JPH0642937U

JPH0642937U - ペプチドフラグメント分取装置

Info

Publication number: JPH0642937U
Application number: JP8249792U
Authority: JP
Inventors: 林太郎山本; 清史軒原
Original assignee: Shimadzu Corp
Current assignee: Shimadzu Corp
Priority date: 1992-11-30
Filing date: 1992-11-30
Publication date: 1994-06-07
Anticipated expiration: 2007-10-29
Also published as: JP2552394Y2

Abstract

(57)【要約】【目的】配管内に残留する試薬を少なくする。【構成】ペプチドフラグメント分取装置は、ペプチド
フラグメント混合物からカルボキシル末端ペプチドを分
取する装置であり、反応容器とカップリング手段と試薬
供給手段と回収手段と試薬回収手段とを備えている。こ
こでは、試薬回収手段が配管に残留する試薬を試薬収納
部に回収する。

Description

【考案の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】

本考案は、ペプチドフラグメント分取装置、特に、ポリペプチド中のリジン残基とそれに続くカルボキシル末端側のアミノ酸残基との間のペプチド結合が特異的に切断されたペプチドフラグメント混合物からカルボキシル末端ペプチドを分取するペプチドフラグメント分取装置に関する。

【０００２】

【従来の技術およびその課題】

ペプチドのカルボキシル末端（Ｃ末端）の分析法として、特開平１−２３５６００号公報に開示されたペプチド分取方法がある。このペプチド分取方法では、ポリペプチド中のリジン残基とそれに続くＣ末端側のアミノ酸残基との間のペプチド結合を特異的に切断処理する。そして、得られたペプチドフラグメント混合物が、遊離のアミノ基と反応して共有結合を形成し得る官能基を有する固相支持体と反応させられる。次いで、各ペプチドのα位のアミノ基を有する末端残基とそれに隣接する残基との間のペプチド結合をトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）により切断し、遊離してくるタンパク質のＣ末端ペプチドフラグメントを採取する。

【０００３】このペプチド分取方法を実施する装置として、ペプチドフラグメント混合物と固相支持体とを充填する反応容器と、ペプチドフラグメント混合物の各ペプチドと固相支持体とを共有結合で結合させるカップリング手段と、酸（特にＴＦＡが適している）を含む試薬を試薬ボトルから配管を介して反応容器に供給するための試薬供給部と、切断されたフラグメントを回収する回収部とを備えたものを本考案者は考えた。しかし、このような構成からなるペプチドフラグメント分取装置では、ＴＦＡ等の試薬を反応容器に供給した後に、試薬を収納する試薬ボトルと反応容器との間の配管に試薬が残留することになる。このため、以下の問題が生じる。

【０００４】時間の経過に伴いＴＦＡが一部分解変質し、次回の送液の際に純度の低下したＴＦＡが装置性能と反応性そのものとに影響を与える。ＴＦＡは配管を透過して装置内に拡散するので、装置の腐食の原因となる。本考案の目的は、配管内に残留する試薬を減少させることにある。

【０００５】

【課題を解決するための手段】

本考案に係るペプチドフラグメント分取装置は、ポリペプチド中のリジン残基とそれに続くカルボキシル末端側のアミノ酸残基との間のペプチド結合が特異的に切断されたペプチドフラグメント混合物からカルボキシル末端ペプチドフラグメントを分取する装置である。この装置は反応容器とカップリング手段と試薬供給手段と回収手段と試薬回収手段とを備えている。

【０００６】反応容器には、固相支持体が充填されており、ペプチドフラグメント混合物が注入される。カップリング手段は、反応容器内の温度を調整してペプチドフラグメント混合物を固相支持体に共有結合するものである。試薬供給手段は、試薬を収納する試薬収納部を有し、試薬収納部から配管を介して試薬を前記反応容器に供給するためのものである。回収手段は、反応容器からのペプチドフラグメントを回収するものである。試薬回収手段は、配管に残留する試薬を試薬収納部に回収するものである。

【０００７】

【作用】

本考案に係るペプチドフラグメント分取装置では、反応容器には固相支持体が充填されており、ここにペプチドフラグメント混合物が注入されると、カップリング手段により、反応容器内の温度が調整され、ペプチドフラグメント混合物が固相支持体にカップリングされる。そして、試薬供給手段が、試薬を試薬収納部から反応容器に配管を介して供給する。さらに、反応容器からのペプチドフラグメントが回収手段により回収される。これらの処理が終了すると、配管に残留する試薬が試薬回収手段により試薬収納部に回収される。

【０００８】ここでは、試薬回収手段により、配管に残留する試薬が確実に試薬収納部に回収される。このため、配管内に残留する試薬が減少する。これにより、装置の寿命は向上しかつ次回使用時にコンタミネーションの危険が減少する。

【０００９】

【実施例】

図１に示す本考案の一実施例によるペプチドフラグメント分取装置１は、箱状の本体ケース２と、本体ケース２の前面上部に配置された操作パネル３とを有している。本体ケース２の前面には、第１容器配置部４と第２容器配置部５とが上下に配置されている。

【００１０】第１容器配置部４には、回収されたＣ末端ペプチドを収納する回収ボトル６を取り付けるための回収ボトル取付部７と、後述するカラム３２を収納するヒートブロック８とが並んで配置されている。第２容器配置部５には、廃液ボトル９を取り付けるための廃液ボトル取付部１０と、回収液を収納する回収液ボトル１１を取り付けるための回収液ボトル取付部１２と、切断に用いるトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を収納する切断液ボトル１３を取り付けるための切断ボトル取付部１４と、洗浄液を収納する洗浄液ボトル１５を取り付けるための洗浄ボトル取付部１５とが並設されている。

【００１１】操作パネル３は、図２に示すように、８個のＬＥＤ１〜ＬＥＤ８を並設配置した工程表示部１９と、５個のキーＫ１〜Ｋ５を並設配置したキー入力部２０と、６個のＬＥＤを上下に配置した状態表示部２１とから構成されている。ＬＥＤ１はカップリング工程時に、ＬＥＤ２は第１洗浄工程時に、ＬＥＤ３は第２洗浄工程時に、ＬＥＤ４は乾燥工程時に、ＬＥＤ５は切断工程時に、ＬＥＤ６は回収工程時に、ＬＥＤ７は濃縮工程時に、ＬＥＤ８は工程完了時にそれぞれ点灯する。

【００１２】キーＫ１は、配管内の洗浄のみを行うときに操作する洗浄キー（ＷＡＳＨ）である。キーＫ２は、後述するＴＦＡ回収時に操作するＴＦＡ回収キー（ＴＦＡ／ＲＥＴ）である。キーＫ３は、任意の工程から進捗させるためのカーソルキーである。キーＫ４は、工程を自動的に進捗させるためのランキー（ＲＵＮ）である。キーＫ５は、工程を強制的に停止させるためのストップキー（ＳＴＯＰ）である。

【００１３】本体ケース１内には、図３に示す１３個の電磁弁ＳＶ１〜ＳＶ１３を含む配管系統が配置されている。電磁弁ＳＶ１〜ＳＶ７及びＳＶ１１〜ＳＶ１３は、常閉の２方向弁である。これらの電磁弁は通電時に開く。また電磁弁ＳＶ８〜ＳＶ１０は３方向弁であり、そのうち２つの入側ポートは常開であり、残りの出側ポートは常閉である。このため電磁弁ＳＶ８〜ＳＶ１０は通電時に全てのポートが開き、遮断時に出側ポートのみ閉じる。

【００１４】電磁弁ＳＶ１の入側ポートには、窒素ガスボンベ（図示せず）が接続される。電磁弁ＳＶ１の出側ポートには、電磁弁ＳＶ２〜ＳＶ７の入側ポートが一括接続されている。電磁弁ＳＶ２の出側ポートは、電磁弁ＳＶ８、電磁弁ＳＶ９、計測管３１及び電磁弁ＳＶ１０を介してヒートブロック８内のカラム３２に接続されている。

【００１５】電磁弁ＳＶ３の出側ポートには、先端が洗浄ボトル１５に挿入された配管の基端が接続されている。電磁弁ＳＶ４の出側ポートには、先端が回収液ボトル１１に挿入された配管の基端が接続されている。電磁弁ＳＶ５の出側ポートには、先端が切断液ボトル１３に挿入された配管の基端が接続されている。電磁弁ＳＶ６には、先端が廃液ボトル９に挿入された配管の基端が接続されている。電磁弁ＳＶ７の出側ポートには、先端が回収ボトル６に挿入された配管の基端が接続されている。

【００１６】また電磁弁ＳＶ８の出側ポートには、先端が洗浄ボトル１５内の底面近くに挿入された配管の基端が接続されている。電磁弁ＳＶ９の出側ポートには、先端が回収液ボトル１１の底面近くに挿入された配管の基端が接続されている。電磁弁ＳＶ１０の出側ポートには、先端が切断液ボトル１３の底面近くに挿入された配管の基端が接続されている。なお、これらの配管は、耐腐食性等を考慮した透明樹脂性のチューブから構成されている。

【００１７】ヒートブロック８内には、酵素処理されたペプチドと固相支持体とを充填するためのカラム３２が配置され得る。カラム３２には、分配ブロック３４が配管を介して接続されている。カラム３２と分配ブロック３４との間には、配管内を通過する液を検出してカラム３２に液が満たされたことを検出するための液センサ３３が配置されている。分配ブロック３４は２方向に分岐しており、一方には廃液ボトル９に挿通された配管が、他方には回収ボトル６に挿通された配管がそれぞれ接続されている。また、切断液ボトル１３、廃液ボトル９及び回収ボトル６には、配管を介して電磁弁ＳＶ１１，ＳＶ１２，ＳＶ１３の入側ポートが接続されている。これらの電磁弁ＳＶ１１，ＳＶ１２，ＳＶ１３の出側ポートは大気に開放されている。

【００１８】ペプチドフラグメント分取装置１は、図４に示す制御部４０を有している。制御部４０は、ＲＯＭ，ＲＡＭ等のメモリを含むマイクロコンピュータから構成されている。制御部４０には、電磁弁ＳＶ１〜ＳＶ１３が接続されている。また制御部４０には、キーＫ１〜Ｋ５と、工程及び状態表示部１９，２１と、ヒートブロック８を温度制御するための温調部４１と、各工程における処理時間を規定するためのタイマー４２と、液センサ３３とが接続されている。なお温調部４１には、温度設定部（図示せず）が設けられている。

【００１９】次に、上述のように構成されたペプチドフラグメント分取装置１の制御動作を、図５〜図１５に示すフローチャートにしたがって説明する。具体的な制御動作を開始させる前に、オペレーターは、各ボトルに試薬を充填し各取付部に取り付ける。ここで、洗浄ボトル９には、メタノールあるいはアセトニトリルが充填されている。回収液ボトル１１には、０．１％ＴＦＡを含む５０％アセトニトリル・２−プロバノール混合液が充填されている。切断液ボトル１３には、ＴＦＡが充填されている。

【００２０】また、ヒートブロック８に、官能基を有する固相支持体（イソシオチアナート基が導入された多孔性ガラス）が充填されたカラム３２を装着する。カラム３２には、酵素（リシルエンドペプチターゼ）で処理されたアミノ酸残基を含むペプチドフラグメント混合物が予め注入されている。なお、このペプチドフラグメント混合物には、酵素処理時に用いた尿素が残留している。

【００２１】一方、ペプチドフラグメント分取装置１の制御部４０では、プログラムがスタートすると、まずステップＳ１で初期設定がなされる。ここでは、たとえば制御部４０内のメモリがクリアされる。ステップＳ２では、工程の進捗状況を示す変数ｓを「１」にセットする。ステップＳ３では、工程表示部１９のＬＥＤ（最初はＬＥＤ１）を点灯する。

【００２２】そして、ステップＳ４〜Ｓ７でキー判定処理を繰り返す。ここで、ステップＳ４では、ランキーＫ３が操作されたか否かを判断する。ステップＳ５では、洗浄キーＫ１が操作されたか否かを判断する。ステップＳ６では、ＴＦＡ回収キーＫ２が操作されたか否かを判断する。ステップＳ７では、カーソルキーＫ３が操作されたか否かを判断する。

【００２３】ステップＳ４でランキーＫ３が操作されたと判断するとステップＳ８に移行する。ステップＳ８では、図７に示す順次処理（ＲＵＮ処理）が実行される。ステップＳ５で洗浄キーＫ１が操作されたと判断するとステップＳ９に移行する。ステップＳ９では、配管内を洗浄する洗浄処理が実行される。ステップＳ６でＴＦＡ回収キーＫ２が操作されたと判断するとステップＳ１０に移行する。ステップＳ１０では、図１６に示すＴＦＡ回収処理が実行される。ステップＳ７でカーソルキーＫ３が操作されたと判断するとステップＳ１１に移行する。ステップＳ１１では、カーソル処理が実行される。このカーソル処理では、カーソルキーＫ３の操作の都度、変数ｓをインクリメントする。なお、変数ｓは「７」の次が「１」に戻るように変更される。また、変数ｓが「８」のときも「１」に戻るように変更される。

【００２４】ステップＳ８での順次処理では、まず図７のステップＳ３１で変数ｓを読み込む。ステップＳ３２では、読み込んだ変数ｓの値が「１」であるか否かを判断する。変数ｓが「１」と判断した場合にはステップＳ３３に移行する。ステップＳ３３では、カラム３２内に充填された固相支持体とペプチドフラグメント混合物とのカップリング処理を行う。ステップＳ３５では、未結合のペプチドのパージ及び回収液による第１洗浄を行う。これにより、未結合のペプチドフラグメント混合物を洗い流す。ステップＳ３５では洗浄液による第２洗浄を行う。これにより、カラム３２及び配管内を洗浄する。ステップＳ３７では、Ｎ₂ ガスによる乾燥処理を行う。ステップＳ３８では、ＴＦＡを用いた酸処理による切断処理を行う。ステップＳ３９では、回収液によるフラグメントの回収処理を行う。ステップＳ４０では、Ｎ₂ガスにより、回収したフラグメントの濃縮処理を行う。

【００２５】これらの処理が終了すると、ステップＳ４１で変数ｓを「８」にし、一連の分取処理が終了したことをＬＥＤ８の点灯によって告知できるようにする。そしてメインルーチンに戻る。ステップＳ３２で変数ｓが「１」ではないと判断した場合（処理を途中の工程から始める場合）には、ステップＳ４３〜ステップＳ４７で、変数ｓが「２」〜「６」のいずれの値であるかを判断する。そして、その判断結果に応じて、ステップＳ４３〜Ｓ４７のいずれかから、ステップＳ３６〜ステップＳ３９のいずれかに移行する。変数ｓが「７」の場合にはステップＳ４７から、ステップＳ４０へと移行する。

【００２６】ステップＳ３３のカップリング処理では、図８のステップＳ５１で、ＲＵＮキーのＬＥＤを点灯する。これにより、オペレータは一連の処理が開始されたことを認識できる。ステップＳ５３では、温調部４１によりヒートブロック８を４℃ 〜８０℃（好ましくは１０℃〜６０℃）の範囲内で温調する。この温調は、設定時間Ｔ₂（たとえば５分〜３時間）の間行われる。すなわち、ステップＳ５４で設定時間Ｔ₂の経過を待ち、設定時間Ｔ₂が経過するとステップＳ５５に移行して温調を終了する。ステップＳ５６ではＬＥＤ１を消灯する。これによって、固相支持体とペプチドフラグメント混合物とのカップリング反応を行う。

【００２７】図７のステップＳ３５の第１洗浄工程では、図９のステップＳ６０でＬＥＤ２を点灯する。ステップＳ６１では、電磁弁ＳＶ１，７，１２を開く。すると、回収ボトル６内がＮ₂ガスで加圧され、また廃液ボトル９は大気に開放される。そして、電磁弁ＳＶ１，２，８，９，１０を介してＮ₂ガスがカラム３２に供給され、これにより、カラム３２内の未カップリングのペプチドが廃液ボトル９へとパージされる。ステップＳ６２では設定時間Ｔ₃の経過を待つ。設定時間が経過したと判断するとステップＳ６３に移行する。ステップＳ６３では電磁弁ＳＶ１，２，７，１２を閉じる。図１０のステップＳ７２では、電磁弁ＳＶ１，４，９，７，１２を開く。これにより、Ｎ₂ガスが、回収液ボトル１１に充填されるとともに、回収ボトル６にも充填される。これにより回収液ボトル１１及び回収ボトル６内の圧力が大気圧より上昇するため、回収液ボトル１１内に充填された回収液が電磁弁ＳＶ９，１０を介してカラム３２に供給される。ステップＳ７３では、カラム３２が回収液で満たされたことを、液センサ３３が検出するのを待つ。

【００２８】液センサ３３が回収液の流れを検出し、カラム３２が回収液で満たされるとステップＳ７４に移行する。ステップＳ７４では、電磁弁ＳＶ１，４，９，７，１２を閉じる。そしてステップＳ７５では、カラム３２内及び配管内の回収液を排出するために、電磁弁ＳＶ１，２，７，１２を開く。これにより、カラム３２及び配管内に満たされた回収液は、回収液ボトル６が加圧され、廃液ボトル９が大気に開放されているので、分配ブロック３４を介して廃液ボトル９側に排出される。ステップＳ７６では設定時間Ｔ₄の経過を待つ。設定時間Ｔ₄経過するとステップＳ７７に移行する。ステップＳ７７では電磁弁ＳＶ１，７，１２を閉じる。そして、ステップＳ７８でＬＥＤ２を消灯することにより第１洗浄工程が終了したことを告知した後、図７のステップＳ３６に移行する。

【００２９】図７のステップＳ３６の第２洗浄工程では、図１１のステップＳ８１でＬＥＤ３を点灯する。続いてステップＳ８２では、電磁弁ＳＶ１，３，８，７，１２を開く。これにより、洗浄ボトル１１及び回収液ボトル６内にＮ₂ガスが充填され、内部が加圧される。また、廃液ボトル９内が大気に開放される。すると、洗浄ボトル１５内に貯蔵された洗浄液が、電磁弁ＳＶ８，９，１０を介してカラム３２内に供給される。カラム３２内に供給された洗浄液は第１洗浄と同様にして廃液ボトル９側に流れる。ステップＳ８３では、洗浄液がカラム３２を満たしたことを液センサ３３が検出するのを待つ。液センサ３３が洗浄液を検出するとステップＳ８４に移行する。ステップＳ８４では開いた電磁弁１，３，８，７，１２をそれぞれ閉じる。以降のステップＳ８５〜ステップＳ８８での動作は、第１洗浄におけるステップＳ７５〜ステップＳ７８での動作と同様であるので説明を省略する。

【００３０】図７のステップＳ３７の乾燥工程では、図１２のステップＳ９１でＬＥＤ４を点灯する。ステップＳ９２では電磁弁ＳＶ１，２，７，１２を開き、カラム３２内にＮ₂ガスを供給する。ステップＳ９３では所定時間Ｔ₆の経過を待つ。設定時間Ｔ₆が経過するとステップＳ９４に移行する。設定時間Ｔ₆が経過するとステップＳ９４に移行し、開いた電磁弁ＳＶ１，２，７，１２を閉じる。そして、ステップＳ９５に移行してＬＥＤ４を消灯し、図７のステップＳ３８に移行する。なお、ここでは、真空中で乾燥するのではなくＮ₂ガスで乾燥するので、乾燥工程が簡略化できる。

【００３１】図７のステップＳ３８の切断工程では、図１３のステップＳ１０１でＬＥＤ５を点灯する。ステップＳ１０２では、電磁弁ＳＶ１，５，１０，７，１２をそれぞれ開く。これにより、切断液ボトル１３内に貯蔵されたＴＦＡが電磁弁ＳＶ１０を介してカラム３２内に供給される。ステップＳ１０３では液センサ３３がＴＦＡ液を検出するのを待つ。カラム３２がＴＦＡで満たされ、液センサ３３がＴＦＡ液を検出したと判断するとステップＳ１０４に移行する。ステップＳ１０４では電磁弁ＳＶ１，５，１０，７，１２を閉じる。

【００３２】ステップＳ１０５では、ヒートブロック８を温調部４１により温調する。このときの温度は２０℃〜８０℃（好ましくは３０℃〜６０℃）の範囲である。ステップＳ１０６では、設定時間Ｔ₇（５分〜１時間）の経過を待つ。ステップＳ１０６で設定時間Ｔ₇が経過したと判断するとステップＳ１０７に移行する。ステップＳ１０７では温調を終了する。ステップＳ１０８では、電磁弁ＳＶ１，２，６，１３を開く。これにより、廃液ボトル９内が加圧されるとともに回収ボトル６内が大気に開放される。そしてＮ₂ガスがカラム３２、分配ブロック３４を通じて回収ボトル６側に噴き出すことで、カラム３２内がパージされる。ステップＳ１０９では設定時間Ｔ₈の経過を待つ。設定時間Ｔ₈が経過するとステップＳ１１０に移行し、電磁弁ＳＶ１，２，６，１３を閉じる。そして、ステップＳ１１１でＬＥＤ５を消灯した後、図７のステップＳ３９に移行する。

【００３３】図７のステップＳ３９の回収処理では、図１４のステップＳ１２１でＬＥＤ６を点灯する。ステップＳ１２２では電磁弁ＳＶ１，４，９，６，１３を開く。これにより、回収液ボトル１１及び廃液ボトル９内が加圧され、回収ボトル６内が大気に開放される。これにしたがって、回収液ボトル１１内の回収液が電磁弁ＳＶ９，計量管３１及び電磁弁ＳＶ１０を介してカラム３２内に供給される。ステップＳ１２３では、液センサ３３が回収液を検出するのを待つ。液センサ３３が回収液を検出するとステップＳ１２４に移行する。ステップＳ１２４では電磁弁ＳＶ１，４，９，６，１３を閉じる。続いてステップＳ１２２では、電磁弁ＳＶ１，２，６，１３を開く。これによりカラム３２内で切断されたＣ末端ペプチドの回収液は分配ブロック３４を介して回収ボトル６に回収される。ステップＳ１２６では設定時間Ｔ₉の経過を待つ。設定時間Ｔ₉が経過するとステップＳ１２７に移行し、電磁弁ＳＶ１，２，６，１３を閉じる。これにより、カラム３２内に残ったＣ末端ペプチドが効率良く回収ボトル６内に回収されたことになり、ステップＳ１２８でＬＥＤ６を消灯した後、図７のステップＳ４０に移行する。

【００３４】図７のステップＳ４０の濃縮処理ルーチンでは、図１５のステップＳ１３１でＬＥＤ７を点灯する。ステップＳ１３２では、電磁弁ＳＶ１，７，１３を開く。これによりＮ₂ガスが回収ボトル６に流れ、回収ボトル６内の回収液が蒸発して濃縮される。ステップＳ１３３では、設定時間Ｔ₁₀の経過を待つ。この設定時間はたとえば３時間程度である。ステップＳ１３４では電磁弁ＳＶ１，７，１３を閉じる。そして、ステップＳ１３５でＬＥＤ７を消灯した後、図７のステップＳ４１に移行する。

【００３５】ステップＳ４１では、ステップＳ３（図５）でＬＥＤ８を点灯させるため、変数ｓを「１」にセットする。この一連の順次処理が終了した時点では、切断液ボトル１３内が加圧されたままであり、電磁弁ＳＶ１０と切断液ボトル１３とを接続する配管にはＴＦＡが残留している。この配管内のＴＦＡを除去するためには、ＴＦＡ回収キーＫ２を操作する。

【００３６】図５のステップＳ１４のＴＦＡ回収処理では、図１６のステップＳ１４１でＴＦＡ回収キーＫ２に設けられたＬＥＤを点灯する。ステップＳ１４２では、電磁弁ＳＶ１，２，１０，１１を開く。これにより、切断液ボトル１３内が大気圧に開放されるとともに、電磁弁ＳＶ１０を介して切断液ボトル１３へとＮ₂ガスが流れ、配管に残留していたＴＦＡ液が切断液ボトル１３に回収される。ステップＳ１４３では、設定時間Ｔ₁₁の経過を待つ。この設定時間Ｔ₁₁は、配管内のＴＦＡ液を回収するのに充分な時間である。設定時間Ｔ₁₁が経過したと判断するとステップＳ１４４に移行する。

【００３７】ステップＳ１４４では、電磁弁ＳＶ１，２，１０を閉じる。ステップＳ１４５では設定時間Ｔ₁₂の経過を待つ。この設定時間Ｔ₁₂は、切断液ボトル１３を大気圧にするのに充分な時間である。設定時間Ｔ₁₂が経過するとステップＳ１４６に移行する。そして、ステップＳ１４６で電磁弁ＳＶ１１を閉じた後、メインルーチンに戻る。

【００３８】また、前記一連の順次処理の途中で処理を中断したい場合には、ストップキーＫ５を押す。ストップキーＫ５が操作されると、割り込み処理がかかり、図６に示すストップ処理が実行される。図６のステップＳ２１では、順次処理中における動作を一端停止する。ステップＳ２２では、ストップキーＫ５が再度操作されたか否かを判断する。ストップキーＫ５が操作されていないと判断するとステップＳ２４に移行する。ステップＳ２４では、ランキーＫ４が操作されたか否かを判断する。ランキーＫ４が操作されていない場合にはステップＳ２１に戻り中断状態を続ける。

【００３９】ここで、ストップキーＫ５が再度操作されたとすると、プログラムはステップＳ２２からステップＳ２３に移行する。ステップＳ２３では、処理工程を最初に戻すため、次の処理が図５のステップＳ２から始まるようにプログラムカウンタを変更し、この処理を終了する。またランキーＫ４が操作された場合には、ステップＳ２５に移行する。ステップＳ２５では中断された動作を再開する。

【００４０】上述の実施例では、カラム３２に固相支持体を充填し、ペプチドフラグメント混合物を注入してヒートブロック８に装着し、各ボトルを対応する取付部に装着するだけの簡単な操作で、ペプチドフラグメント混合物からＣ末端フラグメントを分取することができる。このため、ペプチドからＣ末端フラグメントを熟練を要さず簡単に再現性良く分取できる。

【００４１】また、ＴＦＡ回収処理により、配管内に残留した試薬を回収できるので、配管からのＴＦＡ蒸気の拡散を減少でき、腐食等のトラブルを軽減できる。さらに、廃液ボトル９と回収ボトル６とを選択的に加圧及び大気圧に開放することによりカラム３２からの液を振り分けているので、振り分け流路中に電磁弁を設ける必要がなくなる。このため、反応カラム等の下流側のデッドボリュームを小さくできでき、たとえば尿素のように乾くと析出する試料や試薬を用いても、長期間の使用が可能となる。

【００４２】〔他の実施例〕（ａ）前記実施例では、ＴＦＡ回収処理を独立して行うように構成したが、ＴＦＡ液による切断終了の都度、自動的に行うようにしてもよい。（ｂ）前記実施例では、切断用のＴＦＡだけを回収するように構成したが他の試薬を回収するようにしてもよい。

【００４３】

【考案の効果】

本考案に係るペプチドフラグメント分取装置では、試薬回収手段により配管に残留する試薬が試薬収納部に回収されるので、配管内に残留する試薬が少なくなる。これによりコンタミネーションの危険が大幅に減少し、また装置の寿命も格段に長くなる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本考案の一実施例によるペプチドフラグメント
分取装置の斜視外観図。

【図２】その操作パネルの正面図。

【図３】その配管系の概略図。

【図４】その制御系のブロック図。

【図５】その制御フローチャート。

【図６】その制御フローチャート。

【図７】その制御フローチャート。

【図８】その制御フローチャート。

【図９】その制御フローチャート。

【図１０】その制御フローチャート。

【図１１】その制御フローチャート。

【図１２】その制御フローチャート。

【図１３】その制御フローチャート。

【図１４】その制御フローチャート。

【図１５】その制御フローチャート。

【図１６】その制御フローチャート。

【符号の説明】

１ペプチドフラグメント分取装置６回収ボトル８ヒートブロック１３切断液ボトル３２反応容器４０制御部ＳＶ５，ＳＶ１１電磁弁

Claims

【実用新案登録請求の範囲】

【請求項１】ポリペプチド中のリジン残基とそれに続く
カルボキシル末端側のアミノ酸残基との間のペプチド結
合が特異的に切断されたペプチドフラグメント混合物か
らカルボキシル末端ペプチドフラグメントを分取する装
置であって、前記ペプチドフラグメント混合物と固相支持体とを充填
する反応容器と、前記反応容器内の温度を調整して前記ペプチドフラグメ
ント混合物を固相支持体に共有結合するカップリング手
段と、試薬を収納する試薬収納部を有し、前記試薬収納部から
配管を介して前記試薬を前記反応容器に供給するための
試薬供給手段と、前記反応容器からのペプチドフラグメントを回収する回
収手段と、前記配管に残留する前記試薬を前記試薬収納部に回収す
る試薬回収手段と、を備えたペプチドフラグメント分取装置。