JPH0623760B2 - 抗ｄ血液型判定用試薬 - Google Patents
抗ｄ血液型判定用試薬Info
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- JPH0623760B2 JPH0623760B2 JP63050710A JP5071088A JPH0623760B2 JP H0623760 B2 JPH0623760 B2 JP H0623760B2 JP 63050710 A JP63050710 A JP 63050710A JP 5071088 A JP5071088 A JP 5071088A JP H0623760 B2 JPH0623760 B2 JP H0623760B2
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
ための抗Ｄ血液型判定用試薬。【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はＲｈ式血液型のＲｈｏ（Ｄ）因子の検出を行う
ための抗Ｄ血液型判定用試薬に関する。
ための抗Ｄ血液型判定用試薬に関する。
Ｒｈ式血液型はLandsteiner とWienerにより発見されて
以来、不適合輸血や不適合妊娠の検査としてＡＢＯ式血
液型と並び重要視されてきた。現在Ｒｈ因子（抗原）は
４０数種類が見けられているが、通常Ｒｈ（＋）または
（−）の表現がＤ因子の陽性、陰性を意味するように、
日常検査においてこのＲｈｏ（Ｄ）因子の検出が最も多
く行われている。
以来、不適合輸血や不適合妊娠の検査としてＡＢＯ式血
液型と並び重要視されてきた。現在Ｒｈ因子（抗原）は
４０数種類が見けられているが、通常Ｒｈ（＋）または
（−）の表現がＤ因子の陽性、陰性を意味するように、
日常検査においてこのＲｈｏ（Ｄ）因子の検出が最も多
く行われている。
Ｒｈｏ（Ｄ）因子の検出には抗Ｄ血液型判定用試薬を用
いて行うことができる。ところがＲｈ式血液型の検査で
はＡＢＯ式血液型の検査のようにオモテ検査とウラ検査
という確認の手段がない。従って、Ｒｈ式血液型の検査
を行うにあたっては操作に留意すると共に、用いる試薬
は特に力価や特異性について十分に保証されていること
が必要である。
いて行うことができる。ところがＲｈ式血液型の検査で
はＡＢＯ式血液型の検査のようにオモテ検査とウラ検査
という確認の手段がない。従って、Ｒｈ式血液型の検査
を行うにあたっては操作に留意すると共に、用いる試薬
は特に力価や特異性について十分に保証されていること
が必要である。
従来より抗Ｄ血液型判定用試薬としては、ヒトまたはそ
の他の動物を免疫して得られた抗血清である抗Ｄポリク
ローナル抗体を用いた抗Ｄ血液型判定用血清がある。
の他の動物を免疫して得られた抗血清である抗Ｄポリク
ローナル抗体を用いた抗Ｄ血液型判定用血清がある。
一方、最近では１９７５年にＫｈｌｅｒとMilsteinら
の研究に始まるモノクローン抗体産生ハイブリドーマの
作成技術、所謂細胞融合の技術による抗Ｄモノクローナ
ル抗体も作成されている（例えば、特開昭５９−１３２
８８８、特開昭６０−１３６５９９）。このモノクロー
ナル抗体は、従来のポリクロナール抗体に比べて、単ク
ーロンより産生されるため高い特異性を有し、均質なも
のが永続的に得られるので、これを使用した抗Ｄ血液型
判定用試薬の製造供給が大いに期待されているところで
ある。
の研究に始まるモノクローン抗体産生ハイブリドーマの
作成技術、所謂細胞融合の技術による抗Ｄモノクローナ
ル抗体も作成されている（例えば、特開昭５９−１３２
８８８、特開昭６０−１３６５９９）。このモノクロー
ナル抗体は、従来のポリクロナール抗体に比べて、単ク
ーロンより産生されるため高い特異性を有し、均質なも
のが永続的に得られるので、これを使用した抗Ｄ血液型
判定用試薬の製造供給が大いに期待されているところで
ある。
しかし、抗Ｄモノクローナル抗体は特異性は優れている
が、これをそのまま用いてＲｈｏ（Ｄ）因子の検出を肉
眼で凝集として観察する場合、実用上力価の点に問題が
残っていた。
が、これをそのまま用いてＲｈｏ（Ｄ）因子の検出を肉
眼で凝集として観察する場合、実用上力価の点に問題が
残っていた。
通常、生理食塩水中の血球浮遊液（抗原）はマイナス側
に荷電しているたため、血球間で互いに反発しあってい
る。従って血球間は一定の距離を保っていて、それ以上
近づくことはない。一方抗体であるＩｇＧの抗原結合部
位の長さは血球間を架橋させるには至らず、ＩｇＧ抗体
と血球は反応していてもＩｇＧ抗体のみでは肉眼的に血
球を凝集させることはできない。このため抗Ｄポリクロ
ーナル抗体を用いた場合には、この凝集反応を補うのに
普通アルブミンを添加している。その結果血球間の反発
エネルギーが押さえられ、Ｒｈｏ（Ｄ）因子との凝集反
応が増強されて実用上力価が上がり、肉眼で充分に凝集
を観察することができる。
に荷電しているたため、血球間で互いに反発しあってい
る。従って血球間は一定の距離を保っていて、それ以上
近づくことはない。一方抗体であるＩｇＧの抗原結合部
位の長さは血球間を架橋させるには至らず、ＩｇＧ抗体
と血球は反応していてもＩｇＧ抗体のみでは肉眼的に血
球を凝集させることはできない。このため抗Ｄポリクロ
ーナル抗体を用いた場合には、この凝集反応を補うのに
普通アルブミンを添加している。その結果血球間の反発
エネルギーが押さえられ、Ｒｈｏ（Ｄ）因子との凝集反
応が増強されて実用上力価が上がり、肉眼で充分に凝集
を観察することができる。
しかし、抗Ｄモノクローナル抗体を用いた場合には、こ
のような蛋白質の添加だけではＲｈｏ（Ｄ）因子との凝
集反応が十分には増強されず、肉眼での凝集の観察は困
難であり、厚生省で定める抗Ｄ血液型判定用血清の製造
基準に達することが出来ない。従って、抗Ｄモノクロー
ナル抗体を用いた抗Ｄ血液型判定用試薬は未だ実用化さ
れていないのが実情である。
のような蛋白質の添加だけではＲｈｏ（Ｄ）因子との凝
集反応が十分には増強されず、肉眼での凝集の観察は困
難であり、厚生省で定める抗Ｄ血液型判定用血清の製造
基準に達することが出来ない。従って、抗Ｄモノクロー
ナル抗体を用いた抗Ｄ血液型判定用試薬は未だ実用化さ
れていないのが実情である。
本発明の目的は、Ｒｈｏ（Ｄ）因子の検出にあたり抗Ｄ
モノクローナル抗体を用いても、その凝集反応が充分に
増強され、実用上力価の高い抗Ｄ血液型判定用試薬を提
供することにある。
モノクローナル抗体を用いても、その凝集反応が充分に
増強され、実用上力価の高い抗Ｄ血液型判定用試薬を提
供することにある。
本発明者らは、このような課題を解決し上述の目的を達
成するため鋭意研究を進めた結果、蛋白質の存在下に、
抗Ｄモノクローナル抗体としてイムノグロブリンサブク
ラスがＩｇＧタイプのものとイムノグロブリンサブクラ
スがＩｇＭタイプのものを併用させると、Ｒｈｏ（Ｄ）
因子との凝集反応が顕著に増強され、肉眼で十分に凝集
を観察することができることを見い出し、さらに研究を
重ねて本発明を完成するに至った。
成するため鋭意研究を進めた結果、蛋白質の存在下に、
抗Ｄモノクローナル抗体としてイムノグロブリンサブク
ラスがＩｇＧタイプのものとイムノグロブリンサブクラ
スがＩｇＭタイプのものを併用させると、Ｒｈｏ（Ｄ）
因子との凝集反応が顕著に増強され、肉眼で十分に凝集
を観察することができることを見い出し、さらに研究を
重ねて本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明はイムノグロブリンサブクラスがＩｇ
Ｇタイプの抗Ｄモノクローナル抗体、イムノグロブリン
サブクラスがＩｇＭタイプの抗Ｄモノクローナル抗体お
よび蛋白質よりなることを特徴とするＲｈｏ（Ｄ）因子
検出のための抗Ｄ血液型判定用試薬に関するものであ
る。
Ｇタイプの抗Ｄモノクローナル抗体、イムノグロブリン
サブクラスがＩｇＭタイプの抗Ｄモノクローナル抗体お
よび蛋白質よりなることを特徴とするＲｈｏ（Ｄ）因子
検出のための抗Ｄ血液型判定用試薬に関するものであ
る。
本発明の抗Ｄ血液型判定用試薬に用いる抗Ｄモノクロー
ナル抗体としては、イムノグロブリンサブクラスがＩｇ
Ｇタイプの抗Ｄモノクローナル抗体とイムノグロブリン
サブクラスがＩｇＭタイプの抗Ｄモノクローナル抗体が
併用して使用される。とりわけ、そのうちでも特異性が
安定している点から、ヒト−ヒトハイブリドーマから産
生されたヒト型抗Ｄモノクローナル抗体が好ましい。
ナル抗体としては、イムノグロブリンサブクラスがＩｇ
Ｇタイプの抗Ｄモノクローナル抗体とイムノグロブリン
サブクラスがＩｇＭタイプの抗Ｄモノクローナル抗体が
併用して使用される。とりわけ、そのうちでも特異性が
安定している点から、ヒト−ヒトハイブリドーマから産
生されたヒト型抗Ｄモノクローナル抗体が好ましい。
ＩｇＧタイプとＩｇＭタイプとの配合割合は、本発明の
目的を達成しうるものであれば特に限定はないが、通常
それぞれの力価として１：４から４：１、好ましくは
１：２から２：１の割合となるように配合される。
目的を達成しうるものであれば特に限定はないが、通常
それぞれの力価として１：４から４：１、好ましくは
１：２から２：１の割合となるように配合される。
本発明の抗Ｄ血液型判定用試薬に用いる蛋白質として
は、本発明の目的を満足するものはすべて用いることが
できる。具体的な蛋白質の例としては、アルブミンがあ
げられる。
は、本発明の目的を満足するものはすべて用いることが
できる。具体的な蛋白質の例としては、アルブミンがあ
げられる。
その添加量は、一概に限定されないが、通常５〜３０
％、好ましくは１０〜２５％の濃度になるように添加さ
れる。
％、好ましくは１０〜２５％の濃度になるように添加さ
れる。
本発明の抗Ｄ血液型判定用試薬は上述のように構成され
ているが、当該試薬は厚生省の定める抗Ｄ血液型判定用
血清の製造基準に適合するものである。この製造基準の
うち凝集反応に関しては、凝集力試験と凝集価試験があ
り、凝集力試験は定められた条件のともで陽性検体を用
い、凝集開始までの時間（秒）および凝集塊の大きさが
１mm2に達するまでの時間（秒）を測定する。また凝集
価試験は定められた条件のもとで２倍連続希釈し、陽性
を示す最高希釈倍数から凝集価を求める。
ているが、当該試薬は厚生省の定める抗Ｄ血液型判定用
血清の製造基準に適合するものである。この製造基準の
うち凝集反応に関しては、凝集力試験と凝集価試験があ
り、凝集力試験は定められた条件のともで陽性検体を用
い、凝集開始までの時間（秒）および凝集塊の大きさが
１mm2に達するまでの時間（秒）を測定する。また凝集
価試験は定められた条件のもとで２倍連続希釈し、陽性
を示す最高希釈倍数から凝集価を求める。
この際、アルブミン液抗体血清では凝集力試験と凝集価
試験に規定があるが、食塩液抗体血清では凝集価試験の
みである。従来のポリクローナル抗体を使用した抗Ｄ血
液型判定用血清は、単独でアルブミン液抗体血清および
食塩液抗体血清の両者の特性を満足することができない
が、本発明の抗Ｄ血液型判定用試薬では、この両者の特
性が満足され、どちらの方法でも使用することできる。
試験に規定があるが、食塩液抗体血清では凝集価試験の
みである。従来のポリクローナル抗体を使用した抗Ｄ血
液型判定用血清は、単独でアルブミン液抗体血清および
食塩液抗体血清の両者の特性を満足することができない
が、本発明の抗Ｄ血液型判定用試薬では、この両者の特
性が満足され、どちらの方法でも使用することできる。
さらに、本発明の抗Ｄ血液型判定用試薬は、ＤＵ因子の
検出のための間接クームス試験を行うことができる。一
般にＤＵ因子は抗Ｄ抗体との反応が弱いものの総称とさ
れ、明瞭な凝集反応が認められなかった場合、Ｒｈｏ
（Ｄ）因子が陰性かどうかの確認が必要となる。このよ
うな場合、本発明の抗Ｄ血液型判定用試薬では、間接ク
ームス試験を行い、その凝集の有無から真のＲｈｏ
（Ｄ）陰性について判定することができる。
検出のための間接クームス試験を行うことができる。一
般にＤＵ因子は抗Ｄ抗体との反応が弱いものの総称とさ
れ、明瞭な凝集反応が認められなかった場合、Ｒｈｏ
（Ｄ）因子が陰性かどうかの確認が必要となる。このよ
うな場合、本発明の抗Ｄ血液型判定用試薬では、間接ク
ームス試験を行い、その凝集の有無から真のＲｈｏ
（Ｄ）陰性について判定することができる。
本発明の抗Ｄ血液型判定用試薬は、モノクローナル抗体
を用いることにより、ポリクローナル抗体に比べて高い
特異性のものが永続的に産生できる。従って、本発明の
抗Ｄ血液型判定用試薬は優れた均質な特性のものとして
ロット間差なく製造することができるという効果を有す
る。
を用いることにより、ポリクローナル抗体に比べて高い
特異性のものが永続的に産生できる。従って、本発明の
抗Ｄ血液型判定用試薬は優れた均質な特性のものとして
ロット間差なく製造することができるという効果を有す
る。
特に、抗Ｄモノクローナル抗体としてイムノグロブリン
サブクラスＩｇＧタイプの抗Ｄモノクローナル抗体とイ
ムノグロブリンサブクラスがＩｇＭタイプの抗Ｄモノク
ローナル抗体とを併用することによって、Ｒｈｏ（Ｄ）
因子に対する凝集反応が増強されて実用上力価が上が
り、かつアルブミン液抗体血清および食塩液抗体血清の
両者の特性を満足することができ、とちらの方法も使用
することができるという効果を有する。
サブクラスＩｇＧタイプの抗Ｄモノクローナル抗体とイ
ムノグロブリンサブクラスがＩｇＭタイプの抗Ｄモノク
ローナル抗体とを併用することによって、Ｒｈｏ（Ｄ）
因子に対する凝集反応が増強されて実用上力価が上が
り、かつアルブミン液抗体血清および食塩液抗体血清の
両者の特性を満足することができ、とちらの方法も使用
することができるという効果を有する。
また、本発明の抗Ｄ血液型判定用試薬は、ＤＵ因子の検
出のための間接クームス試験を行うことができるという
効果をも有する。これはＩｇＭタイプのモノクローナル
抗体では行うことができない。
出のための間接クームス試験を行うことができるという
効果をも有する。これはＩｇＭタイプのモノクローナル
抗体では行うことができない。
以上のことから明らかなように、本発明の抗Ｄ血液型判
定用試薬は臨床検査の分野に有用なものとして供するこ
とができる。
定用試薬は臨床検査の分野に有用なものとして供するこ
とができる。
以下に本発明の実施例を示すが、本発明はこれら実施例
に限定されるものではない。
に限定されるものではない。
実施例１ 本発明の抗Ｄ血液型判定用試薬は次のようにして作製す
ることができる。ます抗Ｄモノクローナル抗体のイムノ
グロブリンサブクラスがＩｇＧタイプのバルクをとり、
それと同じ力価の抗Ｄモノクローナル抗体のイムノグロ
ブリンサブクラスがＩｇＭタイプのバルクを加える。こ
れにウシアルブミンを２０％の濃度になるように加え、
さらに防腐剤としてアジ化ナトリウムを０．１％の濃度
になるように加えたあと、除菌し無菌的にバイアルに小
分けして作製する。
ることができる。ます抗Ｄモノクローナル抗体のイムノ
グロブリンサブクラスがＩｇＧタイプのバルクをとり、
それと同じ力価の抗Ｄモノクローナル抗体のイムノグロ
ブリンサブクラスがＩｇＭタイプのバルクを加える。こ
れにウシアルブミンを２０％の濃度になるように加え、
さらに防腐剤としてアジ化ナトリウムを０．１％の濃度
になるように加えたあと、除菌し無菌的にバイアルに小
分けして作製する。
試験例１ 本発明の抗Ｄ血液型判定用試薬の凝集力試験については
次のように実施した。まずＤ陽性血球の４０ｖ／ｖ％浮
遊液をウシアルブミン溶液を用いて作製し、載せガラス
上でのこの２滴に実施例１で製作した抗Ｄ血液型判定用
試薬の１滴を混合し、凝集が開始するまでの時間を測定
した（測定１）。更にその凝集塊の大きさが１mm2に達
した時間も測定した（測定２）。このとき対照として抗
Ｄ血液型判定用試薬の代わりに、抗Ｄモノクローナル抗
体のイムノグロブリンサブクラスがＩｇＧタイプのもの
および抗Ｄモノクローナル抗体からなる市販のDade社製
造品も同様に試験した。
次のように実施した。まずＤ陽性血球の４０ｖ／ｖ％浮
遊液をウシアルブミン溶液を用いて作製し、載せガラス
上でのこの２滴に実施例１で製作した抗Ｄ血液型判定用
試薬の１滴を混合し、凝集が開始するまでの時間を測定
した（測定１）。更にその凝集塊の大きさが１mm2に達
した時間も測定した（測定２）。このとき対照として抗
Ｄ血液型判定用試薬の代わりに、抗Ｄモノクローナル抗
体のイムノグロブリンサブクラスがＩｇＧタイプのもの
および抗Ｄモノクローナル抗体からなる市販のDade社製
造品も同様に試験した。
その結果は表１のようになり、本発明の抗Ｄ血液型判定
用試薬は凝集力試験において満足できる成績を示した。
用試薬は凝集力試験において満足できる成績を示した。
試験例２ 本発明の抗Ｄ血液型判定用試薬のアルブミン液抗体血清
としての凝集価試験については次のように実施した。ま
ず陽性血球の２ｖ／ｖ％浮遊液をウシアルブミン溶液を
用いて作製する。次に実施例１で作製した抗Ｄ血液型判
定用試薬をＡＢ型血清で２０連続希釈し、それぞれ０．
１mlを試験管にとり、これに上記の血球浮遊液０．１ml
を加え混割する。これを遠心沈澱し凝集を観察する。こ
の凝集を示す最高希釈倍数から凝集価を求める。このと
き対照として抗Ｄモノクローナル抗体のイムノグロブリ
ンサブクラスがＩｇＧタイプのものおよび抗Ｄポリクロ
ーナル抗体からなる市販のDade社製造品も同様に試験し
た。
としての凝集価試験については次のように実施した。ま
ず陽性血球の２ｖ／ｖ％浮遊液をウシアルブミン溶液を
用いて作製する。次に実施例１で作製した抗Ｄ血液型判
定用試薬をＡＢ型血清で２０連続希釈し、それぞれ０．
１mlを試験管にとり、これに上記の血球浮遊液０．１ml
を加え混割する。これを遠心沈澱し凝集を観察する。こ
の凝集を示す最高希釈倍数から凝集価を求める。このと
き対照として抗Ｄモノクローナル抗体のイムノグロブリ
ンサブクラスがＩｇＧタイプのものおよび抗Ｄポリクロ
ーナル抗体からなる市販のDade社製造品も同様に試験し
た。
その結果は表２のようになり、本発明の抗Ｄ血液型判定
用試薬はアルブミン液抗体血清としての凝集価試験にお
いても満足できる成績を示した。
用試薬はアルブミン液抗体血清としての凝集価試験にお
いても満足できる成績を示した。
試験例３ 本発明の抗Ｄ血液型判定用試薬の食塩液抗体血清として
の凝集価試験については次のように実施した。まず陽性
血球の２ｖ／ｖ％浮遊液を生理食塩液浮遊液を用いて作
製する。次に実施例１で作製した抗Ｄ血液型判定用試薬
を生理食塩液で２倍連続希釈し、それぞれ０．１mlを試
験管にとり、これに上記の血球浮遊液０．１mlを加え混
和する これを遠心沈澱し凝集を観察する。この凝集を示す最高
希釈倍数から凝集価を求める。このとき対照として抗Ｄ
モノクローナル抗体のイムノグロブリンサブクラスがＩ
ｇＧタイプのものも同様に試験した。
の凝集価試験については次のように実施した。まず陽性
血球の２ｖ／ｖ％浮遊液を生理食塩液浮遊液を用いて作
製する。次に実施例１で作製した抗Ｄ血液型判定用試薬
を生理食塩液で２倍連続希釈し、それぞれ０．１mlを試
験管にとり、これに上記の血球浮遊液０．１mlを加え混
和する これを遠心沈澱し凝集を観察する。この凝集を示す最高
希釈倍数から凝集価を求める。このとき対照として抗Ｄ
モノクローナル抗体のイムノグロブリンサブクラスがＩ
ｇＧタイプのものも同様に試験した。
その結果は表３のようになり、本発明の抗Ｄ血液型判定
用試薬は食塩液抗体血清としての凝集価試験においても
満足できる成績を示した。
用試薬は食塩液抗体血清としての凝集価試験においても
満足できる成績を示した。
なお、この際、対象として用いた抗Ｄモノクローナル抗
体（ＩｇＧタイプ）は厚生省の製造基準に適合すること
が出来なかった。
体（ＩｇＧタイプ）は厚生省の製造基準に適合すること
が出来なかった。
Claims (1)
- 【請求項１】イムノグロブリンサブクラスがＩｇＧタイ
プの抗Ｄモノクローナル抗体、イムノグロブリンサブク
ラスがＩｇＭタイプの抗Ｄモノクローナル抗体および蛋
白質よりなることを特徴とするＲｈｏ（Ｄ）因子検出の
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63050710A JPH0623760B2 (ja) | 1988-03-03 | 1988-03-03 | 抗ｄ血液型判定用試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63050710A JPH0623760B2 (ja) | 1988-03-03 | 1988-03-03 | 抗ｄ血液型判定用試薬 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01223349A JPH01223349A (ja) | 1989-09-06 |
| JPH0623760B2 true JPH0623760B2 (ja) | 1994-03-30 |
Family
ID=12866451
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63050710A Expired - Lifetime JPH0623760B2 (ja) | 1988-03-03 | 1988-03-03 | 抗ｄ血液型判定用試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0623760B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113341163B (zh) * | 2021-06-03 | 2024-01-19 | 上海市血液中心 | 一种-d-稀有血型筛选试剂及其应用 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0115062A3 (de) * | 1982-12-30 | 1986-08-27 | Biotest Aktiengesellschaft | Monoklonale Antikörper, im direkten Agglutinationstest reagierend, spezifisch für das humane Blutgruppenantigen D (Rho) und Hybridoma-Zell-Linien, die diese monoklonalen Antikörper produzieren |
| JPS60136599A (ja) * | 1983-12-26 | 1985-07-20 | Isao Ono | モノクロ−ナル抗体 |
| GB8610106D0 (en) * | 1986-04-25 | 1986-05-29 | Central Blood Lab Authority | Human igm-producing heterohybridoma |
| JPH0690206B2 (ja) * | 1986-06-16 | 1994-11-14 | 日本赤十字社 | 抗原抗体複合物及びその使用方法 |
-
1988
- 1988-03-03 JP JP63050710A patent/JPH0623760B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH01223349A (ja) | 1989-09-06 |
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