JPH06339368A - 細胞融合株 - Google Patents
細胞融合株Info
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- JPH06339368A JPH06339368A JP11267391A JP11267391A JPH06339368A JP H06339368 A JPH06339368 A JP H06339368A JP 11267391 A JP11267391 A JP 11267391A JP 11267391 A JP11267391 A JP 11267391A JP H06339368 A JPH06339368 A JP H06339368A
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- JP
- Japan
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- aspergillus
- strain
- awamori
- cell fusion
- oryzae
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Abstract
(57)【要約】
【構 成】アスペルギルス・オリーゼ（Ａｓｐｅｒｇｉ
ｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）とアスペルギルス・アワモリ
（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ）もしくは
アスペルギルス・アワモリ・バル・カワチ（Ａｓｐｅｒ
ｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ ｖａｒ．ｋａｗａｃｈ
ｉｉ）とを細胞融合せしめて細胞融合株を製造する。 【効 果】このようにして創成された新規細胞融合株を
用いてなる麹を利用することにより、さわやかな酸味と
芳香を有する新しいタイプのアルコール飲料を製造でき
る。
ｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）とアスペルギルス・アワモリ
（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ）もしくは
アスペルギルス・アワモリ・バル・カワチ（Ａｓｐｅｒ
ｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ ｖａｒ．ｋａｗａｃｈ
ｉｉ）とを細胞融合せしめて細胞融合株を製造する。 【効 果】このようにして創成された新規細胞融合株を
用いてなる麹を利用することにより、さわやかな酸味と
芳香を有する新しいタイプのアルコール飲料を製造でき
る。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ
ｏｒｙｚａｅとＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓａｗａｍｏｒ
ｉもしくはＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ
ｖａｒ．ｋａｗａｃｈｉｉの細胞融合株に関するもので
ある。
ｏｒｙｚａｅとＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓａｗａｍｏｒ
ｉもしくはＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ
ｖａｒ．ｋａｗａｃｈｉｉの細胞融合株に関するもので
ある。
【０００２】そして、本発明によれば、Ａｓｐｅｒｇｉ
ｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅとＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａ
ｗａｍｏｒｉもしくはＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａ
ｍｏｒｉ ｖａｒ．ｋａｗａｃｈｉｉの細胞融合株から
なる麹菌を用いて、さわやかな酸味を有し芳香を発する
アルコール飲料を効率的に製造することができる。
ｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅとＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａ
ｗａｍｏｒｉもしくはＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａ
ｍｏｒｉ ｖａｒ．ｋａｗａｃｈｉｉの細胞融合株から
なる麹菌を用いて、さわやかな酸味を有し芳香を発する
アルコール飲料を効率的に製造することができる。
【０００３】
【従来の技術】一般にＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙ
ｚａｅは、清酒を製造する際に用いる麹菌としてよく知
られている。またＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａ
ｅは澱粉の液化、糖化などの酵素生産性は高いのである
が、クエン酸生産能が低く、さわやかな酸味をもつ清酒
を製造することはできなかった。
ｚａｅは、清酒を製造する際に用いる麹菌としてよく知
られている。またＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａ
ｅは澱粉の液化、糖化などの酵素生産性は高いのである
が、クエン酸生産能が低く、さわやかな酸味をもつ清酒
を製造することはできなかった。
【０００４】また、一般にＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａ
ｗａｍｏｒｉもしくは、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗ
ａｍｏｒｉ ｖａｒ．ｋａｗａｃｈｉｉは焼酎を製造す
る際に用いる麹菌としてよく知られている。
ｗａｍｏｒｉもしくは、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗ
ａｍｏｒｉ ｖａｒ．ｋａｗａｃｈｉｉは焼酎を製造す
る際に用いる麹菌としてよく知られている。
【０００５】それらは、クエン酸生産能は高いが、穀類
上での繁殖力や澱粉の液化力並びに糖化力が弱いので、
製麹に要する時間が長くかかり、しかも原料の利用率が
極端に悪いなどの欠点がみられていたのである。
上での繁殖力や澱粉の液化力並びに糖化力が弱いので、
製麹に要する時間が長くかかり、しかも原料の利用率が
極端に悪いなどの欠点がみられていたのである。
【０００６】従来、プロトプラスト融合による育種は、
数多く行なわれるようになり、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ
属に関しては、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ
の各株を用いた種内融合が行なわれたり（古屋ら：農化
５７ １（１９８３））、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎ
ｉｄｕｌａｎｓとＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇ
ａｔｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ
とＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｒｕｇｕｌｏｓｕｓとの異
種間融合が行なわれたりしている。（Ｌ．Ｆｅｒｅｎｃ
ｚｙ：Ｅｘｐｅｒｉｅｎｔｉａ ３３ １８４（１９７
７），Ｆ．Ｋｅｖｅｉ ｅｔ ａｌ：Ｊ．Ｇｅｎ．Ｍｉ
ｃｒｏｂｉｏｌ．１０２ ２５５（１９７７））しかし
ながら、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅとＡｓ
ｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉもしくは、Ａｓｐ
ｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ ｖａｒ．ｋａｗａ
ｃｈｉｉとの細胞融合株が得られたとの報告はない。
数多く行なわれるようになり、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ
属に関しては、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ
の各株を用いた種内融合が行なわれたり（古屋ら：農化
５７ １（１９８３））、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎ
ｉｄｕｌａｎｓとＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇ
ａｔｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ
とＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｒｕｇｕｌｏｓｕｓとの異
種間融合が行なわれたりしている。（Ｌ．Ｆｅｒｅｎｃ
ｚｙ：Ｅｘｐｅｒｉｅｎｔｉａ ３３ １８４（１９７
７），Ｆ．Ｋｅｖｅｉ ｅｔ ａｌ：Ｊ．Ｇｅｎ．Ｍｉ
ｃｒｏｂｉｏｌ．１０２ ２５５（１９７７））しかし
ながら、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅとＡｓ
ｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉもしくは、Ａｓｐ
ｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ ｖａｒ．ｋａｗａ
ｃｈｉｉとの細胞融合株が得られたとの報告はない。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】解決しようとする課題
は、従来得ることのできなかったＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕ
ｓ ｏｒｙｚａｅの特性である澱粉の液化、糖化の高い
酵素力をそのまま有し、かつＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ
ａｗａｍｏｒｉもしくは、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａ
ｗａｍｏｒｉ ｖａｒ．ｋａｗａｃｈｉｉの特性である
高いクエン酸生産性を有するすぐれた細胞融合株を創成
することである。
は、従来得ることのできなかったＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕ
ｓ ｏｒｙｚａｅの特性である澱粉の液化、糖化の高い
酵素力をそのまま有し、かつＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ
ａｗａｍｏｒｉもしくは、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａ
ｗａｍｏｒｉ ｖａｒ．ｋａｗａｃｈｉｉの特性である
高いクエン酸生産性を有するすぐれた細胞融合株を創成
することである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】上記課題を解決するため
に各方面から検討した結果、本発明者は、多くのＡｓｐ
ｅｒｇｉｌｌｕｓ属の菌がもつ種々の特性を一つの菌株
に併有させ、これを麹菌として使用すれば新しい品質の
アルコール飲料を製造することができるとの発想を新た
に得、そして異種間融合を鋭意研究したところ、ここに
すぐれた性質を有するＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙ
ｚａｅとＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉもし
くは、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ ｖａ
ｒ．ｋａｗａｃｈｉｉの細胞融合株を得ることに成功し
たのである。
に各方面から検討した結果、本発明者は、多くのＡｓｐ
ｅｒｇｉｌｌｕｓ属の菌がもつ種々の特性を一つの菌株
に併有させ、これを麹菌として使用すれば新しい品質の
アルコール飲料を製造することができるとの発想を新た
に得、そして異種間融合を鋭意研究したところ、ここに
すぐれた性質を有するＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙ
ｚａｅとＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉもし
くは、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ ｖａ
ｒ．ｋａｗａｃｈｉｉの細胞融合株を得ることに成功し
たのである。
【０００９】本発明において得られた細胞融合株はＡｓ
ｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅの特性である澱粉の
液化、糖化の高い酵素力をそのまま有し、かつＡｓｐｅ
ｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉもしくは、Ａｓｐｅｒ
ｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ ｖａｒ．ｋａｗａｃｈ
ｉｉの特性である高いクエン酸生産性を有するものであ
る。
ｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅの特性である澱粉の
液化、糖化の高い酵素力をそのまま有し、かつＡｓｐｅ
ｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉもしくは、Ａｓｐｅｒ
ｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ ｖａｒ．ｋａｗａｃｈ
ｉｉの特性である高いクエン酸生産性を有するものであ
る。
【００１０】本発明において得られた細胞融合株を麹菌
として使用すれば、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚ
ａｅの麹を用いて製造するアルコール飲料にクエン酸に
よるさわやかな香味を付与することができ、そしてＡｓ
ｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉもしくは、Ａｓｐ
ｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ ｖａｒ．ｋａｗａ
ｃｈｉｉの麹における繁殖力や澱粉液化力や糖化力を高
めることができるので、製麹時間を短縮でき、原料利用
率を高めることができることになるのである。
として使用すれば、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚ
ａｅの麹を用いて製造するアルコール飲料にクエン酸に
よるさわやかな香味を付与することができ、そしてＡｓ
ｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉもしくは、Ａｓｐ
ｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ ｖａｒ．ｋａｗａ
ｃｈｉｉの麹における繁殖力や澱粉液化力や糖化力を高
めることができるので、製麹時間を短縮でき、原料利用
率を高めることができることになるのである。
【００１１】本発明に係る融合株の創成は、まず、Ａｓ
ｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅに属する菌株と、Ａ
ｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉもしくは、Ａｓ
ｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ ｖａｒ．ｋａｗ
ａｃｈｉｉに属する菌株をそれぞれ別個にプロトプラス
トにすることが必要である。Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｏ
ｒｙｚａｅに属する菌株としては、変異種でもよく、各
原株でもよく、また、栄養要求性変異株などいずれでも
よい。また、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ
もしくは、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ
ｖａｒ．ｋａｗａｃｈｉｉに属する菌株としては、変異
種でもよく、各原株でもよく、また栄養要求性変異株な
どいずれでもよい。なかでも栄養要求変異株を使用すれ
ば、融合処理後に融合株のみを、選択生育させるのに、
便利がよくなるので好んで使用される。
ｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅに属する菌株と、Ａ
ｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉもしくは、Ａｓ
ｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ ｖａｒ．ｋａｗ
ａｃｈｉｉに属する菌株をそれぞれ別個にプロトプラス
トにすることが必要である。Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｏ
ｒｙｚａｅに属する菌株としては、変異種でもよく、各
原株でもよく、また、栄養要求性変異株などいずれでも
よい。また、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ
もしくは、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ
ｖａｒ．ｋａｗａｃｈｉｉに属する菌株としては、変異
種でもよく、各原株でもよく、また栄養要求性変異株な
どいずれでもよい。なかでも栄養要求変異株を使用すれ
ば、融合処理後に融合株のみを、選択生育させるのに、
便利がよくなるので好んで使用される。
【００１２】融合処理する両菌株は、各別に栄養培地に
接種し約２４時間振とう培養し、培養後、培養液を濾過
して菌糸体を得る。菌糸体は、糖類、糖アルコール類、
塩類等のスタビライザーを含むリン酸バツフアーに懸濁
し、これに細胞壁溶解酵素としてＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍ
ａ ｈａｒｚｉａｎｕｍ由来のＮｏｖｏｚｙｍｅ２３４
とＣｅｌｌｕｌａｓｅ ｏｎｏｚｕｋａ Ｒ−１０を夫
々５ｍｇ／ｍｌ程度を加え、約３０℃で４時間ゆるやか
に振とう攪拌した後、１５００×ｇで１０分間遠心分離
し、各プロトプラストを得る。
接種し約２４時間振とう培養し、培養後、培養液を濾過
して菌糸体を得る。菌糸体は、糖類、糖アルコール類、
塩類等のスタビライザーを含むリン酸バツフアーに懸濁
し、これに細胞壁溶解酵素としてＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍ
ａ ｈａｒｚｉａｎｕｍ由来のＮｏｖｏｚｙｍｅ２３４
とＣｅｌｌｕｌａｓｅ ｏｎｏｚｕｋａ Ｒ−１０を夫
々５ｍｇ／ｍｌ程度を加え、約３０℃で４時間ゆるやか
に振とう攪拌した後、１５００×ｇで１０分間遠心分離
し、各プロトプラストを得る。
【００１３】プロトプラスト融合に際しては、夫々のプ
ロトプラストを混合し、７００×ｇ１０分間遠心分離し
た後、３０℃に予熱した０．０１Ｍ ＣａＣｌ２・２Ｈ
２Ｏ、０．０５Ｍグリシンを含むｐＨ７．５ ２０％ポ
リエチレングライコール６０００溶液を加えて３０℃で
１０分間融合させる。得られた融合処理物は、スタビラ
イザーを含むリン酸バツフアーに懸濁し、適宜希釈し、
栄養欠損培地上に拡散させて、３０℃で数日培養すれ
ば、栄養要求性の相補された融合株のみが生育するので
これを分離し、培養することによってＡｓｐｅｒｇｉｌ
ｌｕｓ ｏｒｙｚａｅとＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗ
ａｍｏｒｉもしくは、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａ
ｍｏｒｉ ｖａｒ．ｋａｗａｃｈｉｉの細胞融合株を得
ることができる。
ロトプラストを混合し、７００×ｇ１０分間遠心分離し
た後、３０℃に予熱した０．０１Ｍ ＣａＣｌ２・２Ｈ
２Ｏ、０．０５Ｍグリシンを含むｐＨ７．５ ２０％ポ
リエチレングライコール６０００溶液を加えて３０℃で
１０分間融合させる。得られた融合処理物は、スタビラ
イザーを含むリン酸バツフアーに懸濁し、適宜希釈し、
栄養欠損培地上に拡散させて、３０℃で数日培養すれ
ば、栄養要求性の相補された融合株のみが生育するので
これを分離し、培養することによってＡｓｐｅｒｇｉｌ
ｌｕｓ ｏｒｙｚａｅとＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗ
ａｍｏｒｉもしくは、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａ
ｍｏｒｉ ｖａｒ．ｋａｗａｃｈｉｉの細胞融合株を得
ることができる。
【００１４】本発明においては、実施例１に示す方法に
よつてＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ、ＲＩＢ
６４７、ＩＦ０３０１０３のヒスチジン要求株と、Ａｓ
ｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ ＩＦＯ４０３３
のリジン要求株を融合させ多くの融合株を得、そのなか
から２株を選択し、Ｆ．Ｆ．２、Ｆ．Ｆ．９と名づけ
た。
よつてＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ、ＲＩＢ
６４７、ＩＦ０３０１０３のヒスチジン要求株と、Ａｓ
ｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ ＩＦＯ４０３３
のリジン要求株を融合させ多くの融合株を得、そのなか
から２株を選択し、Ｆ．Ｆ．２、Ｆ．Ｆ．９と名づけ
た。
【００１５】同様にして更にＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ
ｏｒｙｚａｅ ＲＩＢ６４７、ＩＦ０３０１０３のヒス
チジン要求株と、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏ
ｒｉｖａｒ．ｋａｗａｃｈｉｉ ＩＦＯ４３０８のアス
パラギン要求株を融合させ、多くの融合株を得、そのな
かから４株を選択し、Ｆ．Ｆ．６、Ｆ．Ｆ．７、Ｆ．
Ｆ．１０、Ｆ．Ｆ．１２と名づけた。各融合株の有機酸
組成比を見た結果が図１に示されるが、（１）はＡｓｐ
ｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅの親株、（８）はＡｓ
ｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉの親株、（９）は
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ ｖａｒ．ｋ
ａｗａｃｈｉｉの親株を示している。
ｏｒｙｚａｅ ＲＩＢ６４７、ＩＦ０３０１０３のヒス
チジン要求株と、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏ
ｒｉｖａｒ．ｋａｗａｃｈｉｉ ＩＦＯ４３０８のアス
パラギン要求株を融合させ、多くの融合株を得、そのな
かから４株を選択し、Ｆ．Ｆ．６、Ｆ．Ｆ．７、Ｆ．
Ｆ．１０、Ｆ．Ｆ．１２と名づけた。各融合株の有機酸
組成比を見た結果が図１に示されるが、（１）はＡｓｐ
ｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅの親株、（８）はＡｓ
ｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉの親株、（９）は
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ ｖａｒ．ｋ
ａｗａｃｈｉｉの親株を示している。
【００１６】また、下記の表１には、各親株と各融合株
の生育度と生産酵素活性（Ｕ／ｍｇＣＯ２）が示され
る。
の生育度と生産酵素活性（Ｕ／ｍｇＣＯ２）が示され
る。
【００１７】
【表１】
【００１８】本発明の細胞融合株から、酵素の生産性
と、クエン酸生産量を検討し、アルコール飲料の製造に
最も好ましい麹菌になり得るものとして、細胞融合株
Ｆ．Ｆ．２とＦ．Ｆ．７を選定した。この細胞融合株
Ｆ．Ｆ．２とＦ．Ｆ．７はそれぞれＦＥＲＭ Ｐ−７２
１４、ＦＥＲＭ Ｐ−７２１１として工業技術院微生物
工業技術研究所に寄託されている。
と、クエン酸生産量を検討し、アルコール飲料の製造に
最も好ましい麹菌になり得るものとして、細胞融合株
Ｆ．Ｆ．２とＦ．Ｆ．７を選定した。この細胞融合株
Ｆ．Ｆ．２とＦ．Ｆ．７はそれぞれＦＥＲＭ Ｐ−７２
１４、ＦＥＲＭ Ｐ−７２１１として工業技術院微生物
工業技術研究所に寄託されている。
【００１９】細胞融合株Ｆ．Ｆ．２、Ｆ．Ｆ．７を夫々
麹菌として用い、基質として３０℃の冷却蒸米３０ｇに
ｇ当り２×１０６ケの胞子を加え、シヤーレ法により製
麹した。
麹菌として用い、基質として３０℃の冷却蒸米３０ｇに
ｇ当り２×１０６ケの胞子を加え、シヤーレ法により製
麹した。
【００２０】麹の分析結果を下記の表２に示す。
【００２１】
【表２】
【００２２】この表から明らかなように、細胞融合株
Ｆ．Ｆ．２とＦ．Ｆ．７は、菌体生育が、Ａｓｐｅｒｇ
ｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ親株よりすぐれ、クエン酸生
成量は、適度に増加し、グルコアミラーゼ量はかなり上
昇しているところから、清酒製造用麹菌としては、きわ
めて好ましいものと認められるものである。
Ｆ．Ｆ．２とＦ．Ｆ．７は、菌体生育が、Ａｓｐｅｒｇ
ｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ親株よりすぐれ、クエン酸生
成量は、適度に増加し、グルコアミラーゼ量はかなり上
昇しているところから、清酒製造用麹菌としては、きわ
めて好ましいものと認められるものである。
【００２３】本発明によれば、各種細胞融合株を麹とし
て使用し、清酒と同様に製造し、各種クエン酸濃度を有
するバラエティーに富んだ新しいタイプのアルコール飲
料が得られるものである。
て使用し、清酒と同様に製造し、各種クエン酸濃度を有
するバラエティーに富んだ新しいタイプのアルコール飲
料が得られるものである。
【００２４】本発明に係る細胞融合株を用いて製造した
アルコール飲料は清酒に類似するが、クエン酸含量が多
いので、さわやかな酸味を有し、更にすっきりした香も
有する新規なアルコール飲料ということができる。
アルコール飲料は清酒に類似するが、クエン酸含量が多
いので、さわやかな酸味を有し、更にすっきりした香も
有する新規なアルコール飲料ということができる。
【００２５】次に本発明の実施例及び応用例を示す。
【００２６】
【実施例１】Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ
ＲＩＢ６４７、ＩＦＯ３０１０３、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌ
ｕｓ ａｗａｍｏｒｉ ＩＦＯ４０３３、Ａｓｐｅｒｇ
ｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ ｖａｒ．ｋａｗａｃｈｉ
ｉ ＩＦＯ４３０８夫々の胞子をニトロソグアニジン１
４ｍＭ溶液に懸濁し、３０℃で２０分間処理して変異さ
せ、夫々ヒスチジン、リジン、アスパラギン要求変異株
を分離した。ここに得られた各変異株は、各別にＣＭ培
地（ツアペックドックス培地に０．２％ディフコイース
トエキストラクトを添加したもの）に、３×１０５胞子
／ｍｌあて接種し、２８℃で２４時間振とう培養した。
培養液は濾過して菌糸体を得、これを水洗した。
ＲＩＢ６４７、ＩＦＯ３０１０３、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌ
ｕｓ ａｗａｍｏｒｉ ＩＦＯ４０３３、Ａｓｐｅｒｇ
ｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ ｖａｒ．ｋａｗａｃｈｉ
ｉ ＩＦＯ４３０８夫々の胞子をニトロソグアニジン１
４ｍＭ溶液に懸濁し、３０℃で２０分間処理して変異さ
せ、夫々ヒスチジン、リジン、アスパラギン要求変異株
を分離した。ここに得られた各変異株は、各別にＣＭ培
地（ツアペックドックス培地に０．２％ディフコイース
トエキストラクトを添加したもの）に、３×１０５胞子
／ｍｌあて接種し、２８℃で２４時間振とう培養した。
培養液は濾過して菌糸体を得、これを水洗した。
【００２７】得られた各菌糸体は、各別に、その７５ｍ
ｇ（湿菌体）を４．６ｍｌの２／１５Ｍリン酸バッファ
ー（スタビライザー添加）に加え、次いで、Ｎｏｖｏｚ
ｙｍｅ ２３４ ５ｍｇ／ｍｌ添加し、３０℃で４時間
ゆるやかに撹拌した。得られた処理液を１５００×ｇで
１０分間遠心分離し、スタビライザー含有水で２度洗浄
しスタビライザー含有水に懸濁させたプロトプラストを
得た。
ｇ（湿菌体）を４．６ｍｌの２／１５Ｍリン酸バッファ
ー（スタビライザー添加）に加え、次いで、Ｎｏｖｏｚ
ｙｍｅ ２３４ ５ｍｇ／ｍｌ添加し、３０℃で４時間
ゆるやかに撹拌した。得られた処理液を１５００×ｇで
１０分間遠心分離し、スタビライザー含有水で２度洗浄
しスタビライザー含有水に懸濁させたプロトプラストを
得た。
【００２８】各プロトプラストを約５×１０６ケずつ混
合し７００×ｇで１０分間遠心分離し、これに３０℃に
予熱した０．０１Ｍ ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、０．０５
Ｍグリシンを含むＰＨ７．５、２０％ポリエチレングラ
イコール６０００溶液１．０ｍｌを加え、３０℃で１０
分間融合処理を行なった。融合処理後スタビライザーを
含むＭＭ培地（ｐＨ６．０のツアペックドックス培地に
０．６Ｍ ＫＣｌを添加したもの）６ｍｌを添加し、７
００×ｇで１０分間遠心分離した。そしてスタビライザ
ー含有水で２度洗浄して、スタビライザー含有水に懸濁
しＭＭ培地上に拡散し、３０℃で数日培養して、Ａｓｐ
ｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅとＡｓｐｅｒｇｉｌｌ
ｕｓ ａｗａｍｏｒｉからＦ．Ｆ．２（ＦＥＲＭ Ｐ−
７２１４）、Ｆ．Ｆ．９を、又Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ
ｏｒｙｚｅａとＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏ
ｒｉ ｖａｒ．ｋａｗａｃｈｉｉからＦ．Ｆ．６、Ｆ．
Ｆ．７（ＦＥＲＭ Ｐ−７２１１）、Ｆ．Ｆ．１０、
Ｆ．Ｆ．１２を得た。
合し７００×ｇで１０分間遠心分離し、これに３０℃に
予熱した０．０１Ｍ ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、０．０５
Ｍグリシンを含むＰＨ７．５、２０％ポリエチレングラ
イコール６０００溶液１．０ｍｌを加え、３０℃で１０
分間融合処理を行なった。融合処理後スタビライザーを
含むＭＭ培地（ｐＨ６．０のツアペックドックス培地に
０．６Ｍ ＫＣｌを添加したもの）６ｍｌを添加し、７
００×ｇで１０分間遠心分離した。そしてスタビライザ
ー含有水で２度洗浄して、スタビライザー含有水に懸濁
しＭＭ培地上に拡散し、３０℃で数日培養して、Ａｓｐ
ｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅとＡｓｐｅｒｇｉｌｌ
ｕｓ ａｗａｍｏｒｉからＦ．Ｆ．２（ＦＥＲＭ Ｐ−
７２１４）、Ｆ．Ｆ．９を、又Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ
ｏｒｙｚｅａとＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏ
ｒｉ ｖａｒ．ｋａｗａｃｈｉｉからＦ．Ｆ．６、Ｆ．
Ｆ．７（ＦＥＲＭ Ｐ−７２１１）、Ｆ．Ｆ．１０、
Ｆ．Ｆ．１２を得た。
【００２９】
【応用例１】細胞融合株Ｆ．Ｆ．２、ＦＥＲＭ Ｐ−７
２１４；Ｆ．Ｆ．７、ＦＥＲＭ Ｐ−７２１１の胞子
を、夫々３０℃の冷却蒸米３００ｇに、ｇ当たり２×１
０６ケ添加し、３０℃で１４時間培養し、切返して３５
℃で２６時間培養して出麹した。３株の親株についても
同様に処理して出麹した。
２１４；Ｆ．Ｆ．７、ＦＥＲＭ Ｐ−７２１１の胞子
を、夫々３０℃の冷却蒸米３００ｇに、ｇ当たり２×１
０６ケ添加し、３０℃で１４時間培養し、切返して３５
℃で２６時間培養して出麹した。３株の親株についても
同様に処理して出麹した。
【００３０】これらの麹の分析結果を下記の表３に示
す。
す。
【００３１】
【表３】
【００３２】これらの麹を用いて、普通に行なわれてい
る清酒醸造に従ってそれぞれ清酒を製造した。
る清酒醸造に従ってそれぞれ清酒を製造した。
【００３３】清酒醸造は下記表４の仕込配合で実施し
た。
た。
【００３４】
【表４】
【００３５】初添の汲水は、１０倍希釈の乳酸７ｍｌと
１０９／ｍｌの酵母懸濁液２ｍｌを加えて２１０ｍｌと
し、初添温度１３℃、仲添温度９℃、留添温度７℃で、
以後１日１℃ずつ昇温し最高温度１５℃で醗酵させ留添
後１５日で上槽した。
１０９／ｍｌの酵母懸濁液２ｍｌを加えて２１０ｍｌと
し、初添温度１３℃、仲添温度９℃、留添温度７℃で、
以後１日１℃ずつ昇温し最高温度１５℃で醗酵させ留添
後１５日で上槽した。
【００３６】上槽酒の成分並びに粕量を下記の表５に示
す。
す。
【００３７】
【表５】
【００３８】その結果、蒸米の溶解やアルコール生成が
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅをしのぎ、クエ
ン酸含量が多いので、さわやかな酸味を有し、更にすっ
きりした香りも有する清酒であることが確認された。
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅをしのぎ、クエ
ン酸含量が多いので、さわやかな酸味を有し、更にすっ
きりした香りも有する清酒であることが確認された。
【００３９】
【発明の効果】本発明によってはじめて、アスペルギル
ス・オリーゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａ
ｅ）とアスペルギルス・アワモリ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌ
ｕｓ ａｗａｍｏｒｉ）もしくはアスペルギルス・アワ
モリ・バル・カワチ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａ
ｍｏｒｉ ｖａｒ．ｋａｗａｃｈｉｉ）の細胞融合株の
創成に成功したものであり、例えば、これらの細胞融合
株を用いて製麹し、得られた麹を用いて、さわやかな酸
味を有し芳香を有するアルコール飲料を効率的に製造す
ることができる。
ス・オリーゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａ
ｅ）とアスペルギルス・アワモリ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌ
ｕｓ ａｗａｍｏｒｉ）もしくはアスペルギルス・アワ
モリ・バル・カワチ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａ
ｍｏｒｉ ｖａｒ．ｋａｗａｃｈｉｉ）の細胞融合株の
創成に成功したものであり、例えば、これらの細胞融合
株を用いて製麹し、得られた麹を用いて、さわやかな酸
味を有し芳香を有するアルコール飲料を効率的に製造す
ることができる。
【図１】親株及び細胞融合株の有機酸組成比率を示す図
である。
である。
Ｌａｃ．；乳酸 Ｍａｌ．；リンゴ酸 Ｓｕｃ．；コハク酸 αＫＧ ；α−ケトグルタール酸 Ｃｉｔ．；クエン酸 Ｏｔｈｅｒｓ；その他の有機酸
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:665 7804−4Ｂ 1:69） 7804−4Ｂ (72)発明者 市川 英治 京都市伏見区南浜町247番地 大倉酒造株 式会社内 (72)発明者 水津 哲義 京都市伏見区南浜町247番地 大倉酒造株 式会社内
Claims (3)
- 【請求項１】 アスペルギルス・オリーゼ（Ａｓｐｅｒ
ｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）とアスペルギルス・アワ
モリ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ）もし
くはアスペルギルス・アワモリ・バル・カワチ（Ａｓｐ
ｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ ｖａｒ．ｋａｗａ
ｃｈｉｉ）の細胞融合株。 - 【請求項２】 アスペルギルス・オリーゼ（Ａｓｐｅｒ
ｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）とアスペルギルス・アワ
モリ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ）の細
胞融合株がＦ．Ｆ．２であることを特徴とする請求項１
の細胞融合株。 - 【請求項３】 アスペルギルス・オリーゼ（Ａｓｐｅｒ
ｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）とアスペルギルス・アワ
モリ・バル・カワチ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａ
ｍｏｒｉ ｖａｒ．ｋａｗａｃｈｉｉ）の細胞融合株が
Ｆ．Ｆ．７であることを特徴とする請求項１の細胞融合
株。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11267391A JP2561182B2 (ja) | 1991-02-22 | 1991-02-22 | 細胞融合株 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11267391A JP2561182B2 (ja) | 1991-02-22 | 1991-02-22 | 細胞融合株 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06339368A true JPH06339368A (ja) | 1994-12-13 |
| JP2561182B2 JP2561182B2 (ja) | 1996-12-04 |
Family
ID=14592619
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11267391A Expired - Lifetime JP2561182B2 (ja) | 1991-02-22 | 1991-02-22 | 細胞融合株 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2561182B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003091445A1 (en) * | 2002-04-26 | 2003-11-06 | Suntory Limited | Process for producing highly unsaturated fatty acid-containing lipid |
| CN111117894A (zh) * | 2019-11-26 | 2020-05-08 | 漳州大北农农牧科技有限公司 | 一株米曲霉菌株及其应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS4969885A (ja) * | 1972-11-08 | 1974-07-05 | ||
| JPS52130978A (en) * | 1976-04-22 | 1977-11-02 | Ajinomoto Co Inc | Preparation of materials for citric acid fermentation |
| JPS57146571A (en) * | 1981-03-09 | 1982-09-10 | Mitsubishi Chem Ind Ltd | Killer yeast |
-
1991
- 1991-02-22 JP JP11267391A patent/JP2561182B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS4969885A (ja) * | 1972-11-08 | 1974-07-05 | ||
| JPS52130978A (en) * | 1976-04-22 | 1977-11-02 | Ajinomoto Co Inc | Preparation of materials for citric acid fermentation |
| JPS57146571A (en) * | 1981-03-09 | 1982-09-10 | Mitsubishi Chem Ind Ltd | Killer yeast |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003091445A1 (en) * | 2002-04-26 | 2003-11-06 | Suntory Limited | Process for producing highly unsaturated fatty acid-containing lipid |
| US7863024B2 (en) | 2002-04-26 | 2011-01-04 | Suntory Holdings Limited | Process for producing highly unsaturated fatty acid-containing lipid |
| CN111117894A (zh) * | 2019-11-26 | 2020-05-08 | 漳州大北农农牧科技有限公司 | 一株米曲霉菌株及其应用 |
| CN111117894B (zh) * | 2019-11-26 | 2023-11-10 | 漳州大北农农牧科技有限公司 | 一株米曲霉菌株及其应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2561182B2 (ja) | 1996-12-04 |
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