JPH0640837B2

JPH0640837B2 - アルコ−ル測定用組成物

Info

Publication number: JPH0640837B2
Application number: JP59002120A
Authority: JP
Inventors: ビユ−シヤン・マドホダス・カプ−ル; イエデイ−・イスラエル
Original assignee: ARUKOHORIZUMU ANDO DORATSUGU A; ARUKOHORIZUMU ANDO DORATSUGU ADEIKUSHON RISAACHI FUAUNDEESHON
Current assignee: ARUKOHORIZUMU ANDO DORATSUGU A; ARUKOHORIZUMU ANDO DORATSUGU ADEIKUSHON RISAACHI FUAUNDEESHON
Priority date: 1983-01-12
Filing date: 1984-01-11
Publication date: 1994-06-01
Anticipated expiration: 2009-06-01
Also published as: JPS59166098A; DE3477812D1; EP0117032A1; EP0117032B1

Description

【発明の詳細な説明】（発明の背景）この発明は尿，唾液，血清又は全血のごとき生物学的流
体中のアルコールの定量的及び定性的測定に関する。

ヒトに対するアルコールの作用は、社会的観点及び医学
的観点から重要な問題である。車両の運転者及びアルコ
ールを過剰に消費する者の正常でない行動は次第に反社
会的行動として認識されつつある。医学的目的及び社会
的目的のために、対象の体アルコールレベルを迅速正確
に測定することが重要である。

正常でない行動を引き起こすアルコールを同定すること
も重要である。エタノール以外のアルコールは、適切に
取扱わなければ、永久的損傷を生じさせるであろう。

（従来技術）現在、アルコールの測定のために種々の技法を使用する
ことができるが、これらの技法においては高価で、煩わ
しく十分に正確ではない装置を使用する必要があり、そ
してアルコール濃度を測定するために容認できない長時
間を必要とする。

従って、この発明は生物学的流体中のアルコールを正確
に測定するための、及びアルコールの臨床的に重要な同
定のための安価で、迅速でそして確実な手段を提供する
ことを目的とする。

（発明の目的）この発明の１つの観点に従えば体液中のアルコールレベ
ルの定量的測定を行うことができ、他の観点に従えば体
液中のアルコールの定性的測定を行うことができ、そし
て他の観点において体液中のアルコールの定量的及び定
性的同時測定を行うことができる。

この発明に従えば、アルコール測定反応体を含浸した固
体担体が提供され、このものは体液に浸漬した場合測定
すべき情報を可視的に表示する。

（発明の構成）第１の態様においては、担体が、第１の酵素の存在下で
エタノールと反応して還元され対応するアルデヒド及び
還元された化合物を生成する化合物；前記第１の酵素；
前記第１の酵素の競争的阻害剤；色原体、すなわち前記
還元された化合物及び第２の酵素の存在下で又はフェナ
ジンもしくはチアジンと共に、体液中に存在するアルコ
ールの濃度を表わす色彩変化をもたらす変色化合物；前
記第２の化合物又はフェナジンもしくはチアジン；アセ
トアルデヒド捕捉剤；所定のpHを保持するための緩衝
剤；及び酵素を保護するためのジチオエリスリトール又
は同等のスルフィドリル化合物が含浸されている。この
系はエタノールと反応するがメタノールとは反応しない
ため、メタノールと他の低級アルコールとの間の分別測
定が可能である。

第２の態様に従えば、担体が、体液中のアルコールと酸
素との反応を触媒して酸化された化合物及び過酸化水素
を生成せしめる酵素；第２の酵素の存在下で過酸化水素
により酸化されてアルコールの存在を示す色彩を生じさ
せる色原体が含浸される。

定量的測定を行うために第１の酵素の競争的阻害剤を用
いる。

この発明の他の態様に従えば、担体が、水と共に過酸化
水素を生成する成分；過酸化水素によりエタノールを対
応するアセトアルデヒドに酸化する第１の酵素触媒；ヌ
クレオチド；アセトアルデヒドの存在下で前記ヌクレオ
チドを還元する第２の酵素；色原体、すなわち還元され
たヌクレオチド及び第３の酵素の存在下で又はフェナジ
ンもしくはチアジンと共に、体液中に存在するアルコー
ルの濃度を表わす色彩の変化をもたらす変色化合物；第
３の酵素；及び所定のpHを保持するための緩衝剤が含浸
される。

酵素が共有結合により固定化されていない場合には、不
活性蛋白質（１種又は複数種）、例えばゼラチン又はア
ルブミンを加えて酵素を安定化し、それと共に発色を強
化する。

界面活性剤、例えばポリオキシ−エチレン−23−ラウリ
ルエーテル（商標：BRIJ-35）又はこれと同等のものを
用いることも好ましい。

固体担体は、例えば、紙片であってもよく、あるいは不
活性粉末物質、例えばシリカゲル，珪藻土、又は微結晶
セルロースであってもよい。不活性粉末は活性成分と混
合し、そして常法に従って錠剤に圧縮することができ、
又は用途によっては開端チューブに充填することもでき
る。

固体担体を被覆して発生する最終色彩の光学的品質を強
化することができることは当業者にとって明らかであろ
う。

含浸剤で含浸された担体に半透性被膜を施すこともでき
る。このような被膜を常法に従ってセロハン，酢酸セル
ロース，酪酸セルロース，エチルセルロース又はメチル
セルロースから形成し、アルコール及び水は通過して含
浸剤と反応するが、赤血球及び大形分子、例えば蛋白質
及びヘモグロビンは篩別され通過しないようにすること
ができる。

例 1. 尿又は唾液中のエタノールを測定するための固体組成物
を次のようにして調製した。

(1) ０．８４ｇ／１００mlのセミカルバジドを含有す
る１２５mM TRIS 緩衝液の調製。1.514ｇのRRISに０．
８４ｇのセミカルバジドを加え、そして再蒸留水で２０
０倍に稀釈した（HClによりpHを８．２に調整する）。
この時点でゼラチンを加えることができる。ゼラチンを
加える場合には溶液を３７℃にし、そして１．５ｇのゼ
ラチンを加える。

(2) ２５mMピラゾールのストック溶液の調製。０．１
７ｇのピラゾールを１００mlの再蒸留水に溶解した。

(3) 凍結乾燥する試薬の調製。

(a) 次の成分を秤り取り、凍結乾燥ビンに入れ、そし
て光から保護するためにアルミニウム箔で覆う。

1.ジアホラーゼ 0.170ｇ（766ユニット） 2.NAH 0.477ｇ 3.ADH （5250ユニット） 4.INT 0.200ｇ 5.アルブミン 0.14 ｇ 6.BRIJ-35 0.10 ｇ 7.ジチオスレイト-ル 25mMストック溶液85μ (b) この凍結乾燥ビンに１４mlのTris緩衝液及び０．
３７mlの２５mMピラゾールを加えた。

(c) この溶液をゆるやかに混合した。１５分間の後、
１５片のワットマン紙＃３を暗室にて溶液に加えた。
この紙片のサイズは５mm×５５mmとした。

(d) 紙片に試薬を５分間吸収せしめ、そしてゆっくり
撹拌した。過剰の液は除去して次のバッチに使用した。

(e) 紙片を収容している凍結乾燥ビンを少なくとも
３時間フリーザーに入れ、そして一夜凍結乾燥した。

(4) 凍結乾燥片の加工及び貯蔵 (a) 凍結乾燥片（５mm×５５mm）を、両面接着テープ
により半硬質プラスチック片（５５mm×６０mm）にはり
付けた。

(b) このプラスチック片を合計１１の細片（５mm×６
０mm）に切断した。従って、この各細片の先端には、す
べての試薬を含有する５mm×５mmの凍結乾燥したパッド
が存在する。

(c) この小片を暗色ビンに入れ、乾燥条件下で、フリ
ーザー（−１５℃）又は冷蔵庫中で保存した。

例 2. 血清又は血漿中のエタノール濃度を測定するための固体
組成物を次のようにして調製した。

(1) ０．８４ｇ／１００mlのセミカルバジドを含有す
る１３８mM TRIS 緩衝液pH８．２の調製。

１．６７１ｇのTRISに０．８４ｇのセミカルバジドを加
え、そして再蒸留水で１００mlに稀釈した（HClによりp
H８．２に調整）。例１の段階１と同様にしてゼラチン
を加えることができる。

段階(2)〜(4)は例１と同様にした。

例 3. 唾液中のエタノール濃度を測定するための固体組成物を
次のようにして調製した。

(1) ０．８４ｇ／１００mlのセミカルバジドを含有す
る１３８mM TRIS緩衝液pH８．０の調製。1.671ｇのTRIS
に０．８４ｇのセミカルバジドを加え、そして再蒸留水
を加えて１００mlに稀釈した（HClによりpHを８．０に
調整）。例１の段階１と同様にしてゼラチンを加えるこ
とができる。

段階(2)〜(4)は例１と同様にした。

例 4. 全血中のエタノール濃度を測定するための固体組成物を
次のようにして調製した。

段階(1)〜(3)は例２と同様にした。

次に凍結乾燥片をアセトン中１．２％エチルセルロース
溶液に浸漬した。次に真空乾燥によりアセトンを除去し
た。

段階(4)は例１と同様にした。

例 5. 定量を必要としない場合に尿，血清又は唾液中のエタノ
ールの存在を測定するための固体組成物を次のようにし
て調製した。

例１の段階を実施した。但しピラゾールは使用しなかっ
た。

当業者は、この発明の原理から逸脱することなく、特定
の用途に応じて、ピラゾールとアルコールデヒドロゲナ
ーゼの相対濃度を変えることにより種々のアルコールレ
ベルの検出感度を変えることができることを認識するで
あろう。

使用に当っては、例えば前記の例に記載した方法により
調製したこの発明の固体組成物を、エタノールを含有す
ると予想される液体中に１〜２秒間浸漬する。固体組成
物に生ずるピンク色〜赤色の強度が液体中に存在するエ
タノールの濃度に比例する。１分間後、生じた色をカラ
ーチャートと比較する。

色は時間と共に濃くなるが、浸漬後の紙ハッド固体組
成物を１．０Ｍピラゾールに浸漬しそして乾燥し又はHC
lに浸漬することにより固定することができる。この固
体組成物は、分光光度計を用いるエタノールの正確な定
量のために使用することができる。

この発明の方法の精度を検討するため、２つの方法によ
り試料液中のエタノール濃度を測定した。

(1) 種々のアルコール飲用避を有する個体の尿試料９
２０点を８週間にわたって採取しこれらのアルコール濃
度を例１により調製した固体組成物により、又は分光光
度計分析〔T.P.Hadjiioannou、S.I.Hadjiioannou等、Au
tomated Enzymic Determination of Ethanol in Bloo
d、Sevum及びVrine with Miniature Centrifugal Analy
zer.Clinical Chemistry、Vol 22(6)、８０２〜８０５
（１９７６）〕により試験した。次に、分光光度計によ
る結果を次のようにして固体組成物スケールに転換し
た。

＞１６００mg／＝６１２００〜１６００mg／＝５８００〜１２００mg／＝４４００〜８００mg／＝３２００〜４００mg／＝２５０〜２００mg／＝１＜５０mg／＝０．５０＝０全試料に基いて、固体組成物と分光光度計法の測定値相
関関係を計算し次の結果を得た。

(X)値及び(Y)値の数は９２０である。

(X)＝ａ(Y)＋ｂ固体組成物値の全平均(X)＝1.1353 分光光度計の全平均 (Y)＝1.1951 勾配 (a)＝1.0248 切片 (b)＝0.0315 相関係数 (r)＝0.9831 (2) アルコールを含む薬剤を摂取した可能性がある患
者の血清試料５８０点を、例２の固体組成物及びガスク
ロマトグラフィー〔Barbara R.Manno.、Joseph E.Mann
o.Simple Approach to Gas Chromatographic Microanal
ysis of Alcohols in Blood and Vrine by Direct-Inje
ction Technique、Tournal of Analytical Toxicology.
Vo12、２５７〜２６１、Nov-Dec.（１９７８）〕により
試験した。

ガスクロマトグラフィーの結果を次のようにして固体組
成物スケールに転換した。

＞１４００mg／＝５１０００〜１４００mg／＝４６００〜１０００mg／＝３３００〜６００mg／＝２５０〜３００mg／＝１＜５０mg／＝０．５０＝０次にデーターを相関させ、次の結果を得た。

(X)値及び(Y)値の数５８０固体組成物値の全平均(X)＝1.928 Ｃ．Ｇ値の全平均 (Y)＝2.050 勾配 (a)＝1.037 切片 (b)＝0.054 相関係数 (r)＝0.9875 これらの相関係数（0.9831及び0.9875）及び勾配（1.02
48及び1.037）は、この発明の固体組成物により得られ
るエタノール濃度は、複雑な分光光度計法又はガスクロ
マトグラフィー法により得られる結果とほとんど同一で
あることを示している。

インターフェレンス試験例１の方法により調製した固体組成物を用いてインター
フェレンス試験を行った。

第１表試験管内薬剤アセトンヒドロクロロチアジドアミトリプチリンイミプラミンアモバラビタールイソプロパノールアンフェタミンメタドンアスコルビン酸メタンフェタミンブタルビタールメタノールクロルジアゼポキシドメチプリロンクロルプロマジンモルフィンシメチジンナロキソンコカインノルトリピリンコデインオキソゼパムジアゼパム PCP ジゴキシンフェノバルビタールジメンヒドリネートフェニルプロパノラミンジフェンヒドラミンプロポキシフェンエフェドリンプロプラノロールエスクロルビノールキニンフルラゼパムサリシレートセコバルビタール試験管内薬剤添加ガスクロマトグラフィー法によりエタノールを含有しな
いことが示された尿に第１表に挙げた薬剤及びエタノー
ルを、尿中の薬剤及びエタノールの最終濃度が１mg／ml
となるように加えた。メタノール・イソプロパノール及
びアセトンの場合には、これらの最終濃度を３mg／mlと
した。尿試料を(1)薬剤を加えた後、及び(2)薬剤を含有
する試料にエタノールを加えた後、に例１のようにして
調製した固体組成物により試験した。各試験における可
視色の変化を記録した。比較のために同一プールからの
１mg／mlのエタノールを含有する尿試料を使用した。

第２表生体内薬剤アミトリプチリンルジオミールアモキサピンメプロチリンアンフェタミンメサドンバルビスレートメタムフェタミンベンゾジアゼピンモルフィンカルバマゼピンノルトリプチリンクロルプロマジンオキシコドンシメチジンペンタゾシンコデインイミプラミンデジミプラミンパーフェナジンジフェンヒドラミンフェンシクリジンドキセピンフェニラミンエフェドリンフェノチアジンエスクロルビノールフェニルプロパノラミンフルラゼパムフェニトインハロペリドールプロポキシフェンヒドロコドンキニジンキニン生体内薬剤個体を用いる種々の薬剤からの尿試料１６６点を次のよ
うにして試験した。

(1) 薄層クロマトグラフィーを用いて薬剤をスクリー
ニングし尿中の薬剤含量を確定した。第２表に単独で又
は組合わせとして見出された種々の薬剤を挙げた。ほと
んどの薬剤はその代謝物を伴っていた（表には挙げてな
い）。

(2) 例１の方法により調製した固体組成物を用いて尿
を試験した。１分間における可視色の変化を記録した。

(a) 陽性の反応があった場合は尿をさらにガスクロマ
トグラフィーにより分析し、尿中エタノールレベルを確
定した。

(b) 固体組成物が色彩変化を起こさなかった場合、尿
にエタノールを加え最終濃度を１００mg／１００mlと
し、固体組成物により再試験した。可視色変化を１分間
で記録した。

比較のため、１００mg／１００mlのエタノールを含有す
るブランク尿試料を用いた。すべての試料は、それを研
究室に受け入れた日に分析した。

インターフェレンス試験の結果試験管内薬剤添加３７種類の異なる薬剤はいずれも視覚的測定において色
彩を妨害せず、又はエタノールが存在しない場合にエタ
ノール陽性反応を示した。メタノール，イソプロハノー
ル、又はアセトンはエタノールの存在下で陽性反応を与
えなかった。

生体内薬剤ほとんどの尿試料が２種類以上の薬剤及びその代謝物を
含有していた。４２点の尿試料は成分の１つとしてエタ
ノールを含有していた。１２４点の試料にエタノールを
加えた。多量の薬剤又は多種類の薬剤（３種類以上）含
有する試料は１＋の負の偏りを示した。すなわちガスク
ロマトグラフィーによる６＋が５＋として視覚的に読み
取られた。これらの尿中のエタノールの内因性レベルは
常に１００mg／１００mlより高かった。

例えば還元され得る化合物として助酵素ニコチンアミド
アデニンジヌクレオチド（NAD）を使用することがで
き、そして第１の酵素触媒としてアルコールデヒドロゲ
ナーゼ（ADH）を使用することができる。変色化合物と
してテトラゾリウム塩を使用することができ、そして第
２の酵素触媒としてジアホラーゼを使用することができ
る。前記テトラゾリウム塩として例えばヨウドニトロテ
トラゾニウムクロリド（INT），チアゾリルブルーテト
ラゾニウムブロミド（MTT）、又はニトロブル−テトラ
ゾリウムクロリド（NBT）を使用することができる。こ
れに代えて、変色化合物として２，６−ジクロロフェノ
ールインドフェノール，メチレンブルーもしくは他の適
当な色素、又はこれらの組合わせに使用することができ
る。

アセトアルデヒド捕捉剤には、セミカルバジド，ヒドロ
キシルアミン，ヒドラジン、又はスルヒドリル試薬、例
えばペニシラミンもしくはシステインが含まれる。緩衝
剤には一般にトリス緩衝剤として知られているトリス
（ヒドロキシメチル）アミノメタンの燐酸塩又は燐酸水
素塩緩衝剤が含まれる。

この固体組成物は、アルコルデヒドロゲナーゼの競争的
阻害剤を用いることにより、これを用いない場合におい
て可能であるのより高いアルコール濃度において測定が
可能であるという利点を有する。競争的阻害剤としてピ
ラゾール，ハロゲン化ピラゾール，メチル，エチル，プ
ロピル，ブチルもしくはフェニルピラゾール、又は適当
なステロイドを用いることができる。

自然状態においてアルコールデヒドロゲナーゼはアルコ
ールに対して非常に高い親和性を有し、非常に低いアル
コール濃度においても最大定常速度でアルコールと反応
する。エタノール濃度が５０mg／を超えるとこの方法
によるアルコールの定量は不可能になる。５０〜１００
mg／又はこれより高濃度での定量が必要であるから、
アルコールに対するアルコールデヒドロゲナーゼの親和
性を低下せしめる必要がある。アルコールデヒドロゲナ
ーゼの競争的阻害剤の適当な濃度での存在下で、この酵
素がアルコールを酸化する速度が前記の濃度範囲におい
てアルコール濃度と比例する。４位において置換されて
いるピラゾールがより活性な競争的阻害剤であり、担体
系中に必要とされる濃度はピラゾール＞ハロゲン化ピラ
ゾール＞メチルピラゾール＞エチルピラゾール＞プロピ
ルピラゾール＞ブチルピラゾール＞フェニルピラゾール
である。ピラゾール以外の競争的阻害剤の濃度は、使用
されたピラゾールの濃度をＫ_i（阻害剤）／Ｋ_i（ピラゾ
ール）で乗ずることにより計算される。ここでＫ_iはア
ルコールデヒドロゲナーゼについての阻害定数である。

他の態様に従えば、体液中の酸素が還元される。この系
においては、触媒としてアルコールオキシダーゼが使用
され、対応するアルデヒドが生成する。使用する色原体
はグイアコール，０−トリジン、又はベンジジン誘導
体、例えばテトラメチルベンジジンから選択することが
できる。アルコールの定量的表示が必要な場合には、阻
害剤、例えば尿素を適当な量で使用する。色彩の変化を
生じさせるために第２の酵素、例えばパーオキシダーゼ
を使用する。この系は低級アルコール、例えばメタノー
ル又はエチレングリコールの検出に使用することができ
る。

担体に、２つの独立領域において２種類の含浸剤を含浸
することができる。一方はこの態様の組成物であり他方
は前記の態様のそれである。これを用いて試験する場
合、エタノールが存在すれば両領域において変色が生
じ、メタノール又は他のアルコールが存在すれば一方の
領域において変色が生ずる。

第２の系は次の例によりさらに十分に理解されるであろ
う。

これらの組成物により検出されるアルコールがメタノー
ル，エタノール又はグリコールであることが理解される
であろう。

例 6. 血清，血漿又は唾液中のアルコールを測定するための、
アルコールオキシダーゼを用いる含浸剤。

(1) ７５mM TRIS緩衝液pH７．５を、0.908ｇのトリス
（ヒドロキシメチル）アミノメタンを100mlの蒸留水に
溶解し、NH₄OHによりpHを調整することにより調製し
た。

(2) ０．１２ｇのゼラチンを１０mlの上記TRIS緩衝液
に加え、温水浴中で緩衝液を加温することによりゼラチ
ンを溶解した。

(3) 凍結乾燥すべき試薬の調製 (a) 次の成分を凍結乾燥ビンに秤取り、アルミニウム
箔で覆った。

1.Brij-35 0.0714ｇ 2.アルブミン 0.1 ｇ 3.パーオキシダーゼ 0.0869ｇ（4000ユニット）上記の試薬にゼラチン含有TRIS緩衝液１０mlを加え、そ
してゆっくりと混合した。これを１５分間放置した。

(b) 上記の試薬混合物に300μ（１０００ユニット）
のアルコールオキシダーゼを加えた。この溶液をゆっく
り混合した。

(c) １５分後、この溶液に１００片のワットマン紙
＃３を加えた。紙片のサイズは５mm×５０mmとした。

(d) この紙片に、約５分間にわたって試薬を吸収せ
しめ、そしてゆっくり振とうした。過剰量の溶液を除去
し次のバッチに使用した。

(e) 紙片を収容した凍結乾燥ビンを少なくとも３時
間フリーザーに入れ、そして次に一夜凍結乾燥した。

(4) 変色化合物。希望する色彩変化に依存して、次の
物質の１種又は組合わせにアセトンを加えて１０mlとし
た。

(5) 阻害剤。０．１５ｇの尿素（0.25mM）を最少量の
水に溶解し、そして変色化合物を含有するアセトン溶液
(4)に加えた。

(6) (3)(e)において調製した凍結乾燥片をアセトン溶
液(5)に浸漬し、そして過剰の溶液をデカント除去し
た。この紙片を乾燥窒素流中で乾燥した。

(7) 凍結乾燥片の加工及び貯蔵 (a) 前記紙片（５mm×５０mm）を両面接着テープに
よ半硬質プラスチック片（５０mm×６０mm）に接着し
た。

(b) 次にこのプラスチック片を切断して１０個の小片
（５mm×６０mm）を作った。従って、各小片の先端に
は、すべての試薬を含有している５mm×５mmの凍結乾燥
パッドが存在する。

(c) この小片を暗色ビンに入れ、乾燥条件下で冷蔵庫
又はフリーザーに貯蔵した。

例 7. 血中アルコールを測定するためのアルコールオキシダー
ゼを使用する固体組成物。

段階(1)〜(3)は例６と同様にした。

段階(4)において、変色化合物のほかにエチルセルロー
スを加えてアセトン中最終濃度を１．２％とした。

段階(5)〜(7)は例６と同様にした。

例 8. 定量を必要としない場合にエタノールを測定するための
固体組成物を次のようにして調製する。

段階５の尿素の添加を省略して例６又は７を行う。

例６及び７に記載した固体組成物はエタノールの他、メ
タノール及びエチレングリコールと反応する。阻害剤と
して尿素を使用した場合、０〜１６００mg／の範囲で
メタノール及びエタノールの濃度の直線性が達成され
る。

当業者は、この発明の原理を逸脱することなく、尿素と
アルコールオキシダーゼとの相対量を変えることによ
り、用途に応じて種々のアルコールレベルの検出を行う
ように感度を変えることができることを認識するであろ
う。

使用する場合、前記の例６及び７に従って調製したこの
発明の固体組成物をアルコール含有すると予想される液
体に１〜２秒間浸漬する。１分後、固体組成物に生じた
色をカラーチャートと比較する。固体組成物中に生ずる
色彩強度は液中に存在するアルコールの濃度に比例す
る。液が血液である場合、固体組成物を、カラーチャー
トと比較する前に数滴の水で洗浄し、又はティッシュペ
ーターで拭く。

前記以外の軽は、酸化バリウムもしくは水酸化バリウム
又は水と共に過酸化水素を発生する適当な薬剤；アルコ
ールを対応するアルデヒドに酸化する酵素カタラーゼ；
ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド；アセトアルデ
ヒドの存在下でこのヌクレオチドを還元するための第２
の酵素、例えばアセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ；色
原体例えばテトラゾリウム塩；還元されたヌクレオチド
のテトラゾニウム塩を還元して、還元されたヌクレオチ
ドの量を示す色を生じさせる第３の酵素、例えばジアホ
ラーゼを含有する。エタノールに関する競争基質（阻害
剤）として蟻酸ナトリウムを加え、所望の濃度範囲にお
いてアルコールの定量を行うことができる。

前記の態様において適当な被覆，界面活性剤，安定剤及
び緩衝剤を使用することができることが理解されよう。
この組成物を担体に含浸せしめ、前記と同様にして使用
する。反応体は所望の結果が得られるように適切な割合
にする。

前記の態様においては、組成物の安定性を保証するため
に凍結乾燥を用いた。他の乾燥方式、例えば適当な温度
における強制対流、又はこれらの技法の組合わせを用い
ることができることが理解されよう。

さらに、この発明の原理から逸脱することなく他の例又
は均等物が当業者に明らかとなろう。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献特開昭56−61652（ＪＰ，Ａ) ＡｎａｌＣｈｉｍＡｃｔａ，115, Ｐ．401−５，1980

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】生物学的流体中の低級アルコールの存在を
測定するための固定組成物であって、有効量の次の組
成、すなわち：前記アルコールを酸化して対応するアルデヒド及び還元
生成物を生成せしせる第１の酵素；体流体中のアルコールの存在を示す色彩変化を生じさせ
る、酵素又は化学物質である少なくとも１種の第１の薬
剤の存在下で前記アルデヒド又は前記還元生成物と反応
し得る色原体；前記酵素又は化学物質である第１の薬剤；前記第１の酵素の競争阻害剤；並びに所定のphを保持するための緩衝剤；を有する固定担体を含んで成る組成物。
【請求項２】前記第１の酵素の存在下でエタノールと反
応し還元され得る化合物をさらに含有する特許請求の範
囲第１項記載の固体組成物。
【請求項３】前記第１の酵素がアルコールデヒドロゲナ
ーゼである特許請求の範囲第２項記載の固体組成物。
【請求項４】前記還元され得る化合物がニコチュンアミ
ドアデニンジヌクレオチドである特許請求の範囲第３項
記載の固体組成物。
【請求項５】前記第１の酵素の競争的阻害剤がピラゾー
ル、ハロゲン化ピラゾール、アルキルピラゾール及びス
テロイドから成る群から選択される特許請求の範囲第１
項記載の固体組成物。
【請求項６】アセトアルデヒド捕捉剤をさらに含有する
特許請求の範囲第３項記載の固体組成物。
【請求項７】前記アセトアルデヒド捕捉剤がセミカルバ
ジドである特許請求の範囲第６項記載の固体組成物。
【請求項８】前記第１の酵素がアルコールデヒドロゲナ
ーゼであり、そして前記阻害剤がピラゾール、ハロゲン
化ピラゾール、アルキルピラゾール及びステロイドから
成る群から選ばれる特許請求の範囲第５項記載の固体組
成物。
【請求項９】前記化学物質である第１の薬剤がフェナジ
ン及びチアジンから成る群から選ばれ、そして前記色原
体がテトラゾリウム塩、２，６−ジクロロフェナールイ
ンドフェノール及びメチレンブルーから成る群から選ば
れる特許請求の範囲第５項記載の固体組成物。
【請求項１０】前記第１の薬剤が酵素ジアホラーゼ、又
はフェナジン及びチアジンから成る群から選ばれた化学
物質であり、そして前記色原体がテトラゾリウム塩、
２，６−ジクロロフェノールインドフェノール及びメチ
レンブルーから成る群から選ばれる特許請求の範囲第８
項記載の固体組成物。
【請求項１１】前記第１の酵素がアルコールオキシダー
ゼであり、そして該第１の酵素の競争的阻害剤を含有す
る特許請求の範囲第１項記載の組成物。
【請求項１２】前記第１の薬剤が酵素パーオキシダーゼ
である特許請求の範囲第11項記載の固体組成物。
【請求項１３】前記競争的阻害剤が尿素である特許請求
の範囲第12項記載の固体組成物。
【請求項１４】不活性蛋白質をさらに含有する特許請求
の範囲第13項記載の固体組成物。
【請求項１５】前記色原体がグアィアコール、ｏ−トリ
ジン及びベンジジン誘導体から成る群から選ばれる特許
請求の範囲第14項記載の固体組成物。
【請求項１６】水と共に過酸化水素を生成する酸化バリ
ウム及び水酸化バリウムから成る群から選ばれた追加の
薬剤、並びに前記アルデヒドと反応することにより第２
の薬剤の存在下で前記色原体と反応し得る還元生成物を
形成するヌクレオチドをさらに含有する特許請求の範囲
第１項記載の固体組成物。
【請求項１７】前記第２の薬剤がジアホラーゼ、フェナ
ジン及びチアジンから成る群から選ばれる特許請求の範
囲第16項記載の固体組成物。
【請求項１８】前記第１の酵素がカタラーゼであり、そ
して前記第１の薬剤が酵素アルデヒドデヒドロゲナーゼ
である特許請求の範囲第17項記載の固体組成物。
【請求項１９】スルヒドリル還元剤をさらに含有する特
許請求の範囲第18項記載の固体組成物。
【請求項２０】前記色原体が還元され得るテトラゾリウ
ム塩である特許請求の範囲第19項記載の固体組成物。
【請求項２１】不活性蛋白質をさらに含有する特許請求
の範囲第20項記載の固体組成物。
【請求項２２】第１のアルコール測定剤により含浸され
た第１の独立領域及び第２のアルコール測定剤により含
浸された第２の独立領域を含む不活性担体であって、前
記第１のアルコール測定剤が、有効量の、ニコチンアミ
ドアデニンジヌクレオチド；アルコールデヒドロゲナー
ゼ；ジアホラーゼ、フェナジン及びチアジンから成る群
から選ばれた薬剤の存在下で反応し得る色原体；ジアホ
ラーゼ、フェナジン又はチアジンの内の１つ；アセトア
ルデヒド捕捉剤；アルコールデヒドロゲナーゼの競争阻
害剤；所定のphを保持するための緩衝剤；及び前記酵素
を安定化するための手段を含み、そして前記第２のアル
コール測定剤が、有効量の、アルコールオキシダーゼ、
パーオキシダーゼの存在下で反応し得る色原体、パーオ
キシダーゼ、アルコールオキシダーゼの競争阻害剤、所
定のphを保持するための緩衝剤及び前記酵素を安定化す
るための手段を含むアルコール測定用不活性担体。
【請求項２３】前記第１のアルコール測定剤がさらにア
ルコールオキシダーゼの競争的阻害剤、パーオキシター
ゼの存在下で反応し得る色原体、パーオキシダーゼ、所
定のphを保持するための緩衝剤、及び前記酵素を安定化
するための手段をさらに含む特許請求の範囲第22項記載
の不活性担体。