JPH0634814B2

JPH0634814B2 - 硝子体適用剤

Info

Publication number: JPH0634814B2
Application number: JP60008512A
Authority: JP
Inventors: 勝清桜井; 義夫上野
Original assignee: Seikagaku Corp
Current assignee: Seikagaku Corp
Priority date: 1985-01-22
Filing date: 1985-01-22
Publication date: 1994-05-11
Anticipated expiration: 2009-05-11
Also published as: JPS61168362A

Description

【発明の詳細な説明】［産業上の利用分野］本発明は、硝子体適用剤に関し、更に詳しくは、通常の
強膜側からの手術操作では、復位の得られにくい難治性
網膜剥離症に対し、眼球内部からのタンポン（tamponad
e）として適用可能な硝子体適用剤に関するものであ
る。

［従来技術及びその問題点］通常の強膜側からの手術操作では復位の得られにくい難
治性網膜剥離症の治療法として、網膜と脈絡膜との間に
癒着瘢痕形成が生じるまでの期間眼球内よりタンポン処
理を施す方法がある。このタンポンの有用な素材として
は、安全性が高く眼内滞留時間の長いことが必要であ
る。現在注目されているものとしては、シリコンオイ
ル、六フッ化イオウ（SF₆）及びフレオンガスなどがあ
る。

しかし、シリコンオイルの安全性はまだ確立されておら
ず、六フッ化イオウやフレオンのような気体を用いた場
合は白内障を発生させることがある。更に、シリコンオ
イルや気体は比重が小さいため術後の伏臥位（free dow
n position）を厳守させる必要があり、患者の苦痛も少
なくなかった。そのため、以上の欠点を補うより安全で
有効な人工硝子体の開発が望まれている。

また、硝子体の成分である高分子量のヒアルロン酸（以
下「HA」という）は、より理想的な素材といえるが、ヒ
アルロニダーゼ等による劣化分解が早いため、比較的吸
収の早いフレオンガス等と同程度の効果しか期待できな
い。

そこで、本発明者らは、安全性が高く、かつ、ヒアルロ
ニダーゼ等の組織酵素に対して抵抗性を示し、しかも適
用に際し、伏臥位をとらせる必要のない硝子体適用剤を
得ることを目的として鋭意研究を重ねた結果、素材とし
て架橋グリコサミノグリカン（以下「架橋GAG」とい
う）を用いることにより本発明の目的を達成できること
を見出し、本発明を完成するに至った。

［発明の構成］本発明の硝子体適用剤は、架橋GAGからなることを特徴
とするものである。

本発明に用いる架橋GAGとしては、HA、コンドロイチン
硫酸（以下「ChS」という）（A,B,C,D,E,F,H）、ヘパリ
ン（以下「Hep」という）、ヘパラン硫酸（以下「HS」
という）、ケラタン硫酸（以下「KS」という）及びケラ
タンポリ硫酸（以下「KPS」という）等のグリコサミノ
グリカン（以下「GAG」という）又はその塩、好ましく
はHA若しくはChS又はそれらの塩を、適当な架橋剤で架
橋させてなるものであって、水溶性のものであれば如何
なるものでもよいが、このうち、高粘度のもの、例えば
架橋HAにおいては、１％生理食塩水溶液における粘度
（20℃，ずり速度1sec^-1）が1000〜60000センチポアー
ズのものが好ましく、架橋ChSにおいては、10％生理食
塩水溶液における粘度（20℃、ずり速度1sec^-1）が1000
〜80000センチポアーズのものが好ましい。

好ましい架橋剤としては、例えば、多官能性エポキシ化
合物が挙げられる。

ここで、多官能性エポキシ化合物とは、エポキシ基を少
なくとも１個有する化合物であって、その他に、エポキ
シ基を含めて、GAGを架橋するに適した官能基を１個以
上有する化合物をいう。

かかる化合物としては、例えば、ハロメチルオキシラン
化合物及びビスエポキシ化合物などが挙げられる。ハロ
メチルオキシラン化合物としては、エピクロルヒドリ
ン、エピブロムヒドリン、β−メチルエピクロルヒドリ
ン及びβ−メチルエピブロムヒドリンなどが挙げられ
る。ビスエポキシ化合物としては、1,2-ビス（2,3-エポ
キシプロポキシ）エタン、1,4-ビス（2,3-エポキシプロ
ポキシ）ブタン、1,6-ビス（2,3-エポキシプロポキシ）
ヘキサン及びビスフェノールＡ又はビスフェノールＦの
ジグリシジルエーテルなどが挙げられる。

本発明の用いる架橋GAGのうち、架橋剤として多官能性
エポキシ化合物を用いたもの及びその製造法は、特願昭
59-88440号及び同59-132885号明細書に詳述されてい
る。

通常、GAG又はその塩を、0.5％以上、好ましくは、1,0
％以上の濃度に、アルカリ水溶液に溶解し、水溶性有機
溶剤を全液量の30％以上、好ましくは50％以上になるよ
うに加える。アルカリ水溶液は、pH８〜14であることが
好ましく、pH12〜14であることが更に好ましい。アルカ
リとしては、通常、水酸化ナトリウム、水酸化カリウ
ム、水酸化カルシウムなどの金属水酸化物及び炭酸ナト
リウム、炭酸カリウムなどの金属炭酸塩等が挙げられ
る。水溶性有機溶剤としては、メタノール、エタノー
ル、イソプロパノール、アセトン、ジオキサンなどが挙
げられ、これらは、単独で又は混合物として用いられ
る。これらの水溶性有機溶剤を加えることにより反応を
有効に行なうことができ、また、アルカリによるGAGの
分解（低分子化）も抑制することができる。

次いで、得られた溶液に、前記多官能性エポキシ化合物
の１種以上を加え、０〜100℃、好ましくは10〜60℃、
更に好ましくは20〜40℃で反応させる。反応時間は、反
応温度により異なるが、20℃近辺では24〜48時間の好ま
しく、40℃近辺では２〜３時間が好ましい。

また、本発明に用いる架橋GAGは、次のようにしても調
製することができる。

即ち、GAG又はその塩の前記アルカリ溶液に前記水溶性
有機溶剤を加えて、得られる水アメ状沈殿物を分取し、
該沈殿物に多官能性エポキシ化合物を加えて、50℃以下
で反応させると非常に効率的に反応を行なうことができ
る。水アメ状沈殿物を分取するには、例えば、デカンテ
ーションにより上清を除去すればよい。反応温度は、通
常10〜50℃で、最も好ましいのは20〜40℃である。温度
が高い程、短時間で反応を終了させる必要がある。一般
的には、40℃近辺では２時間程度が、20℃近辺では24〜
48時間が好ましい。

架橋GAGの調製において、GAG又はその塩と多官能性エポ
キシ化合物とのモル比、即ち架橋度を変えることによ
り、得られる架橋GAG又はその塩の溶解性及び粘度を調
節することができる。

分子量100万前後のHAにおいては、HAの繰り返し二糖１
モルに対する多官能性エポキシ化合物の使用モル数を１
〜10モルにすれば、水溶性で１％生理食塩水溶液におけ
る粘度（20℃，ずり速度1sec^-1）が1000〜60000センチ
ポアーズの架橋HAを得ることができる。

架橋GAGの硝子体への注入に際しては、架橋GAGを、通
常、生理食塩水に溶解し、注射針を通過できる粘度、即
ち50000センチポアーズ（20℃，ずり速度1sec^-1）以
下、好ましくは5000〜30000センチポアーズ（20℃，ず
り速度1sec^-1）にして用いる。注入は、例えば、シリコ
ンオイルの双眼倒像検眼鏡下注入法（Scott法）(Scot
t，J.D.;Trans.Ophthalmol.Soc.U.K.,93,417(1973))に
準じて行なう。

［発明の効果］本発明によれば、安全性が高く、かつ、ヒアルロニダー
ゼ等の組織酵素に対して抵抗性を示し、しかも適用に際
し、伏臥位をとらせる必要のない硝子体適用剤を提供す
ることができる。かかる本発明の硝子体適用剤は、復位
の得られにくい難治性網膜剥離症、即ち、増殖性硝子体
網膜症を伴う網膜剥離、巨大裂孔を伴う網膜剥離、増殖
性牽引性網膜剥離、糖尿病性網膜症に合併した裂孔原性
網膜剥離の治療剤として有用である。

［発明の実施例］以下、調製例、試験例及び実施例により本発明を更に詳
細に説明するが、これらは、本発明の範囲を何ら制限す
るものではない。

調製例１架橋HAの調製（１）HAナトリウム塩（分子量730000）５ｇを1N水酸化
ナトリウム水溶液に２％になるように溶解した後、0.22
μｍの膜で除菌し、エタノール250ｍ及びエピクロル
ヒドリン3.75ｍを加え、20℃で８時間反応させた。酢
酸を加えて反応液のpHを6.0とした後、エタノール3000
ｍを加えて沈殿させ、架橋HA（以下「架橋HA-1」とい
う）を調製した。

（２）架橋剤であるエピクロルヒドリンの量を変える以
外は、（１）と同様に処理して、表１に示す３種の架橋
HAを調製した。

これらの３種の架橋HA及び合成に使用したHAナトリウム
塩を、それぞれ、0.1M酢酸（pH5.0）に１％の濃度に溶
解し、測定（20℃，ずり速度1sec^-1）したところ、次の
とおりであった。

架橋HA-2 45000センチポアーズ架橋HA-3 27000センチポアーズ架橋HA-4 8000センチポアーズ HAナトリウム塩 1500センチポアーズこれらの溶液に0.09重量％になるように牛睾丸ヒアルロ
ニダーゼを加え50℃で反応させ、15、35、55、70分後に粘
度を測定し、反応前の粘度に対する割合を算出した。

結果を図に示す。図において、□印、△印、○印及び●
印は、それぞれ、架橋HA-2、３、４及びHAナトリウム塩
の酢酸溶液の各反応時間における反応前の粘度に対する
割合を表わす。

図から、本発明に用いる架橋HAは、HAに比し、ヒアルロ
ニダーゼに対する抵抗性が高く、その程度は、架橋度が
高いほど顕著であることがわかる。

調製例２架橋ChSの調製 ChS-Cナトリウム塩（分子量53000)3.1ｇを0.75N水酸化
ナトリウム水溶液に12.5％になるように溶解し、攪拌
下、エタノール１容量を加え、生じたアメ状沈殿物を分
取した。このアメ状沈殿物にエピクロルヒドリン0.18ｍ
を加えて充分に練り合わせ、20℃で24時間放置した。
反応液に水30ｍを加えて溶解し、酢酸でpH6.0とし
て、エタノール沈殿を行なった。再度、水に溶解し、エ
タノール沈殿を行ない減圧乾燥し、架橋ChS-C（以下
「架橋ChS」という）を調製した。

試験例１架橋HAの架橋度と粘度との関係分子量370000及び730000のHAナトリウム塩100mgを、そ
れぞれ、1N水酸化ナトリウム5.0ｍに溶解した溶液
に、エタノール５ｍとエピクロルヒドリン、それぞ
れ、25、50、100、200μとを加え、40℃で２時間反応
した。反応後は調製例１（１）に準じて後処理を行なっ
た。

また、分子量1700000のHAナトリウム塩75mgを1N水酸化
ナトリウム7.5ｍに溶解した溶液にエタノール7.5ｍ
とエピクロルヒドリン40μ又は80μとを加え、40℃
で２時間反応した。更に、上記反応と同時に同じ条件で
［2-¹⁴Ｃ］エピクロルヒドリン（アマシャム・ジャパン
社から入手）を用いて反応を行ない、この標識化合物の
放射活性から架橋度を算出した。架橋度と粘度との関係
を表２に示す。

表２から、架橋HAにおいては、架橋度と粘度とが比例関
係にあることがわかる。

試験例２急性毒性試験４週令のddY系雄性マウスを１週間予備飼育した。試験
開始時における実験に用いたマウスの体重は21〜27ｇで
あった。

前記マウスを各群15匹ずつに分け、それぞれについて架
橋HA-1の0.5％生理食塩水溶液１ｍ／10ｇ体重（架橋H
A-1500mg/Kg）、同１％生理食塩水溶液１ｍ／10ｇ体
重（架橋HA-1 1000mg/Kg）又は生理食塩水１／10ｇ体
重を腹腔内投与した。

Irwin法に準じて毎日同時刻に一般症状を観察した。投
与後７日目に各群５匹ずつを屠殺し、14日目に残りの生
存マウスを屠殺し、投与部位及び主要臓器の肉眼的観察
を行なった。その結果を以下に示す。

(i)各群とも死亡例はなかった。

(ii)500mg/Kg投与群、1000mg/Kg投与群、対照群とも一
般症状、体重変化、摂取量、摂水量に差はなかった。

(iii)７日目、14日目の剖検では対照群と500mg/Kg投与
群に差はなかったが、1000mg/Kg投与群についてのみ７
日目、14日目とも腹腔内残留液のウロン酸が対照群より
も多く、14日目で3.6〜3.8mg/mの架橋HA-1が残留して
いると推定された。

(iv)各群とも臓器への影響は殆どなかった。

実施例１架橋HAによる硝子体置換と復位率の
測定架橋HA-1の１％生理食塩水溶液を用いて以下の実験を行
なった。

皮質硝子体をピンセット（眼科用鉗子）で牽引し実験的
に網膜剥離を起こさせた家兎10羽（体重３ｋｇ）の右眼
強膜に排出孔をつくり、網膜下液を排除しつつ、毛様体
扁平部に一カ所切開創をつくり、双眼倒像検眼鏡観察下
に、架橋HA注入針を水晶体後方まで進めて架橋HA-1をゆ
っくりと注入した。網膜下液が排除され網膜の復位が得
られたならば、注入針と排液針を抜去し、互いに反対の
孔から排除、注入を繰り返し、できるだけ硝子体腔の全
体を架橋HA-1で置換した。

10日目に眼底カメラで復位の状態を観察した。その結
果、７羽については網膜剥離が完全に治癒していること
が観察された（復位率70％）。

実施例２架橋ChSによる硝子体体置換と復位
率の測定架橋HA-1の１％生理食塩水溶液の代わりに、架橋ChSの1
0％生理食塩水溶液を用いる以外は、実施例１と同様の
実験を行なった。その結果、10羽の家兎のうち７羽につ
いて網膜剥離が完全に治癒していることが観察された
（復位率70％）。

【図面の簡単な説明】

図は、各種架橋HA及びHAをヒアルロニダーゼ処理したと
きの粘度低下と時間との関係を示す図である。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】架橋グリコサミノグリカンからなることを
特徴とする硝子体適用剤。