JPH06504065A - 多糖類−タンパク質複合体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、概して、多糖類−タンパク質複合体とワクチンに関するものである。

特に、本発明は、ポリα（２→８）Ｎ−アセチルノイラミン酸（ＮｅｕＮＡｃ： 　Ｎ−ａｃｅｔｙｌｎｅｕｒａｍｉｎｉｃ　ａｃｉｄ）、または、ポリ（！（２ −８）Ｎ−アセチルノイラミン酸とポリα（２→９）Ｎ−アセチルノイラミン酸 の両者、または、ポリα（２→８）、α（２→９）Ｎ−アセチルノイラミン酸に 対する血清１ｇＧおよびＩｇＭ抗体を誘導する多糖類−タンパク質複合体に関す るものである。

Ｉｔｌｌｌｌｊ Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｅ　吐牡旺■」卦（髄膜炎菌）は、ヒトにおける全身感染症 、特に髄膜炎の主な原因菌である。髄膜炎菌グループ（ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃ ａｌ　ｇｒｏｕｐｓ）　Ａ、　Ｃ，Ｙ、　Ｗ１３５については、被嚢多糖類（ｃ ａｐｓｕｌａｒ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ：ＣＰ）ワクチンが認可されて いる。グループＢの髄膜炎菌が原因の疾病は、風土病および流行病として発生し 続けており、未だ重要な医療問題である（Ｇｏｔｓｃｈｌｉｃｈ、　Ｅ。

Ｃ，（１９８４）、　Ｂａｃｔｅｒｉａｌ　Ｖａｃｃｉｎｅｓ　（細菌ワクチン ）所収、ＧｅｒｒｎａｎｉｅｒＷａ　（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、　＝　 ニーヨーク）２３７−２５５ベージ；　Ｐｅ１ｔｏｌａ、　Ｈ，（１９８３）　 Ｂｅｖ、Ｉｎｆｅｃｔ、　Ｄｉｓ、　５゜７ｌ−９ｆ；　Ｐｏｏｌｍａｎ、　Ｊ 、Ｔ等（１９８６）　Ｌａｎｃｅｔ、　ｉｉ、　５５５−５５７）。大腸菌（Ｅ 、　Ｃｏ１１）　Ｋｌは、新生児髄膜炎、入院患者や家畜、実験動物の上部尿路 感染症および全身感染症の主要原因である（Ｒｏｂｂｉｎｓ、Ｊ、Ｂ、等（１９ ７４）　Ｎ、　Ｅｎｇ、　ＪＭｅｄ、　２９０．１２１６−１２２０：　Ｋａｉ ｊｓｅｒ、　Ｂ等（１９７７）　Ｌａｎｃｅｔ。

ｉ、　６６３−６６４．Ｃｒｏｓｓ、　Ａ、Ｓ等（１９８４）　Ｊ、　Ｉｎｆｅ ｃｔ、　Ｄｉｓ１４９、１８４−１９３；　０ｒｓｋｏｖ、　１．、　＆　０ｒ ｓｋｏｖ、Ｆ、　（１９８５）　ＪＨｙｇ、　Ｃａｍｂ、　９５．５５１−５７ ５）。抗生物質とその補助的医療にもかかわらず、この２つの病原菌を原因とす る髄膜炎は、恒久的な中枢神経系（ＣＮＳ）障害を含め、高い罹患率と死亡率を 示し続けている（Ｐｅｌｔｏｌａ、　Ｈ，（１９８３）　Ｒｅｖ、Ｉｎｆｅｃｔ 、　Ｄｉｓ、５．７１−９１ベージ；　５ｃｈｎｅｅｒｓｏｎ、　Ｒ（１９８８ ）、　Ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ　Ｍｅｎｔａｌ　Ｒｅｔａｒｄａｔｉｏｎ　 （精神発育遅延の理解）所収、Ｋａｖａｎａｇｈ、Ｊ、Ｆ、編（Ｐａｕｌ　Ｂｒ ｏｏｋｅｓ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、ボルチモア）、　２３７−２４９ページ； 　Ｂｒａｎｄｔｚａｅｇ、　Ｐ等（１９８９）　Ｊ、　Ｉｎｆｅｃｔ、　Ｄｉｓ 、　１５９．１９５−２０４；ＭｃＣｒａｋｅｎ、　Ｇ、Ｈ，、Ｊｒ等（１９７ ４）　Ｌａｎｃｅｔ、　ｉｉ、　２４６−２５０）。

グループＢ髄膜炎菌と大腸菌に１の被嚢多糖類は、同一であり（ポリα（２→８ ）Ｎ−アセチルノイラミン酸）、同病原菌に対しての必須の病毒因子として、ま た、防御抗原として作用する（Ｇｒａｄｏｓ、　Ｏ，、＆　Ｅｗｉｎｇ、　Ｗ、 Ｈ，（１９７０）Ｊ、　Ｉｎｆｅｃｔ、　Ｄｉｓ、　１２２．１００−１０３： 　Ｋａｓｐｅｒ、　Ｄ、Ｌ等（１９７３）　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１１０． ２６２−２６８；　Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｊｅｅ、　Ａ、に等（１９７５）　Ｊ 、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｔｎ、　２５０．１９２６−１９３２：　Ｒｏｂｂｉｎ ｓ。

Ｊ、Ｂ等（１９７４）　Ｎ、　Ｅｎｇ、　Ｊ、　Ｍｅｄ、　２９０．１２１６− １２２０）。

ポリα（２−８）Ｎ−アセチルノイラミン酸は、ＭｏｒａｘｅＬｌａｎｏｎｌｉ 　ｕｅｆａｃｉｅｎｓ（非水解性モラクセラ）とＰａｓｔｅｕｒｅｌｌａｈａｅ ｍｃ山厖」（溶血性肺炎菌）血清型Ａ〜２の表面抗原でもある（Ｂｏｖｒｅ、　 Ｋ等（１９８３）　ＮＩＨＰ　Ａｒ＋ｎａｌｓ、６．６５−７３；　Ｄｅｖｉ、 　Ｓ、Ｊ、Ｎ等（１９９１）　Ｉｎｆｅｃｔ、　Ｉｍｍｕｎ、　５９．７３２− ７３６；ＡＡｃｌｌａ、　Ｃ等（１９８７）　ＦＥＭＳ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、 　Ｌｅｔｔ、　４２．２３−２５）。後者は、牛革におけるパスツレラ症（ｐａ ｓｔｅｕｒｅｌｌｏｓｉｓ）の流行の主要原因であり、これは、ポリα（２→８ ）Ｎ−アセチルノイラミン酸が、また別の細菌種の病毒因子として作用する可能 性を示唆するものである。

ポリα（２−８）Ｎ−アセチルノイラミン酸は、単独または外膜タンパク質と複 合体を形成した状態で、一過性の低濃度のＩｇＭ抗体しか誘導しないので、グル ープＢ髄膜炎菌と大腸菌に１に対する防御免疫を誘導する試みは成功していない （Ｋａｓｐｅｒ、　Ｄ、Ｌ、等（１９７３）　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ。

１１０、２６２−２６８；　Ｗｙｌｅ、　Ｆ、Ａ、等　（１９７２）　Ｊ、　Ｉ ｎｆｅｃｔ、　Ｄｉｓ。

１２６、５１４−５２２；　Ｚｏｌｌｉｎｇｅｒ、　Ｗ、Ｄ等（１９７９）　Ｊ 、　Ｃｌ１ｎ。

Ｉｎｖｅｓｔ、　６３．８３６−８４２；　Ｍｏｒｅｎｏ、　Ｃ等（１９８５） 　Ｉｎｆｅｃｔ。

Ｉｍｍｕｎ、　４７．５２７−５３３；　Ｆｒａｓｃｈ、　Ｃ，Ｅ等（１９８８ ）　Ｊ、　Ｉｎｆｅｃｔ、　Ｄｉｓ、　１５８．７１０−７１８；　Ｌｉｆｅｌ ｙ、　Ｍ、Ｒ，等　（１９９１）　Ｖａｃｃｉｎｅ　９．６Ｏ−６６）。過ヨウ 素酸処理（Ｊｅｎｎｉｎｇｓ、　Ｈ，＆Ｌｕｇｏｖｙｓｈｉ、Ｃ，（１９８１） 　Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、１２７，１０１１−１０１８）または酸加水分解された ポリα（２−８）Ｎ−アセチルノイラミン酸（Ｐｏｒｒｏ、　Ｍ等　（１９８３ ）　Ｍｅｄ、　Ｔｒｏｐ、　４３．１２９−１３２）を、共有結合によってタン パク質に付着させた場合でも、この抗原に対する抗体を誘導する事はできなかっ た。更に、α（２−８）Ｎ−アセチルノイラミン酸は、成人において糖タンパク 質およびガングリオシド類（ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅｓ）にモノマーまたはダイ マーとして、また胎児組織においてＮ−ＣＡＭＳを含めて約１１残基まで認めら れるので、この被嚢多糖類は、”自己抗原（ｓｅｌｆ　ａｎｔｉｇｅｎ）”と考 えられている（Ｆｉｎｎｅ、　Ｊ等（１９８３）　Ｌａｎｃｅｔ、　ｉｉ。

３５５−３５７：　Ｆｉｎｎｅ、　Ｊ等（１９８７）　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、 　１３８．４４０２−４４０７：　Ｓｏｄｅｒｓｔｒｏｍ、　Ｔ等（１９８４） 　Ｎ’、　Ｅｎｇ、　Ｊ、　Ｍｅｄ３１０、７２６−７２７）。そこで、研究者 等は、強力ワクチンとして、リポ多糖類（ＬＰＳ）、外膜タンパク質類、鉄結合 タンパク質類、化学的に変態させたポリα（２−８）Ｎ−アセチルノイラミン酸 等の別の成分を検討した（Ｚｏｌｌｉｎｇｅｒ。

ＷＤ等（１９７９）　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、　６３．８３６−８４ ２；　Ｍｏｒｅｎｏ、　Ｃ等（１９８５）　Ｉｎｆｅｃｔ、　Ｉｍｍｕｎ、　４ ７，５２７−５３３；　Ｆｒａｓｃｈ、　Ｃ，Ｅ等（１９８ｇ）　Ｊ、　Ｉｎｆ ｅｃｔ、　Ｄｉｓ、　１５８．７１０−７１８；Ｊｅｎｎｉｎｇｓ、　Ｈ，Ｊ等 （１９８４）　Ｉｎｆｅｃｔ、　Ｉｍｍｕｎ、　４３．４０７−４１２；　Ｊｅ ｎｎｉｎｇｓ、　Ｈ，Ｊ等（１９８６）　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３７．１ ７ｖ、２（補遺）、　５１３４−８１３８）。

大部分の新生児と成人は、髄膜炎菌の３つの主な血清学的グループ（Ａ、　Ｂ、 　Ｃ）に対する殺菌性抗体を持っている（Ｇｏｌｄｓｃｈｎｅｉｄｅｒ、　Ｉ等 　（１−９６９）　Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、　１２９゜１３０７−１３２６） 。グループＢ髄膜炎菌を含め、大部分の殺菌活性か、同種の被嚢多糖類を用いる 吸着により除去された（Ｆｒａｓｃｈ、　Ｃ，Ｅ、等　（１９８８）　Ｊ、　Ｉ ｎｆｅｃｔ、　Ｄｉｓ、　１５８゜７１０−７１８；　Ｂｒａｎｄｔ、　Ｂ、Ｌ 等（１９７２）　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１０８゜９１３−９２０；　Ｋａｓ ｐｅｒ、　Ｄ、Ｌ等（１９７３）　Ｊ、　Ｉｎｆｅｃｔ、　Ｄｉｓ１２７、３７ ８−３８７；　５ｋｅｖａｋｉｓ、　Ｌ等（１９８４）　Ｊ、　ＩｎｆｅｃｔＤ ｉｓ、　１４９．３８７−３９６）。母体由来の抗体が減量した時や、成人の濃 度にまだ達していない時に、グループＢを含む髄膜炎菌を原因とする疾病の発生 率が最高となる（Ｇｏｔｓｈｃｌｉｃｈ、　Ｅ、Ｃ，（１９８４）、　Ｂａｃｔ ｅｒｉａｌ　Ｖａｃｃｉｎｅｓ　（細菌ワクチン）所収、Ｇｅｒｍａｎｉｅｒ編 　（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、＝　ニーヨーク）　２３７−２５５ベーン ；　Ｇｏｌｃｆｓｃｈｎｅｉｄｅｒ、　Ｉ等　（１９６９）Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍ ｅｄ、　１２９．１３０７−１３２６）。グループＢ髄膜炎菌による髄膜炎の回 復期の患者において、ＩｇＧイソタイプの上昇を含むポリα（２→８）Ｎ−アセ チルノイラミン酸抗体の上昇が認められる（Ｗｙｌｅ、　Ｆ、Ａ等　（１９７２ ）　Ｊ、　ＩｎｆｅＣｔ、　Ｄｉｓ、１２６．５１４−５２２：　Ｚｏｌｌ、ｉ ｎｇｅｒ、　Ｗ、Ｄ等（１９７９）Ｊ、　Ｃ１１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、　６３． ８３６−８４２；　Ｆｒａｓｃｈ、　Ｃ，Ｅ、等　（１９８８）　Ｊ、Ｉｎｆｅ ｃｔ、　Ｄｉｓ、　１５８．７１０−７１８；　５ｋｅｖａｋｉｓ、　Ｌ等（１ ９８４）　Ｊ、　Ｉｎｆｅｃｔ、　Ｄｉｓ、　１４９．３８７−３９６；　Ｃｒ ａｖｅｎ、　Ｄ、Ｅ等（１９８２）　Ｉｎｆｅｃｔ、　Ｉｍｍｕｎ、　３７．１ ３２−１３７：　Ｍｅｎｄｒｅｌｌ。

Ｒ，Ｅ、　＆　Ｚｏｌｌｉｎｇｅｒ、　Ｗ、Ｄ、　（１９８２）　Ｊ、　Ｉｍｍ ｕｎｏｌ、　１２９゜２１７２−２１７８；　Ｌｅｉｎｏｎｅｎ、　Ｍ、　＆　 Ｆｒａｓｃｈ、　Ｃ，Ｅ、　（１９８２）　Ｉｎｆｅｃｔ、　Ｉｍｍｕｎ、　３ ８．１２０３−１２０７）。動物において、細菌を複数回静注する事によって、 ポリクローナルおよびモノクローナルの（モノクローナル抗体）ポリα（Ｚ−８ ）Ｎ−アセチルノイラミン酸抗体（（ｍＡｂ）　ｐｏｌｙ　ａ　（２−８）　Ｎ ｅｕＮＡｃ　ａｎｔｉｂｏｄｙ）か作製された（Ｒｏｂｂｉｎｓ、　Ｊ、Ｂ等（ １９７４）Ｎ、　Ｅｎｇ、　Ｊ、　Ｍｅｄ、　２９０．１２１６−１２２０；　 Ｍｏｒｅｎｏ、　Ｃ，等　（１９８５）　Ｉｎｆｅｃｔ、Ｉｍｍｕｎ、４７．　 ５２７−５３３；　Ｍａｎｄｒｅｌｌ、Ｒ，Ｅ。

＆　Ｚｏｌｌｉｎｇｅｒ、Ｗ、Ｄ、（１９８２）　Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、ｉ２９ ．　２１７２−２１７８；　Ａ１１ｅｎ、Ｐ、Ｚ　等（１９８２）　Ｊ、Ｃ１１ ｎ、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、１５゜３２４−３２９；　Ｃｒａｖｅｎ、　Ｄ、Ｅ等 （１９７９）　Ｊ、　Ｃ１１ｎｃ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　１０．３０２−３ ０７；　Ｆｒｏｓｃｈ、　Ｍ、等（１９８５）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ。

Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　（ＵＳＡ）　８２．１１９４−１１９８）。健康な８１ 才の男性とハイブリドーマ培養において、この抗原に対するモノクローナル抗体 が同定された（Ｋａｂａｔ、　Ｅ、Ａ、等　（１９８６）Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍａ ｄ、　１６４．６４２−６５４；　Ｋａｂａｔ、　Ｅ、Ａ、等（１９８８）Ｊ、 　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、　１６８．６９９−７１１：　Ｒａｆｆ、　Ｈ，Ｖ、等（ １９８８）　Ｊ。

Ｉｎｆｅｃｔ、　Ｄｉｓ、　１５７．１８８−１２６）。これらの抗体は防御免 疫と相関関係を有する生物活性を示す。１）グループＢ髄膜炎菌に対する補体依 存性溶菌作用（Ｇｏｔｓｃｈｌｉｃｈ、　Ｅ、Ｃ（１９８４）、　Ｂａｃｔｅｒ ｉａｌ　Ｖａｃｃｃｉｎｅｓ　（細菌ワクチン）所収、Ｇｅｒｍａｎｉｅｒ編　 （Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、　＝　ニーヨーク）２３７−２５５ページ； 　Ｇｏｌｄｓｃｈｎｅｉｄｅｒ、　１等（１９６９）　Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ １２９、１３０７−１３２６）、２）大腸菌に１にょる薩歯類の致死的感染症に 対する防御作用（Ｒｏｂｂｉｎｓ、　Ｊ、Ｂ等　（１９７４）　ＮＥｎｇ、　Ｊ 、　Ｍｅｄ、　２９０．１２１６−１２２０；　Ｇｌｏｄｅ、　Ｍ、Ｐ、等（１ ９７７）Ｉｎｆｅｃｔ、　ｆ＋ｍｕｎ、　１６．７５−８０；　Ｋｉｍ、　Ｋ、 Ｓ等（１９８５）　Ｉｎｆｅｃｔ、　ｒｍｍｕｎ、　５０．７３４−７３７）。

他に２つの細菌性Ｎ−アセチルノイラミン酸ポリマーがある。すなわち、１）ポ リα（２−９）Ｎ−アセチルノイラミン酸から成るグループＣ髄膜炎菌の被嚢多 糖類、大部分の菌株は、Ｃ７またはＣ８で様々に０−アセチル化されている（Ｂ ｈａｔｔａｃｈａｒｊｅｅ、　Ａ、に等（１９７５）　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈ ｅｍ、　２５０、１９２６−１９３２）。結合のみがポリα（２−８）Ｎ−アセ チルノイラミン酸と異なるが、ポリα（２→９）Ｎ−アセチルノイラミン酸は免 疫原性があり、認可されたグループＣ髄膜炎菌用ワクチンである（世界保健機構 生物学的規格化専門委員会）。（１９７７）　Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ　Ｒｅｐｏｒ ｔ　５ｅｒｉｅｓ、　６１０ＷＨＯ，ジュネーブ、スイス）。そして、２）α（ ２→８）、α（２→９）のＮ−アセチルノイラミン酸が交互に来る二炭糖の単位 の繰り返しを有する大腸菌［９２被嚢多糖類（図１）［この多糖類の構造は、９ ）−Ｎ−アセチルノイラミン酸−α−（２→８）Ｎ−アセチルノイラミン酸−α −（２→、）と書く事ができる（Ｒｏｂｂｉｎｓ、　Ｊ、Ｂ、等（１９７２）　 Ｉｎｆｅｃｔ、　Ｉｍｍｕｎ。

６、６５１−６５６；　Ｇｌｏｄｅ、　Ｍ、Ｐ、等Ｊ、　Ｉｎｆｅｃｔ、　Ｄｉ ｓ、　１３５゜９４−１０２；　Ｅｇａｎ、　Ｗ等（１９７７）　Ｂｉｏｃｈｅ ｍ、　（ＵＳＡ）　１６．３６８７−３６９２；　Ｇｌｏｄｅ、　Ｍ、Ｐ、等　 （１９７９）　Ｊ、　Ｉｎｆｅｃｔ、　Ｄｉｓ、　１３９゜５２−５９）］。グ ループＢおよびグループＣ髄膜炎菌の抗血清は共に、被嚢多糖類によって沈降す る（Ｇｌｏｄｅ、　Ｍ、Ｐ。

等（１９７７）　Ｊ、　Ｉｎｆｅｃｔ、　Ｄｉｓ、　１３５．９４−１０２；　 Ｅｇａｎ、　Ｗ等（１９７７）　Ｂｉｏｃｈｅｍ、（米国）　１６．３６８７− ３６９２；　Ｇｌｏｄｅ、　Ｍ。

Ｐｏ等（１９７９）　Ｊ、　Ｉｎｆｅｃｔ、　Ｄｉｓ、　１３９．５２−５９） 。死滅させた大腸菌に９２を複数回静注すると、ポリα（２→９）Ｎ−アセチル ノイラミン酸とポリα（２→８）、α（２→９）Ｎ−アセチルノイラミン酸に対 して沈降する抗体が誘導されたが、ポリα（２→８）Ｎ−アセチルノイラミン酸 に対して沈降する抗体は誘導されなかった（Ｇｌａｄｅ、　Ｍ、Ｐ等（１９７７ ）　ＪＩｎｆｅｃｔ、　Ｄｉｓ、　１３５．９４−１０２）。成人ボランティア において、大腸菌に９２被嚢多糖類を注射することによって、ポリα（２−９） Ｎ−アセチルノイラミン酸抗体が誘導されたが、ポリα（２→８）Ｎ−アセチル ノイラミン酸に対する抗体は測定されなかった（Ｇｌｏｄｅ、　Ｍ、Ｐ等　（１ ９７９）　Ｊ、　Ｉｎｆｅｅｔ、　Ｄｉｓ、　１３９．５２−５９）。

免ユニ１老 本発明の一般的な目的は、多糖類−タンパク質複合体およびワクチンを提供する 事である。

本発明の具体的な目的は、ポリα（２→８）Ｎ−アセチルノイラミン酸（ｐｏｌ ｙ　ａ　（２−８）ＮｅｕＮＡｃ）、または、ポリα（２→８）Ｎ−アセチルノ イラミン酸とポリα（２→９）Ｎ−アセチルノイラミン酸の両者、または、ポリ α（２→８）、α（２→９）Ｎ−アセチルノイラミン酸に対する血清１ｇＧおよ びＩｇＭ抗体を誘導できる多糖類−タンパク質複合体を提供する事である。

本発明のさらなる目的は、全身感染症への使用に適した医薬組成物を提供する事 である。

本宅明の他の目的は、全身感染症の予防法を提供する事である。

本発明のさらなる目的は、全身感染症の予防法を提供する事である。

本発明のさらなる目的は、グループＡ、　ＢＳＣの髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉ ａ　ｍｅｎｉｎ　１ｔｉｄｉｓ）によって引き起こされる全身感染症の予防法を 提供する事である。

本発明の他の目的は、多糖類−タンパク質複合体の製造法を提供する事である。

本発明のさらなる目的と利点は、以下の説明によって明らかになるであろう。

ある実施例において、本発明は、多糖類と担体タンパク質から成る多糖類−タン パク質複合体に関するものである。ここで、この複合体は、哺乳動物または鳥に おいて、ポリα（２→８）Ｎ−アセチルノイラミン酸（ｐｏｌｙａ　（２→８） 　ＮｅｕＮＡｃ）、または、ポリα（２−８）Ｎ−アセチルノイラミン酸とポリ α（２→９）Ｎ−アセチルノイラミン酸の両者、またはポリα（２−９）Ｎ−ア セチルノイラミン酸に対する血清１ｇＧおよびＩｇＭ抗体を誘導できる。

別の実施例において、本発明は、全身感染症を十分予防できる量の多糖類−タン パク質複合体から成る医薬組成物とワクチン、および薬理学的に投与可能な希釈 剤、担体、または賦形剤に関するものである。

さらなる実施例において、本発明は、動物における全身感染症の予防法に関する もので、予防効果を発揮するのに十分量の多糖類−タンパク質複合体の動物への 投与に関するものである。

別の実施例において、本発明は、動物におけるグループＡ、　Ｂ、　Ｃの髄膜炎 菌による全身感染症の予防法に関するもので、感染症を予防できる条件で、上述 の多糖類−タンパク質複合体およびグループＡ髄膜炎菌多糖類−タンパク質複合 体の動物への投与に関するものである。

更に別の実施例において、本発明は、多糖類−タンパク質複合体の製造法に関す るもので、多糖類の誘導体を作り、誘導された多糖類をタンパク質に結合させる 事に関するものである。

図面の簡単な説Ｂ 図１．　Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ（大腸菌）Ｋ９２被嚢多糖類の構造 　ポリα（２−８）、α（２−９）Ｎ−アセチルノイラミン酸（Ｅｇａｎ、Ｗ等 （１９７７）　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　（ＵＳＡ）　１３．３６８７−３６９２）。

図２．　Ｋ９２−ＴＴ（ｔｅｔａｎｕｓ　ｔｏｘｏｉｄ：破傷風トキソイド）複 合体のゲル濾過法。１０ｍ１の［９２−ＴＴを、０．２Ｍ塩化ナトリウム中で４ Ｂ−ＣＬセファ０−ス（２，５Ｘ　９０　ｃｍ）のカラムを通過させた。フラク ションサイズは２．０　ｍｌで、溶出液は、Ｎ−アセチルノイラミン酸の分析（ Ｙａｏ、　Ｋ、　＆　Ｕｂｕｋａ、　Ｔ、（１９８７）　Ａｃｔａ　Ｍｅｄ、　 Ｏｋａｙａｍａ、　４１．２３７−２４１）と２８０　ｎｍの吸収によってモニ ターした（世界保健機構生物学的規格化専門委員会（１９７７）　Ｔｅｃｈｎｉ ｃａｌ　Ｒｅｐｏｒｔ　５ｅｒｉｅｓ、　６１０．　ＷＨＯ，ジュネーブ、スイ ス；　５ｃｈｎｅｅｒｓｏｎ、　Ｒ。

等（１９８０）　Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、　１５２．３６１−３７６）。

図３に９２複合体を用いる二重免疫拡散法：中央のウェル−に９２−ＴＴ、　０ ．１　ｍｇ／ｍｌ、ウェルＡ　−１１ｕＫ９２細胞に対するウサギ抗血清、ウェ ルＢ−マウス破傷風毒素抗血清。

発明の詳細な説明 本発明は、多糖類−タンパク質複合体（ｃａｎ　ｊ　ｕｇａｔｅ　）とワクチン に関する。本複合体は、多糖類と担体タンノくり質を含み、哺乳動物または鳥に おいて、ポリα（２−８）Ｎ−アセチルノイラミン酸、または、ポリα（２→８ ）Ｎ−アセチルノイラミン酸とポリα（２→９）Ｎ−アセチルノイラミン酸の両 者、または、ポリα（２−８）、α（２−９）Ｎ−アセチルノイラミン酸に対す る血清１ｇＧおよびＩｇＭ抗体を誘導できる。多糖類の免疫原性を高め、多糖類 がブースタ一応答とＩｇＧ抗体の両者を誘導できる様に、多糖類に担体を結合さ せる。これらの免疫特性は、多糖類−タンパク質ワクチンのみによって誘導され る筈である。

アルミニウム塩、生理的食塩水中またはエマルジョン中の細菌性ムレイン（ｂａ ｃｔｅｒｉａｌ　ｍｕｒｅｉｎ）構造等のアジュバントを加えると、大腸菌に９ ２によるポリα（２→８）Ｎ−アセチルノイラミン酸とポリα（２→９）Ｎ−ア セチルノイラミン酸抗体とポリα（２→８）Ｎ−アセチルノイラミン酸複合体ワ クチンの産生を誘導または増強するのを助ける場合がある。１つの望ましい実施 例において、担体タンパク質は、多糖類に共有結合している。共有結合は本来の 多糖類と本来の多糖類の免疫特性を維持しなければならない。共有結合している 多糖類−タンパク質複合体の効果的な担体として作用し得るタンパク質には、ア ルブミンおよびジフテリア、破傷風、百日咳、Ｐｓｅｕｄｏａ＋ｏｎａｓ　ａｅ ｒｕ　１ｎｏｓａ（緑膿菌）外毒素Ａ、　針ト１胆シｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ（ 黄色ブドウ球菌）毒素等の化学的ある（１は遺伝的機序により無毒化された薬理 活性を有するタンパク質、合成ポリペプチド、細菌の外膜タンパク質、ウィルス タンパク質等かある（Ｓｃｈｎｅｅｒｓｏｎ、　Ｒ等　（１９８０）、　Ｎｅｗ 　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　Ｈｕｍａｎ　ａｎｄ　Ｖｅｔｅｒｉｎ ａｒｙ　Ｖａｃｃｉｎｅｓ　（人間と動物のワクチンに関する新たな展開）所収 、　Ｍｉｚｒａｈｉ等編、ニューヨーク、Ａｌａｎ　Ｒ，Ｌｉ５ｓ；　５ｃｈｎ ｅｅｒｓｏｎ、　Ｒ等（１９８７）、　Ｔｏｗａｒｄｓ　Ｂｅｔｔｅｒ　Ｃａｒ ｂｏｈｙｄｒａｔｅ　Ｖａｃｃｉｎｅｓ　（より優れた炭水化物ワクチンに向け て）所収、Ｂｅ１１．　Ｒ，＆　Ｔｏｒｒｉｇｉａｎｉ、　Ｇ、編、世界保健機 構、Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　５ｏｎｓ、　Ｌｔｄ、）、　Ｋ９２またはポリ α（２−８）Ｎ−アセチルノイラミン酸多糖類の担体は、それ自体が免疫原性を 有し、ブースタ一応答を誘導するタンパク質でなくてはならない。担体は、大腸 菌に９２またはポリα（２→８）Ｎ−アセチルノイラミン酸多糖類と複合体（ｃ ｏｎｊｕｇａｔｅ）を合成するために必要な基を有していなくてはならない。担 体は、免疫原性と大腸菌に９２とポリα（２→８）Ｎ−アセチルノイラミン酸に 対するブースタ一応答を増強する特性を与えるものでなくてはならない。この特 性には、これらの多糖類に対するＩｇＭおよびＩｇＧ抗体の両者の形成が含まれ ている（Ｓｃｈｎｅｅｒｓｏｎ等、（１９８７）　７ａｗａｒｄｓ　Ｂｅｔｔｅ ｒ　Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ　Ｖａｃｃｉｎｅｓ　（より優れた炭水化物ワク チンに向けて）所収、Ｂｅ１１．　Ｒ，＆　Ｔｏｒｒｉｇｉａｎｉ、　Ｇ編、世 界保健機構、Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　５ｏｎｓ、　Ｌｔｄ、）。

別のより望ましい実施例において、多糖類とタンパク質はリンカ−物質（結合物 質）によって共有結合している。効果的なリンカ−物質か、アジピン酸ジヒドラ ジド（ａｄｉｐｉｃ　ａｃｉｄ　ｄｉｈｙｄｒａｚｉｄｅ）である事が認められ ている。他のリンカ−物質として、ジアミノヘキサン、アミノニブシロンカブシ ロン酸（ａｍｉｎｏ　ｅｐｓｉｌｏｎ　ｃａｐｒ。

ｉｃ　ａｃｉｄ）、Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プリオピ オネート（ＳＰＤＰ：　Ｎ−ｓｕｃＮ−５ｕｃｃｉｎｉ　３−（２−ｐｙｒｉｄ ｙｌｄｉｔｈｉｏ）　ｐｒｉｏｐｉｏｎａｔｅ）によって示される様な、無水Ｎ −ヒドロキシスクシンイミドアシド（Ｎ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ ｅ　ａｃｉｄ　ａｎｈｙｄｒｉｄｅ）に基づく異種二官能性結合物質等がある。

毒性が無く、ポリα（２−８）Ｎ−アセチルノイラミン酸とポリα（２−９）Ｎ −アセチルノイラミン酸の抗体を誘導する複合体ができるならば、他の架橋化合 物を複合体の合成に使用する事ができる（Ｒｏｂｂｉｎｓ、　Ｊ、ＢＳｃｈｎｅ ｅｒｓｏｎ、　Ｒ，（１９９０）　Ｊ、　Ｉｎｆｅｃｔ、　Ｄｉｓ、　１６１： ８２１−８３２）。リンカ−物質は、多糖類をタンｌくり質に共有結合させるた めに使用できる分子である。リンカ−物質の各末端との化学反応によって、リン カ−物質の構造力（変化する。例えば、アジピン酸ジヒドラジドが化学的に多糖 類とタンパク質に結合して複合体を形成すると、多糖類とタンパク質はアジピン 酸ジヒドラジド結合↓こよって結合される。別の望ましい実施例にお０て、多糖 類は、ポリα（２−８）Ｎ−アセチルノイラミン酸またＣよその誘導体から構成 されている。更に望まし０実施例において、多糖類は、α（２−８）、α（２− ９）Ｎ−アセチルノイラミン酸のヘテロポリマーまたはまたはその誘導体から構 成されている。また別の望ましい実施例にお（為て、担体タンパク質は破傷風ト キソイドである。使用でさる担体タンパク質としては他に、アルブミン（Ｓ　ｃ 　ｈｎｅｅｒｓｏｎ、　Ｒ等（１９８０）　Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｓｄ、　１５２ ．３６１−３７６）、ジフテリアトキソイド（Ｓｃｈｎｅｅｒｓｏｎ、　Ｒ，等 　（１，９９０）　ＪＥｘｐ、　Ｍｅｄ、　１５２．３６１−３７６）、緑膿菌 外毒素Ａおよびこのタンパク質の突然変異体等がある（Ｆａｔｔｏｍ　Ａ等　（ １９９０）Ｉｎｆｅｃｔ、Ｉｍｍｕｎ、５８．　２３６７−２３７４）。

別の実施例において、本発明は、グループＢまたはグループＣＮｅ１ｓｓｅｒｉ ａ　柱現１１ｔｉｄｉｓ（髄膜炎菌）、Ｅｓｃｈｅｒｊ、　ｃ　ｈ　ｉ　ｑｐ、 ｕ（大腸菌）Ｋｌ、Ｍｏｒａｘｅｌｌ、ａ　１聰旦ｉ　ｕｅｆａｃｉｅｎｓ（非 水解性モラクセラ）、Ｐａ５ｔｅｕｒｅｌｌａ　Ｉ↓−見１ハｊ２ｃａ（溶血性 肺炎菌）、または、その他のポリα（２−８）Ｎ−アセチルノイラミン酸、ポリ α（２−９）Ｎ−アセチルノイラミン酸、またはポリα（２→８）、α（２−９ ）Ｎ−アセチルノイラミン酸表面抗体を含む微生物等によるｍｅｎｉｎ　１ｔｉ ｄｉｓ（髄膜炎）の全身感染症を予防するのに十分な量の上述の多糖類−タンパ ク質複合体の医薬組成物と、薬理学的に投与可能な希釈剤、担体、賦形剤に関す るものである。本発明の医薬組成物には、投与経路によって選択された量の多糖 類複合体か含まれる。皮下または筋肉内投与か望ましいが、上述の多糖類−タン パク質複合体は、腹腔内または静脈内投与も可能であろう。いわゆる当業者は、 特定の投与方法の投与量か容易に決定できる事を理解するであろう。適量は、多 糖類でもタンパク質でも、１回の投与量たり５０マイクログラムから１００．０ マイクログラムの範囲に入ると予測できる（複合体を構成する多糖類とタンパク 質の比が異なる事がある。各成分について、報告されている投与量は、予想範囲 内に入る）。

別の実施例において、本発明は、上述の全身感染症を予防するために、上述の多 糖類−タンパク質複合体を使用する方法に関するものである。当業者は、特定の 投与方法の投与量が容易に決定できる事を理解するであろう。

また別の実施例において、本発明は、動物においてグループＡＸＢＳＣのＮｅ１ ｓｓｅｒｉａ　ｍｅｎｉｎ　１ｔｉｄｉｓ（髄膜炎菌）によって引き起こされる 全身感染症の予防法に関するものである。これは、動物に上述の多糖類−タンパ ク質複合体とグループＡ髄膜炎菌多糖類−タンパク質複合体を、感染症を予防で きる条件で投与するものである。

この組成は、ワクチンとしても作用する。

別の望ましい実施例において、本発明は、哺乳動物または鳥において、ポリα（ ２→８）Ｎ−アセチルノイラミン酸、または、ポリα（２→８）Ｎ−アセチルノ イラミン酸およびポリα（２−９）Ｎ−アセチルノイラミン酸の両者、または、 ポリα（２→８）、α（２→９）Ｎ−アセチルノイラミン酸に対する血清ＩｇＧ およびＩｇＭ抗体を誘導する作用を有する多糖類−タンパク質複合体の製造方法 に関するものである。この方法の第一段階は、例えば、カルボジイミド反応にお いて、アジピン酸ンヒドラント（ａｄｉｐｉｃａｃｉｄ　ｄｉｈｙｄｒａｚｉｄ ｅ）を用いる事によって、あるいはそれに代わる試薬と方法を用いて、多糖類の 誘導体を生成する。カルボジイミド反応において、アンピン酸ジヒドラジドの代 わりに、他のジヒドラジド化合物またはンアミノ化合物（例　ンアミノへキサン ）を代用できる。

タンパク質に共有結合させるため、他の多糖類の誘導体も製造する事かできた１ 、これらの製造には、異種二官能性試薬によって結合される二硫酸塩を使用する （Ｓｚｕ、Ｓ、Ｃ等　（１９８６）　夏ｎｆｅｃｔ、Ｉｍｍｕｎ、５４．　４４ ８−４５５；　５ｚＩＪ、Ｓ、Ｃ等　（１９８７）　Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、 　１６６、１５１０−１５２４）　。

多糖類誘導体を作った後、次の段階で、この誘導体をタンパク質に結合させる。

好ましくは、多糖類のアジピン酸ジヒドラジド誘導体をタンパク質に結合させる 。結合方法は、等ｊ−い濃度の誘導体と担体タンパク質を混合し２、ｐＨ６、１ から７０の範囲にｐＨを調整する。反応生成物を０．２Ｍ塩化すＩ・リウムに溶 解Ｉ２、温度を３〜８℃どする。次に、最終濃度が０．３Ｍ以下になる様に、１ −コーチルー３（３−ジメチル了ミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＡＣ）を 加える。元のｐＨ値を３時間維持する。次に、反応混合物を、３〜８℃で、０． ２Ｍ塩化すＩリウムに対し、外液を、数回交換１．で、３日間透析する。この複 数部位の結合を生成するｈ成性によって、ポリα（２−８）Ｎ−アセチルノイラ ミン酸またはポリα（２−８）、α（２−９）Ｎ−アセチル、ノイラミン酸か著 しく分断される事はなく、多糖類の立体配座安定性は維持されるものと思われる 。

本発明は、以下の限定されない実施例において更に詳細に説明されている。

例 以下のプロトコールと実験の詳細は、さらに続く例において引用されている。

１゜Ｅ、ｃｏｌｉ（大腸菌）０７：Ｋｌ：Ｈ−１Ｃ９４株、Ｅ、　ｃｏｌｉ０１ ６：ＫＩＨ：Ｈ−１０アセチル基陰性型（ＯＡｃ）で安定、Ｅ、　ｃｏｌｉ　０ ７５：Ｋｌ：Ｈ−１ＯＡｃ”、ＬＨ株、　（Ｌ３ｒ５　Ａ、１ａｎｓｏｎ、Ｇｏ ｔｅｂ。

ｒｇ、スウェーデン）、Ｅ、　ｃｏｌｉ　０１３：に９２：Ｈ４、Ｎ６７株が述 べられている（Ｒｏｂｂｉｎｓ、　Ｊ、Ｂ、等　（１９７２）　Ｉｎｆｅｃｔ、 　Ｉｍｍｕｌｌｏ。６．６５１−６６６）。グループＢのｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃ ｃｉ　（髄膜炎菌）、血清型６、Ｍ９９０株と８１１株、グループＣのｍｅｎｉ ｎｇｏｃｏｃｃｉ。

Ｃ１１株は、　Ｃａｒｌ　Ｅ、Ｆｒａｓｅｈ、ＦＤＡ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍａ ｒｙｌａｎｄによって提供された。

１１星上ｌヱヨノ１゜被嚢多糖類（ＣＰ）は、グループＢのｍｅｎｉｎｇｏｃｏ ｅｃｉ　（髄膜炎菌）、ＢｌｌおよびＭ９９０株、Ｅ、　ｃｏｌｌ（大腸菌）０ ９４株、ＬＨ，０１６：Ｋｌ：Ｈ−１Ｎ６７株から精製された（世界保健機構生 物学的規格化専門家委員会（１９７７）。

技術報告書シリーズ、６１０、ＷＨＯ、ジュネーブ、スイス）。

これらの被嚢多糖類は、１．０％未満のタンパク質と核酸、７５から８７％のＮ −アセナルノイラミン酸（Ｙａｏ、　Ｋ、　＆　Ｕｂｕｋ。

丁、（１９８７）　Ａｅｔａ　Ｍｅｄ、Ｏｋａｙａｍａ、４１．２３７−２４１ ）、　０．０１％未満のリポ多糖類（ＬＳＰ）を含み、４Ｂ−ＣＬセファロース を通過するＫｄ値は０５未満であった（世界保健機構生物学的規格化専門家委員 会（１９７７）。技術報告書シリーズ、６１０、ＷＨＯ、ジュネーブ、スイス） 。ＯＡｃ含有量は、ＬＨで１６２μＭ／Ｂ、グループＣの髄膜炎菌の被嚢多糖類 で１３９μＭ／ｍｇであった（Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｊｅｅ、　Ａ、に、等　（ １９７５）　ＪＢｉｏｌ、　Ｃｈｅｒｎ、　２５０．１９２６−１９３２；世界 保健機構生物学的規格化専門家委員会（１９７７）。技術報告書シリーズ、６１ ０、ＷＨＯ，ジュネーブ、スイス）。ポリα（２−８）Ｎ−アセチルノイラミン 酸および［９２被嚢多糖類の１３（とプロトンのＮＭＲスペクトルは、これら２ つのポリマーについて報告されティるものと同一であった（Ｂｈａｔｔａｅｈａ ｒｊｅｅ、　ＡＫ等（１９７５）　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｗ、　２５０，１ ９２６−１９３２；　Ｅｇａｎ、Ｗ等　（１９７７）　Ｂｉｏｃｈｅｍ、（ＵＳ Ａ）１６．３６８７−３６９２）。グループＣ髄膜炎菌の被嚢多糖類は、Ｐａｔ 　ＭｃＶｅｒｒｙ、　Ｃｏｎｎａｕｇｈｔ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　Ｉｎｃ 、、Ｓｗｉｆｔｗａｔｅｒ、Ｐｅｎｎ５ｉｌｖａｎｉａより、破傷風トキソイド （ＴＴ）、ロットＧＹＡおよびグループＡ髄膜炎菌の被嚢多糖類は、Ｄｏｍｉｎ ｉｑｕｅ　５ｃｈｕｌｚ、　ＰａｓｔｅｕｒＭｅｒｉｅｕｘ　Ｓｅｒｕｍｓ　ａ ｎｄ　Ｖａｃｃｉｎｅｓ、　Ｌｙｏｎ、フランスより入手した。■型グループＢ の５ｔｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ（連鎖球菌）の被嚢多糖類は、実験室で精製した（ Ｌａｇｅｒｇａｒｄ、　Ｔ、等（１９９０）　Ｉｎｆｅｃｔ、　＆　Ｉｎ＋ｍｕ ｎ、　５８．６８７−６９４）。

１免亙盲」工ＬＬ亘Ｕ旦」五船。グループＢ髄膜炎菌、８１１株（ウマ４６）、 グループＣ髄膜炎菌、Ｃ１１株（ロバ２１１）、ウサギの大腸菌に９２（Ｄｒｓ 、　ｒｄａ　ａｎｄ　Ｆｒ１ｔｓ　０ｒｓｋｏｖ、　５ｔａｔｅｎｓ　Ｓｅｒｕ ｍｉｎｓｔｉｔｕｔ、　Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、デンマーク）の死滅細胞の静脈 注射により調整された抗血清が、報告されている（Ｏｒｓｋｏｖ、　１．　＆　 ０ｒｓｋｏｖ、　Ｆ、　（１９８５）　Ｊ、　Ｈｙｇ、　Ｃａｍｂ、　９５．５ ５１−５７５；　Ａ１１ｅｎ、　Ｐ、Ｚ、等　（１９８２）　Ｊ、　Ｃ１１ｎ、 　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　１５．３２４−３２９：　Ｇｏｌｄｅ、　Ｍ、Ｐ、等 　（１９７７）　ＪＩｎｆｅｃｔ、　Ｄｉｓ、１３５．９４−１０２；　０ｒｓ ｋｏｖ、　Ｆ等（１９７９）　Ｊ。

Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、　１４９．６６９−６８５）。マウスニホルマリンｌ：　ヨ ル死滅細胞を注射し、報告されている様にその血清を得た（Ｏｒｓｋｏｖ、　１ ．　＆　０ｒｓｋｏｖ、Ｆ、　（１９８５）　Ｊ、　Ｈｙｇ、　Ｃａｍｂ。

９５、５５１−５７５；　Ｌａｇｅｒｇａｒｄ、　Ｔ等（１９９０）　Ｉｎｆｅ ｃｔ、　＆　Ｉｍｍｕｎ、　５８．６８７−６９４）。標準用抗血清は、フロイ ンドアジュバント中の５．０ＭｇのＴＴまたはＫｌ−ＴＴ、を腹腔内注射する事 によって、ＮＩＨ一般目的マウスにおいて生成された（Ｌａｇｅｒｇａｒｄ、　 Ｔ等（１９９０）　Ｉｎｆｅｃｔ、　＆　Ｉｍｍｕｎ、　５８．６８７−６９４ ）。

１遣３゜０６％アガロース中で、二重免疫拡散法を実施した。ビオチン化された 被嚢多糖類を用いて、酵素結合イムノソルベント検定法（ＥＬＩＳＡ）を実施し た（Ｓｕｔｔｏｎ、　Ａ等（１９８５）　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　Ｍｅｔｈ、 　８２．２１５−２２４）。

アルカリ性ホスファターゼで標識したヤギ抗ネズミ免疫グロブリンを用いて、ネ ズミ血清を、ポリα（２→８）Ｎ−アセチルノイラミン酸、ポリα（２−９）Ｎ −アセチルノイラミン酸、破傷風トキソイド抗体（Ｋｉｒｋｇａａｒｄ　＆　Ｐ ｅｒｒｙ　Ｉｎｃ、、　Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、メリーランド）について分 析した（Ｌａｇｅｒｇａｒｄ、　Ｔ等（１９８９）　Ｉｎｆｅｃｔ、　＆　Ｉｍ ｍｕｎ、　５８゜６８７−６９４；　５ｕｔｔｏｎ、　Ａ等（１９８５）　Ｊ、 　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　Ｍｅｔｈ８２、２１５−２２４）。ポリα（２→８）Ｎ− アセチルノイラミン酸に対するネズミのＩｇＭモノクローナル抗体（Ｗｅｎｄｅ ｌｌ　Ｚｏｌｌｉｎｇｅｒ、Ｗａｉｔｅｒ　Ｒｅｅｄ　Ａｒｍｙ　Ｉｎ５ｔｉｔ ｕｔｅ　ｏｆ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ。

Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、　Ｄ、Ｃ，）とポリα（２＝９）Ｎ−アセチルノイラミ ン酸に対するネスミのＩｇＭおよびＩｇＧモノクローナル抗体（Ｋａｔｈｒｙｎ 　５ｔｅｉｎ、　ＦＤＡ、　Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、メリーラント）を標準として 使用した□Ｊａｎｄｒｅｌｌ、　Ｒ，Ｅ、　＆　Ｚｏｌｌｉｎｇｅｒ。

Ｗ、Ｄ、　（１９８２）　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１２９．２１７２−２１７ ８：　Ｒｕｂｉｎｓｔｅｉｎ、　Ｌ、Ｊ、　＆　５ｔｅｉｎｎ、　Ｋ、Ｅ、　（ １９８８）　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１４１゜４３５７−４３６２）。ヒトの ポリα（２→８）Ｎ−アセチルノイラミン酸抗体は、報告されている様にして分 析した（Ｃ１ａｅｓｓｏｎ、　Ｂ、Ｏ等（１９８８）　Ｊ、　Ｐｅｄｉａｔｒ、 　１１２．６９５−７０２）。ヒトのＩｇＭモノクローナル抗体（Ｅｌｖｉｎ　 Ｋａｂａｔ、　ＣｏｌｕｍｂｉａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ） 　（Ｋａｂａｔ、Ｅ、Ａ等（１９８６）　Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、　１６４． ６４２−６５４：　Ｋａｂａｔ、　Ｅ、　Ａ等（１９８８）　ＪＥｘｐ、　Ｍｅ ｄ、　１６８．６６９−７１１）と力価を厳密に測定されたヒト血清（ＧＨ）を 、ヒトポリα（２→８）Ｎ−アセチルノイラミン酸抗体の標準として使用した。

データは、ＩｇＭについてはμｇ／ｍｌで、ＩｇＧについては標準に対するノく 一セントで表した。

ＩｇＧのポリα（２−８）Ｎ−アセチルノイラミン酸およびα（２−９）Ｎアセ チルノイラミン酸への結合に対する温度の影響を、細菌または、１０Ｍｇの複合 体を３回注射されたマウスの血清を用いて分析した。データは、２２℃に対する ３７°Ｃにおける結合のパーセントで表されている。

聚皇港の合成。ｐＨ６，０未満での処理、または、中性のｐＨでも０．３Ｍ以上 の濃度の１−エチル　１−３（３−ジメチルアミノプロピル）カルボンイミド（ ＥＤＡＣ）による処理は、ポリα（２−８）Ｎ−アセチルノイラミン酸の免疫原 性を低下させる事が確認されている（Ｌｉｆｅｌｙ、　Ｍ、Ｒ，、Ｇ１１ｂｅｒ ｔ、ＡＳ、　＆　Ｍｏｒｅｎｏ、　Ｃ，（１９８１）　Ｃａｒｂ、　Ｒｅｓ、　 ９４．１９３−２０１）。

そこで、０．５Ｍのアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）と０．１ＭＥＤＡＣ，ｐ Ｈ６，１〜７０を用いて、室温で３〜４時間かけて、被嚢多糖類（０２Ｍの塩化 ナトリウム中に５．０　ｍｇ／ｍｌ）の誘導体を調製した。０．２５Ｎ塩酸を用 いてｐＨスタットにおいて、ｐＨを維持した。反応混合物は、３〜８℃で０．２ Ｍ塩化ナトリウムに対して２日間、外液を３回交換して透析し、この溶媒中で４ ８−ＣＬセファロースを通過させた。被嚢多糖類を含むフラクションをプールし 、発熱物質を含まない滅菌水に対して透析を行い、凍結乾燥した。アジピン酸ジ ヒドラジド（ＡＨ）の含有量は、ＴＮＢＳ反応によって分析した（ＩｎＩＩｌａ ｎ、　Ｊ、に、　＆　Ｈ，Ｍ、　Ｄｉｎｔｚｉｓ、　（１９６９）　Ｂｉｏｃｈ ｅｍ、　（ＵＳＡ）　８．４０７４−４０８０；　５ｃｈｎｅｅｒｓｏｎ、　Ｒ ，等　（１９８０）　Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、　１５２．３６１−３７６）。

０．２Ｍ塩化ナトリウム中の７．５から２０　ｍｇ／ｍｌの等しい濃度のアジピ ン酸ジヒドラジド−被嚢多糖類および破傷風トキソイドを、０．ＩＮ塩酸を用い てｐＨ６、１から７０に調整した。次に、０．１Ｍ　ＥＤＡＣを加え、このｐＨ を３〜８°Ｃで３時間維持した。３〜８℃でＬ２Ｍ塩化ナトリウムに対して、二 の反応混合物を透析してから、同じ溶媒中で４Ｂ−ＣＬセファロースを通過させ た。ボイドボリュームフラクションをプールし、Ｎ−アセチルノイラミン酸とタ ンパク質を分析し、３〜８℃で００１％チメロサール中に保存した。

マウス１喉慰虎支見且、２０４〜５週令の一般目的用マウスに、０．１１！１１ の生理的食塩水に溶解した２、５μｇのＮ−アセチルノイラミン酸を、被嚢多糖 類単独あるいは複合体として、２週問おきに３回皮下注射した（Ｓｃｈｎｅｅｒ ｓｏｎ、　Ｒ等　（１９８０）　Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、　１５２．３６１− ３７６）。それぞれの注射を行った７日後に各群１０匹のマウスを瀉血した。生 理的食塩水（対照）を注射されたマウスで、被嚢多糖類（ＣＰ）または破傷風ト キソイド（ＴＴ）に対する抗体を有したものは全くなかった（データは示されて いない）。

■。酵素結合イムノソルベント検定法を用いて、ＩｇＧポリα（２−８）Ｎ−ア セチルノイラミン酸およびポリα（２−９）Ｎ−アセチルノイラミン酸抗体の特 異性を決定した。曲線の上部直線部分に吸光度を示す血清希釈液（１０から１４ ）を、１００μｇのポリα（２→８）Ｎ−アセチルノイラミン酸、またはポリα （２→９）Ｎ−アセチルノイラミン酸、またはに９２被嚢多糖類と混合させ２２ ℃で２時間、３〜８°Ｃで１晩インキユベートした。対照は、グループＡ髄膜炎 菌と■型グループＢ連鎖球菌の被嚢多糖類である（繰り返される単位１つ当たり α（２→８）−結合Ｎ−アセチルノイラミン酸残基を含む）。被嚢多糖類による 吸着は、吸着されない血清に対する吸光度のパーセントとして計算Ｐａｒｋｅ　 Ｊｒ、、　Ｃｈａｒｌｏｔｔｅ　Ｍｅｍｏｒｉａｌ　Ｈｏ５ｐｉｔａｌ　ａｎｄ 　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｅｎｔｅｒ、Ｎｏｒｔｈ　Ｃａ１ｏｒｉｎａ、ａｎｄ　Ｅ ｙａｌ　５ｃｈｉｆｆ　ａｎｄＪｕｓｔｉｎ　Ｐａｓｓｗｅｌｌ、５ｈｅｂａ　 Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｅｎｔｅｒ、イスラエルから寄付された。

１止主五方１゜データ分析は、統計分析システム（Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ　Ａ ｎａｌｙｓｉｓ　Ｓｙｓｔｅｍ：　５ＡＳ）を用いて行った。

濃度の対数が、全ての統計学的計算に使用された。酵素結合イムノソルベント検 定法の鋭敏度限界以下の抗体濃度は、その値の１７２とした。相乗平均の比較は 、両側を検定と対のｔ検定によって行われた。

創 複合　の特徴・１才 代表的な複合体のデータを表１に示す。アジピン酸ジヒドラジド（ＡＨ）による 被嚢多糖類（ＣＰ）の誘導体生成率は、Ｋｌ−ＴＴ、の０．８％からに９２−Ｔ Ｔ２の１０２％の範囲であった。後者を除き、全てのアジピン酸ジヒドラジド誘 導体は、二重免疫拡散法により元の被嚢多糖類と同一性反応を示した。元の被嚢 多糖類は、このに９２−ＡＨ誘導体の上のスパーを形成した（データは示されて いない）。

タンパク質／Ｎ−アセチルノイラミン酸比は、アジピン酸ジヒドラジドによる被 嚢多糖類の誘導体生成率に関係していた。Ｋｌ−ＴＴ、は、タンパク質／Ｎ−ア セチルノイラミン酸比か最も高＜　（１２，８）、０８％のアジピン酸ジヒドラ ジドを持つ被嚢多糖類を含んでいた。Ｋ９２−ＴＴ２は、比が最も低く　（１， ４）、１０．２％のアジピン酸ジヒドラジドを有する被嚢多糖類を含んでいた。

複合体の最高収率は、複合体を生成するための反応混合物か、７５から１０　ｍ ｇ／ｎ＋１の濃度のＴＴとＡＨ−ＣＰを使用した場合に得られｔ：。

ＣＬ−４Ｂセフアロースを通過するボイドボリュームで溶出された複合体の全標 本から、ＡＨ−ＣＰとＴＴが複数の部位で結合している事が示される（図２）。

図３は、被嚢多糖類と担体タンパク質（ＴＴ）の共有結合の血清学的所見を示し ている。各成分に対する抗血清は、代表的複合体、Ｋｌ−ＴＴ、と同一の沈降線 を形成した。これらの抗血清か、被嚢多糖類と破傷風トキソイドの混合物と反応 すると、沈降線は一致しなかった（データは示されていない）。

表１　被嚢多糖類−タンパク質複合体の特徴付は各１トイチ４１（夕′ンｌぐり １蔭　タンｌぐりｖｃｐ比　収率　づ＆７１に１・ＴＴ、”５３１４１．４０． ８１２．５５．０２０（１・ＴＴ、豐會４６５９６．＋２．６４４９．６Ｉ５（ １，、、、−ＴＴ”６３０２６２Ｌ９２．４２１Ｊ１０ＸＭｔＴＴ、　４６３　 ９４．５　Ｌａ　＆、９　５．０　１５Ｍｅ＋ｎ−Ｔ丁、！＋４ＳＬＩ２Ｊ６． ２４．６１５［９２−ＴＴ、　２９４　９８．８　３．４　３．０　Ｔｏ、５　 １５（９２・ＴＴ、７０５５１７１０．２Ｌ４５Ｌ７７．５１１ａｎｃ・ＴＴ　 ２３４　１２＋　８．５　１．９　２２．ｓ１０＊　複合過程の反応物の濃度 ＊＊　これらの複合体のに１被嚢多糖類は、０Ａｃ−であった。

＊＊＊　Ｅ、　ｅｏｌｉ、ＬＨ株のＯＡｃ＋変株のに１被嚢多糖類ポリα恨＝− 針ロ←アセチノリムエ乏±２１１体の誘導（１４種類の被嚢多糖類は、ＩｇＭま たはＩｇＧ抗体の上昇を誘導しなかった。４種類のα（２−８）Ｎ〜ルアセチル ノイラミン複合体は全て（Ｋｌ−ＴＴ、、Ｋｌ−ＴＴ、、ＭｅｎＢ−ＴＴ、、Ｍ ｅｎＢ−ＴＴ２）ＩｇＭ抗体を統計的に有意に上昇させる。これらの複合体の２ 回目の注射後に、ＩｇＭブースタ一応答が誘導された；　Ｋｌ−ＴＴ、とＭｅｎ Ｂ−ＴＴ、により誘導される量は、他の２種類のポリα（２→８）Ｎ−アセチル ノイラミン酸複合体により誘導される量よりも高かった（ｐ＜０．００１）。Ｋ ｌ−ＴＴ２とＭｅｎＢ−ＴＴ　２だけが、３回目の注射後、ブースタ一応答を誘 導した。

４種類のポリα（２→８）Ｎ−アセチルノイラミン酸複合体は、２回目と３回目 の注射後に、統計学的に有意なＩｇＧ抗体の上昇を誘導した。ＭｅｎＢ−ＴＴ２ の３回目の注射によって誘導されたＩｇＧ量（４，２９０／［１１１）は、別の ３種類の複合体によって誘導されたＩｇＧ量よりも高かったが、有意ではなかっ た（ＮＳ）。しかし、この群の１匹のマウスは２４０Ｕ／ｍ１の値を示し、この 動物を除外した相乗平均は２．７４０／ｍｌであった。

Ｅ、　ｃｏｌｉのＬＨ株から調製されたＫｌｏＡＣ，−ＴＴによって、この被嚢 多糖類のＯＡｅ”変株に対するＩｇＭおよびＩｇＧ抗体量は高かったか、ポリα （２→８）Ｎ−アセチルノイラミン酸に対する抗体量は低かった。

２種類のに９２−ＴＴは、ＩｇＭおよびＩｇＧポリα（２→８）Ｎ−アセチルノ イラミン酸抗体の両者を誘導した；　ＩｇＧ量は、Ｋｌ−ＴＴ、　（Ｐ＝　０． ０１）、Ｋｌ−ＴＴ２（Ｐ＝　０．０００１）、ＭｅｎＢ−ＴＴ、　（Ｐ＝０． ０００２）、ＭｅｎＢ−ＴＴ、　（Ｐ＜０．０５）によって誘導されたＩｇＧ　 量よりも高かった。Ｋ９２被嚢多糖類の誘導の程度か高度な誘導体を含むに９２ −ＴＴ、も、Ｋｌ−ＴＴおよびＭｅｎＢ−ＴＴ複合体よりもＩｇＧ抗体をより多 く誘導した。

ＭｅｎＣ−ＴＴは、とのマウスにおいても、ポリａ（２−８）Ｎ−アセデルノイ ラミン酸抗体を誘導しなかった。

死滅細菌、または、複合体を３回注射されたマウスの血清を用いる吸着実験によ って、抗体の特異性が示されたくデータは示されていない）。ポリα（２→８） Ｎ−アセチルノイラミン酸およびポリα（２→９）Ｎ−アセチルノイラミン酸は 、抗血清から同種のＩｇＧ抗体を吸着した（５０−８９％）。Ｋ９２被嚢多糖類 は、ポリα（２−８）およびポリα（２−９）Ｎ−アセチルノイラミン酸抗体の 両者を吸着したく６９〜８９％）。２種類の対照（グループＡ髄膜炎菌およびグ ループＢＩ型連鎖球菌）が吸着したポリα（２−８）またはポリα（２→９）Ｎ ・−アセチルノイラミン酸抗体は、１０％未満であった。

表２　グループＢのＮｅ１ｓｓｅｒｉａ　ｅｎｉｎ　１ｔｉｄｉｓ（髄膜炎菌） セチルノイラミン酸）に対する血清１ｇＧおよびＩ　ｇ　Ｍ抗体・′の相　′飴 に１・ＴＴ、　０．３２　３Ｊ５　Ｌ６３”　０．１０　０．４９　２．４４’ に１−ＴＴ、　０．１２　０ｊ９　０．６２’　０．０６　Ｇ、１３　Ｌ９５” ｒｌ、、、、・ＴＴ’　０．１７　０．１６　０．Ｑａ　Ｏ，０７０，２００， ７２又、７　２７．２　７．１ａ　Ｏ，＋６　１２．１　５６．１Ｍｅｎａ　Ｏ ，０５０，０５０，０５’　０．０５　０．０５　０．０５゜＋４ｅｒＪ−ＴＴ 、０．６７　１．５９　１．５０”　Ｏ，Ｑａ　Ｏ，４５１，８１’Ｎｅｎ１− ７丁、　０−ＱＩＳ　０．２６　０．７２’　０．０５　０．１１　４．２９” Ｋ９２　０．０５　０．０５　０．０５’　０．０５　０．０５　０．０５’に ９２−７丁、　０．０９　０．４９　＋、２０ｈ　Ｏ，ＱＩＳ　０．２５　＋７ ．２″１′Ｐ２−工Ｔ、０．２１１　０．７８　０．４ｆＯ，０５ｏ、ａｘ　４ ．５２’ＭｅｎＣＯ，０５０，０５０，０５０，０５０，０５０，０５ｋｔ＜・ ＴＴ　Ｏ，０５０，Ｄ５　０．０５　０．０５　０．ｏ５　０．０５ｂ対ａ：　 Ｐ＜０．００１、ｈ対ｉ：　Ｐ＜０．００７、ｈ対ｇ：　Ｐ（００５、ｈ対ｆ。

ｅ：　Ｐ＜０．０５、　ｈ対ｄ：　Ｐ＝０．０１＊複合体に１ｏＡｅやづＴに関 する２回目の値は、ＯＡｃ″に１被嚢多糖類を抗原として使用して決定された。

例３ 同種被嚢多糖類か誘導したポリα（２−９）Ｎ−アセチルノイラミン酸１ｇＭ抗 体の遣は低値であった。同種被嚢多糖類も異種被嚢多糖類も、ＩｇＧ抗体を誘導 しなかった。

全ての複合体か、１回目の注射後にＩｇＭ抗体を誘導しまた。ＭｅｎＣ−ＴＴお よびに９２−ＴＴ複合体の２回目および３回目の注射後に（べ　Ｊこれらの値は 減少し、Ｋｌ−ＴＴ複合体は、最初の２回の注射後に限り、これらの値は増加し た。

ＭｅｎＣ−４７だけが、１回目の注射後に、ポリα（２＝９）Ｎ−アセチルノイ ラミン酸ＩｇＧ抗体を誘導した。全ての複合体は、２回目と３回目の注射後に、 ＩｇＧ抗体の増加を誘導した。　最も高い値は、　ＭｅｎＣ−ＴＴ　＞　Ｋ９２ −ＴＴ　＞　Ｋｌ−ＴＴによって誘導された。ポリα（２−８）Ｎ−アセチルノ イラミン酸抗体の観察結果ど同様に、Ｋ９２−ＴＴ、よりもに９２−ＴＴ。

の方が、ＩｇＧ抗体をより多く誘導したが、有意差はながった。

ＴＴ抗体は、全ての複合体によって誘導され、各回の、−１射後にブースタ一応 答か認められた。これは、このタンパク質を担体とし５て使用する他の複合体に ついて報告されたブースタ一応答と類似している（データは示されでいない）（ Ｒｏｂｂｉｎｓ、　Ｊ、　Ｂ、　＆　５ｃｂｎｅｅｒｓｏｎ、　Ｒ，（１９９０ ）　Ｊ、　Ｉｎｆｅｃｔ、　Ｄｉｓ、　１６１．８２１−８３２：　Ｌａｇｅｒ ｇａｒｄ、　Ｔ等（１９９０）　Ｉｎｆｅｃｔ、　＆　Ｉｍｍｕｎｏ、　５８． ６８７−６９４）。

表３　グループＣのＮｅ１ｓｓｅｒｊａ　ｍｅｎｉｎ　１ｔｉｄｉｓ（髄膜炎菌 ）の被嚢多糖類（ポリα（２−９）Ｎ−アセチルノイラミン酸）に対する血清Ｉ ｇＧおよびＩｇＭ抗体（μｇ／ｍ１）Ｅｌ　Ｏ，０５０，０５０，０５”　０． ０５　０．０５　０．０５’［１−ＴＴ、　０．１１　０．３２　０ｊ＆”　Ｑ 、０５　０．＋４　ｉ、２４’に１−ＴＴ、　０．２３　１．０９　０．４０” 　０．０５　０．９７　Ｉ２’％ｗＣＯ，ｏ５　０．ＯＪ　Ｏ，＋＋’　０．０ ７　０．１０　０．０５’−イ４Ｔ　２．２６　０．１１９　０．５３’　Ｌａ ７　１ａ、４　１０７．５”Ｋ９２　０．０５　０．０５　０．０５’　０．０ ５　０．０５　０．０５ｃＫ９２４Ｔ、　３．２３　２．８５　０．６８’　０ ．０５　０．７０　２Ｌ４’ｍ−ｙｔ、ｔ、ｓｙＯ，７４０，１５”ｌ）、０４ ＋−ｙｔ１５．ｑ″Ｌ）対ａ：　Ｐ＜＝　０．０００１、ｄ対ｅ：　Ｐ＝　０． ０００４、Ｃ対ａ：　Ｐ＜０．００１、ｆ、ｇ、ｈ対ｅ：　Ｐ＝　０．０００１ 、ｇ対ｆ、ｈ：　Ｐ　＜　０．００１旧 １印：　（＊　ＯＦ　！３−先へ血１叛が１−リに９２−ＴＴ、Ｋｌ−ＴＴ、Ｍ ｅｎＣ−ＴＴ複合体、　および、　Ｅ、ｃｏｌｉＫ９２の細胞、Ｍ、　ｎｏｎｌ ｉｑｕｅｆａｅｉｅｎｓの細胞により誘導されたＩｇＧ抗体の２種類の被嚢多糖 類への結合性を、２２°Ｃと３７℃において分析した。Ｋｌ−ＴＴ２、Ｍ、　ｎ ｏｎ］、１ｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ。

に９２−ＴＴ、によって誘導されたポリα（２→８）Ｎ−アセチルノイラミン酸 抗体の３７℃における結合性の低下率は類似していた（〜４０％）。これに反し て、Ｋｌ−ＴＴ２、Ｋ９２−ＴＴ、、ＭｅｎＣ−ＴＴ、　Ｅ、　ｃｏｌｉ　Ｋ９ ２の細胞によって誘導されたポリα（２−９）Ｎ−アセチルノイラミン酸抗体の 結合性の低下率は僅か１０％または１０％以下であった。これらのデータは、他 の結果と一致している（Ｍａｎｄｒｅｌｌ、　Ｒ，Ｅ、　＆　Ｚｏｌｌｉｎｇｅ ｒ、　Ｗ、　Ｄ、　（１９８２）　Ｊ、　Ｉｍ＋ｎｕｎｏ１．１２９．２１７２ −２１７８）。

表４　ネズミのポリα（２→８）およびポリα（２→９）Ｎ−アセチルノイラミ ン酸ＩｇＧ抗体の温度依存の結合性ＥＬＩＳＡに　用されたＣＰ ポリα（２→８）　ポリα（２→９） アセチル　アセチル イラミン　イラミン Ｋｌ−ＴＴ２　４１．８％　９０．９％Ｍ、　ｎｏｎｌｉ　ｕｅｆａｃｉｅｎｓ 　３４．６　Ｎ、Ｄ細胞 に９２−ＴＴ、　４９．１％　９３．８％Ｅ、　ｃｏｌｉ　Ｋ９２細胞　Ｎ、Ｄ 、　９１．５％＊ＮＤ　検出不能 わ と　“の且合せの血′における ポリα（２→８）Ｎ−アセチルノイラミン酸　体（表５）妊娠満期の大部分の女 性において、ＩｇＭおよびＩｇＧポリα（２→８）Ｎ−アセチルノイラミン酸抗 体が検出された。

イスラエルの女性のＩｇＧおよびＩｇＭ量は、ノースカロライナのＣｈａｒｌｏ ｔｔｅの女性よりも高値であった（Ｐ＋０．０００Ｌ）。

予想通り、調帯の［ｇＭポリα（２−８）Ｎ−アセチルノイラミン酸抗体は、微 量または検出不能量であった。慶帯血清のＩｇＧ抗体のＧＭグループの量は、両 地域の母体よりも高かった。慶帯のポリα（２−８）Ｎ−アセチルノイラミン酸 ＩｇＧ抗体の大部分は、対応する母体血清のポリα（２−８）Ｎ−アセチルノイ ラミン酸ＩｇＧ抗体よりも高かった（６９／８１）。

表５．ヒトの母親と新生児（ＩＦ帯）の組合せの血清におけるポリα（２→８） Ｎ−アセチルノイラミン酸に対するＩｇＧおよびＩｇＭ抗体（相乗平均） 母二体−１母体１ｇＧ 源　ｎ　ＩＮ　ＩＧ　ＩＭ　ｒＧ　−＠−ｒＧＩｇＭ抗体量は、　μｇ抗体／ｍ ｌとして、　ＩｇＧ抗体量は、酵素結合イムノソルベント検定法の単位として示 される厳密に力価を測定された成人の血清（ＧＨ）のパーセントとして表されて いる。

剋」 愛」１免Ｉ 全身感染症の予防を目的とする受動免疫法として、あるいはヒトを含む動物にお けるポリα（２→８）Ｎ−アセチルノイラミン酸またはポリα（２−９）Ｎ−ア セチルノイラミン酸表面抗原を含む細菌による全身感染症の補助的治療法として 、ヒトまたは動物由来のモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体を、上述 の複合体ワクチンによって製造する事ができる（例　髄膜炎を含むグループＢ髄 膜炎菌による全身感染症に接触する場合の受動免疫法）。治療と予防を目的とし た受動免疫法は、今世紀の初めから行われてきた。この場合も、胎児、新生児、 先天性または後天性免疫不全の患者（免疫不全の患者は、Ｋ９２および／または ポリα（２→８）Ｎ−アセチルノイラミン酸複合体ワクチンを注射されても、防 御可能な量の抗体を産生できない事がある）を含む一般集団よりもリスクの高い 宿主におけるｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｕｓ　（肺炎球菌）、　Ｈｇｇｇｑ口１ｕｓ 　１ｎｆｌｕｅｎｚａ（インフルエンザ菌）ｂ型、グループＢの５ｔｒｅｐｔｏ ｃｏｃｃｕｓ　（連鎖球菌）、Ｅ、　ｃｏｌｉ（大腸菌）等の全身感染症を引き 起こす他の被嚢細菌性病原体と共に、髄膜炎を含むグループＢ髄膜炎菌による全 身感染症について、やはり受動免疫法が検討されてきた。

受動免疫法の技術は、以下の参考文献に報告されている。　Ｆｌｅｘｎｅｒ（１ ９１３）　Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、１７：５５３−５７０：　Ｂｒａｈａｈｍ　（ １９３８）　Ｐｒｏｃ、　Ｓａｃ、　Ｅｘｐ、　Ｂｉｏｌ、　Ｍｅｄ、　３０： ３４８：　Ｒａｆｆ等　（１９８８）　Ｊ、Ｉｎｆｅｃｔ、Ｄｉｓ、１５７：１ １８−１２６；　Ｋｉｍ等（１９８５）　Ｉｎｆｅｃｔ、Ｉｍｍｕｎｏ、５０ニ ア３４−７３７．Ｌａｔｓｏｎ等　（１９８８）　Ｐｏｄｉａｔｒ、Ｉｎｆｅｃ ｔ、Ｄｉｓ、７：７４７−７５２例ｊ のその　の１用法 単独のポリα（２−８）Ｎ−アセチルノイラミン酸、ポリα（２→９）Ｎ−アセ チルノイラミン酸、ポリα（２→８）、α（２→９）Ｎ−アセチルノイラミン酸 、またはこれらの多糖類を含む複合体分子または細菌の成分に関して１、診断、 あるいは発症のプロセス、病因、予防、免疫病理、免疫応答の研究のために、モ ノクローナル抗体またはポリクローナル抗体が調製される。発症研究に使用する ための、ポリα（２→８）Ｎ−アセチルノイラミン酸抗体、特にＩｇＧクラスの 使用法が以下の報告に示されているＨｕｓｍａｎｎ等　（１９９０）　Ｊ、　Ｈ ｉｓｔｏｃｈｅｍ、　＆　Ｃｙｔｏｌ、３８：　２０９−２１５；　Ｒｏｂｂｉ ｎｓ　＆　５ｃｈｎｅｅｒｓｏｎ（１９９０）　Ｊ、　Ｉｎｆｅｃｔ、　Ｄｉｓ １６１、８２１−８３２）。上述の複合体によって誘導された抗体から、誘導体 を作製したり、あるいは他の物質と相互作用させて、疾病の診断用キット、ある いはポリα（２−８）Ｎ−アセチルノイラミン酸またはポリα（２→９）Ｎ−ア セチルノイラミン酸を含む細菌の同定用キットを作製する。ポリクローナルまた はモノクローナル抗体を含むキットは、髄膜炎を含む全身感染症の診断、あるい はＮｅ１ｓｓｅｒｉａ　ｍｅｎｉｎ　１ｔｉｄｉｓ（髄膜炎菌）と他の被嚢細菌 性病原体の無症候性保菌状態の診断を目的として世界的に使用されている。この 使用法は以下に概説されている　Ｌｉｍ等　（１９９０）　Ｊ、　Ｃ１１ｎｃ、 　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　２８：　６７０−６７５：　Ｃｕｅｖａｓ等　（１９ ８９）　Ａｎｎ、　Ｔｒｏｐ、　Ｍｅｄ、Ｐａｒａｓｉｔｏ１８３：　３７５− ３７９．０ｒｓｋｏｖ等　（１９７９）Ｊ、Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、１４９：　６６ 引 １１ス１ｐ」１ＬＬＪＬ−１Δ１遺ｌ晟ニブに址ｊ〜ｍＡ資Ｎｅ１ｓｓｅｒｉａ 　ｍｅｎｉｎ　ｉｔユ１ｄｉｓ（髄膜炎菌）の主な３種類の血清グループに対す る自動免疫には、上述の複合体ワクチンとともにグループＡの複合体ワクチンが 含まれる。

グループＡ、　ＢＳＣのｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃａｌ　ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓに 対する血清抗体を誘導でき、それによって髄膜炎菌による髄膜炎を含む全身感染 症の大部分を予防できる三価の多糖類−タンパク質複合体ワクチンは、上述の複 合体とグループＡ髄膜炎菌複合体を用いるこの方法によって製造する事ができる 。グループＡ髄膜炎菌多糖類−タンパク質複合体は、発表されている方法に従っ て合成されている（Ｃｈｕ等　（１９８３）　Ｉｎｆｅｃｔ、　Ｉｍｍｕｎ、　 ４０：２４５−２５６）。動物およびヒトにおいて、１種類以上の多糖類−タン パク質複合体を同時に注射すると、各成分に対する防御可能量の抗体を誘導し、 各複合体を別々に注射した時と等しい抗体量か誘導される事が明らかにされてい る（Ｓｃｈｎｅｅｒｓｏｎ等　（１９８６）　Ｉｎｆｅｃｔ、Ｉｍｍｕｎ、５２ ：５０１−５１８）。

上記の全ての刊行物は、引用することにより本明細書の一部とする。

上述の本発明は、明確さと理解を目的として、詳細に述べられているが、当業者 は、本報告を読めば、本発明と添付の請求の範囲を逸脱せずに、形式および詳細 に種々の変更を加える事ができる事を理解するであろう。

補正書の翻訳文提出書 （特許法第１８４条の８）　Ｉζ 平成５年６月３０日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．多糖類と担体タンパク質とからなる多糖類−タンパク質複合体であって、該 複合体が、哺乳動物または鳥にあって、ポリα（２→８）Ｎ−アセチルノイラミ ン酸、またはポリα（２→８）Ｎ−アセチルノイラミン酸とポリα（２→９）Ｎ −アセチルノイラミン酸の両者、またはポリα（２→８），α（２→９）Ｎ−ア セチルノイラミン酸に対する血清ＩｇＧおよびＩｇＭ抗体を誘導する、多糖類と 担体タンパク質とからなる多糖類−タンパク質複合体。 ２．上記担体タンパク質が上記多糖類に共有結合している請求項１に記載の多糖 類−タンパク質複合体。 ３．上記担体タンパク質が上記多糖類にリンカー物質によって共有結合している 請求項１に記載の多糖類−タンパク質複合体。 ４．上記リンカー物質がアジピン酸ジヒドラジドである請求項３に記載の多糖類 −タンパク質複合体。 ５．上記多糖類がポリα（２→８）Ｎ−アセチルノイラミン酸またはその誘導体 から構成されている請求項１に記載の多糖類−タンパク質複合体。 ６．上記多糖類がα（２→８），α（２→９）Ｎ−アセチルノイラミン酸または その誘導体のヘテロポリマーから構成されている請求項１に記載の多糖類−タン パク質複合体。 ７．上記担体タンパク質が免疫原性を有し、ブースター応答を誘導し、上記免疫 原性と上記ブースター応答を上記複合体に付与する請求項１に記載の多糖類−タ ンパク質複合体。 ８．上記担体タンパク質が破傷風トキソイドである請求項７に記載の多糖類−タ ンパク質複合体。 ９、上記哺乳動物または鳥が、ヒト、ウシ、ブタ、コヒツジ、ニワトリの群から 選択される請求項１に記載の多糖類−タンパク質複合体。 １０．グループＢまたはＣのＮｅｉｓｓｅｒｉａｍｅｎｉｎｇｉｔｄｉｓ、Ｅｓ ｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＫ１、Ｍｏｒａｘｅｌｌａｎｏｎｌｉｑｕｅｆａｃ ｉｅｎｓ、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ、またはその他のポ リα（２→８）Ｎ−アセチルノイラミン酸、ポリα（２→９）Ｎ−アセチルノイ ラミン酸、またはポリα（２→８）、α（２→９）Ｎ−アセチルノイラミン酸抗 原を含む微生物を原因とする動物における全身感染症の予防に有効な量の請求項 １に記載の多糖類−タンパク質複合体、および、薬理的に投与可能な希釈剤、担 体または賦形剤から構成される医薬組成物。 １１．上記担体タンパク質が上記多糖類に共有結合している請求項１０に記載の 医薬組成物。 １２．上記担体タンパク質が上記多糖類にリンカー物質により共有結合している 請求項１０に記載の医薬組成物。 １３．上記リンカー物質がアジピン酸ジヒドラジドである請求項１０に記載の医 薬組成物。 １４．上記多糖類がポリα（２→８）Ｎ−アセチルノイラミン酸またはその誘導 体から構成されている請求項１０に記載の医薬組成物。 １５．上記多糖類がα（２→８），α（２→９）Ｎ−アセチルノイラミン酸また はその誘導体のヘテロポリマーから構成されている請求項１０に記載の医薬組成 物。 １６．上記担体タンパク質が免疫原性を有し、ブースター応答を誘導し、上記免 疫原性と上記ブースター応答を上記複合体に付与する請求項１０に記載の医薬組 成物。 １７．上記担体タンパク質が破傷風トキソイドである請求項１６に記載の医薬組 成物。 １８．上記動物が、ヒト、ウシ、ブタ、コヒツジ、ニワトリの群から選択される 請求項１０に記載の医薬組成物。 １９．グループＢまたはＣのＮｅｉｓｓｅｒｉａ　ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、 ＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＫ１、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ　ｎｏｎｌｉｑｕｅ ｆａｃｉｅｎｓ、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ　ｈａｅｍｏｌｔｉｃａ、または動物 においてポリα（２→８）Ｎ−アセチルノイラミン酸、ポリα（２→９）Ｎ−ア セチルノイラミン酸、またはポリα（２→８），α（２→９）Ｎ−アセチルノイ ラミン酸表面抗原を含むその他の微生物による全身感染症の予防のための、上記 多糖類−タンパク質複合体が、上記動物に上記感染症が予防できる条件で動物に 投与される請求項１に記載の多糖類−タンパク質複合体の使用。 ２０．上記タンパク質が上記多糖類に共有結合している請求項１９に記載の使用 。 ２１．上記タンパク質が上記多糖類にリンカー物質によって共有結合している請 求項２０に記載の使用。 ２２．上記リンカー物質がアジピン酸ジヒドラジドである請求項２１に記載の使 用。 ２３．上記多糖類が、ポリα（２→８）Ｎ−アセチルノイラミン酸またはその誘 導体から構成される請求項１９に記載の使用。 ２４．上記多糖類が、ポリα（２→８），α（２→９）Ｎ−アセチルノイラミン 酸またはその誘導体から構成される請求項１９に記載の使用。 ２５．上記タンパク質が、免疫原性を有し、ブースター応答を誘導し、上記免疫 原性と上記ブースター応答を上記複合体に付与する請求項１９に記載の使用。 ２６．上記担体タンパク質が破傷風トキソイドである請求項２５に記載の使用。 ２７．上記動物が、ヒト、ウシ、ブタ、コヒツジ、ニワトリの群から選択される 請求項１９に記載の使用。 ２８．請求項１に記載の上記多糖類−タンパク質複合体とグループＡの髄膜炎菌 性多糖類−タンパク質複合体が、上記感染症を予防できる条件で動物に投与され る、グループＡ、Ｂ、ＣのＮｅｉｓｓｅｒｉａ　ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓによ る全身感染症の予防のための、請求項１に記載の多糖類−タンパク質複合体およ びグループＡの髄膜炎菌性多糖類−タンパク質複合体の使用。 ２９．上記タンパク質が上記多糖類に共有結合している請求項２８に記載の使用 。 ３０．上記タンパク質が、上記多糖類にリンカー物質によって共有結合している 請求項２９に記載の使用。 ３１．上記リンカー物質が、アジピン酸ジヒドラジドである請求項３０に記載の 使用。 ３２．上記多糖類が、ポリα（２→８）Ｎ−アセチルノイラミン酸またはその誘 導体から構成される請求項２８に記載の使用。 ３３．上記多糖類が、ポリα（２→８），α（２→９）Ｎ−アセチルノイラミン 酸またはその誘導体のヘテロポリマーから構成される請求項２８に記載の使用。 ３４．上記タンパク質が、免疫原性を有し、ブースター応答を誘導し、上記免疫 原性と上記ブースター応答を上記複合体に付与する請求項２８に記載の使用。 ３５．上記タンパク質が、破傷風トキソイドである請求項３４に記載の使用。 ３６．上記動物が、ヒト、ウシ、ブタ、コヒツジ、ニワトリの群から選択される 請求項２８に記載の使用。 ３７．哺乳動物または鳥において、ポリα（２→８）Ｎ−アセチルノイラミン酸 、または、ポリα（２→８Ｎ−アセチルノイラミン酸とポリα（２→９）Ｎ−ア セチルノイラミン酸の両者、または、ポリα（２→８），α（２→９）Ｎ−アセ チルノイラミン酸に対する血清ＩｇＧおよびＩｇＭ抗体を誘導する多糖類−タン パク質複合体の製造方法であって、以下のステップからなる該製造方法。 （１）製造すべき複合体の多糖類部分の誘導体を作る。 （２）ステップ（１）の生成物を製造すべき複合体のタンパク質部分に結合させ る。 ３８．上記哺乳動物または鳥が、ヒト、ウシ、ブタ、コヒツジ、ニワトリの群か ら選択される請求項３７に記載の多糖類−タンパク質複合体の製造方法。 ３９．カルボジイミド反応においてアジピン酸ジヒドラジドが上記多糖類部分の 誘導体を作製するのに使用される請求項３７に記載の多糖類−タンパク質複合体 の製造方法。 ４０．動物においてグループＢまたはＣのＮｅｉｓｓｅｒｉａ　ｍｅｎｉｎｇｉ ｔｉｄｉｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　Ｋ１、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ　 ｎｏｎｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ　ｈａｅｍｏｌｙｔ ｉｃａまたはポリα（２→８）Ｎ−アセチルノイラミン酸、ポリα（２→９）Ｎ −アセチルノイラミン酸、ポリα（２→８），α（２→９）Ｎ−アセチルノイラ ミン酸表面抗原を含むその他の微生物に対する防御抗体を誘導する効果を発揮す る量の請求項１に記載の多糖類−タンパク質複合体、および、薬理的に投与可能 な希釈剤、担体または賦形剤からなるワクチン。 ４１．上記タンパク質が上記多糖類に共有結合している請求項４０に記載のワク チン。 ４２．上記タンパク質が上記多糖類にリンカー物質により共有結合している請求 項４０に記載のワクチン。 ４３．上記リンカー物質がアジピン酸ジヒドラジドである請求項４２に記載のワ クチン。 ４４．上記多糖類がポリα（２→８）Ｎ−アセチルノイラミン酸またはその誘導 体から構成されている請求項４０に記載のワクチン。 ４５．上記多糖類がα（２→８），α（２→９）Ｎ−アセチルノイラミン酸また はその誘導体のヘテロポリマーから構成されている請求項４０に記載のワクチン 。 ４６．上記担体タンパク質が免疫原性を有し、ブースター応答を誘導し、上記免 疫原性と上記ブースター応答を上記複合体に付与する請求項４０に記載のワクチ ン。 ４７．上記タンパク質が破傷風トキソイドである請求項４６に記載のワクチン。 ４８．上記動物が、ヒト、ウシ、ブタ、コヒツジ、ニワトリの群から選択される 請求項４０に記載のワクチン。