JPH0649718B2

JPH0649718B2 - 多環状窒素含有構造を有する新規なペプチド誘導体

Info

Publication number: JPH0649718B2
Application number: JP63030709A
Authority: JP
Inventors: ビンセンミシェル; ルモンジョルジェ; クデネッククロード
Original assignee: アディールエコンパニー
Priority date: 1987-02-13
Filing date: 1988-02-12
Publication date: 1994-06-29
Anticipated expiration: 2009-06-29
Also published as: US4965250A; AU1166988A; IE880382L; GR880100079A; DE3862596D1; GR1000079B; PT86755A; FR2610934B1; DK74988A; ZA88995B; NZ223509A; PT86755B; IE60073B1; EP0282374B1; FR2610934A1; CA1331672C; JPS63203698A; ATE63125T1; OA08715A; AU604090B2

Description

【発明の詳細な説明】本発明は新規なテトラペプチド化合物、その製造および
これらの化合物を含有する医薬組成物に関する。

生物学的応答を変えるかなりの天然または合成テトラペ
プチド化合物、特にタフトシン(tuftsin)(Thr-Lys-Pro-
Arg)が知られている。タフトシンのうちの一群の同族
体、特にスレオニンが４−カルボキシ−２−オキサゾリ
ジノン基で置き換えられている化合物はY.Stabinsky等
によりInt,J.Peptide.Protein Risearch１９７８；１
２、１３０〜１３８頁に記載されている。しかしなが
ら、これらの誘導体はタフトシンのほぼ半分の活性を有
するだけであり、そして抗体応答に係り弱い活性を有す
るだけである。

そのプロリンが窒素含有多環状構造基で置き換えられて
いるタフトシンの同族体はヨーロツパ特許出願第０，１
９０，０５８号に記載されている。これらの誘導体は一
般に、タフトシンの活性よりも大きい活性を有する。

本発明により、ここに、そのプロリンがヨーロツパ特許
出願第０，１９０，０５８号に記載の誘導体と同一タイ
プの窒素含有多環状構造基で置き換えられており、しか
もそのスレオニル残基が環化されているタフトシンの同
族体が見い出された。驚くべきことに、これらの誘導体
はタフトシンの活性よりも大きく、しかも前記出願第
０，１９０，０５８号の誘導体の活性と少なくとも均等
な活性を有し、しかも抗体応答を非常に格別に増強する
という追加の利点を有する。この特性は本発明の化合物
の作用が従来技術の化合物の特性とメカニズム的に異な
ることを示唆しており、特にこれらの誘導体を治療分野
で使用できるようにする有利な性質を有することを示唆
している。

さらに特に、本発明は下記の一般式Ｉで示されるテトラ
ペプチド誘導体、それらのエナンチオマー、エピマーお
よびジアステレオマー、ならびに医薬的に許容されうる
酸または塩基によるそれらの付加塩に関する：〔式中Ｒは水素原子、炭素原子１〜４個を有する直鎖状
または分子鎖状アルキル基、置換基としてヒドロキシ基
を有していてもよいフェニルまたはチエニル基、あるい
はベンジル基を表わし、Ｒ′は水素原子または炭素原子１〜４個を有する直鎖状
または分枝鎖状アルキル基を表わし、Ｘは酸素原子またはNH基を表わし、ＹはＸがNH基を表わす場合に、酸素原子または硫黄原子
を表わし、あるいはＹはＸが酸素原子を表わす場合に、
NH基を表わし、ｔは０または１を表わし、 LysおよびArgはそれぞれ、ペプチド結合で結合されてい
るリジルおよびアルギニル残基を表わし、は次式で示される二環状構造基（式中ｍは１または０に等しく、ｎおよびｐは０、１ま
たは２を表わし、RaおよびRbは水素原子を表わすか、あ
るいはRaおよびRbはｐ＝０の場合に、一緒になつて直接
結合を表わすことができ、Ｂはｑが２、３または４に等
しい場合に、アルキレン鎖(CH₂)_qを表わしここでｑは
２、３または４に等しく、あるいはＢはｐ＝０でありそ
してRaおよびRbが一緒になつて結合を表わす場合に、不
飽和構造基(-CH＝CH-)₂を表わし、ただしｍ、ｎ、ｐお
よびｑの合計は３〜６の整数である）で示される基を表
わすか、あるいはは１，２，３，４−テトラヒドロ−ベータ−カルボリン
を表わす〕。

式Ｉで示される化合物の中で、環状構造基がインドリン、イソインドリン、テトラヒドロキノリ
ン、テトラヒドロイソキノリン、パーヒドロインドー
ル、パーヒドロイソインドール、パーヒドロイソキノリ
ン、パーヒドロキノリン、パーヒドロシクロペンタ
〔ｂ〕ピロール、２−アザビシクロ〔2,2,2〕オクタ
ン、２−アザビシクロ〔2,2,1〕ヘプタンまたは1,2,3,4
−テトラヒドロ−ベータ−カルボリンを表わす化合物が
好ましい化合物としてあげられる。

式Ｉで示される化合物に付加して付加塩を形成できる酸
の中で、例として塩酸、硫酸、リン酸、酒石酸、マレイ
ン酸、リンゴ酸、フマール酸、シユウ酸、メタンスルホ
ン酸、エタンスルホン酸、樟脳酸およびクエン酸等をあ
げることができる。

式Ｉで示される化合物と塩形成できる塩基としては、水
酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウムま
たは水酸化アルミニウム、アルカリ金属炭酸塩またはア
ルカリ土類金属炭酸塩、あるいは有機塩基、たとえばト
リエチルアミン、ベンジルアミン、ジエタノールアミ
ン、第３ブチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、アル
ギニン等を使用することができる。

本発明はまた、式Ｉで示される化合物の製造方法に関
し、この方法はヨーロツパ特許出願第０，１９０，０５
８号に記載のようにして得られる式II （式中tBocは第３ブトキシカルボニル基を表わし、そし
てＡはこれが結合している炭素原子および窒素原子と一
緒になつて、式Ｉにおける意味と同一の意味を有する）
で示される誘導体をＮ^ω−ニトロアルギニンメチルエス
テル（Ｈ−Arg(NO₂)OCH₃）またはベンジルエステル（Ｈ
−Arg(NO₂)OCH₂C₆H₅）と縮合させ、式III （式中Ａはこれが結合している炭素原子および窒素原子
と一緒になつて、式Ｉにおける意味と同一意味を有し、
そして式中Ｄはメチルまたはベンジル基を表わす）で示される誘導体を生成し、この生成物を次いでB.Gutt
eおよびK.B.Merrifieldにより記載された方法〔J.Am.Ch
em.Soc.１９６９年、９１、５０１頁〕に従い三フッ化
酢酸で脱保護基化して、式IV （式中Ａはこれが結合している炭素原子および窒素原子
と一緒になつて式Ｉにおける意味と同一意味を有し、そ
して式中Ｄは式IIIにおけるＤと同一の意味を有する）
で示される誘導体を生成し、この生成物を次いでＮ^α−
第３ブトキシカルボニル−Ｎ^ω−ベンジルオキシカルボ
ニルリジン、すなわち(tBoc)Lys(Z)と縮合させ、式Ｖ（式中Ａはこれが結合している炭素原子および窒素原子
と一緒になつて式Ｉにおける意味と同一意味を有し、そ
してＤは式IIIにおけるＤと同一の意味を有する）で示される化合物を生成し、この生成物に三フツ化酢酸
を作用させ、式VI （式中Ａはこれが結合している炭素原子および窒素原子
と一緒になつて式Ｉにおける意味と同一意味を有しそし
てＤは式IIIにおけるＤと同一の意味を有する）で示される誘導体に変換し、この生成物を次いで式VII （式中Ｒ、Ｒ′、Ｘ、Ｙおよびｔは式Ｉにおける意味と
同一意味を有する）で示される誘導体と縮合させ、式VIII （式中Ａはこれが結合している炭素原子および窒素原子
と一緒になつて式Ｉにおける意味と同一意味を有し、そ
してＲ、Ｒ′、Ｘ、Ｙおよびｔは式Ｉにおける意味と同
一意味を有し、そしてＤは式IIIにおけるＤと同一意味
を有する）で示される誘導体を導き、この生成物はＤがCH₃を表わ
す場合に、ケン化し、次いで接触水素添加することがで
き、あるいはＤがベンジル基を表わす場合に、接触水素
添加することができ、かくして式Ｉで示される誘導体を
生成し、この生成物は所望により、医薬的に許容されう
る酸または塩基により塩形成させることができ、あるい
はその異性体に分離でき、次いで必要に応じて医薬的に
許容されうる酸または塩基により塩形成させることがで
きる方法である。

式VIIIで示される誘導体は新規化合物であり、式Ｉで示
される誘導体と同様に本発明の一部分を形成し、式Ｉで
示される誘導体の合成に関与する。

式Ｉで示される化合物は有利な薬理学的性質を有する。

特に、これらの誘導体にはヨーロツパ特許出願第０，１
９０，０５８号の化合物の主要性質がこれより高くまた
は少なくとも匹敵しうるレベルで見い出される。

特に、これらの誘導体は「自然のキラー」NK細胞の活性
を増強する。メラノーマを有するマウスに投与すると、
これらの誘導体はこのメラノーマの増殖を実質的な程度
まで阻害する。これらの誘導体は病原性細菌に感染した
動物における免疫防衛を増強し、従来技術から予想され
ないように、マウスにおける羊抗原に対する抗体応答、
非特異的食菌作用およびオキサゾロンに対する遅延型過
敏反応を実質的に増大させる。

これらの活性は本発明の化合物の免疫変調因子的性質に
結び付けられ、人間または動物の医療において、癌の処
置、ウイルス、細菌またはカビに起因する症状の処置、
紅斑性エリスマトーデスまたはリユーマチ性関節炎のよ
うな自己免疫性疾病の処置およびさらに一般的に、人間
または動物の身体の自然の免疫応答の障害あるいは減少
から生じる疾病の処置に用途が見い出される。

さらにまた、本発明の誘導体が有するマウスにおける羊
赤血球に対する抗体応答に係る活性はこれらの誘導体が
一方で特許出願第０，１９０，０５８号の化合物と同一
の治療用途に有用であるとともに、他方で従来技術のも
のとは異なりそしてなおかつ補足的である作用様相で作
用し、この作用性はこれらの誘導体を治療適用分野で特
に有用なものとすることを示唆している。

本発明の主題はまた、一般式Ｉで示される化合物または
医薬的に許容されうる酸または塩基によるその付加塩の
一種の少なくとも一種を単独で、あるいは医薬的に許容
されうる非毒性の不活性賦形剤またはベヒクルの一種ま
たは二種以上と組合せて含有する医薬組成物に関する。

本発明による医薬組成物の中で、特に非経口、皮下、経
皮、鼻、直腸、舌下、眼または呼吸による投与に適する
組成物をあげることができ、特に注射用製剤、エアゾ
ル、点眼剤、点鼻剤、錠剤、舌下錠、舌下投与用製剤、
ピル、坐薬、クリーム、軟膏、皮膚施用用ゲル等をあげ
ることができる。

適当な薬用量は患者の年令および体重、投与経路、治療
指示の種類およびいづれかの付随する処置により変わ
り、一回の投与または施用当りで１マイクログラム〜１
グラムの範囲である。

次例は本発明を制限することなく、本発明を例示するも
のである。

原料化合物は文献から既知である。

記載されている融点はマイクロ−コフラー技法に従い測
定した。¹³Ｃ核磁気共鳴スペクトルは内部対照としてTM
Sを用いて記録し、¹HNMRは一般に、溶剤としてCDCl₃を
用いて記録した。質量スペクトル分析はFAB技法に従い
得た。

例１シクロ(S)Thr-(S)Lys-(S)ABO-(S)Arg-OHシクロ(S)Thr-O
H＝（トランス，Ｌ）−４−カルボキシ−５−メチル−
２−オキソ−１，３−オキサゾリジン、すなわち(S)−
シクロスレオニンはY.Stabinsky等によりInt.J.Peptid
Prot.Res.１９７８年、１２、１３０〜１３８頁に記載
されている。

工程Ａ： tBoc(S)ABO-OH、すなわち（３Ｓ）−２−第３ブトキシ
カルボニル−２−アザビシクロ〔２，２，２〕オクタン
−３−カルボン酸ジオキサン60cm³と水30cm³との混合物中に、(S)ABO-OH
0.03モルを溶解し、０℃に冷却し、Ｎ水酸化ナトリウム
溶液70cm³を加え、次いでジオキサン100cm³中のジ−ter
t−ブチルカーボネート0.03モルの溶液を滴下して加え
る。この混合物を、０℃〜５℃の温度で30分間、次いで
室温で２時間攪拌する。溶媒を減圧の下に蒸発させる。
この残留物をクエン酸によりpH４に酸性にした水中に取
り、次いでこの水性相を酢酸エチルにより抽出する。こ
の有機相を10％塩化ナトリウム水溶液により洗浄し、無
水硫酸カルシウム上で乾燥させ、濾過し、次いで減圧下
に濃縮する。この残留物をｎ−ペンタン中で結晶化さ
せ、吸引濾別し、次いで乾燥させ、標題の化合物を得
る。

工程Ｂ： tBoc(S)ABO-(S)Arg(NO₂)-OBzl W.KnigおよびR.Geigerの方法（Ber、１９７０年、１
０３、７８８頁）を使用し、前記工程で得られたtBoc
(S)ABO-OH０．０５モルを溶媒としてジメチルホルムア
ミドを用いて(S)−Ｎ^ω−ニトロアルギニンベンジルエ
ステル、すなわち (S)-H-Arg(NO₂)-OBzl０．０５モルとカツプリングさせ
る。

tBoc(S)ABO-(S)Arg(NO₂)-OBzlが油状物の形で９８％の
収率で得られる。この生成物はさらに処理することな
く、次の工程で使用する。

IRスペクトル特性（CHCl₃溶液） V〔NH（アミド）〕＝３４００cm^-1 V(CO) ＝１７００cm^-1（広い）工程Ｃ： (S)ABO-(S)Arg(NO₂)-OBzl B.GutteおよびR.B.Merrifieldにより記載されている無
水塩化メチレン中の三フツ化酢酸による脱保護基化方法
（J.Am.Chem.Soc.１９６９年、９１、５０１頁）を使用
し、前工程で製造されたtBoc(S)ABO-(S)Arg(NO₂)-OBzl
０．０４７５モルを原料として、(S)ABO-(S)Arg(NO₂)-O
Bzlを三フツ化酢酸塩（TFA）の形で定量的に得る。この
生成物の純度は薄層クロマトグラフイ（溶剤：CH₂Cl₂/M
eOH、９：１：Rf＝０．１９）により確認する。

工程Ｄ： tBoc(S)Lys(Z)-(S)ABO-(S)Arg(NO₂)-OBzl 前記工程ＢにおけるtBoc(S)ABO-OHをＮ^α−第３ブトキ
シカルボニル−Ｎ^ω−ベンジルオキシカルボニル−
（Ｓ）−リジン〔すなわち、tBoc(S)Lys(Z)-OH；０．０
４７５モル）で置き換え、そして (S)-H-Arg(NO₂)-OBzlを前工程で製造された (S)ABO-(S)Arg(NO₂)-OBzl、TFA（０．０４７５モル）で
置き換えて、同一方法によりtBoc(S)Lys(Z)-(S)ABO-(S)
Arg(NO₂)-OBzlを６８％の収率で得る。

主要¹³CNMR特性（DMSO-d₆/TMS） ppmによるδ Ｃ^αリジン＝５０．２Ｃ^αABO＝５９．６Ｃ^αArg＝５１．８工程Ｅ： (S)Lys(Z)-(S)ABO-(S)Arg(NO₂)-OBzl 上記工程Ｃに記載のようにして、tBoc(S)Lys(Z)-(S)ABO
-(S)Arg(NO₂)-OBzlを三フツ化酢酸で脱保護基化するこ
とにより、(S)Lys(Z)-(S)ABO-(S)Arg(NO₂)-OBzlを三フ
ツ化酢酸塩の形で定量的に得る。この生成物の純度は薄
層クロマトグラフイ（溶剤：CH₂Cl₂/MeOH、９５：５）
により確認する。

工程Ｆ：シクロ(S)Thr-(S)Lys(Z)-(S)ABO-(S)Arg(NO₂)-OBzl 前記工程Ｂに記載の技法に従い、(S)Lys(Z)-(S)ABO-(S)
Arg(NO₂)-OBzlを(S)−シクロスレオニン（すなわちシク
ロ(S)Thr-OHとカツプリングさせることにより、同一の
方法でシクロ(S)Thr-(S)Lys(Z)-(S)ABO-(S)Arg(NO₂)-OB
zlを得る。生成物はシリカ（６０〜２３０メツシユ）上
で溶剤としてCH₂Cl₂/MeOH、（９６：４）混合物を用い
るクロマトグラフイにより精製する。

主要¹³CNMR特性（DMSO-d₆/TMS） ppmによるδ Ｃ^αシクロThr＝６０．０Ｃ^αLys＝４９．０Ｃ^αABO＝５９．７Ｃ^αArg＝５１．５工程Ｇ：シクロ(S)Thr-(S)Lys-(S)ABO-(S)Arg-OH 前工程で得られたシクロ(S)Thr-(S)Lys(Z)-(S)ABO-(S)A
rg(NO₂)-OBzl０．００１２モルを酢酸８０m中で３バ
ールの水素圧下にパラジウム含有木炭（１０％パラジウ
ム）４００mgの存在の下で接触水素添加する。溶媒を減
圧下に蒸発させた後に、無定形残留物を蒸留水５mに
取り入れ、微細濾過により分離し、次いで凍結乾燥させ
る。

シクロ(S)Thr-(S)Lys-(S)ABO-(S)Arg-OH−酢酸塩が得ら
れる（収率：９０％）スペクトル特性： IR： V(CO)：１７５０cm^-1 質量分析 FAB＋KVスペクトル（７ＫＶ）プロトン付加分子イオン〔Ｍ＋Ｈ〕^＋Ｍ／Ｚで５６７
（C₂₅H₄₂N₈O₇：分子量＝５６６）例２シクロ(S)Thr-(S)Lys-(S)THIQ-(S)Arg-OH 工程Ａ： tBoc(S)THIQ-OH、すなわち（３ｓ）−２−第３ブトキシ
カルボニル−１，２，３，４，−テトラヒドロ−３−イ
ソキノリンカルボン酸この化合物は、例１の工程Ａに記載の方法にしたがう
が、(S)ABO-OHの代りに、(S)THIQ-OHを使用して製造す
る。

工程Ｂ： tBoc(S)THIQ-(S)Arg(NO₂)-OCH₃ (S)-N^ω−ニトロアルギニンメチルエステル、すなわち
(S)-H-Arg(NO₂)-OCH₃および前工程で得られたtBoc(S)TH
IQ-OHを使用し、例１の方法に従い、tBoc(S)THIQ-(S)Ar
g(NO₂)-OCH₃を油状物の形で得る。この生成物の純度は
薄層クロマトグラフイ（溶剤：酢酸エチル；Rf＝0.2）
により確認する。

IRスペクトル特性： V(CO)＝１７４０cm^-1 工程Ｃ： (S)THIQ-(S)Arg(NO₂)-OCH₃ 例１の工程ＣにおけるtBoc(S)ABO-(S)Arg(NO₂)-OBzlの
代りに、前工程で得られたtBoc(S)THIQ-(S)Arg(NO₂)-OC
H₃を使用して、(S)THIQ-(S)Arg(NO₂)-OCH₃を同一の方法
で三フツ化酢酸塩の形で得る。

NMR(¹H)スペクトル特性：１．７ppm：４Ｈ（CH₂）３．２ppm：４Ｈ（CH₂N,CH₂−φ）３．６ppm：３Ｈ（COOCH₃）４．３ppm：４Ｈ（N-CH-CO,N-CH₂−φ）７．３ppm：４Ｈ（フエニル）７．４〜１０．０ppm：交換可能なプロトン工程Ｄ： tBoc(S)Lys(Z)-(S)THIQ-(S)Arg(NO₂)-OCH₃ 例１の工程Ｄにおける(S)ABO-(S)Arg(NO₂)-OBzl・TFAの
代りに、前工程で得られた(S)THIQ-(S)Arg(NO₂)-OCH₃・T
FAを使用して、tBoc(S)Lys(Z)-(S)THIQ・(S)Arg(NO₂)-OC
H₃を得る。この生成物はシリカゲル上のクロマトグラフ
イにより精製する（溶剤：酢酸エチル；Rf＝0.16；収
率：６６％。

工程Ｅ： (S)Lys(Z)-(S)THIQ-(S)Arg(NO₂)-OCH₃ 例１の工程Ｃで使用されている方法に従い、(S)Lys(Z)-
(S)THIQ-(S)Arg(NO₂)-OCH₃がtBoc(S)Lys(Z)-(S)THIQ-
(S)Arg(NO₂)-OCH₃から三フツ化酢酸塩の形で得られる。

薄層クロマトグラフイ（溶剤：CH₂Cl₂/MeOH、９０：１
０；Rf＝0.13）。

工程Ｆ：シクロ(S)Thr-(S)Lys(Z)-(S)THIQ-(S)Arg(NO₂)-OCH₃ 例１の工程Ｆで(S)Lys(Z)-(S)ABO-(S)Arg(NO₂)-OBzl・TF
Aの代りに(S)Lys(Z)-(S)THIQ-(S)Arg(NO₂)-OCH₃・TFAを
使用する。シクロ(S)Thr-(S)Lys(Z)-(S)THIQ-(S)Arg(NO
₂)-OCH₃が濃厚油状物の形で得られる。この生成物はさ
らに処理することなく次の工程で使用する。

工程Ｇ：シクロ(S)Thr-(S)Lys(Z)-(S)THIQ-(S)Arg(NO₂)-OH 前工程で得られたシクロ(S)Thr-(S)Lys(Z)-(S)THIQ-(S)
Arg(NO₂)-OCH₃０．００１モルをメタノール２０cm³中に
溶解し、0.1Ｎ水酸化ナトリウム１０cm³を加え、混合物
を室温に２４時間保持する。減圧下に濃縮し、水３０cm
³中に取り入れ、次いで0.1Ｎ塩酸１０cm³の添加により
中和する。沈殿を濾別し、水で、次いで塩化メチレンで
洗浄し、次いで乾燥させる。収率：７８％スペクトル特性：質量分析：工程Ｈ：シクロ(S)Thr-(S)Lys-(S)THIQ-(S)Arg-OH 前工程で得られたシクロ(S)Thr-(S)Lys(Z)-(S)THIQ-(S)
Arg(NO₂)-OH0.0005モルを酢酸５０cm³に溶解する。３kg
/cm²の水素圧下にパラジウム含有木炭（１０％パラジウ
ム）２００mgの存在の下で接触水素添加する。溶媒を減
圧下に蒸発させた後に、残留物を蒸留水５cm³に取り入
れ、微細濾過により分離し、次いで凍結乾燥させる。シ
クロ(S)Thr-(S)Lys-(S)THIQ-(S)Arg-OH一酢酸塩が得ら
れる。収率：９８％。

スペクトル特性質量分析例３シクロ(S)Thr-(S)Lys-PHII-(S)Arg-OH 例２の工程Ａで、（３ｓ）−１，２，３，４−テトラヒ
ドロ−３−イソキノリンカルボン酸、すなわち(S)THIQ-
OHの代りに、パーヒドロ−１−イソインドールカルボン
酸、すなわちPHII-OHを使用し、下記の化合物を順次、
得る： tBocPHII-OH tBocPHII-(S)Arg(NO₂)-OCH₃ PHII-(S)Arg(NO₂)-OCH₃・TFA tBoc(S)Lys(Z)-PHII-(S)Arg(NO₂)-OCH₃ (S)Lys(Z)-PHII-(S)Arg(NO₂)-OCH₃・TFA シクロ(S)Thr-(S)Lys(Z)-PHII-(S)Arg(NO₂)-OCH₃ シクロ(S)Thr-(S)Lys(Z)-PHII(S)Arg(NO₂)-OH シクロ(S)Thr-(S)Lys-PHII-(S)Arg-OH 最終生成物は一酢酸塩の形で凍結乾燥させる。

スペクトル特性質量分析：例４シクロ（２Ｓ，３Ｒ）AHPA-(S)Lys-(S)ABO-(S)Arg-OH H.UmezawaおよびM.Ohnoによりヨーロツパ特許第０，１
５６，２７９号に記載されているシクロ（２Ｓ，３Ｒ）
AHPA-OH、すなわち（４Ｒ，５Ｓ）−２−オキソ−４−
ベンジル−１，３−オキサゾリジン−５−カルボン酸を
Y.Stabinsky等の方法（Int.J.Peptide,Prot.Res.,１９
７８年、１２、１３０〜１３８頁）に従い、T.Takita等
により記載された（J.Med.Chem.,，１９７７年、２０、
５１０〜５１５頁）Ｚ（２Ｓ，３Ｒ）AHPA-OH、すなわ
ち（２Ｓ，３Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−ベンジルオキ
シカルボニルアミノ−４−フエニルブタン酸から製造す
る。

例１の工程Ｆで、シクロ(S)Thr-OHの代りにシクロ（２
Ｓ，３Ｒ）AHPA-OHを使用し、下記の化合物を順次、得
る：シクロ（２Ｓ，３Ｒ）AHPA-(S)Lys(Z)-(S)ABO-(S)Arg(N
O₂)-OBzl シクロ（２Ｓ，３Ｒ）AHPA-(S)Lys-(S)ABO-(S)Arg-OH 最終生成物は一酢酸塩の形で凍結乾燥させる。

スペクトル特性：ＩＲ：ＶＳ〔Ｃ＝Ｏ（オキサゾリジノン）〕：１７６０cm^-1 質量分析：FAB⁺スペクトルプロトン付加分子イオン〔Ｍ＋Ｈ〕^＋Ｍ／Ｚ：６４３。

例５〔（４Ｒ）−４−メチル−２−オキソ−１，３−オキサ
ゾリジニル−５−カルボニル〕−(S)Lys-(S)ABO-(S)Arg
-OH Ｚ（２Ｓ，３Ｒ）AHPA-OHの代りに、T.Takita等により
記載された（３Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−ベンジルオ
キシカルボニルアミノブタン酸（J.Med.Chem.，１９７
７年、２０、５１０〜５１５頁）を使用すると、下記の
化合物が順次、得られる：（４Ｒ）−２−オキソ−４−メチル−１，３−オキサゾ
リジン−５−カルボン酸（この化合物はY.Shimohigashi
等によりBull.Chem.Soc.Jpn.，１９７９年、５２、(3)
９４９〜９５０頁に記載されている）、〔（４Ｒ）−４−メチル−２−オキソ−１，３−オキサ
ゾリジニル−５−カルボニル〕−(S)Lys(Z)-(S)ABO-(S)
Arg(NO₂)-OBzl 〔（４Ｒ）−４−メチル−２−オキソ−１，３−オキサ
ゾリジニル−５−カルボニル〕−(S)Lys-(S)ABO-(S)Arg
-OH。

最終生成物は一酢酸塩の形で凍結乾燥させる。

スペクトル特性： IR：VS〔CO（オキサゾリジノン）〕：１７５０cm^-1 質量分析：m/z＝ＦＡＢ^＋スペクトル〔Ｍ＋Ｈ〕^＋＝５６７〔Ｍ＋Ｎａ〕^＋＝５８９〔Ｍ−Ｈ＋２Na〕^＋＝６１１例６シクロGABOB-(S)Lys-(S)ABO-(S)Arg-OH 工程Ａ： N-ZGABOB-OH、すなわち３−ヒドロキシ−４−ベンジル
オキシカルボニルアミノブタン酸 BergmannおよびZervasの方法（Ber.，１９３２年、６
５、１１９２頁）に従い３−ヒドロキシ−４−アミノブ
タン酸（GABOB-OH）から製造する。

工程Ｂ：シクロGABOB-OH、すなわち５−カルボキシメチル−２−
オキソ−１，３−オキサゾリジン Y.Stabinsky等により記載された方法（Int.J.Peptide P
rot.Res.,１９７８年、１２、１３０〜１３８頁）を使
用して、シクロGABOB-OHを前工程で製造されたNZ-GABOB
-OHから得る。

工程Ｃ：シクロGABOB-(S)Lys-(S)ABO-(S)Arg-OH 例１の工程Ｆでシクロ(S)Thrの代りに、シクロGABOB-OH
を使用すると、下記の化合物が順次、得られる：シクロGABOB-(S)Lys(Z)-(S)ABO-(S)Arg(NO₂)-OBzl シクロGABOB-(S)Lys-(S)ABO-(S)Arg-OH 最終生成物は一酢酸塩の形で凍結乾燥させる。

例７シクロStat-(S)Lys-(S)ABO-(S)Arg-OH 例６の工程Ａで３−ヒドロキシ−４−アミノブタン酸、
すなわちGABOB-OHの代りに、３−ヒドロキシ−４−アミ
ノ−６−メチルヘプタン酸、すなわちスタチン（Stat-O
H）を使用すると、下記の化合物が順次、得られる：工程Ａ：N-Z-Stat-OH、すなわち３−ヒドロキシ−４−
ベンジルオキシカルボニルアミノ−６−メチルヘプタン
酸工程Ｂ：シクロStat-OH、すなわち２−オキソ−４−イ
ソブチル−５−カルボニルメチル−１，３−オキサゾリ
ジン工程Ｃ：シクロStat-(S)Lys-(S)ABO-(S)Arg-OH 最終生成物は一酢酸塩の形で凍結乾燥させる。

例８ TZC-(S)Lys-(S)ABO-(S)Arg-OH 例１の工程Ｆで（Ｓ）−シクロスレオニンの代りに、２
−オキソ−４−チアゾリジンカルボン酸（TZC-OH）を用
いると、下記の化合物が順次、得られる： TZC-(S)Lys(Z)-(S)ABO-(S)Arg(NO₂)-OBzl TZC-(S)Lys-(S)ABO-(S)Arg-OH 最終生成物は一酢酸塩の形で凍結乾燥させる。

スペクトル特性：質量分析：m/z ＦＡＢ^＋スペクトル：〔Ｍ＋Ｈ〕^＋：５６９ＦＡＢ⁻スペクトル：〔Ｍ−Ｈ〕⁻：５６７〔Ｍ−Ｈ−Ｈ_２Ｓ〕⁻：５
３３例９シクロ(S)Thr-(S)Lys-(S)PHI-(S)Arg-OH 例１の工程ＢでtBoc(S)ABO-OHに代りに、上記例１の工
程Ａの記載により製造された（２Ｓ，３ａＳ，７ａＳ）
−１−第３ブトキシカルボニルパーヒドロ−２−インド
ールカルボン酸、すなわちtBoc(S)PHI-OHを使用し、次
いで本発明の例１の工程Ｂ〜工程Ｇに記載のように処理
すると、下記の誘導体が得られる：シクロ(S)Thr-(S)Lys-(S)PHI-(S)Arg-OH 生成物は一酢酸塩の形で凍結乾燥させる。

例１０ＮＫ活性の増強本発明による化合物をそれらの「自然キラー」活性の増
強能力に係り試験した。この能力が付与されている細胞
は敗血性、ウイルス性または腫瘍の侵襲に対する身体の
防衛ラインの第一線を形成している。

本発明の化合物の刺激的能力を評価するために、これら
の化合物をReynolds等の技法（J.Immunol.１２７、２８
２頁）に従い試験した。

被験化合物をB6D2F1株マウスに２０〜５０μｇ／kgの投
与量で静脈内注射する。

処置した後の３日目に、動物を犠牲にし、それらの脾臓
を取り出し、その構成細胞に分離し、次いで放射性クロ
ムで予め標識をつけたYAC−１腫瘍細胞が存在する培地
に接種する。インキユベーシヨン期間の終了時点で、本
発明の化合物の破壊的能力を放出されたクロムの量から
評価する。

一例として、例１の化合物は２５μｇ／kgの投与量でク
ロムの放出を対照に対して１５％増加させる。この結果
は(S)Thr-(S)Lys-(S)ABO-(S)Arg-OHによって生じる結果
と同一であり、他方タフトシンは４０μｇ／kgの投与量
で放出を１０％増加させるだけである。

例１１Ｂ１６メラノーマの増殖の阻害メラノーマは患者の免疫系の反応に感受性のある癌性腫
瘍である。メラノーマは抗腫瘍防衛の刺激性を評価する
場合に選ばれるモデルである。

本発明の例９の化合物は、たとえば一週間に３回２０μ
ｇ／kgの割合で腹腔内投与した場合に、マウスＢ１６メ
ラノーマの増殖を４５％減少させることができることが
証明された。同一条件において、(S)Thr-(S)Lys-(S)Phi
-(S)Arg-OHで得られたパーセンテージは４０％にすぎ
ず、またタフトシンはこの移植腫瘍の増殖速度を減少さ
せることはできないことが証明されている。

例１２動物の感染に対する抵抗性の増大健康な宿主に接種された或る種の病原性細菌は宿主を殺
すことができる。たとえば、クレブシエラプネウモニ
アエ（Klebsiella pneumoniae）の場合に、ペネウモニ
アに応答できる薬剤が存在する（Parent等によるProc.N
atl.Acad.Sci.USA，１９７８年、７５、No.７、３３９
５頁）。

本発明の例１の化合物は、(S)Thr-(S)Lys-(S)ABO-(S)Ar
g-OHと同一の挙動を示し、たとえば６０μｇ／動物の投
与量で感染前４８時間に投与すると、クレブシエラプ
ネウモニアエ株７８２３をIP接種した、体重２０〜２５
ｇの雌のswissマウスの全部を、感染による死から防護
することができる。同一条件下に、タフトシンは動物の
僅かに２０％を救うことができるだけである。

例１３抗体応答に対する評価本発明による化合物をマウスにおける羊赤血球に対する
抗体応答に係るそれらの能力について試験した。

抗体応答はJerneの技法（Science，１９６３年、１４
０、４０５頁）に従いインビトロで評価する。

平均体重２３ｇの雄のＣ５７Ｂ１／６マウスを、羊赤血
球の腹腔内接種の前、４８時間に本発明による化合物を
静脈内投与することにより処理する。５日後に、羊赤血
球に対する特異性抗体の生産をこれらの動物の脾臓細胞
の懸濁液で検出する。

一例として、本発明の例１による化合物は、１mg/kgの
投与量で投与した場合に、マウスにおける羊赤血球に対
する抗体応答を５０％増加させることができることが証
明された。

比較例として、タフトシンであるY.Stabinsky等の誘導体は同一条件下
に、この抗体応答を３５％だけ増加させることができ
る。ヨーロツパ特許第０，１９０，０５８号の例８の相
当する誘導体はこの試験で不活性であることが証明され
た。

例１４非特異性食菌作用の試験本発明による化合物をそれらの非特異性食菌作用の増加
に係り試験した。

この試験は流動血球計算により処理した後に、イヌの全
血中に存在する多形核白血球が直径1.8μｍのラテツク
スビーズを食べる能力を一方で本発明の化合物の存在下
におよび他方で本発明の化合物の不存在下に（対照）測
定することよりなる。

一例として、本発明の例１による化合物は非特異的食菌
作用に係る多形核白血球の能力を対照に比較して１９％
増加させることができ、他方タフトシンは同一条件下
に、有意の応答を示さないことが証明された。

例１５オキサゾロンに対する遅延型過敏反応この試験は動物をオキサゾロンに対して感作し、７日後
に、遅延型過敏反応試験を一方で本発明による化合物の
不存在下に（対照）および他方で本発明による化合物を
投与した後に、行なうことよりなり、両方の場合に、犠
牲にした動物の耳の重量を測定する。耳は炎症反応の場
所であり、その重量はこの反応の強度により変わる。本
発明の例１による化合物で処置した後に、被験動物の耳
の重量の増加の対照動物群の耳重量よりも１１％重い。
タフトシンはこの試験で有意の応答を示さない。

例１６医薬組成物注射用溶液シクロ(S)Thr-(S)Lys-(S)PHI- (S)Arg-OH ０．０５０ｇ注射用水２cm 皮膚クリームシクロ(S)Thr-(S)Lys-(S)ABO- (S)Arg-OH ２ｇポリプロピレングリコール２５ｇ白色ワセリン１０ｇアルコール９５°強度１０ｇ精製水全量を１００ｇにする量

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】一般式Ｉ〔式中Ｒは水素原子、炭素原子１〜４個を有する直鎖状
または分子鎖状アルキル基、置換基としてヒドロキシ基
を有していてもよいフェニルまたはチエニル基、あるい
はベンジル基を表わし、Ｒ′は水素原子あるいは炭素原子１〜４個を有する直鎖
状または分枝鎖状アルキル基を表わし、Ｘは酸素原子またはNH基を表わし、ＹはＸがNH基を表わす場合に、酸素原子または硫黄原子
を表わし、あるいはＹはＸが酸素原子を表わす場合に、
NH基を表わし、ｔは０または１を表わし、 LysおよびArgはそれぞれペプチド結合で結合されている
リジルおよびアルギニル残基を表わし、は次式で示される二環状構造基（式中ｍは１または０に等しく、ｎおよびｐは０、１ま
たは２を表わし、RaおよびRbは水素原子を表わすか、あ
るいはRaおよびRbはｐが０である場合に一緒になって直
接結合を表わすことができ、Ｂはアルキレン鎖(CH₂)_qを
表わし、ここでｑは２、３または４に等しく、あるいは
Ｂはｐ＝０であり、そしてRaおよびRbが一緒になって結
合を表わす場合に、不飽和構造基(-CH＝CH-)₂を表わ
し、ただしｍ、ｎ、ｐおよびｑの合計は３〜６の整数で
ある）を表わすか、あるいはは1,2,3,4−テトラヒドロ−ベータ−カルボリンを表わ
す〕で示される化合物、それらのエナンチオマー、エピ
マーおよびジアステレオマーならびに医薬的に許容され
る酸または塩基によるそれらの付加塩。
【請求項２】環状構造基がインドリン、イソインドリン、テトラヒドロキノリ
ン、テトラヒドロイソキノリン、パーヒドロインドー
ル、パーヒドロイソインドール、パーヒドロキノリン、
パーヒドロイソキノリン、パーヒドロシクロペンタ
〔ｂ〕ピロール、２−アザビシクロ〔2,2,2〕オクタ
ン、２−アザビシクロ〔2,2,1〕ヘプタンまたは1,2,3,4
−テトラヒドロ−ベータ−カルボリンを表わす化合物、
それらのエナンチオマー、エピマーおよびジアステレオ
マー、ならびに医薬的に許容される酸または塩基による
それらの付加塩である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】環状構造基がパーヒドロインドールまたはアザビシクロ〔2,2,2〕
オクタンを表わす化合物、それらのエナンチオマー、エ
ピマーおよびジアステレオマーならびに医薬的に許容さ
れる酸または塩基によるそれらの付加塩である、請求項
１または２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４】シクロ(S)Thr-(S)Lys-(S)ABO-(S)Arg-OHお
よび医薬的に許容される酸または塩基によるその付加塩
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】シクロ(S)Thr-(S)Lys-(S)PHI-(S)Arg-OHお
よび医薬的に許容される酸または塩基によるその付加塩
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】シクロ(S)Thr-(S)Lys-(S)THIQ-(S)Arg-OH
および医薬的に許容される酸または塩基によるその付加
塩である、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】シクロ(S)Thr-(S)Lys-PHII-(S)Arg-OH、そ
のエナンチオマー、ジアステレオマーおよび医薬的に許
容される酸または塩基によるその付加塩である、請求項
１に記載の化合物。
【請求項８】シクロ(2S,3R)AHPA-(S)Lys-(S)ABO-(S)Arg
-OHおよび医薬的に許容される酸または塩基によるその
付加塩である、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】(4R)−４−メチル−２−オキソ−1,3−オ
キサゾリジニル−５−カルボニル−(S)Lys-(S)ABO-(S)A
rg-OH、そのエナンチオマーおよび医薬的に許容される
酸または塩基によるその付加塩である、請求項１に記載
の化合物。
【請求項１０】シクロGABOB-(S)Lys-(S)ABO-(S)Arg-O
H、そのエナンチオマーおよび医薬的に許容される酸ま
たは塩基によるそれらの付加塩である、請求項１に記載
の化合物。
【請求項１１】一般式Ｉ〔式中Ｒは水素原子、炭素原子１〜４個を有する直鎖状
または分子鎖状アルキル基、置換基としてヒドロキシ基
を有していてもよいフェニルまたはチエニル基、あるい
はベンジル基を表わし、Ｒ′は水素原子あるいは炭素原子１〜４個を有する直鎖
状または分枝鎖状アルキル基を表わし、Ｘは酸素原子またはNH基を表わし、ＹはＸがNH基を表わす場合に、酸素原子または硫黄原子
を表わし、あるいはＹはＸが酸素原子を表わす場合に、
NH基を表わし、ｔは０または１を表わし、 LysおよびArgはそれぞれペプチド結合で結合されている
リジルおよびアルギニル残基を表わし、は次式で示される二環状構造基（式中ｍは１または０に等しく、ｎおよびｐは０、１ま
たは２を表わし、RaおよびRbは水素原子を表わすか、あ
るいはRaおよびRbはｐが０である場合に一緒になって直
接結合を表わすことができ、Ｂはアルキレン鎖(CH₂)_qを
表わし、ここでｑは２、３または４に等しく、あるいは
Ｂはｐ＝０であり、そしてRaおよびRbが一緒になって結
合を表わす場合に、不飽和構造基(-CH＝CH-)₂を表わ
し、ただしｍ、ｎ、ｐおよびｑの合計は３〜６の整数で
ある）を表わすか、あるいはは1,2,3,4−テトラヒドロ−ベータ−カルボリンを表わ
す〕で示される化合物、それらのエナンチオマー、エピ
マーおよびジアステレオマーならびに医薬的に許容され
る酸または塩基によるそれらの付加塩の製造方法であっ
て、式II （式中tBocは第３ブトキシカルボニル基を表わし、そし
てＡはこれが結合している炭素原子および窒素原子と一
緒になって、式Ｉにおける意味と同一の意味を有する）
で示される誘導体をＮ^ω−ニトロアルギニンメチルエス
テル（Ｈ−Arg(NO₂)OCH₃）またはベンジルエステル（Ｈ
−Arg(NO₂)OCH₂C₆H₅）と縮合させ、式III （式中Ａはこれが結合している炭素原子および窒素原子
と一緒になって、式Ｉにおける意味と同一の意味を有
し、そして式中Ｄはメチルまたはベンジル基を表わす）で示される誘導体を生成させ、この生成物を次いでトリ
フルオル酢酸により脱保護基処理し、式IV （式中Ａはこれが結合している炭素原子および窒素原子
と一緒になって、式Ｉにおける意味と同一の意味を有
し、そしてＤは式IIIにおけるＤと同一の意味を有す
る）で示される誘導体を生成させ、この生成物を次いでＮ^α
−第３ブトキシカルボニル−Ｎ^ω−ベンジルオキシカル
ボニルリジン、(tBoc)Lys(Z)と縮合させ、式Ｖ（式中Ａはこれが結合している炭素原子および窒素原子
と一緒になって式Ｉにおける意味と同一の意味を有し、
そしてＤは式IIIにおけるＤと同じ意味を有する）で示される化合物を生成させ、この生成物にトリフルオ
ル酢酸を作用させ、式VI （式中Ａはこれが結合している炭素原子および窒素原子
と一緒になって式Ｉにおける意味と同一の意味を有し、
そしてＤは式IIIにおけるＤと同じ意味を有する）で示される誘導体に変換し、この生成物を式VII （式中Ｒ、Ｒ′、Ｘ、Ｙおよびｔは式Ｉにおける意味と
同一の意味を有する）で示される誘導体と縮合させ、式VIII （式中Ａはこれが結合している炭素原子および窒素原子
と一緒になって式Ｉにおける意味と同一の意味を有し、
Ｒ、Ｒ′、Ｘ、Ｙおよびｔは式Ｉにおける意味と同一の
意味を有し、そしてＤは式IIIにおけるＤと同一の意味
を有する）で示される誘導体を導き、次いで、この生成物を、ＤがCH₃を表わす場合には、ケン化によ
り脱保護基処理し、次いで接触水素添加し、あるいはＤ
がベンジル基を表わす場合には、接触水素添加して、式
Ｉで示される誘導体を生成させ、所望により、この生成
物を医薬的に許容される酸または塩基により塩形成さ
せ、あるいはその異性体に分離し、次いで必要に応じ
て、医薬的に許容される酸または塩基により塩形成させ
る、ことを特徴とする製造方法。
【請求項１２】請求項１に記載の化合物の製造に有用で
ある、請求項11に記載の一般式VIIIで示される化合物。
【請求項１３】活性成分として、一般式Ｉ〔式中Ｒは水素原子、炭素原子１〜４個を有する直鎖状
または分子鎖状アルキル基、置換基としてヒドロキシ基
を有していてもよいフェニルまたはチエニル基、あるい
はベンジル基を表わし、Ｒ′は水素原子あるいは炭素原子１〜４個を有する直鎖
状または分枝鎖状アルキル基を表わし、Ｘは酸素原子またはNH基を表わし、ＹはＸがNH基を表わす場合に、酸素原子または硫黄原子
を表わし、あるいはＹはＸが酸素原子を表わす場合に、
NH基を表わし、ｔは０または１を表わし、 LysおよびArgはそれぞれペプチド結合で結合されている
リジルおよびアルギニル残基を表わし、は次式で示される二環状構造基（式中ｍは１または０に等しく、ｎおよびｐは０、１ま
たは２を表わし、RaおよびRbは水素原子を表わすか、あ
るいはRaおよびRbはｐが０である場合に一緒になって直
接結合を表わすことができ、Ｂはアルキレン鎖(CH₂)_qを
表わし、ここでｑは２、３または４に等しく、あるいは
Ｂはｐ＝０であり、そしてRaおよびRbが一緒になって結
合を表わす場合に、不飽和構造基(-CH＝CH-)₂を表わ
し、ただしｍ、ｎ、ｐおよびｑの合計は３〜６の整数で
ある）を表わすか、あるいはは1,2,3,4−テトラヒドロ−ベータ−カルボリンを表わ
す〕で示される化合物、それらのエナンチオマー、エピ
マーおよびジアステレオマーならびに医薬的に許容され
る酸または塩基によるそれらの付加塩の少なくとも一種
を、医薬的に許容される無毒性の不活性賦形剤またはベ
ヒクルの一種または二種以上と組合せて含有する、自然
の免疫応答不全疾患治療剤。