JPH06505386A

JPH06505386A - 蛋白質の調製

Info

Publication number: JPH06505386A
Application number: JP4504873A
Authority: JP
Inventors: ブッズ，ペテル; ニールセン，ペル　ムンク
Original assignee: Novo Nordisk AS
Current assignee: Novo Nordisk AS
Priority date: 1991-02-06
Filing date: 1992-02-06
Publication date: 1994-06-23
Also published as: DK19991D0; EP0647276A1; WO1992013964A1; US5523237A

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】蛋白質の調製技術分野本発明は、反応混合物の粘度の増加方法、本方法により得られるプラスティン物質、並びに、これらのプラスティン物質を含んで成る食品に関する。

発明の背景苦くない蛋白質調製品は、逆波水分解の実施により得ることができる。蛋白分解酵素の反応は、他の酵素反応と同様、可逆的である。ペプチド結合の酵素分解の逆は、プラスティン反応と呼ばれ、そして、プラスティン反応により合成された蛋白質様生成物は、プラスティンまたはプラスティン物質と呼ばれる［ｖｉｄｅ　ｅ、ｇ、　Ｈｏｒｏｗｉｔｚ。

ン物質は、蛋白質とは異なり、そして、高分子量のポリペプチドの混合物と考えられるであろう。事実、ライ−ランド他［Ｗｉｅｌａｎｄ、　Ｔ：Ｄｅｔｅｒｍａｎｎ、　Ｈ，＆　Ａｌｂｒｅｃｈｔ、　Ｅ、　（１９６０）　：Ａｎｎ、　、　６３３．１８５］は、高分子量のポリペプチド形成としてプラスティン反応を定義している。

各種の微生物プロテアーゼは、プラスティン合成活性をもっていることが知られている。良く知られたプロテアーゼ（それらのプラスティン合成活性のためにも良く知られている）は、ペプシン、α−キモトリプシン、トリプシン、およびパパインである［ｖｉｄｅ　ｅ、ｇ。

Ｆｕｊｉｍａｋｉ、　Ｍ、　：Ｋａｔｏ、　Ｈ，：Ａｒａｉ、　Ｓ、　＆　Ｙａｍａｓｈｉｔａ、　Ｍ、　（１９７１）　：Ｊ、　ＡｐｐｌA　Ｂａｃｔ。

今までのところ、４つの点が、プラスティン反応を効果的に進行させるために適用されると信じられている。第一に、基質の濃度は、高くなければならない。第二に、基質は、低分子量でなければならない。第三に、プラスティンの合成におけるｐＨは、蛋白質の加水分解におけるものと差異がある。プラスティンの合成におけるｐＨ範囲は、加水分解におけるｐＨ範囲よりも狭い。第四に、比較的長いインキュベーション時間で実施されなければならない。

加水分解産物の苦さの除去は別として、プラスティン反応は、他の食品加工における潜在能力、例えば、さまざまなタイプの食品を取り込むために優れた粘弾性を備えたゲル状製品の調製、基質としての加水分解産物混合物の使用により改良されたアミノ酸組成をもつ製品の調製、特定の食物に対し補助食物として使用されるであろう単一アミノ酸のとても高いレベルをもつ製品の調製、そして、重要なフレーバーまたはその他の特性をもつ可溶性ペプチドの特殊タイプの調製、の能力をもつ。

発明の概要本発明は、反応混合物の粘度増加方法であって、以下の特徴＝（ａ）グルタミン酸（Ｇｌｕ）およびアスパラギン酸（Ａｓｐ）残基に特異的なセリンプロテアーゼであり；（ｂ）酵素蛋白１グラム当たり、少なくとも２５　ＣＰＵ（本明細書中で定義する）の比活性をもち：（Ｃ）約２３．６００のみかけの分子量をもち；（ｄ）ジイソプロピルホスホフルオリデートにより阻害されるが、フェニルメタンスルホニルフルオリドによっては阻害されず：（ｅ）　６．５〜１０．０のｐＨ範囲において、その最大活性の７５％以上を示す：をもつ蛋白分解酵素を含んで成り、他のプロテアーゼ活性を実質的に有しない酵素調製物を、プラスティン反応を可能にする蛋白質基質に添加し、次に、粘度増加を引き起こす条件でのインキュベーションを行い、そして、次に、該酵素を失活させることを特徴とする方法を提供する。

第２には、発明は、以下の特徴：（ａ）グルタミン酸（Ｇｌｕ）およびアスパラギン酸（Ａｓｐ）残基に特異的なセリンプロテアーゼであり：（ｂ）酵素蛋白１　グラム当たり、少なくとも２５　ＣＰＬＩ（本明細書で定義する）の比活性をもち；（Ｃ）約２３．６００のみかけの分子量をもち：（ｄ）ジイソプロピルホスホフルオリデートにより阻害されるが、フェニルメタンスルホニルフルオリドによっては阻害されず：（ｅ）　６．５〜１０．００ＰＨ範囲において、その最大活性の７５％以上を示す：をもつ蛋白分解酵素を含んで成り、そして他のプロテアーゼ活性を実質的に有しない酵素調製物を、蛋白質物質に添加し、次に、インキュベーションを行い、そして次に、酵素を失活させることにより得られるプラスティン物質を提供する。

第３には、発明は、発明のプラスティン物質を含んで成る食品を提供する。

上記の蛋白分解酵素は、米国特許第４．２６６、０３１号に、バチルスリケニホルミス（ＢａｃｉｌｌｌＬｓ　１ｉｃｈｅｎｉｆｏｒａｉｓ）により生産されるスブチリシンＡの汚染物として、以前に、特徴づけられている。しがしながら、その明細書中には、酵素は、非セリンプロテアーゼとして間違って特徴づけられていた。本題に関してのその後の調査により、現在では、酵素は、ジイソプロピルホスホフルオロリプ−）−（ＤＦＰ）によって実際に阻害され、そして、それゆえセリンプロテアーゼであることが、明らかになっている。

さらに、上述の米国特許では、酵素の特異的蛋白分解活性についての指摘がないし、そして、反応混合物の粘度増加のための本発明の方法における使用に関する効用は、それゆえ、その特許での酵素それ自体の開示によっては、事前に知られていない。

国際特許出願第Ｗ０９１／１３５５４号では、上記の蛋白分解酵素は、ＧＩＵおよび／またはＡｓｐ残基においての蛋白質の限定的および特異的加水分解を提供し、そして、それゆえ、明細書は、蛋白質の加水分解の方法におけるその酵素の使用に関係する。

今回、驚くべきことに、上記の蛋白分解酵素が、このプロテアーゼがたとえ温和な条件でも反応混合物の粘度増加を発揮することを可能にするホエー蛋白に特に適用されたとき、優れたプラスティン合成活性を有していることが見いだされた。

図面の簡単な説明本発明は、付属図面への言及によってさらに説明され、ここで二図１は、本発明のＳＰ　４４６ブロテアーゼの、ｐＨ（ｐＨ６−１１）と活性（相対％）との関係を示すグラフであり：図２は、トリポリリン酸ナトリウム（ＳＴＰＰ）の存在（自負）および非存在（黒角）下での本発明のＳＰ　４４６ブロテアーゼの、温度（１５−７０”Ｃ）と活性（相対％）との関係を示すグラフであり：図３は、ＳＰ　４４６ブロテアーゼによるインシュリンの解裂を示し二図４は、本発明のＳＰ　４４６ブロテアーゼとホエー蛋白分離物とのインキュベーション中の、粘度およびΔ重量オスモル濃度を示しく口＝ｍＰａ　’　ｓ；◆＝Δｍｏｓｍ／ｋｇ）　；図５は、本発明のＳＰ　４４６ブロテアーゼとホエー蛋白分離物とのインキュベーション中の、加水分解の程度（％ＤＩ）と粘度（ｍＰａ　”　ｓ）との関係を示し；図６は、ＳＰ　４４６と大豆蛋白とのインキュベーション中の、粘度（ｍＰａ　 ”　ｓ）を示し；図７は、例２に従って得られたプラスティン物質（６％ＤＨ）の分子量分布（− ペプチド分布；−・・積算重量分布）を示し：そして、図８は、例２に従って得られたプラスティン物質（６％ＤＨ）のペプチド分布（−重量分布；口数量分布）を示す。

発明の詳細な開示本発明は、プラスティン合成、すなわち、反応混合物の粘度増加方法のための、特異的蛋白分解酵素の使用に関する。

従って、発明は、反応混合物の粘度増加方法であって、以下の特徴：（ａ）グルタミン酸（Ｇｌｕ）およびアスパラギン酸（Ａｓｐ）残基に特異的なセリンプロテアーゼであり：（ｂ）酵素蛋白１　グラム当たり、少なくとも２５　ＣＰＵＣ本明細書中で定義する）の比活性をもち：（Ｃ）約２３．６００のみかけの分子量をもち；（ｄ）ジイソプロピルホスホフルオリデートにより阻害されるが、フェニルメタンスルホニルフルオリドによっては阻害されず：（ｅ）　６．５〜！０．０のｐＨ範囲において、最大活性の７５％以上を示す；をもつ蛋白分解酵素を含んで成り、他のプロテアーゼ活性を実質的に有しない酵素調製物を、プラスティン反応を可能にする蛋白質基質に添加して、次に、粘度増加を引き起こす条件でのインキュベージョンを行い、そして次に酵素を失活させることを特徴とする方法を提供する。

酵素本方法で使用される蛋白分解酵素は、微生物、特に、バクテリアにより生産されるであろう。このようなバクテリアは、バチルスリケニホルミス（ＢａｃｉｌｌＬＬｓ　Ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒａｉｓ）株、例えば、スプチリシンＡ、および、上述の蛋白分解酵素に対応する他のプロテアーゼを生産することで知られる株であろう。この場合は、蛋白分解酵素は、単離され得るアルカリ性プロテアーゼの生産を誘導する条件下での、バクテリア株の培養により作ることができ、その後、プロテアーゼ活性は、それ自体既知の方法、例えば、上記の米国特許第４゜２６６、０３１号に記された方法により、分離することができる。

バチルス　リケニホルミス（ＢａｃｉＬＬＩ！ｓ　Ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒａｉｓ ’）株は、突然変異株でもよく、例えば、スブチリシンＡをコードしている遺伝子が、例えば、突然変異源、例えばニトロソグアニジンの使用を含む一般的な突然変異誘発手順により、例えば、上記の米国特許第４゜２６６、０３１号に記された手順（本件の蛋白分解酵素の遺伝子コードの不活性について開示している）により、不活性となっている突然変異体でもある。あるいは、スブチリシンＡ遺伝子の不活化は、組換えＤＮＡ技術、例えば、塩基配列を破壊するための１またはそれより多くの塩基のスブチリシンＡ遺伝子への挿入によっても行うことができる。これは、例えば、相同性組換え、例えば、Ｆｅｒｒａｒｉ　ｅｔ　ａｌ、　、　Ｊ、　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、　１５４（３）、　１９８３．　ｐｐ、　１５１３−１５１５に記載された方法により行われるであろう。蛋白分解酵素は、酵素を生産する微生物、例えば、バチルス　リケニホルミス（ＢａｃｉｌＬｗｓ　１ｉｃｈｅｎｉｆｏｒｎｔｉｓ＞株のｃＤＮＡもしくは遺伝子ライブラリーからのそのＤＮＡ配列の単離、適当な発現ベクターへのそのＤＮＡ配列の挿入、適当な宿主微生物のベクターでの形質転換、酵素の生産を誘導する条件下での宿主の増殖および培養からの酵素の回収によっても生産されるであろう。このような段階は、標準手順により行われるであろう（Ｍａｎｉａｔｉｓｅｔ　ａｌ、、Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ＋Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂａｒ、　１９８２．参照のこと）。

本方法の特定の態様では、蛋白分解酵素は、付属の配列表に示す、アミノ酸配列番号をもつもの、または、それらの誘導体である。

本文中、「誘導体」という用語は、酵素の蛋白分解活性がそれによって損なわれない条件で、生来の蛋白のＣ−およびＮ−末端の両方またはいずれか一方への１つまたはそれより多くのアミノ酸の追加、生来のアミノ酸配列中１つまたはいくつかの異なった場所での１つまたはそれより多くのアミノ酸の置換、生来の蛋白の末端の両方またはいずれか一方でのあるいはアミノ酸配列中１つまたはより多くの場所での１つまたはそれより多くのアミノ酸の欠失、あるいは、生来のアミノ酸配列中１つまたはより多くの場所での１つまたはそれより多くのアミノ酸の挿入による、生来の酵素から誘導される蛋白分解酵素を、表すと理解される。

本発明の明細書中、蛋白分解活性は、用語：カゼインプロテアーゼ　ユニット（ＣＰＵ）で表される（定義については例１を参照のこと）。

酵素は、０．０５〜５０　ＣＰＵ／１００　ｇ蛋白、より好ましくは０．１〜２５　ＣＰＵ／１００　ｇ蛋白、最も好ましくは１〜２５　ＣＰＵ／１ｏＯｇ蛋白範囲の濃度で、蛋白質物質に添加されるであろう。

基質本発明の方法に有利に供されるであろう蛋白質物質は、先行の文献で加水分解について示唆される蛋白質または蛋白質物質のいずれか１つであろう。適当な蛋白質物質の例は、動物蛋白、例えば、ホエー蛋白、カゼイン、肉蛋白、魚蛋白、赤血球細胞、卵白もしくはゼラチン、または、植物蛋白、例えば、大豆蛋白、穀物蛋白、例えば、小麦グルテンもしくはセイン、なたね蛋白、アルファルファ蛋白、えんどう豆蛋白、マメ科の豆の蛋白、綿実蛋白もしくはゴマの実蛋白、あるいは、それらの組合せである。

特定の態様では、蛋白質物質は、カゼイン、大豆蛋白、もしくはホエー蛋白、または、これらの１つもしくはそれより多くの蛋白を含んで成る蛋白質混合物である。

好ましくは、蛋白質物質は、ホエー蛋白、または、ホエー蛋白を含んで成る蛋白質混合物である。

インキュベーションの間、基質の濃度は、５〜５０％（Ｗ／Ｗ）　、より好ましくは、５〜３０％（Ｗ／Ｗ）　、最も好ましくは、５〜１５％（Ｗ／Ｗ）の範囲内であろう。

インキュベーションの条件インキュベーションの間、最適プラスティン合成活性を与える反応条件が観察されるべきである。既知の他のプラスティン反応とは対照的に、発明の方法は、温和な条件で行われる。

方法は、２０〜７０°Ｃ１好ましくは、４５〜６５℃の範囲内のインキュベーション温度で行われるであろう。

インキュベーションは、４〜１２、より好ましくは、６〜９の範囲内、最も好ましくは、８付近のＰＨで行われるであろう。

インキュベーション時間は、０．５〜２４時間、より好ましくは、１〜１０時間、最も好ましくは、１〜５時間の範囲にあるであろう。

改良されたアミノ酸組成をもつ製品、または、非常に高いレベルの単一アミノ酸をもつ製品の調製のため、基質は、加水分解産物の混合物であることができ、または、基質は、添加された１つもしくはそれより多くの単一アミノ酸であってもよい。

確立された手順に従って、蛋白分解酵素は、インキュベーション混合物の温度を約３分間、約７０℃まで、好ましくは８５℃まで上昇させること、あるいは、インキュベーション混合物のＰ）ｌを、約５．０より低く減少させることにより、好適に、不活性とされるであろう。

プラスティン混合物もう１つの視点では、本発明は、本発明の方法により得られる蛋白調製物に関係する。従って、発明は、以下の特長：（ａ）グルタミン酸（Ｇｌｕ）およびアスパラギン酸（Ａｓｐ）残基に特異的なセリンプロテアーゼであり：（ｂ）酵素蛋白１　グラム当たり、少なくとも２５　ＣＰＵ（本明細書中で定義する）の比活性をもち；（Ｃ）約２３．６００のみかけの分子量をもち：（ｄ）ジイソプロピルホスホフルオリデートにより阻害されるが、フェニルメタンスルホニルフルオリドによっては阻害されず：（ｅ）　６．５〜１０．０のＰＨ範囲において、最大活性の７５％以上を示す；をもつ蛋白分解酵素を含んで成り他のプロテアーゼ活性を実質的に有しない酵素調製物を、蛋白質物質に添加し、次に、インキュベーションを行い、そして次に、該酵素を失活させることにより得られるプラスティン物質を提供する。

より具体的な視点では、プラスティン物質は、カゼイン、大豆蛋白、もしくはホエー蛋白、または、これらの１つもしくはそれより多くの蛋白を含んで成る蛋白質混合物から得られる。

好ましくは、プラスティン物質は、ホエー蛋白、または、ホエー蛋白を含んで成る蛋白質混合物から得られる。

他の具体的な視点では、プラスティン物質は、約７．０００を超えない分子量をもつ。

さらに具体的な視点では、プラスティン物質は、出発物質（基質）の乾燥物質組成物と本質的に同じ乾燥物質組成物をもつ。

さらなる具体的な視点では、プラスティン物質は、５０’Ｃで、ＮＶセンサーおよびスピンドルＮ００４を備えたＨＡＡＫＥ　ＶＴ　１８１粘度計での測定で、４０　ｍＰａ”　ｓより大きい、好ましくは、６０　ｍＰａ”　ｓより大きい粘度をもつ。

改良されたアミノ酸組成をもつプラスティン物質、または、非常に高いレベルの単一アミノ酸をもつプラスティン物質の調製のため、基質は、加水分解産物の混合物であることができ、または、基質は、添加された１つもしくはそれより多くの所望の単一アミノ酸であろう。アミノ酸組成の強化により、栄養価を高められた食品が得られるであろう。

本発明のプラスティン物質は、優れた乳化能力をもっている。概して、増加した粘度は、より安定なエマルジョンを導く。しかしながら、増加した粘度は、本発明のプラスティン物質の場合のように、必ずしも改良された乳化能力を導くとはかぎらない。

高分子化合物は、アレルギー誘発の危険の増大と関係する。従って、加水分解の進んだ段階では、一般的に、アレルギー誘発性のより低い製品を導く。図７から明白なように、記されたプラスティン物質は、非常に特異的な分子量分布をもつ。プラスティン物質は、約７．０００を超える分子量をもつペプチドを含んでいない。これ故に、このプラスティン物質は、特定の母乳代用物への導入を許容する減少されたアレルギー誘発の危険性をもっている。

さらに、本発明のプラスティン物質は、味に関して中立である。

このことは、各種の食品、例えば、乳化肉製品、低脂肪バター、または母乳代用食品への導入をも可能にする。

さらなる視点では、発明は、本発明の方法により得られたプラスティン物質を含んで成る食品に関する。

有利には、発明のプラスティン物質は、さまざまなタイプの食品、例えば、乳化肉製品、低脂肪バター、あわだてたトッピングおよびデザート、例えば改良されたアミノ酸組成もしくは一定の食物に対し補助食物として使用されるであろう単一アミノ酸の増加レベルの結果による特別に設計された栄養価をもつ製品、重要なフレーバーもしくはその他の特性をもつ可溶性ペプチドの特別タイプを含む製品に取り込むことができるように、例えば優れた粘断性をもつゲル状物質の製造において導入されるであろう。

好ましい態様では、発明のプラスティン物質は、母乳代用物へ取り食品に取り込まれるプラスティン物質の量は、典型的には、１〜３０％（Ｗ／Ｗ）の範囲内となる。食品は、脂肪および／または炭水化物を含んで成り、そして、普通の食品添加物、例えば、芳香剤、甘味料、ビタミン、ミネラルおよび微量元素を、さらに含んで成るかもしれない。

本発明は、さらに、以下の例で説明される。例は、請求された発明の範囲をいかなる方法でも限定することを意図していない。

例１（バチルス　リケニホルミス）　Ｂａｃｉｌｌｕｓ　１ｉｃｈｅｎｉｆｏｒａｉｓ　ＳＰ　４４６ブＡｌｃａｌａｓｅ”　ＰＰＡ　１６１８は、米国特許第４．２６６、０３１号に記載された方法で精製された。精製されたＳＰ　４４６ブロテアーゼの収率は、基質としてＣＢＺ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−ｐＮＡ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｍａｎｎｈｅｉｍ）を使用した、出発および精製ＳＰ　４４６の酵素活性の測定により、決定された。スブチリシンＡは、おそらく、ＰｈｅまたはＬｅｕの後の切断により、基質を分解することができるので、酵素調製物の中に存在するスブチリシンＡを不活性化するためには、フェニルメタンスルホニルフルオリドの添加（１：１０　ｖｏｌ　）が必要であった。出発物質（４０ｍｌ）の酵素活性は、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ　Ｌａｍｂｄａリーダーで、４０５　ｎｍ／ｍｉｎ、／ｍｌにおける吸光度として測定され、そして、１６６、９２０と決定された。精製物質（３０ｍｌ）の酵素活性も同様に測定され、そして、１５８．７２０と決定された。従ってＳＰ　４４６ブロテアーゼの収率は、９５％であった。

蛋白分解活性ＳＰ　４４６ブロテアーゼの蛋白分解活性は、基質としてカゼインを使用し、２７　ＣＰＵ７ｇと決定された。１カゼイン　プロテアーゼ　ユニット（ＣＰＵ）は、下記の標準条件下、１分当り、第一級アミノ基ｌミリモル（セリン標準との比較により決定される）を遊離する酵素量として定義される。

標準条件：カゼイン（Ｍｅｒｃｋ　ＡＧ、　Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、　ＦＲＧにより供給されたＨａｍｍａｒｓｔｅｎＯ）の２％（ｗ／ｖ）溶液が、（Ｂｒｉ　ｔｔｏｎ　ａｎｄ　Ｒｏｂｉｎｓｏｎ、　、　Ｊ、　Ｃｈｅｍ、　ｓｏｃ、　、　１９３１、　ｐ、　１４５１）に記された　Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ　Ｂｕｆｆｅｒで調製され、９．５のＰＨに調整される。基質溶液２ｍｌは、水浴中、２５°Ｃ，１０分間、予めインキュベートされる。Ｌｌｎｉｖｅｒｓａｌ　Ｂｕｆｆｅｒ（ＰＨ９，５）の約０．２〜０．３　ＣＰＵ／ｍｌ溶液と一致する酵素調製物ｂ　ｇ／ｍｌを含む酵素溶液１　ｍｌが添加される。２５°Ｃ１３０分間のインキュベート後、反応は、反応停止剤（トリクロロ酢酸１７．９ｇ、酢酸ナトリウム２９．９ｇおよび酢酸１９．８ｇを含み、脱塩水により５００　ｍｌとされた溶液５ｍ１）の添加により停止される。ブランクは、反応停止剤が前もって酵素溶液に添加されていることを除いて、同様の方法で、テスト溶液として調製される。反応混合物は、水浴中、２５分間放置され、その後、Ｗｈａｔｍａｎ　４２ペーパーフイルターで濾過される。本分析方法を記載したＡＰ　２２８／１のパンフレットは、Ｎｏｖｏ　Ｎｏｒｄｉｓｋ　Ａ／Ｓ、Ｄｅｎｍａｒｋからの要求に関し利用可能である。

第一級アミノ基は、以下に示すように、Ｏ−フタルジアルデヒド（ＯＰＡ）との発色により、測定される。

テトラホウ酸２ナトリウム１２水塩７．６２ｇおよびドデシル硫酸ナトリウム２．０ｇが、１５０　ｍｌの水に溶解される。４ｍｌのメタノールに溶解された１６０　ｍｇのＯＰＡは、次に、４００μｌのβ−メルカプトエタノールと一緒に加えられ、その後、水で２００　ｍｌまで調整される。３ｍｌまでのＯＰＡ試薬が、上記のように得られた濾液４００μｌに、混合しながら加えられる。３４０　ｎｍでの吸光度（ＯＤ）が、約５分後に測定される。このＯＰＡ試験は、１００　ｍｌのＵｎｉｖｅｒｓａｌ　Ｂｕｆｆｅｒ（ＰＨ９゜５）中に、セリン１０　ｍｌを含む標準セリンでも実施される。バッファー単独が、ブランクとして使用される。プロテアーゼ活性は、吸光度（ＯＤ）測定から、以下の計算式により計算される。

ＣＯＤ、−００，）Ｘ　Ｃ，、、ＸＱＣＰＵ／ｍｌ酵素溶液：□ （ＯＤ３□−ＯＤｍ　）　Ｘ　ＭＷＩＩＫＩ　Ｘ　ｔ　１ＣＰＵ／ｇ酵素調製物＝　ＣＰＵ／ｍｌ　：　ｂ〔式中、ＯＤ、　、００．．００．、、およびＯＤ、は、それぞれ、試験溶液、ブランク、標準セリンおよびバッファーの吸光度（ＯＤ）である。Ｃａｔｌは、標準でのセリン濃度（ｍｇ／ｍｌ）　（本ケースでは、０．１　ｍｇ／ｍｌ　）、およびＭＷａ□は、セリンの分子量（１０５，０９）である。Ｑは、酵素溶液の希釈倍率（本ケースでは、８倍）であり、そして、ｔｌ、分単位でのインキュベーション時間（本ケースでは、３０分）である〕ＰＨ活性ＳＰ　４４６ブロテアーゼの活性のＰＨ依存性は、Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ　Ｂｕｆｆｅｒか異なるＰＨ値、すなわちＰＨ６，７，８，９，１０およびｌｌに調整された変更の下、上記のＯＰＡカゼイン法により決定された。結果を図１に示す。

該図により、ＳＰ　４４６ブロテアーゼは、ＰＩ（８〜ＩＯの範囲に最適ＰＨをもつと思われる。

温度活性ＳＰ　４４６ブロテアーゼの活性の温度依存性は、酵素反応が異なる温度、すなわち１５℃、３０°Ｃ１４０°Ｃ１５０℃、６０°Ｃおよび７０°Ｃで行われた、そして、酵素反応が、多くの商業的界面活性剤中の普通の成分であるトリポリリン酸ナトリウム（ＳＴＰＰ）　０．１％の存在下、並びに非存在下で、処理された、変更を伴って、上記のＯＰＡカゼイン法により決定された。結果を図２に示す。該図により、ＳＰ　４４６ブロテアーゼは、トリポリリン酸ナトリウム（ＳＴＰＰ）の存在の有無にかかわらず、約５０°Ｃに最適温度をもつと思われる。

Ｇｌｕ特異性ＳＰ　４４６ブロテアーゼのＧｌｕ特異性は、以下のように決定された。

ＰＨ９，５のＵｎｉｖｅｒｓａｌ　Ｂｕｆｆｅｒ　（上記参照）中のｆ　ｍｇ／ｍｌａ度のヒトインシュリン０．５　ｍｌ　、および同じバッファー中のＳＰ　４４６ブロテアーゼ（０，６ＣＰＵ／ｌ）　７５μｍが、３７°Ｃで、１２０分間、インキュベートされた。反応は、ＩＮの塩酸５０μｌの添加により停止された。

インシュリン分子は、多数のペプチド断片に解裂した。それらは、適当なＣ−１８カラム（Ｍｅｒｃｋ　ＡＧ、　Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、　ＦＲＧ、により供給されるＨｉｂａｒ　ＬｉＣｈｒｏｓｏｒｂ　ＲＰ−１８，５μｍの充填剤）を使用した逆相ＨＰＬＣにより分離および単離される。断片は、以下の溶媒により、０〜５分間で９０％Ａ／１０χＢから８０％Ａ／２０％Ｂまでの線型グラジェントおよび実質的に８０％Ａ／２０％Ｂ　５０分間で、溶出された。

Ａ、０．２Ｍ硫酸ナトリウムおよび０．１Ｍリン酸：ｐＨ２，５；Ｂ、　アセトニトリル／水、５０％：単離された断片は、Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ　Ｃ１ｔｙ、ＣＡ、ＵＳＡ）　Ｍｏｄｅｌ　４７０Ａ気相配列決定機の使用により、自動エドマン分解によるアミノ酸配列決定法に供される、そして、フェニルチオヒダントイン（ＰＴＨ−）アミノ酸は、Ｔｈ１ｍ他による「形質転換された酵母細胞によるヒトインシュリンの分泌Ｊ　ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔｅｒ　２１２　（２）、　１９８７．　ｐ、３０７１ｍ記載された高速液体クロマトグラフィーにより分析された。インシュリン分子の解裂部位は、図３に示されるように同定された。

Ｎ−末端アミノ酸配列精製ＳＰ　４４６ブロテアーゼのＮ−末端アミノ酸配列は、前段落に記載のように決定された。Ｎ−末端配列は、と決定された。

全体アミノ酸配列全体アミノ酸配列は、ＤＮＡ配列により決定された。このＤＮＡ配列は、「発明の詳細な開示」と題した段落に記載された標準技法により決定された。全体アミノ酸配列の番号１、付属の配列表に示す。

アミノ酸配列に基礎を置き、ＳＰ　４４６ブロテアーゼの分子量は、２３．６００と決定された。

ＳＰ　４４６ブロテアーゼのＤＦＰによる不活性化（体積として”）　１／ｌｏの比で、Ｐ＆１ＳＦ（イソプロパツール中１％）と共に酵素をインキュベートしたが、ＳＰ　４４６ブロテアーゼは、不活性化されなかった。しかしながら、酵素ｌＯμｌ（１ｍｇ／ｍｌ）を、１０　ｍＭ　ＭＯＰＳ　８０μｍと一緒に、ｐＨ７，２で、０．１Ｍジイソプロピルホスホフルオリデー）（ＤＦＰ）　１０μ ｌを添加してインキュベートしたら、基質ＣＢ２−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−ｐＮＡに対する活性についての測定により、酵素は完全に不活性となった。

例２高粘度ホエー蛋白の調製粘度の増加は、加水分解（ＤＨ）の程度との関係を調査された。

基質として、スプレードライされたホエー蛋白の濃縮物（ＤａｎｍａｒｋＰｒｏｔｅｉｎ　Ａ／Ｓ、　Ｎｒ、　Ｖｉｕｍ、　６９２０　Ｖｉｄｅｂａｅｋ、　Ｄｅｎｍａｒｋから利用できるＬａｃｐｒｏｄａｎ−８０）が使用された。蛋白質の濃度は、８．０％（Ｗ／Ｗ）であり、そして、ＳＰ　４４６ブロテアーゼの投与量は、５　ＣＰＬＩ／１００ｇ蛋白であった。インキュベーションは、ＮａＯＨで調整したｐＨ８，０の固定ｐＨのもと６５°Ｃで行われた。

粘度は、ＮＶセンサーおよびスピンドルＮＯ３４を備えたＨＡＡＫＥ　ＶＴ　１８１粘度計を使用して、５０°Ｃで測定された。

このテストの結果は、図４に表される。この図から、最大粘度は、インキュベーション３時間後に得られることが分かる。興味深いことに、この点でも、重量オスモル濃度の極小点が現れる。

塩基の消費量から、加水分解の程度が、Ａｄｌｅｒ−ＮｉＳＳｅｎ著；ＥｎｚｙｍｉｃＨｙｄｒｏｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ｆｏｏｄ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｅｌｓｖｉｅｒ　Ａｐｐｌｉｅｄ　５ｃｉｅｎｃｅ　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ　Ｌｔｄ、　（１９６１）、　ｐ、　１２２に従って計算された。

加水分解の程度は、以下の式により計算されるであろう。

ペプチド結合の解裂数ＤＨ＝　□ ペプチド結合の総数蛋白質のペプチド結合の総数は、そのアミノ酸組成物から計算される。ペプチド結合の解裂数は、トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）を使用した以下の方法による加水分解産物中の、遊離のＯ−アミノ基の分析から決定されであろう。

０．２５ｘｌＯ”と２．５Ｘ１０−”アミノ当量／ｌの間を含むサンプル０．２５ｍ１は、ｐＨ８，２のリン酸バッファー２．００ｍ１と共に試験管内で混合される。０．１％のＴＮＢＳ溶液２溶液２加ｌられ、そして、５０＋／−１℃の水浴中に、６０分間、振とうされながら置かれる。インキュベーションの間、試験管および水浴は、ブランクの反応が光に晒されることによって加速されるので、アルミニウム箔で覆われる。６０分後、塩酸４．００ｍ１が、反応を終了させるために添加され、そして、試験管は、３４０　ｎｍで水に対する分光光度計の使用による吸光度の計測の前、室温で３０分間静置される。より詳しいことは、Ａｄｌｅｒ−Ｎｉｓｓｅｎ著、Ｊ、Ａｇｒｉｃ、　Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍ、　２７．１９７９．　ｐ、　１２５６−１２６２を参照のこと。

図５は、Ｄｆ（と粘度との関係を表している。明らかに、生成物は、約６％のＤＨで、最大粘度を示す。生成物の味が評価され、食品または栄養補給物への実施の可能性をもつ、すばらしい、苦みの無いものであることが分かった。

例３乳化特性発明の高粘度生成物の乳化能力が、調査された。

例２に従い得られた高粘度生成物のサンプルは、それぞれ、２％、４％および６％のＤＨをもっていた。

インキュベーションは、３分間８５°Ｃの熱処理により、所望のＤＨで停止された。サンプルは、５ｗ１ｆｔ他；　Ｆｏｏｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（１９６１）。

１５、　ｐ、　４６８−４７３に記載されたＳｗｉ　ｆ　を滴定法、および母乳代用食品に類似する食品系モデルの、２つの異なったテスト方法によって、分析され、そして原料と比較された。

５ｗ１ｆｔ滴定は、僅かの変更とともに使用された。

例２に従って得られた蛋白質１．２５　ｇ（ＮＸ６．３８）は、０．５　Ｍ　ＮａＣ１２５０ｍｌを使用し２分間、低速で分散された。５０　ｍｌが、混合ジャーに移され、そして重量を計られた。５０　ｍｌの大豆油が添加され、そして油 −水混合物は、ＭＳＥホモゲナイザーイー高速切断および混合（約１３．０００　ｒｐｍ）された。

混合ジャーは、水浴で冷やされた。混合の間、１秒当たり０．３ｍｌの割合で、分離管から連続油流が、添加された（油添加の速度は、乳化能力に影響力をもつ）。油は、エマルジョンが抵抗性混合を形成するまで添加される。その後、ホモゲナイイーの刃は、無垢の油の吸収を確保すために、変更された。この濃厚剤は、″終点″到達間際であることを示す。

油の添加は、粘度の急激な減少が肉眼で観察されたとき、直ちに停止された。このことは、エマルジョンが油／水エマルジョンから水／油エマルジョンへと崩壊されたことを示している。”終点”までに添加された油の総量は、混合ジャーの重量測定によりめられた。

乳化能力は、蛋白質（ＮＸ６．３８）　１グラム当たりのｇ数として計算された。乳化能力は、平均能力を計算するために、それぞれの生産物において５回ずつ測定された。このテストの結果を表１に表す。

原料　２３１　ｇ　ｏｉｌ／ｇ蛋白ＤＢ　＝　２％　４６７ＤＨ＝　４％　４５５ＤＨ＝　６％　５０７第２の方法では、乳化特性は、以下の組成物：蛋白／蛋白　加水分解産物（約８０％の蛋白乾燥物質）２．０％マルトデキストリンＤε８−１０（ＣＰＣ−１９０８）　３．５％ショ糖　３．５％油（大豆）３．５％水　８７．５％の液状母乳代用製品のための食品系モデルにおいて調査された。

蛋白／蛋白　加水分解産物、マルトデキストリンおよびショ糖は、水に溶解され、そして、約７０°Ｃまで加熱された。油は、約７０°Ｃまで加熱された。５ｉｌｖｅｒｓｏｎ−混合機を使用して水相が、混合され、そして、混合の間、油は、２分間の混合により予乳化を得るために添加された。

混合物は、約７０°Ｃおよび３００　ｂａｒでＲａｎｎ１ｅ　Ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｒで均質化された。その後、エマルジョンは、３分間８５°Ｃで熱処理され、そしてその後、２０°Ｃ未満に冷却された。サンプルは、５°Ｃ未満で冷蔵された。

ｌおよび７日間の貯蔵の後、エマルジョンは、外観を検査された。もし、サンプルが不均一であり、または表面に油が在れば、乳化能力は低い。

さらに、ｌおよび７日間の貯蔵の後、エマルジョンは、１５．０００ｘｇで１５分間、遠心分離され、そして外観を検査された。もし、サンプルが不均一であり、または表面に油が在れば、乳化能力は低い。

この実験で、いずれのサンプルの表面にも油は、観られず、すばらしい乳化能力を備えた安定したエマルジョンであることが示された。

例４７９−−　Ｌ　）ｆニー、−＾炒早ＨＰＬＣの装置は、高圧ポンプ、　Ｗａｔｅｒｓ　Ｍ　５１０、流速０．７　ｍｌ／ｍｉｎから成る。インジェクターは、Ｗａｔｅｒｓ　ＷＩＳＰ　Ｍ　７１０　、そして検出器は２１４　ｎｍまで拡張された波長をもつＷａｔｅｒｓ　Ｍ　４４０であった。

３つのＧＣＰカラムＴＳＫ　Ｇ　２０００５ＷＸＬ、７．８　ｍｍ　ｘ　３００　ｍｍか、直列に計算結果を図７に表す。結果は、以下の表現により計算された、重量および数平均の分子量として与えられる。

Σ　Ａ、　Σ（Ａ、／Ｍ、、、）ここで、Ｍ、＝重量平均分子量、および、Ｍ、＝数平均分子量ＡＩ　＝それぞれの時間間隔での検出器の応答の積算として計算された、それぞれの区分に関するクロマトグラムの面積Ｍｗ、ｌ＝それぞれの区分に一致する分子量値は、一定時間間隔における平均溶離容量を使用して、換算曲線により計算されるこれらの計算により、重量平均分子量は、２７３０と計算され、そして、数平均分子量は、１２２０と計算された。このことは、平均ペプチド長が、ｌ０１３の〈ｘ〉であることを示している。

図８に、重量および数におけるペプチド分布を表す。

西己ダリ表（２）配列番号：１に関する情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）長さ：２２２アミノ酸（Ｂ）タイプ：アミノ酸（Ｃ）鎖ニ一本鎖（Ｄ）トポロジー：線状（ｉｉ）分子のタイプ：蛋白質（ｘｉ）配列の詳細：配列番号＝１　：Ｓｅｒ　Ｖａｌ　Ｉｌｅ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ａｓｐ　Ａｓｐ　Ａｘｚ　Ｔｈｒ　ｆｉａＨＶｉｌ　Ｔｈｒ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ａｌａｌ　５　１０　１５丁ｙｒ　Ｐｒｏ　Ｔｙｒ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｉｌｅ　Ｖａｔ　Ｈｉｓ　Ｉｌａ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｉｌｅ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｃｙｓ”１０　２５　３０Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ｍｅｔ　Ｉｌｅ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｌｙｓ　Ｔｈｒ　Ｖａｔ　ｉｓＪｍ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｈｌｓ　Ｃｙ■ １１ｅ　Ｔｌｒ　Ａｓｐ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　宕ｙ　Ｓｅｒ　Ｐｈｅ　Ａｌａ　Ｇｌｙ、Ｔｈｒ　Ａｌｉ　Ｔｈｒ　Ｖａｔ　５ｅｒＰｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ａｓｎ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　Ｐｒｏ　Ｔｙｒ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｖｉｌ　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　ＴｈｒＡｘｚ　Ｔｙｒ　Ｐｈｅ　Ｉ　ｌｅ　、Ｐ、ｒｏ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ａｒｇ　、Ｓ、ｅｒ　Ｇｌｙ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ａｓｎ　、Ｖ窒■■ Ｔｙｒ　Ｇｌｙ　ＡＪ＊　Ｉｌｅ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ｇｌｕ　Ｐｒｏ　Ｌ１Ｇ４ｙ　Ａ５ｎ　Ｔｈｒ　Ｖａｔ　Ｇｌｙ　ＴｙｒＺｏｏ　１０５　１１０Ｐｈｅ　Ｇｌｙτｙｒ　Ｓｅｔ　Ｔｙｒ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｓｅｔ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｖａｔ　ＴｈｒＩｌｅ　視Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　：！　Ｌｙｓ　Ｔｈｒ　Ａｌｉ　Ｇｌｙ　、Ｔｈ、ｒ　Ｇｉｎ　Ｔｒｐ　Ｇｌｎ　Ｈｉ　ｓ毘Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｉ　ＩｃＡｌａ　、Ｉ、１．ｅ　Ｓｅｒ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ｔｙｒ　品ｓ　Ｌｅｕ　Ｇｌｎ　Ｔｙｒ　Ａｌａ　温＋Ａｓｐ　Ｔｈｒ　Ｔｙｒ　Ｇｌｙ　ＧＡＩ　Ｇｉｎ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　歴Ｖａｔ　Ｐｈｅ　Ｇｌｕ　Ｇｌｎ　、５．ｅ、ｒ　５ｃｒＳｅｒ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ａｓｎ　Ｃｙｓ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｃｙｓ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ａｌｘ　’ｖｉｌ　Ｈｉｓ　Ｔｈｒ　Ａ３■ Ｇｌｙ　Ｖａ　ｌ　Ｔｌｉ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　Ａｓｎ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　、Ａｊ、ｇ　Ｉ　Ｉｅ　Ｔｈｒ@ＬｙｓｐＨ活性温度活性１０°Ｃ２０°Ｃ３０°Ｃ４００Ｃ５００Ｃ６００Ｃ７０ｏＣＦｉｇ、　３分間ＤＨ，７分間１０１　１０２　１ｏ３　１０４　１０５残基数１−３　４−６　７−１０　１１−２０　＞２０分子量国際調査報告＋、＋、、、−＋＋１．Ｉ−＋　１１５５１１ｃｍ＋ｉ−Ｎ−、ＰＣＴｌｏＫ　９２１０００３６国際調査報告フロントページの続き（５１）　Ｉｎｔ、　Ｃ１，５識別記号　庁内整理番号Ａ　２３　Ｌ　１／３０５　２１１４−４ＢＣＯ７Ｋ　１５／１０　８３１８−４ＨＣ１２Ｐ　２１１０６　８２１４−４ＢＩ

Claims

【特許請求の範囲】

１．反応混合物の粘度増加方法であって、以下の特徴：（ａ）グルタミン酸（Ｇｌｕ）およびアスパラギン酸（Ａｓｐ）残基に特異的なセリンプロテアーゼであり；（ｂ）酵素蛋白１グラム当たり、少なくとも２５ＣＰＵ（本明細書中で定義する）の比活性をもち；（ｃ）約２３，６００のみかけの分子量をもち；（ｄ）ジイソプロピルホスホフルオリデートにより阻害されるが、フェニルメタンスルホニルフルオリドによっては阻害されす；（ｅ）６．５〜１０．０のＰＨ範囲において、最大活性の７５％以上を示す；をもつ蛋白分解酵素を含んで成り、他のプロテアーゼ活性を、実質的に有しない酵素調製物を、ブラステイン反応を可能にする蛋白質基質に添加して、次に、粘度増加を引き起こす条件でのインキュベーションを行い、そして、次に、該酵素を失活させる、ことを特徴とする方法。
２．プラステイン反応を可能にする蛋白質基質が、カゼイン、大豆蛋白、もしくはホエー蛋白、または、これらの１つもしくはそれより多くの蛋白を含んで成る蛋白質混合物である、請求項１に記載の方法。
３．プラステイン反応を可能にする蛋白質基質が、ホエー蛋白、または、ホエー蛋白を含んで成る蛋白質混合物である、請求項１に記載の方法。
４．前記インキュベーションが、５〜５０、より好ましくは、５〜３０％（Ｗ／Ｗ）、最も好ましくは、５〜１５％（Ｗ／Ｗ）の範囲内の濃度での基質で行われる請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
５．前記酵素が、０．０５〜５０ＣＰＵ／１００ｇ蛋白、より好ましくは、０．１〜２５ＣＰＵ／１００ｇ蛋白、最も好ましくは、１〜２５ＣＰＵ／１００ｇ蛋白の範囲内の濃度で、蛋白質物質に添加される請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
６．前記インキュベーションが、２０〜７０℃、好ましくは、４５〜６５℃の範囲内の温度で行われる請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
７．前記インキュベーションが、４〜１２、好ましくは、６〜９の範囲内のＰＨで行われる請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
８．前記インキュベーションの時間が、０．５〜２４時間、より好ましくは、１〜１０時間、最も好ましくは、１〜５時間である請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
９．インキュベーションに先立って前記蛋白質基質に所望のアミノ酸を添加することにより、１またはそれより多くのアミノ酸を反応混合物に導入することを、さらに含んで成る請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
１０．以下の特徴：（ａ）グルタミン酸（Ｇｌｕ）およびアスパラギン酸（Ａｓｐ）残基に特異的なセリンプロテアーゼであり；（ｂ）酵素蛋白１グラム当たり、少なくとも２５　ＣＰＵ（本明細書中で定義する）の比活性をもち；（ｃ）約２３，６００のみかけの分子量をもち；（ｄ）ジイソプロピルホスホフルオリデートにより阻害されるが、フェニルメタンスルホニルフルオリドによっては阻害されず；（ｅ）６．５〜１０．０のＰＨ範囲において、最大活性の７５％またはそれ以上を示し；をもつ蛋白分解酵素を含んで成り、他のプロテアーゼ活性を実質的に有しない酵素調製物を、蛋白質基質に添加し、次に、インキュベーションを行い、続いて、酵素を失活させることにより得られるプラステイン物質。
１１．カゼイン、大豆蛋白もしくはホエー蛋白、または、これらの１つもしくはそれより多くの蛋白を含んで成る蛋白質混合物から得られる請求項１０に記載のプラステイン物質。
１２．ホエー蛋白、またはホエー蛋白を含んで成る蛋白質混合物から得られる請求項１０に記載のプラステイン物質。
１３．約７，０００を超えない分子量をもつ請求項１０〜１２のいずれか１項に記載のプラステイン物質。
１４．出発物質（基質）の乾燥物質組成物と本質的に同じ乾燥物質組成物をもつ請求項１０〜１３のいずれか１項に記載のプラステイン物質。
１５．５０℃で、ＮＶセンサーおよびスピンドルＮｏ．４を備えたＨＡＡＫＥ　ＶＴ１８１粘度計での測定で、４０ｍＰａ■ｓより大きい、好ましくは、６０ｍＰａ■ｓより大きい粘度をもつ、請求項１０〜１４のいずれか１項に記載のプラステイン物質。
１６．改良されたアミノ酸組成をもつか、または、１つもしくはより多くの単一アミノ酸に関して強化されている請求項１０〜１５のいずれか１項に記載のプラステイン物資。
１７．請求項１０〜１６のいずれか１項に記載のプラステイン物質を含んで成る食品。
１８．母乳代用物である請求項１７に記載の食品。
１９．乳化肉製品または低脂肪バターである請求項１７に記載の食品。
２０．改良されたアミノ酸組成をもつか、または、１つ、もしくはより多くの単一アミノ酸に関して強化されているプラステイン物質の導入による高められた栄養価をもつ請求項１９に記載の食品。