JPH06263779A - ３−ジメチルホスフィノチオイル−２（３ｈ）−オキサゾロンおよびこれからなるアミド結合生成用縮合剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 【化１】 上記（式−Ｉ）にて示される3-ジメチルホスフィノチオ
イル-2(3H)-オキサゾロン。 【効果】 本発明に係る3-ジメチルホスフィノチオイル
-2(3H)-オキサゾロンは、結晶性であり、貯蔵安定性に
優れ、また、アミド結合生成用縮合剤として使用した場
合、（１）ラセミ化が極めて少なく、（２）反応収率が
良好であり、（３）反応副生成物が少なく、（４）ある
種の添加剤と併用することにより反応速度が速くなり、
（５）ペプチドの環化反応が容易に行える等、ペプチド
合成反応において極めて大きな利点がある。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の技術分野】本発明は、新規な化合物である3-ジ
メチルホスフィノチオイル-2(3H)-オキサゾロンならび
に、この化合物からなるアミド結合生成用縮合剤に関す
る。アミド結合生成用縮合剤は、カルボン酸とアミンと
の縮合反応からアミド結合を生成せしめるための反応剤
であり、主にペプチド合成の分野で使用されている。

【０００２】なお、本明細書において、アミノ酸、ペプ
チド、保護基、その他に関して、略号で表示する場合は
ＩＵＰＡＣ、ＩＵＢの規定あるいは当該分野における慣
用記号に従うものとする。

【０００３】

【発明の技術的背景】ペプチド合成分野においては、各
種多様の反応剤が、生理活性ペプチドやその誘導体の合
成のために研究開発され、利用されている。

【０００４】カルボン酸とアミンとの縮合反応（カップ
リング）からペプチド結合を生成せしめる反応剤（以
下、縮合剤と呼ぶ）に関しては、下記のような特性が要
求されている。 （１）ラセミ化のないセグメントカップリングが可能な
こと。 （２）縮合（カップリング）反応の速度が大であるこ
と。 （３）N-メチルアミノ酸のような立体障害のあるアミノ
酸に対して高効率なカップリングが可能であること。 （４）ペプチドの環化反応が可能であること。 （５）カップリング反応時に副反応が生じないこと。 （６）カップリング収率が良好であること。

【０００５】上記（１）〜（６）の要求を同時に充足し
うる理想的な縮合剤の開発、市場への提供が当該業界で
は切望されている。従来、当該分野における縮合剤とし
ては、下記式で示されるような、N,N'- ジシクロヘキシ
ルカルボジイミド（ＤＣＣ）、1-エチル-3-(ジメチルア
ミノプロピル)-カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ・ＨＣ
ｌ）、カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、ジフェニ
ルリン酸アジド（ＤＰＰＡ）、ジメチルチオホスホニッ
クアジド（ＭＰＴＡ）、ベンゾトリアゾール-1-イル-オ
キシ-トリス-（ジメチルアミノ）-ホスホニウムヘキサ
フルオロホスフェート（ＢＯＰ）などの多種多様の縮合
剤が知られている。

【０００６】

【化２】

【０００７】しかしながら、これらの縮合剤は前述の要
件（１）〜（６）を十分に満足するような縮合剤とは言
い難い。例えばＤＰＰＡは、ペプチドの環化反応のため
に、商業的レベルでは最も汎用されている試薬の一つで
あるが、オイル状物質であり、貯蔵安定性が悪い。ま
た、ＤＰＰＡを用いての縮合反応においては、カルバモ
イルアジドやウレアの誘導体が反応副生成物として生じ
てしまう問題もある。

【０００８】ＭＰＴＡは、ラセミ化のない縮合剤として
有用であり、長期保存に対して全く問題がないが、アジ
ド法による縮合反応や、上記ＤＰＰＡによる縮合反応と
同様に、副反応を回避することはできない（即ち、カル
バモイルアジドやウレアの誘導体が生成する。) 。

【０００９】本発明者らは、上記のような従来技術に鑑
み、新規でありかつ（１）〜（６）の要件を同時に充足
しうるような縮合剤を開発すべく鋭意検討の結果、本発
明を完成するに至った。

【００１０】

【発明の目的】本発明は、ペプチド合成分野におけるア
ミド結合の生成のための新規な縮合剤を提供することを
目的としている。

【００１１】

【発明の概要】本発明に係る新規化合物は、3-ジメチル
ホスフィノチオイル-2(3H)-オキサゾロンであり、また
本発明に係るアミド結合生成用縮合剤は、上記化合物か
らなることを特徴としている。

【００１２】

【発明の具体的説明】以下、本発明に係る新規化合物な
らびにこの化合物からなる縮合剤について具体的に説明
する。

【００１３】本発明に係る新規化合物は、下記式で示さ
れる3-ジメチルホスフィノチオイル-2(3H)-オキサゾロ
ンである（以下ＭＰＴＯと略す。）。

【００１４】

【化３】

【００１５】ＭＰＴＯはラセミ化のないカップリング反
応、あるいはペプチドの環化反応に対し、好適な縮合剤
（カップリング剤）であり、本発明に係るアミド結合生
成用縮合剤はＭＰＴＯからなる。

【００１６】以下ＭＰＴＯの製造方法について説明す
る。ＭＰＴＯは、2(3H)-Oxazolone とDimethylphosphin
othioic chloride（以下Ｍｐｔ−Ｃｌと略す。）とを、
有機溶媒中、塩基の存在下、室温にて反応させることに
より得られる。この反応は、下記式にて示される。

【００１７】

【化４】

【００１８】Ｍｐｔ−Ｃｌは"L. Maier, Chem. Ber., 9
4, 3051 (1961)" に教示してある方法で合成可能であ
り、また2(3H)-Oxazolone は"K.H.Scholz, et al. Lieb
lgs Ann,Chem. 1976, 1319 - 1322"にて教示してある方
法で合成可能である。

【００１９】ＭＰＴＯ合成反応に用いる有機溶媒として
は、本質的に反応に悪影響を及ぼさない限り、種々の溶
媒が用いられ、一般的にはエーテル類、エステル系、炭
化水素系溶媒、ハロゲン化炭化水素溶媒、非プロトン性
極性溶媒等が好ましい。

【００２０】このような有機溶媒のさらに具体的な例と
しては、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、
ベンゼン、トルエン、酢酸エチル、ジクロルメタン、ク
ロロホルム、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、
テトラヒドロフラン等が用いられる。

【００２１】有機溶媒は、オキサゾロン１重量部に対し
て２〜１００重量部、好ましくは３〜２０重量部となる
ように用いられる。塩基としては第３級アミン類または
無機塩基類が好適であり、具体的には、トリエチルアミ
ン、ピリジン、N-メチルモルホリン等の第３級アミン
類、ＮａＯＨ、ＫＯＨ等のアルカリ金属水酸化物、Ｎａ
₂ＣＯ₃ 、Ｋ₂ＣＯ₃ 等のアルカリ金属炭酸塩またはその
部分水素化物等の無機塩基類が用いられる。

【００２２】反応温度は室温付近にて設定し、反応時間
は２〜８時間程度である。オキサゾロン（Ａ）とＭｐｔ
−Ｃｌ（Ｂ）の配合比率はモル比でＡ／Ｂ＝１／１．２
〜１．２／１の範囲で設定され、好ましくは１．０／
１．１〜１．１／１．０程度である。

【００２３】反応液から目的物であるＭＰＴＯの取り出
し、精製は使用する反応溶媒系によって、一概に設定で
きないが、一般的には反応液の減圧濃縮→溶媒希釈→弱
酸水溶液洗浄→弱アルカリ水溶液洗浄→減圧濃縮→結晶
化→再結晶化→口取→乾燥の工程を経て得られる。

【００２４】反応収率は、通常８５〜９０％である。次
に、本発明に係るＭＴＰＯをアミド結合生成用縮合剤と
して利用する方法について説明する。カルボン酸とアミ
ンとの縮合反応（カップリング）によるアミド結合の生
成は、ペプチド合成分野において多用されている。

【００２５】本発明に係るＭＴＰＯをアミド結合生成用
縮合剤として使用する場合、通常アミン成分１当量とカ
ルボン酸成分１当量とを、有機溶媒中にて、塩基性触媒
としての第３級アミン１〜１．５当量存在下、ＭＴＰＯ
を１〜１．５当量使用し、−１０〜４０℃、好ましくは
０〜室温付近にて縮合反応させることにより、目的とす
るアミド結合含有化合物（ペプチド）を得ることができ
る。なお、アミン成分としては第１級アミンまたは第２
級アミンが用いられる。反応時間は通常１〜２００時間
である。

【００２６】上記塩基性触媒としての第３級アミンと
は、ピリジン、トリエチルアミン、N-メチル-モルホリ
ン、ジイソプロピルエチルアミン等である。なお、反応
にあずかるアミン成分は、塩酸塩、p-トルエンスルホン
酸塩等の形で使用してもよく、この場合、たとえば塩酸
塩を使用する場合には塩酸成分を中和するために、塩酸
量と当量の第３級アミンをさらに添加しておく必要があ
る。

【００２７】アミド結合生成反応に用いる有機溶媒とし
ては、本質的に反応に悪影響を及ぼさない限り、種々の
溶媒が用いられ、好ましくは非プロトン性の極性溶媒が
用いられる。その具体例としては、N,N'- ジメチルホル
ムアミド、アセトニトリル、テトラヒドロフラン等が挙
げられる。有機溶媒の使用量は適宜設定される。

【００２８】また、従来より知られているとおり、ラセ
ミ化防止剤や反応促進剤としてN-ヒドロキシベンゾトリ
アゾール（ＨＯＢｔ）等を添加剤として適宜使用するこ
とにより、反応時間の短縮、収率の向上等の好結果をも
たらす。

【００２９】ペプチドの環化反応に本発明に係るＭＰＴ
Ｏを使用する場合、上記の方法とほぼ同様な操作を行う
ことにより、目的とする環状ペプチドを得ることができ
る。

【００３０】

【発明の効果】本発明に係るＭＰＴＯは結晶性が良く、
貯蔵安定性に優れる。また本発明に係るＭＰＴＯを縮合
剤として使用した場合、（１）ラセミ化が極めて少な
く、（２）反応収率が良好であり、（３）反応副生成物
が少なく、（４）ＨＯＢｔのような添加剤と併用するこ
とにより反応速度が速くなり、（５）ペプチドの環化反
応が容易に行える等、ペプチド合成反応において極めて
大きな利点がある。

【００３１】

【実施例】以下、本発明を具体的な実施例により説明す
るが、本発明はこれら実施例に限定されるものではな
い。

【００３２】

【実施例１】

【００３３】

【化５】

【００３４】ベンゼン１０ml中に2(3H)-Oxazolone
（２．０１ｇ、２３．６ミリモル）を懸濁させ、トリエ
チルアミン（３．３ml、２３．６ミリモル）とＭｐｔ−
Ｃｌ（３．０４ｇ、２３．８ミリモル）を加えた。室温
にて、３時間攪拌反応させた後減圧濃縮した。残査を酢
酸エチルに溶解し、５％クエン酸水溶液、５％重曹水に
て順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムにて乾燥した。この
溶液を減圧濃縮して、結晶を得た。酢酸エチル／石油エ
ーテル混合溶媒より再結晶し、口取、真空乾燥し目的物
３．６０ｇ（収率８６％）を得た。得られた3-ジメチル
ホスフィノチオイル-2(3H)-オキサゾロンの物性は以下
のとおりであった。

【００３５】融点：８７〜９０℃¹ Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃，２７０ＭＨｚ，δ_TMS）＝
２．２（ｄ，６Ｈ，Ｐ（Ｓ）（ＣＨ₃）₂）、６．８
（ｄ，１Ｈ，Ｎ−ＣＨ＝）、７．２（ｄ，１Ｈ，＝ＣＨ
−Ｏ） 実施例１にて得られたＭＰＴＯを各種の縮合反応に適用
した場合の実施例を以下に示す。

【００３６】

【実施例２〜７、および比較例１〜６】各種方法による
Z-Gly-Val-OHとH-Val-OMe・HCl のカップリングにおけ
るラセミ化度の試験を行った。

【００３７】一般的方法：Z-Gly-Val-OH（０．１６ミリ
モル）、 H-Val-oMe・HCl （０．１６ミリモル）、第３
級アミン（０．１６ミリモル）、必要に応じて表１に記
載の添加剤（０．１９ミリモル）を、反応溶媒として表
１に記載の溶媒１mlに攪拌下混合し、この混合液に、表
１に記載の縮合剤（０．１６ミリモル）と塩基性触媒と
して表１に記載の第３級アミン（０．１６ミリモル）と
を含むＤＭＦ溶液０．６mlを添加し設定温度において、
２４時間攪拌反応させた。

【００３８】その後、反応液を水１０mlで希釈し、酢酸
エチル３０mlで抽出した。有機層を分離し、５％クエン
酸水で、５％重曹水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾
燥した。溶媒留去後、残査をメタノールに溶解し、逆相
ＨＰＬＣで分析した。

【００３９】カップリング収率は、シリカゲルＴＬＣで
純品を分離し、評価した。また、純度はＨＰＬＣ分析に
てチェックした。なお、エピメリックペプチドであるZ-
Gly-D-Val-Val-OMe はステップワイス法にて得た。

【００４０】使用機器および条件は下記のとおり。 ＨＰＬＣ分析 ウォーターズ社 ６２５ＬＣ システム カラム ５μｍ μBondasphere Ｃ１８（３．９mm×
１５０mm） ディテクター ウォーターズ社 ４８４ ＨＰＬＣ条件 elution gradient, アセトニトリル−０．０１Ｍ ＨＣ
ｌ ３５／６５〜４５／５５（１５分） flow rate １ml／分 detection ２５４ｎｍ リテンションタイム（ｔ_R） Z-Gly-Val-Val-OMe ：９．３分 Z-Gly-D-Val-Val-OMe ：１０．８分 以下表１に、ＭＰＴＯを用いた実施例（６点）、比較例
としＭＰＴＡ（４点）、ＢＯＰＣ（１点）、ＤＣＣ（１
点）の結果を示す。

【００４１】

【表１】

【００４２】ＭＰＴＯ：3-ジメチルホスフィノチオイル
-2(3H)-オキサゾロン ＭＰＴＡ：ジメチルチオホスホニックアジド ＢＯＰ：ベンゾトリアゾール-1-イル-オキシ-トリス-
（ジメチルアミノ）-ホスホニウムヘキサフルオロホス
フェート ＤＣＣ：N,N'- ジシクロヘキシルカルボジイミド ＨＯＢｔ：N-ヒドロキシベンゾトリアゾール ＨＯＳｕ：N-ヒドロキシサクシンイミド ＴＥＡ：トリエチルアミン ＤＩＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン ＮＭＭ：N-メチルモルホリン ＤＭＦ：N,N-ジメチルホルムアミド ＤＣＭ：ジクロロメタン ＮＭＰ：N-メチルピロリドン

【００４３】

【実施例８】ＭＰＴＯの有用性を示すため、３官能アミ
ノ酸含有ジペプチド（Z-Val-Tyr-OMe ）を以下の手法に
より合成した。

【００４４】ＤＭＦ ０．７ml中に、N-保護アミノ酸
（Z-Val ）０．５ミリモル、アミノ酸エステル塩酸塩
（Tyr-OMe・HCl ）０．５ミリモルを溶解し、トリエチ
ルアミン１．０ミリモルとＭＰＴＯ ０．６ミリモルを
添加し、０℃で３時間、室温で１２時間攪拌した。反応
液を酢酸エチル３０mlと水１０mlに投入した後、よく攪
拌し、分液した。有機層を５％クエン酸水溶液で充分に
洗浄し、次いで５％重曹水で充分に洗浄し、無水硫酸ナ
トリウムで乾燥した。溶媒を減圧留去後、目的物（Z-Va
l-Tyr-OMe ）を得た。シリカゲルＴＬＣにて精製を行っ
て収量を求めた。結果を表２に示す。反応副生成物であ
るアミノ成分誘導体（MPT-Tyr-OMe）の割合は、ＨＰＬ
Ｃ分析の結果、０．２％以下であった。

【００４５】得られたZ-Val-Tyr-OMe の物性値を測定し
たところ以下のとおりであった。文献値（Schwarz, H.,
Bumpus, F.M., & Page, I.H. (1957) J. Am. Chem. So
c. 79, 5697-5703）と併せて次に示す。 測定値：融点＝１５３〜１５４℃、［α］_D ＝＋１０．
８°（c1, ピリジン） 文献値：融点＝１５５．５〜１５６℃、［α］_D ＝＋１
０．２°（c4.8, ピリジン）

【００４６】

【実施例９】実施例８において、Z-Val の代わりに表２
に記載のN-保護アミノ酸を用い、Tyr-OMe・HCl の代わ
りに表２に記載のアミノ酸エステル塩酸塩を用いた以外
は、実施例８と同様の操作を行い、目的物（Z-Ser-Gly-
OEt ）を得た。シリカゲルＴＬＣにて精製を行って収量
を求めた。結果を表２に示す。反応副生成物であるアミ
ノ成分誘導体（MPT-Gly-OEt ）の割合は、ＨＰＬＣ分析
の結果、０．３％であった。

【００４７】得られたZ-Ser-Gly-OEt の物性値を測定し
たところ以下のとおりであった。文献値（Ueki, M. & I
nazu, T. (1982) Chem. Lett. 45-48 ）と併せて次に示
す。 測定値：融点＝１０４〜１０５℃、［α］_D ＝−６．４
°（c1, エタノール） 文献値：融点＝９９〜１０３℃、［α］_D ＝−５．０°
（c1, エタノール）

【００４８】

【実施例１０】実施例８において、Z-Val の代わりに表
２に記載のN-保護アミノ酸を用い、Tyr-OMe・HCl の代
わりに表２に記載のアミノ酸エステル塩酸塩を用いた以
外は、実施例８と同様の操作を行い、目的物（Z-Thr-Ph
e-OBu^t ）を得た。シリカゲルＴＬＣにて精製を行って
収量を求めた。結果を表２に示す。反応副生成物である
アミノ成分誘導体（MPT-Phe-OBu^t ）の割合は、ＨＰＬ
Ｃ分析の結果、０．２％以下であった。

【００４９】得られたZ-Thr-Phe-OBu^t の物性値を測定
したところ以下のとおりであった。文献値（Ozawa, K.,
Shioiri, T., & Yamada, S. (1977) Chem. Pharm. Bul
l. 25, 122-125）と併せて次に示す。 測定値：融点＝７８〜８０℃、［α］_D ＝＋１４．８°
（c1.5, アセトン）、 ¹Ｈ−ＮＭＲ（６０ＭＨｚ，ＣＣ
ｌ₄ ）δ_TMS ＝0.9-1.1(d, 3H, Thr γ-CH₃), 1.3(s, 9
H, t-Bu), 2.8-3.0(d, 2H, Phe β-CH₂), 3.7-3.9(br,
1H, Thr β-CH),4.0-4.7(m, 3H, Thr α-CH, Phe α-C
H, OH), 5.0(s, 2H, Ar-CH₂), 5.9-6.1(br, 1H, Z-NH),
7.0-7.4(m, 11H, Ar-H, CONH) 文献値：融点＝１０１〜１０２．５℃、［α］_D ＝＋１
４．４°（c1.5, アセトン）

【００５０】

【実施例１１】実施例８において、Z-Val の代わりに表
２に記載のN-保護アミノ酸を用い、Tyr-OMe・HCl の代
わりに表２に記載のアミノ酸エステル塩酸塩を用いた以
外は、実施例８と同様の操作を行い、目的物（Z-Trp-Gl
y-OMe ）を得た。シリカゲルＴＬＣにて精製を行って収
量を求めた。結果を表２に示す。反応副生成物であるア
ミノ成分誘導体（MPT-Gly-OMe ）の割合は、ＨＰＬＣ分
析の結果、０．２９％であった。

【００５１】得られたZ-Trp-Gly-OMe の物性値を測定し
たところ以下のとおりであった。文献値（Hofmann, K.,
Woolner, M.E., Spuhler, G., & Schwartz, E.T. (195
8) J. Am. Chem. Soc. 80, 1486-1489）と併せて次に示
す。 測定値：融点＝１５７〜１５８℃、［α］_D ＝−１２．
０°（c2, 酢酸） 文献値：融点＝１５８〜１５９℃、［α］_D ＝−１１．
０°（c2, 酢酸）

【００５２】

【実施例１２】実施例８において、Z-Val の代わりに表
２に記載のN-保護アミノ酸を用い、Tyr-OMe・HCl の代
わりに表２に記載のアミノ酸エステル塩酸塩を用いた以
外は、実施例８と同様の操作を行い、目的物（Z-Asn-Le
u-OBu^t ）を得た。シリカゲルＴＬＣにて精製を行って
収量を求めた。結果を表２に示す。反応副生成物である
アミノ成分誘導体（MPT-Leu-OBu^t ）の割合は、ＨＰＬ
Ｃ分析の結果、０．２％以下であった。

【００５３】得られたZ-Asn-Leu-OBu^t の物性値を測定
したところ以下のとおりであった。文献値（Studer, R.
O. & Lergier, W. (1965) Helv. Chim. Acta 48, 460-4
70）と併せて次に示す。 測定値：融点＝１３２〜１３４℃、［α］_D ＝−１６．
５°（c2, ＤＭＦ） 文献値：融点＝１３０〜１３１℃、［α］_D ＝−１７．
７°（c2, ＤＭＦ）

【００５４】

【比較例７】実施例１１において、3-ジメチルホスフィ
ノチオイル-2(3H)-オキサゾロン（ＭＰＴＯ）の代わり
にジフェニルリン酸アジド（ＤＰＰＡ）を用いた以外
は、実施例１１と同様の操作を行った。反応副生成物で
あるアミノ成分誘導体（DPP-Gly-OMe ）の割合は、ＨＰ
ＬＣ分析の結果、１．７９％であった。

【００５５】

【表２】

【００５６】

【実施例１３】環化縮合反応時におけるラセミ化度を評
価するために、Cyclo-(D-Trp-D-Glu(OBzl)-Ala-D-Val-L
eu) （１）の合成を行ない、またD-Leu-エピマー体の評
品としてCyclo-(D-Trp-D-Glu(OBzl)-Ala-D-Val-D-Leu)
を合成した。 〔Cyclo-(D-Trp-D-Glu(OBzl)-Ala-D-Val-Leu) （１）の
合成〕出発物質となる線状ペプチド（７）を下記の手順
で合成した。合成スキームを図１に示す。 BOC-D-Val-Leu-Opac（２）の合成：10mLクロロホルム中
にBOC-D-Val-OH・DCHA(3.99 g, 10.0 ミリモル）を含有
する氷冷溶液に、Mpt-Cl(1.29 g, 10.0 ミリモル) を加
え、30分間攪拌した。これにTEA(2.79 mL, 20.0 ミリモ
ル) とHBr・H-Leu-OPac(3.31 g, 10.0 ミリモル) を加
え、混合物を一晩室温にて攪拌した後、エバポレートし
た。残留物をEtOAc に溶解させ、次いで5%クエン酸水溶
液および5%NaHCO₃水溶液で洗浄し、Na₂SO₄で乾燥した。
溶液をエバポレートし結晶を得て、クロロホルム・石油
エーテルから再結晶を行った。収量は２．３８ｇ（５２
％）であった。

【００５７】得られたBOC-D-Val-Leu-Opacの物性は以下
のとおりであった。 測定値：融点＝１２１〜１２２℃、［α］_D ²⁵＝−１
４．９°（c1, CHCl₃ ）、 ¹Ｈ−ＮＭＲ（60MHz, CDC
l₃）δ_TMS ＝0.7(m, 12H, Val γ-CH₃, Leu δ-CH₃),1.
3-2.2(m, 13H, Val β-CH, Leu β-CH₂, γ-CH, t-Bu),
3.7-4.2(m, 2H, Valα-CH, Leu α-CH), 4.6-5.3(m, 3
H, ArCOCH₂, Boc-NH), 6.4-6.6(br, 1H, CONH), 7.1-7.
9(m, 5H, Ar-H)

【００５８】BOC-Ala-D-Val-Leu-Opac（３）の合成：上
記で得られた化合物（２）(2.38 g, 5.31 ミリモル) を
２１mLのTFA-DCM(3:1)の混合液に溶解させた。溶液を０
℃で１時間攪拌し、エバポレートした。油状残留物を石
油エーテル中で練り潰し、デカンテーションにより固体
を得た。５mLのクロロホルム中で、Boc-Ala-OH(1.00 g,
5.31 ミリモル) 、 TEA(740μL, 5.31 ミリモル) およ
びMpt-Cl(682 mg, 5.31ミリモル) から調製された混合
無水物の氷冷溶液に、上記固体と、TEA(1.48mL.10.6ミ
リモル) を加えた。混合物を室温にて一晩攪拌し、エバ
ポレートした。残留物をEtOAc に溶解させ、常法により
洗浄し、乾燥した。溶液をエバポレートし結晶を得て、
クロロホルム・石油エーテルから再結晶を行った。収量
は２．２６ｇ（８２％）であった。

【００５９】得られたBOC-Ala-D-Val-Leu-Opacの物性は
以下のとおりであった。 測定値：融点＝１６８〜１７０℃、［α］_D ²⁵＝−１
４．８°（c1, CHCl₃ ）、Ｒｆ＝０．６９（CHCl₃-MeOH
9:1) 、 ¹Ｈ−ＮＭＲ（60MHz, CDCl₃）δ_TMS ＝0.7-1.
2(m, 15H, Val γ-CH₃, Leu δ-CH₃, Ala β-CH₃), 1.3
-2.2(m, 13H, Valβ-CH, Leu β-CH₂, γ-CH, t-Bu),
3.7-4.5(m, 3H, Val α-CH, Leu α-CH, Ala α-CH),
4.6-5.3(m, 3H, ArCOCH₂, Boc-NH), 6.7-7.9(m, 7H, Ar
-H, 2xCO-NH)

【００６０】BOC-D-Glu(OBzl)-Ala-D-Val-Leu-Opac
（４）の合成：上記で得られた化合物（３）(1.05 g,
2.01 ミリモル) を８．５mLのTFA-DCM(5:1)の混合液に
溶解させた。溶液を０℃で３０分間攪拌し、エバポレー
トした。油状残留物を石油エーテル中で練り潰し、デカ
ンテーションにより固体を得た。２mLのクロロホルム中
で、Boc-D-Glu(OBzl)-OH(679 mg, 2.01 ミリモル) 、TE
A(280 μL, 2.01 ミリモル) およびMpt-Cl(259 mg, 2.0
1 ミリモル) から調製された混合無水物の氷冷溶液に、
上記固体と、TEA(561 μL, 4.03 ミリモル) を加えた。
混合物を室温にて一晩攪拌し、エバポレートした。残留
物をEtOAc に溶解させ、常法により洗浄し、乾燥した。
溶液をエバポレートし結晶を得て、クロロホルム・石油
エーテルから再結晶を行った。収量は１．１２ｇ（７５
％）であった。

【００６１】得られたBOC-D-Glu(OBzl)-Ala-D-Val-Leu-
Opacの物性は以下のとおりであった。 測定値：融点＝１５０〜１５２℃、［α］_D ²⁷＝−２．
８５°（c1, CHCl₃ ）、Ｒｆ＝０．６８（CHCl₃-MeOH
9:1) 、 ¹Ｈ−ＮＭＲ（270MHz, CDCl₃ ）δ_TMS ＝0.8-
1.0(m, 12H, Val γ-CH₃, Leu δ-CH₃), 1.3-1.4(m, 12
H, Ala β-CH₃, t-Bu), 1.7-2.0(m, 4H, Val β-CH, Le
u β-CH₂, γ-CH), 1.9-2.2(d, 2H, Glu β-CH₂), 2.4-
2.6(d, 2H, γ-CH₂), 4.2-4.8(m, 4H, Glu α-CH, Ala
α-CH, Valα-CH, Leu α-CH), 5.1(s, 2H, PhCH₂), 5.
2-5.7(m, 3H, ArCOCH₂, Boc-NH), 7.0-7.2(m, 2H, 2xCO
-NH), 7.2-7.9(m, 11H, Ar-H, CONH)、ＳＩＭＳ＝m/z 7
61 [M+Na]⁺

【００６２】Mpt-D-Trp-D-Glu(OBzl)-Ala-D-Val-Leu-Op
ac（５）の合成：上記で得られた化合物（４）(966 mg,
1.35 ミリモル) をTFA-DCM(3:1)で脱保護し、上記と同
様にしてMpt-D-Trp-OH・DCHA(648 mg, 1.36 ミリモル)
から調製された混合無水物によりアシル化した。生成物
をクロロホルム・石油エーテルから再結晶した。収量は
９１７ｍｇ（７４％）であった。

【００６３】得られたMpt-D-Trp-D-Glu(OBzl)-Ala-D-Va
l-Leu-Opacの物性は以下のとおりであった。 測定値：融点＝１３９〜１４１℃、［α］_D ²⁷＝＋７．
４１°（c1, CHCl₃ ）、Ｒｆ＝０．５１（CHCl₃-MeOH
9:1) 、ＦＤＭＳ＝m/z 916 [M+H]⁺

【００６４】Mpt-D-Trp-D-Glu(OBzl)-Ala-D-Val-Leu-OH
（６）の合成：DMF ２mL中に上記化合物（５）（304 m
g, 0.33ミリモル）を含有する溶液に、DMF ６mL中にTBA
F・xH₂O(209 mg, 0.66 ミリモル) と1-オクタンチオー
ル(547mL, 3.31ミリモル) を含有する溶液を加えた。溶
液を室温にて１５分間攪拌し、5%クエン酸水溶液で希釈
した。沈澱物を濾過により回収し、5%クエン酸水溶液、
水およびエーテルにより洗浄し、乾燥した。収量は２４
４ｍｇ（９２％）であった。

【００６５】得られたMpt-D-Trp-D-Glu(OBzl)-Ala-D-Va
l-Leu-OHの物性は以下のとおりであった。 測定値：融点＝１１８〜１２０℃、［α］_D ³⁰＝＋２．
６°（c0.25, DMF）、ＳＩＭＳ＝m/z 821 [M+Na]⁺

【００６６】H-D-Trp-D-Glu(OBzl)-Ala-D-Val-Leu-OH・
HCl （７）の合成：上記で得られた化合物（６）(221 m
g, 0.28 ミリモル）を、酢酸エチル中に４．２Ｍ ＨＣ
ｌを含有するする溶液３mLに溶解し、０℃にて１時間攪
拌した後、エーテル（30mL）で希釈した。沈澱物を濾過
により回収し、酢酸エチルで洗浄し、次いでエーテルで
洗浄し、無色の粉末を得た。収量は１８４ｍｇ（９０
％）であった。

【００６７】得られたH-D-Trp-D-Glu(OBzl)-Ala-D-Val-
Leu-OH・HCl の物性は以下のとおりであった。 測定値：［α］_D ²⁸＝−４．２°（c0.5, DMF ）、ＦＤ
ＭＳ＝m/z 707 [M+H]⁺

【００６８】環状ペプチド（１）の合成：21mLのDMF 中
に化合物（７）(34 mg, 0.046 ミリモル) を含有する氷
冷溶液に、DIEA(16 μL, 0.092ミリモル) を加え、次い
で2 mLのDMF 中にMPTO(0.055ミリモル) を含有する溶液
を加えた。溶液を０℃にて１４４時間攪拌し、エバポレ
ートした。残留物を水（10mL）中で練り潰し、得られた
沈澱物を濾過により回収し、酢酸エチルで洗浄し、次い
でエーテルで洗浄し、無色の粉末状環状ペプチド（１）
を得た。収率およびエピマー含量を表３に併せて示す。

【００６９】なお、D-Leu-エピマー体評品となるCyclo-
(D-Trp-D-Glu(OBzl)-Ala-D-Val-D-Leu) を以下の手順で
合成した。 〔Cyclo-(D-Trp-D-Glu(OBzl)-Ala-D-Val-D-Leu) の合
成〕出発物質となる線状ペプチド（１３）を下記の手順
で合成した。合成スキームを図１に示す。 BOC-D-Val-D-Leu-Opac（８）の合成：TFA・H-D-Leu-OPa
c(1.82 g, 4.98 ミリモル) を出発物質として、上記化
合物（２）の合成と同様の手順で行ない、クロロホルム
・石油エーテルからの再結晶により無色の結晶を得た。
収量は１．８９ｇ（８４％）であった。

【００７０】得られたBOC-D-Val-D-Leu-Opacの物性は以
下のとおりであった。 測定値：融点＝１２８〜１２９℃、［α］_D ²⁸＝＋４
０．６°（c1, CHCl₃ ）、Ｒｆ＝０．４９（ヘキサン-E
tOAc 2:1）、 ¹Ｈ−ＮＭＲ（60MHz, CDCl₃）δ_TMS＝0.8
-1.1(m, 12H, Val γ-CH₃, Leu δ-CH₃), 1.3-2.1(m, 1
3H, Val β-CH, Leu β-CH₂, γ-CH, t-Bu), 4.1-4.6
(m, 2H, Val α-CH, Leu α-CH), 5.1-5.3(m,3H, ArCOC
H₂, Boc-NH), 6.7-7.8(m, 6H, CONH, Ar-H)

【００７１】BOC-Ala-D-Val-D-Leu-Opac（９）の合成：
上記で得られた化合物（８）(1.52 g,3.39 ミリモル)
を出発物質として、上記化合物（３）の合成と同様の手
順で行ない、クロロホルム・石油エーテルからの再結晶
により無色の結晶を得た。収量は１．６０ｇ（９３％）
であった。

【００７２】得られたBOC-Ala-D-Val-D-Leu-Opacの物性
は以下のとおりであった。 測定値：融点＝１５７〜１５９℃、［α］_D ²⁸＝＋２
５．８°（c1, CHCl₃ ）、Ｒｆ＝０．３１（ヘキサン-E
tOAc 1:1）、 ¹Ｈ−ＮＭＲ（60MHz, CDCl₃）δ_TMS＝0.8
-1.1(m, 12H, Val γ-CH₃, Leu δ-CH₃), 1.3-2.3(m, 1
8H, Ala β-CH₃, Val β-CH, Leu β-CH₂, γ-CH, t-B
u), 4.2-4.5(m, 3H, Ala α-CH, Val α-CH,Leu α-C
H), 5.1-5.3(d, 2H, ArCOCH₂), 6.6-6.7(br, 1H, Boc-N
H), 6.7-7.7(m, 7H, 2xCONH, Ar-H)

【００７３】BOC-D-Glu(OBzl)-Ala-D-Val-D-Leu-Opac
（１０）の合成：上記で得られた化合物（９）(1.50 g,
2.89 ミリモル) を出発物質として、上記化合物（４）
の合成と同様の手順で行ない、クロロホルム・石油エー
テルからの再結晶により無色の結晶を得た。収量は１．
５８ｇ（７４％）であった。

【００７４】得られたBOC-D-Glu(OBzl)-Ala-D-Val-D-Le
u-Opacの物性は以下のとおりであった。 測定値：融点＝１４６〜１４８℃、［α］_D ²⁸＝＋２
０．６°（c0.5, CHCl₃ ）、Ｒｆ＝０．５５（CHCl₃-Me
OH 20:1)、 ¹Ｈ−ＮＭＲ（270MHz, CDCl₃ ）δ_TMS＝0.8
-1.0(m, 12H, Val γ-CH₃, Leu δ-CH₃), 1.3-1.4(m, 1
2H, Ala β-CH₃, t-Bu), 1.7-2.0(m, 4H, Val β-CH, L
eu β-CH₂, γ-CH), 2.0-2.2(d, 2H, Gluβ-CH₂), 2.4-
2.6(d, 2H, γ-CH₂), 4.2-4.8(m, 4H, Glu α-CH, Ala
α-CH, Val α-CH, Leu α-CH), 5.1(s, 2H, PhCH₂),
5.2-5.7(m, 3H, ArCOCH₂, Boc-NH),6.8-7.0(m, 2H, 2xC
ONH), 7.2-7.8(m, 11H, Ar-H, CONH) 、ＳＩＭＳ＝m/z
761[M+Na]⁺

【００７５】Mpt-D-Trp-D-Glu(OBzl)-Ala-D-Val-D-Leu-
Opac（１１）の合成：上記で得られた化合物（１０）
(1.37 g, 1.85 ミリモル) を出発物質として、上記化合
物（５）の合成と同様の手順で行ない、クロロホルム・
石油エーテルからの再結晶により無色の結晶を得た。収
量は１．２５ｇ（８０％）であった。

【００７６】得られたMpt-D-Trp-D-Glu(OBzl)-Ala-D-Va
l-D-Leu-Opacの物性は以下のとおりであった。 測定値：融点＝１８１〜１８２℃、［α］_D ²⁸＝＋４
６．４°（c0.25, CHCl₃）、Ｒｆ＝０．５５（CHCl₃-Me
OH 20:1)、ＦＤＭＳ＝m/z 916 [M+H]⁺

【００７７】Mpt-D-Trp-D-Glu(OBzl)-Ala-D-Val-D-Leu-
OH（１２）の合成：上記で得られた化合物（１１）(114
mg, 0.12 ミリモル) を出発物質として、上記化合物
（６）の合成と同様の手順で行ない、無色の結晶を得
た。収量は８５ｍｇ（８６％）であった。

【００７８】得られたMpt-D-Trp-D-Glu(OBzl)-Ala-D-Va
l-D-Leu-OHの物性は以下のとおりであった。 測定値：融点＝１２９〜１３２℃、［α］_D ³⁰＝＋１
８．２°（c0.25, DMF）、ＦＤＭＳ＝m/z 799 [M+H]⁺

【００７９】H-D-Trp-D-Glu(OBzl)-Ala-D-Val-D-Leu-OH
・HCl （７）の合成：上記で得られた化合物（１２）(2
21 mg, 0.28 ミリモル) を出発物質として、上記化合物
（７）の合成と同様の手順で行ない、無色の結晶を得
た。収量は１８４ｍｇ（９０％）であった。

【００８０】得られたH-D-Trp-D-Glu(OBzl)-Ala-D-Val-
D-Leu-OH・HCl の物性は以下のとおりであった。 測定値：［α］_D ²⁵＝＋９．７°（c0.25, DMF）、ＦＤ
ＭＳ＝m/z 707 [M+H]⁺

【００８１】Cyclo-(D-Trp-D-Glu(OBzl)-Ala-D-Val-D-L
eu) の合成：上記環状ペプチド（１）の合成において、
化合物（７）の代わりに化合物（１３）を用い、D-Leu-
エピマー体評品となる環状ペプチドを合成した。

【００８２】ＨＰＬＣ分析の条件は下記のとおり。 elution gradient, アセトニトリル−０．０１Ｍ ＨＣ
ｌ ４４／６６〜５９／４１（１５分） flow rate １ml／分 detection ２５４ｎｍ リテンションタイム（ｔ_R） L-Leu エピマー ：１０．８分 D-Leu エピマー ： ９．６分

【００８３】

【実施例１４】上記実施例１３の環状ペプチド（１）の
合成において、以下のとおり条件を変更して環状ペプチ
ドの合成を行った。

【００８４】22mLのDMF 中に化合物（７）(35 mg, 0.04
7 ミリモル) とHOBt(8.7 mg, 0.057ミリモル) とを含有
する溶液に、DIEA(17 μL, 0.094ミリモル) を加え、次
いで2 mLのDMF 中にMPTO(0.055ミリモル) を含有する溶
液を加えた。溶液を室温にて３時間攪拌し、エバポレー
トした。残留物を水（10mL）中で練り潰し、得られた沈
澱物を濾過により回収し、酢酸エチルで洗浄し、次いで
エーテルで洗浄し、無色の粉末状環状ペプチド（１）を
得た。収率およびエピマー含量を表３に併せて示す。

【００８５】得られた環状ペプチドの物性は以下のとお
りであった。 測定値：融点＝３００℃以上、［α］_D＝−１５．２°
（c0.25, DMSO ）、ＦＤＭＳ＝m/z 689 [M+H]⁺ 元素分析： 計算値：C=62.87; H=7.13; N=11.89 （化学式: C₃₇H₄₈
N₆O₇・H₂O ） 測定値：C=62.54; H=6.93; N=11.87

【００８６】

【比較例８】実施例１３において、ＭＰＴＯの代わりに
ＭＰＴＡを用い、反応時間を４８時間とした以外は、実
施例１３と同様の操作を行った。結果を表３に示す。

【００８７】

【比較例９】実施例１３において、ＭＰＴＯの代わりに
ＤＰＰＡを用い、反応時間を２６４時間とした以外は、
実施例１３と同様の操作を行った。結果を表３に示す。

【００８８】

【比較例１０】実施例１４において、ＭＰＴＯの代わり
にＭＰＴＡを用い、反応時間を８時間とした以外は、実
施例１４と同様の操作を行った。結果を表３に示す。

【００８９】

【比較例１１】実施例１４において、ＭＰＴＯの代わり
にＤＰＰＡを用い、反応時間を７２時間とした以外は、
実施例１４と同様の操作を行った。結果を表３に示す。

【００９０】

【表３】

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１は、実施例１４で合成した線状ペプチド
の合成スキームを示す。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 【化１】 上記（式−Ｉ）にて示される3-ジメチルホスフィノチオ
   イル-2(3H)-オキサゾロン。
2. 【請求項２】 3-ジメチルホスフィノチオイル-2(3H)-
   オキサゾロンからなるアミド結合生成用縮合剤。