JPH0638752B2 - 醗酵法による２−ケト−ｌ−グロン酸の製造法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、Ｌ−アスコルビン酸合成の中間体として有用
な２−ケト−Ｌ−グロン酸の醗酵法による製造法に関す
る。

従来の技術 Ｌ−アスコルビン酸合成の中間体として有用な２−ケト
−Ｌ−グロン酸は、工業的に確立されたいわゆるライヒ
シュタイン法［ヘルベチカ・キミカ・アクタ（Helvetic
a Chimica Acta）第１７巻，311頁，（1934）］によ
って生産されてきた。しかし、この方法は工程数も多
く、多量の溶媒を必要とし現代の工業技術として満足す
べきものではない。また一方でライヒシュタイン法に代
わる方法として、主に微生物を使った方法がいくつか提
案されてきている。例えばグルコースを微生物的に酸化
して５−ケト−Ｄ−グルコン酸を生成せしめ、これを化
学的、または微生物的に還元してＬ−イドン酸とし、こ
れをまた微生物的に酸化して２−ケト−Ｌ−グロン酸を
得る方法［米国特許第2,421,611号］さらにはグルコー
スを微生物的に酸化して、２，５−ジケト−Ｄ−グルコ
ン酸とし、これをさらに微生物的、化学的に２−ケト−
Ｌ−グロン酸にする方法［特公昭３９−１４４９３，特
公昭５３−２５０３３，特公昭５６−１５８７７，特公
昭５９−３５９２０］が検討されてきた。

発明が解決しようとしている問題点 しかしこれらの方法に用いられる化学的還元工程即ち、
前者の５−ケト−Ｄ−グルコン酸のＬ−イドン酸への還
元と後者の２，５−ジケト−Ｄ−グルコン酸の２−ケト
−Ｌ−グロン酸への還元は立体特異性に問題があり、そ
れぞれ前者ではＤ−グルコン酸、後者では２−ケト−Ｄ
−グルコン酸を副生し収率の低下をきたす。また前記の
還元を微生物で行う場合は、還元エネルギー源として余
分の糖質を微生物に供給せねばならずやはり収率の低下
をもたらすものである。この点Ｌ−ソルボースを出発原
料とする場合は酸化工程のみで２−ケト−Ｌ−グロン酸
を製造することができる。事実この方法をとる試みがグ
ルコノバクター属，シュードモナス属，セラチア属アク
ロモバクター属およびアルカリゲネス属の細菌を用いて
なされている。［バイオテクノロジー・アンド・バイオ
エンジニアリング（Biotechnology and Bioengineeri
ng）第１４巻，７９９頁，（１９７２），特公昭４１−
１５９，特公昭４１−１６０，米国特許第3,043,749
号，特公昭４９−３９８３８，中国微生物学報，第２０
巻，第２４６頁（１９８０）および第２１巻，第１８５
頁（１９８１）］ しかしこれまでに公表された菌株の成績は充分な収率が
得られていず、工業的に利用されるには程遠いものであ
った。

問題点を解決するための手段 本発明者らは、この様な事情に鑑み、工業的に有利な２
−ケト−Ｌ−グロン酸の製造法につき種々研究を行った
結果、和歌山県の土壌資料から分離した細菌，Ｋ５９１
ｓ株，滋賀県の土壌資料から分離した細菌，１２−５
株，１２−１５株，１２−４株および２２−３株が従来
の知見を遥かに上廻る収率でＬ−ソルボースを２−ケト
−Ｌ−グロン酸に変換し、また分類学的研究の結果、こ
れまでに知られない新しい細菌であることを見い出し、
本発明を完成するにいたった。

すなわち、本発明は、(1)シュードグルコノバクター属
に属し、Ｌ−ソルボースを２−ケト−Ｌ−グロン酸に酸
化する能力を有する微生物またはその処理物を、Ｌ−ソ
ルボースに接触させて２−ケト−Ｌ−グロン酸を生成蓄
積せしめ、これを採取することを特徴とする２−ケト−
Ｌ−グロン酸の製造法および（２）シュードグルコノバ
クター属に属し、Ｌ−ソルボースを２−ケト−Ｌ−グロ
ン酸に酸化する能力を有する微生物またはその処理物
を、バチルス属，シュードモナス属，プロテウス属，シ
トロバクター属，エンテロバクター属，エルウィニア
属，キサントモナス属またはフラボバクテリウム属に属
する微生物のうち少なくとも一種の存在下、Ｌ−ソルボ
ースに接触させて２−ケト−Ｌ−グロン酸を生成蓄積せ
しめ、これを採取することを特徴とする２−ケト−Ｌ−
グロン酸の製造法である。

前記５菌株のうちＫ５９１ｓ，１２−５両菌株の分類学
的性状は次の通りである。

(a)形 態 （１）桿菌。細胞の大きさは０．３〜０．５×０．７〜
１．４μｍ。

（２）細胞の多形性は認められない。

（３）運動性を有し、２〜４本の極鞭毛を有する。

（４）胞子を形成しない。

（５）グラム陰性。

（６）非抗酸性。

(b)生育の状態 （１）肉汁寒天平板培養：殆ど生育しない。酵母エキス
添加肉汁寒天平板培養では円形，全縁，平滑，乳白色。

（２）酵母エキス添加肉汁寒天斜面：生育中程度，糸
状，平滑，乳白色。

（３）酵母エキス添加肉汁液体培養：生育中程度，培地
全体を均一に混濁する。

（４）肉汁ゼラチン穿刺培養：上部のみ微弱に生育。ゼ
ラチンは液化しない。

（５）リトマスミルク：酸性化する。凝固する。

(c)生理学的性質 （１）硝酸の還元は微弱であるが陽性。

（２）脱窒反応は認められない。

（３）メチルレッド（MR）テストは陽性。

（４）フォーゲス・プロスカウエル（VP）テストは陰
性。

（５）インドールを生成しない。

（６）硫化水素を生成しない。

（７）デンプンを加水分解しない。

（８）クエン酸の利用性は陰性。

（９）アンモニウム塩を利用する。

(10)色素の生成は認められない。

(11)ウレアーゼを生成する。

(12)オキシダーゼは陽性。

(13)カタラーゼは陽性。

(14)１６〜３６℃で生育し、至適生育温度は２４〜３４
℃。pH５．５〜８．７で生育し、至適生育pHは６．０〜
７．５。

(15)好気性。

(16)ヒュー・ライフソンのOFテストで糖の分解は酸化
的。

(17)Ｌ−アラビノース，Ｄ−キシロース，Ｄ−グルコー
ス，Ｄ−フラクトース，Ｄ−ガラクトース，Ｄ−マンノ
ース，麦芽糖，ショ糖，乳糖，トレハロース，Ｄ−マン
ニトール，グリセロールから酸を生成するが、ガスは生
成されない。

Ｄ−ソルビトール，イノシトール，デンプンから酸、ガ
スの生成は認められない。

(d)その他の性質 （１）エタノールから微弱ではあるが酢酸を生成する。

（２）ビオチン，チアミン，リボフラビンおよび補酵素
Ａ（以下ＣｏＡと称することもある）を生育に要求す
る。

（３）グリセロールからジハイドロオキシアセトンを生
成する。

（４）ＤＮＡのグアニン＋シトシン含量は６７±１モル
％。

（５）イソプレンユニット数１０のユビキノン（ＣｏＱ
₁₀）を有する。

（６）Ｌ−ソルボースから著量の２−ケト−Ｌ−グロン
酸を生成する。

（７）ストレプトマイシンに耐性を有する。

ついで１２−１５株の分類学的性状は以下の通りであ
る。

(a)形 態 （１）桿菌。細胞の大きさは０．３〜０．５×０．７〜
１．４μｍ。

（２）細胞の多形性は認められない。

（３）運動性を有し、２〜４本の極鞭毛を有する。

（４）胞子を形成しない。

（５）グラム陰性。

（６）非抗酸性。

(b)生育の状態 （１）肉汁寒天平板培養：殆ど生育しない。酵母エキス
添加肉汁寒天平板培養では円形，全縁，平滑，乳白色。

（２）酵母エキス添加肉汁寒天斜面：生育中程度，糸
状，平滑，乳白色。

（３）酵母エキス添加肉汁液体培養：生育中程度，培地
全体を均一に混濁する。

（４）肉汁ゼラチン穿刺培養：上部のみ微弱に生育。ゼ
ラチンは液化しない。

（５）リトマスミルク：酸性化するが凝固しない。

(c)生理学的性質 （１）硝酸の還元は陰性。

（２）脱窒反応は認められない。

（３）メチルレッド（MR）テストは陽性。

（４）フォーゲス・プロスカウエル（VP）テストは陰
性。

（５）インドールを生成しない。

（６）硫化水素を生成しない。

（７）デンプンを加水分解しない。

（８）クエン酸の利用性は陰性。

（９）アンモニウム塩を利用する。

(10)色素の生成は認められない。

(11)ウレアーゼを生成する。

(12)オキシダーゼは陽性。

(13)カタラーゼは陽性。

(14)２３〜３２℃で生育し、至適生育温度は２８〜３２
℃。pH６．０〜７．５で生育し、至適生育pHは６．５〜
７．１。

(15)好気性。

(16)ヒュー・ライフソンのOFテストで糖の分解は酸化
的。

(17)Ｌ−アラビノース，Ｄ−キシロース，Ｄ−グルコー
ス，Ｄ−フラクトース，Ｄ−ガラクトース，Ｄ−マンノ
ース，麦芽糖，ショ糖，乳糖，トレハロース，グリセロ
ールから酸を生成するが、ガスは生成されない。Ｄ−マ
ンニトール，Ｄ−ソルビトール，イノシトール，デンプ
ンから酸、ガスの生成は認められない。

(d)その他の性質 （１）エタノールから微弱ではあるが酢酸を生成する。

（２）ビオチン，チアミン，リボフラビンおよびＣｏＡ
を生育に要求する。

（３）グリセロールからジハイドロオキシアセトンを生
成する。

（４）ＤＮＡのグアニン＋シトシン含量は６７±１モル
％。

（５）イソプレンユニット数１０のユビキノン（ＣｏＱ
₁₀）を有する。

（６）Ｌ−ソルボースから著量の２−ケト−Ｌ−グロン
酸を生成する。

（７）ストレプトマイシンに耐性を有する。

また１２−４株の分類学的性状を記載すると次の通りで
ある。

(a)形 態 （１）桿菌。細胞の大きさは０．３〜０．５×０．７〜
１．４μｍ。

（２）細胞の多形性は認められない。

（３）運動性を有し、２〜４本の極鞭毛を有する。

（４）胞子を形成しない。

（５）グラム陰性。

（６）非抗酸性。

(b)生育の状態 （１）肉汁寒天平板培養：微少コロニーとしてのみ生育
し、充分な観察はできない。酵母エキス添加肉汁寒天平
板培養では円形，全縁，平滑，乳白色。

（２）酵母エキス添加肉汁寒天斜面：生育中程度，糸
状，平滑，乳白色。

（３）酵母エキス添加肉汁液体培養：生育中程度，培地
全体を均一に混濁する。

（４）肉汁ゼラチン穿刺培養：上部のみ微弱に生育。ゼ
ラチンは液化しない。

（５）リトマスミルク：酸性化するが凝固しない。

(c)生理学的性質 （１）硝酸の還元は陰性。

（２）脱窒反応は認められない。

（３）メチルレッド（MR）テストは陽性。

（４）フォーゲス・プロスカウエル（VP）テストは陰
性。

（５）インドールを生成しない。

（６）硫化水素を生成する。

（７）デンプンを加水分解しない。

（８）クエン酸の利用性は陰性。

（９）アンモニウム塩を利用する。

(10)色素の生成は認められない。

(11)ウレアーゼを生成する。

(12)オキシダーゼは陽性。

(13)カタラーゼは陽性。

(14)１６〜３６℃で生育し、至適生育温度は２４〜３４
℃。pH５．５〜８．２で生育し、至適生育pHは６．０〜
７．５。

(15)好気性。

(16)ヒュー・ライフソンのOFテストで糖の分解は酸化
的。

(17)Ｌ−アラビノース，Ｄ−キシロース，Ｄ−グルコー
ス，Ｄ−フラクトース，Ｄ−ガラクトース，Ｄ−マンノ
ース，麦芽糖，ショ糖，乳糖，トレハロース，グリセロ
ールから酸を生成するが、ガスは生成されない。Ｄ−マ
ンニトール，Ｄ−ソルビトール，イノシトール，デンプ
ンから酸、ガスの生成は認められない。

(d)その他の性質 （１）エタノールから微弱ではあるが酢酸を生成する。

（２）ビオチン，チアミンおよびリボフラビンとＣｏＡ
またはパントテン酸を生育に要求する。

（３）グリセロールからジハイドロオキシアセトンを生
成する。

（４）ＤＮＡのグアニン＋シトシン含量は６７±１モル
％。

（５）イソプレンユニット数１０のユビキノン（ＣｏＱ
₁₀）を有する。

（６）Ｌ−ソルボースから著量の２−ケト−Ｌ−グロン
酸を生成する。

（７）ストレプトマイシンに耐性を有する。

さらに２２−３株の分類学的性状は次の通りである。

(a)形 態 （１）桿菌。細胞の大きさは０．３〜０．５×０．７〜
１．４μｍ。

（２）細胞の多形性は認められない。

（３）運動性を有し、２〜４本の極鞭毛を有する。

（４）胞子を形成しない。

（５）グラム陰性。

（６）非抗酸性。

(b)生育の状態 （１）肉汁寒天平板培養：微少コロニーとしてのみ生育
し、充分な観察はできない。酵母エキス添加肉汁寒天平
板培養では円形，全縁，平滑，乳白色。

（２）酵母エキス添加肉汁寒天斜面：生育中程度，糸
状，平滑，乳白色。

（３）酵母エキス添加肉汁液体培養：生育中程度，培地
全体を均一に混濁する。

（４）肉汁ゼラチン穿刺培養：上部のみ微弱に生育。ゼ
ラチンは液化しない。

（５）リトマスミルク：酸性化するが凝固しない。

(c)生理学的性質 （１）硝酸の還元は微弱であるが陽性。

（２）脱窒反応は認められない。

（３）メチルレッド（MR）テストは陽性。

（４）フォーゲス・プロスカウエル（VP）テストは陰
性。

（５）インドールを生成しない。

（６）硫化水素を生成しない。

（７）デンプンを加水分解しない。

（８）クエン酸の利用性は陰性。

（９）アンモニウム塩を利用する。

(10)色素の生成は認められない。

(11)ウレアーゼを生成する。

(12)オキシダーゼは陽性。

(13)カタラーゼは陽性。

(14)１６〜３８℃で生育し、至適生育温度は２４〜３４
℃、pH５．５〜８．７で生育し、至適生育pHは６．０〜
７．８。

(15)好気性。

(16)ヒュー・ライフソンのOFテストで糖の分解は酸化
的。

(17)Ｌ−アラビノース，Ｄ−キシロース，Ｄ−グルコー
ス，Ｄ−フラクトース，Ｄ−ガラクトース，Ｄ−マンノ
ース，麦芽糖，ショ糖，乳糖，トレハロース，グリセロ
ールから酸を生成するが、ガスは生成されない。Ｄ−マ
ンニトール，Ｄ−ソルビトール，イノシトール，デンプ
ンから酸、ガスの生成は認められない。

(d)その他の性質 （１）エタノールから微弱ではあるが酢酸を生成する。

（２）ビオチン，チアミンおよびリボフラビンとＣｏＡ
またはパントテン酸を生育に要求する。

（３）グリセロールからハイドロオキシアセトンを生成
する。

（４）ＤＮＡのグアニン＋シトシン含量は６７±１モル
％。

（５）イソプレンユニット数１０のユビキノン（ＣｏＱ
₁₀）を有する。

（６）Ｌ−ソルボースから著量の２−ケト−Ｌ−グロン
酸を生成する。

（７）ストレプトマイシンに耐性を有する。

以上土壌分離細菌５株の分類学的諸性質を、バージーズ
・マニュアル・オブ・デタミネーティブ・バクテリオロ
ジー （Befgey′s manual of Determinative
Bacteriology）第８版（１９７４年）およびバージーズ
・マニュアル・オブ・システマティック・バクテリオロ
ジー（Ber-gey′s manual of Systematic Bacterio
logy）第１巻（１９８４年）に照合してみると、５菌株
即ち、Ｋ５９１ｓ株，１２−５株，１２−１５株，１２
−４株と22-3株は、グラム陰性，極鞭毛を有する運動性
桿菌で、好気性、オキシダーゼ陽性であることからシュ
ードモナス（Pseudomonas）属細菌種と一応は考えられ
る。生育因子を要求すること、ＤＮＡのグアニンとシト
シンとの総含量が６７±１モル％であること、キノン系
はイソプレンユニット数１０のユビキノンであることか
ら、この属のセクションIVのＲＮＡグループIVに属する
シュードモナス・ディミニュタ（Pseudomonas diminut
a），シュードモナス・ベシキユラリス（Pseudomonas
vesicularis）に類似している。しかしながらエタノー
ルから微弱ながらも酢酸を生成すること、グリセロール
からジハイドロオキシアセトンを生成することはシュー
ドモナス属菌の性質とは異なる。

これらの性質は、グルコノバクター（Glucono-bacter）
属菌種のそれである。しかしまたこれ等５菌株はオキシ
ダーゼテストが陽性であること、pH４．５では生育でき
ないこと，糖（力源）を含まない酵母エキス添加肉汁培
地またはペプトン−酵母エキス培地でよく生育出来るこ
と、ＤＮＡグアニンとシトシンとの総含量が６７±１モ
ル％であること等の性質はグルコノバクター属の菌種の
それとは異なる。

従って、これら５菌株即ち、Ｋ５９１ｓ株，１２−５
株，１２−１５株，１２−４株と２２−３株は既知の属
に該当するものを見い出だすことが出来ず新しい属の新
菌種とみなさざるを得ない。そこでＫ５９１ｓ株，１２
−５株，１２−１５株，１２−４株と２２−３株の５菌
株はシュードグルコノバクター・サッカロケトゲネス
（Pseudogluconobacter saccharoketogenes）と命名さ
れた。

ここでこれ等５菌株の栄養要求性について触れると、Ｋ
５９１ｓ株，１２−５株および１２−１５株はＣｏＡを
生育に要求する珍しい性質を有している。これら３株の
ＣｏＡ要求性はパントテン酸によって代替することは出
来ない。一方１２−４株と２２−３株はＣｏＡ存在下に
おいてもパントテン酸存在下においても生育出来る。

以下、これらのシュードグルコノバクター・サッカロケ
トゲネスを酸化菌と称することもある。

本発明に用いられる菌株は上記した５菌株は勿論のこ
と、例えば、５菌株を紫外線やＸ線照射したり、Ｎ−メ
チル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ニトロ
ソグアニジン），メチルメタンスルホン酸，ナイトロジ
エンマスタードの様な変異誘起剤で処理して得られる変
異株も有利に用いられる。その例としてシュードグルコ
ノバクター・サッカロケトゲネスＫ５９１ｓからニトロ
ソグアニジン処理によって誘導されたＴＨ１４−８６株
を挙げることができる。ＴＨ１４−８６株はＬ−ソルボ
ースから２−ケト−Ｌ−グロン酸生成能が増強されてい
る他は、親株であるＫ５９１ｓ株と同じ分類学的性質を
示した。

上記シュードグルコノバクター・サッカロケトゲネスＫ
５９１ｓ株，１２−５株およびＴＨ１４−８６株は、昭
和６０年（１９８５年）９月１９日に、シュードグルコ
ノバクター・サッカロケトゲネス１２−１５株，１２−
４株および２２−３株は、昭和６０年（１９８５年）１
２月１６日にＩＦＯ １４４６４，ＩＦＯ １４４６
５， ＩＦＯ １４４６６， ＩＦＯ １４４８２，
ＩＦＯ１４４８３，およびＩＦＯ１４４８４としてそれ
ぞれ寄託され、またシュードグルコノバクター・サッカ
ロケトゲネスＫ５９１ｓ株，１２−５株およびＴＨ１４
−８６株は、昭和６０年１０月７日に、シュードグルコ
ノバクター・サッカロケトゲネス１２−１５株，１２−
４株および２２−３株は昭和６０年１２月２０日に通商
産業省工業技術院微生物工業技術研究所（FRI）に受託
番号ＦＥＲＭ Ｐ−８４８１，ＦＥＲＭ Ｐ−８４８
０，ＦＥＲＭ Ｐ−８４７９，ＦＥＲＭ Ｐ−８５７
７，ＦＥＲＭ Ｐ−８５７６およびＦＥＲＭ Ｐ−８５
７８としてそれぞれ寄託され、該寄託がブダペスト条約
に基づく寄託に切換えられて、下記に示す受託番号とし
て同研究所に保管されている。

本発明においては、Ｌ−ソルボースを含有する培地に前
記の菌を培養してもよく、またＬ−ソルボースに前記の
菌の菌体処理物を作用させてもよい。

本発明で用いられる「菌体処理物」とは、前記の菌を培
養して得られる培養物の洗浄菌体、アセトンパウダー，
ポリアクリルアミドゲルまたはＫ−カラギーナン包括固
定化菌体などをいう。

原料のＬ−ソルボースを培地に加えるに際し、使用全量
を培養当初から培地に添加してもよいし、全量を何回か
に分けて、または連続的に培養液に加えてもよい。

Ｌ−ソルボースと前記の微生物とを接触させて行う反応
における反応液中のＬ−ソルボースの濃度は、培地に対
して３〜３０％（w/v）、好ましくは５〜２５％（w/v）
である。

Ｌ−ソルボースと菌体処理物とを接触させる方法として
は、たとえば、菌体処理物にＬ−ソルボース，２−（Ｎ
−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）緩衝液（pH
６．５，０．５Ｍ）およびCaCO₃を加え、水で希釈して
三角フラスコ中で振盪させる方法が挙げられる。

Ｌ−ソルボースと前記の微生物の処理物を接触させて行
なう反応における反応液中のＬ−ソルボースの濃度は、
０．１〜１０％（w/v）、好ましくは０．３〜３％（w/
v）である。微生物の処理物の量は、処理前の乾燥菌体
量として１〜３０mg／mlである。反応液のpHは、約５．
５〜７．５に調整され、反応温度は、約２０〜４０℃，
反応時間は約１〜１００時間である。

本発明においてシュードグルコノバクター属細菌をＬ−
ソルボースを含有する液体培地に培養し、２−ケト−Ｌ
−グロン酸を培養液中に生成蓄積せしめる場合に、本酸
化菌シュードグルコノバクター属細菌を単独で培養する
よりも、本酸化菌とは別種の細菌を混在させると、２−
ケト−Ｌ−グロン酸の蓄積量が顕著に増加する。

混在させる菌としては、例えば、バチルス属，シュード
モナス属，プロテウス属，シトロバクター属，エンテロ
バクター属，エルウィニア属，キサントモナス属および
フラボバクテリウム属等に属する菌が挙げられ、さらに
具体例として下記に示す菌が挙げられる。

バチルス・セレウス （Bacillus cereus）ＩＦＯ ３
１３１ バチルス・リケニホルミス （Bacillus liche-niform
is） ＩＦＯ １２２０１ バチルス・メガテリウム （Bacillus megate-rium）
ＩＦＯ １２１０８ バチルス・プミルス （Bacillus pumilus）ＩＦＯ
１２０９０ バチルス・アミロリケフアシエンス （Bacillus amyl
oliquefaciens） ＩＦＯ ３０２２ バチルス・ズブチリス （Bacillus subtilis）ＩＦＯ
１３７１９ バチルス・サーキユランス（Bacillus circu-lans）
ＩＦＯ ３９６７ シュードモナス・トリホリ （Pseudomonas tri-foli
i） ＩＦＯ １２０５６ シュードモナス・マルトフィリア（Pseudomonas malto
philia） ＩＦＯ １２６９２ プロテウス・インコンスタンス（Proteus in-constan
s） ＩＦＯ １２９３０ シトロバクター・フロインディ （Citrobacter freun
dii） ＩＦＯ １３５４４ エンテロバクター・クロアカ （Enterobacter cloaca
e） ＩＦＯ ３３２０ エルウィニア・ハービコラ （Erwinia herbi-cola）
ＩＦＯ １２６８６ キサントモナス・ピシ （Xanthomonas pisi）ＩＦＯ
１３５５６ キサントモナス・シトリ （Xanthomonas citri） Ｉ
ＦＯ ３８３５ フラボバクテリウム・メニンゴセプティカム（Flavobac
terium meningosepticum） ＩＦＯ １２５３５ これらの菌のいずれかを適当な培地に、２０℃〜４０℃
で１日から４日間培養して得られる培養液を混合菌の種
培養液として、用いることができる。その移植量は通
常、酸化菌（シュードグルコノバクター属）のそれの１
／１０から１／１０００とするのが望ましい。この程度
の移植量で混合菌を酸化菌と混合培養すると、酸化菌の
生育が促進され、それにつれて、酸化菌単独培養の場合
より、より高濃度のＬ−ソルボースが、より短い時間で
２−ケト−Ｌ−グロン酸に酸化される。混合菌として用
いられる細菌は、本発明の原料であるＬ−ソルボースや
生産物である２−ケト−Ｌ−グロン酸の資化性が無いか
または微弱な菌であることが望ましい。その他の培養条
件は、酸化菌の単独培養と特に変わるところはない。

前記の微生物の培養に用いられる培地は、該菌株が利用
し得る栄養源を含むものなら液状でも固体状でもよい
が、大量のものを得る時には液体培地を用いるのが好ま
しい。

該培地には、通常微生物の培養に用いられる炭素源，窒
素源，無機塩類，有機酸塩及び微量栄養素が用いられ
る。炭素源としては原料であるＬ−ソルボースがそのま
ま使用されうるが、その他の補助炭素源として、例え
ば、グルコース，グリセリン，ショ糖，乳糖，麦芽糖，
糖蜜等が使用できる。

窒素源としては、例えば、アンモニウム塩類（例、硫酸
アンモニウム，硝酸アンモニウム，塩化アンモニウム，
リン酸アンモニウム等），コーンスチープリカー（以下
ＣＳＬと称することもある），ペプトン，肉エキス，酵
母エキス，乾燥酵母，大豆粉，綿実粕，尿素等の無機ま
たは有機の窒素含有物が挙げられる。また無機塩類とし
てはカリウム，ナトリウム，カルシウム，マグネシウ
ム，鉄，マンガン，コバルト，亜鉛，銅及び燐酸の塩類
が用いられる。

微量栄養素としては前記の菌の生育必須因子であるCo
A，パントテン酸，ビオチン，チアミン，リボフラビン
は勿論のこと、生育及び２−ケト−Ｌ−グロン酸生成に
促進的効果を示すフラビンモノヌクレオチド（以下FMN
と称することもある），フラビンアデニンジヌクレオチ
ド（以下ＦＡＤと称することもある），その他のビタミ
ン類，Ｌ−システイン，Ｌ−グルタミン酸，チオ硫酸ナ
トリウム等が化合物として、または、それらを含むもの
として天然物を適宜加えられる。

培養の手段は、静置培養でも、振盪培養あるいは通気攪
拌培養法等の手段を用いてもよい。大量の処理には、い
わゆる深部通気撹拌培養によるのが望ましい。

培養条件は、勿論菌株の種類，培地の組成，その他によ
っても異なり、要するに目的物が最も効率よく生産され
る様に個々の場合に応じて選択すればよい。例えば、培
養温度は２５〜３５℃にて行うのがよく、培地のpHは５
〜９程度が望ましい。以上の様な条件下で１０〜１２０
時間培養または反応することにより２−ケト−Ｌ−グロ
ン酸が最高濃度に蓄積される。尚この場合目的物の生成
に伴ってpHが低下するのが一般的であるので、適当な塩
基性物質、例えば苛性ソーダ，苛性カリ，アンモニアを
添加して常に微生物の２−ケト−Ｌ−グロン酸生成に最
も適したpHに保持するのもよく、また培地中に適当な緩
衝剤を添加しておいて最適のpHが維持される様にするの
もよい。

この他、前記の酸化菌とは別種の細菌の滅菌培養物を培
地成分として有効に利用することもできる。利用できる
菌としては、例えば、バチルス属，シュードモナス属，
シトロバクター属，エシェリヒア属およびエルウィニア
属に属する菌が挙げられ、さらに具体例として下記に示
す菌が挙げられる。

バチルス・セレウス （Bacillus cereus）ＩＦＯ ３
１３１ バチルス・ズブチリス （Bacillus subtilis）ＩＦＯ
３０２３ バチルス・プミルス （Bacillus pumilus）ＩＦＯ
１２０８９ バチルス・メガテリウム （Bacillus megate-rium）
ＩＦＯ １２１０８ バチルス・アミロリケファシエンス （Bacillus amyl
oliquefaciens） ＩＦＯ ３０２２ シュードモナス・トリホリ（Pseudomonas tri-folii）
ＩＦＯ １２０５６ シトロバクター・フロインディ （Citrobacter freun
dii） ＩＦＯ １２６８１ エシェリヒア・コリ（Escherichia coli）ＩＦＯ ３
４５６ エルウィニア・ハービコラ （Erwinia herbi-cola）
ＩＦＯ １２６８６ これらの細菌を、これらが生育しうる培地に、２０℃〜
４０℃で２日から４日間培養し、得られる培養液を滅菌
し、これを本酸化菌の培地に０．５〜５．０％（v/v）
の割合で加え、酸化菌の生育を促進させることもでき
る。

この様にして培溶液中または反応液中に生成し蓄積した
２−ケト−Ｌ−グロン酸は、その性状を利用したそれ自
体公知の手段で分離精製することができる。２−ケト−
Ｌ−グロン酸は遊離の酸として分離してもよく、例え
ば、ナトリウム，カリウム，カルシウム，アンモニウム
等の塩として分離してもよい。

分離の方法としては目的を阻害しないかぎり、いかなる
ものでもよいが、例えば必要に応じて反応生成物から濾
過、遠心分離あるいは活性炭処理等を行って、菌体を除
去した後、この溶液をそのまま濃縮し、析出する結晶を
濾取し、さらに再結晶させて目的物を取り出す方法、溶
媒抽出法、クロマトグラフィー法、塩析法などを単独
で、あるいは適宜組み合わせ、また反復して利用するこ
ともできる。

２−ケト−Ｌ−グロン酸が遊離型で得られる場合はこれ
を適宜の方法によって、例えば、ナトリウム，カリウ
ム，カルシウム，アンモニウム等の塩にしてもよく、ま
た塩として得られる場合は、これを適宜の方法によって
遊離型あるいは他の塩にかえてもよい。

本発明の方法によって得られる目的物が２−ケト−Ｌ−
グロン酸であることは、例えば元素分析，融点，旋光
度，赤外線スペクトル等の物理化学的諸性質の測定によ
って同定された。

反応液，培養液中に生成した２−ケト−Ｌ−グロン酸の
定量は、スルホン化ポリスチレンゲル充填カラム（島津
製作所製，ＳＣＲ−１０１Ｈカラム、７．９mm×３０c
m）を用いる高速液体クロマトグラフィー法（移動相：p
H２．２の希硫酸，流量；０．５ml／min，検出器：示差
屈折計）で行ない、標準品としては２−ケト−Ｌ−グロ
ン酸ナトリウム１水塩の結晶を使用した。また２−ケト
−Ｌ−グロン酸の検出は薄層クロマトグラフィー法で行
なった。セルロースプレート（メルク社製，米国）にサ
ンプルをスポットし、フェノール：水：ギ酸（７５：２
５：５）の溶媒で室温、３時間展開後、プレートを乾燥
し発色させると、２−ケト−Ｌ−グロン酸は、硝酸銀試
薬では黒褐色の、ｏ−フエニレンジアミン試薬では黄色
の、アニリンフタル酸試薬では桃色のスポットをＲｆ値
０．３０付近に与えることにより検出された。

実施例 以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明す
る。なお培地の％は、重量／容量％を示す。

実施例１ グルコース２．０％，ペプトン１．０％、乾燥酵母１．
０％、CaCO₃２．０％からなる種培地２０mlを２００ml
容三角フラスコに分注し、１２０℃で２０分間蒸気滅菌
した。このフラスコに第１表に示す斜面培地に２８℃、
４日間生育させたシュードグルコノバクター・サッカロ
ケトゲネスＫ５９１ｓ株（ＩＦＯ１４４６４，ＦＥＲＭ
ＢＰ−１１３０）の菌体１白金耳を植菌し、３０℃で
２日間振盪（２００rpm）培養した。得られた培養液２m
lを上記と同じ種培地を含むフラスコに移植し同じ条件
で培養し種培養液を得た。

ＣＳＬ２．０％，乾燥酵母０．５％，硫安０．５％，Na
₂S₂O₃ ０．０５％，硫酸第１鉄０．２％，CaCO₃ ４．
０％，Ｌ−ソルボース１０．０％（別滅菌）からなる発
酵培地２５mlを２００ml容の三角フラスコに分注し、１
２０℃で２０分間蒸気滅菌した。この発酵培地を含む三
角フラスコに上記種培養液１．２５mlを移植し、３０℃
で３日間振盪培養した。この様にして得られた発酵液は
高速液体クロマトグラフィー法で定量すると６０．５mg
／mlの２−ケト−Ｌ−グロン酸を含んでいた。（モル変
換収率：５６．１％）この発酵液１０００mlを遠心分離
して、菌体等の残渣を除き、９８０mlの上清を得た。こ
の上清をアンバーライトＩＲ１２０（ロース・アンド・
ハース社製，米国，Ｈ型，５００ml）カラムに通し、カ
ラムを約３００mlの脱イオン水で洗浄した。通過液と洗
液を合せて、活性炭（５００ml）カラムを通過させ、つ
いで約３００mlの脱イオン水で洗浄し、脱カチオンと脱
色を行った。この通過液と洗液の合計１６００mlを苛性
ソーダでpH６．５に調整した後、５０℃で約７０ml迄減
圧下、濃縮した。この濃縮液を５℃に２４時間放置する
と無色柱状の結晶を生じた。生じた結晶を濾取し、少量
の冷メタノールで洗浄後、室温，減圧下に五酸化燐上で
乾燥して３７．５ｇの２−ケト−Ｌ−グロン酸モノナト
リウム・１水塩を得た。得られた結晶の分析値は融点：
１４７〜１５５℃（分解） 元素分析値（Ｃ_６Ｈ_９Ｏ_７Ｎａ・Ｈ_２Ｏ） 理論値：Ｃ，３０．７８％；Ｈ，４．７４％ 測定値：Ｃ，３０．９４％；Ｈ，４．８５％ 比旋光度［α］▲²⁴ _D▼−２３．３゜（Ｃ＝１．０，
水）で、高速液体クロマトグラフィーの保持時間と薄層
クロマトグラフィーのＲｆ値と色調は標準品のものと一
致した。

実施例２ 第１表に示す斜面培地で生育したシュードグルコノバク
ター・サッカロケトゲネスＫ５９１ｓ株の菌体１白金耳
を第２表に示す完全培地５mlを含む試験管（１６mm×１
６０mm）に植菌し、３０℃で２日間振盪培養した。この
培養液１mlを同じ培地５mlを含む試験管に移植し、４日
間振盪培養した。得られた培養液５mlを無菌的に５℃で
１５分間遠心分離（１２，０００rpm）して集菌し、次
いで１０mlのトリスマレイン酸緩衝液（ｐＨ６．５，
０．０５Ｍ）に懸濁し、再び遠心分離（１２，０００rp
m）した。これを２回繰り返して得た洗浄菌体を１mg／m
lのニトロソグアニジンを含む上記緩衝液５mlに懸濁
し、３０℃で２時間振盪して変異剤処理した。この処理
液を５℃で１５分間遠心分離（１２，０００rpm）して
菌体を集め、１０mlのトリスマレイン酸緩衝液で上記と
同じ様に２回洗浄して、ニトロソグアニジン処理菌体を
得た。これを０．８５％の食塩水で適当に希釈して、１
５mlの完全培地（固型）を含むプレート（直径９cm）に
撒き、２８℃で５日間培養しコロニーを生成させた。生
じたコロニーを計数し、無処理のものと比較すると、こ
のニトロソグアニジン処理による菌の死滅率は９０．４
％であった。また完全培地プレート上のコロニーを第３
表に示す最小培地プレートにレプリカし、２８℃で３日
間培養後、栄養要求変異株の出現頻度を調べると約６．
６％であった。

以上の様に変異剤処理した完全培地プレート上のコロニ
ーを新しい完全培地プレートに一枚当り１２株の割合で
約２cmの長さに画線移植した。２８℃で２日間培養後、
生育した菌体１白金耳をＬ−ソルボース７．０％（別滅
菌），乾燥酵母１．０％，ペプトン１．０％，塩化第１
鉄０．１％およびＣａＣＯ_３ ３．０％からなる培地
（ｐＨ６．５）３mlを含む試験管に移植し、３０℃で４
日間振盪培養した。この条件下で親株Ｋ５９１ｓ株の２
培程度の２−ケト−Ｌ−グロン酸生成能を有するＴＨ１
４−８６株 （ＩＦＯ １４４６６， ＦＥＲＭ ＢＰ
−１１２８）が、Ｌ−ソルボース酸化能増強株として選
択された。

実施例３ シュードグルコノバクター・サッカロケトゲネスK591s
株から実施例２で誘導された変異株ＴＨ１４−８６株を
第１表の斜面培地に２８℃で４日間生育させた。この斜
面培地から菌体１白金耳を実施例１の種培地２０mlを含
む２００ml容の三角フラスコに接種し、３０℃で２日間
振盪培養した。

グルコース３．０％，ペプトン１．０％，乾燥酵母１．
０％およびＣａＣＯ_３ ２．０％からなる培地２００ml
を１容三角フラスコに分注し、１２０℃で２０分間蒸
気滅菌した。この三角フラスコに上記培養液２０mlを移
植し、２８℃で２日間振盪培養し種培養液を得た。

一方、第１表の斜面培地で２８℃，２日間生育させたバ
チルス・メガテリウムＩＦＯ １２１０８株の菌体１白
金耳を、ショ糖４．０％，綿実粕４．０％，K₂HPO₄
０．６５％，KH₂PO₄ ０．５５％，硫安０．０５％，Ｎ
ａＣｌ ０．０５％，硫マグネシウム０．０５およびパ
ントテン酸カルシウム０．０５％からなる培地（ｐＨ
７．０）２０mlを含む２００ml容三角フラスコ（１２０
℃，２０分間蒸気滅菌）に接種し、３０℃で３日間培養
した。得られた培養液は１２０℃，２０分間蒸気滅菌し
て、冷所に保存し、バチルス・メガテリウムの滅菌培養
物として下記する醗酵培地の１成分として使用した。Ｌ
−ソルボース１２．５％（１２０℃，１５分別滅菌），
硫安０．５％，KH₂PO₄ ０．０３％，Na₂S₂O₃・５Ｈ_２
Ｏ ０．０５％，硫酸マグネシウム０．０５％，ＦｅＳ
Ｏ_４・７Ｈ_２Ｏ ０．１％，ＭｎＳＯ_４・４Ｈ_２Ｏ ５
μｇ／ml，チアミン５μｇ／ml，ビオチン０．１μｇ／
ml，ＦＭＮ０．１μｇ／ml，ＣａＣＯ_３ ５．０％およ
び上記バチルス・メガテリウムの滅菌培養物４．０％
（v/v）からなる醗酵培地３を５容醗酵槽に入れ、
１２０℃，３０分間蒸気滅菌した。この醗酵槽に前記の
種培養液３００mlを移植し、３２℃，通気２．４／mi
n攪拌８００rpmの条件下で３日間培養した。この様にし
て得られた醗酵液には１０２．０mg／mlの２−ケト−Ｌ
−グロン酸が含まれていた。（モル変換収率：７５．７
％）この醗酵液１を実施例１と同じ方法で分離精製
し、２−ケト−Ｌ−グロン酸モノナトリウム１水塩の結
晶７３．２ｇを採取した。

実施例４ シュードグルコノバクター・サッカロケトゲネス１２−
５株（ＩＦＯ １４４６５， ＦＥＲＭ ＢＰ−１１２
９）を実施例１と同じ方法で培養して種培養液を得た。
Ｌ−ソルボース濃度を１２．５％から９．０％に変えた
実施例３の醗酵培地２０mlを２００ml容三角フラスコに
分注し、１２０℃で２０分間蒸気滅菌した。このフラス
コに上記種培養液１．５mlを移植し、３２℃で２日間振
盪培養したところ７３．２mg／mlの２−ケト−Ｌ−グロ
ン酸が培養液中に生成した。（モル変換収率：７５．４
％） 実施例５ シュードグルコノバクター・サッカロケトゲネス１２−
４株（ＦＥＲＭ ＢＰ−１１３１，ＩＦＯ １４４８
３），１２−１５株（ＦＥＲＭ ＢＰ−１１３２，ＩＦ
Ｏ １４４８２）および２２−３株 （ＦＥＲＭ ＢＰ
−１１３３，ＩＦＯ １４４８４）を実施例４と同じ方
法でそれぞれ３日間振盪培養したところ、１２−４株で
は５２．１mg／ml（モル変換収率：５３．７％），１２
−１５株では４８．７mg／ml（モル変換収率：５０．２
％），２２−３株では６９．３mg／ml（モル変換収率：
７１．４％）の２−ケト−Ｌ−グロン酸がそれぞれ培養
液中に生成した。

実施例６ Ｌ−ソルボース１．０％（別滅菌），ペプトン０．５％
および酵母エキス０．５％からなる培地（ｐＨ７．０）
２５mlを２００ml容三角フラスコに分注し、１２０℃，
１５分間蒸気滅菌した。このフラスコに第１表に示す斜
面培地で２８℃、４日間生育したシュードグルコノバク
ター・サッカロケトゲネスＴＨ１４−８６株の菌体１白
金耳を植菌し、３０℃で２日間振盪培養して種培養液を
得た。Ｌ−ソルボース５．０％（別滅菌），ペプトン
１．０％，酵母エキス０．５％およびCaCO₃２．０％か
らなる培地（ｐＨ７．０）２５mlを２００ml容三角フラ
スコに分注し、１２０℃，１５分間蒸気滅菌した。この
フラスコに上記した種培養液１．０mlを移植し、３０℃
で２日間振盪培養した。

得られた培養液５００mlを２０分間室温で静置後、デカ
ントして沈澱物を除き、ついで室温，１，０００rpmの
低速で５分間遠心分離して、主にCaCO₃からなる沈澱物
を除き菌体懸濁液を得た。これをさらに５℃で１０分間
遠心分離（６，０００rpm）して菌体を集め、約１００m
lの冷食塩水（０．８５％）で２回洗浄、５℃で遠心分
離（６，０００rpm）して洗浄菌体を得た。これを３５m
lの冷食塩水（０．８５％）に懸濁して、洗浄菌体懸濁
液とした。

この洗浄菌体懸濁液４mlにＬ−ソルボース３００mg，２
−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）緩衝
液（ｐＨ６．５，０．５Ｍ）０．５mlとＣａＣＯ_３１８
０mgを加え、水で総量を１０mlとし、１００ml容三角フ
ラスコ中で３０℃，２４時間振盪しながら反応させた。
この様にして得られた反応液中には２４．６mg／mlの２
−ケト−Ｌ−グロン酸が生成していた。（モル変換収
率：７６．０％） 実施例７ シュードグルコノバクター・サッカロケトゲネスＫ５９
１ｓ株，１２−５株とＴＨ１４−８６株を各々第１表に
示す斜面培地で２８℃、４日間生育させた。一方第４表
に示す混合菌は同じ斜面培地で２８℃，２日間成育させ
た。各々の菌体１白金耳を実施例１に示す種培地２０ml
を含む２００ml容三角フラスコに植菌し３０℃で２日間
振盪（２００rpm）培養し、各々の種培養液を得た。

ＣＳＬ２．０％，乾燥酵母０．３％，硫酸アンモニウム
０．５％，Na₂S₂O₃・５Ｈ_２Ｏ ０．０５％，硫酸第１
鉄０．２％，ＣａＣＯ_３ ５．０％およびＬ−ソルボー
ス１５．０％（別滅菌）からなる醗酵培地２５mlを２０
０ml容三角フラスコに分注し、１２０℃で２０分間蒸気
滅菌した。

この醗酵培地を含む三角フラスコに前記したシュードグ
ルコノバクター・サッカロケトゲネス（酸化菌）の各菌
株の種培養液１．５mlを植菌、３０℃で５日間振盪培養
しこれを純粋培養とした。

一方混合培養とする場合には酸化菌の植菌と同時に前記
した混合液の種培養液０．１mlをそれぞれ植菌し３０℃
で５日間振盪培養した。

得られた培養液中に生成した２−ケト−Ｌ−グロン酸量
を高速液体クロマトグラフィーで測定し、その結果を第
４表にまとめた。

混合菌の共存により２−ケト−Ｌ−グロン酸の生成量が
増加した。

実施例８ グルコース２．０％，ペプトン１．０％，乾燥酵母１．
０％およびアクトコール（消泡剤，武田薬品工業製）
０．０１％からなる前培養培地５００mlを２容の坂口
フラスコに分注し、１２０℃で２０分間蒸気滅菌した。
第１表に示す斜面培地に２８℃で４日間生育させたシュ
ードグルコノバクター・サッカロケトゲネスＴＨ１４−
８６株の菌体を１０mlの滅菌水に懸濁し全量を坂口フラ
スコに植菌し、２８℃，３日間往復振盪（８５spm）培
養して前培養液を得た。

グルコース３．０％，ＣＳＬ１．０％，乾燥酵母０．５
％，チオ硫酸ナトリウム０．０５％，硫酸第一鉄０．１
％，炭酸カルシウム２．０％およびアクトコール０．０
３％からなる種培養培地１２０（pH６．５）を２００
容の醗酵槽に仕込み、１２５℃で３０分間蒸気滅菌し
た。この醗酵槽に上記した前培養液１．８を移植し、
攪拌１２０rpm，通気１００／min，内圧１．０Kg／cm
²Ｇ，３０℃の条件下で３日間培養して種培養液を得
た。

一方、第１表に示す斜面培地に２８℃，２日生育させた
混合菌バチルス・メガテリウムＩＦＯ１２１０８株の菌
体１白金耳を上記前培養培地５００mlを含む２容坂口
フラスコに植菌して、２８℃，２日間往復振盪（８５sp
m）培養して前培養液を得た。前培養培地と同じ組成の
培地３０を５０容の醗酵槽に入れ１２０℃で２０分
間蒸気滅菌した。この醗酵槽に混合菌の前培養液５００
mlを植菌し、攪拌１２０rpm，通気３０／min，内圧
１．０kg／cm²Ｇの条件下で３０℃，２日間培養して混
合菌の種培養液を得た。

Ｌ−ソルボース１５．０％（別に滅菌して加えた），炭
酸カルシウム５．０％，ＣＳＬ２．０％，乾燥酵母０．
２％，硫酸アンモニウム０．３％，チオ硫酸ナトリウム
０．０５％，硫酸第一鉄鉄０．１％，アクトコール０．
０３％からなる醗酵培地１０００を２m³容醗酵槽に仕
込み、１２５℃で３０分間蒸気滅菌した。この醗酵槽に
前記したシュードグルコノバクター・サッカロケトゲネ
スＴＨ１４−８６株の種培養液１１０および混合菌バ
チルス・メガテリウムＩＦＯ１２１０８株の種培養液１
０を移植し、攪拌１１０rpm，通気９００／min，内
圧０．５Kg／cm²Ｇ，温度３０℃で培養した。４日間培
養後得られた培養液中には、１２３．１mg／mlの２−ケ
ト−Ｌ−グロン酸が含まれていた。（モル変換収率：７
６．１％） 実施例９ 実施例８の前培養培地２０mlを２００ml容三角フラスコ
に分注し、１２０℃で３０分間蒸気滅菌した。第１表に
示す斜面培地に２８℃で４日間生育させたシュードグル
コノバクター・サッカロケトゲネスＴＨ１４−８６の菌
体１白金耳を上記フラスコに植菌し、３０℃で２日間振
盪培養した。得られた培養液２０mlを同じ培地２００ml
を含む１容三角フラスコに移植し、３０℃で２日間振
盪培養してＴＨ１４−８６株の種培養液を得た。

前培養培地２０mlを含む２００ml容三角フラスコに、斜
面培地に２８℃で２日間生育させたバチルス・メガテリ
ウムＩＦＯ１２１０８株の菌体１白金耳を植菌し、２８
℃で２日間振盪培養して、混合菌の種培養液を得た。

Ｌ−ソルボース３．０％（別滅菌して加えた），ＣＳＬ
２．０％，乾燥酵母０．２％，硫酸アンモニウム０．３
％，チオ硫酸ナトリウム０．０５％，硫酸第一鉄０．１
％，アクトコール０．０２％および炭酸カルシウ９．０
％からなる醗酵培地の３分を２．１に調製し、１２
０℃で３０分間蒸気滅菌し、予め滅菌した５容の醗酵
槽に仕込んだ。

この醗酵槽に前記したＴＨ１４−８６株の種培養液３０
０mlと混合菌の種培養液４mlを移植し、３０℃，通気
２．４／min，攪拌８００rpmの条件で培養を開始し
た。

一方ソルボース５１０ｇを水で溶解して８００mlとし、
１２０℃で２０分間蒸気滅菌したソルボース溶液を、培
養６時間目から連続的に醗酵槽に加え、３６時間で全量
添加した。ソルボース添加終了後さらに２８時間前記条
件下で培養し、合計７０時間培養した。この様にして得
られた培養液中には１６３．５mg／mlの２−ケト−Ｌ−
グロン酸が蓄積していた。（モル変換収率：７５．８
％） 発明の効果 本発明の、シュードグルコノバクター属に属し、Ｌ−ソ
ルボースを２−ケト−Ｌ−グロン酸に酸化する能力を有
する微生物を用いる方法により、２−ケト−Ｌ−グロン
酸を収率よく製造することができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:01 7804−4Ｂ 1:085） (Ｃ１２Ｐ 39/00 Ｃ１２Ｒ 1:01 7804−4Ｂ 1:10） (Ｃ１２Ｐ 39/00 Ｃ１２Ｒ 1:01 7804−4Ｂ 1:11） (Ｃ１２Ｐ 39/00 Ｃ１２Ｒ 1:01 7804−4Ｂ 1:07） (Ｃ１２Ｐ 39/00 Ｃ１２Ｒ 1:01 7804−4Ｂ 1:125） (Ｃ１２Ｐ 39/00 Ｃ１２Ｒ 1:01 7804−4Ｂ 1:38） (Ｃ１２Ｐ 39/00 Ｃ１２Ｒ 1:01 7804−4Ｂ 1:18） (Ｃ１２Ｐ 39/00 Ｃ１２Ｒ 1:01 7804−4Ｂ 1:64） (Ｃ１２Ｐ 39/00 Ｃ１２Ｒ 1:01 7804−4Ｂ 1:20） (Ｃ１２Ｐ 39/00 Ｃ１２Ｒ 1:01 7804−4Ｂ 1:37） (Ｃ１２Ｐ 39/00 Ｃ１２Ｒ 1:01） 微生物の受託番号 ＦＥＲＭ ＢＰ−１１３３

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】シュードグルコノバクター属に属し、Ｌ−
   ソルボースを２−ケト−Ｌ−グロン酸に酸化する能力を
   有する微生物またはその処理物を、Ｌ−ソルボースに接
   触させて２−ケト−Ｌ−グロン酸を生成蓄積せしめ、こ
   れを採取することを特徴とする２−ケト−Ｌ−グロン酸
   の製造法。
2. 【請求項２】シュードグルコノバクター属に属し、Ｌ−
   ソルボースを２−ケト−Ｌ−グロン酸に酸化する能力を
   有する微生物またはその処理物を、バチルス属，シュー
   ドモナス属，プロテウス属，シトロバクター属，エンテ
   ロバクター属，エルウィニア属，キサントモナス属また
   はフラボバクテリウム属 に属する微生物のうち少なく
   とも一種の存在下、Ｌ−ソルボースに接触させて２−ケ
   ト−Ｌ−グロン酸を生成蓄積せしめ、これを採取するこ
   とを特徴とする２−ケト−Ｌ−グロン酸の製造法。