JPH06500231A - 抗生物質ｇｅ１６５５複合体及びその因子ａ、ｂ及びｃ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 抗生物質ＧＥ１６５５複合体及びその因子Ａ、Ｂ及びＣ本発明は、独断的に抗生 物質ＧＥ１６５５複合体（ｃ　ａｍｐ　１　ｅ　ｘ）と命名する新規抗生物質、 その因子である抗生物質ＧＥ１６５５因子Ａ１抗生物質ＧＥ１６５５因子Ｂ、及 び抗生物質ＧＥ１６５５因子Ｃ１該因子の任意の割合における混合物、製薬学的 に許容しつるその塩、その製薬学的組成物、ならびに新規抗生物質の薬剤として 、特に動物及び人の菌・カビ感染の処置のための利用に関する。これらは植物に おける植物病原性微生物の抑制にも使用することができる。

本発明の他の目的は、新株ストレプトミセス・ヒグロスコピクス（Ｓｔｒｅｐｔ ｏｍｙｃｅｓ　ｈｙ　ｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ）ＡＴＣＣ５５０８５又は抗生物質 ＧＥ１６５５を生産するその変異株又は突然変異体を培養し、その発酵ブイヨン から複合体を回収し、因子Ａ、Ｂ及びＣを分離する段階を含む抗生物質ＧＥ１６ ５５複合体及びその因子Ａ１ＢならびにＣの製造法である。

その物理化学的性質に従い抗生物１０Ｅ１６５５複合体及びその因子Ａ、Ｂなら びにＣは、アザロマイシンの種類に帰することができる。この種類の最も代表的 抗生物質であるアザロマイシンは、グアニジノ基の窒素上に存在する置換基が互 いに異なる少なくとも３種類の主成分の混合物としてストレプトミセス・ヒグロ スコピクス変異株ザロミセチクス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｈｙｇｒｏｓｃ ｏｐｉｃｕｓ　ｖａｒ。

ｚａｌｏｍｙｃｅｔｉｃｕｓ）により生産される大環状ポリヒドロキシルラクト ンの種類の抗生物質である（複合体の生産に関しては米国特許第３０７６７４６ 号、因子の単離に関してはＪ、Ａｎｔ　ｉｂ、、Ｓｅｒ。

この種類の抗生物質の他の仲間は、例えばグアニジルフンジン（ｇｕａｎｉｄｙ ｌｆｕｎｇｉｎ）（日本特許第８３１７０４８２号及びＪ。

Ａｎｔ　ｉｂ、、Ｓｅｔ、Ａ、３７．１１６１．１１７０　（１９８４））及び コビアマインン（ｃｏｐｉａｍｙｃｉｎ）（米国特許第３６２７８８０号）であ る。

ストレプトミセス　ヒグロスコピクス　ＡＴＣＣ５５０８５は、Ｄｅｈｒａｄｕ ｎ　（インド）で集められた土壌試料から単離され、１１９０年８月６日、ブタ ベスト条約の規定の基にＡｍｅｒｉｃａｎ　’ｒＶＩ）ｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｃ ｏ１１ｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）、１２３０１Ｐａｒｋｌａｗｎ　Ｄｒｉｖｅ、 Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ　２０８５２　Ｍａｒｙｌａｎｄ、Ｕ、Ｓ、Ａ、に預 託された。

株は受け入れ番号ＡＴＣＣ５５０８５を与えられた。

抗生物賀ＧＥ１６５５複合体の生産は、それを生産することができるストレプト ミセス株、すなわちストレプトミセス・ヒグロスコピクスＡＴＣＣ５５０８５又 は抗生物質ＧＥ１６５５を生産するその変異株又は突然変異体を、炭素、窒素の 同化源及び無機塩を含む水性普通培地中の好気性条件下で培養することにより行 う。発酵の技術で通常用いられる普通培地の多くを使用することができるが、あ る種の培地が好ましい。

好ましい炭素源は、グルコース、マンノース、ガラクトース、澱粉、とうもろこ し粉などである。好ましい窒素源は、アンモニア、硝酸塩、大豆粉、ペプトン、 内袖出物、酵母抽出物、トリプトン、アミノ酸などである。培地中に挿入するこ とができる無機塩の中には、ナトリウム、カリウム、鉄、亜鉛、コバルト、マグ ネシウム、カルシウム、アンモニウム、塩化物、炭酸塩、硫酸塩、リン酸塩、硝 酸塩などのイオンを与えることができる通常の可溶性塩がある。

通常抗生物質生産株は、震盪フラスコ中で予備−培養し、その後培養物を、実質 的量の抗生物質の生産のためのジャー発酵器に接種するのに用いる。予備−培養 に用いる培地は、より大規模の発酵に用いる培地と同一であることができるが、 他の培地も使用することができる。

抗生物質ＧＥ１６５５生産株は、２０−４０℃、好ましくは２４−３５℃の温度 で成育することができる。

発酵の間に、例えばバイオアッセイ又はＴＬＣあるいはＨＰＬＣ法によりブイヨ ン試料を抗生物質活性に関して調べ、抗生物質生産を監視することができる。

カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ）などの抗生物質 ＧＥ１６５５に感応性の生物を試験生物として使用することができる。バイオア ッセイは寒天プレート上の寒天拡散により簡単に行う。抗生物質活性の最大生産 は一般に、発酵の第２及び第５日の間に起こる。

抗生物質ＧＥ１６５５複合体は、株ストレプトミセス・ヒグロスコピクス　ＡＴ ＣＣ５５０８５又は抗生物質ＧＥ１６５５を生産するその変異株又は突然変異体 を培養することにより生産され、それは主に培養ブイヨン中に見いだされる。

本発明において、本発明の化合物をその物理化学的又は生化学的性質と関連して 扱う場合、“抗生物質ＧＥ１６５５”は一般に、発酵過程の最後に回収される抗 生物質ＧＥ１６５５複合体を言うものと考える（実施例２を参照）。

ストレプトミセス・ヒグロスコピクス　ＡＴＣＣ５５０８５の形態学的特徴 ストレプトミセス・ヒグロスコピクス　ＡＴＣＣ５５０８５は、はとんどの標準 的培地上で良く成育する。一般に厚くて堅い表面を持つ増殖菌糸体は、直径が約 ０．８マイクロメーターの曲がりくねり、分校した菌糸から成る。それはほとん どの培地上でクリーム色から淡黄色を呈する。気中菌糸体（ａｅｒｉａｌ　ｍｙ ｃｅｌ　ｉｕｍ）は直径が０．８−１．０マイクロメーターの長くて分校した菌 糸から成り、非常に近接して２−５回転の螺旋状に配置された担胞子体を形成し 、それは気中菌糸の主幹上に密度の高いクラスターとして位置している。他の放 線菌類中で一般に非常に嫌気性である気中菌糸体は、ある種の培地上で（それぞ れマンニトール、ガラクトース、ラクトース、マンノース、デキストロース、イ ノシトール、フルクトース、ラムノース及びリボースを加えたｌ５ＰＮ、３、Ｎ 、４、Ｎ、７、オートミール、ツアペックグルコース寒天及びＩＳＰ、Ｎ、８寒 天）湿気を帯び、暗く輝くバッチを表し、それは時間と共に表面全体に広がる。

胞子は、直径が１−１．　２Ｘ１．６マイクロメーターの丸かられずかに卵形で ある。その色は灰色であるが、湿ると暗茶色からほとんど黒になる。

ストレプトミセス・ヒグロスコピクス　ＡＴＣＣ５５０８５の培養特性 培養特性の実験のために、ストレプトミセス・ヒグロスコピクス　ＡＴＣＣ５５ ０８５を、Ｓｈｉｒｌｉｎｇ　ａｎｄ　Ｇｏｔｔｌｉｅｂ（Ｓｈｉｒｌｉｎｇ　 Ｅ、Ｂ、ａｎｄ　Ｇｏｔｔｌｉｅｂ　Ｄ、、１９６６−Ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　 Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　。

種々の標準的培地、及びＷａｋｓｍａｎ　（Ｗａｋｓｍａｎ、Ｓ、Ａ。

１９６１−Ｔｈｅ　Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｔｈｅ　Ｗｉｌｌｉａｍ　ａ ｎｄ　Ｗｉｌｋｉｎｓ　Ｃｏ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ：Ｖｏｌ。

２．３２８．３３４）により推奨された数種の培地上で培養した。

必要な場合はＭａｅｒｚ　ａｎｄ　Ｐａｕｌ　（Ａ、Ｍａｅｒｚ　ａｎｄ　Ｍ、 Ｒｅａ　Ｐａｕｌ、１９５０−Ａ　Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙｏｆ　Ｃｏ１ｏｒ−２ ｎｄ　Ｅｄｉｔｉｏｎ　ＭｃＧｒａｗ−ＨｉｌｌＢｏｏｋ　Ｃｏｍｐａｎｙ　Ｉ ｎｃ、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ）の方法により色の決定を行った。生物が異なる炭素源 を使用する能力を、Ｓｈｉｒｌｉｎｇ　ａｎｄ　Ｇｏｔｔｌｉｅｂにより記載さ れた方法で研究した。

培養及び生理学的特性ならびに炭素源の利用を表Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩに報告する 。表１は、２８℃で２週間のインキュベーション後に読み取ったものである。

表！ 培　地　形態学的性質 寒天　２０％）　灰色の胞子の豊富な形成。

文字と数字は、ＭａｅｒｚとＰａｕｌに従う色の決定を示す（上記参照）。

表ＩＩ 試験　結果 澱粉加水分解　陽性（強） チロシン加水分解　陽性（強） カゼイン加水分解　陽性（弱） ゼラチン液化　陽性（弱） リンゴ酸カルシウム　陽性（強） 加水分解 リドマス乳凝集　陰性 リドマス乳ペプトン化　陽性 メラニン形成　陽性（強） 表ＩＩＩ 炭水化物利用 炭素源　成育 デキストロース　十千十 フルクトース　＋＋＋ ガラクトース　＋＋＋ マンニトール　＋＋＋ ＋＋＋　豊富な成育 斗　中程度の成育 −成育せず この試験の場合、培地ＩＳＰ　８　（Ｔ、Ｇ、Ｐｒｉｄｈａｍ、Ｄ、Ｇ。

ｔｔｌｉｅｂ　Ｊ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、、５６，１０７−１１４゜１９４８） を用い、２８−３０℃で２週間インキュベートした後に結果を評価する。

細胞壁中に存在するアミノ酸の分析を、Ｍ、Ｚａｎｏｌ　ａｎｄ　Ｌ。

Ｇａ５ｔａｌｄｏ　′″ＨＰＬＣ５ｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅＴｈｒｅ ｅ　Ｓｔｅｒｅｏｉｓｏｍｅｒｓ　ｏｆ　Ｄｉａｍｉｎｏｐｉｍｅｌｉｃ　Ａｃ １ｄ　ｉｎ　Ｈｙｄｒｏｌｙｚｅｄ　Ｂａｃｔｅｒｉａｌ　Ｃｅ１ｌｓ”ＸＩＶ 　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｓｙｍｐ。

ｓｉｕｍ　ｏｎ　Ｃｏｌｕｍｎ　Ｌｉｑｕｉｄ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ 、Ｂｏｓｔｏｎ　Ｕ、Ｓ、Ａ、１９９０に記載のＨＰＬＣ法に全細胞中の糖含有 量の分析を、凍結乾燥したバイオマスをオートクレーブ中の０．５ＮのＨＣｌ中 、１７０℃にて７０分間加水分解した後に行った。得られた細胞懸濁液を０．７ ７ミクロンのミリポアフィルタ−に通し、その後Ｈ，Ｎ、Ｅｎｇｌｙｓｔ　ａｎ ｄ　Ｊ、Ｈ，ＣｕＣｕｍｍ１ｎ　：Ａｎａｌｙｓｔ、　１０９．　Ｉ）、　９３ ７−９４２　（１９８４）により公開された方法を用いて糖を誘導した。

ストレプトミセス　ヒグロスコピクス　ＡＴＣＣ５５０８５の同定以下の化学的 及び形態学的特徴の故に、抗生物質ＧＥ１６５５を生産する株をストレプトミセ ス属に帰し、ストレプトミセス　ヒグロスコピクスと分類した。

ａ）細胞壁にり、Ｌ−ジアミノピメリン酸が存在、ｂ）全細胞加水分解物中に特 徴的糖が不在、Ｃ）短くて非常に近接した螺旋中に配置された胞子の鎖中の気中 菌糸体の分化、 ｄ）気中菌糸体上に、胞子の高い吸湿性のための黒く輝（湿った点が存在。

他の生物の場合と同様に、抗生物質ＧＥ１６５５生度株の特徴は、変異を受け易 い。例えば紫外線、Ｘ−線、高周波、放射線及び亜硝酸、Ｎ−メチル−Ｎ′　− 二トローＮ−ニトロソグアニジン及び多数の化学物質などの種々の既知の突然変 異誘発物質で処理することにより、株の人工的変異株及び突然変異体を得ること ができる。ストレプトミセス　ヒグロスコピクス属の種に属し、抗生物質ＧＥ１ ６５５を生産するすべての天然の、及び人口の変異株及び突然変異体は、本発明 の目的に関して株ストレプトミセス・ヒグロスコピクス　ＡＴＣＣ５５０８５と 同等であるとみなされ、本発明の範囲内に含まれる。

上記の通り、一般に抗生物質ＧＥ１６５５複合体は主に発酵ブイヨン中で見いだ される。生産微生物の発酵ブイヨンからの抗生物質ＧＥ１６５５複合体の回収は 、溶剤を用いた抽出、非溶剤を加えることによるか又は溶液のｐＨを変えること による沈澱、分配クロマトグラフィー、逆相分配クロマトグラフィー、イオン− 交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィーなどを含む、それ 自体既知の方法に従って行う。

発酵ブイヨンからの本発明の抗生物質の回収法は、抗生物質、又は有機溶剤中に 可溶性のイオン対を形成するように設計された対イオンを持つその塩を水−非混 和性有機溶剤を用いて抽出し、その後おそらくは沈澱剤を添加することにより濃 縮抽出物から沈澱させるか、又はその水性残留物を水−非混和性溶剤でさらに抽 出する段階を含む。

本出願で用いる“水−非混和性溶剤”という用語は、当該技術において現在この 用語に与えられている意味を有し、使用条件において、使用目的に適した合理的 な広い濃度範囲で水と少し混和性であるか、又は事実上非混和性である溶剤を言 うものとする。

本発明の抗生物質の発酵ブイヨンからの抽出に使用することができる水−非混和 性有機溶剤の例は、炭素数が少なくとも４の直鎖状、分枝鎮状又は環状アルカノ ール、例えばｎ−ブタノール、１−ペンタノール、２−ペンタノール、３−ペン タノール、１−ヘキサノール、２−ヘキサノール、３−ヘキサノール、３．３− ジメチル−１−ブタノール、４−メチル−１−ペンタノール、３−メチル−１− ペンタノール、２．２−ジメチル−３−ペンタノール、２．４−ジメチル−３− ペンタノール、４．４−ジメチル−２−ペンタノール、５−メチル−２−ヘキサ ノール、１−ヘプタツール、２−ヘプタツール、５−メチル−１−ヘキサノール 、２−エチル−１−ヘキサノール、２−メチル−３−ヘキサノール、１−オクタ ノール、２−オクタツール、シクロペンタノール、２−シクロペンチルエタノー ル、３−シクロベンチルー１−プロパツール、シクロヘキサノール、シクロヘプ タツール、シクロオクタツール、２．３−ジメチルシクロヘキサノール、４−エ チルシクロヘキサノール、シクロオクチルメタノール、６−メチル−５−へブテ ン−２−オール、１−ノナノール、２−ノナノール、１−デカノール、２−デカ ノール及び３−デカノール；炭素数が少なくとも５のケトン、例えばメチルイソ プロピルケトン、メチルプロピルケトン、メチルイソブチルケトン、メチルｎ− アミルケトン、メチルイソアミルケトン及びこれらの混合物又は官能基誘導体で ある。

技術的に既知の通り、相分離は水相の塩析により促進される。

抽出の後、実質的量の水を含む有機相を回収した場合、そこから水を共沸により 蒸留するのが簡便である。一般にこれには、水と最低共沸混合物（ｍｉｎｉｍｕ ｍ　ａｚｅｏｔｒｏｐｉｃ　ｍ１ｘｔｕｒｅｓ）を形成することができる溶媒を 加え、必要なら所望の生成物の沈澱のための沈澱剤を加えることが必要である。

水と最低共沸混合物を形成することができる有機溶剤の代表的例は、ｎ−ブタノ ール、ベンゼン、トルエン、ブチルエーテル、四塩化炭素、クロロホルム、シク ロヘキサン、２゜５−ジメチルフラン、ヘキサン及びｍ−キシレンであり、好ま しい溶剤はｎ−ブタノールである。

沈澱剤の例は、石油エーテル、低級アルキルエーテル、例えばエチルエーテル、 プロピルエーテル及びブチルエーテル、ならびに低級アルキルケトン、例えばア セトンである。

抗生物質ＧＥ１６５５複合体の好ましい回収法に従い、濾過した発酵ブイヨンを 吸着マトリックスと接触させ、その後緩衝極性水−混和性溶媒又はその混合物を 用いて溶離し、減圧下で濃縮し、水−非混和性溶剤で抽出し、すでに上記に挙げ た種類の沈澱剤を用いて沈澱させることができる。

本発明の抗生物質の回収に簡便に用いることができる吸着マトリックスの例は、 ポリスチレン又は混合ポリスチレン−ジビニルベンゼン樹脂、例えばＳ１１２（ Ｄｏｗ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、）、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ　ＸＡＤ２又はＸＡ Ｄ４　（Ｒｏｈｍ　ａｎｄ　Ｈａａｓ）　、ならびにＤｉａｉｏｎ　ＨＰ　２０ （Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ）ニアクリル樹脂、例えばＸＡＤ７又はＸＡＤ８　（Ｒ ｏｈｍ　ａｎｄ　Ｈａａｓ）；一般に細孔容積（ｍｌ／ｇ）が１−５の範囲であ り、表面積（ｍ”／ｇ）が１−１００の範囲であり、見掛けの密度（ｇ／ｍｌ） が０．１５−〇、５０の範囲であり、平均孔径（オングストローム単位）が１０ ０−３０００の範囲であり、粒子の少なくとも４０％の大きさが３００マイクロ メーター以下である粒径分布を有するポリアミド、例えばポリカプロラクタム、 ナイロン及び架橋ポリビニルピロリドン、例えばポリアミド−ＣＣ６、ポリアミ ド−３Ｃ６、ポリアミド−ＣＣ６，６、ポリアミド−ＣＣ６ＡＣ及びポリアミド −３Ｃ６ＡＣ（Ｍａｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇｅｌ　＆　Ｃｏ、、Ｗｅｓｔ　Ｇｅｒ ｍａｎｙ）、ポリビニルピロリドン樹脂ＰＶＰ−ＣＬ　（Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｃｈ ｅｍｉｅ　ＧｍｂＨ＆　Ｃｏ、、ＫＧ、Ｗｅｓｔ　Ｇｅｒｍａｎｙ）；ならびに 木炭である。ポリスチレン樹脂、ポリスチレン−ジビニルベンゼン樹脂又はアク リル樹脂の場合、好ましい溶離剤は、水−混和性溶剤の緩衝混合物であり、ポリ アミド樹脂の場合溶離剤は水−混和性溶剤の水性混合物が好ましく、木炭の場合 に好ましい溶離剤は、アセトンなどの低級ケトン又はメタノールなどの低級アル コールである。

本出願で用いる“水−混和性”という用語は、現在当該技術においてこの用語に 与えられている意味を有し、使用条件下で、合理的に広い濃度範囲で水と混和性 である溶剤を言うものとする。

本発明の抗生物質の溶離に使用することができる水−混和性有機溶剤の例は：低 級アルカノール、例えばメタノール、エタノール及びプロパツールなどの（Ｃ＋ 　Ｃｓ）アルカノール：フェニル（Ｃ＋−Ｃｓ）アルカノール、例えばベンジル アルコール：低級ケトン、例えばアセトン及びエチルメチルケトンなどのＣＣ８ −Ｃ４）ケトン：環状エーテル、例えばジオキサン及びテトラヒドロフラン：グ リコール及びその部分的エステル化物、例えばエチレングリコール、プロピレン グリコール及びエチレングリコールモノメチルエーテル；低級アミド、例えばジ メチルホルムアミド及びジエチルホルムアミド：酢酸、ジメチルスルホキシド及 びアセトニトリルである。

抗生物質ＧＥ１６５５複合体の粗調製物は、いずれの既知の方法によってもさら に精製することができるが、クロマトグラフィー法を用いて行うのが好ましい。

これらのクロマトグラフィー法の例は、回収段階に関連して上記に報告した例で あり、すでに上記で述べた種類のハロゲン化炭化水素、エーテル、ケトンを含む 溶剤の混合物から成る有機溶層相を用いたシリカゲル、アルミナ、フロリシルな どの固定相上のクロマトグラフィー、又は上記の種類の水−混和性溶剤の水性混 合物を用いて溶離する、種々の官能基誘導を有するシラン化シリカゲル上の逆相 クロマトグラフィーも含まれる。

いわゆる立体排除クロマトグラフィー法（ｓｔｅｒｉｃ　ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ　 ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒｏｐｈｉｃ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）を簡便に使用し、良い 精製結果を得ることもできる。特にほとんどの水酸基がアルキル化されている制 御された孔をもつ架橋デキストラン（ＣＯｎｔｒｏｌｌｅｄ　ｐｏｒｅ　ｄｒｐ ｓｓ−１ｉｎｋｅｄ　ｄｅｘｔｒａｎｓ）、例えば５ｅｐｈａｄｅｘ　ＬＨ−２ ０（ＰｈａｒｍａｃｉａＦｉｎｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ａｂ）がこの方法で用 いるのに有用である。

精製段階（例えば５ｅｐｈａｄｅｘ　ＬＨ−２０上の排除クロマトグラフィー） から回収した留分は、−緒に集め、減圧下で濃縮し、上記から選んだ沈澱剤（例 えば石油エーテル）の添加により沈澱させ、純粋な抗生物質ＧＥ１６５５複合体 を得る。

当該技術で常にそうである通り、生産、ならびに回収及び精製段階は、バイオア ッセイ、例えばカンジダ・アルビカンスなどの感応性微生物上の濾紙又は寒天拡 散アッセイ、あるいは紫外又は微生物による検出段階を含むことができるＴＬＣ 又はＨＰＬＣを含む多様な分析法により監視することができる。

好ましいＨＰＬＣ法は、シラン化シリカゲルの多孔性で球形の粒子、例えば均一 な直径を持ちＣ−８アルキル基で官能基化したシリカゲル（Ｊ、Ｔ、Ｂａｋｅｒ 　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ　Ｐｈｉｌｌｉｓｂｕｒｇ、Ｎｅｗ　Ｊ ｅｒｓｅｙ　０８８６５　ＵＳＡにより供給される５マイクロメーターＢａｋｅ ｒｂｏｎｄ’　オクチル（Ｃ８）など）を有するカラム、Ｃ−８アルキル基で官 能基化されたシリカゲル（例えばオクタシラン　シリカゲル　５マイクロメータ ー　ＲＰ　８Ｂｒｏｗｎｌｅｅ　Ｌａｂｓ、）であるプレーカラム、及び緩衝水 溶液中の極性水混和性溶剤、例えば上記のひとつの直線勾配混合物である溶離剤 を用いた逆相ＨＰＬＣにより示される。この溶液はｐＨ５−７に調節するのが好 ましい。最も好ましい溶離剤は、溶離剤Ａに４０−６０％の直線勾配で溶解した 溶離剤Ｂ　（ｖ／ｖ）で表され、ここで溶離剤Ｂはアセトニトリル／テトラヒド ロフラン／イソプロピルアルコール／緩衝水溶液の混合物、ｐＨ５−７，３５： ２５：１０：３０であり、溶離剤Ａはアセトニトリル／緩衝水溶液の混合物、ｐ Ｈ５−７，２０：８０である。

Ａ、Ｂ及びＣ因子の分離は、分析による監視に関して上記に記載した条件と基本 的に同一の条件を用いる分取ＨＰＬＣ法により簡便に行うことができる。

好ましい分取ＨＰＬＣ法は、均一な直径を持ちＣ−１８アルキル基で官能基化し たシラン化シリカゲルカラム（例えば５マイクロメーターＮｕｃｌｅｏｓｉ　Ｉ 　Ｃ１８，２５０Ｘ４０ｍｍ、Ｓｔａｇｒｏｍａ。

ＣＨ−８３０４Ｗａ　ｌ　１　ｉ　ｓ　ｅ　１１　ｅｎ）　、及び緩衝水溶液中 に溶解した例えば上記の極性水混和性溶剤の直線勾配混合物である溶離剤を備え た逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィー系により表される。

最も好ましい溶離剤は、溶離剤Ａに５％−１０％の直線勾配で溶解した溶離剤Ｂ により表され、ここで溶離剤Ｂはアセトニトリル／テトラヒドロフラン／緩衝水 溶液の混合物、ｐＨ６，５，６０：２０：２０（ｖ／　ｖ　）であり、溶離剤Ａ はアセトニトリル／緩衝水溶液の混合物、ｐＨ６，５，４０：　６０　（ｖ／ｖ ）である。

カラムはＳｈｉｍａｄｚｕ　５ＰＤ−６ＡＶ　紫外検出器に２５４ｎｍで連結す る。

均質な抗生物質を含む種々のクロマトグラフィー実験の留分を一緒に集め、濃縮 し、別々の残留溶液を得る。

異なる残留物を凍結乾燥してそれぞれ抗生物質ＧＥ１６５５因子Ａ、ＧＥ１６５ ５因子Ｂ及びＧＥ１６５５因子Ｃを得る。

抗生物質ＧＥ１６５５複合体及びその因子Ａ、ＢならびにＣは塩基性及び酸性基 の両方を含む両性であるので、従来の方法に従って適した酸及び塩基と塩を形成 することができる。そのようにして形成された製薬学的に許容しつる塩も本発明 の一部である。“製薬学的に許容しつる”塩は、温血動物の治療に有用な塩であ る。本発明の抗生物質の代表的で適した塩には、有機及び無機酸の両方、例えば 塩酸、臭素酸、硫酸、リン酸、酢酸、三フッ化酢酸、三塩化酢酸、コハク酸、ク エン酸、アスコルビン酸、乳酸、マレイン酸、フマル酸、パルミチン酸、コリン 酸、パモン酸、粘液酸、グルタミン酸、樟脳酸、グルタル酸、グリコール酸、フ タル酸、酒石酸、ラウリン酸、ステアリン酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、 ベンゼンスルホン酸、ソルビン酸、ピクリン酸、安息香酸、けい皮酸などとの標 準的反応により形成される酸付加塩が含まれる。

これらの塩基の代表的例は：アルカリ金属又はアルカリ土類金属ヒドロキシド、 例えばナトリウム、カリウム及びカルシウムヒドロキシド：アンモニア及び有機 脂肪族、脂環式又は芳香族アミン、例えばメチルアミン、ジメチルアミン、トリ メチルアミン及びピコリンである。

本発明の非−塩化合物から対応する付加塩への変換及びその逆、すなわち本発明 の化合物の付加塩から非−塩の形態への変換は、通常の技術的熟練の範囲内であ り、本発明に含まれる。

抗生物質ＧＥ１６５５複合体の物理化学的特徴Ａ）　紫外吸収スペクトルを添付 図面の図１に示す。それは以下の極大吸収を示すニ ラムダマックス（ｎｍ） ０．１Ｍ　ＨＣｌ　２３０（ショルダー）０．１Ｍ　ＫＯＨ２４０ リン酸塩緩衝液　２３５（ショルダー）ｐＨ７，４２４０ メタノール　２４０ ２６０（ショルダー） Ｂ）　ＫＢｒベレット中の赤外吸収スペクトルを添付図面の図２に示す。

それは以下の極大吸収を示す（ｃｍ−１）：３３９８　；　２９２６　；　２８ ５４　；　１７０５　；　１６４０　：１４５８　：１４１９　：１３８３　； 　１２９９　：１２７９　＋　１２６３　：１２３０　；　１１４１；　１０６ ９　；　１００５　：　９７０　；　９１８　；　８５６　；　８３７　：　６ ６２　；６０４；５５９ Ｃ）　’Ｈ−ＮＭＲスペクトルを図３に示す。それは５００ＭＨｚにおいてＤＭ ＳＯ−ｄ＠　（ヘキサシューテロジメチルスルホキシド）中でＴＭＳを内部標準 （０，ＯＯｐｐｍ）として用いて記録して、以下の群の信号（ｐｐｍ）を示す： 信号の重度は括弧内に示し、ここで： （ｓ）は−重項を示し、 （ｄ）は２重項を示し、 （ｍ）は多重項を示し、 （ｂｒ　ｓ）はブロードな一重項を示す。

７、５５（ｂｒ　ｓ）　；７．１６　（ｍ）　；６．００−５．７５（ｍ）　； ５．９５−５．８０（ｍ）　；５．３８（ｍ）　＋５．０８（ｍ）　：４．６８ 　（ｍ）　；４．０２　（ｍ）　；３．９０　（ｍ）　；３．８３　（ｍ）　； 　３．６７（ｍ）　；３．５５（ｍ）　；３．０９（ｍ）　：３．０４（ｓ）　 ；２．９５　（ｔ）　；２．７３　（ｓ）　；２．６８　（ｓ）　；２．５０　 （ＤＭＳＯｄａ）；２．３８　（ｍ）　＋２．００−１．９０　（ｍ）　；１． ８２　（ｍ）　；１゜７４（ｍ）；１．５９　（ｓ）　；１．０２　（ｄ）　； ０．９３　（ｄ）　：０゜９０−０．７５　（ｄ）。

Ｄ）　Ｋｒａｔｏｓ　ＭＳ−５０二重焦点質量分析器上で、８ｋＶの加速電圧を 用い、陽イオンＦＡＢスペクトルを得た。電圧６ｋＶ及び電流１ｍＡにてＸｅガ スと共に（供給源イオンゲージに示された圧力２Ｘ１０−’トール）サドルフィ ールドアトムガン（Ｓａｄｄｌｅ　ｆｉｅｌｄ　ａｔｏｍ　ｇｕｎ）を用いた。

試料は０、ＩＮのＣＨ，Ｃ０ＯＨを用いて酸性化したグリセロールマトリックス 中で陽イオンモードで調べた。ＦＡＢ−ＭＳ分析は、ｍ／ｚ　１０８２．１０６ ８及び１０５４にて３種類のプロトン化分子イオンＭ＋ｌを示す。

Ｅ）　以下の条件下で逆相ＨＰＬＣにより保持一時間（Ｒ１）を分析した： カラム：Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ’＊オクチル（Ｃ８）（逆相シラン化シリカゲル； ５マイクロメーター）４．６Ｘ２５０ｍｍ（＊）　ＢａｋｅｒｂｏｎｄはＪ、Ｔ 、Ｂａｋｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈＰｒｏｄｕｃｔｓ　Ｐｈｉｌｌｉｓｂｕｒｇ、 Ｎｅｗ　Ｊｅｒｓｅｙ　０８８６５　ＵＳＡにより供給されるＨＰＬＣカラムの 商標である。

プレカラム：Ｂｒ□ｗｎｌｅｅ　Ｌａｂｓ　ＲＰ　８（オクタシランシリカゲル ；５マイクロメーター） 溶離剤Ａ：　ＣＨｓＣＮ　６．６ｍＭクエン酸アンモニウム２０　：　８０（Ｖ ／Ｖ） 溶離剤Ｂ　：　ＣＨｌＣＮ−テトラヒドロフラン−イソプロピルアルコール−６ ，６ｍＭクエン酸アンモニウム３５：２５＋１０：３０（ｖ　／　ｖ　） 溶離モード２２０分で溶離剤Ａ中の溶離剤Ｂを４０−６０％に直線勾配。

流量：１．８ｍｌ／分 紫外検出器：２５４ｎｍ 抗生物質ＧＥ１６５５は、以下のＲ８値を示す：１０．３．１０．５６、Ａ）　 紫外吸収スペクトルは以下の極大吸収を示すニラムダマックス（ｎｍ） リン酸塩緩衝液　２４０ ｐＨ７，４２６８ メタノール　２４０ Ｂ）　’Ｈ−ＮＭＲスペクトルは５００ＭＨｚにおいてＤ　Ｍ　Ｓ　Ｏ−ｄ　ｓ （ヘキサシューテロジメチルスルホキシド）中でＴＭＳを内部標、準（０，ＯＯ ｐｐｍ）として用いて記録して、以下の群の信号（ｐｐｍ）を示すニ ア、　４５　（ｂｒ　ｓ）　＋７．１７（ｍ）　：６．３０−６．　１５　（ｍ ）　；５、９５−５．８０（ｍ）　；５．３９（ｍ）　：５．０８　（ｍ）　： ４．７２（ｍ）＋４．０２（ｍ）；３．８３（ｍ）：３．６７（ｍ）：３．３（ Ｒ２０）　：３．０９　（ｍ）　：２．７３　（ｓ）　：　２．５０　（ＤＭＳ Ｏｄｓ）；２．３８　（ｍ）　：２．００−１．９０　（ｍ）　：１．　７３　 （ｍ）　；１゜５９　（ｓ）　；１．０２　（ｄ）　：０．９５　（ｄ）　：０ ．９０−０．７５（ｄ）。

Ｃ）　Ｋｒａｔｏｓ　ＭＳ−５０二重焦点質量分析器上で、８ｋＶの加速電圧を 用い、陽イオンＦＡＢスペクトルを得た。電圧６ｋＶ及び電流１ｍＡにてＸｅガ スと共に（供給源イオンゲージに示された圧力２Ｘ１０−’トール）サドルフィ ールドアトムガン（Ｓａｄｄｌｅ　ｆｉｅｌｄ　ａｔｏｍ　ｇｕｎ）を用いた。

試料は０、ＩＮのＣＨＩＣＯＯＨを用いて酸性化したグリセロールマトリックス 中で陽イオンモードで調べた。ＦＡＢ−ＭＳ分析は、ｍ／ｚ　１０８２にてＭ＋ Ｈ”ピークラ示ス。

Ｄ）　以下の条件下で逆相ＨＰＬＣにより保持一時間（Ｒ７）を分析した： カラム：Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ”＊オクチル（Ｃ８）（逆相シラン化シリカゲル； ５マイクロメーター）４．６ｘ２５０ｍｍ（＊）　ＢａｋｅｒｂｏｎｄはＪ、Ｔ 、Ｂａｋｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈＰｒｏｄｕｃｔｓ　Ｐｈｉｌｌｉｓｂｕｒｇ、 Ｎｅｗ　Ｊｅｒｓｅｙ　０８８６５　ＵＳＡにより供給されるＨＰＬＣカラムの 商標である。

プレカラム：Ｂｒｏｗｎｌｅｅ　Ｌａｂｓ　ＲＰ　８　（オクタンランシリカゲ ル：５マイクロメーター） 溶離剤Ａ：　ＣＨｓＣＮ　６．６ｍＭクエン酸アンモニウム２０８０（ｖ／ｖ） 溶離剤Ｂ　：ＣＨ３ＣＮ−テトラヒドロフラン−イソプロピルアルコール−６， ６ｍＭクエン酸アンモニウム３５：２５：１０：３０（ｖ　／　ｖ　） 溶離モード・２０分で溶離剤Ａ中の溶離剤Ｂを４０−６０％に直線勾配。

流量：１．８ｍｌ／分 紫外検出器：２５４ｎｍ 抗生物質ＧＥ１６５５因子Ａは、１１．１２分のＲ７値を示す。

抗生物質ＧＥ１６５５因子Ｂの物理化学的特徴Ａ）　紫外吸収スペクトルを添付 図面の図４に示す。それは以下の極大吸　収を示すニ ラムダマックス（ｎｍ） リン酸塩緩衝液　２４０ ｐＨ７，４２６８ メタノール　２４０ Ｂ）　ＩＨ−ＮＭＲスペクトルは５００ＭＨｚにおいてＤＭＳＯ−ｄｓ（ヘキサ シューテロジメチルスルホキシド）中でＴＭＳを内部標準（０，００ｐｐｍ）と して用いて記録し、以下の群の信号（ｐｐｍ）を示す； ７．５７（ｂｒ　ｓ）；７．１６　（ｍ）；６．３０−６．１５（ｍ）；５．９ ５−５．８０（ｍ）；５．３９（ｍ）；５．０８（ｍ）；４．７２（ｍ）　；４ ．０２　（ｍ）　；３．９０（ｍ）　；３．８３　（ｍ）　；３．６７（ｍ）； ３．３（Ｒ２０）：３．０６（ｍ）：２．７０（ｓ）；２５０　（ＤＭＳＯｄｓ ）；　２．３７　（ｍ）；　２．００　１．９０　（ｍ）；１．７３（ｍ）；１ ．５９（ｓ）；１．０２（ｄ）；０．９４（ｄ）；０．９０−０．７５　（ｄ） 。

Ｃ）　Ｋｒａｔｏｓ　ＭＳ−５０二重焦点質量分析器上で、８ｋＶの加速電圧を 用い、陽イオンＦＡＢスペクトルを得た。電圧６ｋＶ及び電流１ｍＡにてＸｅガ スと共に（供給源イオンゲージに示された圧力２ｘｌＯ−’トール）サドルフィ ールドアトムガン（Ｓａｄｄｌｅ　ｆ　１ｅｌｄ　ａｔｏｍ　ｇｕｎ）を用いた 。試料は０゜ＩＮのＣＨ，Ｃ０ＯＨを用いて酸性化したグリセロールマトリック ス中で陽イオンモードで調べた。ＦＡＢ−ＭＳ分析は、ｍ／ｚ１０６８にてＭ＋ Ｈ”ピークを示す。

Ｄ）　以下の条件下で逆相ＨＰＬＣにより保持一時間（Ｒ２）を分析した： カラム：ＢａｋｅｒｂｏｎｄＲ＊オクチル（Ｃ８）（逆相シラン化シリカゲル： ５マイクロメーター）４．６ｘ２５０ｍｍ（＊）　ＢａｋｅｒｂｏｎｄはＪ、Ｔ 、Ｂａｋｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈＰｒｏｄｕｃｔｓ　Ｐｈｉｌｌｉｓｂｕｒｇ、 Ｎｅｗ　ＪｅｒｓｅＶ　０８８６５　ＵＳＡにより供給されるＨＰＬＣカラムの 商標である。

プレカラム：Ｂｒｏｗｎｌｅｅ　Ｌａｂｓ　ＲＰ　８　（オクタシランシリカゲ ル：５マイクロメーター） 溶離剤Ａ：　ＣＨ３ＣＮ−６，６ｍＭクエン酸アンモニウム２０　：　８０（Ｖ ／Ｖ） 溶離剤Ｂ・ＣＨ３ＣＮ−テトラヒ：：ロフランーイソプロピルアルコール−５， ５ｍＭクエン酸アンモニウム３５：２５：１０：３０（ｖ　／　ｖ　） 溶離モード：２０分で溶離剤Ａ中の溶離剤Ｂを４０−６０％に直線勾配。

流量：１．８ｍｌ／分 紫外検出器：２５４ｎｍ 抗生物質ＧＥ１６５５因子Ｂは、１０．５６分のＲ０値を示す。

抗生物質ＧＥ１６５５因子Ｃの物理化学的特徴Ａ）　Ｋｒａｔｏｓ　ＭＳ−５０ 二重焦点質量分析器上で、ｇｋＶの加速電圧を用い、陽イオンＦＡＢスペクトル を得た。電圧５ｋＶ及び電流１ｍＡにてＸｅガスと共に（供給源イオンゲージに 示された圧力２ｘ１０−ｓトール）サドルフィールドアトムガン（Ｓａｄｄｌｅ 　ｆｉｅｌｄ　ａｔｏｍ　ｇｕｎ）を用いた。試料は０、ＩＮのＣＨｓＣＯＯＨ を用いて酸性化したグリセロールマトリックス中で陽イオンモードで調べた。Ｆ ＡＢ−ＭＳ分析は、ｍ／ｚ　１０５４にてＭ＋Ｈ”ピークを示す。

Ｂ）　以下の条件下で逆相ＨＰＬＣにより保持一時間（Ｒｏ）を分析した： カラム：Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ”＊オクチル（Ｃ８）（逆相シラン化シリカゲル： ５マイクロメーター）４．６ｘ２５０ｍｍ（＊）　ＢａｋｅｒｂｏｎｄはＪ、Ｔ 、Ｂａｋｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈＰｒｏｄｕｃｔｓ　Ｐｈｉｌｌｉｓｂｕｒｇ、 Ｎｅｗ　Ｊｅｒｓｅｙ　０８８６５　ＵＳＡにより供給されるＨＰＬＣカラムの 商標である。

プレカラム：Ｂｒｏｗｎｌｅｅ　Ｌａｂｓ　ＲＰ　８　（オクタシランシリカゲ ル：５マイクロメーター） 溶離剤Ａ　：　ＣＨｓＣＮ　６．６ｍＭクエン酸アンモニウム２０　：　８０（ Ｖ／Ｖ） 溶離剤Ｂ　：　ＣＨ３ＣＮ−テトラヒドロフラン−イソプロピルアルコール−６ ，６ｍＭクエン酸アンモニウム３５：２５＋１０：３０（ｖ　／　ｖ　） 溶離モード：２０分で溶離剤Ａ中の溶離剤Ｂを４０−６０％に直線勾配。

流量：１．８ｍｌ／分 紫外検出器：２５４ｎｍ 抗生物質ＧＥ１６５５因子Ｂは、１０．３分のＲ，値を示す。

抗生物質生成物の生物学的活性 本発明の化合物の殺菌活性を、試験管内の一連の標準的試験により示すことがで きる。

微量ブイヨン希釈法（ｍｉｃｒｏｂｒｏｔｈ　ｄｉｌｕｔｉｏｎｍｅ　ｔｈｏｄ ｏ　ｌｏｇｙ）により最小阻止濃度（ＭＩＣ）を決定することができる。接種材 料は、酵母、アスペルギルス・ニゲル（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒ） 、及び細菌の場合１０’−１０’ｃ　ｆ　ｕ／ｍｌ：皮膚生菌類の場合、菌糸体 と分生子の混合物を含む約１％の標準的水性（０，２％Ｖ　／　Ｖ　）ツイーン ８０懸濁液である。菌・カビは３０℃で成育し、カンジダ　アルビカンスの場合 ２０−２４時間で、クリプトトン・メンタグロフィテス（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔ ｏｎ　ｍｅｎｔａｇｒｏｐｈｙｔｅｓ）及びミクロスポルム・カニス（Ｍｉｃｒ ｏｓｐｏｒｕｍ　ｃａｎｉｓ）の場合７２時間でＭＩＣを読み取る。使用した培 地は、酵母及びアスペルギルス・ニゲルの場合グルコース（１％Ｗ／Ｖ）及びＬ −アスパラギン（０，１５％Ｗ／Ｖ）を補足したｐＨ７のリン酸塩−緩衝酵母窒 素ベースブイヨン（Ｄｉｆｃｏ）、デルマトフイテスの場合ＹＭブイヨタンＤｉ ｆｃｏ）である。細菌は３７℃で培養し、ナイセリアφゴノルホエアエ（Ｎｅｉ ｓｓｅｒｉａ　ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａ見）、ヘモフィルス・インフルエンザエ（ Ｈａｅｍｏｐｈ　ｉ　Ｉｕｓｉｎｆ　Ｉｕｅｎｚａｅ）、プロピオニバクテリウ ム・アクネス（旦二旦時間で読み取る以外は２０−２４時間でＭＩＣを読み取る 。ナイセリア・ゴノルホエアエ及びヘモフィルス・インフルエンザエは５％Ｃ○ ２雰囲気下でインキュベートする。嫌気性細菌は、嫌気的混合気体中でインキュ ベートする。用いた培地は、０ｘｏｉｄ　ｌ５ｏ−３ｅｎｓｉｔｅｓｔブイヨン （スタフィロコックス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ）、ブトコックス）、ナイ セリア・ゴノルホエアエの場合、１％のＢＢＬＩｓｏｖｉｔａｌｅｘを含むＤｉ ｒｃｏ　ＧＣベースブイヨン、Ｈインフルエンザエの場合１％のＤｉｆｃｏ補足 薬Ｃを含むＤｉｆｃ。

Ｂｒａｉｎ　Ｈｅａｒｔ　Ｉｎｆｕｓｉｏｎブイヨン、嫌気性細菌の場合は０ｘ ｏｉｄ　Ｗｉｌｋｉｎｓ−Ｃｈａ１ｇｒｅｎブイヨンである。

ガードネレラ・バギナリス（Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ　ｖａｇｉｎａｌｉｓ）の 場合の最小阻止濃度は、５％のうさぎの血液及び０．１５％の溶血したうさぎの 血液を含むＤｉｆｃｏ　Ｃａｓｍａｎ培地ベース上の寒天希釈により決定する。

接種材料は１０’−１０’ｃｆｕ／点であり、微生物は嫌気的混合気体中、３７ ℃でインキュベートし、ＭＩＣは４８時間で読み取る。

い（つかの菌・カビ及び細菌の場合の最小阻止濃度（ＭＩＣ）を、マイクログラ ム／ｍｌで表して表ＩＶＳＶ％ＶＩ及びＶＩＩに報告する。

煮−ｙ スタフィロコックス・アウレウスＬ１６５　Ｔｏｕｒ　８＋３０％牛血清　６４ スタフィ口コックス・ハエモリチフスＬ６０２　８ストレプトミセス・ピオゲネ スＬ４９　Ｃ２０３８ストレプトミセス・ニューモニアエＬ４４　ＵＣ４１８Ｉ 　８Ｍ６８／１２６ エシェリキア・コリＬ４７　５ＫＦ１２１４０　＞１２８プロテウス・ブルガリ スＬ７９　＞１２８ＡＴＣＣ８８１ 色ｙユ Ｃ，アルビカンス＊　２４　２−８　４　４Ｃ，マリスＬ１６６０　１　２ Ｃ，ゲラブラタＬ１６６１　１　４ Ｃ，クルゼイＬ２４４　１　４ Ｃ，＋−ロピカリスＬ２４３１２ 本　出願人のコレクションの以下の内部コードで同定される２４個のカンジダ　 アルビカンス株の系列につき試験を行った：Ｌ１４０４、Ｌｉ２Ｏ２、Ｌｉ２Ｏ ２、Ｌｉ２Ｏ２、Ｌｉ２Ｏ２、Ｌｉ２Ｏ２、Ｌ１４１０、Ｌ１４１１、Ｌ１４１ ２、Ｌ１４１３、Ｌ１４１４、Ｌ１４１５、Ｌ１４１６、Ｌ１４１７、Ｌ１４１ ８、Ｌ１４２９、Ｌ１４３０、Ｌ１４３０、Ｌ１４３２、Ｌ１６３２、Ｌ１６３ ３、Ｌ１６６２、Ｌ１６６４、Ｌ１６６５゜表ｌ１ １４＊　３２→１２８　６４　１２８ 本　出願人のコレクションの以下の内部コードで同定される１４個のガードネレ ラ・バギナリス株の系列につき試験を行った：Ｌ３３２、Ｌ５２９、Ｌ５３０、 Ｌ５３１、Ｌ１６２２、Ｌ１６２３、Ｌ１６２４、Ｌ１６２５、Ｌ１６２６、Ｌ １６２７、Ｌ１６２８、Ｌ１６２９、Ｌ１６３０、Ｌ１６３１゜ＧＥ１６５５複 合体の殺菌・殺カビ活性緩衝補足酵母窒素ブイヨン（３０℃、撹拌）中で対数的 に成育するＣ、アルビカンスＳＫＦ　２２７０の培養物を、ＭＩＣ値以上の濃度 のＧＥ１６５５複合体に暴露し、時々試料を採取した。最初の接種材料は１０’ ｃｆｕ／ｍｌであった。生存コロニー形成単位（ｃｆｕ）の決定のために、５ａ ｂｏｕｒａｕｄ寒天プレート上の２．５ｍｌのＳａｂ。

ｕｒａｕｄ軟寒天（０，７％）中に封入することにより、適切に希釈したアリコ ートを二重にプレート化した。プレートを３０℃で２日間インキュベートした。

ＭＩＣ（３２ｍｃｇ／ｍりの４倍のＧＥ１６５５複合体濃度で４８時間後、９９ ．５％以上の酵母が死んだ。死亡の９９．９％以上が最初の７日間で起こり、７ から２４時間の間に再びいくらか増加した。

従ってＧｅ１６５５複合体は、Ｃ，アルビカンスの関して殺菌・殺カビ性である と思われる。

本発明の抗生物質は、植物病原菌・カビに対しても活性である。

ＧＥ１６５５複合体の生体内抗菌・カビ活性卵巣摘出した雌のＣＤラット（体重 １５０−１７０ｇ、術後７日でＣｈａｒｌｅｓ　Ｒｉｖｅｒから入手）における カンジダ　アルビカンスに対する抗生物質ＧＥ１６５５複合体の生体内保護活性 を決定した。

カンジダ　アルビカンスＬ１４５は、３０℃の５ａｂｏｕｒａｕｄ　デキストロ ースブイヨン（ｄｉｆｃｏ）中で終夜成育した。培養物を４℃にて６０００ｒ、 ｐ、ｍ、で２０分間遠心し、酵母を１５％（ｖ／ｖ）のグリセロールを含む栄養 ブイヨンＮ、　２　（Ｏｘｏ　ｉ　ｄ）中に再懸濁し、−８０℃で保存した。温 度及び湿度を制御した室で７日間新環境に順応させた後、動物に４ｍｇのエスト ラジオールベンゾエート（Ｓｉｇｍａ）を皮下適用により与えた。４日後、それ らに０．０２５ｍ１の解凍したカンジダ　アルビカンス懸濁液（約５ｘｌＯ’ｃ ｆｕ／ラツト）を膣内（ｉ、ｖａ、）注入することにより感染させた。

ＧＥ１６５５複合体及びミコナゾール（Ｓｉｇｍａ）をジメチルスルホキシド（ ＤＭＳＯ）に溶解し、ＰＥＧ４００を用いて１：１０に希釈し、均賞な懸濁液を 得た。動物は、感染後２４時間から開始して３日間、１日に２回、Ｑ、１ｍｌの これらの懸濁液のひとつを膣内投与により与えられた。標準動物はビヒクル（Ｐ Ｅ０４００中の１０％ＤＭＳＯ）で処理した。

膣内に使い捨ての０．０１ｍ１キヤリプレートループを挿入することによりカン ジダの存在を決定した。試料は０．２ｍｌの滅菌ペプトン化食塩水に再懸濁し、 細菌汚染物の成育を阻害するために１００ｍｇ／ｌのリファムピシンを含む５ａ ｂｏｕｒａｕｄデキストロース寒天上で培養した。

２回のカンジダ・バギニチス実験で得た結果（表ＶＩ　Ｉ　Ｉ）は、毎日１０ｍ ｇのＧＥ１６５５複合体又は４ｍｇのミコナゾールで処理した動物の膣内の負荷 が、標準の群より非常に低い（ｐ＜０．０１）ことを示す。

表ＶＩＩＩ 卵巣摘出ラットにおけるカンジダ・バギニチス２実験からのデータ ビヒクル＊　膣内　３．７５＋０．３１　３．６６＋０．６２ミコナゾール　４ 　〃１．２０＋１．０１　１．２４＋０．８６ＧＥ１６５５　１０　ｌ／　１． ９４＋０．５１　１．９０＋０．６０複合体 ＋　ＤＭＳＯ及びＰＥＧ４００　（１０：９０）＊＊　処置後３日のｃｆｕ／試 料 急性毒性データ 腋腔内（ｉ、ｐ、）、静脈内（ｉ、ｖ、　）及び経口（ｐ、ｏ、　）投与した場 合の、マウスにおける抗生物質ＧＥ１６５５複合体の急性毒性を決定した。

雄及び雌（７）ＣＤ、？ウス（体重１８−２２ｇ、Ｃｈａｒｌｅｓ　Ｒｉｖｅｒ ）を用いた。抗生物質ＧＥ１６５５を、ｐＨ７に緩衝したＤＭＳＯと５％グルコ ースの溶液（１０：９０）に溶解した。動物を２０．１０又は５ｍｇ／ｋｇ　ｉ 、ｖ、；４０．２０又は１０ｍｇ／ｋｇ　ｉ。

ｐ、＋５００又は２５０ｍｇ／ｋｇ　ｐ、ｏ、の１回の投薬で処ｆｌＬ、り。

Ｓｐｅａｒｍａｎ　ａｎｄ　Ｋａｅｒｂｅｒ法（Ｄ、Ｊ、Ｆｉｎｎｅｙ“５ｔａ ｔｉｓｔｉｃａｌ　Ｍｅｔｈｏｄ　ｉｎ　ＢｉｏｌｏｇｉｃａＩ　Ａｓ５ａｙ″ ｐｐ、５２４−５３０　Ｃｈａｒｌｅｓ　Ｇｒｉｆｆ後７日目にＬ日月。を算出 した。種々の経路の場合のＬＤ、。を表ＩＸに示す。一般ｊこ処置後数分以内に 死亡し、２０ｍｇ／ｋｇで腹腔内処置した動物の２／４は、２日目に死んだ。生 き残った動物はすべて観察の最初の１０時間の間、少し沈静を示した。グロス　 ネクロスコビー（Ｇｒ。

ｓｓ　ｎｅｃｒｏｓｃｏｐｙ）からは何の変化も明らかにならなかった。

５　１５　＞５００ 抗生物質ＧＥ１６５５複合体を、ＤＭＳＯ及びｐＨ７に緩衝したメチルセ／ｌ１ ０−ス（Ｍｅｔｈｏｃｅｌ”ｌＩＤｏｗ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ。

）（１０：９０）に溶解した。

両性のＣＤ、７ウス（体重２０−２２ｇ、Ｃｈａｒｌｅｓ　Ｒｉｖｅｒ）を用い た（−投薬１当たり４匹のマウス）。０．０５ｇ／ｍ＋のフエンタニル及び２． ５ｍｇ／ｍｌのドロペリドール（Ｌｅｐｔｏｆｅｎ”　Ｃａｒｌｏ　Ｅｒｂａ） に５ｍｇ／ｋｇのりｏロアゼボキシド（Ｖａ　Ｉ　ｉ　ｕｍ”　Ｒｏｃｈｅ）を 足して含む水溶Ｉ＆３ｍｌ／ｋｇをＭ腔内投与により用いて動物を麻酔し、各マ ウスの背中をエメリーペーパーで摩擦し、その１１０又は５ｍｇの抗生物質ＧＥ １６５５複合体の１回の投薬で局所的に処置した。

毒性の症状は観察されなかった。

広範囲の活性を考慮すると、本発明の抗生物質は種々の用途の抗菌・カビ組成物 で使用するのに適応可能である。そのような利用の場合、化合物は産物学的に不 活性な担体と、場合により界面活性分散剤を用いて混合することができ、その界 面活性分散剤の性質は、利用が人又は動物に感染する病原菌の抑制のためである か、又は土壌又は植物の一部などの農業における菌・カビの抑制のためであるか により変わる。

本発明の別の目的は、特に膣感染の処置に抗生物質ＧＥ１６５５複合体及びその 因子を局所的に投与するために有用な製薬学的投薬形態の提供である。本発明に 従い、膣内錠剤、ペッサリー、クリーム、軟膏、ゲル、座薬、ローション、フオ ーム、粉末、懸濁液、活性物質を感染部位に配達し、放出させることができる薬 剤配達系などを含む局所的投薬形態を提供する。

製薬学的投薬形態は、抗生物質ＧＥ１６５５複合体又はその因子のひとつ、なら びに１種類か又はそれ以上の賦形剤、例えば：固体投薬形態の場合の澱粉、ラク トース、グルコース、タルク、セルロース；半一固体投薬形態の場合のメチルセ ルロース、修飾植物油、鉱油、ポリアルキレングリコール、脂肪酸及びアルコー ルなど、液体又は半一液体投薬形態の場合の水、アルカノール、グリセロール、 ラノリン、ポリエチレングリコール、鉱油、製薬学的に許容しうる有機溶剤（例 えばＤＭＳＯ、メチルデシルスルホキシド）を含む。投薬形態は場合により他の 活性成分、又は感染部位における抗生物質ＧＥ１６５５複合体又はその因子の抗 微生物活性を保護し、支持する成分（例えば防腐剤、乳化剤、界面活性剤など） を含むことができる。

適した局所的投薬形態の調製のための有用な指示を：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ″　ｓ 　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅ、１７ｔｈＥｄｉｔｉｏｎ、 １９８５　（Ｍａｃｋ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃ。

ｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐｅｎｎ５ｙｌｖａｎｉａ）に見い出すことができ る。

明らかに投薬量は、感染の重度、及び患者の種類により調節することができる。

患者から単離した微生物の感受性を決定する実験的データも適した投薬量を選ぶ ための有用な指示となる。一般に有効投薬量は、１日１−３回の膣内適用毎に１ ０−６００ｍｇ、好ましくは１００−４００ｍｇの範囲である。処置は３−１０ 日か又は必要ならそれ以上続けることができる。

クリーム、ローション、軟膏、フオーム及び懸濁液などの液体又は半一液体投薬 形態は一般に０．０５−５重量％の抗生物質を含む。

必要ならこの範囲は、各投薬形態の特性を実質的に修正することなく広げること ができる。膣内錠剤及び座薬などの固体膣内投薬単位は、異なる投薬量で製造す ることができる。例えばそれらは１０−６００ｍｇの本発明の抗生物質を含むこ とができる。

本発明の抗生物質を挿入する典型的薬剤配達系は、例えばＤｒａｇＤｅｌｉｖｅ ｒｙ　Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕ ｅｓ−Ｅｄｉｔｅｄ　ｂｙ　Ｐ、Ｊｏｈｎｓｏｎａｎｄ　Ｊ、Ｇ、Ｌｏｙｄ−Ｊ ｏｎｅｓ、１９８７．ＥｌｌｉｓＨｏｒｗｏｏｄ　Ｌｔｄ、Ｃｈｉｃｈｉｓｔｅ ｒ、Ｅｎｇｌａｎｄという本の１０６−１１９頁に記載されているような放出制 御のための生物分解可能ポリマーを用いて調製することができる。

非−医学的用途の場合、単独の又は混合物としての本発明の生成物は、微粉砕乾 燥又は液体希釈剤、伸展剤、充填剤、コンディショナー及び種々のクレー、ケイ 藻土、タルクなどを含む賦形剤、又は水及び種々の有機液体、例えばエタノール 及びイソプロパツールなどの低級アルカノール又はケロセン、トルエンならびに 他の石油蒸留留分又はそれらの混合物を含む不活性担体中の組成物において使用 することができる。

発明の実行においては、抗菌・カビ量の組成物を菌・カビの抑制が望まれている 領域に直接適用することができる。

以下の実施例は、本発明をさらに例示するものであり、本発明をいかようにも制 限するものではない。

実施例 実施例１：抗生物質ＧＥ１６５５の生産ストレプトミセス・ヒグロスコピクス　 ＡＴＣＣ５５０８５の培養物を２８−３０℃のオートミール寒天斜面上で１週間 成育し、以下の組成のシード培地（ｓｅｅｄ　ｍｅｄｉｕｍ）１００ｍｌを含む ５００ｍ１の三角フラスコに接種するのに用いた：酵母抽出物　２ｇ／ｌ 大豆粉　８ｇ／ｌ デキストロース　２０　ｇ／　ｌ ＮａＣｌ　Ｉｇ／ｌ ＣａＣＯ５４ｇ／ｌ 蒸留水　１０１００Ｏとなるのに十分な量（滅菌の前にｐＨ７，３に調節）。

接種したフラスコを２８℃にて回転震盪器（２０Ｏｒｐｍ）上で６０分間インキ ュベートし、その後４１のシード培地を含む１０１のジャー発酵器に移した。こ の新しい培養物を２８−３０℃で撹拌（約９０Ｏｒｐｍ）及びエアレージコン（ 体積当たり及び１分当たり１標準リツトルの空気）しながら４８時間成育した。

その後得られたブイヨンを用い、５０１の生産培地を含む７０１のジャー発酵器 に接種する： 澱粉　２％ ペプトン　０．２５％ 加水分解カゼイン　０．２５％ 酵母抽出物　０．３％ ビーフ抽出物　０．２％ 大豆粉　０．２％ 炭酸カルシウム　０．　１％ （滅菌の前にｐＨ７，４とする）。

発酵条件： 撹拌　５００ｒｐｍ エアレージコン　０．５Ｖ／Ｖ／分（体積／体積／分）温度　２８℃ 及び７２時間インキュベート。

抗生物質生産は、Ｄａｖｉ　ｓ最少培地で成育したカンジダ　アルビカンス　Ａ ＴＣＣ１０２３１を用いたウェル−寒天分析により監視する。

２８℃で終夜インキュベーションした後、阻害領域を評価する。

実施例２：抗生物質ＧＥ１６５５複合体の回収７２時間の発酵の後、上記で得た ブイヨンを収穫し、濾過助剤（Ｈｙｆｌｏ）の存在下で濾過する。

抗生物質ＧＥ１６５５を濾液から回収する。

濾液をｐＨ７に調節し、１．５リツトルの樹脂Ｓ１１２（ＤｏｗＣｈｅｍｉｃａ ｌ　Ｃｏ、）を加え、３時間撹拌する。この時間の後、樹脂をブフナーロート上 の濾過により集め、１リツトルの水で２回洗浄する。樹脂を、以下の組成の緩衝 液２リツトルで溶離する：Ｎ　ａ　Ｈ！Ｐ　Ｏａ　（ナトリウムニ水素リン酸塩 −水和物）　２．　５ｇ／ｌメタノール テトラヒドロフラン 比率１　：　１　：　１　（ｖ／ｖ）、ＮａＯＨＩＮを用いてｐＨ７，５＋：調 節。

溶離物を減圧下で濃縮し、水性残留物を得、それを最初に３５０ｍ１の酢酸メチ ルで２回、その後４００ｍ１のｎ−ブタノールで２回抽出する。

酢酸エチル抽出物は捨て、ブタノール性抽出物を減圧下で濃縮し、石油エーテル の添加により濃縮有機相から粗抗生物質ＧＥ１６５５複合体を沈澱させる。

沈澱した抗生物質を濾過により集め、乾燥して１０．９ｇの粗抗生物質ＧＥ１６ ５５複合体を得る。

実施例３．抗生物質ＧＥ１６５５複合体の精製実施例２に例示する方法で得た粗 抗生物質ＧＥ１６５５複合体の一部を、以下の方法に従って５ｅｐｈａｄｅｘ　 ＬＨ２０（Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｆｉｎｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ａｂ）上のり ０７トグラフイーにより精製する： ２００ｍｇをメタノールに溶解し、メタノール中で調製した一１００ｇの樹脂Ｌ Ｈ２０を含むクロマトグラフィーカラムに適用する。カラムをメタノールで展開 し、各７ｍｌの４０留分を集める。

留分をＨＰＬＣにより、及びカンジダ　アルビカンスに対して微生物学的に分析 し、その抗生物質含有量に従って集める。

集めた純粋な抗生物質ＧＥ１６５５複合体を含む留分を減圧下で濃縮し、石油エ ーテルを添加することにより沈澱させ、４１ｍｇの抗生物質ＧＥ１６５５複合体 を得る。

実施例４：抗生物質ＧＥ１６５５因子Ａ１因子Ｂ及び因子Ｃの単離粗ＧＥ１６５ ５複合体の一部を以下の方法に従い、分取ＨＰＬＣにより精製する＝ この粗抗生物賀の一部（２０ｍｇ）をアセトニトリル／水１　：　１　（ｖ／　 Ｖ　）に溶解し、シラン化シリカゲルカラム（Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ　Ｃ１８，５ マイクロメーター、２５０ｘ４０ｍｍＳＳｔａｇｒｏｍａＳＣＨ−８３０４Ｗａ 　１１　ｉ　ｓ　ｅ　Ｉ　ｌ　ｅｎ）を備えたＨＰＬＣり０７トグラフイー系に 注入する。溶液Ａ及びＢの混合物の、Ａ中に５％から１０％のＢを含む直線勾配 を用い、２３分で、流量２０ｍ１／分で溶離を行う。

溶液Ａは、９ｍＭの蟻酸アンモニウムとアセトニトリル６０４０（Ｖ　／　Ｖ　 ）の混合物であり、ｐＨ６，５に調節する。溶液Ｂは９ｍＭの蟻酸アンモニウム 、アセトニトリル及びテトラヒドロフラン２０　＋　６０：２０の混合物であり 、ｐＨ６，５に調節する。

カラムはＳｈｉｍａｄｚｕ　５ＰＤ−６ＡＶ　紫外検出器に２５４ｎｍで連結す る。

含有抗生物質が均質な８回のクロマトグラフィー実験の留分を集め、濃縮してア セトニトリル及びテトラヒドロフランを除去し、か（してそれぞれ抗生物質ＧＥ １６５５因子Ａ、抗生物質ＧＥ１６５５因子Ｂ及び抗生物質ＧＥ１６５５因子Ｃ を含む分離残留溶液を得る。

３種類の異なる残留物を凍結乾燥し、１５ｍｇの抗生物質ＧＥ１６５５Ａ因子（ 保持時間１１．４分Ｌ１９ｍｇの抗生勧賞ＧＥ１６５５Ｂ因子（保持時間１０． ５分）、及び５ｍｇの抗生物質ＧＥ１６５５Ｃ因子（保持時間１０．３分）を得 る。

点線はメタノール溶液中のＧＥ１６５５複合体の紫外スペクトルを示し、はＨＣ Ｉ　Ｏ，１Ｍ中のＧＥ１６５５複合体の紫外スペクトルを示し、 はリン酸塩緩衝液、ｐＨ’７．４中のＧＥ１６５５複合体の紫外スペクトルを示 し、 はＫＯＨＯ，１Ｍ中のＧＥ１６５５複合体の紫外スペクトルを示す。

図２はＫＢｒベレット中のＧＥ１６５５複合体の赤外スペクトルを示す。

」旦はＤＭＳＯｄａ中のＧＥ１６５５複合体の’ＨＮＭＲスペクトル（５００Ｍ Ｈｚ）を示す。

」は異なる溶剤中のＧＥ１６５５因子Ｂの紫外スペクトルを示す：はメタノール 溶液中のＧＥ１６５５因子Ｂの紫外スペクトルを示し、はリン酸塩緩衝液ｐＨ７ ，４中のＧＥ１６５５因子Ｂの紫外スペクトルを示す。

国際調査報告 フロントページの続き （７２）発明者　イスラム、カリト イタリー国２２１００コモ・ビアカントウリナ（７２）発明者　デナロ、マウリ ツイオイタリー国ミラノ・２００９０オペラ・スポルテイングミラソーレ３４／ ２１

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．抗生物質ＧＥ１６５５複合体、抗生物質ＧＥ１６５５因子Ａ、抗生物質ＧＥ １６５５因子Ｂ、抗生物質ＧＥ１６５５因子Ｃ、任意の割合の該因子の混合物及 び製薬学的に許容しうるその塩から選ばれる抗生物質。 ２．塩でないの形態で、以下の特徴： Ａ）添付図面の図１に示し、以下の極大吸収を示す紫外吸収スペクトル： 　　　　　　　　ラムダマックス（ｎｍ）０．１ＭＨＣＩ　２３０（ショルダー ）　　　　　　　　２４０ 　　　　　　　　２６８ ０．１ＭＫＯＨ　２４０ 　　　　　　　　２６８ リン酸塩緩衝液　２３５（ショルダー）ｐＨ７．４　　　２４０ 　　　　　　　　２６８ メタノール　　　２４０ 　　　　　　　　２６０（ショルダー）Ｂ）添付図面の図２に示し、以下の極大 吸収を示すＫＢｒペレット中の赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）： ３３９８；２９２６；２８５４；１７０５；１６４０；１４５８；１４１９；１ ３８３；１２９９；１２７９；１２６３；１２３０；１１４１；１０６９；１０ ０５；９７０；９１８；８５６；８３７；６６２；６０４；５５９ Ｃ）図３に示し、５００ＭＨｚにおいてＤＭＳＯ−ｄ５（ヘキサジューテロジメ チルスルホキシド）中でＴＭＳを内部標準（０．００ｐｐｍ）として用いて記録 して、以下の群の信号（ｐｐｍ）を示す１Ｈ−ＮＭＲスペクトル： ７．５５（ｂｒｓ）；７．１６（ｍ）；６．００−５．７５（ｍ）；５．９５− ５．８０（ｍ）；５．３８（ｍ）；５．０８（ｍ）；４．６８（ｍ）；４．０２ （ｍ）；３．９０（ｍ）；３，８３（ｍ）；３．６７（ｍ）；３．５５（ｍ）； ３．０９（ｍ）；３．０４（ｓ）；２．９５（ｔ）；２．７３（ｓ）；２．６８ （ｓ）；２．５０（ＤＭＳＯｄ６）２．３８（ｍ）；２．００−１．９０（ｍ） ；１．８２（ｍ）；１．７４（ｍ）；１．５９（ｓ）；１．０２（ｄ）；０．９ ３（ｄ）；０．９０−０．７５（ｄ）。 Ｄ）ＫｒａｔｏｓＭＳ−５０二重焦点質量分析器上で、８ｋＶの加速電圧を用い 、電圧６ｋＶ及び電流１ｍＡにてＸｅガスと共に（供給源イオンゲージに示され た圧力２×１０−５トール）サドルフィールドアトムガン（ｓａｄｄｌｅｆｉｅ ｌｄａｔｏｍｇｕｎ）を用い、０．１ＮのＣＨ３ＣＯＯＨを用いて酸性化したグ リセロールマトリックス中で陽イオンモードで調べた陽イオンＦＡＢスペクトル は、ｍ／ｚ１０８２、１０６８及び１０５４にて３種類のプロトン化分子イオン Ｍ＋１を示す。 Ｅ）以下の条件下で逆相ＨＰＬＣにより分析した場合の保持−時間（Ｒｔ）が１ ０．３、１０．５６、１１．１２分：カラム：ＢａｋｅｒｂｏｎｄＲ＊オクチル （Ｃ８）（逆相シラン化シリカゲル；５マイクロメーター）４．６×２５０ｍｍ （＊）ＢａｋｅｒｂｏｎｄはＪ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｐｒｏｄ ｕｃｔｓ　Ｐｈｉｌｌｉｓｂｕｒｇ，ＮｅｗＪｒｅｓｅｙ　０８８６５　ＵＳＡ により供給されるＨＰＬＣカラムの商標である。 プレカラム：ＢｒｏｗｎｌｅｅＬａｂｓＲＰ８（オクタシランシリカゲル；５マ イクロメーター） 溶離剤Ａ：ＣＨ３ＣＮ−６．６ｍＭクエン酸アンモニウム２０：８０（Ｖ／Ｖ） 溶離剤Ｂ：ＣＨ３ＣＮ−テトラヒドロフラン−イソプロピルアルコール−６．６ ｍＭクエン酸アンモニウム３５：２５：１０：３０（Ｖ／Ｖ） 溶離モード：２０分で溶離剤Ａ中の溶離剤Ｂを４０−６０％に直線勾配。 流量：１．８ｍｌ／分 紫外検出器：２５４ｎｍ を有する抗生物質ＧＥ１６５５複合体。 ３．以下の特徴、 Ａ）以下の極大吸収を示す紫外吸収スペクトル：　　　　　　　　ラムダマック ス（ｎｍ）リン酸塩緩衝液　２４０ ｐＨ７．４　　　２６８ メタノール　　　２４０ 　　　　　　　　２６０ Ｂ）５００ＭＨｚにおいてＤＭＳＯ−ｄ６（ヘキサジューテロジメチルスルホキ シド）中でＴＭＳを内部標準（０．００ｐｐｍ）として用いて記録して、以下の 群の信号（ｐｐｍ）を示す１Ｈ−ＮＭＲスペクトル： ７．４５（ｂｒｓ）；７．１７（ｍ）；６．３０−６．１５（ｍ）；５．９５− ５．８０（ｍ）；５．３９（ｍ）；５．０８（ｍ）；４．７２（ｍ）；４．０２ （ｍ）；３．８３（ｍ）；３．６７（ｍ）；３．３（Ｈ２Ｏ）；３．０９（ｍ） ；２．７３（ｓ）；２．５０（ＤＭＳＯｄ６）２．３８（ｍ）；２．００−１． ９０（ｍ）；１．７３（ｍ）；１．５９（ｓ）；１．０２（ｄ）；０．９５（ｄ ）；０．９０−０．７５（ｄ）。 Ｃ）ＫｒａｔｏｓＭＳ−５０二重焦点質量分析器上で、８ｋＶの加速電圧を用い 、電圧６ｋＶ及び電流１ｍＡにてＸｅガスと共に（供給源イオンゲージに示され た圧力２×１０−５トール）サドルフィールドアトムガン（ｓａｄｄｌｅｆｉｅ ｌｄａｔｏｍｇｕｎ）を用い、０．１ＮのＣＨ３ＣＯＯＨを用いて酸性化したグ リセロールマトリックス中で陽イオンモードで調べた陽イオンＦＡＢスペクトル は、ｍ／ｚ１０８２にてＭ＋Ｈ＋ピークを示す。 Ｄ）以下の条件下で逆相ＨＰＬＣにより分抗した場合、保持−時間（Ｒｔ）が１ １．１２分である： カラム：ＢａｋｅｒｂｏｎｄＲ＊オクチル（Ｃ８）（逆相シラン化シリカゲル； ５マイクロメーター）４．６×２５０ｍｍ（＊）ＢａｋｅｒｂｏｎｄはＪ．Ｔ． Ｂａｋｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ　Ｐｈｉｌｌｉｓｂｕｒｇ， ＮｅｗＪｒｅｓｅｙ　０８８６５　ＵＳＡにより供給されるＨＰＬＣカラムの商 標である。 プレカラム：ＢｒｏｗｎｌｅｅＬａｂｓＲＰ８（オクタシランシリカゲル；５マ イクロメーター） 溶離剤Ａ：ＣＨ３ＣＮ−６．６ｍＭクエン酸アンモニウム２０：８０（Ｖ／Ｖ） 溶離剤Ｂ：ＣＨ３ＣＮ−テトラヒドロフラン−イソプロピルアルコールー６．６ ｍＭクエン酸アンモニウム３５：２５：１０：３０（ｖ／ｖ） 溶離モード：溶離剤Ａ中の溶離剤Ｂを２０分で４０−６０％に直線勾配。 流量：１．８ｍｌ／分 紫外検出器：２５４ｎｍ を有する抗生物質ＧＥ１６５５因子Ａ。 ４．以下の特徴、 Ａ）添付図面の図４に示し、以下の極大吸収を示す紫外吸収スペクトル： 　　　　　　　　ラムダマックス（ｎｍ）リン酸塩緩衝液　２４０ ｐＨ７．４　　　２６８ メタノール　　　２４０ 　　　　　　　　２６０ Ｂ）５００ＭＨｚにおいてＤＭＳＯ−ｄ６（ヘキサジューテロジメチルスルホキ シド）中でＴＭＳを内部標準（０．００ｐｐｍ）として用いて記録して、以下の 群の信号（ｐｐｍ）を示す１Ｈ−ＮＭＲスペクトル： ７．５７（ｂｒｓ）；７．１６（ｍ）；６．３０−６．１５（ｍ）；５．９５− ５．８０（ｍ）；５．３９（ｍ）；５．０８（ｍ）；４．７２（ｍ）；４．０２ （ｍ）；３．９０（ｍ）；３．８３（ｍ）；３．６７（ｍ）；３．３（Ｈ２０） ；３，０６（ｍ）；２．７０（ｓ）；２．５０（ＤＭＳＯｄ６）；２．３７（ｍ ）；２．００−１．９０（ｍ）；１．７３（ｍ）；１．５９（ｓ）；１．０２（ ｄ）；０．９４（ｄ）；０．９０−Ｏ．７５（ｄ）。 Ｃ）ＫｒａｔｏｓＭＳ−５０二重焦点質量分析器上で、８ｋＶの加速電圧を用い 、電圧６ｋＶ及び電流１ｍＡにてＸｅガスと共に（供給源イオンゲージに示され た圧力２×１０−５トール）サドルフィールドアトムガン（ｓａｄｄｌｃｆｉｅ ｌｄａｔｏｍｇｕｎ）を用い、０．１ＮのＣＨ３ＣＯＯＨを用いて酸性化したグ リセロールマトリックス中で陽イオンモードで調べた陽イオンＦＡＢスペクトル は、ｍ／ｚ１０６８にてＭ＋Ｈ＋ピークを示す。 Ｄ）以下の条件下で逆相ＨＰＬＣにより分析した場合、保持−時間（Ｒ２）が１ ０．５６分である： カラム：ＢａｋｅｒｂｏｎｄＲ＊オクチル（Ｃ８）（逆相シラン化シリカゲル； ５マイクロメーター）４．６×２５０ｍｍ（＊）Ｂａｋｅｒｂｏｎｄは【配列が あります】により供給されるＨＰＬＣカラムの商標である。 ブレカラム：ＢｒｏｗｎｌｅｅＬａｂｓＲＰ８（オクタシランシリカゲル；５マ イクロメーター） 溶離剤Ａ：ＣＨ３ＣＮ−６．６ｍＭクエン酸アンモニウム２０：８０（Ｖ／Ｖ） 溶離剤Ｂ：ＣＨ３ＣＮ−テトラヒドロフラン−イソプロピルアルコールー６．６ ｍＭクエン酸アンモニウム３５：２５：１０：３０（Ｖ／Ｖ） 溶離モード：２０分で溶離剤Ａ中の溶離剤Ｂを４０−６０％に直線勾配。 流量：１．８ｍＩ／分 紫外検出器：２５４ｎｍ を有する抗生物質ＧＥ１６５５因子Ｂ。 ５．以下の特徴、 Ａ）ＫｒａｔｏｓＭＳ−５０二重焦点質量分析器上で、８ｋＶの加速電圧を用い 、電圧６ｋＶ及び電流１ｍＡにてＸｅガスと共に（供給源イオンゲージに示され た圧力２×１０−５トール）サドルフィールドアトムガン（ｓａｄｄＩｅｆｉｅ ｌｄａｔｏｍｇｕｎ）を用い、０．１ＮのＣＨ３ＣＯＯＨを用いて酸性化したグ リセロールマトリックス中で陽イオンモードで調べた陽イオンＦＡＢスペクトル は、ｍ／ｚ１０５４にてＭ＋Ｈ＋ピークを示す。 Ｂ）以下の条件下で逆相ＨＰＬＣにより分析した場合、保持−時間（Ｒｔ）が１ ０．３分である： カラム：ＢａｋｅｒｂｏｎｄＲ＊オクチル（Ｃ８）（逆相シラン化シリカゲル； ５マイクロメーター）４．６×２５０ｍｍ（＊）Ｂａｋｅｒｂｏｎｄは【配列が あります】により供給されるＨＰＬＣカラムの商標である。 プレカラム：ＢｒｏｗｎｌｅｅＬａｂｓＲＰ８（オクタシランシリカゲル；５マ イクロメーター） 溶離剤Ａ：ＣＨ３ＣＮ−６．６ｍＭクエン酸アンモニウム２０：８０（Ｖ／Ｖ） 溶離剤Ｂ：ＣＨ３ＣＮ−テトラヒドロフラン−イソプロピルアルコールー６．６ ｍＭクエン酸アンモニウム３５：２５：１０：３０（Ｖ／Ｖ） 溶離モード：２０分で溶離剤Ａ中の溶離剤Ｂを４０−６０％に直線勾配。 流量：１．８ｍｌ／分 紫外検出器：２５４ｎｍ を有する抗生物資ＧＥ１６５５因子Ｃ。 ６．ストレプトミセス・ヒグロスコピクスを、水に浸した好気的条件下で、炭素 、窒素の同化源及び無機塩の存在下で培養し、生成された抗生物質ＧＥ１６５５ 複合体をそこから回収し、単離し、それを精製し、場合によりそれを因子Ａ、Ｂ 及びＣに分離する段階を含む請求の範囲１に記載の抗生物質の調製法。 ７．ＧＥ１６５５生産株がストレプトミセス・ヒグロスコピクスＡＴＣＣ５５０ ８５又はその変異株あるいは突然変異体である請求の範囲６に記載の方法。 ８．ＧＥ１６５５生産株の培養を、２４−３５℃、好ましくは２８℃の温度で約 ２−５日間行う請求の範囲６に記載の方法。 ９．因子Ａ、Ｂ及びＣを逆相ＨＰＬＣ法を用いて分離する請求の範囲６に記載の 方法。 １０．請求の範囲１に記載の化合物を製薬学的に許容しうる担体と混合して含む 製薬学的組成物。 １１．薬剤として使用するための請求の範囲１に記載の化合物。 １２．菌・カビ感染の抑制の有用な薬剤の製造のための請求の範囲１に記載の化 合物の利用。 １３．土壌又は植物の一部中の菌・カビの抑制のための請求の範囲１に記載の化 合物の利用。 １４．感染を引き起こす菌・カビがカンジダ・アルビカンスである、請求の範囲 １２に記載の利用。 １５．ストレプトミセス・ヒグロスコピクスＡＴＣＣ５５０８５。