JPS6270764A - 血清中の免疫抗体測定方法 - Google Patents
血清中の免疫抗体測定方法Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔技術分野〕
本発明は、血清中に含まれる特定の免疫抗体を選択的に
測定することのできる免疫抗体徂す定力法に関するもの
である。
測定することのできる免疫抗体徂す定力法に関するもの
である。
感染病にかかると病気の経過中にその病気に対する免疫
力が出始めて、症状が消退し、治癒に向う。その頃、そ
の患者の血清を調べてみると５その疾患に特有な免疫抗
体（ＩｇＭ抗体、ＩｇＡ抗体、ＩｇＧ抗体・・・など）
が産生され、免疫力がついたことが確認される。ところ
で、従来の血清学的診断法は、それらの抗体を別々に測
定できず抗体全体を測定していた。けれども、感染病に
おいて、その感染症状は、急性に経過するものもあれば
、慢性に長く経過をたどるものもある。この場合、感染
の初期はその病気に対するＩｇＭ抗体がまず産生され、
その後だんだんとＩｇＧ抗体に移行していく、その間に
治療が施こされたり、あるいはそのまま自然に治癒して
いくものもある。発病してまもなくすると、Ｉｇ：Ｍ抗
体が上昇し、ピークに達したあと漸次低下し、治癒する
頃にはＩｇＭ抗体は消失する。
力が出始めて、症状が消退し、治癒に向う。その頃、そ
の患者の血清を調べてみると５その疾患に特有な免疫抗
体（ＩｇＭ抗体、ＩｇＡ抗体、ＩｇＧ抗体・・・など）
が産生され、免疫力がついたことが確認される。ところ
で、従来の血清学的診断法は、それらの抗体を別々に測
定できず抗体全体を測定していた。けれども、感染病に
おいて、その感染症状は、急性に経過するものもあれば
、慢性に長く経過をたどるものもある。この場合、感染
の初期はその病気に対するＩｇＭ抗体がまず産生され、
その後だんだんとＩｇＧ抗体に移行していく、その間に
治療が施こされたり、あるいはそのまま自然に治癒して
いくものもある。発病してまもなくすると、Ｉｇ：Ｍ抗
体が上昇し、ピークに達したあと漸次低下し、治癒する
頃にはＩｇＭ抗体は消失する。
一方ＩｇＧ抗体は、Ｉ ｇＭ接抗体りやや遅れて血中に
出現し、ＩｇＭが消失する頃も盛んに産生じつづけ、長
い量産中に証明される。しかし、疾／Ｄによってまちま
ちであるが、このＩｇＧ抗体もいずれは低下する。測定
限界以下で血中で存在するのも含めて、この抗体があれ
ば２度とかからない感染疾患が多いが、あっても再度感
染を起す感染疾患もあるとされている。それ故、完全に
消失した時点では免疫力がなくなったと考えられ、再び
感染がおこるのではないかと考えられる。故に、それら
の抗体を、１１１１定することにより、その疾患の免疫
力の有無を判断し得るばかりでなく、初期に産生される
■ｇＭ抗体の検出により、患者が急性期であって、有症
状であり、他に伝染させることのできる時期であること
も判断できるし、またＩｇＭ抗体の検出は病気の回復以
降の免疫力の指標となる。従って、■ｇＧ抗体、ＴｇＭ
抗体を別々に定量的に測定することは、いろいろな意味
において有意義である。
出現し、ＩｇＭが消失する頃も盛んに産生じつづけ、長
い量産中に証明される。しかし、疾／Ｄによってまちま
ちであるが、このＩｇＧ抗体もいずれは低下する。測定
限界以下で血中で存在するのも含めて、この抗体があれ
ば２度とかからない感染疾患が多いが、あっても再度感
染を起す感染疾患もあるとされている。それ故、完全に
消失した時点では免疫力がなくなったと考えられ、再び
感染がおこるのではないかと考えられる。故に、それら
の抗体を、１１１１定することにより、その疾患の免疫
力の有無を判断し得るばかりでなく、初期に産生される
■ｇＭ抗体の検出により、患者が急性期であって、有症
状であり、他に伝染させることのできる時期であること
も判断できるし、またＩｇＭ抗体の検出は病気の回復以
降の免疫力の指標となる。従って、■ｇＧ抗体、ＴｇＭ
抗体を別々に定量的に測定することは、いろいろな意味
において有意義である。
最近の検査法としては、放射性同位元素を用いる放射免
疫測定（ＲＩＡ）や酵素抗体を用いる酵素免疫測定（Ｅ
ＩＡ）において、１ｇＭ、ＩｇＧを測定できる試薬が開
発されてきているが、これらの方法では、そのＩｇＨや
ＩｇＧを測定するのに複雑な操作を要し。
疫測定（ＲＩＡ）や酵素抗体を用いる酵素免疫測定（Ｅ
ＩＡ）において、１ｇＭ、ＩｇＧを測定できる試薬が開
発されてきているが、これらの方法では、そのＩｇＨや
ＩｇＧを測定するのに複雑な操作を要し。
未だ実用化されるまでには到っていない。
本発明は、血清中に含まれる特定の免疫抗体ＩｇＭ、Ｉ
ｇＧ等を簡単に測定し得る方法を提供することを目的と
する。
ｇＧ等を簡単に測定し得る方法を提供することを目的と
する。
本発明によれば、第１の発明として、血清中の免疫抗体
と反応する物質を吸着感作させた担体粒子液を被検査血
清で反応処理した後、得られた反応処理担体粒子と、測
定すべき免疫抗体と反応する物質を吸着感作させた固体
微粒子の懸濁液とを混合反応させ、次いで反応混合物か
ら担体粒子を担体粒子に結合した固体微粒子と共に分離
し、得られた懸濁液の混濁度を測定することを特徴とす
る血清中の免疫抗体測定方法が提供され、第２の発明と
して、測定すべき免疫抗体と反応する物質を吸着感作さ
せた担体粒子液を被検査血清で反応処理した後、得られ
た反応処理担体粒子と、血清中の免疫抗体と反応する物
質を吸着感作させた固体微粒子の懸濁液とを混合反応さ
せ、次いで反応混合物から担体粒子を担体粒子に結合し
た固体微粒子と共に分離し、得られた懸濁液の混濁度を
測定することを特徴とする血清中の免疫抗体測定方法が
提供される。
と反応する物質を吸着感作させた担体粒子液を被検査血
清で反応処理した後、得られた反応処理担体粒子と、測
定すべき免疫抗体と反応する物質を吸着感作させた固体
微粒子の懸濁液とを混合反応させ、次いで反応混合物か
ら担体粒子を担体粒子に結合した固体微粒子と共に分離
し、得られた懸濁液の混濁度を測定することを特徴とす
る血清中の免疫抗体測定方法が提供され、第２の発明と
して、測定すべき免疫抗体と反応する物質を吸着感作さ
せた担体粒子液を被検査血清で反応処理した後、得られ
た反応処理担体粒子と、血清中の免疫抗体と反応する物
質を吸着感作させた固体微粒子の懸濁液とを混合反応さ
せ、次いで反応混合物から担体粒子を担体粒子に結合し
た固体微粒子と共に分離し、得られた懸濁液の混濁度を
測定することを特徴とする血清中の免疫抗体測定方法が
提供される。
本明細書でいう血清中の免疫抗体と反応し得る物質とは
、感染症の抗原、即ち、病原体ないしはその成分を意味
する。また、測定すべき免疫抗体と反応する物質とは、
接抗体を意味し、例えば、測定すべき免疫抗体がＩｇＭ
である時は、抗ＩｇＭを意味し、またＩｇＧである時は
、抗ＩｇＧを意味する。さらに、吸着感作又は感作とは
、所定の抗原又は接抗体を担体粒子又は固体微粒子上に
吸着により結合させることを意味する。
、感染症の抗原、即ち、病原体ないしはその成分を意味
する。また、測定すべき免疫抗体と反応する物質とは、
接抗体を意味し、例えば、測定すべき免疫抗体がＩｇＭ
である時は、抗ＩｇＭを意味し、またＩｇＧである時は
、抗ＩｇＧを意味する。さらに、吸着感作又は感作とは
、所定の抗原又は接抗体を担体粒子又は固体微粒子上に
吸着により結合させることを意味する。
次に、本発明の第１の方法について詳述する。
この方法においては、あらかじめ所要の抗原を吸着感作
させた担体粒子液と、測定すべき免疫抗体（ＩｇＧ、
ＩｇＭ等）に対する接抗体を吸着感作させた固体微粒子
の懸濁液を試薬として用いる。この場合、担体粒子及び
固体粒子は、両者が混合された時、適宜な方法、例えば
遠心分離、沈降分離、濾過分離、磁気分離等により互い
に分離できるような水不溶性の固体物質であればいかな
るものでも使用できるが、好ましくは担体粒子としては
、カオリン、炭素粉末などの無機物質、細菌菌体、ゼラ
チン、多Ｍ類、人の赤血球、動物の赤血球などの生体物
質、ポリスチレンなどの合成高分子物質等を用いること
ができる。これらは、単独で用いてもよいが、混合物、
複合体、マイクロカプセル化物の形態で用いることもで
きる。一方、固体微９粒子の懸濁液としては、従来公知
の高分子ラテックス液や、カオリン、炭素微粉末等を含
む懸濁液が好ましく用いられ、特に好ましくは、ポリス
チレンラテックス液が用いられる。担体粒子の粒径は１
〜ＩＯμｍ、好ましくは５〜８μｍ程度であり、懸濁液
中の固体粒子の粒径は、０．０５〜１μｍ、好ましくは
０．１〜０．３μｍ程度である。担体粒子に対する抗原
の吸着感作及び固体微粒子に対する抗抗体の吸着感作は
従来公知の手法によって行うことができる。
させた担体粒子液と、測定すべき免疫抗体（ＩｇＧ、
ＩｇＭ等）に対する接抗体を吸着感作させた固体微粒子
の懸濁液を試薬として用いる。この場合、担体粒子及び
固体粒子は、両者が混合された時、適宜な方法、例えば
遠心分離、沈降分離、濾過分離、磁気分離等により互い
に分離できるような水不溶性の固体物質であればいかな
るものでも使用できるが、好ましくは担体粒子としては
、カオリン、炭素粉末などの無機物質、細菌菌体、ゼラ
チン、多Ｍ類、人の赤血球、動物の赤血球などの生体物
質、ポリスチレンなどの合成高分子物質等を用いること
ができる。これらは、単独で用いてもよいが、混合物、
複合体、マイクロカプセル化物の形態で用いることもで
きる。一方、固体微９粒子の懸濁液としては、従来公知
の高分子ラテックス液や、カオリン、炭素微粉末等を含
む懸濁液が好ましく用いられ、特に好ましくは、ポリス
チレンラテックス液が用いられる。担体粒子の粒径は１
〜ＩＯμｍ、好ましくは５〜８μｍ程度であり、懸濁液
中の固体粒子の粒径は、０．０５〜１μｍ、好ましくは
０．１〜０．３μｍ程度である。担体粒子に対する抗原
の吸着感作及び固体微粒子に対する抗抗体の吸着感作は
従来公知の手法によって行うことができる。
本発明の第１の方法を実施するには、被検血清を先ず血
清中の免疫抗体と反応する抗原を吸着感作させた担体粒
子液で反応処理し、担体粒子表面において、抗原と被検
血清中の免疫抗体とを反応させる（抗原抗体反応）。こ
の場合、担体粒子は、懸濁液状で用いられ、また被検血
清は、通常、０．１％牛血清アルブミンの入った０、０
０５モル燐酸緩衝食塩水（以下、メディウムという）で
希釈して用いられる。反応温度は通常室温でよいが、好
ましくは３０〜３７℃の範囲である。
清中の免疫抗体と反応する抗原を吸着感作させた担体粒
子液で反応処理し、担体粒子表面において、抗原と被検
血清中の免疫抗体とを反応させる（抗原抗体反応）。こ
の場合、担体粒子は、懸濁液状で用いられ、また被検血
清は、通常、０．１％牛血清アルブミンの入った０、０
０５モル燐酸緩衝食塩水（以下、メディウムという）で
希釈して用いられる。反応温度は通常室温でよいが、好
ましくは３０〜３７℃の範囲である。
前記反応処理後、反応混合液から担体粒子を分離、洗浄
及び再懸濁化することが望ましい。例えば、２０００ｒ
ｐｍの条件で５分間程度遠心処理し、上澄液を除去した
後、充分の生理食塩水を加えて攪拌洗浄し、再び２００
０ｒｐｍの条件で５分間程度で遠心処理し、上澄液を除
き、次に、遠心処理により得られた担体粒子を３％乳糖
又は蔗糖の入ったメディウム中に浮遊離させる。このよ
うにして、所要の検体を得る。
及び再懸濁化することが望ましい。例えば、２０００ｒ
ｐｍの条件で５分間程度遠心処理し、上澄液を除去した
後、充分の生理食塩水を加えて攪拌洗浄し、再び２００
０ｒｐｍの条件で５分間程度で遠心処理し、上澄液を除
き、次に、遠心処理により得られた担体粒子を３％乳糖
又は蔗糖の入ったメディウム中に浮遊離させる。このよ
うにして、所要の検体を得る。
次に、前記抗抗体感作固体微粒子の懸濁液を３％乳糖又
は蔗糖を加えたメディウムで懸濁液濃度０．０１％にな
るように希釈し、これを前記各検体に添加混合し、３２
℃前後で約１０分間程度反応させる。
は蔗糖を加えたメディウムで懸濁液濃度０．０１％にな
るように希釈し、これを前記各検体に添加混合し、３２
℃前後で約１０分間程度反応させる。
得られた反応混合液から担体粒子及び固体微粒子を結合
した担体粒子を分離する。例えば、反応混合液を＋５０
０ｒｐＩ１１の条件下で１０分間程度遠心処理し、得ら
れた上澄の懸濁液の混濁度を測定する。この場合、抗抗
体感作懸濁液として、抗ＩｇＧ感作懸濁液を用いること
により、ＩｇＭの抗体を測定することができ、また抗Ｉ
ｇＧ感作懸濁液を用いることにより、ＩｇＧの抗体を測
定することができる。即ち、抗ＩｇＭ＋ｔｇ作懸濁液と
前記検体とを接触させると、検体中の担体粒子上に存在
するＩｇＭの抗体と、懸濁液中の固体微粒子上に存在す
る抗ＩｇＭとが凝集反応し、その結果、担体粒子と固体
粒子とは凝結し、この凝結物は未凝結の担体粒子と共に
、遠心により沈降する。一方、未反応の固体微粒子は上
澄液に残留する。そして、この上澄液に残留する固体微
粒子濃度から、反応した抗ＩｇＧ感作固体微粒子量を知
ることができる。他の抗抗体感作懸濁液、例えば抗Ｉｇ
Ｇ感作懸濁液を用いる場合にも、前記と同様の機構によ
り、反応した抗ＩｇＧ感作固体微粒子量を知ることがで
きる。前記抗抗体感作懸濁微粒子の反応伝は、血清中に
含まれる免疫抗体の量に対応するものである。なお、固
体微粒子懸濁液や上記上澄液の混濁度は、例えば、分光
光度計で測定することができる。
した担体粒子を分離する。例えば、反応混合液を＋５０
０ｒｐＩ１１の条件下で１０分間程度遠心処理し、得ら
れた上澄の懸濁液の混濁度を測定する。この場合、抗抗
体感作懸濁液として、抗ＩｇＧ感作懸濁液を用いること
により、ＩｇＭの抗体を測定することができ、また抗Ｉ
ｇＧ感作懸濁液を用いることにより、ＩｇＧの抗体を測
定することができる。即ち、抗ＩｇＭ＋ｔｇ作懸濁液と
前記検体とを接触させると、検体中の担体粒子上に存在
するＩｇＭの抗体と、懸濁液中の固体微粒子上に存在す
る抗ＩｇＭとが凝集反応し、その結果、担体粒子と固体
粒子とは凝結し、この凝結物は未凝結の担体粒子と共に
、遠心により沈降する。一方、未反応の固体微粒子は上
澄液に残留する。そして、この上澄液に残留する固体微
粒子濃度から、反応した抗ＩｇＧ感作固体微粒子量を知
ることができる。他の抗抗体感作懸濁液、例えば抗Ｉｇ
Ｇ感作懸濁液を用いる場合にも、前記と同様の機構によ
り、反応した抗ＩｇＧ感作固体微粒子量を知ることがで
きる。前記抗抗体感作懸濁微粒子の反応伝は、血清中に
含まれる免疫抗体の量に対応するものである。なお、固
体微粒子懸濁液や上記上澄液の混濁度は、例えば、分光
光度計で測定することができる。
本発明の第２の方法は、−抗原の吸着感作担体として固
体微粒子を用い、抗抗体吸着感作担体として担体粒子を
用いることによって実施される。担体粒子及び固体微粒
子としては前記した第１の方法において用いるものと同
様なものが用いられる。
体微粒子を用い、抗抗体吸着感作担体として担体粒子を
用いることによって実施される。担体粒子及び固体微粒
子としては前記した第１の方法において用いるものと同
様なものが用いられる。
担体粒子に常法に従って接抗体液を吸着感作させて、抗
抗体感作担体粒子液を得、これを被検血清（通常、メデ
ィウムで希釈して用いる）と混合し、約３２°Ｃで１０
分間程度反応させる。好ましくは、反応処理後、反応混
合液から担体粒子を分離、洗浄、再ｊ％Ｑさせる。例え
ば、得られた反応混合液を。
抗体感作担体粒子液を得、これを被検血清（通常、メデ
ィウムで希釈して用いる）と混合し、約３２°Ｃで１０
分間程度反応させる。好ましくは、反応処理後、反応混
合液から担体粒子を分離、洗浄、再ｊ％Ｑさせる。例え
ば、得られた反応混合液を。
２００Ｏｒｐｍで約１０分間程度遠心処理し、上澄を除
去し、充分な生理食塩水を加えて攪拌洗浄した後、２０
００ｒｐｍで５分間程度遠心処理して上澄を除去する。
去し、充分な生理食塩水を加えて攪拌洗浄した後、２０
００ｒｐｍで５分間程度遠心処理して上澄を除去する。
得られた沈渣担体粒子を、３％乳糖又は蔗糖を加えたメ
ディウム１．５＋ｎＱに浮遊させて、検体を得る。
ディウム１．５＋ｎＱに浮遊させて、検体を得る。
一方、被検血清中の免疫抗体に対応する抗原。
即ち、病原体又はその成分を固体微粒子懸濁液に吸着感
作させたものを、０．０１％の１鵠濁液濃度になるよう
に、３％乳糖又は蔗糖を加えたメディウムで希釈して、
これを前記検体と混合し、約３２°ＣでＩＯ分間程度反
応させた後、得られた反応混合液から担体粒子及び固体
微粒子を結合した担体粒子を分離する。例えば、反応混
合液を、１５００ｒｐｍで１０分間程度遠心処理し、上
澄の懸濁液の混濁度を測定する。この測定値から免疫抗
体の世を知ることができる。
作させたものを、０．０１％の１鵠濁液濃度になるよう
に、３％乳糖又は蔗糖を加えたメディウムで希釈して、
これを前記検体と混合し、約３２°ＣでＩＯ分間程度反
応させた後、得られた反応混合液から担体粒子及び固体
微粒子を結合した担体粒子を分離する。例えば、反応混
合液を、１５００ｒｐｍで１０分間程度遠心処理し、上
澄の懸濁液の混濁度を測定する。この測定値から免疫抗
体の世を知ることができる。
本発明の方法では、種々の抗原に対する免疫抗体を、そ
の免疫抗体の種別に応して定量的に測定することができ
、例えば、ＩｇＭとＩＨＧを個々にイ１１定することが
できる。しかも、その操作は簡単であるという利点があ
る。
の免疫抗体の種別に応して定量的に測定することができ
、例えば、ＩｇＭとＩＨＧを個々にイ１１定することが
できる。しかも、その操作は簡単であるという利点があ
る。
本発明は１種々の抗原に対する免疫抗体を測定すること
ができるが、この場合の抗原としては、各種の感染症の
抗原、例えば、病原微生物、原虫、ウィルス等の他、フ
ィシリア症、カンジダ症、レプトスピラ症、マイコプラ
スマ症、アスペルギルス症、コクシジオミコージス、結
核、梅毒、風疹、１−キンプラズマ症、ヘルペス症、サ
イ１−メガロ症、成人Ｔ−細胞白血病、後天性免疫不全
症候群（エイズ）等の抗原が挙げられる。測定すべき免
疫抗体としては、例えば、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＧ等が
挙げられる。
ができるが、この場合の抗原としては、各種の感染症の
抗原、例えば、病原微生物、原虫、ウィルス等の他、フ
ィシリア症、カンジダ症、レプトスピラ症、マイコプラ
スマ症、アスペルギルス症、コクシジオミコージス、結
核、梅毒、風疹、１−キンプラズマ症、ヘルペス症、サ
イ１−メガロ症、成人Ｔ−細胞白血病、後天性免疫不全
症候群（エイズ）等の抗原が挙げられる。測定すべき免
疫抗体としては、例えば、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＧ等が
挙げられる。
次に本発明を実施例によりさらに詳細に説明する。
実施例１ 〔梅毒ＩｇＭ、梅毒ＩｇＧの測定〕（１）血
球反応液の調製 抗原とする梅毒病原体（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ−ｐａｌｌ
ｉｄｕｍ。
球反応液の調製 抗原とする梅毒病原体（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ−ｐａｌｌ
ｉｄｕｍ。
以下丁、Ｐ、と略す）をウサギ来丸に接種して生体培遠
心分画でＴ、Ｐを集め、１０キロサイクルの音波で１０
分間処理し、これをＴ、Ｐ液とする。一方、ヒツジ固定
血球液を調製しておき、このヒツジ固定血球液と丁、Ｐ
、液をまぜて、 Ｔ、Ｐ、ヒツジ感作血球液を作り、血
球反応液とする。
心分画でＴ、Ｐを集め、１０キロサイクルの音波で１０
分間処理し、これをＴ、Ｐ液とする。一方、ヒツジ固定
血球液を調製しておき、このヒツジ固定血球液と丁、Ｐ
、液をまぜて、 Ｔ、Ｐ、ヒツジ感作血球液を作り、血
球反応液とする。
（２）懸濁反応液の調製
０．２ｍμの粒子を含む高分子ラテックス液を０．００
５Ｍのリン酸緩衝食塩水（以下ＰＢＳという）で希釈し
て０．２５％液を作り、これに抗ヒトＩｇＭ 、抗ヒト
ＩｇＧをそれぞれまぜ合わせ、抗ヒトＩｇＧ感作ラテツ
クス液（０，０１％）と、抗ヒトＩｇＧ感作ラテツクス
液（０，０１％）をそれぞれ作製する。
５Ｍのリン酸緩衝食塩水（以下ＰＢＳという）で希釈し
て０．２５％液を作り、これに抗ヒトＩｇＭ 、抗ヒト
ＩｇＧをそれぞれまぜ合わせ、抗ヒトＩｇＧ感作ラテツ
クス液（０，０１％）と、抗ヒトＩｇＧ感作ラテツクス
液（０，０１％）をそれぞれ作製する。
（３）被検血清液の調製
ウサギＩｇＧ血清を、牛血清アルブミン０．１％を加え
た０、００５ＭのＰＢＳで１００倍に希釈して希釈液を
調整する。この希釈液を用いて被検血清を１０倍及び１
００倍に希釈する。
た０、００５ＭのＰＢＳで１００倍に希釈して希釈液を
調整する。この希釈液を用いて被検血清を１０倍及び１
００倍に希釈する。
（４）測定方法
１０倍希釈被検血清液０．２５ｍｆｌをそれぞれ２つの
試験管（１）及びＣＩＨに入れ、また１００倍希釈被検
血清液０．２５ｍＱをそれぞれ別の試験管［１１１）及
び［ＩＶ）に入れる。次に、前記試験管〔■〕（１０倍
希釈被血清液）と試験管（ｍ）（ｔｏｏ倍希釈被検血清
液）に、前記血球反応液０．１５ｍ１２入れる。一方、
残りの試験管（ｎ）と試験管ＣＩＶ）に、血球対照液（
丁、Ｐ、液を含まない以外は上記血球反応液と同一）０
゜１５ｍＱをそれぞれ入れる。これらの各試験管を３２
℃で１０分間保持した後、遠心処理して血球を沈殿させ
、上澄を除去し、生理食塩水を加えて攪拌洗浄し、次い
で２００Ｏｒｐｍで５分間遠心処理して、上澄を除去す
る。
試験管（１）及びＣＩＨに入れ、また１００倍希釈被検
血清液０．２５ｍＱをそれぞれ別の試験管［１１１）及
び［ＩＶ）に入れる。次に、前記試験管〔■〕（１０倍
希釈被血清液）と試験管（ｍ）（ｔｏｏ倍希釈被検血清
液）に、前記血球反応液０．１５ｍ１２入れる。一方、
残りの試験管（ｎ）と試験管ＣＩＶ）に、血球対照液（
丁、Ｐ、液を含まない以外は上記血球反応液と同一）０
゜１５ｍＱをそれぞれ入れる。これらの各試験管を３２
℃で１０分間保持した後、遠心処理して血球を沈殿させ
、上澄を除去し、生理食塩水を加えて攪拌洗浄し、次い
で２００Ｏｒｐｍで５分間遠心処理して、上澄を除去す
る。
次に、これらの試験管に庶Ｍ３％を加えたメディウム１
．５ｍＱを加えて、血球を浮遊させる。
．５ｍＱを加えて、血球を浮遊させる。
次に、前記試験管のうち、試験管〔１〕及び試験管（１
１）に、抗ヒトＩｇ旧盛作うテ・・・クス液１．５ｍｒ
Ｌをそれぞれ加え、一方、試験管（ＩＩＩ）及び〔■〕
に、抗ヒト１．Ｇ感作ラテックス液１．５ｍ＋Ｑをそれ
ぞれ加え。
１）に、抗ヒトＩｇ旧盛作うテ・・・クス液１．５ｍｒ
Ｌをそれぞれ加え、一方、試験管（ＩＩＩ）及び〔■〕
に、抗ヒト１．Ｇ感作ラテックス液１．５ｍ＋Ｑをそれ
ぞれ加え。
これらの試験管を３２°Ｃで１０分間保持した後、１５
００ｒｐｍで１０分間遠心処理し、試験管（１）〜Ｃｒ
Ｖ）の上澄を形成するラテックス液の混濁度（吸光度Ｏ
Ｄ工〜０ＤＩＶ）を分光光度計（波長６６０ｒ＋ｍ）で
それぞれ測定する。
００ｒｐｍで１０分間遠心処理し、試験管（１）〜Ｃｒ
Ｖ）の上澄を形成するラテックス液の混濁度（吸光度Ｏ
Ｄ工〜０ＤＩＶ）を分光光度計（波長６６０ｒ＋ｍ）で
それぞれ測定する。
実施例２〔風疹ＩｇＭ、風疹ＩｇＧの測定〕（１）血球
反応液の調製 ０．００５ＨのＰＢＳで１００倍に希釈した抗ヒ１〜Ｉ
ｇＭ液と抗ヒｌ−ＩｇＧ液を作る。これらの液に、０．
００５ＭのＰｕｓで希釈したヒツジ固定血球液（２，５
％）を別々にかつ同量混合し、抗ヒトＩｇＭ感作ヒツジ
血球液及び抗ヒｌ−ＩｇＧ感作ヒツジ血球液を調製する
。
反応液の調製 ０．００５ＨのＰＢＳで１００倍に希釈した抗ヒ１〜Ｉ
ｇＭ液と抗ヒｌ−ＩｇＧ液を作る。これらの液に、０．
００５ＭのＰｕｓで希釈したヒツジ固定血球液（２，５
％）を別々にかつ同量混合し、抗ヒトＩｇＭ感作ヒツジ
血球液及び抗ヒｌ−ＩｇＧ感作ヒツジ血球液を調製する
。
（２）懸濁液反応液の調製
０．２μｍの粒子を含む高分子ラテックス液を０、００
５ＨのＰＢＳで希釈して、２．５％のラテックス液を作
り、これに、０．００５ＭのＰＢＳで４０倍に希釈した
精製風疹ビールス液を同量混合し５３２°Ｃで１０分間
保持した後、Ｌ’０’０００ｒｐｍで２０分間遠心処理
し、洗浄後、再び０゜１％牛血清アルブミン添加ＰＢＳ
を加えて、風疹ビールス感作ラテツクス液（２，５％）
を調製する。
５ＨのＰＢＳで希釈して、２．５％のラテックス液を作
り、これに、０．００５ＭのＰＢＳで４０倍に希釈した
精製風疹ビールス液を同量混合し５３２°Ｃで１０分間
保持した後、Ｌ’０’０００ｒｐｍで２０分間遠心処理
し、洗浄後、再び０゜１％牛血清アルブミン添加ＰＢＳ
を加えて、風疹ビールス感作ラテツクス液（２，５％）
を調製する。
（３）被検血清液の調製
ウサギエ１ζＧ血清を、０．１％牛血清アルブミンを添
加した０、００５８のＰＢＳで１００倍に希釈して、希
釈液を得る。この希釈液を用いて被検血清液を１０倍及
び１００倍に希釈する。
加した０、００５８のＰＢＳで１００倍に希釈して、希
釈液を得る。この希釈液を用いて被検血清液を１０倍及
び１００倍に希釈する。
（４）測定方法
１０倍希釈被検血清液０．２５ｍＱをそれぞれ別の試験
管〔Ｉ〕及び（ｎ）に入れ、次に、試験管（１）及び（
ＩＩＩ）にそれぞれ抗ヒトＩｇＭｄｒ作ヒツジ血球液０
．１５ａ＋Ｑ及び抗ヒトＩｇＧ感作ヒツジ血球液０．１
５ｍＱ入れ、一方、試験管（ＩＩ）及び（ＩＶ）には血
球対照液（抗ヒトＩｇＭ及び抗ヒｌ−ＩｇＧを含まない
血球液）０．１５ｍ Ｑを入れる。
管〔Ｉ〕及び（ｎ）に入れ、次に、試験管（１）及び（
ＩＩＩ）にそれぞれ抗ヒトＩｇＭｄｒ作ヒツジ血球液０
．１５ａ＋Ｑ及び抗ヒトＩｇＧ感作ヒツジ血球液０．１
５ｍＱ入れ、一方、試験管（ＩＩ）及び（ＩＶ）には血
球対照液（抗ヒトＩｇＭ及び抗ヒｌ−ＩｇＧを含まない
血球液）０．１５ｍ Ｑを入れる。
それら試験管を３２°Ｃで１０分間保持した後、遠心処
理し、洗浄処理し、上澄液を除去し、生理食塩水を加え
て攪拌し、次いで２００Ｏｒｐｍで５分間遠心処理して
上澄液を除去する。次にこれらの試験管に蔗糖３％を加
えたメディウム１．５ｍＱを加えて血球を浮遊させる。
理し、洗浄処理し、上澄液を除去し、生理食塩水を加え
て攪拌し、次いで２００Ｏｒｐｍで５分間遠心処理して
上澄液を除去する。次にこれらの試験管に蔗糖３％を加
えたメディウム１．５ｍＱを加えて血球を浮遊させる。
次に、これらの試験管に、前記の風疹ビールス感作ラテ
ツクス反応液（０，０１％）１．５ｍＱを加え、３２℃
で１０分間保持した後、１５００ｒｐｍで１０分間遠心
処理し、実施例１と同様に、上澄液を形成するラテック
ス液の混濁度を分光光度計（波長６６０ｎｍ）でＪｌ’
ｌ定する。
ツクス反応液（０，０１％）１．５ｍＱを加え、３２℃
で１０分間保持した後、１５００ｒｐｍで１０分間遠心
処理し、実施例１と同様に、上澄液を形成するラテック
ス液の混濁度を分光光度計（波長６６０ｎｍ）でＪｌ’
ｌ定する。
実施例３〜５
実施例１と同様の手法により、トキソプラスマ症のＩｇ
Ｍ及びＩｇＧ （実施例３）、サイトメガロ感染症のＩ
ｇＭ及びＩｇＧ（実施例４）及びヘルペス（■型、■１
型）感染症のＩ 、、Ｍ及びＩｇＧ （実施例５）をそ
れぞれ測定する。
Ｍ及びＩｇＧ （実施例３）、サイトメガロ感染症のＩ
ｇＭ及びＩｇＧ（実施例４）及びヘルペス（■型、■１
型）感染症のＩ 、、Ｍ及びＩｇＧ （実施例５）をそ
れぞれ測定する。
以上で得られた測定結果を、患者の感染状態との関連で
表−１に示す。以下の表において、ＩｇＭ抗体価及びＩ
、Ｇ抗体価として示した数値は、対照試験、即ち、抗原
で吸着感作されていない血球又はラテックス液を用いた
以外は同様にして実施して得られた上澄ラテックス液の
混濁度を基準として得られたものである。例えば、実施
例１におけるｉｇＭ抗体価及びＩｇＧ抗体価は（ＯＤ□
ニーＯＤ工）ｘｌｏｏＯ及び（ＯＤＩＶ−〇Ｄ□１□）
ｘ １０００をそれぞれ示す。
表−１に示す。以下の表において、ＩｇＭ抗体価及びＩ
、Ｇ抗体価として示した数値は、対照試験、即ち、抗原
で吸着感作されていない血球又はラテックス液を用いた
以外は同様にして実施して得られた上澄ラテックス液の
混濁度を基準として得られたものである。例えば、実施
例１におけるｉｇＭ抗体価及びＩｇＧ抗体価は（ＯＤ□
ニーＯＤ工）ｘｌｏｏＯ及び（ＯＤＩＶ−〇Ｄ□１□）
ｘ １０００をそれぞれ示す。
表 −ｌ
実施例６
実施例１において、ヒツジ固定血球に代えて粒径約５μ
ｍのゼラチン粒子担体（特開昭５７年第１５３６５８号
公報記載の方法に従って製造したもの）を用いた以外は
同様にして梅毒ＩｇＭ及び梅毒ＩｇＧを測定する。
ｍのゼラチン粒子担体（特開昭５７年第１５３６５８号
公報記載の方法に従って製造したもの）を用いた以外は
同様にして梅毒ＩｇＭ及び梅毒ＩｇＧを測定する。
実施例７
実施例２において、抗ヒトＩｇＧ感作ヒツジ血球液及び
抗ヒトＩｇＧ感作ヒツジ血球液の代りに抗ヒトＩｇＭ感
作イムノビーズ液及び抗ヒトＩｇＧ感作イムノビーズ液
（バイオ・ラド ラボラトリーズ社製）をそれぞれ用い
た以外は同様にして風疹ＩｇＧを測定する。
抗ヒトＩｇＧ感作ヒツジ血球液の代りに抗ヒトＩｇＭ感
作イムノビーズ液及び抗ヒトＩｇＧ感作イムノビーズ液
（バイオ・ラド ラボラトリーズ社製）をそれぞれ用い
た以外は同様にして風疹ＩｇＧを測定する。
実施例８〜ＩＯ
実施例６と同様の手法により１−キソプラスマ症のＩｇ
Ｍ及びＩｇＧ （実施例８）、サイトメガロ感染症のＩ
ｇＭ及びＩｇＧ （実施例９）及びヘルペス（Ｉ型、Ｉ
ｌ、型）感染症のＩｇＭ及びＩｇＧをそれぞれ測定する
。結果を表−２に示す。
Ｍ及びＩｇＧ （実施例８）、サイトメガロ感染症のＩ
ｇＭ及びＩｇＧ （実施例９）及びヘルペス（Ｉ型、Ｉ
ｌ、型）感染症のＩｇＭ及びＩｇＧをそれぞれ測定する
。結果を表−２に示す。
表 −２
〔効 果〕
表−１及び表−２に示された結果かられかるように、本
発明によれば、ＩｇＭ抗体とＩｇＧ抗体とを個々に測定
することができ、そして、これらの測定結果に基づき１
、・ハ者の感染状態を適確に知ることができる。
発明によれば、ＩｇＭ抗体とＩｇＧ抗体とを個々に測定
することができ、そして、これらの測定結果に基づき１
、・ハ者の感染状態を適確に知ることができる。
Claims (2)
- （１）血清中の免疫抗体と反応する物質を吸着感作させ
た担体粒子液を被検査血清で反応処理した後、得られた
反応処理担体粒子と、測定すべき免疫抗体と反応する物
質を吸着感作させた固体微粒子の懸濁液とを混合反応さ
せ、反応混合物から担体粒子を担体粒子に結合した固体
微粒子と共に分離し、得られた懸濁液の混濁度を測定す
ることを特徴とする血清中の免疫抗体測定方法。 - （２）測定すべき免疫抗体と反応する物質を吸着感作さ
せた担体粒子液を被検査血清で反応処理した後、得られ
た反応処理担体粒子と、血清中の免疫抗体と反応する物
質を吸着感作させた固体微粒子の懸濁液とを混合反応さ
せ、次いで反応混合物から担体粒子を担体粒子に結合し
た固体微粒子と共に分離し、得られた懸濁液の混濁度を
測定することを特徴とする血清中の免疫抗体測定方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60-45897 | 1985-03-08 | ||
| JP4589785 | 1985-03-08 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6270764A true JPS6270764A (ja) | 1987-04-01 |
Family
ID=12732033
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4853286A Pending JPS6270764A (ja) | 1985-03-08 | 1986-03-07 | 血清中の免疫抗体測定方法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0194156B1 (ja) |
| JP (1) | JPS6270764A (ja) |
| DE (1) | DE3669077D1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02231565A (ja) * | 1989-03-04 | 1990-09-13 | Green Cross Corp:The | 遊離ヘモグロビン測定用試薬キット及びそれを用いる遊離ヘモグロビンの測定法 |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5252493A (en) * | 1986-09-22 | 1993-10-12 | Nippon Telegraph And Telephone Corporation | Laser magnetic immunoassay method and apparatus therefor |
| US5238810A (en) * | 1986-09-22 | 1993-08-24 | Nippon Telegraph And Telephone Corporation | Laser magnetic immunoassay method and apparatus thereof |
| GB8717863D0 (en) * | 1987-07-28 | 1987-09-03 | Acade Diagnostic Systems Sa Nv | Determination of antibodies |
| GB8717862D0 (en) * | 1987-07-28 | 1987-09-03 | Acade Diagnostic Systems Sa Nv | Turbidimetric assay |
| US5338689A (en) * | 1987-08-24 | 1994-08-16 | Stiftung Fur Diagnostische Forschung | Method and card for detecting antigens and/or antibodies |
| JPH087215B2 (ja) * | 1987-08-24 | 1996-01-29 | シュティフツング・フュア・ディアグノスティッシュ・フォルシュンク | 抗原および／又は抗体の検出方法および検出用の試験キット |
| US5017472A (en) * | 1987-09-09 | 1991-05-21 | Bankert Richard B | Microflotation devices used for immunoassays and cell/molecular fractionation |
| GB8724549D0 (en) * | 1987-10-20 | 1987-11-25 | Coombs R R A | Immunoassay |
| US5158871A (en) * | 1988-02-12 | 1992-10-27 | University Of Connecticut | Method of using magnetic particles for isolating, collecting and assaying diagnostic ligates |
| JP3127449B2 (ja) * | 1989-07-28 | 2001-01-22 | 三菱化学株式会社 | 抗体の測定法 |
| GB9326379D0 (en) * | 1993-12-23 | 1994-02-23 | Sinvent As | Method of assay |
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| US5905028A (en) * | 1994-05-17 | 1999-05-18 | Gamma Biologicals, Inc. | Method and apparatus useful for detecting bloodgroup antigens and antibodies |
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| US20110151435A1 (en) | 2009-12-17 | 2011-06-23 | Abaxis, Inc. | Novel assays for detecting analytes in samples and kits and compositions related thereto |
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| JPS5938656A (ja) * | 1982-08-27 | 1984-03-02 | Tetsuo Tomiyama | 抗体の免疫グロブリンクラス別検出法 |
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-
1986
- 1986-03-07 EP EP19860301634 patent/EP0194156B1/en not_active Expired
- 1986-03-07 JP JP4853286A patent/JPS6270764A/ja active Pending
- 1986-03-07 DE DE8686301634T patent/DE3669077D1/de not_active Expired - Lifetime
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|---|---|---|---|---|
| JPS5931453A (ja) * | 1982-07-14 | 1984-02-20 | Fujirebio Inc | 梅毒抗体の測定方法 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02231565A (ja) * | 1989-03-04 | 1990-09-13 | Green Cross Corp:The | 遊離ヘモグロビン測定用試薬キット及びそれを用いる遊離ヘモグロビンの測定法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0194156A1 (en) | 1986-09-10 |
| DE3669077D1 (de) | 1990-03-29 |
| EP0194156B1 (en) | 1990-02-21 |
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