JPH0625000A - プロテアーゼ阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 歯周病の予防あるいは治療に有用な、プロテ
アーゼ作用を阻害するプロテアーゼ阻害剤の提供。 【構成】 ニンニク、チンピ、カンゾウ、カミツレ、シ
ャゼンソウ、キキョウ、ケイヒ、ウイキョウ、ホップ、
カノコソウ、オウゴン、シコン、セージ、イチョウ、竹
およびソウハクヒからなる群の１種または２種以上から
選ばれる植物、または該植物の溶媒抽出エキスを有効成
分としてなるプロテアーゼ阻害剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、新規なプロテアーゼ阻
害剤に関する。さらに詳しくは、歯肉炎、歯槽膿漏など
歯周病の予防あるいは治療に有用な、歯周病原性細菌が
産生するプロテアーゼの活性を阻害する新規プロテアー
ゼ阻害剤に関する。

【０００２】

【従来の技術および課題】近年、歯周病は、歯肉溝内の
ある種のグラム陰性嫌気性細菌に起因することが明らか
になり、その原因菌の代表的なものとしてポルフィロモ
ナス・ジンジバリス（旧名バクテロイデス・ジンジバリ
ス）やトレポネマ・デンティコラが挙げられている。こ
れら原因菌は歯周局所に棲息し、コラゲナーゼ、トリプ
シン様酵素などこれら病原菌に特異的なプロテアーゼを
産生し、これらのプロテアーゼが歯周組織の破壊など歯
周病の発症と密接に関係するといわれている［ジャーナ
ル・オブ・デンタル・リサーチ（Ｊ．Ｄent．Ｒes．）
６３，４１２−４２１，１９８４およびジャーナル・オ
ブ・デンタル・リサーチ ６５，１３３５−１３４０，
１９８６］。したがって、歯周病を予防または治療する
手段として、これらのプロテアーゼの作用を阻害するこ
とが非常に有効な方法であると考えられる。

【０００３】しかしながら、これまで、このようなプロ
テアーゼの活性に注目し、その酵素活性を阻害すること
により、歯周病を予防または治療することについての提
案は何ら見当たらない。また、従来から、ロイペプチン
やアンチパインなどのプロテアーゼ阻害剤が知られてい
るが、安全性の点で問題があり、医薬品、医薬部外品ま
たは化粧品として実用化されていないのが現状である。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明は、公知のプロテ
アーゼ阻害剤の満足できない点を考慮し、安全性が高く
真にプロテアーゼ阻害効果に優れた薬剤を得るべく鋭意
研究を重ねた結果、ある種の植物抽出エキスがプロテア
ーゼ阻害作用という新規な活性を有することを見い出
し、本発明を完成するに至った。

【０００５】すなわち、本発明は、ニンニク、チンピ、
カンゾウ、カミツレ、シャゼンソウ、キキョウ、ケイ
ヒ、ウイキョウ、ホップ、カノコソウ、オウゴン、シコ
ン、セージ、イチョウ、竹およびソウハクヒからなる群
より選ばれる１種または２種以上の植物、または該植物
の溶媒抽出エキスを有効成分とすることを特徴とするプ
ロテアーゼ阻害剤を提供するものである。

【０００６】本発明において用いる植物は、その部位や
形態は特に限定するものではないが、通常、植物自体を
乾燥し粉砕した乾燥粉末の形態のものを用いることが好
ましい。また、植物溶媒抽出エキスは、自体公知の抽出
操作に従って、例えば、前記植物あるいはその乾燥粉末
を水もしくは有機溶媒、例えば、メタノール、エタノー
ル、ｎ−プロパノール、ブタノール、アセトン、ピリジ
ン、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、
クロロホルム、酢酸エチル、エーテル、ベンゼン、トル
エン、シクロヘキサン、四塩化炭素などで抽出し、濃縮
し、乾燥することにより得ることができる。

【０００７】本発明のプロテアーゼ阻害剤は常法に従っ
て、練歯磨、粉歯磨、液状歯磨、マウスウォッシュ、パ
スタ、クリーム、うがい液、トローチ、キャンディ、チ
ューインガム、軟膏剤、貼付剤、錠剤等の組成物とする
ことができる。本発明においては、該植物乾燥粉末ある
いは溶媒抽出エキスを単独であるいは２種以上を組み合
わせて用いることができ、プロテアーゼ阻害剤全量に対
し乾燥重量として０．０００１〜３０重量％、好ましく
は０．００１〜５重量％配合することにより、所望の効
果が得られる。他の配合成分は、特に限定するものでは
なく、通常、この種の組成物に用いられるいずれの成分
も配合することができる。

【０００８】さらに、これら組成物に他の薬効成分、た
とえばクロルヘキシジン、トリクロサン、塩化セチルピ
リジニウムなどの殺菌剤や抗菌性のある植物成分等を適
量配合することにより歯周病の予防あるいは治療効果を
一層高めることができる。

【０００９】

【実施例】次に、実施例および試験例を挙げて本発明を
さらに詳しく説明する。 実施例１ 植物抽出エキスの調製 乾燥し、粉砕した各植物粉末１０ｇに水、メタノールま
たはこれらの混液を加え、加熱還流下にて２時間抽出を
行った。抽出液を減圧濃縮後、乾燥し、所望の植物抽出
エキスを得た。

【００１０】実施例２ 練歯磨 次の処方により、常法に従って練歯磨を製造した。 成分 配合量（重量％） 無水ケイ酸 １５ ラウリル硫酸ナトリウム １ ポリアクリル酸 １ ソルビット（７０％溶液） ６０ カラギーナン ０．２ シャゼンソウエキス ０．０１ ケイヒエキス ０．０１ サッカリンナトリウム ０．２ 防腐剤および香料 １．２ 蒸留水 １００％に調整

【００１１】実施例３ マウスウオッシュ 次の処方により、常法に従ってマウスウオッシュを製造
した。 成分 配合量（重量％） エタノール ５ ソルビット（７０％溶液） １５ ポリオキシエチレン（６０ＥＯ）硬化ヒマシ油 ０．５ モノオレイン酸ポリオキシエチレン（２０ＥＯ）ソルビタン ０．５ ウイキョウエキス ０．０５ サッカリンナトリウム ０．１ 防腐剤および香料 ０．８ 蒸留水 １００％に調整

【００１２】実施例４ マウスウオッシュ 次の処方により、常法に従ってマウスウオッシュを製造
した。 成分 配合量（重量％） エタノール １５ グリセリン １５ ポリオキシエチレン（６０ＥＯ）硬化ヒマシ油 １ カノコソウエキス ０．０５ 塩化セチルピリジニウム ０．０５ サッカリンナトリウム ０．１ 香料 ０．５ 蒸留水 １００％に調整

【００１３】実施例５ 口腔内パスタ 次の処方により、常法に従って口腔内パスタを製造し
た。 成分 配合量（重量％） 白色ワセリン １０．０ ステアリンアルコール ８．０ プロピレングリコール ５．６ ラウリル硫酸ナトリウム ０．６ パラオキシ安息香酸エチル ０．０１ 蒸留水 １６．１ ソウハクヒエキス １．０ カルボキシメチルセルロースナトリウム １００％に調整

【００１４】実施例６ ハードキャンディ 次の処方により、常法に従ってハードキャンディを製造
した。 成分 配合量（重量％） グラニュー糖 ４６．８ 水飴 ５２．３７ クエン酸 ０．３ チンピエキス ０．０３ ｌ−メントール ０．５ 合計 １００．０

【００１５】試験例１ 実施例１の方法に従って調製した各植物抽出エキスのプ
ロテアーゼ阻害活性について検討した。 （１）プロテアーゼの調製 ポルフィロモナス・ジンジバリス３８１株をブレイン・
ハート・インフュージョンブロス（０．５％酵母エキ
ス、５μｇ／ｍｌヘミン、０．２μｇ／ｍｌメナジオン
添加）で、３７℃、４８時間嫌気培養し、遠心分離（７
０００ｒｐｍ、１０分間）に付し、培養上澄をプロテア
ーゼ粗酵素として以下の試験に供した。

【００１６】（２）基質溶液の調製 Ｎ−カルボベンゾキシ−グリシル−グリシル−アルギニ
ン−β−ナフチルアミドをジメチルスルホキシドで１０
ｍＭの濃度が得られるよう調整し、これを蒸留水で１ｍ
Ｍに希釈したものを基質溶液とした。

【００１７】（３）プロテアーゼ活性の測定 試験管（内径１２ｍｍ、長さ１００ｍｍ）に１ｍＭの基
質溶液０．３ｍｌ、０．１ＭのＴris−ＨＣl緩衝液（p
Ｈ７．０）０．９ｍｌ、種々の濃度の植物抽出エキスあ
るいは蒸留水０．３ｍｌを入れ反応溶液とし、これに上
記プロテアーゼ粗酵素０．３ｍｌを加え、３７℃、１時
間インキュベーションを行った。終了時、０．５ｍｇ／
ｍｌ Ｆast Ｇarnet ＧＢＣ（１０％ Ｔween２０を含
む１Ｍ酢酸緩衝液、pＨ４．２に溶解したもの）０．６
ｍｌを加え、室温で１５分以上放置した後、５２５ｎｍ
における吸光度を分光光度計（Ｐerkin−Ｅlmer, Ｍode
l ５５Ｂ）を用いて測定した。被験植物エキスを用いた
場合の酵素活性（ΔＯＤ₅₂₅）をａ、蒸留水を用いた場
合の酵素活性をｂとした場合、各植物エキス抽出エキス
試料のプロテアーゼ阻害率（％）を次式より算出した。

【００１８】

【数１】

【００１９】その結果を表１に示す。

【表１】

【００２０】表１から明らかなように、各植物エキスは
０．１％の濃度で６１〜９９％、０．０１％濃度で２２
〜９８％の阻害率を示した。特に、陽性対照として用い
たロイペプチンの阻害率（０．１％濃度で９５％、０．
０１％濃度で５０％）と同等もしくはそれ以上の阻害率
を示した植物エキスは、チンピ、シャゼンソウ、ケイ
ヒ、カノコソウ、竹、ソウハクヒの各エキスであった。

【００２１】試験例２ 歯周病患者の歯周局所より分離したトレポネマ・デンテ
ィコラの１菌株をＴＹＧＶＳ培地で３７℃、１週間嫌気
培養した培養菌液（濁度がＯＤ₆₆₀＝０．５となるよう
同培地で調製したもの）を酵素液とし、シャゼンソウエ
キスおよびソウハクヒエキスの種々の濃度におけるプロ
テアーゼ阻害活性について検討した。基質溶液の調製お
よびプロテアーゼ活性の測定法は試験例１に準じて行っ
た。その結果を表２に示す。

【００２２】

【表２】

【００２３】表２に示すように、いずれの植物エキスも
０．０００１％の濃度で１０％以上の阻害率、０．００
１％以上の濃度では５０％以上の阻害率を示した。

【００２４】

【発明の効果】本発明によれば、プロテアーゼを強力か
つ有効に阻害し、歯周病の予防あるいは治療に非常に有
用であるだけでなく、かつ、有効成分が天然物であるた
め、副作用もなく、安全性面で非常に優れているプロテ
アーゼ阻害剤を得ることができる。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ニンニク、チンピ、カンゾウ、カミツ
   レ、シャゼンソウ、キキョウ、ケイヒ、ウイキョウ、ホ
   ップ、カノコソウ、オウゴン、シコン、セージ、イチョ
   ウ、竹およびソウハクヒからなる群より選ばれる１種ま
   たは２種以上の植物、または該植物の溶媒抽出エキスを
   有効成分とすることを特徴とするプロテアーゼ阻害剤。