JPH06343492A - １，５−アンヒドログルシトールの定量法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】糖尿病の診断マーカーとして用いられている
１，５−アンヒドログルシトール（１，５−ＡＧ）の正
確、迅速な且つ自動分析に適用可能な定量法を提供する
こと。 【構成】血清等の試料中の１，５−ＡＧをピラノースオ
キシダーゼまたはＬ−ソルボースオキシダーゼを用いて
測定する際に、試料中に混在するグルコースをピラノー
スオキシダーゼまたはＬ−ソルボースオキシダーゼと反
応しない物質に変換するときのｐＨを７未満にするか、
あるいは予め試料に酸性物質を加えて試料を酸性にした
後、グルコースをピラノースオキシダーゼまたはＬ−ソ
ルボースオキシダーゼと反応しない物質に変換する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は糖尿病の診断マーカーと
して利用されている１，５−アンヒドログルシトール
（以下１，５−ＡＧと略す）の正確、迅速でかつ自動分
析装置にも適用可能な測定方法に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】１，５−ＡＧは、グルコースと類似構造
を持つ環状ポリオールである。この１，５−ＡＧは、健
常人の血液中に、グルコースに次ぎ高濃度（個人毎に一
定値を持つ）で存在するが、糖尿病患者では、１，５−
ＡＧの濃度は特異的に低下し、かつその低下率が顕著で
あることから、糖尿病の診断に用いられる様になった。

【０００３】従来、１，５−ＡＧを測定するには、１，
５−ＡＧを酸化する酵素（以下１，５−ＡＧ酸化酵素と
いう）が見いだされ、これを応用した測定法（特公平３
−２４２００号公報）が開発された。また、１，５−Ａ
Ｇ酸化酵素ではあるが、基質特異性が厳密でないピラノ
ースオキシダーゼ叉はＬ−ソルボースオキシダーゼを用
い、これら酵素と反応性を有する１，５−ＡＧ以外の糖
類（以下、夾雑糖類という）を選択的に除去するいくつ
かの方法のうちの１つと組み合わせた測定法（特開昭６
３−１８５３９７号公報）が開発された。

【０００４】この特開昭６３−１８５３９７号公報に
は、夾雑糖類（ヒト血中では主としてグルコース）の除
去法として、（１）イオン交換樹脂（ミニカラム）で吸
着する方法、（２）塩酸で分解する方法、（３）水素化
ホウ素ナトリウムで還元する方法、（４）グルコースオ
キシダーゼで酸化する方法、（５）ヘキソキナーゼでリ
ン酸化する方法が開示されている。これらの方法のう
ち、（１）の方法が最も厳密かつ簡便であり、現在、こ
の方法を用いた用手法の１，５−ＡＧ測定キットが診断
薬として開発され、上市されている。しかしながら、多
忙な臨床現場を考えると、カラム操作を必要とする用手
法のキットでは、必ずしも十分に簡便とは言えず、自動
化法の開発に強い期待がかけられている。

【０００５】そこで、カラム操作が不要であり、生化学
検査用に市販されている汎用の自動分析装置へも応用可
能な（５）の夾雑糖類（主としてグルコース）の酵素に
よるリン酸化法が注目され、特開平１−３２０９９８号
公報、特開平２−１０４２９８号公報、特開平３−２７
２９９号公報にその改良法が提案されている。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】ところで、血液中では
グルコースは空腹時で８００〜１，２００mg/L、食後で
も１，４００mg/L程度の量にコントロールされている。
ところが糖尿病になるとこれ以上に上昇し、３，０００
から４，０００mg/Lに上がることもまれではなく、１
０，０００mg/Lに上昇することも有り得る。一方、１，
５−ＡＧの量は０〜５０mg/Lの範囲に分布しており、健
常者で平均２３〜２５mg/L（グルコースのおよそ１／４
０）、糖尿病患者ではずっと少なくなって平均４〜７mg
/Lであり、１mg/L以下（グルコースの数千分の１）とな
ることもある。従って、１０，０００mg/Lのグルコース
を完全に除去できる方法でないと、１，５−ＡＧを充分
精度良く測定できる方法とは言えない。すなわち、グル
コース濃度が１０，０００mg/Lの糖尿病患者の血液で
は、グルコースの９９．９９％が除去できても１mg/Lの
グルコースが残存し、１，５−ＡＧの測定値は上昇し、
正確に測定できない。

【０００７】従って、１，５−ＡＧに対する特異性が悪
く、むしろグルコースと強く反応するようなピラノース
オキシダーゼ叉はＬ−ソルボースオキシダーゼを用い、
汎用の生化学分析装置で測定可能な１，５−ＡＧ自動測
定法を開発するためには、グルコースを完全に除去する
方法が必要となる。

【０００８】また、特開平１−３２０９９８号公報、特
開平２−１０４２９８号公報、特開平３−２７２９９号
公報、特開平５ー７６３９７号公報等では、グルコース
の処理に、グルコース６位リン酸化酵素（グルコキナー
ゼ叉はヘキソキナーゼ）を用い、さらにこの反応を完結
させるため、グルコースのリン酸化反応の平衡を完全に
グルコース−６−リン酸に向かわせる工夫がなされてい
る。

【０００９】いずれの方法でも、１，５−ＡＧとグルコ
ースのみを試料とした場合、正確に１，５−ＡＧを定量
することができる。しかしながら、これらの方法でヒト
血清叉は血漿中の１，５−ＡＧの測定を行なった場合、
血清あるいは血漿の採取から測定までの保存期間により
測定値が異なり、時間の経過とともに測定値が上昇し、
又、グルコース量が多いほど測定値が大きくなる傾向が
あり、大きな問題点となっている。

【００１０】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、汎用の自
動分析装置にも応用可能な方法で前述した問題点を解決
する方法を検討し、本発明を完成した。即ち本発明は、
（１）試料中の１，５−アンヒドログルシトールをピラ
ノースオキシダーゼまたはＬ−ソルボースオキシダーゼ
を用いて測定する際に、試料中のグルコースを予めピラ
ノースオキシダーゼまたはＬ−ソルボースオキシダーゼ
と反応しない化合物にｐＨ７未満の条件下で酵素変換す
ることを特徴とする１，５−アンヒドログルシトールの
定量法、

【００１１】（２）試料中の１，５−アンヒドログルシ
トールをピラノースオキシダーゼまたはＬ−ソルボース
オキシダーゼを用いて測定する際に、試料に酸性物質を
加えて試料のｐＨを７未満にした後試料中のグルコース
をピラノースオキシダーゼまたはＬ−ソルボースオキシ
ダーゼと反応しない化合物に予め酵素変換することを特
徴とする１，５−アンヒドログルシトールの定量法、に
関する。

【００１２】以下、本発明の１，５−ＡＧ定量法につい
て詳細に説明する。本発明においては、試料中のグルコ
ースをピラノースオキシダーゼまたはＬ−ソルボースオ
キシダーゼと反応しない化合物に変換する際あるいは変
換する前に試料を酸性（ｐＨ７未満）にして変換を行な
う。本発明者らは、標準の試料では試料の経時変化がな
いのに、血清等蛋白を含む試料を用いた場合に経時的、
グルコース量依存的に干渉が起こる現象を見いだし、そ
の原因の推定を行い、その解決策を見いだした。

【００１３】１，５−ＡＧを含まない試料として牛血清
アルブミンにグルコース１００００mg/Lを加えた試料
を、１，５−ＡＧとグルコース（１００００mg/L）の標
準試料では正確な定量が可能な方法で測定したところ、
測定値は１〜１０mg/Lの間でバラツキの大きい定量値が
得られた。そこで、この時の試料のｐＨを種々変えたと
ころ、酸性サイドで低い定量値、アルカリサイドで高い
定量値となった。試料として用いた牛血清アルブミンは
１，５−ＡＧを全く含んでいないので、この定量値はグ
ルコースを測定したものと推定される。

【００１４】また、イオン交換樹脂を充填したカラムを
用いてグルコース及び蛋白を除去する方法（ラナＡＧ
（アンヒドログルシトール）キット（日本化薬（株）
製））で測定すると、その測定値はいずれもほとんど０
mg/Lであった。従って、この測定値を上げる物質はカラ
ム処理によって除去出来ることが分かった。

【００１５】上記のように、血清等蛋白を含む試料を用
いた場合に測定値にバラツキが生じる原因は、蛋白とグ
ルコースが可逆的に結合し、グルコースの酵素変換反応
中に酵素の作用を受けず、１，５−ＡＧの定量反応中に
一部がグルコースを解離し、発色定量されたものと考え
られる。この蛋白とグルコースの可逆的な結合は蛋白の
リジン側鎖のアミノ基、あるいは蛋白のアミノ末端のア
ミノ基とグルコースのアルデヒド基とのシッフ塩基結合
が推定される。シッフ塩基はアルカリ性で生成の方に平
衡が大きくなり、酸性では逆の方向に平衡がずれること
が知られている。

【００１６】従って、蛋白とグルコースはｐＨの高い条
件では、シッフ塩基の結合を生成し、グルコースの変換
消去反応の際に反応を受けず、１，５−ＡＧの定量反応
で再び生成してくるので測定値が上昇するものと思われ
る。一方、血清、血漿等は放置によってｐＨが上昇する
ことが知られている。このことから血清等の試料の１，
５−ＡＧ測定値は、経時的に上昇し、又、グルコース量
に応じて上昇してくることとなる。

【００１７】本発明では、血清、血漿等の試料中のグル
コース変換反応中のｐＨが低い条件となっているため、
あるいは、試料に酸を加えてｐＨを下げているため、シ
ッフ塩基の結合は解離し蛋白とグルコースに分かれるの
で、グルコース変換反応が完全に進行し、１，５−ＡＧ
を正確に測定する事ができる。

【００１８】本発明の前記（１）の定量法において、グ
ルコース変換反応中のｐＨの範囲は７未満であるが好ま
しくは５、５〜６、５の範囲である。この場合、ｐＨを
コントロールする物質としては、単なる酸を用いるより
も、緩衝作用のあるものを用いるのが好ましく、例え
ば、燐酸緩衝液、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、コハク
酸緩衝液、グッドの緩衝液（例えば、ＭＥＳ、Ｂｉｓ−
Ｔｒｉｓ、ＡＤＡ、ＰＩＰＥＳ、ＡＣＥＳ、ＭＯＰＳ
Ｏ、ＭＯＰＳ等）等が挙げられるが、ｐＨ７未満の範囲
で緩衝作用のあるものなら特に限定されない。その濃度
も通常使われている５〜２００ｍＭ程度の範囲が好まし
い。

【００１９】本発明の前記（２）の定量法において、試
料のｐＨを下げる場合の試料のｐＨの範囲は７未満であ
るが好ましくは２〜６の範囲である。ｐＨを下げるため
に用いる酸性物質は、特に限定されないが、例えば、塩
酸、硫酸、燐酸等の無機酸、酢酸、プロピオン酸、クエ
ン酸、リンゴ酸、酒石酸、コハク酸、マレイン酸等の有
機酸を使うことが可能であるが、グルコース変換酵素
類、１，５−ＡＧ酸化酵素あるいはペルオキシダーゼ等
の酵素阻害の起こるイオンを持つ酸性物質は使用できな
い。

【００２０】本発明において、グルコース変換反応は公
知の方法に従って行なうことができ、特に限定されない
が、グルコース６位リン酸化酵素（グルコキナーゼ叉は
ヘキソキナーゼ）とＡＴＰ（アデノシン三リン酸）を用
いて、グルコース−６−リン酸に変換する方法が好まし
い。また、この反応を完全に進行させるため、ＡＴＰを
別な酵素と基質を用いてＡＤＰから再生させる工夫、あ
るいは生成物であるグルコース−６−リン酸をさらに別
酵素を用いて６ーホスフォグルコノラクトン、あるいは
フルクトース−６−リン酸さらにフルクトース−２，６
二リン酸に変換する工夫等がなされているがいずれの方
法も採用することができる。

【００２１】これらの反応は通常５〜４０℃で行われる
が、自動測定機では３７℃で行われることが多い。反応
時間は反応温度との関係で１分〜１時間程度であり、自
動測定機では３〜１０分が採用されている。

【００２２】上記反応により試料中のグルコースを消去
した後、１，５−ＡＧをピラノースオキシダーゼ叉はＬ
−ソルボースオキシダーゼを用いて定量する。この１，
５−ＡＧの定量法は公知であり、特開平３−２４２００
号、特開昭６３−１８５３９７号、特開平１−３２０９
９８号公報等に記載された方法に従って行うことができ
る。

【００２３】例えば、上記反応により試料中のグルコー
スを消去した後、これに酸素等の電子受容体、及び、ピ
ラノースオキシダーゼ叉はＬ−ソルボースオキシダーゼ
を添加し、４〜５０℃好ましくは２５〜４０℃で、３０
秒〜３時間、好ましくは２分〜１時間インキュベート
し、次いで生成する過酸化水素等の電子受容体の還元体
等を測定し、別に作製した検量線から１，５−ＡＧ量を
求めれば良い。

【００２４】この１，５−ＡＧ測定反応はグルコース消
去反応に引き続いて行われるので、反応温度はそのまま
の条件がとられることが多い。反応時間は１分〜１時間
程度であるが、発色強度と測定方法との関係から選択さ
れ、自動測定機では３〜１５分が採用されている。

【００２５】ピラノースオキシダーゼ及びＬ−ソルボー
スオキシダーゼはＩＵＰＡＣ−ＩＵＢの命名法でそれぞ
れＥＣ１．１．３．１０及びＥＣ１．１．３．１１に分
類しうるものであれば、特に制限はなく、市販のものを
使用しうる。これら酵素は、通常０．５〜５００Ｕ／mL
好ましくは１〜５０Ｕ／mL使用される。

【００２６】具体例を示すとつぎのとおりである。例え
ば、電子受容体の還元体が過酸化水素の場合、過酸化水
素を検出する方法としては、高感度に検出できる方法で
あればいずれであっても良く、数多くの方法が利用でき
る。これらのうちで最も一般的に用いられている方法
は、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）を
触媒酵素として、各種のＨＲＰ基質を過酸化水素で酸化
するものであり、酸化反応の結果生成した色素、ケイ光
物質や化学発光をそれぞれ吸光度測定、ケイ光測定及び
発光測定すれば良い。

【００２７】色素を生成するＨＲＰの基質としては２，
２’−アジノビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−
スルホン酸）（ＡＢＴＳ）、ｏ−フェニレンジアミン
（ＯＰＤ）、５−アミノサリチル酸（５−ＡＳ）、３，
３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）、
Ｎ−（カルボキシメチルアミノカルボニル）−４，４’
−ビス（ジメチルアミノ）−ジフェニルアミンナトリウ
ム塩（ＤＡ−６４）、４−アミノアンチピリンとフェノ
ール類、Ｎ−エチル−Ｎ−スルホプロピル−ｍ−トルイ
ジンあるいはＮ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−
スルホプロピル）−ｍ−トルイジン（ＴＯＯＳ）等の組
み合わせによるいわゆるトリンダー系発色剤などがあ
る。ケイ光物質を生成するＨＲＰの基質としては、ｐ−
ヒドロキシフェニル酢酸、３−（ｐ−ヒドロキシフェニ
ル）プロピオン酸（ＨＰＰＡ）などがある。また、化学
発光するＨＲＰの基質としては、ルミノール、イソルミ
ノールなどが知られている。

【００２６】ＨＲＰなしに化学発光で検出する方法もい
くつか知られている。たとえば、フェリシアンイオン存
在下に過酸化水素でルミノールを発光させる方法、金属
イオン存在下に過酸化水素でルシゲニンを発光させる方
法、ビス（２，４，６−トリクロルフェニル）オギザレ
ートの様なアリルシュウ酸エステル類の化合物をケイ光
物質存在下に過酸化水素と反応させ、シュウ酸エステル
の分解エネルギーでケイ光物質を励起させ発光させる方
法などが知られている。さらに過酸化水素を直接検出す
る方法として、過酸化水素電極を用いても良い。

【００２７】また、本発明で用いられる試料としては種
々のものが使用でき、１，５−ＡＧを定量したいものな
らとくに制限はなく、例えば髄液、血漿、血清、尿等の
体液や植物、動物組織などの抽出物および、それらの除
蛋白物が挙げられる。

【００２８】本発明によれば、試料中のグルコース変換
反応中のｐＨを７未満の酸性の条件下で行うこと、また
は、試料のｐＨを酸性物質を用いて下げることで、グル
コースと蛋白の可逆的な結合を解離の方向にずらしてグ
ルコースを変換するので、ピラノースオキシダーゼ叉は
Ｌ−ソルボースオキシダーゼを用いた１，５−ＡＧの測
定中にグルコースが蛋白から解離して測定値を押し上げ
ることが少なくなるため、正確な１，５−ＡＧ測定値を
得ることが出来る。従って、本発明によれば、試料を保
存しても、採取後すぐに測定してもその測定値に変化は
なく、１，５−ＡＧの定量を高い精度で行うことができ
る。

【００２９】

【実施例】以下、比較例及び実施例により本発明を具体
的に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるも
のではない。

【００３０】以下、比較例、実施例ともに次の血清（検
体）を試料として用いた。 １，５−ＡＧ濃度（mg/L) グルコース濃度（mg/L) 検体Ａ ２８．４ ８２０ 検体Ｂ １４．５ １２５０ 検体Ｃ ４．６ ３１２０ （１，５−ＡＧ濃度はラナＡＧ（アンヒドログルシトー
ル）キット（日本化薬（株）製）にて測定した。）

【００３１】これらは、血清分離後プラスチック製サン
プルチューブに分注し、−２０℃で凍結保存し、使用時
に解凍し、新鮮試料とした。また、分注した各血清を冷
蔵庫に１ヶ月間保存したものを保存試料とし、それぞ
れ、検体Ｄ、検体Ｅ、検体Ｆとして使用した。また、測
定は自動分析装置７１５０型（（株）日立製作所製）を
用い、検体量１０μｌとし、これに試薬１を２６０μｌ
加え３７℃で５分間処理し、次いで試薬２を１３０μｌ
加え３７℃で５分間処理し測定した。検量線には、１，
５−ＡＧ濃度５０ｍｇ／Ｌの標準液及び生理食塩液
（１，５−ＡＧ濃度０ｍｇ／Ｌ）を用いた。

【００３２】比較例１ 以下の試薬を調製し検体Ａ〜Ｆを測定した。その結果を
表１に示す。なお、検体を試薬１で処理している際の系
のｐＨは、いずれも約８であった。 試薬１（ｐＨ８．０） ４−アミノアンチピリン １．５ｍＭ ＭｇＣｌ₂ ５ｍＭ ＫＣｌ ５０ｍＭ ＡＴＰ ５ｍＭ グルコキナーゼ ２Ｕ／mL アスコルビン酸オキシダーゼ ５Ｕ／mL ピルビン酸キナーゼ ３Ｕ／mL ホスフォエノールピルビン酸 ４ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液 ５０ｍＭ

【００３３】 試薬２（ｐＨ８．０） ＴＯＯＳ ４．５ｍＭ ピラノースオキシダーゼ １００Ｕ／mL ＨＲＰ ３．７５Ｕ／mL ＨＥＰＥＳ緩衝液 ５０ｍＭ

【００３４】比較例２ 以下の試薬を調製し検体Ａ〜Ｆを測定した。その結果を
表１に示す。なお、検体を試薬１で処理している際の系
のｐＨは、いずれも約８であった。 試薬１（ｐＨ８．０） ４−アミノアンチピリン １．５ｍＭ ＭｇＣｌ₂ ５ｍＭ ＫＣｌ ５０ｍＭ ＡＴＰ ５ｍＭ グルコキナーゼ ２Ｕ／mL アスコルビン酸オキシダーゼ ５Ｕ／mL グルコース−６−リン酸脱水素酵素 １２Ｕ／mL 乳酸脱水素酵素 ２Ｕ／mL ピルビン酸 ２ｍＭ ＮＡＤ １ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液 ５０ｍＭ

【００３５】 試薬２（ｐＨ８．０） ＴＯＯＳ ４．５ｍＭ ピラノースオキシダーゼ １００Ｕ／mL ＨＲＰ ３．７５Ｕ／mL ＨＥＰＥＳ緩衝液 ５０ｍＭ

【００３６】比較例３ 以下の試薬を調製し検体Ａ〜Ｆを測定した。その結果を
表１に示す。なお、検体を試薬１で処理している際の系
のｐＨは、いずれも約８であった。 試薬１（ｐＨ８．０） ４−アミノアンチピリン １．５ｍＭ ＭｇＣｌ₂ １０ｍＭ ＫＣｌ ２５ｍＭ ＫＨ₂ ＰＯ₄ ４０ｍＭ ＣａＣｌ₂ １．５ｍＭ ＡＴＰ １５ｍＭ グルコキナーゼ ３．５Ｕ／mL アスコルビン酸オキシダーゼ ５Ｕ／mL グルコースリン酸イソメラーゼ ３．５Ｕ／mL ６−ホスフォフルクトキナーゼ ５Ｕ／mL ピルビン酸キナーゼ ３Ｕ／mL ホスフォエノールピルビン酸 ４ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液 ２０ｍＭ

【００３７】 試薬２（ｐＨ８．０） ＴＯＯＳ ４．５ｍＭ ピラノースオキシダーゼ １００Ｕ／mL ＨＲＰ ３．７５Ｕ／mL ＨＥＰＥＳ緩衝液 ５０ｍＭ

【００３８】

【表１】 表１ 比較例１ 比較例２ 比較例３ 検体Ａ ２８．３ ２８．５ ２８．４ 検体Ｂ １４．６ １４．６ １４．４ 検体Ｃ ４．８ ４．６ ４．５ 検体Ｄ ２９．５ ３０．１ ２９．３ 検体Ｅ １６．２ １６．４ １６．９ 検体Ｆ ９．８ ９．２ １０．１ （１，５−ＡＧ濃度、ｍｇ／Ｌ）

【００３９】実施例１ 比較例１の試薬１の緩衝液をＭＥＳ緩衝液５０ｍＭと
し、試薬１のｐＨを６．３に調整した。他は比較例１と
同様にして測定した。その結果を表２に示す。なお、検
体を試薬１で処理している際の系のｐＨはいずれも約
６．３であった。

【００４０】実施例２ 比較例２の試薬１の緩衝液をＭＥＳ緩衝液５０ｍＭと
し、試薬１のｐＨを６．０に調整した。他は比較例２と
同様にして測定した。その結果を表２に示す。なお、検
体を試薬１で処理している際の系のｐＨはいずれも約６
であった。

【００４１】実施例３ 比較例１の試薬１の緩衝液をＭＥＳ緩衝液２０ｍＭと
し、試薬１のｐＨを５．８に調整した。他は比較例１と
同様にして測定した。その結果を表２に示す。なお、検
体を試薬１で処理している際の系のｐＨはいずれも約
５．８であった。

【００４２】

【表２】 表２ 実施例１ 実施例２ 実施例３ 検体Ａ ２８．４ ２８．５ ２８．６ 検体Ｂ １４．６ １４．７ １４．４ 検体Ｃ ４．７ ４．９ ４．７ 検体Ｄ ２８．４ ２８．２ ２８．３ 検体Ｅ １４．５ １４．６ １４．６ 検体Ｆ ５．０ ４．６ ４．８ （１，５−ＡＧ濃度、ｍｇ／Ｌ）

【００４３】実施例４〜６ 比較例１〜３で用いた検体Ａ〜Ｆ０．５ｍｌのそれぞれ
に１０％酢酸水溶液５０μｌを添加しそれぞれｐＨを
４．２〜４．５としたものを試料とし、比較例１〜３で
使用した試薬を用いて測定した。また、検量線に用いた
１，５−ＡＧ濃度５０ｍｇ／Ｌの標準液および生理食塩
液も同様に処理した。その測定結果を表３に示す。

【００４４】

【表３】 表３ 実施例４ 実施例５ 実施例６ 検体Ａ ２８．５ ２８．５ ２８．６ 検体Ｂ １４．５ １４．８ １４．４ 検体Ｃ ４．７ ４．９ ４．８ 検体Ｄ ２８．４ ２８．６ ２８．７ 検体Ｅ １４．５ １４．７ １４．６ 検体Ｆ ４．９ ４．７ ４．９ （１，５−ＡＧ濃度、ｍｇ／Ｌ）

【００４５】実施例７〜９ 実施例４〜６と同様にして検体Ａ〜Ｆ０．５ｍｌのそれ
ぞれに１０％リンゴ酸水溶液５０μｌを添加しそれぞれ
ｐＨを３．７〜４．０としたものを試料とし、実施例４
〜６と同様にして測定した。その測定結果を表４に示
す。

【００４６】

【表４】 表４ 実施例７ 実施例８ 実施例９ 検体Ａ ２８．５ ２８．６ ２８．９ 検体Ｂ １４．６ １４．８ １４．８ 検体Ｃ ４．７ ４．９ ４．８ 検体Ｄ ２８．５ ２８．４ ２８．３ 検体Ｅ １４．５ １４．８ １４．６ 検体Ｆ ４．８ ４．９ ５．８ （１，５−ＡＧ濃度、ｍｇ／Ｌ）

【００４７】

【発明の効果】本発明によれば試料の保存状態の違いに
関わらず、試料中の１，５−ＡＧを迅速で簡便な方法に
より精度良く定量する事ができ、自動分析装置での測定
が可能である。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】試料中の１，５−アンヒドログルシトール
   をピラノースオキシダーゼまたはＬ−ソルボースオキシ
   ダーゼを用いて測定する際に、試料中のグルコースを予
   めピラノースオキシダーゼまたはＬ−ソルボースオキシ
   ダーゼと反応しない化合物にｐＨ７未満の条件下で酵素
   変換することを特徴とする１，５−アンヒドログルシト
   ールの定量法。
2. 【請求項２】試料中の１，５−アンヒドログルシトール
   をピラノースオキシダーゼまたはＬ−ソルボースオキシ
   ダーゼを用いて測定する際に、試料に酸性物質を加えて
   試料のｐＨを７未満にした後試料中のグルコースをピラ
   ノースオキシダーゼまたはＬ−ソルボースオキシダーゼ
   と反応しない化合物に予め酵素変換することを特徴とす
   る１，５−アンヒドログルシトールの定量法。