JPH06247870A

JPH06247870A - インターロイキン−６を含有する医薬製剤

Info

Publication number: JPH06247870A
Application number: JP5033693A
Authority: JP
Inventors: Kazuhiro Takasu; 和宏鷹栖; Junko Ono; 順子大野; Michihide Miyazawa; 道秀宮沢; Akira Yabuki; 昭矢吹
Original assignee: Ajinomoto Co Inc
Current assignee: Ajinomoto Co Inc
Priority date: 1993-02-23
Filing date: 1993-02-23
Publication date: 1994-09-06

Abstract

(57)【要約】【目的】ＩＬ−６の安定性、溶状、器壁への吸着防止を
向上させた医薬製剤を提供する。【構成】ＩＬ−６に例えばヒト血清アルブミン、還元
性物質等を加えて凍結乾燥する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は医薬品等として有用なイ
ンターロイキン−６の医薬製剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】インターロイキン−６（以下，ＩＬ−６
と略称することがある。）は、ＢＳＦ−２とも呼ばれ、
当初Ｂ細胞を抗体産生細胞へ分化させる因子（ＢＣＤ
Ｆ：Ｂ−cell Ｄifferentiation Ｆactor−２）として
クローニングされたリンホカインであることが報告され
ている(Ｔ．Ｈirano et. al. Ｎature 324，73，198
6）。この他にもインターロイキン−６は、種々の生物
活性を示すことが報告されているが、なかでも血球の幹
細胞の増殖作用（Ｐroceedings of Ｎational Ａcademy
of Ｓcience、84巻、9035頁、1987年）、血小板前駆細
胞から血小板へ分化させる作用（特開平３−101624号公
報）を有する。

【０００３】またＢ細胞分化因子の遺伝子配列の特定に
関する発明(特開昭63−42688号公報，特開昭63−56291
号公報）からＢ細胞分化因子は、184個のアミノ酸より
なるポリペプチドであることが示され、Ｂ細胞分化因子
の遺伝子工学的な生産方法（特開昭63−157996号公報）
も開発されている。

【０００４】さらにＩＬ−６の薬理的作用の研究とし
て、血小板減少症の治療剤としての応用の研究（特開平
３−101624号公報）がある。その他に癌の化学療法や、
ワクチンの作用を増強する薬として利用が強く期待され
てきた。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】さて、ＩＬ−６は不安
定で、水溶液の保存あるいは凍結融解の繰り返しによ
り、容易に溶液中に濁りを生じ活性が低下する。さら
に、アンプル、バイアル瓶、注射器等の器壁への吸着に
よる活性の低下を示す。これらの問題点は依然として残
されたままである。ＩＬ−６は、これらの性質により、
医療等に用いる上で正確な量の投与が期し難い等、投与
の上で甚だ問題があった。

【０００６】本発明は、上記の問題点を解決して安定な
ＩＬ−６の医薬製剤を提供することを目的とする。

【０００７】

【問題点を解決するための手段】そこで、上記のような
問題点を解決するために、本発明者らは鋭意研究を進め
た結果、安定なＩＬ−６の凍結乾燥医薬製剤の製造に成
功し、本発明を完成したものである。

【０００８】本発明は、ＩＬ−６を含有し、溶液状態で
ｐＨ２〜11を示すように調製した凍結乾燥医薬製剤を提
供するものである。

【０００９】本発明におけるＩＬ−６は、哺乳動物のも
のであればいかなるものでもよいが、ヒトのものが好ま
しい。また、ＩＬ−６は、天然あるいは遺伝子組み換え
技術で得られるいずれのものでもよい。

【００１０】ＩＬ−６は、配列番号１で表されるもので
ある。このものは、例えば遺伝子組み換え技術で製造さ
れる非グリコシル化ＩＬ−６である。ＩＬ−６は前述の
生物活性を有するものであればよく、上記アミノ酸配列
のＮ末端又はＣ末端側が欠落して短縮したものやあるい
はさらにアミノ酸が結合して長鎖化したものでもよい。
例えば、Ｎ末端にＡlaが付加されたものでもよく、又、
Ｎ末端のＰroが除去されたものでもよい。例えば、ＣＨ
Ｏ細胞から産生したものは糖鎖がつながっているがこれ
でもよい。要は、ＩＬ−６活性を有する限り、本発明に
於いて使用することができる。

【００１１】本発明のＩＬ−６の医薬製剤には、安定
性、凍結乾燥したときの外観や再溶解した液の溶状、器
壁への吸着防止等を向上させるため、ヒト血清アルブミ
ン又は還元性物質を含有させることが好ましい。使用す
るヒト血清アルブミン（以下，ＨＳＡと略記する。）
は、非経口投与に用いられる程度の高品質のものがよ
く、安定化剤として、アセチルトリプトファンナトリウ
ムやカプリル酸ナトリウムを、また含有するＨＳＡを用
いてもよい。ＨＳＡはＩＬ−６の１重量部に対し、１重
量部〜20,000重量部、好ましくは５重量部〜1,000重量
部の範囲内の量で含有させる。

【００１２】還元性物質は、例えば、還元型グルタチオ
ン、チオクト酸、Ｎ−アセチルシステインやアスコルビ
ン酸などが挙げられ、特に還元型グルタチオンおよびア
スコルビン酸が好ましい。これら還元性物質は、１種ま
たは２種以上併用することもでき、更に、ＨＳＡと併用
することもできる。還元性物質はＩＬ−６の１重量部に
対し、１重量部〜20,000重量部、好ましくは5重量部〜
1,000重量部の範囲内の量で含有させる。

【００１３】本発明のＩＬ−６の医薬製剤には、さらに
アミノ酸、糖アルコール、塩類の少なくとも一種類以上
を配合することにより、その外観をさらに向上させ、保
存中のＩＬ−６活性の低下が極めて少なく、注射剤とし
て投与する場合の疼痛が軽減される等の優れた特徴を発
揮させることができる。アミノ酸はグリシン、アスパラ
ギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、ア
ルギニンなどであり、糖アルコールはイシトール、ソル
ビット、マンニット等であり、塩類は塩化ナトリウム、
塩化カリウム等が好ましい。アミノ酸にあってはとりわ
けグリシンが、糖アルコールにあってはとりわけマンニ
ットが、塩類にあってはとりわけ塩化ナトリウムが好ま
しい。配合量としては、ＩＬ−６の１重量部に対し、ア
ミノ酸については１重量部〜20,000重量部、とりわけ4
重量部〜5,000重量部、糖アルコールについては１重量
部〜40,000重量部、とりわけ４重量部〜10,000重量部、
塩類については１重量部〜10,000重量部、とりわけ4重
量部〜5,000重量部の範囲内の量で含有させることが好
ましい。

【００１４】さらに、本発明のＩＬ−６の医薬製剤に
は、酒石酸、クエン酸、リン酸等の緩衝剤やｐＨ調整
剤、無痛化剤、溶解補助剤、等張化剤、賦形剤等をさら
に配合することができる。

【００１５】本発明の医薬製剤は凍結乾燥品とすること
が特に好ましい。凍結乾燥の方法については、特に限定
を受けるものではない。例えば、所定量のＨＳＡの溶液
中にＩＬ−６を含有する水溶液を加えた後、前記のごと
くｐＨを調整し、所望により小分けし、−30℃〜−70℃
で凍結させ常法により減圧乾燥すればよい。

【００１６】本発明の医薬製剤は水溶液またはリン酸
塩、クエン酸等の緩衝剤を含む溶液として用いる。ＩＬ
−６の濃度は0.01〜100mg／mlが有利に用いられる。

【００１７】本発明のＩＬ−６の凍結乾燥医薬製剤を注
射用水で再溶解した溶液状態でｐＨ２〜11、好ましくは
ｐＨ３〜９、特に好ましくはｐＨ４〜８を示すようにす
るために、塩酸、リン酸等の鉱酸、もしくは酒石酸、ク
エン酸等の有機酸またはそれらの塩からなる緩衝剤を配
合して所定のｐＨに調整するか、または、これらの緩衝
剤にさらに水酸化ナトリウム等のｐＨ調整剤を加えて、
所定のｐＨに調整してもよい。

【００１８】本発明の手法はＩＬ−６に限らず、他の蛋
白質、例えば、インターフェロン−α，β，γやインタ
ーロイキン−１，２等に用い、その安定性等を向上させ
ることができる。

【００１９】

【実施例】以下の実施例においてＩＬ−６の残存活性の
測定は以下のごとく実施した。

【００２０】逆相系高速液体クロマトグラフィー法Ｃ４逆相カラム（4.6mmφ×250mm，５μｍ）を用い、Ｉ
Ｌ−６として１μｇ以上を注入し、以下の条件でＩＬ−
６の量を測定する。相移動；次のグラジエント方式を用いる。Ａ・Ｂ混液
（60：40）で平衡化したカラムに試料を導入し、移動相
Ｂが８分間に10ν／ν％増加する割合の直線濃度勾配
で、移動組成相がＡ・Ｂ混液（25：75）まで溶出する。

【００２１】移動相Ａ…水：トリフルオロ酢酸（1000：１）移動相Ｂ…アセトニトリル：水：トリフルオロ酢酸（80
0：200：１）流量；毎分１ml 測定波長；280nm

【００２２】

【数１】

【００２３】なお、この測定方法は、マウスハイブリド
ーマ細胞の増殖刺激活性あるいはヒトＢ細胞の分化誘導
活性によるＩＬ−６の定量と良い相関を示している。

【００２４】〔実施例１〕ＩＬ−６原液を10mMのリン酸
緩衝液ｐＨ6.5で希釈した溶液およびＨＳＡを添加して
希釈した溶液（いずれもＩＬ−６ 250μｇ／ml含有）を
無菌的に調製し、この２mlを前記のごとく凍結乾燥し、
製剤を製造した。これらの製剤を製造直後および40℃で
２週間保存後に外観を調べた後、注射用水２mlで再溶解
し、溶状（澄明度）および活性を調べた。活性について
は、製造直後を100％としたときの残存率を求めた。そ
の結果は表１に示されるとおり、本発明の凍結乾燥医薬
製剤は、外観、溶状、活性の残存率が優れていた。

【００２５】〔実施例２〕表２に記載の添加物を加えた
製剤を実施例１と同様にして調製し、製造直後の外観お
よび注射用水２mlで溶解後の溶状と製剤を40℃にて保存
後の活性の製造直後に対する残存率を調べた。結果を表
２に示した。尚、表１，２中の重量部とは、ＩＬ−６を
１重量部とした時の各成分の重量部を示している。

【００２６】

【表１】

【００２７】

【表２】

【００２８】

【発明の効果】本発明のＩＬ−６の凍結乾燥医薬製剤は
凍結乾燥後の外観が向上し、バイアル器壁への吸着が少
なく、再溶解後の溶状が澄明であり、保存中のＩＬ−６
の活性の低下が極めて少ない等の特徴を有し、医薬製
剤、特に注射剤として有利に用いることができる。

【配列表】

配列番号：１配列の長さ：１８４配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Pro-Val-Pro-Pro-Gly-Glu-Asp-Ser-Lys-Asp-Val-Ala-Ala-Pro-His-Arg-Glu- １５ 10 15 Pro-Leu-Thr-Ser-Ser-Glu-Arg-Ile-Asp-Lys-Gln-Ile-Arg-Tyr-Ile-Leu-Asp- 20 25 30 Gly-Ile-Ser-Ala-Leu-Arg-Lys-Glu-Thr-Cys-Asn-Lys-Ser-Asn-Met-Cys-Glu- 35 40 45 50 Ser-Ser-Lys-Glu-Ala-Leu-Ala-Glu-Asn-Asn-Leu-Asn-Leu-Pro-Lys-Met-Ala- 55 60 65 Glu-Lys-Asp-Gly-Cys-Phe-Gln-Ser-Gly-Phe-Asn-Glu-Glu-Thr-Cys-Leu-Val- 70 75 80 85 Lys-Ile-Ile-Thr-Gly-Leu-Leu-Glu-Phe-Glu-Val-Tyr-Leu-Glu-Tyr-Leu-Gln- 90 95 100 Asn-Arg-Phe-Glu-Ser-Ser-Glu-Glu-Gln-Ala-Arg-Ala-Val-Gln-Met-Ser-Thr- 105 110 115 Lys-Val-Leu-Ile-Gln-Phe-Leu-Gln-Lys-Lys-Ala-Lys-Asn-Leu-Asp-Ala-Ile- 120 125 130 135 Thr-Thr-Pro-Asp-Pro-Thr-Thr-Asn-Ala-Ser-Leu-Leu-Thr-Lys-Leu-Gln-Ala- 140 145 150 Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gln-Asp-Met-Thr-Thr-His-Leu-Ile-Leu-Arg-Ser-Phe- 155 160 165 170 Lys-Glu-Phe-Leu-Gln-Ser-Ser-Leu-Arg-Ala-Leu-Arg-Gln-Met 175 180

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ａ６１Ｋ 9/14 Ｅ 7329−4Ｃ 47/10 7433−4Ｃ 47/18 7433−4Ｃ 47/22 7433−4Ｃ 47/42 Ｊ 7433−4Ｃ // Ｃ０７Ｋ 13/00 8318−4Ｈ (72)発明者矢吹昭神奈川県川崎市川崎区鈴木町１−１味の素株式会社中央研究所内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】インターロイキン−６を含有してなる医
薬製剤
【請求項２】インターロイキン−６が凍結乾燥品であ
ることを特徴とする請求項１記載の医薬製剤
【請求項３】少なくともヒト血清アルブミン及び／又
は還元性物質を含有している請求項１又は２記載の医薬
製剤
【請求項４】還元性物質が還元型グルタチオンおよび
アスコルビン酸のいずれか一方又は両方である請求項３
記載の医薬製剤
【請求項５】アミノ酸、糖アルコールおよび塩類のう
ちの少なくとも１種類の物質を含有している請求項３記
載の医薬製剤
【請求項６】アミノ酸がグリシン、糖アルコールがマ
ンニット及び塩類が塩化ナトリウムである請求項５記載
の医薬製剤