JPH06502158A - Ｄｎａゲル中に安定化された温泉水のリポソーム - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ＤＮＡゲル中に安定化された温泉水のりポノー二本発明は、特に皮膚病学および 美容術において有用な、ＤＮＡゲル中に安定化された温泉水のリポソームを含有 する、温泉水を主剤とする組成物に関する。

リポソームは１またはそれ以上の脂質二重層からなる微小胞であり、中心に水性 の空間を有し、多重ラメラ小胞の場合は２つの二貫層間に水性の空間を有する。

これらはり７脂質から構成され、安定性を増加させるためフレステ０−ルのよう ｆｉミスチロールか添加されることが多い。

リボ′ノームはその大きさおよび単ラメラが多重ラメラかにより分類される。

ＭＬＶ　（多重う／−ｙ小胞）　直１１００−５０００　ｎｉ　（？！数）二重 層）ＬＵＶ　（大きい単うメラ小抱）　直径２００〜２０００　ｎｍ　（１つの 二重層）ＳＵＶ（小さい単ラメラ小胞）　直径２０〜８１）ｎｍ（１つの二重層 ）大量のリポソームをつる手法が工業的に開発されたＣ超分散、音波処理、リボ ブレ　ノ　ト　（Ｉｉｐｏｐｒｅｄ）　）　。　ＰＵＩＳＩＥＩＩＸ　Ｆ、、Ｄ ＥＬＡＴ丁ＲＥ　Ｊ、−Ｌｅｓ　ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ、Ａｐ垂撃奄■ ａ＋＋ｏｎ　ｔｈｅｒｐｕｅｊｉｑｕｅｓ、　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ｅｔ　Ｄｏ ｃｕｍｅｎｔａｌｉｏｎ、　Ｌａｖｏｉｓｉｅｒ　Ｐａｒｉ刀A１９８５参 詔。

これらの微小胞は、リポソームの膜と同し性質の膜を有する細胞と相互作用しつ る。

支１病字や美容術はりヂノームの活用に有望な分野である。皮′ｉｊｌ二関する 主要を研究１！フル千コイトのりボノームに関する。コルチコイドのマイクロカ プセル化は製品の経皮的浸透を減らし、局所−表皮および真皮−における、１１ １度を高めるよってある。＃０）ＩＬＲＡＢ　Ｗ　、　ＬＡＳｃＨＪ　−ヒトの 皮膚におけるリボノーふ化ヒドロコル千ノ゛ンの浸透動力学、Ｄｅｒｍａ＋ｏｌ ｏｇ＋ｃａ　１７４．　ｌ８−２２．１９８７参詔。

その他の物質も導入されたが、研究は断皆的で一般化されない　ＥＧＦ　（上覧 増殖因子）は傷の治癒を促進すると考えられる　スーパーオキ、ト、スムターグ は局所的に抗炎症作用を宵すると考えられる。巳がし、使用された調合物ではｌ ボソーム小抱が脆すぎて標的に到達する前に破壊されることが多重多くの人か、 水性ゲルの形態でリイノーム小抱を安定化するためのゲル化剤の使用に言及して いる。使用された主なゲル化剤にはセラチノ、カルボキノビニル重合体、メタク ＩＪル重合体、ポリ／メチル／ロキサ、共重合体かあり、最も新しくはコラーゲ ／かある。

現在用いられているゲル化剤で水性ケル中のリポソームを安定化しても、調合物 について４０℃で３か月以上の安定性は得られｒｊい。

本発明ではデオキ／リホ核酸ケル中にリポソームを安定化することにより、この 主な欠点を解消することかできる。本発明によれば、ＤＮＡは当業者に既知の方 法で高度に重合したＤＮＡ（以後、ＨＰ　ＤＮＡと称する）であり、これは市販 されている。特に、ｓｏｏ、　ｏｏｏ〜１５　ＸＩ（＋’　、好ましくは８００ ．０００〜１．２　ｘ＋ｏ６の分子量を有するＤＮＡである。

本発明の組成物は有利には０１〜１０％、より好ましくは０５〜５％のＤ　Ｎ　 Ａを含有する。

本発明によれば、温泉水、より具体的にはアヴエ：／　（ＡＶＥＮＥ）水または コートレ（ＣＡＩＩ冗ＥＴＳ）水、をリポソーム中に入れる。アヴ二ノ水は湿疹 、播床、乾癖、治癒の遅れ、火傷の処置に有用な冶１！ｉ効果を有する。基礎研 究らまたアヴ二ノ水の効能を裏付けている。このように一連の研究により、７ヴ エノ水かヒト好塩基球の顆粒消失を阻止する効果を発揮することか示唆される。

これはまた、皮膚の炎症に重要な役割を果たす多核細胞の遁走を阻止する。

リポソーム形態の硫化フートレ水は皮膚病、より詳しくは乾艙、湿疹、挫瘉、擾 痒、脂漏症、脱毛の治療に重要である。

アヴ二ノ水の組成は以下の通りである。

コートレ水の組成はり下の通りである。

本発明によれば当鉾、治療および／または美容上の効能のあるその他いＴれの温 泉水も、表皮および直皮中に目障とする浸透か可能なようにマイクロカプセル化 しうる。

本発明の別の特徴によれば、本組成物はさらに併用添加した有効成分を任意に含 有していてもよい。このようｔ追Ｉ７０有効成分としては、抗菌剤、より具体的 に１＝フエノニツプ（Ｐｈｅｎｏｎｉｐ）　、　ＥＤＴＡ、安９香酸、ｐ−ヒト ロキ７安二香酸ブ千ル、′ノルピノ酸、ビタミ／Ｅ、ヒタこノＣ等の付随するヒ タミ／成分、またはルリヂサ油Ｌｂｏｒａｇｅ　ｏｗｌ）やアーカノ油（ａｒｇ ａｎ　ｏｗｌ）等の油Ｏもちろん、これらの例示は制昭を！味するしのではｔｉ い。

これらの追加有効成分は具体的には組Ｆ＆物のＯ〜５０叙特に０１〜３重量００ の量で存在する。

本発明組成物は、有利にはりイノーム構成成分とｆｉる脂質を０１〜１０重量％ 、特に０５〜５重量％含有し、　（脂質）／（すｆノームに被包された温泉水） の重量比は約１／３である。

１つの具体例においては、本発明で使用されるリポソームはフランス特許第２６ ３４、３７５号により調製された多重うＩ″７型のものである。この具体例では 、リポソームゲルは次のようにして製造される。

ａ）リポソーム 両ｔｌ［性脂質溶液と、任意に親油性の前記追加有効成分とから本質的にする脂 質相を宵機溶媒、より具体的には工２ノール中で２節する。

次に、この相を親水性の前記追加成ガを任意に含汀していてもよい温泉水溶液に 槍やかに攪拌し−から添加する。

減圧下で蒸発させて、所望１度の一１ｆノームの一濁順を得る。

両護媒性脂質は糖脂質、ホスｊニア　’−／指賃および特にり７脂質、例えはレ ジ千）（卵、大豆等の）等であれはよい 溶媒は、いかｆｉる割合でも水と昆！′０可能ｆ本アルコールか好ましく、こく にエフノールか好ましい。

ｍｎａ性脂ｘの溶液にはさらに、フしステロール、ステアリルアこノ、”スフ７ チ／ノ酸等のようｔ、壁の物理的性質（１１１Ｅ荷、剛さ）や化学的性質を変化 させるように設計されたＭ７１１！性を有する物質を含有させてもよい。

溶媒中の脂質濃度は０．１〜１０重量％、好ましくは１〜５重量％である。

小さいリボ゛ノーム（特に１００〜３００ｎｍ）を得るには、相（１）に用いら れる溶媒の量か体積で、相（２）の水の３０〜ｌＯＯ％、例えば５０％であるの か有利である。

ｂ）リポソームゲルの調製 上記懸４Ｐ＆へ、穏やかに攪拌しなからＤＮＡ　（特にＨＰ　［ｌＮ＾）と任意 に保存量および香料を添加する。

本発明によればゲル中で完全に安定な温泉水のリポソームを得ることかできる本 発明により得られるこれらの調合物は、皮膚美容術に、特に、局所用担体を含有 する場合は局所用に使用でき、チューブや主にポンプによる機械的装置に充填し たゲルであるか、またはゲルの形で噴出するスプレー組成物であればよい。

以下の実施例は本発明を説明するためのものであり、限定のためではない。

実施例Ｉ　脂質２％を含有するアヴエン水のリポソームの５にバッチの調製原料 １−有機相 一リン脂質（リポイド８０）セビック（ＳＥＰＰＩＣ）　１００　ｇ−コレステ ロールＢＰ　１５　ｇ −９５％エタノール　２．５リットル ２−水相 一アヴエン水　５リットル −ＥＤＴＡ　にナトリウム４）　１０　ｇ操作 １−有機相１の！Ａ製 エタノール２．５１中に、室温で激しく攪拌しながら、リン脂質１００ｇ、コレ ステロールｌｏｇおよびフェノニップＩＯｇを加える。溶解と淡黄色均質相の生 成か起こるまで攪拌を１７２時間続ける。

アラ五ノ水５ｐ中に撹拌しなからＥＤＴＡ二ナトリウムｌＯｇを加える。

３−リポソームの２製 クレムリン（Ｋｒｅｓｌｉｎ）装置と螺動ずノブを使用して、水相■中に１ｉｒ 機相１を薄層ジェット状で導入する。

レイネリ（Ｒａｙｎｅｒｉ）装置を使用して激しく攪拌しながら、この添加を１ ５分間かイナて行う。有機相は攪拌コーン（攪拌でできる円錐部）の外７１１１ １１こ導入すべきである。乳白色の相か生成する。

減圧下で２．７１（エタノール＋水）を蒸発させる。水浴の温度は５０℃であろ う礼白色ｒｓ液４．８１か生成し、これをアヴ五ノ水で５１に調整して、２％の 脂質を含有する溶液を得る。

実施例２１　８Ｐ　ＤＮＡゲルで安定化された温泉水のりポノーム組成物の調製 上記の脂質２％を含有する乳白色溶液に、穏やかに攪拌しｒｉから、Ｈｐ　ＤＮ Ａ　ｉ／ヤバ不ｌり（ＪＡＶＥＲＮＥＣＨ）社より市販３１００ｇを少しつつ添 加する。溶解を室温でゆっくり行う。１時間攪拌すると、Ｈｐ　ＤＮＡゲル２％ とリポ゛ノーム２％とを含有する・安定化された調合物か得られる。

実施例３　性互男 以下の処方例Ｊこおいて、リポソーム中に肢包された温泉水の量（重量基準）（ まリポソームを構成する脂質の量の３＠程度である。

処方１ 脂質　２　％ ＨＰ　ＤＮＡ　２　％ フェノニップ　０．５％ ＥＤＴΔ　０．２％ アヴエノ水を加えて　１００ 処方２ 脂質　２９６ ＨＰ　ＤＮＡ　０５％ フェノニップ　０．５％ ＥＤＴＡ　０．２％ アヴ工／水を加えて　＋００ 処方３ 脂質　２　％ ＨＰ　ＤＮＡ　Ｏ，１％ フェノニップ　０５°１０ ＥＤＴＡ　０．２％ アヴエノ水を加えて　＋００ 処方４ 脂質　０５％ ＨＰＤＮＡ　Ｏ，２％ ｐ−ヒドロキシ安色香酸ブチル　０２％フローラル水（Ｆｌｏｒａｌ　ｗａｔｅ ｒ）　１　０ｂアヴエン水を加えて　＋００ 処方５ 脂質　２　％ ＨＰ　ＤＮＡ　０５％ ソルビン酸　０３％ コートレ水を加えて　１００ 処方６ 脂質　１　％ ＨＰ　ＤＮＡ　０５％ フローラル水　Ｉ　九 コートレ水を加えて　１００ 処方７− 脂質　２　％ ＨＰ　ＤＮＡ　０．５％ 銀杏エキス（Ｇｉｎｇｋｏ　ｅｘｔｒａｃｔ）　ｌ　％フェノニップ　０５％ フローラル水　１　％ 温泉水を加えて　ｉｏ。

処方８ 脂質　０１９６ ＨＰ　ＤＮＡ　０．５９δ ルリヂサ油　１０６ フエノニノブ　１　％ 温泉水を加えて　＋００ 処方９ 脂質　１０　％ ＨＰ　ＤＮＡ　５　％ 温泉水を加えて　１００ 実施例４　安定性の検討 アヴ二／温泉水のりボノームを２８０含亙する処方について安定性の検ｊ１を行 った。

電子顕微鏡を使用して視覚検査を行った。ニの視覚検査１＝、’、１　ノア　／ り’７．　＋　’７酸ナトリウムの２％溶液を用いてリポソームをネガティア染 色すること１こよ・）毎月行う。

この検討の結果を次の表暴こまとめて示すっ＋＝良好な安定性（リヂ／−ム３０ ０　ｔ３０　ｎｍ）二−リポソームの寸法か増大（膜の融合）−一相分Ｗｔ（処 方の不安定性） 写真検量では、すｆクレムはＨＰＤ呂格子中でその形状とＴ２去か（化せずに適 正に分散されていることか示され、基本処方中でリポソームの驚くべき安定性か 確認される。

実施した他の実験からし、本発明によるＤＮＡの存在によって、本発明による鉱 水のりｆクレムの製造中および製剤処方において、リポソーム、つ顕著−安定化 を得ることかできるという結論に達する。

０５〜２０ものＨＰ　ＤＮＡＪ度でリポソームを２４力呵安定化することかでき るのに利して、従来のカーナポールおよび／またｂ；：ラーケノ型のゲル化記１ で１諜リヂｌ−ム膜の安定性は最大で６力月間保持されるたけてあろうこの安定 性は、水性媒質中でＨＰ　ＤＮＡ繊維の架橋結合か起こることで、リポソームの 分散か可能とｔす、脂質小抱の融着か防止されることにより説明できる。

実施例５　薬学的および化学的活性 本発明によるリポソーム形態の鉱水のベクトル化（νｅｃｔｏｒｉｚａ＋１ｏｎ ）により、予想外にも、この水の薬理および臨床活性の効力を強化することかで きる。

得られた結果を次にまとめる。

１、　ヒト好塩基球の悦１４粒反応の阻止ヒト好塩基球の脱顆粒反応を次の手順 に従って検査する。

アレルギー性ぞ者からの検体または特異的１ｇＥ抗体に富む血清によりトナーの 好塩基球の受動感作後の検体からの所定抗原に感作された好塩基球の調製も作さ れた好塩基球をアレルギー性患者から得る場合には、１ｇでの単なる沈降および 白血球の多い血漿のＪ七・分離による高１１度化を行うことか必要である。

こうして得られた白血球ペレットは１５００〜３０００個／ＩＩＩＩ′の好塩基 球を含有している。

得られた白血球を次いで無ｌｌ緩衝液に！濁させた後、遠心・分離する。次に、 感作させる抗原をＲＰＭＩ　＋６４０　ｆｆｌｏｗｓ　Ｌａｂｏｌ中で希釈する （希釈率５倍での連続希釈を７回）。最初の濃度は、グリセリ／処理したエキス の場合で、例えば１０−３である。

この感作させるアレルゲノー好塩基球でのアヴエン水のベクトル化を検討するた めに、純水と蒸留水とを一定量の旧胞ベレットと接触させておき、２５℃で３０ 分間インキユベーンヨノする。このイ／キュヘー／９ノ時間か経過した後、細胞 懸４液を同体積量の抗原希釈液と混合する。１昭として、抗原を含有しない液と の混合も行う。

細胞−抗原混合物を３７℃で１５分間イノキュへ−ノ３ノした後、トルイノノ膏 で染色する。

その後、脱顆粒反応を受けｔｉかった好塩基球を、マラセノ（Ｍａｌａｓｓｅｚ ｌまたはフノフスーローセノタール（Ｆｕｃｈｓ−Ｒｏｓｅｎｌｈａ　ｌ）血球 ｇｆて計数する。

敬！ 次の表は、各種の呼吸アレルケノ（ｐｎｅｕｍａ　ｌ　ｌｅｒｇｅｎ）の存在下 での１５回の脱顆粒化試験に列する最大脱顆粒化工で表した結果を示す。１５回 の実験での平均脱顆粒化率は、蒸留水での対１１ｇ実験で５７．１０６．７ヴエ ／水で２９．３％、安定化りｆノームを使用して行った試験では１４．１％であ った（この差異は高度に膏！、ｐ＜Ｑ。Ｏｌである）。

リポソームによるアヴエン水のベクトル化により、好塩基球の脱顆粒化の阻止効 果の１００％の効力増強が可能である。

２、　薬理臨床検討 ヒトにおける抗刺激原活性の増強を、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）により 引き起こされる皮膚刺激のモデルを使用して検Ｎした。

（ｃ）アヴＬノ水（リポソーム、Ｉ（Ｐ　［ｌＮＡ濃度５％）試験するこれら３ 種類の物質を、刺激モデルとなる対照用のＳＬＳ溶液と同じ１度の溶液を調製す るために、ＳＬＳの溶媒として使用する。これらの溶液を対間溶液と一緒に、閉 ！（ｏｃｃｌｕｓｉｖｅ）パＩチ試験により２４時間適用する。

皮膚刺激の強さの評価は、ドツプラー・レーザー速度計法（Ｄｏｐｐｌｅｒ　Ｌ ａ５ｅｒ　Ｖｅｌｏｃｉｍｅ＋ｒｙ、　ＤＬＶ）による皮膚面？ｆ［の変動を測 定することにより行う。

表作（被験者数：２０名） 検査する物質（ａ、　ｂ、　ｃ）を使用して０７５％の３種類のＳＬＳ　１ｇ液 を調製する。月日用のＳＬＳ　ｉ’ｇ液とａ、　ｂ、　ｃの各溶液を、６５μｌ ／ｃｒｓ’の量でそれぞれ円形濾紙上にラノダムに滴下してパｌ千を用！する。

次いて、閉塞包帯で２４時間皮膚に百着させる。、包帯をはずした後、閉塞で起 ０り得る効果を排除するように、測定開始まで３０分間皮膚を開放空気にさらし ておく。

皮膚血液流の測定は６部分について１０分間のＬＤＶ測定記録をとることにより 行うか、測定は生理学的基準値を得るようにバッチの適用前と、上記のバッチを はずしてから３０分後との２回行う。

結果は、ＬＤＶ曲線曲線面積によって表される。

ＳＬＳによる欠症の阻止率は次式Ｊこより算出される。

ＡＵＣＳＬＳ　＝　ＳＬＳ単独の１ｇ４での曲線下の面積＾υＣｐ＝ａ、ｂおよ びｃｌｌｌｆの溶液での曲線下の面積試験し二冬物質の活性か有意であるか否か を決定するｔこめに、イ尋られｔこ結果ζ二月して７′ｌ　（Ｉｌａ　＋　ｒｅ ｄ）スチューテント（検定を利用し！こ統ｊ士学的検討を行う。

唯黒 ＳＬＳにより引き起こされる刺激の明止工は次の通りである。

臨床学的検討により、リポソームでベクトル化されたアヴ二／水の抗炎症活性の 非富に明ｗ戸功力増強（＞１００％）か確認される。

国際ｖ４斎報告 フロントページの続き （５１）　Ｉｎｔ、　Ｃ１，Ｓ　識別記号　庁内整理番号Ａ６１Ｋ　７１００　 Ｔ　９１６４−４Ｃ（７２）発明者　ムザン、ギルベール フランス、３１０００トウールーズ、リュー・デ・ベニタン・ブラン１１ Ｉ （７２）発明者　トレポ、マリ一一テレーゼフランス、８１１００カストレ、リ ュー・バロン・カシャン１９

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．デオキシリボ核酸ゲル中に安定化された温泉水のリボソームを含有すること を特徴とする、温泉水を主剤とする組成物。 ２．使用したデオキシリボ核酸が高度に重合したもの（ＨＰＤＮＡ）であること を特徴とする、請求の範囲第１項記載の組成物。 ３．リボソームを構成する脂質を０．１〜１０％含有することを特徴とする、請 求の範囲第１項または第２項記載の組成物。 ４．０．１〜１０％のＤＮＡを含有することを特徴とする、請求の範囲第１項な いし第３項のいずれか１項に記載の組成物。 ５、抗菌剤、より具体的にはフエノニツプ、ＥＤＴＡ、ｐ−ヒドロキシ安息香酸 ブチル、ソルビン酸から選ばれたものを、追加有効成分として含有することを特 徴とする、請求の範囲第１項ないし第４項のいずれか１項に記載の組成物。 ６．ビタミンＥ、ビタシンＣ、ルリヂサ油、アーガン油、銀杏バイローバ（ｇｉ ｎｇｋｏｂｉｌｏｂａ）エキスから選ばれた追加有効成分を含有することを特徴 とする、請求の範囲第１項ないし第５項のいずれか１項に記載の組成物。 ７．使用した温泉水がより具体的にはコートレ水またはアヴェン水であることを 特徴とする、請求の範囲第１項ないし第６項のいずれか１項に記載の組成物。 ８．組成物が０．１〜３重量％の前記追加有効成分を含有することを特徴とする 、請求の範囲第５項ないし第７項のいずれか１項に記載の組成物。 ９．さらに、美容術用、持に皮膚美容術用に適した１種もしくは２種以上のビヒ クルを含有することを特徴とする、請求の範囲第１項ないし第８項のいずれか１ 項に記載の組成物。 １０．請求の範囲第１項ないし第９項のいずれか１項に記載のリボソームゲルを 含有する組成物の製造方法であって、下記工程からなることを特徴とする方法。 １）両親媒性脂質溶液と任意に親油性の前記追加有効成分とから本質的になる脂 質相を有機溶媒、より具体的にはエタノール中で調製し、２）この相を次いで、 任意に親水性の前記追加有効成分を含有していてもよい温泉水溶液に、穏やかに 撹拌しながら加え、３）減圧下で蒸発させて、所望のリボソーム濃度の懸濁液を 得、４）上記懸濁液中に穏やかに撹拌しながら前記ＤＮＡを導入する。