JPH0623744B2

JPH0623744B2 - 亜硝酸塩検出用試験片

Info

Publication number: JPH0623744B2
Application number: JP61144641A
Authority: JP
Inventors: 武男野村; 宏鈴木; 裕子川上
Original assignee: Terumo Corp
Current assignee: Terumo Corp
Priority date: 1986-06-20
Filing date: 1986-06-20
Publication date: 1994-03-30
Anticipated expiration: 2009-03-30
Also published as: JPS631970A

Description

【発明の詳細な説明】Ｉ発明の背景 (1) 技術分野本発明は、体液、特に尿中の亜硝酸塩を検出するための
試験片に関する。

(2) 先行技術およびその問題点最近、迅速診断剤は、医学プラクティスおよび臨床検査
において著しく重要になっており、迅速診断剤として、
吸水性基材を用いたいわゆる試験片が多く使用されてい
る。この試験片は、吸水性基材（多くの場合、紙であ
る）に検出反応に必要な薬剤を含浸させており、これを
測定対象の体液中に浸漬すると、検出すべき物質が存在
する場合には呈色反応を呈し、その存在を容易に確認す
ることができる。

医学的診断で非常に重要になった測定項目として、体液
中の亜硝酸塩の測定がある。

亜硝酸塩は、例えば大腸菌、パラ大腸菌、チフス菌、パ
ラチフス菌、ブドウ球菌および腸球菌などの一定の細菌
等の硝酸塩還元活動によって生じるものである。

従って、亜硝酸塩、特に、尿中の亜硝酸塩の検出は、人
体に対し病原となる細菌や微生物による感染を診断する
ために重要である。

そして、亜硝酸塩の検出の原理は、亜硝酸塩を酸性条件
下にジアゾ化可能なアミンと反応させることによりジア
ゾ化合物を形成させ、該ジアゾ化合物にカップリング剤
を反応させて赤色発色団のアゾ基−Ｎ＝Ｎ−を有するジ
アゾ化合物を形成させる。この色の濃度が、亜硝酸イオ
ンの濃度と十分な相関関係を有することにより、亜硝酸
塩量の尺度となる。

上記のような亜硝酸塩検出用試験片として、多くの試験
片があり、例えば、吸収キャリヤ上でジアゾ化可能なア
ミン、ジアゾニウム塩とのカップリング成分及び固体の
有機酸より成り、亜硝酸塩及び亜硝酸塩を形成する細菌
を検出するに当り、カップリング成分として、1,2,3,4-
テトラヒドロ-7,8-ベンゾキノリンまたはその誘導体を
含有するものがある（特公昭49-27719号公報）。

しかし、従来の試験片は、熱、光、湿気（水分）などに
対し、その影響を受け易く、安定性が悪いという問題点
を有していた。

II 発明の目的本発明の目的は、熱、光、湿気（水分）などに対し、そ
の影響を受けにくく、安定性を向上させた亜硝酸塩検出
用試験片を提供することにある。

上記目的を達成するものは、吸水性基材に、ジアゾ化可
能なアミンおよび１，２，３，４−テトラヒドロ−７，
８−ベンゾキノリンまたはその誘導体であるカップリン
グ剤とともに、固体の無機酸を担持させた亜硝酸塩検出
用試験片である。

さらに、前記固体の無機酸が、ホウ酸、モリブデン酸、
メタリン酸よりなる群から選ばれた少なくとも一種の無
機酸であることが好ましい。さらに、前記1,2,3,4-テト
ラヒドロ-7,8-ベンゾキノリンまたはその誘導体が、1,
2,3,4-テトラヒドロ-7,8-ベンゾキノリン塩酸塩である
ことが好ましい。また、前記ジアゾ化可能なアミンが、
芳香族第１級アミンであることが好ましい。さらに、前
記芳香族第１級アミンが、スルファニルアミドであるこ
とが好ましい。また、前記吸水性基材が、紙であること
が好ましい。

III発明の具体的説明本発明の亜硝酸塩検出用試験片は、吸水性基材に、ジア
ゾ化可能なアミンおよび１，２，３，４−テトラヒドロ
−７，８−ベンゾキノリンまたはその誘導体であるカッ
プリング剤とともに、固体の無機酸を担持させた試験片
であり、ジアゾカップリング反応を用いて検体液中の亜
硝酸塩を検出測定するものである。本発明の試験片に含
有されるジアゾ化可能なアミンは、酸性条件下に検体液
中に含まれる亜硝酸塩と作用してジアゾ化合物を形成す
るものであり、芳香族第１級アミン類が使用でき、特に
アルサニル酸およびスルファニルアミドが好適に使用で
きる。

また、本発明の試験片に含有されるカップリング剤は、
1,2,3,4-テトラヒドロ-7,8-ベンゾキノリンまたはその
誘導体であり、例えば、1,2,3,4-テトラヒドロ-7,8-ベ
ンゾキノリン、1,2,3,4-テトラヒドロ-7,8-ベンゾ(h)キ
ナルジン、3-ヒドロキシ-Ｎ-メチル-1,2,3,4-テトラベ
ンゾ(h)キノリン、3-アセトキシ-Ｎ-メチル-1,2,3,4-テ
トラベンゾ(h)キノリン、Ｎ-メチル-1,2,3,4-テトラベ
ンゾ(h)キノリン、1,2,3,4-テトラヒドロ-7,8-ベンゾキ
ノリン塩酸塩などがあり、特に1,2,3,4-テトラヒドロ-
7,8-ベンゾキノリン塩酸塩が好ましい。

また、本発明の試験片に含有される亜硝酸塩とジアゾ化
可能なアミンとの反応において酸性条件を与える酸に
は、固体の無機酸が使用されている。本発明では、この
無機酸を使用したことにより熱、光、湿気に対し、安定
性を向上させることができた。固体の無機酸としては、
ホウ酸、ヨウ素酸、モリブデン酸、タングステン酸、チ
タン酸、バナジウム酸、セレン酸、メタリン酸などが使
用でき、好ましくは、ホウ酸、モリブデン酸、メタリン
酸よりなる群から選ばれた少なくとも一種の無機酸であ
り、特に、メタリン酸が好ましい。そして、上記無機酸
の量は、グリース反応に必要なｐＨ値が得られる程度含
有されていることが必要であり、含有量が少ないと呈色
反応に時間がかかる。

また、試験片を検体液中に浸漬したとき、検体液が均一
に湿潤するように湿潤剤を試験片に含有させてもよい。
湿潤剤としては、ラウリル硫酸ナトリウム、ドデシル硫
酸ナトリウム、テトラドデシル硫酸ナトリウム、ドデシ
ルベンゼンスルホン酸ナトリウム等のアルキルベンゼン
スルホン酸ナトリウム、ジヘプチルスルホコハク酸ナト
リウム等のジアルキルスルホコハク酸塩等の界面活性剤
が好適に使用できる。

また、試験片には、吸水性基材に含有させた薬剤の流出
を防止するために、粘調剤を含有させることが好まし
い。粘調剤としては、ポリビニルアルコール、ポリビニ
ルピロリドン、ポリエチレングリコール、ポリアクリル
酸塩、ポリアクリルアミド、ポリ（ヒドロキシエチルメ
タクリレート）、ポリ（ヒドロキシエチルアクリレー
ト）、カルボキシメチルセルロース等の重合体、ゼラチ
ン、アラビアゴム等が使用でき、特に、ポリビニルピロ
リドンが好ましい。

前記薬剤は、溶媒、例えばベンゼン、トルエン、キシレ
ン、メタノール、エタノール、イソプロパノール、アセ
トン、メチルエチルケトン、クロロホルム、四塩化炭
素、酢酸エチル、水等に溶解させ、該溶液を吸水性基材
に含浸させて乾燥させることにより、基材にそれら薬剤
を担持させる。

また、本発明の試験片に使用する吸水性基材としては、
濾紙等の紙、ガラス繊維またはプラスチック素材からな
る不織布、吸水性プラスチックシート等があり、試験片
に含有させる薬剤、その溶媒および検体液と反応したり
あるいはそれらに溶解したりせず、かつ吸水性を有して
いるものであればよい。好ましくは、紙である。次に、
実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明する。

［実施例１］Ａ液 1,2,3,4-テトラヒドロ-7,8-ベンゾキノリン塩酸塩 0.1g メタリン酸 2.0g ポリビニルピロリドン 10 g 蒸溜水 100ml Ｂ液スルファニルアミド 0.09g 酢酸エチル 100ml 濾紙にＡ液を含浸させた後、乾燥させ、さらにＢ液に含
浸させ乾燥させ本発明の試験片を作成した。Ａ液とＢ液
に分けた理由は、それぞれの試薬の溶媒に対する溶解性
が異なるからである。また、Ａ液を先に含浸させ乾燥さ
せた後、Ｂ液を含浸させ乾燥させのは、ジアゾ化可能な
アミンとカップリング剤が接触して生じる安定性の低下
を避けるためである。

作成した試験片の色は、白色であった。

［実施例２］Ａ液 1,2,3,4-テトラヒドロ-7,8-ベンゾキノリン塩酸塩 0.1g ホウ酸 1.5g ポリビニルピロリドン 10 g 蒸溜水 100ml Ｂ液スルファニルアミド 0.09g 酢酸エチル 100ml とし、実施例１と同様に濾紙にＡ液を含浸させた後、乾
燥させ、さらにＢ液に含浸させ乾燥させ本発明の試験片
を作成した。

作成した試験片の色は、白色であった。

［実施例３］Ａ液 1,2,3,4-テトラヒドロ-7,8-ベンゾキノリン塩酸塩 0.1g モリブデン酸 1.0g ポリビニルピロリドン 10 g 蒸溜水 100ml Ｂ液スルファニルアミド 0.09g 酢酸エチル 100ml とし、実施例１と同様に濾紙にＡ液を含浸させた後、乾
燥させ、さらにＢ液に含浸させ乾燥させ本発明の試験片
を作成した。

作成した試験片の色は、白色であった。

［比較例１］Ａ液 1,2,3,4-テトラヒドロ-7,8-ベンゾキノリン塩酸塩 0.1g 酒石酸 3.7g ポリビニルピロリドン 10 g 蒸溜水 100ml Ｂ液スルファニルアミド 0.09g 酢酸エチル 100ml 濾紙にＡ液を含浸させた後、乾燥させ、さらにＢ液に含
浸させ乾燥させ比較例１の試験片を作成した。

作成した試験片の色は、白色であった。

［比較例２］比較例１の酒石酸の代わりにクエン酸 4.7ｇを用いた以
外は、比較例１と同じものを用いて比較例２の試験片を
作成した。

［比較例３］比較例１の酒石酸の代わりにリンゴ酸 3.3ｇを用いた以
外は、比較例１と同じものを用いて比較例３の試験片を
作成した。

［比較例４］比較例１の酒石酸の代わりにシュウ酸 3.1ｇを用いた以
外は、比較例１と同じものを用いて比較例４の試験片を
作成した。

上記比較例２ないし４の試験片の色は、比較例１と同様
に白色であった。

上記の各実施例および各比較例の試験片を用いて以下の
実験を行った。

［実験１］作成した各試験片を６０℃の恒温装置に入れ、試験片自
体の色変化と性能の変化を１日後、２日後、３日後、６
日後について調べた。

性能の変化については、亜硝酸塩濃度陰性のヒト正常
尿、亜硝酸塩を濃度 0.2μg/mlとなるように添加したヒ
ト正常尿、および亜硝酸塩を濃度 1.5μg/mlとなるよう
に添加したヒト正常尿に各試験片を浸漬して行った。

試験片自体の色変化のついての結果を表１に、試験片の
性能の変化についての結果を表２(ａ)ないし表２(ｃ)に
示す。

［実験２］作成した各試験片を室内光（照度500Lx、紫外線強度0.0
09μw/cm²）にあて、試験片自体の色変化と性能の変化
を見た。

色変化については、室温で遮光した状態で保管したもの
と比較して行い、性能の変化については、１分，３分，
７分，１０分，３０分，６０分について行った。

試験片自体の色変化のついての結果を表３に、試験片の
性能の変化についての結果を表４(ａ)ないし表４(ｃ)に
示す。

［実験３］作成した各試験片を温度４０℃，相対湿度７５％の恒温
恒湿装置に入れ、試験片自体の色変化と性能の変化を１
日後、３日後、６日後、９日後について調べた。

性能の変化については亜硝酸塩濃度陰性のヒト正常尿お
よび亜硝酸塩を濃度 1.5μg/mlとなるように添加したヒ
ト正常尿に各試験片を浸漬して行った。

試験片自体の色変化のついての結果を表５に、試験片の
性能の変化についての結果を表６(ａ)および表６(ｂ)に
示す。

以上の実験の結果により無機酸を用いた本発明の実施例
による試験片のほうが有機酸を用いた比較例の試験片よ
りも温度、光および湿気に対し安定であることがわかっ
た。

IV 発明の具体的効果本発明の亜硝酸塩検出用試験片は、吸水性基材に、ジア
ゾ化可能なアミンおよび１，２，３，４−テトラヒドロ
−７，８−ベンゾキノリンまたはその誘導体であるカッ
プリング剤とともに、固体の無機酸を担持させたもので
あるので、熱、光、湿気などに対し、その影響を受けに
くく、安定性が高く、さらに確実かつ容易に体液中の亜
硝酸塩の検出および測定を行うことができる。

特に、固体の無機酸がメタリン酸であり、カップリング
剤が、1,2,3,4-テトラヒドロ-7,8-ベンゾキノリン塩酸
塩であり、ジアゾ化可能なアミンが、スルファニルアミ
ドであれば、より優れたものとなる。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】吸収性基材に、ジアゾ化可能なアミン、
１，２，３，４−テトラヒドロ−７，８−ベンゾキノリ
ンまたはその誘導体であるカップリング剤、および固体
の無機酸を担持させたことを特徴とする亜硝酸塩検出用
試験片。
【請求項２】前記固体の無機酸が、ホウ酸、モリブテン
酸、メタリン酸よりなる群から選ばれた少なくとも一種
の無機酸である特許請求の範囲第１項に記載の亜硝酸塩
検出用試験片。
【請求項３】前記１，２，３，４−テトラヒドロ−７，
８−ベンゾキノリンまたはその誘導体が、１，２，３，
４−テトラヒドロ−７，８−ベンゾキノリン塩酸塩であ
る特許請求の範囲第１項または第２項に記載の亜硝酸塩
検出用試験片。
【請求項４】前記ジアゾ化可能なアミンが、芳香族第１
級アミンである特許請求の範囲第１項ないし第３項のい
ずれかに記載の亜硝酸塩検出用試験片。
【請求項５】前記芳香族第１級アミンが、スルファニル
アミドである特許請求の範囲第４項に記載の亜硝酸塩検
出用試験片。
【請求項６】前記吸水性基材が、紙である特許請求の範
囲第１項ないし第５項のいずれかに記載の亜硝酸塩検出
用試験片。