JPH0646835A - マロニル−７−アミノセファロスポラン酸誘導体の微生物学的製造方法 - Google Patents
マロニル−７−アミノセファロスポラン酸誘導体の微生物学的製造方法Info
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- JPH0646835A JPH0646835A JP5087652A JP8765293A JPH0646835A JP H0646835 A JPH0646835 A JP H0646835A JP 5087652 A JP5087652 A JP 5087652A JP 8765293 A JP8765293 A JP 8765293A JP H0646835 A JPH0646835 A JP H0646835A
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C07D505/00—Heterocyclic compounds containing 5-oxa-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. oxacephalosporins; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulfur-containing hetero ring
- C07D505/10—Heterocyclic compounds containing 5-oxa-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. oxacephalosporins; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulfur-containing hetero ring with a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. an ester or nitrile radical, directly attached in position 2
- C07D505/12—Heterocyclic compounds containing 5-oxa-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. oxacephalosporins; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulfur-containing hetero ring with a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. an ester or nitrile radical, directly attached in position 2 substituted in position 7
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【目的】 マロニル−７−アミノセファロスポラン酸誘
導体、７−アミノセファロスポラン酸誘導体の微生物を
利用した製造法の提供。 【構成】 式ＩのセファロスポリンＣ誘導体またはそれ
らの可溶性塩を原料として、式IIのマロニル−７−アミ
ノセファロスポラン酸誘導体またはそれらの可溶性塩を
製造し、さらに、このマロニル−７−アミノセファロス
ポラン酸誘導体を原料として、式IIIの７−アミノセフ
ァロスポラン酸誘導体を製造する微生物学的方法を提供
する。I→IIにスフィンゴモス ｓｐ．ＦＢ１（ＤＳＭ
７００７）を、II→IIIにシュードモナス ｓｐ．
（ＤＳＭ７５０９）を、それぞれ利用する。 （ＲはＨ，ＯＨ，ＯＣＯＨ３）
導体、７−アミノセファロスポラン酸誘導体の微生物を
利用した製造法の提供。 【構成】 式ＩのセファロスポリンＣ誘導体またはそれ
らの可溶性塩を原料として、式IIのマロニル−７−アミ
ノセファロスポラン酸誘導体またはそれらの可溶性塩を
製造し、さらに、このマロニル−７−アミノセファロス
ポラン酸誘導体を原料として、式IIIの７−アミノセフ
ァロスポラン酸誘導体を製造する微生物学的方法を提供
する。I→IIにスフィンゴモス ｓｐ．ＦＢ１（ＤＳＭ
７００７）を、II→IIIにシュードモナス ｓｐ．
（ＤＳＭ７５０９）を、それぞれ利用する。 （ＲはＨ，ＯＨ，ＯＣＯＨ３）
Description
【０００１】本発明は、一般式
【０００２】
【化７】
【０００３】［式中、Ｒは水素原子、ヒドロキシ基また
はアセトキシ基を意味する。］の新規なマロニル−７−
アミノセファロスポラン酸誘導体またはそれらの可溶性
塩、それらの物質を対応するセファロスポリンＣ誘導体
から製造するための新規な方法、ならびにその方法に適
した新規な微生物に関する。
はアセトキシ基を意味する。］の新規なマロニル−７−
アミノセファロスポラン酸誘導体またはそれらの可溶性
塩、それらの物質を対応するセファロスポリンＣ誘導体
から製造するための新規な方法、ならびにその方法に適
した新規な微生物に関する。
【０００４】さらに本発明は、マロニル−７−アミノセ
ファロスポラン酸誘導体を原料として７−アミノセファ
ロスポラン酸誘導体を製造するための新規な微生物学的
方法、ならびにシュードモナス ｓｐ．（ＤＳＭ ７５
０９）種の微生物の新規な使用にも関する。
ファロスポラン酸誘導体を原料として７−アミノセファ
ロスポラン酸誘導体を製造するための新規な微生物学的
方法、ならびにシュードモナス ｓｐ．（ＤＳＭ ７５
０９）種の微生物の新規な使用にも関する。
【０００５】以下、マロニル−７−アミノセファロスポ
ラン酸誘導体（式ＩＩＩ）、セファロスポリンＣ誘導体
（式ＩＶ）、式ＩＩのマロニルラクトンおよび式Ｉのラ
クトンとしては、それらの可溶性塩、たとえばそれらの
アンモニウム塩またはアルカリ塩も含まれるものとす
る。
ラン酸誘導体（式ＩＩＩ）、セファロスポリンＣ誘導体
（式ＩＶ）、式ＩＩのマロニルラクトンおよび式Ｉのラ
クトンとしては、それらの可溶性塩、たとえばそれらの
アンモニウム塩またはアルカリ塩も含まれるものとす
る。
【０００６】マロニル−７−アミノセファロスポラン酸
誘導体は、たとえばセファロスポリン抗生物質製造用の
重要な原料である７−アミノセファロスポラン酸誘導体
を製造するための原料として使用することができる
（Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，１９８７，Ｖｏｌ．１６
９，No.１２，５８１５〜５８２０頁）。
誘導体は、たとえばセファロスポリン抗生物質製造用の
重要な原料である７−アミノセファロスポラン酸誘導体
を製造するための原料として使用することができる
（Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，１９８７，Ｖｏｌ．１６
９，No.１２，５８１５〜５８２０頁）。
【０００７】これまで、マロニル−７−アミノセファロ
スポラン酸誘導体を製造するための化学的方法も微生物
学的方法も知られていない。 ７−アミノセファロスポ
ラン酸の製造には、たとえばＪＰ−Ａ６２４８３８０に
記載されているような、セファロスポリンＣを原料とす
る多くの微生物学的方法が知られている。 しかし、こ
れらの方法にはすべて、工業的に実行できないという欠
点がある。
スポラン酸誘導体を製造するための化学的方法も微生物
学的方法も知られていない。 ７−アミノセファロスポ
ラン酸の製造には、たとえばＪＰ−Ａ６２４８３８０に
記載されているような、セファロスポリンＣを原料とす
る多くの微生物学的方法が知られている。 しかし、こ
れらの方法にはすべて、工業的に実行できないという欠
点がある。
【０００８】本発明の目的は、新規な微生物を使用し
て、新規なマロニル−７−アミノセファロスポラン酸誘
導体を製造するための新規な、簡単で経済的な微生物学
的方法を提供することである。 別の目的は、これらの
新規な誘導体を使用して７−アミノセファロスポラン酸
誘導体を製造するための新規な微生物学的方法を提供す
ることである。
て、新規なマロニル−７−アミノセファロスポラン酸誘
導体を製造するための新規な、簡単で経済的な微生物学
的方法を提供することである。 別の目的は、これらの
新規な誘導体を使用して７−アミノセファロスポラン酸
誘導体を製造するための新規な微生物学的方法を提供す
ることである。
【０００９】これらの目的は、本発明により、それぞれ
請求項１の新規な微生物により、請求項３の新規な方法
により、請求項８の新規なマロニル−７−アミノセファ
ロスポラン酸誘導体により、および請求項１０の新規な
方法により達成される。
請求項１の新規な微生物により、請求項３の新規な方法
により、請求項８の新規なマロニル−７−アミノセファ
ロスポラン酸誘導体により、および請求項１０の新規な
方法により達成される。
【００１０】本発明の微生物は、式
【００１１】
【化８】
【００１２】のラクトンを唯一の炭素、窒素およびエネ
ルギー源として利用し、これを式
ルギー源として利用し、これを式
【００１３】
【化９】
【００１４】のマロニルラクトンに変換できるが、この
マロニルラクトンは分解代謝できないように選択する。
マロニルラクトンは分解代謝できないように選択する。
【００１５】これらの微生物は、式Ｉのラクトンによ
り、通常の微生物学的技術を使用して、たとえば各種の
土壌から選択する。 すなわち、接種物としての土壌か
ら式Ｉのラクトンにより微生物を培養し、このラクトン
を唯一の炭素、窒素およびエネルギー源として成長でき
る微生物を得る。 次いで、これらの微生物から、当業
者には一般的な方法により、式Ｉのラクトンを式ＩＩの
マロニルラクトンに変換するがこのマロニルラクトンを
代謝することはない微生物を選択する。
り、通常の微生物学的技術を使用して、たとえば各種の
土壌から選択する。 すなわち、接種物としての土壌か
ら式Ｉのラクトンにより微生物を培養し、このラクトン
を唯一の炭素、窒素およびエネルギー源として成長でき
る微生物を得る。 次いで、これらの微生物から、当業
者には一般的な方法により、式Ｉのラクトンを式ＩＩの
マロニルラクトンに変換するがこのマロニルラクトンを
代謝することはない微生物を選択する。
【００１６】この選択に必要な式Ｉのラクトンは、市販
のデスアセチルセファロスポリンＣから得ることができ
る。 これにはまず既知の方法（ジョフリーら，Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ．Ｊ，１９６１，８１，５９１頁）により、デ
スアセチルセファロスポリンＣを対応するラクトンにラ
クトン化する。 次いで式Ｉの、ラクタム環が開裂した
望ましいラクトンを形成するために、ラクタム環をたと
えばペニシリナーゼで開裂させる。
のデスアセチルセファロスポリンＣから得ることができ
る。 これにはまず既知の方法（ジョフリーら，Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ．Ｊ，１９６１，８１，５９１頁）により、デ
スアセチルセファロスポリンＣを対応するラクトンにラ
クトン化する。 次いで式Ｉの、ラクタム環が開裂した
望ましいラクトンを形成するために、ラクタム環をたと
えばペニシリナーゼで開裂させる。
【００１７】原則的に、この淘汰圧下で得られたすべて
の微生物が好適である。 これらの微生物は文献には記
載がなく、本発明の構成要素である。
の微生物が好適である。 これらの微生物は文献には記
載がなく、本発明の構成要素である。
【００１８】この選択により、ＦＢ１（ＤＳＭ ７００
７）の記号を有する微生物ならびにそれらの突然変異体
および子孫を得ることが有利である。 これらの微生物
は、１９９２年３月２５日にドイチェン・ザムルング・
フュア・ミクロオルガニズメン・ウント・ツェルクルト
ゥーレン ＧｍｂＨ，マシェローデヴェーク１ｂ，Ｄ−
３３００ ブラウンシュバイクに寄託されている。
７）の記号を有する微生物ならびにそれらの突然変異体
および子孫を得ることが有利である。 これらの微生物
は、１９９２年３月２５日にドイチェン・ザムルング・
フュア・ミクロオルガニズメン・ウント・ツェルクルト
ゥーレン ＧｍｂＨ，マシェローデヴェーク１ｂ，Ｄ−
３３００ ブラウンシュバイクに寄託されている。
【００１９】これらの微生物は、本出願の優先日の後、
１６Ｓ ＲＮＡ分析によりスフィンゴモナス ｓｐ．に
属することが確認されている。
１６Ｓ ＲＮＡ分析によりスフィンゴモナス ｓｐ．に
属することが確認されている。
【００２０】スフィンゴモナス ｓｐ． ＦＢ１（ＤＳＭ ７００７）の科学的データ： 細胞形態 微小桿状 幅μｍ ０．４〜０．６ 長さμｍ ０．８〜１．５ 移動性 ＋ べん毛 極性１ グラム反応 − ３％ＫＯＨによる分解 ＋ アミノペプチダーゼ（セルニー） ＋ 胞子 − オキシダーゼ ＋ カタラーゼ ＋ 主キノン成分：ユビキノンＱ１０ ＨＰＬＣ高速法によるＤＮＡ塩基構成：６３モル％Ｇ＋
Ｃ 通常の方法により、選択および培養を鉱物塩培地、好ま
しくは表１（ａおよびｂ）に組成を示す鉱物塩培地中で
行なう。 選択後の微生物の培養には、他の培地、たと
えば市販の完全培地も考えられる。
Ｃ 通常の方法により、選択および培養を鉱物塩培地、好ま
しくは表１（ａおよびｂ）に組成を示す鉱物塩培地中で
行なう。 選択後の微生物の培養には、他の培地、たと
えば市販の完全培地も考えられる。
【００２１】培養および選択には、式Ｉのラクトンを
０．２〜１重量％、好ましくは０．３〜０．６重量％の
量で鉱物塩培地に加える。
０．２〜１重量％、好ましくは０．３〜０．６重量％の
量で鉱物塩培地に加える。
【００２２】選択および培養の際、温度は０〜６０℃、
好ましくは２０〜４０℃の間にあるのが有利である。
好ましくは２０〜４０℃の間にあるのが有利である。
【００２３】選択および培養は、ｐＨ５〜９、好ましく
は６〜８で行なうのが有利である。
は６〜８で行なうのが有利である。
【００２４】好適な６５０ｎｍにおける光学密度（ＯＤ
650）０．１〜１に達したら、微生物を当業者には一般
的な方法により収穫し、本発明の方法に使用することが
できる。
650）０．１〜１に達したら、微生物を当業者には一般
的な方法により収穫し、本発明の方法に使用することが
できる。
【００２５】このようにして選択した微生物を、本発明
により、基質として使用する一般式
により、基質として使用する一般式
【００２６】
【化１０】
【００２７】［式中、Ｒは水素原子、ヒドロキシ基また
はアセトキシ基を意味する。］のセファロスポリンＣ誘
導体を、一般式
はアセトキシ基を意味する。］のセファロスポリンＣ誘
導体を、一般式
【００２８】
【化１１】
【００２９】［式中、Ｒは上記の意味を有する。］のマ
ロニル−７−アミノセファロスポラン酸誘導体に変換す
る本発明の方法に使用する。
ロニル−７−アミノセファロスポラン酸誘導体に変換す
る本発明の方法に使用する。
【００３０】本方法は、選択した、すでに説明したよう
に寄託してある微生物スフィンゴマナス ｓｐ．ＦＢ１
（ＤＳＭ ７００７）またはそれらの子孫および突然変
異体で行なうのが有利である。
に寄託してある微生物スフィンゴマナス ｓｐ．ＦＢ１
（ＤＳＭ ７００７）またはそれらの子孫および突然変
異体で行なうのが有利である。
【００３１】通常、この方法は当業者には一般的な方法
により、成長していない細胞で行なう。
により、成長していない細胞で行なう。
【００３２】基質としては、Ｒが上記の意味を有する一
般式ＩＶのセファロスポリンＣ誘導体を使用する。 好
ましくは、基質としてセファロスポリンＣ（一般式ＩＩ
Ｉ中のＲ＝アセトキシ基）を使用する。
般式ＩＶのセファロスポリンＣ誘導体を使用する。 好
ましくは、基質としてセファロスポリンＣ（一般式ＩＩ
Ｉ中のＲ＝アセトキシ基）を使用する。
【００３３】本方法では、基質を一度に、または連続的
に加えることができる。 基質は、培養基中の基質濃度
が２０重量％、好ましくは４重量％を超えないようにし
て加えるのが有利である。
に加えることができる。 基質は、培養基中の基質濃度
が２０重量％、好ましくは４重量％を超えないようにし
て加えるのが有利である。
【００３４】本方法では、培養基として、当業者には一
般的な培養基を使用することができる。 本方法は低分
子量ＨＥＰＥＳ緩衝液（４−（２−ヒドロキシエチル）
−ピペラジン−１−エタン−スルホン酸）中で行なうの
が有利である。
般的な培養基を使用することができる。 本方法は低分
子量ＨＥＰＥＳ緩衝液（４−（２−ヒドロキシエチル）
−ピペラジン−１−エタン−スルホン酸）中で行なうの
が有利である。
【００３５】通常、本方法はＯＤ650が１〜１００、好
ましくは２〜５０の微生物懸濁液で行なう。
ましくは２〜５０の微生物懸濁液で行なう。
【００３６】本方法は、温度０〜６０℃、好ましくは２
０〜４０℃、およびｐＨ５〜９、好ましくは６〜８で行
なうのが有利である。
０〜４０℃、およびｐＨ５〜９、好ましくは６〜８で行
なうのが有利である。
【００３７】通常１〜２４時間の変換期間の後、文献未
記載の式ＩＩＩのマロニル−７−アミノセファロスポラ
ン酸誘導体を、当業者には既知の常法により分離するこ
とができる。 好ましいマロニル−７−アミノセファロ
スポラン酸誘導体として、マロニル−７−アミノセファ
ロスポラン酸（一般式ＩＩＩのＲ＝アセトキシ基）が分
離される。
記載の式ＩＩＩのマロニル−７−アミノセファロスポラ
ン酸誘導体を、当業者には既知の常法により分離するこ
とができる。 好ましいマロニル−７−アミノセファロ
スポラン酸誘導体として、マロニル−７−アミノセファ
ロスポラン酸（一般式ＩＩＩのＲ＝アセトキシ基）が分
離される。
【００３８】一般式
【００３９】
【化１２】
【００４０】［式中、Ｒは上記の意味を有する。］の７
−アミノセファロスポラン酸誘導体を製造するための本
発明の方法においては、一般式ＩＩＩのマロニル−７−
アミノセファロスポラン酸誘導体またはそれらの可溶性
塩を基質として使用し、これをシュードモナス ｓｐ．
（ＤＳＭ ７５０９）種の微生物またはそれらの子孫お
よび突然変異体、またはこれらの微生物から得た無細胞
酵素により式Ｖの物質に変換する。
−アミノセファロスポラン酸誘導体を製造するための本
発明の方法においては、一般式ＩＩＩのマロニル−７−
アミノセファロスポラン酸誘導体またはそれらの可溶性
塩を基質として使用し、これをシュードモナス ｓｐ．
（ＤＳＭ ７５０９）種の微生物またはそれらの子孫お
よび突然変異体、またはこれらの微生物から得た無細胞
酵素により式Ｖの物質に変換する。
【００４１】微生物シュードモナス ｓｐ．（ＤＳＭ
７５０９）は、１９９３年３月５日にドイチェン・ザム
ルング・フュア・ミクロオルガニズメン・ウント・ツェ
ルクルトゥーレン ＧｍｂＨ，マシェローデヴェーク１
ｂ，Ｄ−３３００ ブラウンシュバイクに寄託されてい
る。
７５０９）は、１９９３年３月５日にドイチェン・ザム
ルング・フュア・ミクロオルガニズメン・ウント・ツェ
ルクルトゥーレン ＧｍｂＨ，マシェローデヴェーク１
ｂ，Ｄ−３３００ ブラウンシュバイクに寄託されてい
る。
【００４２】これらの微生物は既知であり、ＪＰ−Ａ６
２４８３８０に微生物シュードモナス ｓｐ．ＳＥ−４
９５（ＦＥＲＭ ＢＰ−８１８）として記載されてい
る。ＪＰ−Ａ６２４８３８０では、これらの微生物は、
グルタリル−７−アミノセファロスポラン酸を７−アミ
ノセファロスポラン酸に加水分解させるようにして選択
されている。 これらの微生物のマロニル−７−アミノ
セファロスポラン酸の加水分解への使用は、上記文献に
は記載されていない。
２４８３８０に微生物シュードモナス ｓｐ．ＳＥ−４
９５（ＦＥＲＭ ＢＰ−８１８）として記載されてい
る。ＪＰ−Ａ６２４８３８０では、これらの微生物は、
グルタリル−７−アミノセファロスポラン酸を７−アミ
ノセファロスポラン酸に加水分解させるようにして選択
されている。 これらの微生物のマロニル−７−アミノ
セファロスポラン酸の加水分解への使用は、上記文献に
は記載されていない。
【００４３】本発明はさらにこれらの微生物のマロニル
−７−アミノセファロスポラン酸誘導体（式Ｖ）、好ま
しくはマロニル−７−アミノセファロスポラン酸（Ｒ＝
アセトキシ）の加水分解のための使用にも関する。
−７−アミノセファロスポラン酸誘導体（式Ｖ）、好ま
しくはマロニル−７−アミノセファロスポラン酸（Ｒ＝
アセトキシ）の加水分解のための使用にも関する。
【００４４】この方法は、浸透性化した微生物細胞によ
るか、あるいは無細胞酵素抽出物により行なう。 とく
に、無細胞酵素抽出物により行なうのが有利である。
るか、あるいは無細胞酵素抽出物により行なう。 とく
に、無細胞酵素抽出物により行なうのが有利である。
【００４５】無細胞酵素抽出物の製造には、たとえば超
音波または「フレンチプレス」処理のような、当業者に
とっては通常の方法を使用することができる。
音波または「フレンチプレス」処理のような、当業者に
とっては通常の方法を使用することができる。
【００４６】基質としては、Ｒが上記の意味を有する一
般式Ｖのマロニル−７−アミノセファロスポラン酸誘導
体を使用することができる。 基質としてマロニル−７
−アミノセファロスポラン酸（Ｒ＝アセトキシ）を使用
するのが有利である。
般式Ｖのマロニル−７−アミノセファロスポラン酸誘導
体を使用することができる。 基質としてマロニル−７
−アミノセファロスポラン酸（Ｒ＝アセトキシ）を使用
するのが有利である。
【００４７】基質は一度に、または連続的に加えること
ができるが、培養基中の基質濃度が１０重量％、好まし
くは２重量％を超えないようにするのが有利である。
ができるが、培養基中の基質濃度が１０重量％、好まし
くは２重量％を超えないようにするのが有利である。
【００４８】この方法には、培養基として、当業者には
一般的な栄養培地を使用することができる。
一般的な栄養培地を使用することができる。
【００４９】本方法を無細胞酵素抽出物で行なう場合、
この抽出物のタンパク質濃度は０．１〜２０ｇ／ｌ、好
ましくは１〜５ｇ／ｌであるのが有利である。
この抽出物のタンパク質濃度は０．１〜２０ｇ／ｌ、好
ましくは１〜５ｇ／ｌであるのが有利である。
【００５０】本方法は、温度４〜５０℃、好ましくは２
０〜３５℃、およびｐＨ４〜９、好ましくは７〜８で行
なうのが有利である。
０〜３５℃、およびｐＨ４〜９、好ましくは７〜８で行
なうのが有利である。
【００５１】通常３〜２４時間の変換期間の後、式Ｖの
７−アミノセファロスポラン酸誘導体を分離することが
できる。
７−アミノセファロスポラン酸誘導体を分離することが
できる。
【００５２】
【実施例１】微生物の分離 開裂したラクタム環を有するラクトン（式Ｉ）５ｍｍｏ
ｌ（０．５ｍｍｏｌ／１００ｍｌ）を含む鉱物塩培養基
（表１）、ｐＨ７．０、１００ｍｌに、接種物としてヴ
ィスプ（スイス）の近辺から採取した各種の土壌を加
え、２５℃で１４０ｒｐｍ（回転／分）で振とうしなが
ら培養した。この培養菌を新しい鉱物塩培養基に４回接
種し、続いてラクトン変換についてＨＰＬＣ分析した。
ｌ（０．５ｍｍｏｌ／１００ｍｌ）を含む鉱物塩培養基
（表１）、ｐＨ７．０、１００ｍｌに、接種物としてヴ
ィスプ（スイス）の近辺から採取した各種の土壌を加
え、２５℃で１４０ｒｐｍ（回転／分）で振とうしなが
ら培養した。この培養菌を新しい鉱物塩培養基に４回接
種し、続いてラクトン変換についてＨＰＬＣ分析した。
【００５３】次いで、これらの培養菌を、５ｍｍｏｌの
ラクトン（式Ｉ）を含む鉱物塩−寒天皿上で２５℃で培
養した。 続いて、成長の際にこのラクトンから式ＩＩ
のマロニルラクトンを形成し、それを完全に分解しない
細菌種スフィンゴモナス ｓｐ．ＦＢ１（ＤＳＭ ７０
０７）を分離した。
ラクトン（式Ｉ）を含む鉱物塩−寒天皿上で２５℃で培
養した。 続いて、成長の際にこのラクトンから式ＩＩ
のマロニルラクトンを形成し、それを完全に分解しない
細菌種スフィンゴモナス ｓｐ．ＦＢ１（ＤＳＭ ７０
０７）を分離した。
【００５４】
【実施例２】マロニル−７−アミノセファロスポラン酸（式ＩＩＩ）
の形成 スフィンゴモナス ｓｐ． ＦＢ１（ＤＳＭ ７００７）
を、ラクトン（式Ｉ）５ｍｍｏｌを含む鉱物塩培養基
で、４日以内にＯＤ650＝０．４４になるまで培養し
た。 （最初の２日間の後にこのラクトンを再度加えた
ので、総濃度は培養基１００ｍｌあたりラクトン１ｍｍ
ｏｌになる） 続いて細胞を遠心分離し、細胞ペレット
を２０ｍｌの１０ｍｍｏｌ−ＨＥＰＥＳ緩衝液、ｐＨ
７．０、に再分散させ、その際ＯＤ650を２．２に調整
した。 この細胞懸濁液にセファロスポリンＣ（式Ｉ
Ｖ）０．４ｍｍｏｌを加えた。 振とう装置上（１４０
ｒｐｍ）、２５℃で培養した。
の形成 スフィンゴモナス ｓｐ． ＦＢ１（ＤＳＭ ７００７）
を、ラクトン（式Ｉ）５ｍｍｏｌを含む鉱物塩培養基
で、４日以内にＯＤ650＝０．４４になるまで培養し
た。 （最初の２日間の後にこのラクトンを再度加えた
ので、総濃度は培養基１００ｍｌあたりラクトン１ｍｍ
ｏｌになる） 続いて細胞を遠心分離し、細胞ペレット
を２０ｍｌの１０ｍｍｏｌ−ＨＥＰＥＳ緩衝液、ｐＨ
７．０、に再分散させ、その際ＯＤ650を２．２に調整
した。 この細胞懸濁液にセファロスポリンＣ（式Ｉ
Ｖ）０．４ｍｍｏｌを加えた。 振とう装置上（１４０
ｒｐｍ）、２５℃で培養した。
【００５５】３０分、６０分、２．２５時間、５．０時
間および２４時間後にそれぞれ試料をＨＰＬＣ分析にか
けた。
間および２４時間後にそれぞれ試料をＨＰＬＣ分析にか
けた。
【００５６】マロニル−７−アミノセファロスポラン酸
の形成速度は２．２５時間で４１０ｍｇ／ｌ／ｈ／ＯＤ
650であった。
の形成速度は２．２５時間で４１０ｍｇ／ｌ／ｈ／ＯＤ
650であった。
【００５７】５時間後には１４２ｍｇのマロニル−７−
アミノセファロスポラン酸が分析により確認されたが、
これはセファロスポリンＣの９９％変換に相当する。
マロニル−７−アミノセファロスポラン酸は、調整ＨＰ
ＬＣにより４０％の収率で分離することができた。
アミノセファロスポラン酸が分析により確認されたが、
これはセファロスポリンＣの９９％変換に相当する。
マロニル−７−アミノセファロスポラン酸は、調整ＨＰ
ＬＣにより４０％の収率で分離することができた。
【００５８】
【実施例３】マロニル−７−アミノセファロスポラン酸（式ＩＩＩ）
の確認 生成物（式ＩＩＩ）を確認するために、鉱物塩培養基
（表１）、ｐＨ７．０、５００ｍｌに対して、式Ｉのラ
クトン溶液を、その最終濃度が５ｍｍｏｌになるように
加えた。 次いで、この溶液にＯＤ650＝０．５の予培
養菌を、２５℃で１４０ｒｐｍで接種した。 １日後に
再度、培養基５００ｍｌあたり５ｍｍｏｌのラクトン
（式Ｉ）を加えた。 ＯＤ650が０．５に達したとき、
細胞を収穫した。 次いでこの細胞ペレットを、セファ
ロスポリンＣ（式ＩＶ）０．６ｍｍｏｌを含む１０ｍｍ
ｏｌのＨＥＰＥＳ緩衝液、ｐＨ７．０、３０ｍｌ中に再
分散させた。 ２５℃、１４０ｒｐｍで５時間培養した
後、細胞を遠心分離し、上澄み液からマロニル−７−ア
ミノセファロスポラン酸を調整ＨＰＬＣで精製して採取
した。 精製した試料を一晩かけて凍結乾燥させ、その
凍結乾燥物をＮＭＲ（１Ｈおよび１３Ｃ）により分析し
た。 化学的に製造した基準物質（Ｂｕｌｌ．Ｓｏｃ．
Ｃｈｅｍ．Ｂｅｌｇ．，１９７７，８６，９９１〜１０
０２頁に従い、７−アミノセファロスポラン酸から製
造）と比較することにより、マロニル−７−アミノセフ
ァロスポラン酸の形成が確認された。
の確認 生成物（式ＩＩＩ）を確認するために、鉱物塩培養基
（表１）、ｐＨ７．０、５００ｍｌに対して、式Ｉのラ
クトン溶液を、その最終濃度が５ｍｍｏｌになるように
加えた。 次いで、この溶液にＯＤ650＝０．５の予培
養菌を、２５℃で１４０ｒｐｍで接種した。 １日後に
再度、培養基５００ｍｌあたり５ｍｍｏｌのラクトン
（式Ｉ）を加えた。 ＯＤ650が０．５に達したとき、
細胞を収穫した。 次いでこの細胞ペレットを、セファ
ロスポリンＣ（式ＩＶ）０．６ｍｍｏｌを含む１０ｍｍ
ｏｌのＨＥＰＥＳ緩衝液、ｐＨ７．０、３０ｍｌ中に再
分散させた。 ２５℃、１４０ｒｐｍで５時間培養した
後、細胞を遠心分離し、上澄み液からマロニル−７−ア
ミノセファロスポラン酸を調整ＨＰＬＣで精製して採取
した。 精製した試料を一晩かけて凍結乾燥させ、その
凍結乾燥物をＮＭＲ（１Ｈおよび１３Ｃ）により分析し
た。 化学的に製造した基準物質（Ｂｕｌｌ．Ｓｏｃ．
Ｃｈｅｍ．Ｂｅｌｇ．，１９７７，８６，９９１〜１０
０２頁に従い、７−アミノセファロスポラン酸から製
造）と比較することにより、マロニル−７−アミノセフ
ァロスポラン酸の形成が確認された。
【００５９】マロニル−７−アミノセファロスポラン酸
ナトリウム塩（化学的標準）13 Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００．５ＭＨｚ，δ ｐｐ
ｍ） ２０，ｓ；２５，ｓ；４０，ｍ；５８，ｄ；６４，ｓ；
１１２，ｓ；１３４，ｓ；１６４，ｄ；１７０，ｔ マロニル−７−アミノセファロスポラン酸（本発明の製
品）13 Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００．５ＭＨｚ，δ ｐｐ
ｍ） ２０，ｓ；２５，ｓ；４０，Ｍ；５８，ｄ；６４，ｓ；
１１２，ｓ；１３４，ｓ；１６４，ｄ；１７０，ｔ1 Ｈ−ＮＭＲ（化学的標準，ＤＭＳＯ，４００ＭＨｚ，
δ ｐｐｍ） ２０，ｓ；２．５，ｓ；３．０，ｔ；３．５，ｍ；４．
８，ｄ；５．０，ｄ；５．６，ｄ1 Ｈ−ＮＭＲ（本発明の製品） ２０，ｓ；２．５，ｓ；３．０，ｔ；３．５，ｍ；４．
８，ｄ；５．０，ｄ；５．６，ｄ。
ナトリウム塩（化学的標準）13 Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００．５ＭＨｚ，δ ｐｐ
ｍ） ２０，ｓ；２５，ｓ；４０，ｍ；５８，ｄ；６４，ｓ；
１１２，ｓ；１３４，ｓ；１６４，ｄ；１７０，ｔ マロニル−７−アミノセファロスポラン酸（本発明の製
品）13 Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００．５ＭＨｚ，δ ｐｐ
ｍ） ２０，ｓ；２５，ｓ；４０，Ｍ；５８，ｄ；６４，ｓ；
１１２，ｓ；１３４，ｓ；１６４，ｄ；１７０，ｔ1 Ｈ−ＮＭＲ（化学的標準，ＤＭＳＯ，４００ＭＨｚ，
δ ｐｐｍ） ２０，ｓ；２．５，ｓ；３．０，ｔ；３．５，ｍ；４．
８，ｄ；５．０，ｄ；５．６，ｄ1 Ｈ−ＮＭＲ（本発明の製品） ２０，ｓ；２．５，ｓ；３．０，ｔ；３．５，ｍ；４．
８，ｄ；５．０，ｄ；５．６，ｄ。
【００６０】
【実施例４】デスアセチルセファロスポリンのラクトン化 デスアセチルセファロスポリンＣ（チバガイギーＡＧ、
バーゼル）を原料として、デスアセチルセファロスポリ
ンＣ−ラクトンを下記のようにして製造した。デスアセ
チルセファロスポリンＣ１００ｇを２０ｍｍｏｌリン酸
ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．０、１リットルに溶解させ
た。 この溶液に、イオン交換体（ダウエックス５０ｘ
８（フルカ）（Ｈ+形）をｐＨ２．５になるまで加え
た。 １０分間撹拌（２５０ｒｐｍ、室温）した後、イ
オン交換樹脂を濾別し、溶液のｐＨを濃塩酸で０．８に
調節した。１時間撹拌（室温、２５０ｒｐｍ）した後、
この反応溶液にダウエックス１ｘ８（酢酸塩形）(フル
カ)をｐＨが３．０〜３．２になるまで加えた。
バーゼル）を原料として、デスアセチルセファロスポリ
ンＣ−ラクトンを下記のようにして製造した。デスアセ
チルセファロスポリンＣ１００ｇを２０ｍｍｏｌリン酸
ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．０、１リットルに溶解させ
た。 この溶液に、イオン交換体（ダウエックス５０ｘ
８（フルカ）（Ｈ+形）をｐＨ２．５になるまで加え
た。 １０分間撹拌（２５０ｒｐｍ、室温）した後、イ
オン交換樹脂を濾別し、溶液のｐＨを濃塩酸で０．８に
調節した。１時間撹拌（室温、２５０ｒｐｍ）した後、
この反応溶液にダウエックス１ｘ８（酢酸塩形）(フル
カ)をｐＨが３．０〜３．２になるまで加えた。
【００６１】次いで、室温で２５０ｒｐｍでさらに１時
間撹拌し、続いてイオン交換樹脂を濾別した。 次に、
新たにダウエックス１ｘ８（酢酸塩形）（フルカ）をｐ
Ｈが３．３〜３．５になるまで加え、１時間撹拌（室
温、２５０ｒｐｍ）し、続いてイオン交換樹脂を濾別し
た。 続いて反応溶液を回転蒸発装置で乾燥するまで蒸
発させた（３０ｍｂａｒ、３０℃）。 なお含まれてい
る酢酸を除去するために、蒸発させた後の生成物を３５
％溶液になるまで水に溶解させ、次いでｐＨを濃塩酸で
１．５に調節した。
間撹拌し、続いてイオン交換樹脂を濾別した。 次に、
新たにダウエックス１ｘ８（酢酸塩形）（フルカ）をｐ
Ｈが３．３〜３．５になるまで加え、１時間撹拌（室
温、２５０ｒｐｍ）し、続いてイオン交換樹脂を濾別し
た。 続いて反応溶液を回転蒸発装置で乾燥するまで蒸
発させた（３０ｍｂａｒ、３０℃）。 なお含まれてい
る酢酸を除去するために、蒸発させた後の生成物を３５
％溶液になるまで水に溶解させ、次いでｐＨを濃塩酸で
１．５に調節した。
【００６２】そのようにして得られた溶液を酢酸エチル
(溶液と同じ体積)で２回抽出した。水相を一つに合わ
せ、３モルの ＫＯＨ溶液で ｐＨ３．５に調節し、回転
蒸発装置（３０ｍｂａｒ、３０℃）で蒸発させた。 続
いて生成物を乾燥機中、真空（３０ｍｂａｒ、２０℃）
下で十分に乾燥させた。
(溶液と同じ体積)で２回抽出した。水相を一つに合わ
せ、３モルの ＫＯＨ溶液で ｐＨ３．５に調節し、回転
蒸発装置（３０ｍｂａｒ、３０℃）で蒸発させた。 続
いて生成物を乾燥機中、真空（３０ｍｂａｒ、２０℃）
下で十分に乾燥させた。
【００６３】総収量は、デスアセチルセファロスポリン
Ｃ１００ｇに対して収量６０％に相当する６０ｇになっ
た。
Ｃ１００ｇに対して収量６０％に相当する６０ｇになっ
た。
【００６４】
【実施例５】開裂したラクタム環を有するラクトン（式Ｉ）の製造 ラクトン（式Ｉ）を製造するために、デスアセチルセフ
ァロスポリンＣ−ラクトンを、β−ラクタマーゼ、ペニ
シリナーゼＥ．Ｃ．3.5.2.6.（シグマ）を含む原液６
(表１ａ)中で処理した。 反応は、ペニシリナーゼを加
えた直後に開始した。 反応中、１規定ＮａＯＨ溶液を
加えてｐＨ値を７．０に維持した。 反応は、ＮａＯＨ
を加えなくてもｐＨ値が７．０で一定になったところで
終了した。反応終了後（約２時間）、この溶液を無菌濾
過（０．２μｍフィルター）し、−８０℃で保存した。
ァロスポリンＣ−ラクトンを、β−ラクタマーゼ、ペニ
シリナーゼＥ．Ｃ．3.5.2.6.（シグマ）を含む原液６
(表１ａ)中で処理した。 反応は、ペニシリナーゼを加
えた直後に開始した。 反応中、１規定ＮａＯＨ溶液を
加えてｐＨ値を７．０に維持した。 反応は、ＮａＯＨ
を加えなくてもｐＨ値が７．０で一定になったところで
終了した。反応終了後（約２時間）、この溶液を無菌濾
過（０．２μｍフィルター）し、−８０℃で保存した。
【００６５】
【実施例６】７−アミノセファロスポラン酸（式Ｖ）の形成 微生物シュードモナス ｓｐＳＥ−４９５（ＤＳＭ ７
５０９；ＦＥＲＭ ＢＰ−８１８）を、肉エキス０．２
％ｗ／ｖ、酵母エキス０．２％ｗ／ｖ、ペプトン０．５
％ｗ／ｖ、グルタミン酸ナトリウム０．５％ｗ／ｖおよ
び硫酸マグネシウム０．００５％ｗ／ｖを含む栄養培地
（ｐＨ７．０）中、３０℃で一晩培養した。 この培養
菌を、同じ組成を有する新しい栄養培地に接種（接種量
１０％）し、２〜４日間培養した。
５０９；ＦＥＲＭ ＢＰ−８１８）を、肉エキス０．２
％ｗ／ｖ、酵母エキス０．２％ｗ／ｖ、ペプトン０．５
％ｗ／ｖ、グルタミン酸ナトリウム０．５％ｗ／ｖおよ
び硫酸マグネシウム０．００５％ｗ／ｖを含む栄養培地
（ｐＨ７．０）中、３０℃で一晩培養した。 この培養
菌を、同じ組成を有する新しい栄養培地に接種（接種量
１０％）し、２〜４日間培養した。
【００６６】続いて細胞を遠心分離（６００ｒｐｍで２
０分間）し、０．１モル−リン酸カリウム緩衝液に再分
散させ、再度遠心分離した（全体をそのつど、培養菌体
積の１０％で３回）。 その後、細胞ペレットを最少量
のリン酸カリウム緩衝液に再分散させ、氷冷しながら超
音波（３０秒間ずつ１０回、その都度２０秒間休止）で
処理した。 この粗抽出物から、細胞の残骸を遠心分離
（最低１０，０００ｒｐｍで２０分間）した。
０分間）し、０．１モル−リン酸カリウム緩衝液に再分
散させ、再度遠心分離した（全体をそのつど、培養菌体
積の１０％で３回）。 その後、細胞ペレットを最少量
のリン酸カリウム緩衝液に再分散させ、氷冷しながら超
音波（３０秒間ずつ１０回、その都度２０秒間休止）で
処理した。 この粗抽出物から、細胞の残骸を遠心分離
（最低１０，０００ｒｐｍで２０分間）した。
【００６７】７−アミノセファロスポラン酸を形成する
ために、この粗抽出物（タンパク質濃度２ｍｇ／ｍｌ）
を室温に温め、次いでリン酸カリウム緩衝液中、５ｍｍ
ｏｌ濃度のマロニル−７−アミノセファロスポラン酸を
加えた。 全体を２５℃で静止培養し、２４時間以内に
７−アミノセファロスポラン酸の形成について分析し
た。
ために、この粗抽出物（タンパク質濃度２ｍｇ／ｍｌ）
を室温に温め、次いでリン酸カリウム緩衝液中、５ｍｍ
ｏｌ濃度のマロニル−７−アミノセファロスポラン酸を
加えた。 全体を２５℃で静止培養し、２４時間以内に
７−アミノセファロスポラン酸の形成について分析し
た。
【００６８】分析は薄層クロマトグラフィー（シリカゲ
ル６０Ｆ245、展開液：ブタノール／メタノール／氷酢
酸／水５０：３０：３：１７）により行なった。 マロ
ニル−７−アミノセファロスポラン酸（Ｒｆ値：０．４
３）からの７−アミノセファロスポラン酸（Ｒｆ値：
０．５１）の形成は、ＵＶ波長２５４ｎｍ、またはＦｌ
ｕｒａｍ試薬（Ｆｌｕｒａｍ３ｍｇ；アセトン１０ｍｌ
中、フルカＣＨ−９４７０Ｂｕｃｈｓ）の散布後、ＵＶ
波長３６６ｎｍで確認できた。
ル６０Ｆ245、展開液：ブタノール／メタノール／氷酢
酸／水５０：３０：３：１７）により行なった。 マロ
ニル−７−アミノセファロスポラン酸（Ｒｆ値：０．４
３）からの７−アミノセファロスポラン酸（Ｒｆ値：
０．５１）の形成は、ＵＶ波長２５４ｎｍ、またはＦｌ
ｕｒａｍ試薬（Ｆｌｕｒａｍ３ｍｇ；アセトン１０ｍｌ
中、フルカＣＨ−９４７０Ｂｕｃｈｓ）の散布後、ＵＶ
波長３６６ｎｍで確認できた。
【００６９】約１４時間後、酵素としてマロニル−７−
アミノセファロスポラン酸−アシラーゼを含むこの粗抽
出物で、５０〜１００マイクロモルの７−アミノセファ
ロスポラン酸が確認された。
アミノセファロスポラン酸−アシラーゼを含むこの粗抽
出物で、５０〜１００マイクロモルの７−アミノセファ
ロスポラン酸が確認された。
【００７０】 表１ ａ）鉱物塩培養基原液 原液１： ＮａＨ2ＰＯ4・２Ｈ2Ｏ １５６．０ｇ ＮＨ4Ｃｌ １０．０ｇ Ｋ2ＳＯ4 １．２ｇ 蒸留水 ５００．０ｍｌ 原液２： ｐ−アミノ安息香酸 ８．０ｍｇ Ｄ−ビオチン ２．０ｍｇ ニコチン酸 ２０．０ｍｇ Ｄ−パントテン酸Ｃａ １０．０ｍｇ ピリドキサール塩酸 ３０．０ｍｇ チアミン二塩酸 ２０．０ｍｇ シアノコバラミン １０．０ｍｇ 蒸留水 １００．０ｍｌ無菌濾過 原液３： ＨＣｌ（３７％） ７．０ｍｌ ＦｅＣｌ2・４Ｈ2Ｏ １．５ｇ ＺｎＣｌ2 ０．０７ｇ ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ ０．１ｇ Ｈ3ＢＯ3 ０．００６ｇ ＣｏＣｌ2・６Ｈ2Ｏ ０．１９ｇ ＣｕＣｌ2・７Ｈ2Ｏ ０．００２ｇ ＮｉＣｌ2・６Ｈ2Ｏ ０．０２４ｇ Ｎａ2ＭｏＯ4・２Ｈ2Ｏ ０．０３６ｇ 蒸留水 １０００．０ｍｌオートクレーブ処理、 １２１℃、２０分間 原液４： ＮａＯＨ ０．５ｇ Ｎａ2ＳｅＯ3・５Ｈ2Ｏ ０．００３ｇ Ｎａ2ＷＯ4・２Ｈ2Ｏ ０．００４ｇ 蒸留水 １０００．０ｍｌオートクレーブ処理、 １２１℃、２０分間 原液５： ＭｇＣｌ2・６Ｈ2Ｏ ４０．０ｇ ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ ５．０ｇ 蒸留水 ２００．０ｍｌオートクレーブ処理、 １２１℃、２０分間 原液６： デスアセチルセファロスポリンＣ−ラクトン３．５５ｇ 蒸留水 ６０．０ｍｌ ペニシリナーゼ（ＥＣ3.5.2.6.） １．０ｍｇ（２５，０００単位） （シグマｐ０３８９） ＮａＯＨでｐＨを７．０に調節 蒸留水で１００．０ｍｌにする。
【００７１】 ｂ）鉱物塩培養基の製造 原液１： ２５．０ｍｌ ＫＯＨでｐＨを７．０に調節し、次いで蒸留水で９５
０．０ｍｌにし、オートクレーブ処理、１２１℃、２０
分間。
０．０ｍｌにし、オートクレーブ処理、１２１℃、２０
分間。
【００７２】滅菌後、 原液２ ０．５ｍｌ 原液３ １．０ｍｌ 原液４ １．０ｍｌ 原液５ ０．５ｍｌ 実施例５から得た溶液 ５０．０ｍｌ を加える。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｄ 513/14 8415−4Ｃ Ｃ１２Ｐ 35/02 8931−4Ｂ 35/06 Ａ 8931−4Ｂ //(Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:38） (Ｃ１２Ｐ 35/02 Ｃ１２Ｒ 1:38） (Ｃ１２Ｐ 35/06 Ｃ１２Ｒ 1:01）
Claims (15)
- 【請求項１】 式 【化１】 のラクトンまたはその可溶性塩を唯一の炭素、窒素およ
びエネルギー源として利用し、これを式 【化２】 のマロニルラクトンまたはその可溶性塩に変換すること
ができるが、このマロニルラクトンを分解代謝すること
はできないように選択されていることを特徴とする微生
物。 - 【請求項２】 スフィンゴモナス ｓｐ．ＦＢ１（ＤＳ
Ｍ ７００７）の寄託番号を有する請求項１の微生物な
らびにそれらの子孫および突然変異体。 - 【請求項３】 一般式 【化３】 ［式中、Ｒは水素原子、ヒドロキシ基またはアセトキシ
基を意味する。］のマロニル−７−アミノセファロスポ
ラン酸誘導体またはそれらの可溶性塩を製造するための
微生物学的な方法において、基質として使用する一般式 【化４】 ［式中、Ｒは上記の意味を有する。］のセファロスポリ
ンＣ誘導体またはそれらの可溶性塩を、請求項１の微生
物により式ＩＩＩの生成物に変換することを特徴とする
方法。 - 【請求項４】 変換を、微生物スフィンゴモナス ｓ
ｐ．ＦＢ１（ＤＳＭ７００７）ならびにそれらの子孫お
よび突然変異体のいずれかにより行なうことを特徴とす
る請求項３の方法。 - 【請求項５】 基質としてセファロスポリンＣを使用す
ることを特徴とする請求項３または４の方法。 - 【請求項６】 培養基中の基質濃度が２０重量％を超え
ないように、基質を一度に、または連続的に加えながら
変換を行なうことを特徴とする請求項３〜５のいずれか
の方法。 - 【請求項７】 変換を、温度０〜６０℃、ｐＨ５〜９で
行なうことを特徴とする請求項３〜６のいずれかの方
法。 - 【請求項８】 一般式 【化５】 ［式中、Ｒは水素原子、ヒドロキシ基またはアセトキシ
基を意味する。］のマロニル−７−アミノセファロスポ
ラン酸誘導体またはそれらの可溶性塩。 - 【請求項９】 マロニル−７−アミノセファロスポラン
酸。 - 【請求項１０】 一般式 【化６】 ［式中、Ｒは請求項３に記載した意味を有する。］の７
−アミノセファロスポラン酸誘導体またはそれらの可溶
性塩を製造するための微生物学的方法において、基質と
して使用する一般式ＩＩＩのマロニル−７−アミノセフ
ァロスポラン酸誘導体またはそれらの可溶性塩を、シュ
ードモナスｓｐ．（ＤＳＭ ７５０９）種の微生物また
はそれらの子孫および突然変異体のいずれかにより、ま
たはこれらの微生物から得た無細胞酵素により式Ｖの物
質に変換することを特徴とする方法。 - 【請求項１１】 基質としてマロニル−７−アミノセフ
ァロスポラン酸を使用することを特徴とする請求項１０
の方法。 - 【請求項１２】 培養基中の基質濃度が１０重量％を超
えないように、基質を一度に、または連続的に加えなが
ら変換を行なうことを特徴とする請求項１０または１１
の方法。 - 【請求項１３】 変換を、温度４〜５０℃、ｐＨ４〜９
で行なうことを特徴とする請求項１０〜１２のいずれか
の方法。 - 【請求項１４】 一般式ＩＩＩのマロニル−７−アミノ
セファロスポラン酸誘導体またはそれらの可溶性塩の、
一般式Ｖの７−アミノセファロスポラン酸誘導体への加
水分解における、シュードモナス ｓｐ．（ＤＳＭ ７
５０９）種の微生物の使用。 - 【請求項１５】 マロニル−７−アミノセファロスポラ
ン酸を７−アミノセファロスポラン酸に加水分解するこ
とを特徴とする請求項１４の微生物の使用。
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