JPH0647678B2 - 酵素洗剤添加剤 - Google Patents

酵素洗剤添加剤

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JPH0647678B2
JPH0647678B2 JP61183532A JP18353286A JPH0647678B2 JP H0647678 B2 JPH0647678 B2 JP H0647678B2 JP 61183532 A JP61183532 A JP 61183532A JP 18353286 A JP18353286 A JP 18353286A JP H0647678 B2 JPH0647678 B2 JP H0647678B2
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detergent additive
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    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
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    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/16—Organic compounds
    • C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
    • C11D3/386—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase
    • C11D3/38627—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase containing lipase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は酵素洗剤添加剤に関する。
（従来の技術および発明が解決しようとする問題点） 洗剤中に酵素添加剤を含有する分野は、過去数十年にお
いて急速に成長してきている。例えば、文献「How Enzy
mes Got into Detergents」第１２巻、Developments in
Industrial Microbiology，パブリケーション オブ
ザ ソサイティ フォー インダストリアル マイクロ
バイオロジー，アメリカン インスティテュート オブ
バイオロジカル サイエンス，ワシントン，Ｄ．Ｃ．
１９７１（クラウス ダンマン，ポール ホルム，ビレ
ヤンセンおよびモーゲンスヒルマー ニルセン著）を参
照されたい。
最も普通の酵素洗剤添加剤は、タンパク分解添加剤であ
るが、脂肪分解洗剤添加剤も例えば米国特許第4,011,16
9号明細書、第４欄６５行〜第５欄、６８行及び米国特
許第1,293,613号明細書、第２頁、６〜２９行に記載さ
れている。
また、ハンス アンドレ等により著わされた洗剤添加剤
としてのリパーゼに関する包括的評論文献がJournal of
Applied Biochemistry,2,２１８〜２２９（１９８０
年）中、表題「Lipasesas Detergent Components」として
見出されている。
本出願人の最も良く知る限りにおいて、洗剤添加剤とし
て用いられている公知のリパーゼ中、フサリアムオキシ
スポラムリパーゼは洗剤適用の見地からみて、最良の脂
肪分解特性を有している（本出願人の欧州特許明細書第
0130064号、特に２７頁の比較表参照）。
もしも洗浄方法を高温度でかつ高アルカリ性で行う場
合、脂肪含有汚れの大部分は除去されるであろう。しか
し、エネルギー危機並びに多くの今日の布帛が低温度で
洗浄すべきであるという事実のため、低温洗浄方法（６
０℃付近およびそれ以下）が一般に好ましく、更にこれ
らの低温度では公知のリパーゼは汚れを含有する脂肪の
一部のみしか溶解できない。
今日まで、脂肪分解洗剤添加剤の有効性はEMPA（Eidgen
ssische Materialprfungs und Versuchsanstalt, S
t. Gallen, Switzerland）見本番号１０１（オリーブ油
／綿）および１０２（オリーブ油／羊毛）を用い英国特
許第1,361,386号明細書（特に第４頁および第７頁）並
びに米国特許第3,723,250号明細書（特に１５〜１９
欄）に記載された手順に適合させることにより通常測定
されてきている。このような方法で、脂肪分解洗浄効果
はディファレンシャル レミッタンスバリュー（differ
ential remittance value）ΔＲとして表わすことがで
きる。しかし、以下の内容が見出されている。
すなわち、脂肪分解洗浄効果又は脂肪分解洗浄力作用に
対するより適切な測定は、脂肪分解処理前の洗たく物中
の脂肪の量に比較し、脂肪分解洗浄を含んでなる脂肪分
解処理後の洗たく物中に残留脂肪および残留脂肪分解生
成物の量の決定にある。何故なら、これはディファレン
シャル レミッタンス バリューΔＲよりも脂肪分解洗
浄作用に関しより直接的でかつ適切なものである。脂肪
分解洗浄作用とは、脂肪分解作用によりもたらされた洗
浄力作用の意味である。この測定を用いることにより、
最良の公知の洗浄剤リパーゼが改良の余地のある脂肪分
解洗浄力作用を示すことを見出した。
かくして、洗浄液中で経済的に適度リパーゼ活性なで相
当に良好な脂肪分解洗浄力効果を示す脂肪分解洗剤添加
剤に対する要求が存する。
（問題点を解決するための手段および作用） 今や、本発明の第一の面によれば、次のような脂肪分解
洗剤添加剤が見出された。すなわち、洗浄液中で経済的
に適度なリパーゼ活性で相当に良好な脂肪分解洗浄力作
用を示す添加剤であり、この脂肪分解洗剤添加剤はリパ
ーゼがシュードモナス・セパシアのリパーゼ生産菌株に
より産生可能であることを特徴とする。
シュードモナス・セパシアはリパーゼ生産菌であること
が１９８０年以来日本特許出願第135999号に記載されて
いる。しかし、この日本特許出願からは以下の内容は明
らかでない。すなわち、１９８０年以来日本特許出願第
１３５９９９号に記載される如く、シュードモナス・セ
パシア リパーゼは酵素洗剤添加剤中で有効成分として
適当である、という内容である。
また、米国特許第3,950,277号明細書には、シュードモ
ナス属由来のリパーゼを、もしも特定のグループのリパ
ーゼ活性化剤と共に使用すると、布帛から油状の汚れの
除去用試剤として適当であることが一般的に記載されて
いる。また、この米国特許から以下の内容も明らかであ
る。すなわち、考慮中のリパーゼは専ら布帛のプレソー
キング用に十分に適しており、一方本発明に係る酵素洗
剤添加剤はプレソーキングの洗剤中および主洗浄洗剤中
での成分として双方に十分適当である。
また、英国特許第1372034号明細書には以下の内容が記
載されている。すなわち、シュードモナス・スタッツェ
リATCC 19154により生産されるリパーゼは、特定の別の
洗剤成分を含む洗剤中の酵素洗剤添加剤として十分適し
ている。しかし、以下の内容が見出されている。すなわ
ち、本発明に係る酵素洗剤添加剤の脂肪分解洗浄力作用
は上記英国特許に記載された酵素洗剤添加剤の脂肪分解
洗浄力作用よりも優れていることが見出された。
先に明定されたリパーゼと免疫学的に同一であるリパー
ゼは、本発明の範囲内であると理解されたい。
また、先に明定したリパーゼから逸脱するリパーゼであ
るが、シュードモナス・セパシアを基礎にして遺伝子工
学手法により生産され更にシュードモナス・セパシアの
リパーゼ生産菌株により生産可能であるリパーゼの活性
中心と同一の活性中心を有するリパーゼはまた本発明の
範囲内であることを理解され度い。
シュードモナス・セパシアに属する幾つかの菌株は、劣
ったリパーゼ生産株である。本発明の目的に対し、シュ
ードモナス・セパシアのリパーゼ生産株は、適当な培地
中、例えばLIP7と命名した培地中、10LU／ml以上又は２
NLU8.5／ml（ＬＵおよひNLU8.5は本明細書中、後に定義
する如きリパーゼ単位である）以上を生産する菌株とし
て定義される。
振とうフラスコに対し意図された培地LIP7は、次の成分
（ｇ／）を用いて調製する： ファルマコメデァ（PHARMAMEDIA） ２０ コーンスティープリカー ４０ グルコース １０ 大豆油 ４０ オートクレーブ処理前、pHを７．４に調整 最終pH７．０ ファルマコメデァの組成は、Traders'Guide to Ferment
ation Media Formulation（1980年、Traders Oil Mill
Co.,５０〜５１頁）中に記載されている。
滅菌は１３０℃付近で４０分位行った。１００mlの基質
を有する５００mlのエルレンマイヤーフラスコに、リパ
ーゼ生産に対し試験すべき菌株で予じめ接種した寒天斜
面からの細胞を用いて接種した。フラスコを２００〜２
５０rpmでかつ２６℃付近で４日間振とうし、しかる後
リパーゼ収率を測定した。
かくして、驚くべきことに以下の内容が見出された。す
なわち、本発明に係る酵素洗剤添加剤は改良された脂肪
分解洗浄効果を示し、これは本明細書中後に示される記
録から明らかであろう。
本明細書中、二種（又は三種）の異ったリパーゼ活性単
位が用いられいる。すなわち、AF 95／5-GBに記載され
ているリパーゼ単位（LU）およびAF 182／3-GBに記載さ
れているノボリパーゼ単位（NLU）であり、双方のＡＦ
書類は要求によりノボインダスリーA／S，ノボアレ，28
80，バグスバエルト，デンマーク国より入手可能であ
り、更に修正ノボリパーゼ単位、これは活性の測定がpH
８．５で行なわれる事実によりノボリパーゼ単位（pH
７．０又はpH７．０近くで測定）からわずかに異なる
が、簡略のためこの修正ノボリパーゼ単位はNLU8.5と命
名される。ＬＵ法は、基質、すなわち短鎖を有する脂
肪、すなわちトリブチリンに基づく速やかでかつ簡易な
活性測定方法であり、更に織物を汚す脂肪に対しては代
表的ではない；NLU法はオリーブ油（これは長鎖の脂肪
酸を含有するトリグリセリドの混合物である）を基にし
たより精巧な活性測定方法であり、織物を汚す脂肪に対
しより代表的なものと考えられる。
本発明に係る酵素洗剤添加剤の特に好ましい態様におい
て、菌株はシュードモナス・セパシアDSM3333，DSM333
4，DSM3335，DSM3336，DSM3337，またはDSM3401，好ま
しくはDSM3335又はDSM3401である。これらの菌株は比較
的高収率のリパーゼをもたらすことが見出された。
本発明に係る酵素洗剤添加剤の特に好ましい態様におい
て、添加剤は無粉塵性粒質物として提供される。粒質物
は数種の異った方法で製造できる。
押出機と整粒機（マルメライザー（MARUMERIZER ）と
して市販）とから成る装置により洗剤添加剤として用い
られる酵素含有粒質物の製造を述べている英国特許第1,
362,365号明細書並びにドラムグラニュレーターを用い
た洗剤添加剤として用いられる酵素含有粒質物の製造を
記載する米国特許第4,106,991号明細書を参照され度
い。
本発明に係る酵素洗剤添加剤の特に好ましい態様におい
て、添加剤は液体として提供される。液体洗剤は適用の
容易さのため、大衆的なものとなっている。
本発明に係る酵素洗剤添加剤の特に好ましい態様におい
て、添加剤は酵素安定剤を有する液体として提供され
る。安定剤は、プロピレングリコールであるか又は酵素
溶液用の安定剤として公知の他の薬剤であってよい。液
体洗剤は適用の容易さのため大衆的なものとなってい
る。
本発明に係る酵素洗剤添加剤の特に好ましい態様におい
て、リパーゼ活性は添加剤１ｇ当たり約2,500NLU以上で
ある。このようにして、洗剤添加剤が洗剤１００ｇ当た
り０．０１〜５０．０ｇの量で洗剤に添加された場合、
更に洗浄剤が洗浄液１当たり１〜２０ｇの洗剤の量で
洗浄液に添加された場合、好都合なリパーゼ活性が洗浄
液中で得られる。
本発明に係る酵素洗剤添加剤の特に好ましい態様におい
て、添加剤はリパーゼの外にタンパク分解酵素を含有す
る。このようなタンパク分解酵素として、バシラス・リ
セニフォルミス（Bacillus liceniformis）により微生
物学的に生産されるタンパク分解酵素アルカラーゼ（AL
CALASE ）（ノボインダストリー A／S）を用いること
ができる。混合酵素添加剤は、予じめ調製したプロテナ
ーゼ粒質物と予じめ調製したリパーゼ粒質物とを混合す
ることにより、又はプロテナーゼコンセントレートとリ
パーゼコンセントレートとを混合し次いでこの混合物を
通常の造粒助剤と共に造粒装置に導入することにより調
製できる。
本発明に係る酵素洗剤添加剤の特に好ましい態様によれ
ば、タンパク分解活性は添加剤１ｇ当たり約０．５〜
３．０アンソン単位である。このようにして、洗浄剤添
加剤を洗剤１００ｇ当たり０．２〜２ｇの量で洗剤に添
加した場合、更に洗剤を洗浄液１当たり１〜２０ｇの
洗剤の量で洗浄液に添加した場合、好都合のタンパク分
解活性が洗浄液中で発生する。
本発明の第二の面は、酵素洗剤添加剤を含む洗剤を含ん
で成り、この活性成分は微生物生産リパーゼであり、こ
こにおいて酵素洗剤添加剤は本発明に係る酵素洗剤添加
剤である。
本発明に係る洗剤の特に好ましい態様において、洗剤は
本発明に係る酵素洗剤添加剤0.01〜50.0％w／w、好まし
くは０．１〜２％w／wの量で含有する。このようにし
て、酵素作用と他の洗剤成分の作用との間の合理的バラ
ンスが生じる。
本発明の第三の面は、用いる洗剤が本発明に係る洗剤で
あり更にpHが７〜１１である洗浄方法を含んでなる。
本発明に係る洗浄方法の特に好ましい態様において、洗
浄溶液は洗浄溶液１当たり１〜２０ｇの量で本発明に
係る洗剤を含有する。このようにして、好都合なリパー
ゼ活性が洗浄液中で、すなわち典形的には洗浄液１当
たり1,000〜5,000NLU得られる。
本発明を以下の実施例により説明する。実施例１〜７は
製造例であり、実施例８〜１３は洗浄例である。
（実施例） 実施例１ 寒天斜面上のシュードモナス・セパシア DSM3401 の培
養物を、５個の５００mlの振とうフラスコ（各フラスコ
は１００mlのブイヨン−３培地を有する）に移し、更に
３０℃で１日間振とうした（２００rpm，振幅２．５c
m）。
ボウリオン（Boullion）−３の組成は、次の通りであっ
た： 成 分 濃 度（ｇ／） ペプトン ６ トリプシン消化カゼイン ４ 酵母エキス ３ 肉エキス １．５ グルコース １ 培地を１２１℃で４０分間オートクレーブ処理した。こ
れらのボウリオン−３の培養ブロスを、２００個の５０
０ml振とうフラスコに接種するための種培養物として用
いた（各フラスコは、200mlのＰＬ−１培地を有す
る）。
ＰＬ−１培地の組成は次の通りであった： 成 分 濃 度（ｇ／） ペプトン １０ トウィーン８０ １２ MgSO4・7H2O ２ CaCl2・2H2O ０．１ オートクレーブ処理前のpH ６．０ 培地を１２１℃で４０分間オートクレーブ処理した。各
ＰＬ−１振とうフラスコに０．５〜２mlのボウリオン−
３培養ブロスを接種し、次いで200rpm（増幅２．５cm）
で３０℃で５日間振とうした。振とうフラスコから培養
ブロスを採取して一緒にすると合計で３９．５とな
り、酵素収率は５３ＬＵ／mlであった。
培養ブロスを、ベックマン型Ｊ−６遠心機を用いて４１
００ｇで３５分間遠心した。10000MWのカットオフフイ
ルターシートを有するミリポア社市販のペリコン遠心分
離装置を用い遠心し１．４まで濃縮した（約１容量の
水で洗浄）。濃縮物を凍結乾燥した。収率は酵素活性2
1.500LU／ｇを有する粉末５６．２ｇであった。
次の製造例２〜６において、５００ml振とうフラスコ中
の１００mlの培地に、３０℃付近で約３日間インキュベ
ートした寒天斜面上のシュードモナス・セパシアの特定
菌株から産生した培養物を接種した。例７は、ヨーロッ
パ特許公報第0130064号明細書の例２３で記載した如く
得られかつ比較洗浄例である実施例１３で使用を企図し
た、フサリアム オキシスポラム リパーゼを代表する
比較例である。例２〜６の培地はLIP7（先に記載）であ
る。
振とうフラスコを２６℃付近でかつ２００〜２５０rpm
で４日間インキュベートした。ブロスのリパーゼ活性
（NLU8.5／ml）を測定し、更にブロスを後に述べる洗浄
実施例におけるリパーゼ源として直接用いた。
洗浄例８〜１３を次のようにして行った。
７．５×５．０cmの大きさで０．５２ｇの重量の綿見本
（日本油化学協会より入手、番号６と命名）の両側を、
クロロホルムに溶解した３％の牛脂溶液０．５mlで処理
した。
見本をほゞ同じ大きさの８個の小片に切断した。これら
の８個の小片を、特定のリパーゼ活性（NLU8.5／ml）を
有しかつ、約０．２Ｍトリス／HCl緩衝液（TRIS＝２−
アミノ−２−ヒドロキシメチル−１，３−プロパンジオ
ール）を用いて調整したpH８．５を有する酵素溶液１０
mlを含有する小反応器に移した。反応混合物を振とうし
ながら４０℃で１時間インキュベートした。次いで０．
２Ｍホウ酸塩緩衝液（pH１０）に溶解した１０％CAS４
０μを反応混合物に添加した。反応混合物を振とうし
ながら４０℃で１５分間インキュベートした。１００μ
の洗浄溶液を、遊離脂肪酸の分析用にとり出した。
遊離脂肪酸の分析は、ワコー ケミカルス社（ニッサン
ストラーセ 2-4040，ノイゼル，西ドイツ）から入手
可能な小冊子コード２７９−75401ネファＣ−テストワ
コー中に記載された方法に従って比色定量的に行った。
但し、５０μサンプルの代りに１００μのサンプル
を用い、試薬サンプルＡおよびＢは１mlおよび２mlの代
りにそれぞれ０．５mlおよび１mlであった。更に分析は
３７℃の代りに４０℃で行った。１cmの路長を有するキ
ュベットを分光光度計による測定に対して用いた。ブラ
ンク（インキュベーション前に反応容器から採取した１
００μの酵素サンプル）に対し５５０nmA0での分光光
度計の読み取りに対し修正された、洗浄液に対する５５
０nmA1での分光光度計の読みとりは、見本から放出され
た洗浄溶液中の遊離脂肪酸の量を表わすΔＡ値（ΔＡ＝
Ａ1−Ａ0）である。かくして、ΔＡはタンパク分解洗浄
効果の指標である。
次の洗浄例８〜１２は本発明を説明する。例１３は比較
例であり、フサリアム オキシスポラム リパーゼを用
いて行った。
上記表より以下の内容が明らかである。すなわち、本発
明に係る酵素洗剤添加剤は洗浄液中の見本から遊離され
た遊離脂肪酸について、NLU8.5／mlで表わされたリパー
ゼ活性の比較値においてフサリアム オキシスポラム
リパーゼより秀れている。

Claims (12)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】シュードモナス・セパシアのリパーゼ生産
    菌株から生産されるリパーゼを有効成分とする、酵素洗
    剤添加剤。
  2. 【請求項２】前記菌株がシュードモナス・セパシア DSM
    3333，DSM3334, DSM3335，DSM3336, DSM3337、またはDS
    M3401 、好ましくはDSM3335 またはDSM3401である、特
    許請求の範囲第１項記載の酵素洗剤添加剤。
  3. 【請求項３】添加剤が無粉塵性粒質物として提供されて
    いる、特許請求の範囲第１項記載の酵素洗剤添加剤。
  4. 【請求項４】添加剤が液体として提供されている、特許
    請求の範囲第１項から第３項までのいずれか１項に記載
    の酵素洗剤添加剤。
  5. 【請求項５】前記液体が酵素安定剤を含有する特許請求
    の範囲第４項記載の酵素洗剤添加剤。
  6. 【請求項６】リパーゼ活性が添加剤１ｇ当たり約2,500
    NLU 以上である、特許請求の範囲第１項から第５項まで
    のいずれか１項に記載の酵素洗剤添加剤。
  7. 【請求項７】リパーゼの他に添加剤がタンパク分解酵素
    を含有する、特許請求の範囲第１項から第６項までのい
    ずれか１項に記載の酵素洗剤添加剤。
  8. 【請求項８】タンパク分解活性が添加剤１ｇ当たり、約
    0.5 〜約3.0 アンソン単位である、特許請求の範囲第７
    項記載の酵素洗剤添加剤。
  9. 【請求項９】シュードモナス・セパシアのリパーゼ生産
    菌株から生産されるリパーゼを有効成分とする酵素洗剤
    添加剤を含んでなる洗剤。
  10. 【請求項１０】洗剤が、酵素洗剤添加剤を0.01〜50.0％
    Ｗ／Ｗ、好ましくは0.1 〜２％Ｗ／Ｗの量で含有する、
    特許請求の範囲第９項記載の洗剤。
  11. 【請求項１１】シュードモナス・セパシアのリパーゼ生
    産菌株から生産されるリパーゼを有効成分とする、酵素
    洗剤添加剤を含んでなる洗剤を用い、pHが７〜11であ
    る、洗浄方法。
  12. 【請求項１２】前記洗剤を洗浄液１当たり１〜20ｇの
    量で用いる、特許請求の範囲第11項記載の洗浄方法。
JP61183532A 1985-08-07 1986-08-06 酵素洗剤添加剤 Expired - Lifetime JPH0647678B2 (ja)

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DK3588/85 1985-08-07

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Publication Number Publication Date
JPS6234997A JPS6234997A (ja) 1987-02-14
JPH0647678B2 true JPH0647678B2 (ja) 1994-06-22

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Application Number Title Priority Date Filing Date
JP61183532A Expired - Lifetime JPH0647678B2 (ja) 1985-08-07 1986-08-06 酵素洗剤添加剤

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