JPH06234637A - 腫瘍壊死因子アルファを阻害するためのレフルノミドの使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 腫瘍壊死因子アルファを阻害するためのレフ
ルノミドの使用。 【効果】 Ｎ−（４−トリフルオロメチルフェニル）−
５−メチルイソキサゾール−４−カルボキサミド（レフ
ルノミド）は、腫瘍壊死因子アルファが関与する疾患を
予防および治療するために有効であり、医薬として使用
される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】レフルノミド〔式 Ｎ−（４−トリフルオ
ロメチルフェニル）−５−メチルイソキサゾール−４−
カルボキサミド参照〕は、すでに化合物として知られて
いる（ＥＰ ００１３３７６， ＥＰ ０２１７２０６，
ＵＳ ４３５１８４１，ＵＳ４９６５２７６）。すでに
開示されている化合物の抗炎症作用のほかに、この物質
は、また自己免疫疾患および移植拒否反応の治療におい
て使用するのに適した免疫調節作用を示す。また、Ｎ−
（４−トリフルオロメチルフェニル）−２−シアノ−３
−ヒドロキシクロトンアミド（式参照）と称せられる代
謝産物がレフルノミドの治療作用の原因であることもす
でに知られている。

【０００２】

【化１】 この知見に対応して、上述したレフルノミドの薬理学的
作用は、また、この代謝産物を投与することによって得
ることもできる〔Bartlett等，Agents and Actions 32
(1991) 10〜21〕。Axton等〔J. Chem. Soc. Perkin Tra
ns. 1 (1992) 2203頁以下〕は、また、レフルノミドが
活性作用を示さずそしてその代りに、この代謝産物が生
理学的作用を示す理由を記載している。文献〔Bartlett
等、Agents and Actions 32 (1991) 10〜21〕および本
発明者等の実験において、以下に詳述する治療作用は、
レフルノミド代謝産物を投与することにより得ることは
できないということを証明することができた。すなわ
ち、本発明によって、レフルノミドはヒトの血球からの
シトキンの合成および遊離に対して強力な阻害作用を示
すが、これに反して、レフルノミド代謝産物はこの有利
な作用を示さないということが見出された。

【０００３】本発明により使用された実験条件下におい
て、レフルノミドの認め得る代謝は行われずそして阻害
作用は、もっぱら物質レフルノミドに帰する。シトキン
は、その構造がすでに知られている種々な生物学的に高
度に強力なペプチドの一つの級である。同様に、シトキ
ンが伝達物質として内因的に誘発および合成されるとい
うことがすでに知られている。これらのシトキンの過度
なレベルは多数の疾患の発生または突発の原因となり得
るので、ヒトおよび動物体におけるシトキンの抑制は、
医薬的に非常に重要なことである。このような疾患は、
体の器官、細胞、組織および受容体系に対する、すでに
存在するかも知れないシトキンの望ましくない作用を阻
害する医薬で治療することができる。しかしながら、レ
フルノミドの使用がシトキンの実際の合成および遊離を
阻害し、その結果シトキンがさらに生じることもなく、
従って疾患の出現が非常に初期の段階で防止され得ると
いうことは、本発明の有意な利点である。

【０００４】本発明は、腫瘍壊死因子アルファ（tumor
necrosis factor alpha）（ＴＮＦアルファ）と称せら
れるシトキンが関与するヒトおよび動物体の疾患の予防
および治療用の医薬を製造するためのレフルノミドの使
用に関するものである。さらに、本発明はこのような疾
患を治療するためのレフルノミドの使用に関するもので
ある。本発明は、また、医薬的に適当な且つ生理学的に
許容し得る賦形剤、希釈剤および（または）他の活性化
合物および補助物質のほかに、有効な量のレフルノミド
を含有する医薬に関するものである。

【０００５】本発明は、また、レフルノミドを、医薬的
に適当な且つ生理学的に許容し得る賦形剤、および必要
に応じてさらに他の適当な活性化物、添加剤または補助
物質と一緒に、適当な製剤形態にすることからなる、腫
瘍壊死因子アルファが関与する疾患を予防および治療す
るための医薬の製法に関するものである。ＴＮＦアルフ
ァおよびその疾患−原因作用は、Ibelgaufts Lexikon Z
ytokine(Cytokine Dictionary)，Medikon Verlag, Muni
ch 1992および該文献に引用されている文献に詳細に記
載されている。また、このシトキンが広いスペクトルの
生物学的活性を有していることは、ＷＯ ９２／０２８
２２から推論することができる。

【０００６】ＴＮＦアルファは、元来、認識されたその
最初の作用、すなわちその抗腫瘍作用によって命名され
た。それから、ＴＮＦアルファの広い多面活性が、ま
た、報告されている〔VilcekおよびLee, J. Biol. Che
m. 266 (1991) 7313頁以下参照〕。ＴＮＦアルファは、
多数の細胞において合成され得そして多くの細胞は、同
様に、このシトキンに対する特異的受容体を有し、それ
によって生長および転写因子、急性相たんぱくおよび細
胞粘着分子、例えばＥＬＡＭ−１およびＩＣＡＭ−１
〔Bevilacqa等、Science 243 (1989) 1160〕が誘発され
得る。

【０００７】ＴＮＦアルファは、内毒素ショックにおい
て〔Tracey等、 Science 234 (1986) 470-474〕および
悪液質において〔Oliff等, Cell 50(1987)555〜563〕に
おいて強力な作用を有している。同様に、ＴＮＦアルフ
ァは、マラリア、髄膜炎〔Waage等、Lancet 1 (1987) 3
55〜357〕、肺炎〔Blanchard等、Lymphokine Res 6 (19
87) 1421〕およびＡＩＤＳ〔Lahdevirta等、Am. J. Me
d. 86 (1988) 289〜291〕ならびに癌患者〔Balkwill
等、Lencet 2 (1987) 1229〜1232〕の場合における疾患
の致死過程を左右する。

【０００８】それ故に、ＴＮＦアルファは、特に、種々
な疾患および疾患の症候の引き金としての中心的位置を
占有することは明らかである。これらの疾患は、現在全
く治療することができないかまたは不十分に治療するこ
とができるにすぎない非常に重大な疾患である。このた
めに、これまでに発見されたレフルノミドの作用は、非
常に重要なことである。さらに、本発明は、敗血ショッ
ク、悪液質、マラリア、髄膜炎、肺炎、ＡＩＤＳ、内毒
素による中毒、結合組織膨潤、肺中毒、肺浮腫または慢
性白血病のような疾患〔Tracy等、Science 234 (1986)
314頁以下；Erroi等、Agents Actions 36 (1992) 66頁
以下；Scrip 1713, 15頁(1992)；Mustafa等、J. Pedia
t. 115 (1989) 1274頁以下〕を予防および治療するため
のレフルノミドの使用に関するものである。

【０００９】慣用のやり方で製造されたレフルノミドの
医薬形態および医薬製剤は、また、特にこれらの疾患を
治療するために使用することができる。適当な固体また
は液状の医薬製剤形態は、例えば顆粒、粉剤、被覆錠
剤、錠剤、（ミクロ）カプセル、坐剤、シロップ、ジュ
ース、懸濁液、乳濁液、滴下剤または注射用溶液、なら
びに活性化合物の放出を延長する製剤でありそしてこれ
らの製剤においては、慣用の補助剤、例えば賦形剤、崩
壊剤、結合剤、被覆剤、膨潤剤、滑走剤、滑沢剤、風味
剤、甘味剤または可溶化剤が使用される。しばしば使用
される補助物質は、例えば炭酸マグネシウム、二酸化チ
タン、ラクトース、マンニトールおよび他の糖類、タル
ク、牛乳蛋白質、ゼラチン、殿粉、セルロースおよびそ
の誘導体、動物および植物油、ポリエチレングリコー
ル、および溶剤、例えば滅菌水および一価または多価ア
ルコール、例えばグリセロールである。

【００１０】ヒトの医薬においては、患者（体重７０k
g）１人当り３〜５mg、好ましくは１０mg、２５mgまた
は５０mgの投与量単位が投与される。もし医薬的に必要
である場合は、投与量単位は、患者１人当り１００mg、
２００mgまたは５００mgまで増加させることができる。
投与は、１日当り１回〜１週間当り１回、好ましくは１
日当り３回または４回まで行うことができる。投与は、
慣用のやり方で経口的に、腹腔的に、静脈内的に、関節
内的にまたは経皮的に行うことができる。家畜医薬にお
いて投与される相当する投与量は、また、これらのデー
タから容易に計算することができる。

【００１１】最後に、上述した医薬製剤形態の製造にお
いては、レフルノミドは、また他の適当な活性化合物、
例えば抗ウリコパテック剤（antiuricopathic agen
t）、血小板凝集阻害剤、鎮痛剤および他のステロイド
性または非ステロイド性の抗炎症剤と一緒に処方するこ
ともできる。レフルノミドを決して認め得る程度にその
代謝産物に代謝しない単離された血球フラクション（単
核細胞）に対するレフルノミドの作用を実験的に証明す
ることができた。

【００１２】実施例１ 新しく単離されたヒトのクエン酸塩添加血液からの単核
細胞を、既知の標準操作〔Tiku等、J. Immunol. 136／1
0 (1986) 3677〕により強化した。

【００１３】新しく製造したヒトのクエン酸塩添加血液
１０mlを、リンホプレプ（Lymphoprep)^R（Molter GmbH,
Heidelberg)１５mlで下張り（underlaid）しそしてそ
れから２０℃で４０分間４００×ｇで遠心分離した。相
境界において白色リングとして目に見える細胞フラクシ
ョンを、注射器で除去し、ＰＭ−１６緩衝液（Feinbioc
hemica GmbH ＆ CO. KG, Heidelberg）で希釈〔１：１
（v/v）〕しそしてそれから、再び上述したように１０
分間遠心分離した。上澄液を、予めＬ−グルタミン３０
０mg／リットルを添加したＲＰＭＩ １６４０緩衝液（G
ibco, Berlin）１０mlで洗浄した。洗浄した細胞フラク
ションを、予めＬ−グルタミン３００mg／リットル、Ｈ
ＥＰＥＳ（Gibco，Berlin）２５ミリモル／リットル、
ストレプトマイシン０.１ｇ／mlおよびペニシリン０.１
ｇ／mlを加えたＲＰＭＩ １６４０１mlにとった。細胞
カウンター（ＩＴ型、Coulter Diagnostics, Krefeld）
を使用して、約リンパ球９０％および単球１０％からな
る細胞懸濁液を、約５００万の細胞／mlに調節した。既
知の乳酸脱水素酵素法を使用して、阻害実験の前後に細
胞生育性を監視した。この場合において、生育性の変化
は観察されなかった。

【００１４】細胞のＴＮＦアルファの合成および遊離
は、ジメチルスルホキシド／水〔１：１０（v/v）〕０.
０１ml中のリポ多糖類〔Salmonella abortus equi, Sig
ma GmbH, Deisenhofen〕５００ngの溶液を上述した細胞
フラクション０.４８mlに加えることにより誘発した。
同時に、ジメチルスルホキシド０.０１ml中のレフルノ
ミドまたはレフルノミド代謝産物の溶液（それぞれの場
合における最終濃度については、表１参照）を細胞フラ
クションに加えそして混合物を、商業的に入手できるイ
ンキュベーター中で３７℃で２０時間放置した。０℃に
冷却した後、試料をベンチ遠心分離機で１分間遠心分離
しそしてそれぞれの場合において、上澄液の一部０.０
２５mlを、“サンドイッチ”酵素免疫試験キット（Bier
mann GmbH,Bad Nauheim）を使用して製造業者の使用説
明書にしたがって、ＴＮＦアルファ含量について検査し
た。比較対照値は、レフルノミドまたはその代謝産物を
添加することなしに測定しそして１００％とした。特
に、ＴＮＦアルファレベルに対するジメチルスルホキシ
ドの可能な影響は、適当な比較測定によって除去した。

【００１５】さらに、レフルノミドを含有する試験試料
の一部を、時間−依存的な方法で除去しそして高圧液体
クロマトグラフィー（Ｃ−１８カラム３.９×１５０m
m，Waters GmbH, Eschborn；溶離剤：メタノール６００
ml／水３５０ml／テトラヒドロフラン５０ml／燐酸１m
l；流速一平方吋当り２０００ポンド（psi）で０.７ml
／分；２７３nmの紫外線範囲で検出）を使用して、レフ
ルノミドまたはレフルノミド代謝産物の含量について試
験した。使用した条件下において、レフルノミドは、極
めて徐々にその代謝産物に代謝されるにすぎず、約１０
時間の半減期を有することが見出された。

【００１６】

【表１】 表１における実験は、レフルノミド代謝産物は実際にＴ
ＮＦアルファレベルに対して作用を示さないが、これに
反して、ＴＮＦアルファレベルは、レフルノミドの添加
により明らかに低下されるということを示す。

【００１７】実施例２ Ｎ−（４−トリフルオロメチルフェニル）−５−メチル
イソキサゾール−４−カルボキサミドの製造

【化２】 アセトニトリル２０ml中の５−メチルイソキサゾール−
４−カルボニルクロライド０.０５モル（７.３ｇ）の溶
液を室温で、アセトニトリル１５０ml中の４−トリフル
オロメチルアニリン０.１モル（１６.１ｇ）の溶液に滴
加する。２０分撹拌した後、沈殿した４−トリフルオロ
メチルアニリン塩酸塩を吸引濾去しそしてそれぞれの場
合においてアセトニトリル２０mlを使用して２回洗浄し
そして合した濾液を減圧下で濃縮する。収量：白色の結
晶性Ｎ−（４−トリフルオロメチルフェニル）−５−メ
チルイソキサゾール−４−カルボキサミド（レフルノミ
ド）１２.８ｇ。

【００１８】実施例３ 腹腔内投与後の急性毒性 試験物質の腹腔内投与後の急性毒性を、ＮＭＲＩマウス
（２０〜２５ｇ）およびＳＤラット（１２０〜１９５
ｇ）を使用して試験した。試験物質は、ナトリウムカル
ボキシメチルセルロースの１％の強度の溶液に懸濁し
た。試験物質の種々な投与量を、マウスには体重１kg当
り１０mlの容量でそしてラットには体重１kg当り５mlの
容量で投与した。１０匹の動物を１投与量当り使用し
た。３週間後、急性毒性を、LitchfieldおよびWilcoxon
の方法によって測定した。結果は、以下の表に要約する
通りである。

【００１９】

【表２】

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 31/42 ＡＤＹ 7431−4Ｃ ＡＥＢ 7431−4Ｃ ＡＧＺ 7431−4Ｃ // Ｃ０７Ｄ 261/18

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 腫瘍壊死因子アルファが関与する疾患の
   予防および治療用の医薬を製造するためのＮ−（４−ト
   リフルオロメチルフェニル）−５−メチルイソキサゾー
   ル−４−カルボキサミドの使用。
2. 【請求項２】 敗血ショック、内毒素ショック、悪液
   質、マラリア、髄膜炎、肺炎、ＡＩＤＳ、内毒素による
   中毒、結合組織膨潤、肺中毒、肺浮腫または慢性白血病
   のような疾患を予防および治療するための請求項１記載
   の使用。
3. 【請求項３】 Ｎ−（４−トリフルオロメチルフェニ
   ル）−５−メチルイソキサゾール−４−カルボキサミド
   の有効な含有量を有する、腫瘍壊死因子アルファが関与
   する疾患を予防および治療するための医薬。
4. 【請求項４】 敗血ショック、内毒素ショック、悪液
   質、マラリア、髄膜炎、肺炎、ＡＩＤＳ、内毒素による
   中毒、結合組織膨潤、肺中毒、肺浮腫または慢性白血病
   のような疾患を予防および治療するための請求項３記載
   の医薬。
5. 【請求項５】 Ｎ−（４−トリフルオロメチルフェニ
   ル）−５−メチルイソキサゾール−４−カルボキサミド
   を、生理学的に許容し得る賦形剤およびさらに他の活性
   化合物、添加剤または補助物質と一緒に、適当な製剤形
   態にすることからなる請求項３または４記載の医薬の製
   法。