JPH06234657A - インターフェロンの使用を含む複合治療のための医薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】インターフェロンを用いた病気の治療、特にウ
イルス性肝炎の治療において、その治療効果を顕著に高
めることができる複合治療法および該複合治療に用いる
医薬を提供すること。 【構成】ヒト・インターフェロンを用いた治療に感受性
を有する疾患の治療において、ヒト・インターフェロン
の使用と組合わせて、遊離ラジカルスカベンジャー（特
に還元型グルタチオン）またはその前駆体若しくは誘起
剤（特にＮ−アセチルシステイン）を使用する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は複合治療(therapeutic c
ombination) 、特にヒト・インターフェロンの使用を含
む複合治療に関する。

【０００２】

【従来の技術】動物のウイルス感染に対する最初の且つ
局部的な応答は、リンホカインであるインターフェロン
を産生することである。インターフェロンは元々は単一
の分子と考えられていたが、現在では、進化的時期とし
ては古い大きなタンパク族として認識されており、動物
界に広く分布している。幾らかの限定された交差反応性
は存在し得るが、インターフェロンは一般に種特異的で
ある。最初は白血球インターフェロン、遷移芽細胞イン
ターフェロン及び免疫インターフェロンとして知られ、
現在では夫々インターフェロンα、βおよびγと命名さ
れた三種類のインターフェロンが特徴付けられている。

【０００３】ヒト・インターフェロンαは多くの異なっ
た細胞タイプによって産生され得るものであり、ＨＰＬ
Ｃを用いることによって、このタイプのインターフェロ
ンは異なる遺伝子によりコードされる３０以上のサブタ
イプに分割されている。ヒト・インターフェロンβは、
一般に単一の物質と考えられており、遷移芽細胞によっ
て製造される。ヒト・インターフェロンγもまた単一の
物質であり、抗原に対する露出の際にＴリンパ球のヘル
パー誘導されたサブセットによって、或いはヒト白血
球、Ｔリンパ球またはＴリンパ芽球をマイトジェンに対
して露出させることによって製造される。

【０００４】ヒト・インターフェロンαは、次の方法に
より商業的な量で製造されている。即ち、ナマルワア(N
amalwa) ヒト・リンパ芽球細胞ラインをセンダイウイル
スで刺激して、２２サブタイプまでのインターフェロン
αの天然混合物を産生し、次いで該混合物をクロマトグ
ラフィーにより純度95％、比活性約 100×10⁶ IU／mgタ
ンパクまで精製する。このような製品（ヒト・インター
フェロンα-Nl ）は、ウエルフェロン（WELLFERON ：ウ
エルカム・ファウンデーション・リミテッド社の登録商
標）の商品名で商業的に入手可能である。天然のヒト・
インターフェロンβは、ヒト・二倍体リンパ芽球（通常
は新生児組織由来）から誘導され、その製造は例えば合
成二重鎖ＲＮＡの添加によって誘起される。ヒト・イン
ターフェロンγは、スタフィロコッカス・エンテロトキ
シンＡのようなマイトジェンを誘起剤として、バッフィ
ーコート（buffy coats ：白血球層）から製造される。

【０００５】ヒト・インターフェロンα，βおよびγは
また、組換ＤＮＡ技術を用いて製造され得るが、関連遺
伝子のバクテリア内での発現によって製造されたとき、
組換型インターフェロンは天然の分子と同一の三次元構
造を有していないかもしれない。同様に、バクテリア細
胞内で産生されたインターフェロンはグリコシル化され
ないであろう。このことは、イン・ビトロでの試験では
分子の生物学的活性に影響するとは思えないが、コンホ
メーション及び抗原性を変化させ、体内における分布に
影響し得るかも知れない。このような組換型ヒト・イン
ターフェロンは、天然のヒト・インターフェロンとの間
で好ましくは90％以上の相同性、より好ましくは95％の
相同性、更に好ましくは97％の相同性、更に好ましくは
98％の相同性、更に好ましくは99％の相同性、最も好ま
しくは100 ％の相同性を有する。組換型ヒト・インター
フェロンは商業的に入手可能であり、その例は、例えば
インターフェロンα-2ａ（ROFERON ：ロッシュ社）およ
びインターフェロンα-2ｂ（INTRON：シェーリング社）
である。これらの分子は 23-位における単一のアミノ酸
残基のみが異なっている（ROFERON ではリジン、INTRON
ではアルギニン）。

【０００６】ヒト・インターフェロンは何年かに亘って
肝炎の治療に用いられている。1970年代の半ばに行なわ
れた最初の試みでは、提供血液から血漿を製造した後に
残ったバッフィーコート細胞から製造されたヒト白血球
インターフェロンが用いられ、これは必然的に入手可能
な量に限界があった。1980年代の初期における製造技術
の進歩によって、天然および組換型ヒト・インターフェ
ロンαの両者を使用した慢性Ｂ型肝炎の治療が導かれ
た。この治療は多くの症例において成功したが、ヒト・
αインターフェロン単独での治療に対する応答率は、ウ
イルスマーカーの持続的ロスで判定すると、一般的に50
％よりも低いと見做された。また、ヒト・インターフェ
ロンβおよびδも慢性Ｂ型肝炎での使用について研究さ
れたが、確立された治療法にはなっていない。

【０００７】インターフェロンβの入手可能性が低いた
め、このタイプのインターフェロンを用いた研究は制限
されるけれども、三つのタイプのインターフェロンの全
てが、慢性Ｃ型肝炎の治療についても研究されている。
上記で述べたα- インターフェロン（インターフェロン
α-2ａ、インターフェロンα-2ｂ及びリンパ芽球インタ
ーフェロン）を用いて非常に広範な試みが行なわれてお
り、患者の約40％に完全な応答が生じるという結果によ
ってこの研究は更に刺激されている。しかし、治療後の
６月間に約50％の再発率が観察されているため、長期に
亘って利益を受けるのは患者の20〜25％に過ぎない。

【０００８】インターフェロンの肝炎治療における使用
の完全な概観のために、参照文献として、1990年にペニ
ンプレス社(Pennine Press) から発行された、エドレス
トン(Eddleston) 及びディクソン(Dixon) による「肝臓
の慢性ウイルス感染の治療におけるインターフェロン」
を挙げておく。

【０００９】更に、インターフェロンは肝炎以外のウイ
ルス疾患、自己免疫症状を含む免疫系疾患、腎臓癌、乳
癌、大腸癌、カポシ肉腫、グリオーム及び悪性の血液病
学的症状を含む種々の癌等、他の多くの症状の治療にイ
ンターフェロンを使用することが提案されている。

【００１０】特にＨＩＶとの関連において、慢性ウイル
ス感染が感染組織に酸化的ストレスを生起させることを
示唆する幾つかの証拠がある。ウイルスによる酸化的ス
トレスの誘導は、免疫複合体による食細胞の活性化、前
炎症性サイトカイン類（ＴＮＦα、ＩＬ６）による遊離
ラジカル形成の促進、並びにウイルスの表面タンパクと
細胞膜との間の直接的相互作用による反応性酸素種の発
生を含む種々のメカニズムに起因して生じ得る。

【００１１】細胞または器官全体のレベルで、遊離ラジ
カルのスカベンジャーとして作用する多くの物質が知ら
れている。例えば、還元型グルタチオンは殆どの哺乳類
細胞に存在し、且つ広範に分布する非タンパク性チオー
ルであり、遊離ラジカルの解毒反応を含む種々の代謝機
能に関与している。グルタチオンは、酸化的ストレスに
対する、並びに遊離ラジカル形成を増大させて細胞間の
グルタチオン蓄積の消耗をもたらす因子に対する主要な
細胞間防御機構である。また、リンパ球の活性化および
増殖の調節、Ｔ細胞の細胞障害性の調節、並びにマクロ
ファージ／リンパ球相互作用の調節において、グルタチ
オンは重要な免疫調節の役割を果たす。

【００１２】Ｎ−アセチルシステインは長年に亘り、粘
膜溶解剤、角膜創傷治療剤およびアセトアミノフェン中
毒の解毒剤として知られている。該化合物は比較的温和
な還元作用を有し、ムコタンパクのジスルフィド結合を
開裂させることにより、粘膜溶解剤として作用すると思
われる。幾つかの慢性ウイルス感染症状、特にＨＩＶ感
染において、還元型グルタチオンのレベルが低下され得
るとの多くの報告がなされている。Ｎ−アセチルシステ
インはグルタチオンの前駆体および誘起剤であり、Ｎア
セチルシツテインはＨＩＶ感染の症例に使用するための
治療剤として提案されている。

【００１３】EP-A-0 269 017（シータス(Cetus) ）は、
遊離ラジカル生成によって惹起された哺乳類ホストの生
物学的損傷を治療するために、リンホカインまたはサイ
トトキシンと、遊離ラジカルスカベンジャーまたは代謝
阻害剤とを組み合わせて使用することに関する。因み
に、当該明細書はリンホカインとしてのインターフェロ
ンに言及しており、また生物学的損傷の可能な原因とし
て感染に言及しているが、該明細書の本質的な関心は癌
の治療中に発生し得る遊離ラジカルに集中している。明
細書中に記載された生物学的データは全体的に癌に関す
るものであり、主にネズミ遷移芽細胞種中のＴＮＦαの
投与に関するものである。

【００１４】本発明は、ヒト・インターフェロンを用い
た治療における補助としての、遊離ラジカルスカベンジ
ャーまたはその前駆体若しくは誘起剤の使用に関する。

【００１５】従って、一つの側面に従えば、本発明はイ
ンターフェロンを用いた治療に対して感受性をもった症
状に履患している患者を治療する方法であって、該患者
に対して有効量のヒト・インターフェロンを投与するこ
とを具備し、該ヒト・インターフェロンの投与期間の全
部または一部に亘って、遊離ラジカルスカベンジャーま
たはその前駆体若しくは誘起剤もまた投与される方法を
提供する。

【００１６】もう一つの側面に従えば、本発明は、イン
ターフェロンを用いた治療に対して感受性をもった症状
に履患している患者の治療であって、ヒト・インターフ
ェロンの投与期間の全部または一部に亘って遊離ラジカ
ルスカベンジャーまたはその前駆体若しくは誘起剤をも
投与する方法による治療のために用いる薬剤を製造する
ための、ヒト・インターフェロンの使用を提供する。

【００１７】本発明の更に別の側面に従えば、本発明
は、インターフェロンを用いた治療に対して感受性をも
った症状に履患している患者の治療であって、ヒト・イ
ンターフェロンの投与を含み、且つヒト・インターフェ
ロンの投与期間の全部または一部に亘って遊離ラジカル
スカベンジャーまたはその前駆体若しくは誘起剤をも投
与する方法による治療のために用いる薬剤を製造するた
めの、遊離ラジカルスカベンジャーまたはその前駆体若
しくは誘起剤の使用を提供する。

【００１８】インターフェロンを用いた治療に対して感
受性をもった症状とは、ヒト・インターフェロンが有効
な治療として確立され又は提案されている症状の何れで
あってもよい。このような症状には、ウイルス性肝炎、
ヒト乳頭腫ウイルス、サイトメガロウイルス及びＨＩＶ
により惹起される感染のようなウイルス感染と、結核の
ような非ウイルス性感染と、喘息のような症状とが含ま
れる。

【００１９】本発明は特に、肝炎の治療におけるヒト・
インターフェロンの使用に適用可能である。既述したよ
うに、このような治療は多くの症例において顕著な利益
をもたらすが、応答率は比較的低い。また、Ｃ型肝炎に
おいては実質的な再発率を無視できない。従って、これ
らの問題を克服するために、ヒト・インターフェロンを
用いた肝炎治療法を改良することに対する大きな必要性
が存在している。

【００２０】本発明に従って使用されるヒト・インター
フェロンの例には、先に述べたものが含まれる。

【００２１】他の側面に従えば、本発明は、ヒト・イン
ターフェロンの投与による肝炎ウイルス感染を治療する
方法であって、ヒト・インターフェロンの投与期間の全
部または一部に亘って遊離ラジカルスカベンジャーまた
はその前駆体若しくは誘起剤をも投与する方法を提供す
る。

【００２２】更なる側面に従えば、本発明は、ウイルス
性肝炎の治療であって、ヒト・インターフェロンの投与
期間の全部または一部に亘りって遊離ラジカルスカベン
ジャーまたはその前駆体若しくは誘起剤をも投与する方
法による治療のために用いる医薬を製造するための、ヒ
ト・インターフェロンの使用を提供する。

【００２３】更に別の側面に従えば、本発明は、ウイル
ス性肝炎の治療であって、ヒト・インターフェロンの投
与を含み、且つヒト・インターフェロンの投与期間の全
部または一部に亘って遊離ラジカルスカベンジャーまた
はその前駆体若しくは誘起剤をも投与する方法による治
療のために用いる薬剤を製造するための、遊離ラジカル
スカベンジャーまたはその前駆体若しくは誘起剤の使用
を提供する。

【００２４】更に別の側面に従えば、本発明は、インタ
ーフェロンを用いた治療に対して感受性のある症状の治
療に使用するための、ヒト・インターフェロンと、遊離
ラジカルスカベンジャーまたはその前駆体若しくは誘起
剤との増強された組み合わせ（相乗作用的組み合わせ）
を提供する。

【００２５】本発明の増強された組み合わせにおいて、
これら活性成分は別々の製剤として同時に若しくは逐次
的に投与されてもよく、また単一の配合剤として投与さ
れてもよい。逐次的な投与が行なわれる場合、第一の活
性成分の投与から第二の活性成分の投与までの遅延時間
は、これら活性成分の組み合わせにより増強された治療
効果を得る利益が失われるようなものであってはならな
い。

【００２６】本発明は、Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型および
Ｅ型としての現在認識されている５種類の全てのウイル
ス性肝炎の治療に適用することができる。

【００２７】Ａ型肝炎は糞便から口への経路で伝染する
潜伏期が４０日未満の急性のウイルス感染である。この
ウイルスは、ピコルナウイルス族の一員であり、外殻の
ない２７nmの球状粒子からなっている。そのウイルスゲ
ノムは配列が決定されており、約7480塩基を含む一本鎖
ＲＮＡからなっている。

【００２８】Ｂ型肝炎は普遍的かつ重篤なウイルス疾患
であり、世界的なキャリア数は 200万人以上と見積もら
れている。これが血清肝炎である分かったとき、該疾患
は輸血、ヒト血漿成分の注射または滅菌していない注射
針の使用から２〜３月後に発現する症状に基づいて診断
された。Ｂ型肝炎の血清マーカーが認識されることによ
って、ウイルスの伝染における皮膚透過、特に血液の重
要性が確認されている。この疾患の急性期を過ぎると、
成人患者の大多数は数週間の間に自然に回復するが、一
部は何ケ月を経てもウイルスを駆逐できずに慢性キャリ
アとなる。Ｂ型肝炎ウイルスはヘパドナウイルス族に属
し、そのゲノムは不完全な二本鎖構造を有する小さな環
状ＤＮＡからなっている。このＤＮＡの複製は、該ＤＮ
ＡをＲＮＡに転写し、次いで該ＲＮＡを逆転写酵素でＤ
ＮＡに再転写することによって行なわれる。

【００２９】非Ａ型、非Ｂ型の肝炎は、国際的な健康問
題としての重大さを増している。非Ａ型、非Ｂ型の輸血
後肝炎の症例の少なくとも80％は、現在はＣ型肝炎ウイ
ルスと同定されたウイルスによるものであることが示さ
れている。多分、該ウイルスによって、血液製品がＢ型
としてスクリーニングされるような臨床的環境での輸血
後肝炎は、事実上全ての症例が説明される。急性Ｃ型肝
炎の症例の約半数は数か月の間に自然に治癒するが、残
りは慢性化し、このような慢性症例の全てではないにし
ても多くは、実質的肝炎が肝硬変および環細胞性カルチ
ノーマに移行する可能性がある。最近になってＣ型肝炎
ウイルスゲノムの構造が解明され、該ウイルスはフラビ
ウイルスに類似した一本鎖ＲＮＡウイルスとして特徴付
けられている。

【００３０】Ｄ型肝炎ウイルスは、一定のＢ型肝炎キャ
リアでの新規抗原の同定に続いて、1977年に初めて認識
された。このウイルスは血清中においてヘルパーウイル
スより高い力価を達成し得る充分な効率で複製するにも
かかわらず、その複製にはヘルパーウイルスとしてＢ型
肝炎ウイルス（または密接に関連したヘパドナウイル
ス）を必要とする。Ｄ型肝炎ウイルスのゲノムは、共有
結合的に閉環された環状ＲＮＡからなり、植物中に見出
されるある種の環状ウイロイドまたはウイルス様物質と
の間の幾つかの構造的類似性を有している。Ｄ型肝炎の
感染は、攻撃的な肝臓疾患に関連しており、持続性の慢
性肝炎の患者でよりも、重篤な疾患（慢性の活発な肝炎
または肝硬変）の患者でより頻繁に見られる。

【００３１】Ｅ型肝炎ウイルスは、Ａ型肝炎を引起こす
ウイルスに関連しており（Reyes etall.,Science 247,
1335-1339(1990)）、慢性相を伴わない急性の肝炎を生
じさせる。このウイルスは腸水生(enteric, waterborn
e) であり、糞弁から口への経路で伝染する。このタイ
プの肝炎はインド亜大陸で流行しており、妊婦の死亡率
が高い。

【００３２】本発明はまた、非生殖器イボ(non-genital
warts) 、若年性咽喉パピローマ（juvenile laryngeal
papilloma) 、尖圭コンジローマの原因であり、頸部ガ
ン(cervical cancer) 中に含まれるヒト・パピローマウ
イルスの治療に適用することできる。本発明はまた、ヒ
トメガロウイルス及びＨＩＶによって引起こされる他の
ウイルス感染の治療に適用することができる。本発明は
また、結核のような非ウイルス性感染および喘息のよう
な症状の治療に適用することができる。

【００３３】本発明に従って使用されるヒト・インター
フェロンは、上記で述べた三つのタイプ、即ち、インタ
ーフェロンα、インターフェロンβ又はインターフェロ
ンγの何れであってもよい。一般に、該ヒト・インター
フェロンはインターフェロンαまたはインターフェロン
γである。好ましくは、該ヒト・インターフェロンはヒ
ト・インターフェロンαであり、より詳細には、培養中
のヒト細胞ラインから誘導されたヒト・インターフェロ
ンα若しくは組換型ヒト・インターフェロンαである。
一つの好ましい態様に従えば、該ヒト・インターフェロ
ンは組換型のインターフェロンα-2ａ又はインターフェ
ロンα-2ｂ、例えば ROFERON及びINTRONの商品名で市販
されている製品である。もう一つの特に好ましい態様に
従えば、該ヒト・インターフェロンは、例えば WELLFER
ONの商品名でウエルカム・ファウンデーション・リミテ
ッド社から製品として市販されている、ヒトリンパ芽球
インターフェロン（インターフェロンαＮ１）である。

【００３４】「ヒト・インターフェロン」の用語は、配
列がヒトから決定されている何れの野生型インターフェ
ロンをも包含し、また対応する野生型配列の活性を実質
的に保存し、且つ対応の野生型配列と80％以上の配列相
同性を有する何れの対立形質、変種または突然変異種を
も包含することを意図している。

【００３５】ヒト・インターフェロンは、問題の症状
（例えば肝炎）の治療において単独で使用するための処
方とにして、本発明に従う投与のために処方され得る。
従って、インターフェロンは、一般に非経腸的（例えば
注射、好ましくは皮下注射）に投与される。好ましく
は、インターフェロンは水溶液製剤として、或いは注射
のための適切な媒質（例えば水）を用いて再構成するこ
とを意図した凍結乾燥製品として処方される。また、該
処方は適切な担体、稀釈剤または安定化剤、例えばヒト
血清アルブミンのような他のヒト蛋白を含有してもよ
い。

【００３６】該ヒト・インターフェロンは一般に、問題
の製品について既に確立された治療プロトコールに従っ
て投与される。例えば、ヒト・インターフェロンα（リ
ンパ芽球性または組換型を問わず）は、一日当たり 1〜
10メガ単位のインターフェロン量で投与され得る。この
投与量が、一週間に３日以上、好ましくは一週間当たり
３回投与される。好ましい投与量の範囲は、一週間に３
日以上、好ましくは一週間に３回で一日当たり２〜６メ
ガ単位のインターフェロンであり、特に好ましいインタ
ーフェロンの投与量は、一週間に３日以上、好ましくは
一週間に３回以上で一日当たり５メガ単位、最も好まし
くは３メガ単位である。肝炎の治療において、インター
フェロンの投与期間は通常は週で数えられる期間間、例
えば12〜30週間（特には約24週間）であるが、幾つかの
症例においては１年以上の長期に亘る投与期間が適切で
あり得る。

【００３７】ここで用いる「遊離ラジカルスカベンジャ
ーまたはその前駆体若しくは誘起剤」の用語は、ホスト
に投与したときに、ホスト内の遊離ラジカル種（酸化的
ストレスとも言う）のレベルを低下させることができる
何れの物質をも意味する。該物質は、遊離ラジカル種を
直接スカベンジするか、或いは直接の生物学的前駆体等
では遊離ラジカル種に対するスカベンジ効果をもった物
質のホスト内での生成を誘導することによって、遊離ラ
ジカル種のレベルの低下をもたらす。或いは、該物質
は、遊離ラジカル種の発生を導くプロセスにおいて阻害
効果を発揮することによって、遊離ラジカル種のレベル
を低下させ得る。

【００３８】好ましい遊離ラジカルスカベンジャーまた
はその前駆体若しくは誘起剤には、グルタチオン、並び
に天然アミノ酸であるシステインの誘導体のようなグル
タチオンの前駆体が含まれる。グルタチオンの特に好ま
しい前駆体の一つは、Ｎ−アセチルシステインである。
先に述べたように、Ｎ−アセチルシステインは粘膜溶解
剤として既に確立した薬剤的用途を有しており、該化合
物の製剤は商業的に入手可能である。それ以外の遊離ラ
ジカルスカベンジャーまたはその前駆体若しくは誘起剤
には、ビタミンＡ、ビタミンＣ（アスコルビン酸）、ビ
タミンＥ、尿酸、ブチオニンスルホキシム(bithionine
sulphoxime) 、メトロニダゾールマレイン酸ジエチル(d
iethyl maleate metronidazole) 、スーパーオキシドジ
スムターゼ、及びメチオニンが含まれる。遊離ラジカル
種の生成を阻害する物質には、アロプリノールのような
キサンチンオキシダーゼ阻害剤が含まれ、これら物質は
ここで言う「遊離ラジカルスカベンジャーまたはその前
駆体若しくは誘起剤」と見做される。

【００３９】遊離ラジカルスカベンジャーまたはその前
駆体若しくは誘起剤は、ホスト内において遊離ラジカル
の生成を減少させることができ、及び／又は遊離ラジカ
ルの効果（酸化的ストレス）を和らげることができるよ
うな形態および投与量で投与されなければならない。そ
の投与は、該物質の性質に応じて、例えば経口又は非経
腸的経路のような何れかの都合のよい経路で行なわれ得
る。

【００４０】Ｎ−アセチルシステインは、好ましくは錠
剤、顆粒剤または液剤（例えばシロップ）の形態で、経
口投与のために製剤化される。Ｎ−アセチルシステイン
の適切な投与量は、一日当たり４回までに分けて投与さ
れる量として 200mg〜４ｇの範囲、例えば一日当たり４
回に分けて投与される 400〜800 mg、好ましくは一日当
たり４回に分けて投与される 600mgである。

【００４１】本発明に従って提供される例えばウイルス
性肝炎の治療法は、ヒト・インターフェロンと、遊離ラ
ジカルスカベンジャーまたはその前駆体若しくは誘起剤
とを組み合わせて投与することからなっており、この二
つの医薬は一般には別々の製剤として投与される。しか
しながら、幾つかの状況においては、これら二つの成分
を単一の配合剤として投与することが有利であり得る場
合があり、本発明はこのような配合剤にも及ぶ。

【００４２】従って、本発明の更に別の側面に従えば、
遊離ラジカルスカベンジャーまたはその前駆体若しくは
誘起剤と共に、ヒト・インターフェロンを含有する薬剤
組成物が提供される。

【００４３】一般には、このような配合剤は何れも非経
腸的投与、例えば注射を意図した形態になるであろう。
このような配合剤は液状の形態で提供され得、或いはヒ
ト・インターフェロンが液状への再構成に適するように
凍結乾燥された固状形態として提供され得る。

【００４４】また、上記二つの医薬を、別々の投与に適
した形態で一緒に提供することも適切であろう。従っ
て、本発明のもう一つの側面に従えば、夫々が別々に投
与されるように包装された、ヒト・インターフェロンと
遊離ラジカルスカベンジャーまたはその前駆体若しくは
誘起剤とを具備したツインパック形態が提供される。

【００４５】本発明は特に、Ｂ型肝炎またはＣ型肝炎の
治療に適用することができる。上記で述べたように、ヒ
ト・インターフェロン、特に組換型またはリンパ芽球型
のインターフェロンαは、Ｂ型肝炎の治療法として既に
確立されている。加えて、多くの試みによって、同じ療
法がＣ型肝炎の治療においても顕著な利益をもたらすこ
とが示されている。本発明に従えば、肝炎、特にＢ型肝
炎またはＣ型肝炎の患者のインターフェロンを用いた治
療は本質的に、ヒト・インターフェロンでの治療期間の
全部または一部に亘って遊離ラジカルスカベンジャーま
たはその前駆体若しくは誘起剤を用いた治療を追加しな
がら、確立されたプロトコールに従って行なわれる。

【００４６】血清中におけるアラニンアミノトランスフ
ェラーゼ（ＡＬＴ）のレベルは、環機能障害に対する高
感度のマーカーである。Ｂ型肝炎およびＣ型肝炎の感染
は、両者共にＡＴＬレベルの上昇によって特徴付けら
れ、該疾患の進行は一般に血清ＡＬＴの測定によってモ
ニターされる。既述したように、Ｂ型肝炎またはＣ型肝
炎の患者のうちでヒト・インターフェロンαでの治療に
反応するのは、ウイルスマーカーの有意なクリアランス
またはＡＴＬレベルの有為な低下によって決定される場
合、約５０％以下に過ぎない。

【００４７】特にＢ型肝炎またはＣ型肝炎、最も特徴的
にはＣ型肝炎の治療に適用され得る本発明の一態様に従
えば、ヒト・インターフェロン（特にヒト・インターフ
ェロンα）での治療が、週で数えられる期間、例えば１
２〜３０週間（特に約２４週間）に亘って通常の方法で
行なわれる。血清ＡＴＬレベルの有為な減少によって判
断したときに、ヒト・インターフェロンを用いたこの初
期治療コースに反応できなかった患者に対しては、ヒト
・インターフェロンでの治療を継続すると共に、遊離ラ
ジカルスカベンジャーまたはその前駆体若しくは誘起
剤、特にグルタチオンまたはその前駆体若しくは誘起
剤、最も好ましくはＮ−アセチルシステインを用いた治
療が加えられる。ヒト・インターフェロンと、遊離ラジ
カルスカベンジャーまたはその前駆体若しくは誘起剤と
を用いた治療は、更に何週間かに亘って、例えば１２〜
３０週間（特に約２４週間）継続される。本発明の好ま
しい態様に従えば、この治療プロトコールは、ヒト・リ
ンパ芽球インターフェロン（ヒト・インターフェロンα
−Ｎ１）を用いたＣ型肝炎の治療に適用される。

【００４８】既述したように、Ｂ型肝炎またはＣ型肝炎
の一定の患者は、初期にはヒト・インターフェロン（特
にヒト・インターフェロンα）での治療に反応し得る
が、その後に再発し得る。このような患者に対しても、
ヒト・インターフェロンと遊離ラジカルスカベンジャー
またはその前駆体若しくは誘起剤とを組み合わせた治療
コースは有益であり得る。

【００４９】ヒト・インターフェロンの投与量、及び遊
離ラジカルスカベンジャーまたはその前駆体若しくは誘
起剤の投与量は、患者および該患者の精密な症状に応じ
て変化することが理解されなければならない。結局、こ
の治療法は臨床医の責任のもとにその管理に委ねられ
る。

【００５０】以下、臨床試験に基づいて本発明を更に詳
細に説明するが、この試験は以下なる意味においても本
発明の範囲を限定するものと解釈されてはならない。

【００５１】実施例 ＜１＞イントロダクション Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）は殆どの輸血後肝炎、並び
に突発性の非Ａ型および非Ｂ型肝炎の原因である。この
感染症の慢性化は非常に普通に起こり、慢性肝炎、肝硬
変および最終的には悪性変質に至る。幾つかの管理され
た研究によって、αインターフェロン（ＩＦＮ）が慢性
Ｃ型肝炎（ＣＨＣ）の治療に有用であることが示された
が、その応答率は平均５０％であり、ＩＦＮ治療を停止
した後の再発頻度は３０〜４０％に達する。従って、Ｉ
ＦＮ治療を止めた後にも、正常なトランスアミナーゼレ
ベルを維持しているＣＨＣ患者の比率は、略２０〜４０
％に過ぎない。

【００５２】還元型グルタチオン（ＧＳＨ）は哺乳類細
胞における重要な抗酸化剤であり、極めて多岐に亘る細
胞機能に関与している。また、ＡＩＤＳのような或る種
の慢性ウイルス性疾患において、ＧＳＨの消失は病原的
役割を果たすことが示唆されている。この研究では、少
なくとも４月間のＩＦＮ治療に反応しなかったＣＨＣ患
者の血漿および抹消血液単核細胞（ＰＢＭＣ）中におい
て、ＧＳＨレベルが測定された。該チオールの前駆体で
あるＮ−アセチルシステインについて、そのＧＳＨレベ
ルに対する影響と、ＩＦＮ治療への臨床的およびウイル
ス学的応答に対する影響もまた評価された。

【００５３】＜２＞患者および方法 ２．１ 患者：組織学的基準および血清学的基準によっ
てＣＨＣと診断された１４人の患者（男性１３人および
女性１人；平均年齢５１才；年齢範囲２７〜７１才；う
ち２人は肝硬変を併発）について臨床試験が行なわれ
た。これら患者の全員が、αリンパ芽球インターフェロ
ン（ウエルフェロン）での治療を最低４カ月間受けてお
り（15±1.6 ＭＵ／週、9-21ＭＵ／週の範囲）、試験開
始時には患者全員が異常なＡＬＴ値（30ＩＵ／Ｌ）を示
した。ＩＦＮに反応する殆どのＣＨＣ患者は、該治療の
最初の３カ月以内にトランスアミナーゼレベルの正常化
が達成される。この治療を４カ月以上続けても高いＡＬ
Ｔレベルを維持する患者は、該治療に反応しないと看做
すことができる。従って、今回の試験においては、上記
患者の全員がＩＮＦに対して非反応性である。今回の試
験において、患者は彼等が以前受けていたと本質的に同
じＩＦＮレジメを継続されたが、一日に 600mgのＮ−ア
セチルシステイン（ＮＡＣ）の経口投与（８時間置き）
が新たに追加された。このＮＡＣの追加後も、患者全員
についてインターフェロンの投与量は増量されなかっ
た。しかし、三つの症例ではインターフェロンの量が若
干減量された（ＮＡＣ投与前は15±1.8 ＭＵ／週であっ
たが、ＮＡＣ投与後は11.5±1.3 ＭＵ／週）。

【００５４】加えて、最近になって慢性Ｃ型肝炎と診断
されたが、未だ抗ウイルスチ治療を受けたことのない１
０人の患者（男性８人、女性２人；平均年齢３２才；年
齢範囲２４〜６３才）に対して、インターフェロンを投
与することなく、上記と同様のＮＡＣの経口投与を行な
った。

【００５５】２６人の健康人（男性１４人、女性１２
人；平均年齢４３才；年齢範囲２５〜７９才）を対照群
とした。全員の患者について、情報を了知させた上で同
意書の提出を受け、試験は地域倫理委員会の承認を受け
て行なわれた。

【００５６】２．２ ＰＢＭＣおよび血症中のＧＳＨ測
定：夫々の患者から、ＰＢＭＣ中のＧＳＨ（Ｌ−ＧＳ
Ｈ）および血小板欠乏血漿中のＧＳＨ（Ｐ−ＧＳＨ）を
同時に測定するための血液サンプルを得た。ＰＢＭＣ
は、リンフォプレップ［Lymphoprep: ノルウエー国オス
ロ市のニコムドファーマ社(Nycomed Pharma AS) 製］を
用いた遠心分離によって単離され、５回洗浄された。単
離された細胞を、20％過塩素酸（最終濃度２％）で致死
させ、更に遠心（４℃において1200ｇ×10分）した後、
上清を -40℃で使用時まで貯蔵した。血小板欠乏血漿に
20％過塩素酸（最終濃度２％）を添加し、遠心した後、
上清を使用時まで -40℃に保った。

【００５７】貯蔵サンプルを解凍し、Ferrer et al., B
iochem.J., 264,531-534(1990)によって改良された Bri
gellus et al., Biochem. Pharmacol.,32, 2529-2534(1
983)の方法に従ってＧＳＨを測定した。ＧＳＨ−Ｓ−ト
ランスフェラーゼの存在下に、ＧＳＨを１−クロロ−
２，４−ジニトロベンゼン（ＣＤＮＢ：シグマ社製）に
結合させた。該複合体の 370 nm における吸光度を、パ
ーキン・エルマー社のラムダ２型分光光度計を用いて測
定した。分子吸光係数 9.6×10³ を用いて、ＧＳＨの絶
対値を求めた。

【００５８】２．３ ＲＮＡの抽出およびＲＴ−ＰＣ
Ｒ：本質的には、Ruiz et al.,Hepatology, 16, 637-64
3(1992) および印刷中のcheng et al., J.Hepatol(199
2) に記載された方法に従って、血清中のＨＣＶ−ＲＮ
Ａ、並びにＰＢＭＣ中におけるＨＣＶ−ＲＮＡの陽性ま
たは陰性鎖について、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（Ｒ
Ｔ−ＰＣＲ）が行なわれた。汚染リスクを減少するため
に、Kwoks and Highch, Nature, 339, 237-238(1989)で
推奨されている方法が厳格に適用された。全ての抽出及
び反応は、陽性及び陰性の対照において同時に行なわれ
た。ＰＢＭＣの最後の洗浄から得たアリコートも含めら
れ、これらサンプルにおいてＰＣＲは常に陰性であっ
た。

【００５９】２．４ 統計的分析：全てのデータは、平
均値±平均の標準誤差（ＳＥＭ）として提示されてい
る。対の又は非対のデータは、マンホイットニー(Mann
Whitney)及びウイルコクソン(Wilcoxon)試験を用いて作
成された。

【００６０】＜３＞図面 結果は、添付の図面を参照して説明される。

【００６１】ここで、図１はこの研究に参加した１４人
の患者について、ＡＬＴレベルに対するＩＦＮの効果
（−４〜０月）およびＩＦＮ＋ＮＡＣの効果（０〜６
月）を示している。

【００６２】図２は、ＩＦＮでの治療期間中およびＩＦ
Ｎ＋ＮＡＣでの治療期間中に行なわれた、ＰＢＭＣｓ中
におけるＨＣＶ−ＲＮＡの陽性鎖および陽性鎖の検出を
示している。

【００６３】図３は、ＩＦＮを用いた治療に対するＮＡ
Ｃの追加前および追加後の両方で行なわれた、血清稀釈
1：10の血清中におけるＨＣＶ−ＲＮＡの検出を示して
いる。

【００６４】図４は、ＩＦＮ＋ＮＡＣ療法の開始後１１
月まで追跡した、図１に記載した患者におけるＡＬＴレ
ベルを示している。

【００６５】＜４＞結果：この研究に参加した１４人の
患者についての平均血清ＡＬＴレベルが下記の表１に示
されている。この表にはまた、Ｌ−ＧＳＨおよびＰ−Ｇ
ＳＨも示されている。

【００６６】

【表１】 対照群のＬ−ＧＳＨ値およびＰ−ＧＳＨ値は次の通りで
ある。

【００６７】 Ｌ−ＧＳＨ： 3.43±0.89 ｎＭol／10⁶ 細胞 Ｐ−ＧＳＨ： 18.1±4.08 μＭ 抗ウイルス治療を受けたことのない慢性Ｃ型肝炎患者
（ｎ＝１０）では、そのＧＳＨレベルが血症中（0.63±
0.07μＭ／10⁶ 細胞）、並びにＰＢＭＣ中（1.02±0.09
ｎＭol／10⁶ 細胞）において、健康な対照（18.1±4.08
μＭol／10⁶ 細胞、及び3.43±0.89ｎＭol／10⁶ 細胞，
ｐ＜0.01）と比較して有意に減少していた。１月間のＮ
ＡＣ投与によって、ＰＢＭＣ中でのＧＳＨレベルは有意
に増加したが（2.22±0.38ｎＭol／10⁶ 細胞；ｐ＜0.0
5）、血漿中でのＧＳＨレベルには有意な改善は認めら
れなかった（0.99±0.22μＭol／n.s.）。加えて、血清
ＡＬＴレベルにも有意な改善は認められなかった（ 128
±32ＩＵ／Ｌに対して、ＮＡＣを用いた１月の治療後で
110 ±29ＩＵ／Ｌ）。

【００６８】インターフェロンに反応しない患者におい
ても、そのＧＳＨレベルは、ＰＢＭＣ中（1.45±0.27ｎ
Ｍ／10⁶ 細胞）並びに血漿中（0.77±0.21μＭol／10⁶
細胞）において、健康な対照と比較して有意に減少して
いた（ｐ＜0.01）。これらの患者に対し、3.4 カ月に亘
ってインターフェロンと共にＮＡＣを投与することによ
り、ＧＳＨのレベルは、単核細胞中（3.32±0.18ｎＭol
／10⁶ 細胞，ｐ＜0.05）および血漿中（2.40±0.20μＭ
ol，ｐ＜0.05）において有意に増加した。

【００６９】図１および上記表は、この研究に参加した
患者（インターフェロンに反応しない）において、４月
のＩＦＮ治療の間にＡＬＴレベルは有意に変化しなかっ
たことを示している（ 139±24に対して 124±17ＩＵ／
Ｌ，n.s.）。しかしながら、ＮＡＣを経口投与によっ
て、ＡＬＴの迅速かつ有意な低下がもたらされた。即
ち、該複合療法の僅か１月後でさえも、ＡＬＴ値は有意
に減少した（87±9 ＩＵ／Ｌ，ｐ＜0.05）。更に、ＩＦ
ＮおよびＮＡＣの５〜６月間に亘る継続的投与によって
全ての症例でＡＬＴ値は更に低下し（37±4 ＩＵ／
Ｌ）、４１％の症例では正常値に達し、残りの症例でも
略正常値に達した（一つの症例では最大56ＩＵ／Ｌ）。
ＩＦＮレジメにＮＡＣを追加することによって、以前は
ＩＦＮ療法に対して反応しない症例に分類された患者の
場合にも、ＩＦＮに対する反応が明瞭に改善される。図
４に見られるように、このＡＬＴ値における減少傾向
は、患者の極く最近の分析（複合療法の開始後１１月）
にまで継続している。

【００７０】ＩＦＮおよびＮＡＣの組み合わせによるＡ
ＬＴレベルの低下には、ウイルスの複製に対する付随効
果が伴われた。ＩＦＮに対して非反応性と分類された９
人の患者の症例において、その治療にＮＡＣを追加する
前および追加した後に、ＨＣＶのゲノム鎖（陽性ＲＮＡ
鎖）および該ウイルスの複製中間体（陰性ＲＮＡ鎖）の
存在についてＰＢＭＣが試験された。図２に示したよう
に、患者をＩＦＮのみで治療したときには、ゲノム鎖は
７症例（７７％）で検出され、複製中間体は３症例（３
３％）で検出された。しかしながら、ＩＦＮおよびＮＡ
Ｃを組合わせた複合治療の４〜６月後には、陽性鎖は２
症例（２２％）で検出されたに過ぎず、また陰性のＨＣ
Ｖ−ＲＮＡ鎖は何れの症例でも検出されなかった。

【００７１】また、ＩＦＮレジメに対するＮＡＣの追加
には、血清中のＨＣＶ−ＲＮＡレベルの低下が伴われ
る。図３に示したように、該療法に対してＮＡＣを追加
した後は、ＨＣＶの検出のために血清濃度の増大を必要
とした。従って、ＮＡＣを追加する前には、血清を 1：
10に稀釈してもＨＣＶ−ＲＮＡが 100％の症例で検出さ
れたが、治療にＮＡＣを追加した後は、同じ血清稀釈に
おいては患者の70％にのみウイルスが検出された。

【図面の簡単な説明】

【図１】慢性Ｃ型肝炎患者のＡＬＴレベルに対する、Ｉ
ＦＮの効果（−４〜０月）およびＩＦＮ＋ＮＡＣの効果
（０〜６月）を示すグラフ。

【図２】ＩＦＮでの治療期間中およびＩＦＮ＋ＮＡＣで
の治療期間中に行なわれた、ＰＢＭＣｓにおけるＨＣＶ
−ＲＮＡの陽性鎖および陽性鎖の検出を示すグラフ。

【図３】ＩＦＮを用いた治療に対するＮＡＣの追加前お
よび追加後の両方で行なわれた、血清稀釈 1：10の血清
中におけるＨＣＶ−ＲＮＡの検出を示すグラフ。

【図４】ＩＦＮ＋ＮＡＣ療法の開始後１１月まで追跡し
た、図１に記載した患者におけるＡＬＴレベルを示すグ
ラフ。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 オスカル・ベロクイ・ルイズ スペイン国、キントデー・パンプロナ、ト ラベシア・モナステリオ・ウルダックス ２

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 Ｃ型肝炎を治療するための医薬であっ
   て、ヒト・インターフェロンと、遊離ラジカルスカベン
   ジャーまたはその前駆体若しくは誘起剤とを活性成分と
   して含有する薬剤組成物の形態である医薬。
2. 【請求項２】 Ｃ型肝炎を治療するための医薬であっ
   て、活性成分としてヒト・インターフェロンを含有する
   第一の製剤パックと、活性成分として遊離ラジカルスカ
   ベンジャーまたはその前駆体若しくは誘起剤を含有し且
   つ前記第一の製剤とは別に投与されるように製剤化され
   た第二の製剤パックとからなるツインパック形態の医
   薬。
3. 【請求項３】 ヒト・インターフェロンの投与との相乗
   作用的組合わせによりＣ型肝炎を治療するための医薬で
   あって、活性成分として遊離ラジカルスカベンジャーま
   たはその前駆体若しくは誘起剤を含有する医薬。
4. 【請求項４】 ヒト・インターフェロンの投与との相乗
   作用的組合わせにより感染性肝炎を治療するための医薬
   であって、活性成分として遊離ラジカルスカベンジャー
   またはその前駆体若しくは誘起剤を含有する医薬。
5. 【請求項５】 請求項１〜４の何れか１項に記載の医薬
   であって、前記ヒト・インターフェロンが天然型または
   組換型のヒト・インターフェロンαである医薬。
6. 【請求項６】 請求項１〜５の何れか１項に記載の医薬
   であって、前記遊離ラジカルスカベンジャーまたはその
   前駆体若しくは誘起剤が、グルタチオンまたはその前駆
   体若しくは誘起剤である医薬。
7. 【請求項７】 請求項１〜５の何れか１項に記載の医薬
   であって、前記遊離ラジカルスカベンジャーまたはその
   前駆体若しくは誘起剤がＮ−アセチルシステインである
   医薬。
8. 【請求項８】 ヒト・インターフェロンと、遊離ラジカ
   ルスカベンジャーまたはその前駆体若しくは誘起剤とか
   らなる相乗作用的組合わせ。
9. 【請求項９】 請求項８に記載の相乗作用的組合わせで
   あって、前記ヒト・インターフェロンが天然型または組
   換型のインターフェロンαであり、前記遊離ラジカルス
   カベンジャーまたはその前駆体若しくは誘起剤がＮ−ア
   セチルシステインである組合わせ。