JPH06507384A - 特定のｔ細胞群による病理的応答により生じる疾患に対するワクチン投与および方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 特定のＴ細胞群による病理的応答により生じる疾患に対するワクチン投与および 方法 発明の背景 本発明は、免疫系に関し、特に詳細には、病理学的免疫応答を改変する方法に関 する。

高等生物は、潜在的な有害物質あるいは微生物の侵入に対して自身を防御する免 疫系により特徴づけられる。抗原と呼ばれる物質が体内に侵入し、そして外来物 として認識されると、免疫系は、抗体媒介応答および細胞媒介応答の両方を行う 。８９７１球あるいはＢ細胞と呼ばれる免疫系の細胞は、外装物質を特異的に認 識して結合する抗体を産生ずる。１９７８球あるいはＴ細胞と呼ばれる他のリン パ球は、細胞媒介応答を生じ、そして調節し、終局的には抗原を除去する。

種々のＴ細胞は、細胞媒介応答に関与する。あるものは、特定のＢ細胞クローン の増殖を誘導して抗原に特異的な抗体を産生ずる。他のものは、その表面上に外 来抗原を提示する細胞を認識して破壊する。ある種のＴ細胞は、他の細胞に刺激 あるは抑制のいずれかを行うことにより、そ゛の応答を調節する。

正常な免疫系は綿密に調節されるが、免疫応答の欠陥は希！・ことではない。例 えば、免疫系は事実、宿主成分に対して、それが外来物であるかのように、不適 切に機能し反応する。

このような応答は、宿主免疫系が宿主自身の組織を攻撃する自己免疫疾患を引き 起こす。免疫系の主要なレギュレーターとして、■細胞は、直接あるいは間接に このような自己免疫病理症状に影響する。

多（の疾患が、自己免疫機構から引き起こされると考えられている。これらの疾 患の主なものには、リウマチ様関節炎、全身性紅斑性根瘤、多発性硬化症、ｌ型 糖尿病、重症筋無力症、および、尋常性天庖癒がある。自己免疫疾患には、世界 中の数百万人が罹患しており、これらの疾患に対する経費は、実際の治療経費お よび生産性の損出に換算して、年間数十像ドルになる。現在では、このような自 己免疫病理症状に対する効果的な治療は知られていない。通常は、症状のみが処 置され得るが、疾患は進行して、ときには重篤な衰弱あるいは死にいたる。

池の例では、リンパ球は制御されずに不適切に複製される。

このような複製は、リンパ腫として周知の痛症状になる。この調節されないリン パ球がＴ細胞型である場合には、その腫瘍′ま、■細胞リンパ腫と呼ばれる。他 の悪性腫瘍と同様に、Ｔ細胞リンパ腫の効果的な治療は困難である。

従って、■細胞媒介の病理症状を治癒あるいは改善する有効な方法が、長い間に わたり必要とされてきた。このような治療では、単に症状を軽減するだけではな （、不適切なＴ細胞応答が完璧に制御されるべきである。本発明はこの要求を満 たし、さらにそれに関連する利点を提供する。

発明の要旨 本発明は、特定のＴ細胞媒介の病理症状を予防あるいは制御するためのワクチン 、およびを推動物へのワクチン投与の方法を提供ｆる。ワクチンは、実質的に純 粋なＴ［ｉレセブ９−（ＴＣＲ）　、あるいは、病理症状を媒介するＴ細胞表面 上に存在するＴＣＨに対応する、それらの免疫原性フラグメントから構成される 。ワクチンフラグメントは、該病理症状を媒介するＴ細胞に特徴的なＴＣＲ配列 に対応するペプチドであり得る。

本発明は、さらに、特定のβ鎖可変領域およびそれらの免疫原性セグメントを提 供し、特に、Ｖβ３、Ｖβ１４およびＶβ１７と呼ばれる３種のＴ細胞レセプタ ーを提供する。これらのレセプターは、自己免疫疾患、例えば、リウマチ様関節 炎（ＲＡ）ならびに多発性硬化症（ＭＳ）の発病に関与する。さらに、他の自己 免疫疾患に関連するＶＤＪ接続（ＣＤＲ３）領域もまた提供する。本発明は、さ らに、ＲＡ、　ＭＳおよび他の自己免疫疾患の検出、予防ならびに治療の方法に 関する。

本発明はさらに、ＲＡおよびＭＳを含むＴ細胞媒介の病理症状を、遺伝子療法に より予防あるいは治療するための方法を提供する。これらの方法においては、Ｔ ＣＲをコードする純粋ＤＮＡあるいはＲＮＡ、それらの免疫原性フラグメント、 あるいはＴＣＲまたは免疫原性フラグメントの内部イメージ（ｉｎｔｅｒｎａｌ 　ｉｍａｇｅ）を有する抗イデイオタイプ抗体が、個体に投与される。ＤＮＡあ るはＲＮＡを含むベクター、およびこのようなベクターを含む組成物もまた、こ れらの方法における使用に提供される。

図面の簡単な説明 図１は、Ｖβ３、Ｖβ１４およびＶβ１７の可変領域配列を示す。

四角で囲ったセグメントは、各Ｖβ鎖のＣＤＲＩ、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ４超 勇変領域を示す。ＣＤＲ２とＣＤＲ４との間の配列は、これらの２つの超可変領 域の重複を示す。

図２（Ａ）は、Ｔ細胞レセプターβ鎖遺伝子のポリメラーゼチェーン反応増幅に 使用されるプライマーの配置を示し、図２（Ｂ）は、ポリメラーゼチェーン反応 に使用されるプライマー配列を示す。

図３は、ＨＬＡ−ＤＲＢ、遺伝子のポリメラーゼチェーン反応増幅に使用される プライマーの配置および配列を示す。さらに、ＨＬＡ−ＤＲ対立遺伝子特異的オ リゴヌクレオチドを示す。

発明の詳細な説明 本発明は、概して、自己免疫疾患およびＴ細胞リンパ腫のようなＴ細胞媒介の病 理症状を、予防、改善あるいは治療するためのワクチンならびにその使用に関す る。ワクチン投与は、他の可能な治療手段に関連する問題を回避する、特定の持 続的な療法を提供する。

本明細書に使用されているように、用語「Ｔ細胞媒介の病理症状」とは、不適切 なＴ細胞応答が病理要素である、あらゆる症状のことである。この用語は、Ｔ細 胞媒介の自己免疫疾患、および調節されていないクローンＴ細胞の複製による疾 患の両方を含むことを意図する。さらに、この用語は、Ｔ細胞による直接媒介の 疾患、および、おもに抗体結合による損傷に特徴ある重症筋無力症のような疾患 、ならびに、不適切なＴ細胞応答がそれらの抗体の産生に寄与する疾患の両方を 含む。

本明細書に使用されているように、用語「実質的なアミノ酸配列」、あるいは「 実質的な配列」とは、アミノ酸配列をさすときには、記載の配列、または、所望 のＴ細胞レセプター配列に対する免疫応答を誘起する配列の能力には実質的には 影響しない、付加、欠損、あるいは、置換を有する他の配列を意味する。このよ うな配列は、一般的には、記載の配列に近接する他の多くの配列を有する。記載 の免疫配列の一部あるいはセグメントは、所望のＴ細胞レセプターに対して有効 な免疫応答をなすが、望まないＴ細胞レセプターに対しては有効な免疫応答をな さないという、所望のＴ細胞レセプターあるいはそれらの７ラグメントの十分な 特性が有る限り、使用され得る。このような配列の多様性は、例えば、代替配列 の合成により容易に作成され得る。次に、その代替配列を、例えば、を椎動物に 免疫して、その有効性を測定するテストがなされ得る。

本明細書に使用されているように、用語「フラグメント」とは、ＴＣＲを含む免 疫原性的に有効なアミノ酸配列のサブセットを意味する。この用語は、ペプチド が他のアミノ酸配列あるいはキャリアと結合されるような、付加配列あるいは部 分と連結または組み合わされるフラグメントを含むことを意図する。従って、ペ プチドはＴ細胞レセプターの最も一般的なフラグメントであるので、用語「フラ グメント」および「ペプチド」は、相互変換的に使用され得る。本発明の各フラ グメントは、用語「実質的な配列」について上述したように、変換配列を有し得 る。

本明細書中で言及される、Ｔ細胞レセプターの「フラグメント」、「部分」ある いは「セグメント」とは、その組成が、本来の完全なＴ細胞レセプター由来であ るべきことを意味しているのではない。このような「フラグメント」、「部分」 あるいは「セグメント」は、当業者に公知の種々の方法、例えば、手技あるいは 自動ペプチド合成、種々のクローニング法、あるいは全ＴＣＲの酵素処理により 生産され得る。

本明細書で使用されているように、本発明のペプチドフラグメントとＴＣＲ配列 との間の関係をさすときには、「対応の」とは、そのペプチドフラグメントが、 患者の効果的な制御応答を刺激する、ＴＣＲ配列あるいはそのフラグメントに十 分に相同であるアミノ酸配列を有することを意味する。しかし、その配列は、例 えば、実施例Ｉ＋およびＩｌｌに示すＴＣＲ配列と同じである必要はない。

「免疫原性的に有効な」とは、免疫応答を効果的に誘起［。

で、個体におけるＴ細胞媒介の病理症状あるいは調節されていないＴ細胞クロー ン複製を予防あるいは処置する、■細胞レセプターあるいはそのフラグメントの 量を意味する。このような量は、当業者が決定Ｉ、得る多くの因子に基づいて、 種および個体間で変えられる。

本明細書に使用されているように、「結合パートナ−」とは、ＴＣＲと反応する 化合物を意味する。一般的には、この化合物は、主要組織適合抗原（ＭＭＣ）で あるが、ＴＣＨに結合したときに、直接あるいは間接にＴ細胞の活性化あるいは 増殖を刺激し得る任意の化合物であり得る。このような化合物はまた、例えば、 ＴＣＨの超抗原結合部位に結合する超抗原であり得る。

本明細書に使用されているように、「個体」とは、Ｔ細胞媒介の病理症状あるい は調節されていないクローンＴ細胞複製を有し得る、ヒトを含む任意のを椎動物 を意味し、「を椎動物」と相互変換的に使用される。

本明細書に使用されているように、「リガンド」とは、他の分子と反応１、て複 合体を形成する任意の分子を意味する。

本明細書に使用されているように、「選択的に結合する」とは、１つの里の分子 あるいは関連の基には結合するが、実質的に他のヲの分子には結合Ｌ７ない分子 を意味する。Ｖβに関しては、［選択結合−ｊとは、特定のＶβを在するＴＣＩ ？あるいはフラグメントとの結合をさし、特定のＶβを欠く他のＴＣＲとの実質 的な交差反応性がないことを示す。

免疫系は５．宿主（自己）の、有害である可能性のある作用物質（非自己）に対 する主要な生物学的防御である。これらの有害作用物質は、細菌あるいは・フィ ルスのような病原体、および、宿主のウィルス感染細胞、腫瘍細胞、あるいは他 の異常細胞を含む、改変された自己細胞であり得る。免疫系のこれらの標的は、 まとめて抗原と呼ばれる。免疫系による抗原の認識は、迅速に免疫機構を作動し て、その抗原を破壊すし、宿主の環境の清浄性を保護する。

抗原特異的免疫応答の主要な現れは、体液性免疫（抗体媒介の）および細胞性免 疫（細胞媒介の）である。これらの各免疫学的機構は、ヘルパー（ＣＤ４＋）　 Ｔ細胞の活性化を介して開始される。これらのＣＤ４＋　Ｔ細胞は、順次Ｂ細胞 を刺激し、抗原結合により抗体を合成するように感作され、抗体を増殖させ、分 泌する。この分泌された抗体は、抗原に結合し、他の免疫機構によりその破壊を 促進する。同様に、ＣＤ４＋　Ｔ細胞は、細胞標的（例えば、宿主のウィルス感 染細胞）を認識して破壊する細胞障害（ＣＤ８＋）　Ｔ細胞に刺激シグナルを提 供する。従って、ＣＤ４＋　Ｔ細胞の活性化は、免疫応答の刺激における中心的 な事象である。ＣＤ４＋　Ｔ細胞の抗原特異活性化が基礎となる機構の精巧さは 、免疫学的な機能の選択的改変のいかなる試みにおいてもきわめて重要である。

Ｔ細胞のその抗原特異性は、細胞表面に発現されるＴ細胞レセプター（ＴＣＲ） による。ＴＣＲは、ヘテロダイマー糖タンパク質であり、２つのポリペプチド鎖 から構成されていて、各鎖０分子量は約４５　ｋＤである。ＴＣＲの２つの形態 が同定されている。１つは、アルファ鎖とベータ鎖とから構成されていて、一方 、２つ目は、ガンマ鎖とデルタ鎖とからなる。これらの４つの各ＴＣＲポリペプ チド鎖は、複数の不連続遺伝子セグメントを含む、異なる遺伝子位置によりコー ドされる。これらには、可変（Ｖ）領域遺伝子セグメント、接続（Ｊ）領域遺伝 子セグメント、および不変（Ｃ）領域遺伝子セグメントカ含マレる。ベータおよ びデルタ鎖は、多様性（Ｄ）遺伝子セグメントと呼ばれるもう一つのエレメント を含む。Ｄセグメントおよびエレメントは、ＴＣＨの遺伝子位置およびポリペプ チドのいくつかにのみに見い出されるので、本明細書中では、適当なＴＣＲ鎖中 においてのみ、この領域が含まれていることを示すために括弧内に示す。従って 、Ｖ（Ｄ）Ｊとは、Ｄ領域を含む鎖のＶＤＪ配列か、あるいはＤ領を含まない鎖 のＶＪ配列のいずれかをさす。

Ｖβと呼ばれる可変領域のベータ鎖に関しては、特定のＶβをさすために本明細 書中で使用されている命名法は、本明細書中のＶβ１４がＫｉｍｕｒａらの■β ３３に相当すること以外は、Ｋｉｎｕｒａら、Ｅｕｒ、　Ｊ、ｌ１１＋ｌ１ｕｎ ｏ、　１７：３７５−３８３　（１９８７）の命名法に従う。

リンパ球の成熟化の間に、１つのＬ　（Ｄ）およびＪ遺伝子が再配列されて、そ の細胞により発現されるＴＣＨのアミノ酸配列を決定する機能性遺伝子を形成す る。再配列され得るＶ、（Ｄ）およびＪ遺伝子のプールは、多重メンバーであっ て、これらのプールの個々のメンバーは、実質的に任意の組合せに再配列され得 るので、全ＴＣＨのレパートリ−は非常に多様であり、生物が曝され得る非常に 多くの結合パートナ−を認識し、そして結合し得る。しかし、特定のＴ細胞は、 １つのＴＣＲ分子のみを有し、そのＴＣＲ分子は、１つでなければ高程度に、そ のＴ細胞のその結合パートナ−に対する特異性を決定する。

動物モデルは、自己免疫疾患の免疫学的機構の理解に顕著に貢献した。このよう な動物モデルの１つ、実験的アレルギー他層を髄炎（ＥＡＥ）は、ミニリン塩基 性タンパク質（ＩＩＩＢＰ）での免疫によりマウスおよびラットに誘発される中 枢神経系の自己免疫疾患である。この疾患は、臨床学的には麻痺および弱い衰弱 に特徴があり、組織学的には、中枢神経系実質の血管周囲の単核細胞浸潤に特徴 がある。この疾患の発病は、ＭＢＰに対する特異性を有するＴ細胞に媒介される 。ＭＢＰ特異的Ｔ細胞の多くのクローンが、ＥＡＥに罹患した動物から分離され 、１続培養により増殖されてきた。ＭＢＰによるインビトロ刺激後、これらのＴ 細胞クローンは、健常宿主に養子移入されると、迅速にＥＡＥを誘発する。重要 なことに、これらのＥＡＥ誘発Ｔ細胞は、同じ抗原（ＭＢＰ）に対して特異的で あるばかりか、通常はさらに、その抗原の１つのエピトープに特異的である。こ れらの観察は、自己攻撃性Ｔ細胞の別個の群が、ＥＡＥの発病の原因となること を示す。

ＥＡＥ誘発Ｔ細胞のＴＣＲの分析は、これらの疾患に関連するレセプターの構造 上の限られた不均質性を明らかにした。３３個のＭＢＰ反応性Ｔ細胞の１つの分 析では、２つのアルファ鎖Ｖ領域遺伝子セグメントおよび１つのアルファ鎖Ｊ領 域遺伝子セグメノトのみが見いだされた。ベータ鎖ＴＣＲ遺伝子の使用（ｕｓａ ｇｅ）の同様の制限もまた、このＴ細胞群に観察された。２つのベータＭＶＱ域 セグメントおよび２つのＪ領域遺伝子セグメントのみが見いだされた。さらに重 要なことに、このＴ細胞クローンの約８０パーセントが、ベータ鎖Ｖ−Ｄ−Ｊ接 続領域を越えて同じアミノ酸配列を有した。これらの発見で、同じ抗原特異性を 有するＴ細胞が共通のＴＣＲ構造を有するという見解が確認され、ＴＣＰがＥＡ Ｅの病因を排除するための免疫治療戦略の有効な標的であることが示される。

ＥＡＥの治療戦略を考案するのに、自己攻撃性Ｔ細胞の抗原特異性の活用がなさ れてきた。例えば、ＥＡＥ誘発Ｔ細胞上に提示されるＴＣＲに特異的なモノクロ ーナル抗体の受動投与が使用さ５４：２６３−２７３　（１９８ｇ）、および、 Ｕｒｂａｎら、Ｃｅｌ＋　５４：５７？−５９２（１９８８）に記載のように、 ＭＢＰ特異的Ｔ細胞の主要ベータ鎖Ｖ領域遺伝子であるＶβ８に特異的なモノク ローナル抗体の注入は、次のＥＡＥ誘発に対するマウスの感受性を減少させた。

同様の防御が、ＭＢＰ特異的Ｔ細胞上の、ＴＣＲの同定されていないイディオタ イプ決定基に反応性であるモノクローナル抗体により、ラットＥＡＥにおいて確 認された（Ｂｕｒｎｓら、Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍａｄ、　１６９：２７−３９　（ １９８９））。受動抗体治療は、ＥＡＥ感受性になんらかの改善的な効果を有す るが、潜在的な問題を伴っている。与えられる防御は一過的であり、従って、抗 体の繰り返し投与が必要である。抗体の複数回注入は、特に異種移植動物に由来 する場合に、投与された抗体に対する免疫応答を生じさせる。

さらに、病原性Ｔ細胞クローンに対する抗体の応答は、全免疫応答中の１つの要 素のみを表し、自己反応性の消失（ｒｅｓｏｌｖｉｎｇ）における細胞性免疫の 潜在的な貢献を無視している。

ＥＡＥ中の自己攻撃性Ｔ細胞活性の減退における細胞性免疫の役割が確かめられ 、可能な治療法が示唆された。受動抗体の研究と同様の様式で、調節Ｔ細胞がエ クソビボで誘導され、免疫治療用に再投与された。例えば、ＣＤ８＋　Ｔ細胞系 が、ＭＢＰ特異的ＣＤ４＋　Ｔ細胞系の養子移入によりＥＡＥが誘導された、回 復ラットから、最近分離された。Ｓｕｎら、Ｎａｔｕｒｅ、　３３２：８４３− ８４５　（１９８８）。ＣＤ８＋　Ｔ細胞系は、疾患を誘導するために使用され たＣＤ４＋丁細胞に対してインビトロにおいて細胞崩壊活性を示した。

さらに、このＣＴＬ系の養子移入は、次のＭＢＰのチャレンジに対する受容ラッ トの感受性を減少させた。Ｌｉｄｅｒら、５ｃｉｅｎｃｅ。

２３９：１８１−１８３　（１９８８）にもまた、ＥＡＥ誘発Ｔ細胞に対して抑 制活性を有するＣＤ８＋　Ｔ細胞の分離が報告されている。これらのＣＤＢ＋細 胞は、弱毒化疾患誘発Ｔ細胞クローンでワクチン投与されたラットから分離され 、これらはインビトロでは細胞崩壊活性を示さないが、ＥＡＥ誘発Ｔ細胞のＭＢ Ｐ作動増殖を抑制した。これらの研究は、ＣＤ８＋　Ｔ細胞がＥＡＥをダウンレ ギュレーションし得たことを示すが、回復ラットの長期間にわたる耐性において 、これらの選択されたＣＤ８４　ＣＴＬが主要な役割をはたしていることをうけ いれるのは困難である。なぜなら、Ｓｅｄｇｖｔｃｋら（Ｅｕｒ、Ｊ、Ｉｍｍｕ ｎｏｌ、、１８：４９５−５０２　（１９８８））は、モノクローナル抗体によ るＣＤＢ＋細胞の枯渇が、疾患のプロセスおよび回復には影響しないことを明白 に示している。

上記のＳｕｎらおよびＬｉｄｅｒらの実験では、エクソピボで誘導された調節Ｔ 細胞の投与が、受動抗体治療の重大な障害を克服し、インビボにおける調節応答 を長時間継続させる。しかし、このような調節Ｔ細胞のクローンを開発するため には、経費および労力を伴うプロセスである、弱毒化疾患誘導Ｔ細胞によるイン ビトロ培養が必要とされる。さらに、ヒトのような異系交配群においては、個体 間のＭｌ（Ｃの不一致により、これは高度に個別化された治療戦略となる。可能 性のある宿主に対しての移植片の反応を避けるために、調節クローンは、各個別 ）患者に対して誘導されることが必要であり、そして次に、そノ患者のみに再投 与される。

弱毒化疾患誘導Ｔ細胞クローンによる直接ワクチン投与もまたＥＡＥの治療とし て使用されている。疾患を移入し得るＭＢＰ特異的Ｔ細胞は、ガンマ線照射ある いは化学的固定化により弱毒化され、無投与ラットにワクチン投与される。ある 場合には、ワクチン投与された動物は、ＥＡＥ誘発の次の試みに対する耐性を示 す（Ｌｉｄｅｒら、前出；　ＣｏｈｅｎおよびＷｅｉｎｅｒ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ 、　Ｔｏｄａｙ　９：３３２−３３５　（１９８８）を参照のこと）。しかし、 このようなワクチン投与は、一貫性がな（、防御の程度は非常に多様である。Ｔ 細胞は、ワクチンとして全Ｔ細胞が投与される場合には、免疫応答を誘導する多 （の異なる抗原を含む。この現象は、０ｆｆｎｅｒら、Ｊ、　Ｎｅｕｒｏｉ＋＋ ｍｕｎｏ１．、２１：１３−２２　（１９８９＞により、全Ｔ細胞による免疫が 、これらのＴ細胞に対する遅延型過敏症（ＤＴＨ）応答（耳の浮腫の測定による ）を、ワクチン投与回数が増すほど、増加させることを示すことにより実証され た。しかし、正のＤＴＩ！応答が、防御された動物および防御されていない動物 の両方に認められた。ラノ）は、脳炎誘発性Ｔ細胞および対照Ｔ細胞の両ワクチ ン投与に対して同様に応答した。逆に、ＰＰＤ特異的Ｔ細胞系由来のＰＰＤ特異 的Ｔ細胞でのワクチン投与は、ワクチン細胞と同様に脳炎誘発性クローンに対す るＤＴＨを誘発したが、防御は認められなかった。疾患誘発細胞および対照細胞 の両方に対して、ワクチン投与されたラットが同様に応答することは、遅延型過 敏症により定量（細胞媒介免疫の測定）され、これらのＴ細胞上の多くの抗原が 免疫応答を誘導することを示している。従って、弱毒化疾患誘発Ｔ細胞でのワク チン投与は、そのＴ細胞表面の防御抗原に対する特異性の欠如、および、その抗 原に対する種々の免疫誘導による不利を招く。

ヒトの疾患治療法の候補としては、弱毒化Ｔ細胞によるワクチン投与は、上記の ＣＤＢ＋細胞の注入と同様の労力および個別化された治療法の必要性のために、 困難である。

Ｔ細胞活性化のもう一つの機構として、例えば、Ｗｈｉｔｅら、Ｃｅ１ｌ　５６ ：２７−３５　（１９８９＞およびＪａｎｅｖａｙ、　Ｃｅ旦６３：６５９−６ ６１　（１９９０）に記載されているように、内因性および外因性の超抗原が、 ■細胞刺激を媒介するとことが示唆されてきた。

本明細書に使用されているように、「超抗原」とは、ＴＣＲのβ鎖上の特定の部 位で、■細胞に優先的に結合し、Ｔ細胞を高頻度で刺激する抗原あるいはそのフ ラグメントを意味する。

このような超抗原は、内因性あるいは外因性であり得る。「頻度」とは、抗原に 応答するＴ細胞の割合であり、超抗原に対する応答では約１１５からｌ／１００ である。従って、超抗原は、Ｔ細胞応答頻度が約１／１０’から１／１０’の範 囲とかなり低い通常の抗原とは異なる。　超抗原は、特定のＶβと結合してＴ細 胞を活性化する。種々のＴＣＲの超抗原結合部位は、ＴＣＨの通常の超可変領域 （ＣＤＩ’ｌ）とは異なる。これらのＣＤＲは、ＭＨＣと複合体化される通常の 抗原の結合の原因となると考えられるＴＣＨの領域を示す。

本発明は、自己免疫疾患を含むＴ細胞媒介の病理症状に対する免疫治療の効果的 な方法を提供する。この方法は、前に示唆された治療法に関連する多くの問題を 回避する。異型抗体の受動投与ではなくワクチン投与により、宿主自身の免疫系 が動員され、自己攻撃性Ｔ細胞を抑制する。従って、その抑制は、持続的であっ て、その抑制を有効にする任意あるいは全ての免疫学的機構を含み得る。この多 面性応答は、モノクローナル抗体の受動投与、あるいは、ヒトのＭＨＣ不一致の ために、宿主に対する移植片の反応を避けるように、高度に個別化された治療法 を必要とする、エクソビボ誘導調節Ｔ細胞クローンの受動投与により達成される 一元的な抑制よりもより効果的である。本発明の方法は、特定のＴ細胞表面上の 防御抗原に対しての特異性を欠如し、そして、その抗原に対する種々の免疫を誘 導する、弱毒化疾患誘発Ｔ細胞によるワクチン投与よりもさらに効果的である。

さらに、弱毒化Ｔ細胞によるワクチン投与は、エクソビボ誘導の調節Ｔ細胞につ いて上述したように、同様の労力および個別化された治療法の必要性のために、 困難である。

自己免疫疾患に関しては、本発明のワクチンペプチドは、自己免疫疾患を媒介す る特定のＴ細胞由来のＴＣＲｌあるいは、その免疫学的フラグメントを含む。こ のワクチンは、Ｔ細胞クローンから実質的に精製された全ＴＣＲ１個別のＴ細胞 レセプタ−鎖（例えば、アルファ、ベータなど）、あるいは、このような鎖の一 部であり、単独あるいは組合せのいずれかであり得る。ワクチンは均質であり得 、例えば、単一ペプチドであり、または、１つ以上の型のペプチドから構成され 得、その各ペプチドはＴＣＨの異なった部分に対応する。さらに、これらのペプ チドは、■細胞媒介の病理症状に寄与する異なるＴＣＲ由来であり得る。これら のワクチンペプチドは、調節応答を誘起し得る限りは、種々の長さであり得る。

好ましくは、このようなペプチドの長さは、約５から１００アミノ酸の間であり 、さらに好ましくは約６から２５アミノ酸である。

具体的な実施態様では、免疫ペプチドは、被検体がＭＳあるいはＲＡを有する場 合には、β鎖ＶＤＪ領域のアミノ酸配列を有り得る。これらのペプチドの任意の 免疫原性部分が有効であり得、特に、ＭＳに対しては、Ｖβ４およびＶβ１２そ れぞれの、配列５ＧＤＱＧＧＮＥ　（配列番号ｌ）あるいはＣＡＩＧＳＮＴＥ　 （配列番号２）　、ＲＡに対しては、配列ＡＳＳＬＧＧＡＶＳＹＮ　（配列番号 ３）　、ＡＳＳＬＧＧＥＥＴＱＹＦ（配列番号４）　、ＡＳＳＬＧＧＦＥＴＱＹ Ｆ　（配列番号５）あるいはＡＳＳＬＧＧＴＥＡＦＦ　（配列番号６）を実質的 に宵する部分が有効であり得る。

従って、ペプチドの免疫原性を破壊しないアミノ酸置換がなされ得る。さらに、 このペプチドは、キャリアに結合されて、さらにその免疫原性を増加し得る。あ るいは、全Ｔ細胞レセプター、あるいは、これらの配列を含むＴＣＲフラグメン トが、直接にワクチン投与に使用され得る。

さらなる具体的な実施態様では、■細胞レセプター、全Ｔ細胞、あるいは、■β １７、Ｖβ１４またはＶβ３を含むＴＣＲフラグメントが、■細胞媒介の病理症 状を有する個体を免疫してこの病気を治療あるいは予防するために使用され得る 。具体的な実施態様では、リウマチ様関節炎がそのように治療され得る。個体に 誘起された免疫応答は、Ｖβ１７、Ｖβ１４またはＶβ３を有するＴ細胞を中和 あるいは殺傷し、そして、このようなＶβを有するＴ細胞の有害な影響を予防あ るいは治療する。さらに、このＶβ１７、Ｖβ１４またはＶβ３が、他の自己免 疫疾患あるいは一般的な自己免疫疾患を媒介する病原性Ｔ細胞上のＴ細胞レセプ ターに共通である限り、このようなワクチンは、このような他の自己免疫疾患を 改善するのにもまた有効である。

本明細書に使用されているように、［Ｖβ１７Ｊとは、３つのＴ細胞レセプター の特定のヒトベータ鎖可変領域のことである。

Ｖβ１７１ｔ、以下ノアミノ酸配列を有する：　ＭＳＮＱＶＬＣＣＶＶＬＣＦＬ ＧＡＮＴＶＤＧＧ　ＩＴＱ　５ＰＫＹ　ＬＦＲＫＥＧＱＮＶＴＬＳＣＥＱＮＬＮ ＨＤＡＭＹＷＹＲＱＤＰＧＱＧＬＲＬ　Ｉ　Ｙ　ＹＳ　Ｑ　Ｉ　ＶＮＤＦＱＫＧ ＤＩＡＥＧＹＳＶＳＲＥＫＫＥＳＦＰＬＴＶＴＳＡＱＫＮＰＴＡＦＹＬＣＡＳＳ 　（配列番号７）。

［Ｖβ１４Ｊとは、他のＴＣＨの特定のヒトベータ鎖可変領域のことである。Ｖ β１４は、以下のアミノ酸配列を有する：　ＭＧＰＱＬＬＧＹＶＶ　ＬＣＬＬＧ ＡＧ　Ｐ　ＬＥＡＱＶＴＱＮＰ　ＲＹＬ　ＩＴＶＴＧＫ　Ｋ　ＬＴＶＴＣＳＱＮ ＭＮＩ（ＥＹＭＳＷＹＲＱＤＰＧＬＧＬＲＱ　Ｉ　ＹＹＳＭＮＶＥＶＴＤＫＧＤ ＶＰＥＧＹＫ　ＶＳＲＫ　ＥＸ　ＲＮＦＰＬ　Ｉ　ＬＥ　５ＰＳＰ　ＮＱＴＳＬ ＹＦＣＡＳ　r （配列番号８）。

「Ｖβ３」とは、特定のヒトベータ鎖可変領域のファミリーのことである。Ｖβ ３ファミリーの２つのメンバーが、Ｖβ３．１およびＶβ３，２として同定され た。Ｖβ３．１は、以下のアミノ酸配列を有すル：　ＭＧＩＲＬＬＣＲＶＡＦＣ ＦＬＡＶＧＬＶＤＶＫＶＴＱＳＳＲＹＬＶＫＲＴＧＦＪＶＦＬＥＣＶＱＤＭＤＨ ＥＮＭＦＷＹＲＱＤＰＧＬＧＬＲＬＩＹＦＳＹＤＶＫＭＫＥＫＧＤＩＰＥＧＹＳ ＶＳＲＥＫＫＥＲＦＳＬＩＬＥＳＡＳＴＮＱＴＳＭＹＬＣＡＳＳ　（配列番号９ ）、Ｖβ３２は、以下のアミノ酸配列を有する：　ＭＧＩＲＬＬＣＲＶＡＦＣＦ ＬＡＶＧＬＶＤＶＫＶＴＱＳＳＲＹＬＶＫＲＴＧＥＫＶＦＬＥＣＶＤＭＩ）ＨＥ ＮＭＦＷＹＱＲＱＤＰＧＬＧＬＲＬＩＹＦ。

超可変領域あるいは接続領域は、本発明のワクチンに有用である。本発明に有用 な超可変領域には、ＣＤＲＩＳＣＤＲ２、ＣＤＲ３およびＣＤＲ４が含まれる。

Ｖβ３、■β１４およびＶβ１７のＣＤＲＩ、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ４超可変 領域のアミノ酸配列を、図１に示す。

Ｖ（Ｄ）Ｊ領域としても知られているＣＤＲ３は、この領域に対応するペプチド により誘起されたＴ細胞免疫が、特定の抗原に対して特異性が強いと考えられる ので、本発明のワクチンとして有用である。成熟化以前の■、ＤおよびＪ領域遺 伝子の組み換えにより、この領域を越えるアミノ酸配列は、各Ｔ細胞およびその クローンに実質的に固有である。

しかし、生殖細胞系のエレメントとして、ＣＤＲ２領域もまた、１．１５、およ び特にＲＡのようなヒト疾患に有用である。ＲＡの研究の結果は、βＶＤＪ領域 中区域中る配列相同性の発生率がわずかなので、活性化されたＴ細胞のうち限ら れた数のＶβのみが溝膜標的組織を浸潤することを示す。従って、ＣＤＲ２領域 に対応するペプチドは、本発明のワクチンとしての使用の生存可能な（ｖｉａｂ ｌｅ）代替である。例えば、■β３のＣＤＲ２領域、ＤＰＧＬＧＬＲＬＩＹＦＳ ＹＤＶＫＭＫＥＫＧ　（配列番号７５）　、Ｖβ１４１７）ＣＤＲ２領域、ＤＰ ＧＬＧＬＲＱＩＹＹＳＭＮＶＥＶＴＤＫＧ　（配列番号７６）、あるいは、Ｖβ １７のＣＤＲ２領域、ＤＰＧＱＧＬＲＬＩＹＹＳＱＩＶＮＫＦＱＫＧ　（配列番 号７７）が使用され得る。

所望の免疫応答を刺激するための免疫原として作用する、レセプターあるいはそ の免疫原性フラグメントの能力に影響しない、これらの配列の改変は予期され、 ＴＣＲフラグメントの定義に含まれる。可変領域は、ＴＣＨの任意のＤおよびＪ セグメントに接続され得る。さらに、Ｖβ３、Ｖβ１４およびＶβ１７の免疫原 性を示すフラグメントもまた、それぞれに、「Ｖβ３」、「Ｖβ１４」および「 Ｖβ１７」の定義に含まれる。

「実質的に純粋」とは、ＴＣＲが、通常は天然で結合する他の生物学的部分を実 質的に含まないことを意味する。このような実質的に純粋なＴＣＲあるいはその フラグメントは、例えば、当業者に公知の手段により、合成され、組み換え産生 され得る。さらに、全ＴＣＲは酵素処理されて、このようなフラグメントを産生 じ得る。

他の実施態様では、ワクチンペプチドは、病原性ＴＣＨに保存されている高度の 相同配列を含むＶβ領域に対応し得る。これらの保存されている相同領域には、 同じＶβを有するＴ細胞に共通である、ＣＤＲＩおよびＣＤＲ２のような通常の ＣＤＲ，ならびに、異なるＶβを有する病原性ＴＣＨに共通であり得る超抗原結 合部位もまた含まれる。超抗原結合部位はまた、ＣＤＲ４超可変超可的領域内は 周囲にあることが知られている。

本発明のワクチンは、ＴＣＲあるいはその免疫原性フラグメントに対応して長さ が変えられたペプチドを含む。ワクチンペプチドは、そのＴＣＲを他の非病原性 ＴＣＲと区別するＴＣＲ領域に対応し得る。このような特定の領域は、例えば、 Ｖ（Ｄ）Ｊ接続領域の範囲の短い配列などの、それぞれのＴＣＲポリペプチド鎖 の種々の領域内に位置し得、免疫応答をこの単一の決定基を有するこれらのＴ細 胞のみに対して限定する。

ワクチンは、自己免疫応答を示す、あるいは、示すおそれのある宿主に投与され る。特定の自己免疫疾患の正確な臨床診断が、関連する疾患に特異的なＴＣＲワ クチンの投与の正当な根拠となる。明白な臨床疾患の徴候よりも自己免疫機構が 先だつ疾患（例えば、１型糖尿病）の場合、予防的適用が正当化される。従って 、家系的疾患を有する個体、および、確実な予後指標により危険性がある個体は 、予防的に治療されて、その徴候が現れる以前に自己免疫機構が阻止され得る。

ＴＣＲペプチドは、薬学的に受容可能な媒体を含む、多くの可能な処方で投与さ れ得る。短いペプチドの場合には、そのペプチドは、免疫原性を増大するために ＫＬＨのようなキャリアと連結され得る。ワクチンは、アジュバントを含み得る か、あるいはアジュバントと連結されて投与され得る。それらのアジュバントの うちいくつかは当業者に公知である。ワクチンによる最初の免疫後、さらに追加 免疫が提供され得る。ワクチンは、通常の方法で免疫学的応答を誘起するために 十分な投与量が投与され得る。このような投与量は、当業者により容易に決定さ れ得る。

免疫に使用される適切なペプチドは、以下のように決定され得る。標的抗原と反 応する疾患誘発Ｔ細胞クローンが、感染個体から分離される。このようなＴ細胞 は、好ましくは、尋常性天庖癒の場合は病斑、多発性硬化症の場合は中枢神経系 （ＣＮＳ）　、あるいは、リウマチ様関節炎の場合は滑液または組織のような、 活性な自己攻撃活性部位から得られる。あるいぼ、このようなＴ細胞は、感染個 体の血液から得られ得る。これらの自己攻撃性Ｔ細胞からのＴＣＲ遺伝子は、次 に配列決定される。

疾患誘発Ｔ細胞中から（非病原性Ｔ細胞に比較して）選択的に提示されたＴＣＲ あるいはその部分に対応するポリペプチドが、次に、ワクチンとして選択され、 上述のように製造および使用され得る。病原性Ｔ細胞の分離ための他の方法は、 １９８８年１２月２９日公開の、ＰＣＴ公開番号ＷＯ３８／１０３１４において Ａｌｂｅｒｔｉｎｉにより提供されている。

あるいは、ワクチンは、上記のペプチドの内部イメージである抗イデイオタイプ 抗体を含み得る。このような抗イデイオタイプワクチンの製造、選択および投与 の方法は、当該分野では公知である。例えば、ＥｉｃｈＩＩｌａｎｎら、ＣＲＣ Ｃｒ１ｔｉｃａｌ　Ｒｅｖｉｅｗｓ　ｉｎ　１ｍｍｕｎｏｌｏ　７：１９３−２ ２７　（１９８７）を参照のこと。これは参考として本明細書に援用されている 。

本発明のさらなる局面においては、■細胞媒介の病理症状に関連するＴ細胞の増 殖を抑制する方法も、予期されている。このような方法には、上記の方法に従っ たＴ細胞レセプターの結合ハードナーの決定、および、Ｔ細胞の増殖を抑制する ためにこのような結合パートナ−の有効量を、適切な形態で投与することが含ま れる。この方法は、例えば、自己免疫疾患の場合のような、自己抗原に対する寛 容性を形成するために用いられ得る。

本発明はさらに、Ｔ細胞の病理症状に関与するＴ細胞の増殖を抑制するために、 Ｔ細胞レセプターとそのＴＣＲ結合パートナ−との結合を阻止することによって 、Ｔ細胞の病理症状を予防あるいは治療する方法に関する。Ｔ細胞レセプターの 結合パートナ−への付着を竜宮する結合部位で、Ｔ細胞レセプターあるいはその 結合パートナ−と反応するリガンドが、使用され得る。このようなリガンドは、 例えば、Ｔ細胞レセプターあるいはその結合パートナ−に対する特異性を有する 抗体であり得る。

本発明はまた、個体において、Ｖββ含有糊細胞特に、Ｖβ３、■β１４および Ｖβ１７含有Ｔ細胞を、細胞障害的あるいは細胞増殖抑制的に治療することを包 含する、個体におけるＴ細胞媒介の病理症状を予防あるいは治療する方法を提供 する。Ｖββ含有糊細胞、例えばＲＡまたはＭＳのような病理症状を媒介するＴ 細胞レセプターのＶβ領域に選択的に結合する、細胞障害あるは細胞増殖抑制性 の薬剤により治療される。薬剤は、放射活性部分あるいは化学治療部分に付着し た抗体であり得る。このような付着物および有効な薬剤は、当該分野に公知であ る。例えば、Ｈａｒｌｏｔ、　ＥおよびＬａｎｅ、　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　Ａ 　Ｌａｂｏｒａｔｅｒ　Ｍａｎｕａｌ、　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏ ｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　（１９８８）を参照のこと。

これは本明細書に参考として援用されている。

ユクニＬ立曇Ｕ久 リウマチ様関節炎（ＲＡ）は、Ｔ細胞媒介の自己免疫疾患である。本発明は、リ ウマチ様関節炎の患者の滑液中の活性化Ｖβ３、Ｖβ１４およびＶβ１７　Ｔ細 胞のクローン浸潤に関する。検査されたほとんどの患者の疾患組織におけるこれ らＴ細胞の存在、それらのクローン性、および、滑液中の付着細胞に対するこれ らＴ細胞の細胞障害性により、ＲＡ発病に関して、これらＶβを有するＴ細胞が 主要な役割を有することが実証される。

ＲＡ患者の滑液組織中の活性化Ｔ細胞群は、ＩＬ−２レセプター陽性（ＩＬ−２ Ｒ＋）滑液Ｔ細胞から単離されたＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のｍＲＮＡを分析 することにより試験された。実施例Ｘ（Ｃ）に記載のように、ＴＣＲｍＲＮＡを ポリメラーゼチェーン反応（ＰＣＲ）のプロトコルにより増幅した。このＰＣＲ 法は種々の任意ノ所望のＶβ遺伝子エレメントを含む、ヒ）　ＴＣＲβ鎖遺伝子 を増幅するように立案されている。この分析で、クローンＶβ１７の再配列が、 １Ｌ２−Ｒ十群中に増加していることが認められた。このことは、Ｖβ１７　Ｔ 細胞がＲＡの発病に関連するであろうことを示している。Ｖβ１７を有するＴ細 胞クローンであるＣＤＡ＋が、一つの溝膜組織標本から単離され、ＣＤＡ＋がイ ンビトロで滑液付着細胞に細胞障害性を及ぼすことより、■β１７　Ｔ細胞がＲ Ａに直接関与することが支持される。

さらなる研究が、初期の研究で、■β１７Ｔ細胞が、Ｖβ共通プライマー（ｃｏ ｎｓｅｎｓｕｓ　ｐｒｉｍｅｒ）への偏った増幅により普及しなかったことを確 認するため、および他のＴＣＲＶβ遺伝子ファミリ−のＲＡへの関与を試験する ために実施された。実施例ＸＩに記載のように、活性化（ＩＬ２−Ｒ＋）滑液Ｔ 細胞由来の［ｌＮＡを、Ｖβ特異ＰＣＲプライマー群を用いたＰＣＲ増幅により 分析した。この分析では、■β１７転写物は、試験された５人の患者のうち４人 に見いだされた。このことは、ＶＢ１７のＲＡへの関連を確実にし、Ｖβ共通プ ライマーの有用性を証明する。さらに、ＶＢ９１４が、５人のＲＡ、！者の４人 に認められ、ＶＢ２およびＶＢ９が５人の患者の３人に検出された。

これら種々のＶβポリペプチドの配列を、ＶＢ１７との相同性について調べた。

結果を表１に示す。

ｈＶ８　Ｌｏｏｔ　（９４ａａ） ｍＶ８６　６９　、　ＩＪ　（９４ａａ）ｈＶＢ３　５Ｂ、５％　（９４ａａ） ｈＶＢ１２　、１　５：］　、　２ｔ　（９４ａａ）ｈＶＢ１４　５２．ＩＪ　 （９４ａａ）ｍＶＢ７　５Ｌ７ｔ　（８９ａａ） ｈＶＢ９　：３１０！ｋ　（９４ａａ）表１に示されるように、マウス■β６が 最も相同であり、続イテ、ｈｖβ３、ｈｖβ１２．ｉ、ｈＶβ１４、そしてｍＶ β７である。３つのヒト■β、すなわちＶＢ２、ＶＢ１４およびＶＢ１７が、Ｒ Ａ患者の溝膜に検出された。ＶＢ１２．ｌは、ＶＢ１７とかなり全体にわたり相 同であるにらかかわらず、溝膜中ではほとんど存在しなかった。これに反して、 ＶＢ９はＶＢ１７とわずかに相同であるが、５つの滑液試料のうち３つに認めら れた。

ＲＡ患者の滑液中に検出されたＶβの中で、Ｖβ９以外の全Ｖβに多（の相同性 が見いだされるのは驚（べき発見である。このＶβはＣＤＲ２領域にカルボキシ が位置する１５個のアミノ酸の隣接範囲にある。これらのＶβおよび他のヒトな らびにマウスＶβの１５アミノ酸を、表２に示す。β鎖内では、この保存領域は 、以前に超抗原結合部位を含むことが示された領域に対応する。

（以下余白） 及−主 Ａ　′−１，の　ム−？１（た　博、色合（１ｈＶＢ１７　ＥＧＹＳＶＳＲＥＫ ＫＥＳＦＰＬ　１１ｈＶ８１４　ＥＧＹＫＶＳ［ＫＲＮＦＰＬ　６６．７　１３ ｈＶＢ１２．Ｉ　ＤＧＹＳＶＳＲ５ＫＴＥＤＦＬＬ　６６．７　１４ｈＶ８９　 ＮＲＦＳＰＫＳＰＤＫＡＪ（ＬＮＬ　＜：］Ｏ１５ｍＶＢ６　ＥＧＹＤＡＳｇｆ ｉＫＫＳＳＦＳＬ　７］、コ　１６ｍＶＢ７　ＫＧＹＲＶＳえｑ＄工ＨＦ５Ｌ　 ６４．３　１７ｍＶＢＢ、２ａ　ＤＧＹＫＡＳＲＰＳＱＥＮＦＳＬ　１ａｍＶＢ ８−＋２ｃ　、、、、、、、、、、）ｆｇ、、、　１９ｈＶ８１３．２　ＤＧＹ ＮＶＳＲＬＫＫＱＮＦＬＩズ扛Σ２０％Ｈ＝　Ｖｐ１１Ｌ比斡（ｒｔ％Ｆａ針体 外因性超抗原５ＥＣ２は、本明細書に参考文献として援用する、Ｃｈｏｉら、Ｎ ａｔｕｒｅ　３４６：４７１−４７３　（１９９０）ｌこｌｔ己載されているよ うに、ＶＢ１３２上の部位に結合して、ヒ）ＶＢ１３．２Ｔ細胞を刺激する。

この結合部位の配列は、ＶＢ１３２の最後の１１個のアミノ酸として、表２に示 す。

内因性超抗原であるＭｉｓ−１ａの結合部位もまた、本明細書に参考文献として 援用する、Ｐｕ１ｌｅｎら、Ｃｅ１１６１＋１３６５−１３７４　（１９９０） に記載のように、この領域にマツプされている。Ｍｌｓ結合部位としてのこの領 域の同定には、■βＢ、２ａｓ実験用マウスに共通であるＶＢ８．２イソ型（ｉ ｓｏｆｏｒｍ）、および野生マウスに見いだされるβ鎖であるＶＢ８．２ｃが含 まれた。これらのβ鎖ポリペプチドは、機能的には、Ｍｉｓ−１ａと異なった反 応性により、ならびに、構造的には、５個のアミノ酸の相違により、区別される 。７０位および７１位の残基が特に重要である。応答β鎖であるＶＢ８．２０は 、これらの位置にリジンとグルタミン酸をそれぞれ有する。７０位および７１位 のりシン−グルタミン酸対をコードするための非応答性の遺伝子の特異的変異誘 発は、その非応答β鎖Ｍｉｓ−１ａ−反応を示した。このことにより、その領域 が超抗原結合の１つであることを確認する。従って、外因性および内因性の画題 抗原は、表２に示されている１５個のアミノ酸の相同配列の近くに結合し得る。

さらに、リシン−グルタミン酸対チャージモチーフ（ｃｈａｒｇｅ　ｍｏｔｉｆ ）は、Ｍｉｓ−１ａ反応性に関連する。Ｍｌ　ｓ−１ａ反応性でのこのチャージ モチーフの関連は、マウスＶβ６およびＶＢ７．２つの他のＭｉｓ−１ａ反応性 ネズミβ鎖中のその存在により確認される。グルタミン酸残基が続くリシンある いはアルギニンのＶＢ８．２ｃ、ＶＢ６およびＶβ７チヤージモチーフは、表２ において下線をつけている。従って、Ｍｌｓ−１ａに対する超抗原結合部位は、 局所的な相同領域内に含まれるこのチャージモチーフにより特徴づけられる。

本発明は、ヒトｖβ３、ＶＢ３１４およびＶＢ１７が、Ｍｉｓ−１ａ結合部位に 対応する領域を有する、予期されない発見に関する。これらの３つのヒトＶβは 、有意に、全９４アミノ酸配列内の全体にわたる相同性、および■Ｖβ６および ■Ｖβ７を有する１５個のアミノ酸内の局所的な相同性を示す。これらの各Ｖβ は、リジンあるいはアルギニン／グルタミン酸対を有し、これらには、表２中で は下線をつけて、用語「チャージモチーフ」が意味するものを示す。ＶＢ３、Ｖ Ｂ１４およびＶＢ１７に対して、全体にわたって高度に、相同性および局所的な 相同性を示すＶＢ１２゜１はチャージモチーフを欠く。ただし、たぶん５人のＲ Ａ患者の１人にだけ溝膜中に存在したことはおそらく説明できない。

ＶＢ９は、■β　３．１４あるいは１７に対する全体にわたる相同性および局所 的な相同性を示さないし、チャージモチーフもない。

ＶＢ３、ＶＢ１４およびＶＢ１７を有するＴ細胞の存在は、ＲＡの活性化滑液Ｔ 細胞中で実証された。他の既知のＶβと比較して、これらの３つのβ鎖ポリペプ チドは、全体および局所配列相同性、および明かな超抗原結合性チャージモチー フを有する。

これらの結果は、超抗原によるＶβ特異Ｔ細胞活性化が、ＲＡにおける役割をな すことを示す。

ＶＢ３、ＶＢ１４およびＶＢ１７は、唯一の既知のヒ）Ｖβ鎖である。

このヒトｖβ鎖は、局所的な配列相同性と、同定されたチャージモチーフにより 特徴づけられる、この明白な超抗原結合部位を有する。しかし、他のＶβがこの ような結合部位を含むことが知られるようになり得る可能性はある。従って、チ ャージモチーフを含む実質的に純粋なＶＢ３、ＶＢ１４あるいはＶＢ１７の配列 は、本発明のワクチンでは免疫原として使用され得る。

例えば、ＶＢ３、ＶＢ１４およびＶＢ１７について表２に示す配列あるいはその フラグメントが使用され得る。これら３つのＶβ配列を全て含む場合を含めて、 任意の組合せを含むワクチンが、Ｔ細胞関連疾患を改善するために有効に使用さ れ得る。

さらに、ＲＡ患者に観察されるβ鎖の他の共通Ｖ（Ｄ）Ｊ配列は、表３に挙げる 。２つの個別のＲＡ研究から得られた結果では、４つの異なるクローン由来のβ ＶＤＪが配列相同性を示す。これは、適切なワクチン候補として、ＣＤＲ３領域 に対応するペプチドが有用であることを示す。

＝　ｔ：Ｋｉｔ：Ｌ＋出９４β　ｖＯｙＩ＊％　毀　Ｖ　Ｒ１・遣　リ３ＪＬ醪 １Ｌ−１０１２ＶＳ１４　ＡＳＳＬＧＧＡＶＳ−ＹＮ　ＪＢ２．１３１０１３Ｖ ８３　ＡＳＳＬＧＧＥＥＴＱＹＦ　ＪＢ２．５　４ＣＶＳ２　ＡＳＳＬＧＧＦＥ ＴＱＹＦ　ＪＢ２．５　５Ａ　ＶＳ２　ＡＳＳＬＧＧＴＥＡ−ＦＦ　、７Ｂ１． １　６本発明は、ＶＢ３、ＶＢ１４およびＶＢ１１と示される３つのＴＣＲのβ 鎖の特異的可変領域が、Ｔ細胞媒介の病理症状、特にヒト患者におけるリウマチ 様関節炎に密接に関連するという発見を提供する。この発見により、本発明を実 施する方法を用いて、リウマチ様関節炎の検出、予防および治療が可能となる。

ＥＡＥに対して上記実施されたものと同様の治療の試みが、当業者によりリウマ チ様関節炎に適応され得る。

特に、本発明は、個体におけるＴ細胞媒介の病理症状に対する感受性を診断ある いは予測する方法を提供する。この方法には、個体からの試料中のＶＢ３、ＶＢ １４あるいは■β１７由来のβ鎖可変領域を有するＴ細胞、病理症状を示すよう なＶβ含有Ｔ細胞の異常レベルでの存在、あるいは病理症状に対する感受性、の 検出が包含される。Ｖβ含有Ｔ細胞は、定性あるいは定量的に正常個体のＴ細胞 と比較され得る。このような診断は、例えば、β鎖可変領域Ｔ細胞レセプターに 関連する、非リウマチ様関節炎では生じない７２部分を検出することにより実施 される。本発明のＶβは、例えば、個体のＶβに特異的に結合し得る検出可能な リガンドにＶβを接触されることにより検出され得る。多くのこのような検出可 能なリガンドは、当該分野では公知であり、例えば、抗体結合酵素がある。ある （箇よ、目的の個体のＶβに相補的な、核酸配列をコードするヌクレオチドプロ ーブが、例えば、実施例Ｘおよびｘｌに教示されて０るように、このようなＶβ 含有Ｔ細胞を検出するのに使用され？与る。

本発明はまた、ＶＢ３−１Ｖβ１４−あるいはＶＢ１７−含有Ｔ細胞レセプター のその結合パートナ−への付着を阻止することを包含するＴ細胞媒介の病理症状 を予防あるいは治療するための方法を提供する。一つの実施態様では、付着は、 リガンドをＶＢ３、ＶＢ１４あるいはＶＢ１７に結合することにより阻まれる。

他の実施態様では、付着は、リガンドをＶＢ３、ＶＢ１４あるいはＶＢ１７の結 合パートナ−に結合することにより阻まれる。付着は、公知の方法、例えば、抗 体の個体のＶβとの結合、あるいは付着を物理的に阻害することによる抗体のそ の結合パートナ−との結合により阻止される。

五及庄ユ進且 ＭＳとＥＡＥと間の臨床的および組織学的類似性により、ＭＢＰ反応性Ｔ細胞が 、１つの役割をなすことが示されてはいたが、多発性硬化症（ＭＳ）の原因であ るＴ細胞は以前には同定されていなかった。ＥＡＥのラットおよびマウスモデル では、ＭＭＣ制限反応およびＭＢＰ−ペプチド抗原特異性が異なることが知られ ているにもかかわらず、ＭＢＰ反応性の脳炎誘発性のＴ細胞は、β鎖Ｖ（Ｄ）Ｊ アミノ酸配列の著しい保存を示す。本発明の一つの実施態様では以下の観察を前 提としている。ＭＳ患者由来のヒトミニリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）反応性 Ｔ細胞系は、ＶＢ２のＶ（Ｄ）Ｊアミノ酸配列を伴ったＴＣＲβ鎖を有する。こ のＶＢ２のＶ（Ｄ）Ｊアミノ酸配列は、表４に示すように、ＭＳの動物モデルの 実験的アレルギー他層を髄炎（ＥＡＥ）でのＭＢＰ反応性Ｔ細胞媒介の病理症状 由来のβ鎖の配列と相同性を有している。この発見は、ＭＳの発病へのＭＢＰ反 応性Ｔ細胞の関与を実証し、ＥＡＥの予防のための本明細書に記載されているペ プチドと同じＴＣＲペプチドが、ＭＳの治療に適切であり得ることを実証する。

表４に示すように、■β１２ノＶＤＪ配列、ＣＡＩＧＳＮＴＥ　（、配列番号２ ）、およびＶβ４１７）ＶＤＪ配列、５ＧＤＱＧＧＮＥ　（配列番号ｌ）が、Ｍ Ｓ患者に観察された。

−ｔトＶＤＴｍｌ＋Ｊｒ＝ＮｒＭＺＭｓ　２．ｓｃｓβ會麺ＶＤＪ％ｅ５’Ｊ” ＪＢ８．２　Ｓ　Ｓ　Ｄ　Ｓ　Ｓ　Ｎ　Ｔ　Ｅ　２１ＶＢＢ、２　Ｓ　Ｓ　Ｄ　 Ｓ　Ｇ　Ｎ　Ｔ　Ｅ　２２ＶＢ４　Ｓ　Ｇ　Ｄ　Ｑ　Ｇ　Ｇ　Ｎ　Ｅ　１ＶＢ１ ２　ＣＡＩＧＳＮＴＥ　２ ＣＳＦ由来の１人のＭＳ患者の活性細胞を分析し、おもにＶβ１４およびＶβ３ であることを見いだした。両方の場合に、Ｖβ１４およびＶβ３の優勢なりロー ンが存在した。これらの発見は、同じＶβに関連するＲＡの研究から得られた結 果が、ＭＳを含む他の自己免疫疾患に及び得ることを示す。

これに関連して、本発明は、１歯類ＥＡＥに見いだされるＶＤＪ配列に相同なβ 鎖ＶＤＪフラグメント、例えば、５ＧＤＱＧＧＮＥ　（配列番号ｌ）およびＣＡ ＩＧＳＮＴＥ　（配列番号２）が、ヒト患者の多発性硬化症に密接に関連すると いう発見に関している。この発見により、本発明で示した方法を用いて、多発性 硬化症の検出、予防、および治療が可能となる。本明細書に示したＥＡＥに対す るのと同様の治療法が、当業者により多発性硬化症に適応され得る。

特に、本発明は、個体における多発性硬化症に対する感受性を診断あるいは予測 する方法を提供する。この方法には、Ｖβ４あるいはＶβ１２のような種々のＶ β、および、特に、実質的ニ配列５ＧＤＱＧＧＮＥ　（配列番号１）あるイＩｔ 　ＣＡ　ＩＧｓＮＴＥ　（配列番号２）を有するＴ細胞の検出、および個体から の試料中に、多発性硬化症あるいは多発性硬化症に対する感受性を示す配列の存 在°の検出が包含される。その配列は、例えば、Ｔ細胞あるいはＴＣＲを検出可 能なリガンドに接触させることにより検出され得る。多（のこのようなリガンド が、当該分野では公知であり、例えば、その配列に特異的である酵素結合抗体あ るいは他の標識抗体である。あるいは、その配列をコードする核酸に相補的なヌ クレオチドプローブが、例えば、実施例■に教示されている様に使用され得る。

本発明はさらに、多発性硬化症を予防あるいは治療するための方法を提供する。

この方法には、■β４、■β１２あるいはそのフラグメント、例えば、実質的に 配列５ＧＤＱＧＧＮＥ　（配列番号ｌ）あるいはＣＡＩＧＳＮＴＥ　（配列番号 ２）を含む種々のＶβを含有するＴ細胞レセプターの、その結合パートナ−への 付着を阻むことが包含される。一つの実施態様では、付着は、リガンドのその配 列への結合により阻まれる。他の実施態様では、付着は、リガンドの結合パート ナ−への結合により阻まれる。付着は、物理的に付着をブロックするように、抗 体のこれらＶβヘノ結合、特に配列５ＧＤＱＧＧＮＥ　（配列番号ｌ）あるいは ＣＡＩＧＳＮＴＥ（配列番号２）への結合のような、公知の方法により阻まれる 。

本発明はまた、個体における多発性硬化症の予防および治療の方法を提供する。

この方法には、個体における、Ｖβ４、Ｖβ１２およびそれらのフラグメントを 含む種々のＶβを含有するＴ細胞、特に、個体に実質的に配列５ＧＤＱＧＧＮＥ 　（配列番号１）あるいはＣＡＩＧＳＮＴＥ　（配列番号２）を有するＴ細胞を 、細胞障害的あるいは細胞増殖抑制的に処理ごとを包含する。一つの実施態様で は、Ｔ細胞は、これらのＶβあるいはそれらの免疫原性フラグメントに選択的に 結合する細胞障害性あるいは細胞増殖抑制性の作用剤で処理される。この作用剤 は、例えば、放射活性部分あるいは化学治療部分に付着される抗体であり得る。

５、　のＴ　゛ ＴＣＲワクチン投与の用途を例示するために、自己免疫疾患に一層いて考察した 。しかし、Ｔ細胞リンパ腫は、この型の治療を受け入れ得る他のＴ細胞病理症状 である。Ｔリンパ腫の治療におけるこの技術の適応は、　実質的には同じ様式で 実施される。

しかし、より容易に病原性Ｔ細胞が単離されるという１つの点により、この技術 は、Ｔ細胞増殖性疾患により一層容易に適応され得る。一旦、クローンが単離さ れると、この技術は、本明細書に記載の方法で適応される。特に、■細胞リンパ 腫のＴＣＲ遺伝子は配列決定され、それらＴＣＨの適切な領域が同定され、そし てワクチンとして使用される。ワクチンは、１つあるいは複数のペプチドを含み 得、従来の手段により、アジュバントを伴って、あるいは伴わずに、薬学的に受 容可能な処方剤として投与され得る。

ｌミニ１迭 本発明はさらに、遺伝子療法によるＴ細胞媒介の病理症状を治療あるいは予防す る代替法に関する。この方法では、ＴＣＲあるいはそれらの免疫原性フラグメン トをコードする核酸が、適当なデリバリ−システム、例えば、プラスミドに挿入 される。核酸は、ＴＣＲ，それらの免疫原性フラグメント、あるいは本発明にお いてワクチンとして使用され得る抗イデイオタイプ抗体をコードするＤＮＡある いはＲＮＡであり得る。このよなりＮＡあるいはＲＮＡは、当該分野で既知の標 準的な方法により単離され得る。この単離された核酸は、次に、周知の方法によ り適切なベクターに挿入され得る。このような方法は、例えば、本明細書に参考 文献として援用する、Ｍａｎｉａｔｉｓらによる、し１ｅｃｕｌａｒ　Ｃ１ｏｎ ｉｎ　：　Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒ　Ｍａｎｕａｌ　（Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ 　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　１９８２）に記載されている。

ベクターは、次に、個体の組織に直接投与される。好ましくは、ＤＮＡあるいは ＲＮＡ含有ベクターが、個体の骨格筋に注射される。例えば、被検体の四頭筋を 曝すように１．５ｃｍ切開がなされる。ＤＮＡあるいはＲＮＡプラスミドを１Ｏ −１ｏｏμｇおよび５−２０％しよ糖を含有する溶液０．１ｍｌを、深さ約０． ２ｃ＋ｏの曝された四頭筋に、１分間かけて注射する。その後、皮膚を閉じる。

ＤＮＡあるいはＲＮＡプラスミドの量は、ｌＯから１００μｌの、低張、等張、 あるいは、高張のしょ糖溶液、あるいは２■ＭＣユｃ１３を含有するしょ糖溶液 であり得る。溶液を含むプラスミドもまた、長時間、例えば、２０分間かけて、 注入により投与され得る。所望の遺伝子のインビボ発現は、当該分野に公知の方 法、あるいは、例えば、Ｗｏｌｆｆらによる、５ｃｉｅｎｃｅ　２４７：１４６ ５−１４６８（１９９０）の記載などに従って、被検体によるコードされたポリ ペプチドの増加産生を測定することにより試験され得る。

処置された細胞は、少なくとも６０日間、コードされたポリペプチドを発現する ことにより、ＤＮＡあるいはＲＮＡの直接注入に応答すると考えられる。従って 、所望のＴＣＲ１免疫原性フラグメント、あるいは抗イデイオタイプ抗体が、こ のようなポリペプチドによるワクチン接種の代替として、個体の細胞により効果 的に発現され得る。

本発明はまた、遺伝子療法に有用で、当該分野に公知の方法により調製され得る ベクターに関する。このようなベクターおよび薬学的に受容可能な媒体を含有す る組成物もまた提供される。薬学的に受容可能な媒体は、所望の核酸を分解する エレメントは含むべきではない。

以下の実施例は、例を示すことを意図し、本発明を限定しない。

尖瀝」［−上 ＥＡＥのラットモデル 雌のルイス（Ｌｅｗｉｓ）ラット（Ｃｈａｒｌｅｓ　Ｒ４ｖｅｒ　Ｌａｂｏｒａ ｔｏｒｉｅｓ、　Ｒａｌｅｉｇｈ−Ｄｕｒｈａｍ、　ＮＣ）を、各後ろ足の内針 ニ、フロイント完全アジュバント中で乳化した５０μｇのモルモットのミニリン 塩基性タンパク質で免疫化した。疾患の最初の徴候を典型的には、免疫化後９− １１日に観察した。疾患の重篤さは、以下の３ポイントにより評価した＝１＝尾 に元気がなくなる；２＝後ろ足が弱る；３＝後ろ足の麻痺。約４日から６日の疾 患経過後、はとんどのラットが自然に回復し、次のＥＡＥ誘発に耐性を有した。

大１ｍ！Ｌ ワクチンの　および−１ ワクチン投与をＴ細胞レセプターペプチドを用いて実施した。

そのペプチドの配列は、ＢＩＯ，ＰＬマウスのＥＡＥ誘発Ｔ細胞中で優勢なＴ細 胞レセプターβ遺伝子のＤＮＡ配列を起源とする。そのＤＮＡ配列は、本明細書 に参考文献として援用する、前ｌ−のＵｒｂａｎらにより報告された配列であっ た。マウスのＴＣＲβ鎖のＶＤＪ接続配列を有する、９個のアミノ酸のペプチド を当業者に周知の方法により合成した。このペプチドの配列は、５ＧＤＡＧＧＧ ＹＥ（配列番号２３）である（アミノ酸は、従来の一文字フードで示されている ）。う、ｌ−の等価配列は、５ＳＤ−ＳＳＮＴＥ　（配列番号２４）と報告され ている（　Ｂｕｒｎｓら、Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、１６９：２７−３９（１９ ８９））　、そのペプチドを、０．１Ｍ酢酸中の、５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ−２５ （Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｆｉｎｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、　Ｐｉｓｃａｔａｗａ ｙ、　ＮＪ）カラムクロマトグラフィーにより脱塩し、溶媒を２サイクルの凍結 乾燥により連続的に除去した。ペプチドの一部を、キーホールリンペノトヘモン アニン（ｋｅｙｈｏｌｅ　ｌｉｍｐｅｔ　ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ）　（ＩＨ）に 、ＫＬＩ（の１＋ｓｇあたり７．５＋＊ｇペプチドの割合で、グルタルアルデヒ ドを用いて連結した。得られた連結体をリン酸緩衝液（ＰＢＳ）に対して透析し た。

尖施夛一旦 ＥＡＥに・するワクチン この研究に使用されるワクチンは、遊離のＶＤＪペプチドからなるものと、ＫＬ Ｈに連結されたＶＤＪペプチドからなるものである。これらを、ＰＢＳに溶解し 、等容量の（１）フロイント不完全アジュバント（ＩＦＡ）、あるいは（２）１ ０　ｍｇ／ｍｌの加熱殺菌乾燥のＭ　ｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｂｅｒｃｕ ｌｏｓｉｓ　Ｈ３７ｒａ　（Ｄｉｆｃｏ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｄｅｔｒ ｏｉｔ、　Ｍｌ）をＩＦＡ中に懸濁させたフロイント完全アジュバント（ＣＦＡ ）　、のいずれかで乳化させた。エマルジョンを、最終容量が動物当り１００μ ｌになるようにして、８−１２週齢の雌ルイスラットに投与した（各後ろ足の内 証に５０μｌ）。ラット当り、５μｇの非連結ＶＤＪペプチドを投与した。ラッ ト当り、ｌＯμｇのＫＬｉｌに相当するＫＬ）Ｉ−ＶＤＪ連結体を投与した。２ ９日後に、各ラットの前足の内針に、フロイント完全アジュバント中のモルモッ トミニリン塩基性タンパク質５０μｇを接種した。動物のＥＡＥの臨床的徴候を ９日目から経口モニターして、上記のように評価した。結果を表５に示す。認め られるように、ワクチン投与した個体ばかりではなく、その病気にかかった個体 においても、その病気の発生は減少し、その病気の重篤さは軽減され、および／ または、発病は遅れた。防御の程度は、ワクチンの処方により変化した。アジュ バントとしてＣＦＡを含むワクチン処方剤が最も高程度の防御を示す。

艮一旦 ■− ＥＡＥに・　るルイスラットＶＤＪペプチドを　いたワクチンこれ以前の実施例 で使用されるＶＤＪペプチドを、ＢＩＯ，ＰＬマウスのＥＡＥ誘発Ｔ細胞に見い だされたＴＣＲβ鎖の配列に従って合成した。さらに、ペプチドを合成し、ルイ スラットの脳炎誘発性のＴ細胞に見いだされる配列に対応することを試験した。

これらＶＤＪ配列は、ＢｌＯ，ＰＬマウスの配列に相同であるが、同一ではない 。そのラットペプチドを、ＢｕｒｎｓらおよびＣｈｌｕｂａらにより、Ｅｕｒ、 　Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１９：２７９−２８４　（１９８９ンに報告されてい るＤＮＡ配列に従って合成した。ＩＲＩ、２．３および９ｂと呼ばれるこれらペ プチド配列を、実施例Ｉがら■で使用するＢＩＯ，ＰＬマウス配列（ＶＤＪ）と 共に並べて、以下に示す。

ｊ江！ｊｌ Ｖ［Ｓ　Ｇ　Ｄ　Ａ　Ｇ　Ｇ　Ｙ　Ｅ　２３ＩＲＥ　ＣＡ　Ｓ　Ｓ　Ｄ　−Ｓ　 Ｓ　Ｎ　Ｔ　Ｅ　Ｖ　Ｆ　Ｆ　Ｇ　Ｋ　２５ＩＲ２ＣＡ　Ｓ　Ｓ　Ｄ　−Ｓ　Ｇ 　Ｎ　Ｔ　Ｅ　Ｖ　Ｆ　Ｆ　Ｇ　Ｋ　２６ＸＲ３ＣＡ　Ｓ　Ｓ　Ｄ　−Ｓ　に　 Ｎ　−Ｖ　Ｌ　Ｙ　Ｆ　Ｇ　Ｅ　Ｇ　Ｓ　Ｒ２７エＲ９ｂ　Ａ　Ｓ　Ｓ　Ｄ　− Ｓ　Ｓ　Ｎ　Ｔ　Ｅ　２Ｂこれらのワクチンの調製、投与、および評価を、以下 の例外と共に、実施例Ｉから■に記載のように実施した：個々のＶＤＪペプチド ５０μｇを、ＣＦＡ含有のワクチン処方剤に取り込んだ；ＩＦＡ中のワクチン投 与、および、ＩＨに連結されたペプチドによるワクチン投与は実施しなかった。

対照動物は、実施例■のように、ＭＢＰ接種前には処置しないか、あるいはＰＢ ＳとＣＦＡとのエマルジョンでワクチン投与して、アジユバントのみの防御効果 を評価した。結果を以下の表６に示す。

（以下余白） 表−ｌ ｔ道権Ｂ敬 ”””’　？７＞’−”；’（ａ　）　１０　１１　１２　１３　１４　１５　 １６　１７　１８表６に示すように、ワクチン投与していない対照動物での疾患 は、１０日より早く観察された。疾患は、深刻な麻痺および衰弱に特徴があり、 ４日から６日持続し、そして自然に回復した。ＰＢＳ−ＣＦＡワクチン投与され たラットは、ワクチン投与されていない対照ラットと実質的に区別できない病気 の経過を示した。これに反して、徴候の遅延が、ＩＲＩ、２あるいは３のワクチ ン投与した動物のいくつかに観察され、他のものは、徴候の遅延、および疾患の 重篤さ、および／または、疾患の持続期間の軽減を示した。しかし、ラットｖＤ Ｊペプチド（ＩＲＩ−３）による全てのワクチン投与は、マウスＶＤＪペプチド による接種（実施例■）よりも僅かに有効性が劣った。しかし、ＩＲ９ｂによる ワクチン投与では、試験された４匹全ての動物に完全な防御を付与した。重要な ことに、疾患の特徴的な組織学的病変は、ＩＲ９ｂでワクチン投与した４匹の動 物のいずれにも認められなかったし、疾患の非顕性の徴候もまた消えていた。

Ｘ遡上−竺 Ｖ（域　ペプチドによるワクチン Ｖβ８遺伝子ファミリーに特異的なペプチドを、ＥＡＥに対するワクチンとして 試験した。Ｖβ８は、ラットおよびマウスの両方で脳炎誘発性のＴ細胞に使用さ れる最も一般的なβ鎖遺伝子ファミリーである。ペプチドをＶβ８遺伝子中に見 いだされる固有のＤＮＡ配列に基づいて合成した。この配列は、Ｍｏｒｒｉｓら によりＩｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ　２７：ｌ７４−１７９　（１９８８）に 報告されている配列を有するが、他のラットｖβ遺伝子中には見いだされない。

ｌＲ７と呼ばれるこのＶβ８ペプチドの配列は、ＩＨ７ＤＭＧＨＧＬＲＬＩＨＹ ＳＹＤＶＮＳＴＥＫ　（配列番号２９）である。

このＶβ８ペプチドの有効性を、実施例■および■に記載のように、ＥＡＥのル イスラットモデル（実施例　ｌ）で試験した。

５０μｇのペプチドをＣＦＡ中で試験した。ＩＦＡ中のワクチンの接種、あるい は、ペプチド−ＫＬＨ連結体によるワクチン投与は実施しなかった。これらの研 究の結果を表７に示す。

１　工Ｒ７（５０μ（１）　−−１２３３３−−３−″″　−″″　−−−一− ラットＶβ８ペプチドで実施したワクチン投与の結果は、マウスおよびラットＩ ＲＩ、２および３ペプチドで観察された結果と同じである。徴候の遅延、および 疾患の重篤さおよび疾患の持続時間の軽減が、１匹の動物で観察された。その１ 匹の動物は、完全に防御されていた。

表８に示すように、Ｖβ８．２の対応の２１個のアミノ酸配列（残基３９−５９ ）は、ｌＲ７より防御性が劣っていた。Ｖβ８．２の２１個ノアミノ酸配列は、 ＤＭＧＨＧＬＲＬＩＨＹＳＹＤＶＮＳＴＥＫＧ　（配列番号３０）である。

各ペプチドは、１００μｇ投与量で使用し、等容量のフロイント完全アジュバン ）　（ＣＦＡ）で乳化する前に、生理食塩水に溶解した。動物に、４２日後、Ｃ ＦＡ中のモルモットミニリン塩基性タンパク質５０μｇを接種した。ＣＦＡは、 １０　ｎａｇ／ｍｌの＋５ｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ を含有した。注入、および、臨床的徴候および組織学的評価を前記のように実施 した。他の動物（グループ当り５匹）は、同じ方法でペプチドにより免疫化し、 それらの肺細胞を、１４日後に取り出してリンパ球増殖について、Ｏｌｅｅら、 Ｊ、　Ｎｅｕｒｏｉｗ＋ｍｕｎｏ１．２１：２３５−２４０　（１９８９）に記 載のように試験した。２０個のアミノ酸ペプチドおよび２１個のアミノ酸ペプチ ドの配列を、それぞれＶβ８．２２ＩＩおよびＶβ８２２１として、表８に示す 。

犬ＩＬ■ Ｊｈレペプチドを　いたワクチン ペプチドを、ラットおよびマウス両方の脳炎誘発性のＴ細胞レセプター中に見い だされる、Ｊα遺伝子セグメントであるＴＡ３９に対応して合成した。ＩＲ５と 呼ぶこのペプチドの配列は、ＩＲ５ＲＦＧＡＧＴＲＬＴＶＫ　（配列番号３１） である。

ＪαＴＡ３９ペプチドの有効性は、実施例■および■に記載のように、ＥＡＥの ルイスラットモデル（実施例１）で試験した。

５０μｇのペプチドを、ＣＦＡ中で試験した。ＩＦＡ中のワクチン投与、あるい は、ペプチド−ＫＬＨ連結体によるワクチン投与は、実施しなかった。これらの 結果を表９に示す。

表−一匹 −ｉ５７′１偽リース鳩）１０Ｗ町？ｉヤ１４１５１６１７１Ｂ　：Ｌ９２０１ 　工Ｒ５（５０μｇ）　−−−−−２１１１１３−−ラットＪαＴＡ３９ペプチ ドにより実施したワクチン投与の結果は、マウスＶＤＪペプチドあるいは■β８ ペプチドで観察された結果より、より有効であった。３匹のうち２匹の動物は、 完全に防御され、３番目の動物では、疾患の徴候は著しく遅れた。

疾患は、５日間疾患の通常経過を持続したが、この動物では重篤さは軽減した。

完全に防御された２匹の動物は、ＣＮＳのＴ細胞浸潤の組織学的形跡は示さなか ったことは重要なことである。この結果は、ＪαＴＡ３９によるワクチン投与カ タ脳炎誘発性のＴ細胞に特異的な調節応答を、非常に有効に誘起することを示す 。疾患の非顕性の徴候でさえ消滅した。

笈丘ヱＬ！ ＴＣＲペプチド　４　を　いたワクチンワクチン投与をＴＣＲペプチド混合物を 用いて実施した。混合物は、ＩＲＩ、２．３および５ペプチドの各５０μｇを含 有した（３つのう、トＶＤＪペプチドおよびラットＪαＴＡ３９ペプチド）。

このペプチド混合物の有効性を実施例■およびｍに記載のように、ルイスラット モデル（実施例　Ｉ）で試験した。ペプチドは、ＣＦＡ中で試験した。ＩＦＡ中 のワクチン投与、あるいは、ペプチド−ＫＬＨ連結体によるワクチン投与は、実 施しなかった。

これらの結果を表１０に示す。

艮−ユ副− ラットＪαＴＡ３９および３つのＶＤＪペプチドによるワクチン投与の結果は、 表６に示すＩＲ９ｂにって記載されているものと同程度に有効であった。３匹全 ての動物が完全に防御された。

ＥＡＥの臨床的徴候が全（なかったごとに加えて、３匹のうち２匹の動物にはＣ ＮＳのＴ細胞浸潤の組織学的形跡は完全になかったが、３番目の動物は、リンパ 球浸潤の小さな病巣を２つだけ、を髄に示した。

Ｋ監匠土入 発　ワクチン Ａ、ヒトＭＢＰ　応　Ｔ ＭＢＰ反応性Ｔ細胞系を、９人の慢性進行型ＭＳ患者および２人の対照健常者の 末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）から確立した。細胞を精製ヒトＭＢＰおよび照射 した自家移植ＰＢＭＣを用いた通常の刺激を与えて培養物中に３日間、続けてＩ Ｌ−２含有培地中に４日間保持した。

Ｂ、ＭＢＰ反応　Ｔ　系から′たＴＣＲ襲゛　ム　のＰＣＲ実施例Ｘに記載のよ うに、Ｔ細胞を対数増殖期培養物から採取し、ＲＮＡを調製し、Ｖβ１６ｍｅｒ プライマーおよびネストされたＣβプライマーを用いて５５サイクルで増幅した 。

Ｃ，ヒトＭＢＰ反応　Ｔ　のＴＣＲダ ヒトＭＢＰ反応性Ｔ細胞系から得たＶβ１６ｍｅｒ増幅したＴＣＲβ鎖遺伝子を Ｃβｓｅｑプライマーを用いて／−ケンスした。増幅生産物をゲル精製し、塩基 変性し、モしてＣβｓｅｑプライマーからシーケンスした。これらのラインのう ち５つから読み取り可能ＤＮＡ配列が得られたが、このことは優勢Ｔ細胞クロー ンが長期のインビトロ継代により選択されたことを示唆している。

ＭＳ−Ｒｅ細胞系（表１１）から得たこれらの配列の１つは、β鎖■ＤＪアミノ 酸配列を有しており、それはＥＡＥのＢＩＯ，ＰＬマウスモデル中のＭＢＰ反応 性脳他層発性Ｔ細胞中に保存されたβ鎖ＶＤＪアミノ酸配列と、全残基の最初の ６つのうち５つ、および９つの全残基のうち６つを共有した。この配列は残りの ４つのヒトＭＢＰ反応性Ｔ細胞系における優勢ＴＣＲ再配列配列中存在しなかっ た。

類似の配列が、他のＭＳ患者から得たＭＢＰ反応性Ｔ細胞系のβ鎖範囲内に存在 して−いるかを決定するために、ＰＣＢ増幅を、この配列の７つのアミノ酸に対 応する縮退（ｎ＝１０２４）　２１−ヌクレオチドブライマー（Ｖｉ３Ｒｅ）を 用いて行った。ＲＮＡ５を逆転写し、２０サイクルの段階■反応液中で、Ｖβ１ ６ｍｅｒおよびＣβｅｘｔプライマーを用いて増幅した。これらの段階Ｉ反応液 のｌμｌアリコートをＶβＲｅおよびＣβｉｎｔプライマーを用いて３５サイク ルで再増幅した。これらの反応液の１μｍアリコートを３２ｐ標識したヒトＣβ プローブを用いたサザンブロットハイブリダイゼーシ目ンにより分析した。この 分析の結果、Ｒｅ細胞系中および他のＭＳ患者ラインの１つにおいて３００ｂｐ の増幅生産物が見いだせたが、それは対照被験者から得たＭＢＦ反応性Ｔ細胞に おいても、また非ＭＢＰ反応性ヒトＴ細胞系およびクローンにおいても見いだせ なかった。テストした９人のＭＳ患者ラインのうち２人にこの配列が存在したこ とは注目すべきである。この配列はＥＡＥ中の脳炎誘発性Ｔ細胞中に保存されて いることは既知であるため、ＭＳ患者から得たＭＢＰ反応性Ｔ細胞中にそれを検 出することにより、ＭＳの病原中にこの決定子を有するＴ細胞の役割は明らかに なる。

配列５ＧＤＱＧＧＮＥ　（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、１）を有する免疫原ペプチド（ よ、実施例Ｉ＋に示すように合成され得、また実施例ＩＩＩζこ説明した方法で ヒト被験者を免疫するために用ｔＡられ得る。そのような免疫化は有効な免疫反 応を生じさせ得る。

ｉζ■す 支皿班入 ＬＬ二二１が肛え１ロ」旦 Ａ、　から′たＴ　− 溝膜組織試料を、関節置換治療中であり、ラジオグラフィーによりリウマチ様関 節炎であると判明した患者から得た。

活性化Ｔ細胞を、磁気ビーズおよびヒトＩＬ２−Ｒ（、αＩＬ２−Ｒ）と反応性 のある抗体を用いて以下のように選択した。溝膜組織を、４時間、３７℃で、４ 　＋＊ｇ／ｍｌのコラゲナーゼ（ＷｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎＢｉｏｃｈｅｍｉｃａ ｌ、Ｆｒｅｅｈｏｌｄ、　ＮＪ）および０．１５＋ａｇ／ｍｌのＤＮＡ５ｅ　（ Ｓｔｇ＋ｎａ、　Ｓｔ、　Ｌｏｕｔｓ、　ＭＯ，）を含有するＲＰＭＩ＋１０％ のウシ胎児血清（ＦＢＳ）中で消化した。消化物を８０メノンユスクリーンに通 して、単個細胞をフィコール密度勾配遠心法により回収した。

界面の細胞を洗浄し、１０６７１１テ、３０分間、０℃で、５　μｇ／＋ｉｌの 対照マウスＩｇＧ　（Ｃｏｕｌｔｅｒ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、　Ｈｉａｌｅａ ｈＳＦＬ）と、２％のＦＢＳを含有するＰＢＳ　（ＰＢＳ−ＦＢＳ）中でインキ ュベートした。

細胞を３回洗浄し、３０分間、０℃で、ヤギ抗マウスＩｇＧ　（Ａｄｖａｎｃｅ ｄ　Ｍａｇｎｅｔｉｃｓ、　Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、　ＭＡ）に結合した磁気ビー ズとインキュベートした。ビーズを磁気的に分離させ、ＰＢＳ−ＦＢＳを用いて ３回洗浄した。マウスＩｇＧ　（ｍｌｇＧ）および磁気ビーズを用いたこの前選 択を、Ｔ細胞の非特異的吸着を制御するために用いた。初期懸濁液中に残存する 細胞をさらに、３０分間、０°Ｃで、ヒトＴ細胞ＩＬ２−Ｒ（Ｃｏｕｌｔｅｒ　 １ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、　Ｈｉａｌｅａｈ。

Ｆ　Ｌ　）と反応性である５μｇ／ｎ＋　ｌのモノクローナルマウスＩｇＧとイ ンキュベートした。細胞を洗浄し、上述のように磁気ビーズを用いて選択した。

ＩｇＧ前吸着およびＩＬ２−Ｒ抗体選択から得たビースヲ、酸性化グアニジニウ ムーフェノールクロロホルム中に即座に再懸濁し、モしてＲＮＡを本明細書に参 考として援用した、Ｃｈｏｎｅｚｙｎｓｋｉおよび５ａｃｃｈｉ、　Ａｎａｌ、 　Ｂｉｏｃｈｅｔ　１６２：１５６（１９８７）に記載のように調製した。ＲＮ Ａを細胞のインビトロ培養および誘発され得る付随の偏り（ｂｉａｓ）なしに調 製したので、それらは外科的に取り除いた時に溝膜組織中でＴ細胞の分布を正確 に反映するものと思われる。患者１０１２から得たｍｌｇＧおよびαＩＬ２−Ｒ ビーズの半分のみを、ＲＮＡを得るために即座に処理した。残りをＩＬ−２の供 給源として５日間、ＲＰＭＩ　１６４０．５％のＦＢＳ、　２０％のＨＬ−１（ Ｖｅｎｔｒｅｘ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　Ｉｎｃ、、Ｐｏｒｔｌａｎｄ。

ＭＥ）　、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、グルタミン、抗生物質、および２０％のＬＡ Ｋ上清（本明細書で参照により援用した、Ａｌｌｅｇｒｅｔｔａら、５ｃｉｅｎ ｃｅ、　２４７＋７１８　（１９９０））中で、ＩＬ−２の源として培養した。

ＲＮＡをαＩＬ２−Ｒビーズ（１ｏ１２１Ｌ２．　ｄ５）の培養物から抽出した が、５日間の培養期間の最後には生存できる細胞は存在しなかったため、１０１ ２＋ａ１ｇＧ試料からは抽出しなかった。

Ｔ細胞クローンを患者１００８のフィコールペレットから得た。

ペレット中の細胞を、２Ｘ　１０６／ｍｌで、ＩＬ−２を有さない培地中で２週 間培養した。この培養物から得た非吸着細胞を、希釈を制限することにより、自 家移植滑脱細胞単層上へクローンした。ＣＤ４＋　Ｔ細胞クローン１００８．８ を得て、自家移植の溝膜単層を用いたＩＬ−２を含まない培地で３日間、続けて ＬＡＫ上清を含む培地での４日間培養の通常の刺激により、培養に適合させた。

Ｂ、１００８．８による　・　の １００８、８による溝膜付着細胞の溶解が以下のように示された。

溝膜細胞単層を、３６ＳをＣＴＬアッセイにおける標的として用いて、本明細書 に参照により援用した、ＳｔｅｄｍａｎおよびＣａｍｐｂｅｌｌ、Ｊ、Ｉｍｍｕ ｎｏｌ、　Ｍｅｔｈ、　１１９：２９１　（１９８９）に記載のように標識した 。細胞をトリプシン処理し、洗浄し、そして９６ウエル丸底マイクロタイタープ レートにｌウェル当り２０００細胞でプレートした。アッセイより前に、溝膜付 着細胞およびＬＡＫ上清を含有する培地で３日間培養した１００８．８細胞を、 指定されたエフェクター：標的比で、標的に添加した。培養物を一晩３７°Ｃで インキュベートし、３００ｘｇで２分間遠心分離し、５０μｌの上清中の放射能 を定量した。界面活性剤で溶解した標的に対する、比溶解率を一般式より計算し た。このクローンはＣＴＬアッセイにおいて溝膜付着標的に対して細胞障害性で ある（表１２）。

表１」工 正！ニーニジと１−−一−−−−りｍ＝１４到−−Ｃ，ＴＣＲ−のＰＣＲ ＴＣＲβ鎖遺伝子を図２に示すプライマーのいくつかの組み合せを用いて増幅し た。Ｖβ１６ｍａｒプライマーは、１６残基の全てでヒトＴＣＲβ鎖遺伝子の８ ５％に、また１５残基で９５％に結合すると予測される縮退Ｖβプライマー（ｎ ＝２５６）である。このプライマーを２５より多くの異なるヒトＴ細胞クローン 、系または主要組織調製物から得たＴＣＲβ鎖を増幅するために用いた。■β遺 伝子のスペクトルがこれらの増幅されたＤＮＡからシーケンスされ、特定のＶβ ファミリーのプライマーの有意な偏りを反証している。よって、■β１６ｍａｒ プライマーを用いたＰＣＲ増幅は、Ｖβ遺伝子の使用（ｕｓａｇｅ）が論理に基 づいて得られない場合のＴ細胞集団の分析を容易にする。

Ｔ細胞レセプターβ鎖遺伝子を、２段階増幅反応で、図２に示すプライマーのネ ストされた対を用いて増幅した。ポリメラーゼ鎖反応で用いたプライマー配列を 表１３に列挙する。

（以下余白） 去」−支 Ｖ８１７　５’　ＴＣＡＣＡＧＡＴＡＧＴＡＡＡＴＧＡｃｒＴＴＣＡＧ　コ’　 ＣＨｖｌ＆’ｔ　５０）ＶＢ８　５’　ＴＣＴＣＣＡＣＴＣＴＧＡＡにＡＴＣｃ 　３’　（ｆｂｅ１＋１％号　５１）ｖａ１２５１ＧＡＴＴＴＣＣＴＣＣＴＣＡ ＣＴＣＴＧ　３１（ｖｈｅ月％８　５２）５＋ＣＢ　５’　ＣＭＧＣＴＧＴＴＣ ＣＣＡＣＣＣＧＡ　３’　（飢Ｗ’１％号　５３）ＣＢｅｘｔ　５’　ＣＣＡＧ ＡＡＧＧＴＧＧＣＣＧＡＧＡＣ３”　（Ｒ７１％％　５４）ＣＢｉｎｔ　５　’ 　ＧＣＧＧＣＴＧＣＴＣＡＧＧＣＡＧＴＡ　３　’　（１１：］ｉピ！ｊ’１１ ｈ％　５５１ＣＢｓｅｑ　５’　ＣＧＡＣＣＴＣＧＧＧＴにＧＧＡＡＣＡ　３’ 　（１ｉｅＪ’１％号　５６）ＲＮＡを、１時間、４２℃で、４０ｐ＋＊ｏｌの Ｃβｅｘｔプライマーを用いて、１２μｌの反応液中、本明細書に参照により取 り込まれた、Ｈａｒｔら、Ｔｈｅ　Ｌａｎｃｅｔ、　ｐ、　５９６　（１９８８ ）に記載の条件を用いて逆転写した。上述のように、反応液を４０ｐｍｏｌのＶ β１６ｍｅｒプライマー、ヌクレオチド、および反応緩衝液を含有するがＭｇＣ ｌ２ハ含有しないマスター混合物を用いて希釈し、最終Ｍ　ｇ　＋　２濃度を３ ．６ｍＭにした。試料を１５分間９５°Ｃで変性し、熱安定組換えＤＮＡポリメ ラーゼ（Ｃｅｔｕｓ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、　Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ、　Ｃ Ａ、　Ａｍｐｌｉ−ｔａｑｏｌ）の１単位を添加し、２０サイクルのＰＣＲを行 った。各サイクルを、１分間の９５°Ｃでの変性、２分間のアニーリングエ程、 および２分間の７２℃での伸長で構成した。最初の２サイクルは、３７℃および ４５℃でそれぞれアニールし、残すは５０℃でアニールした。これらの段階■反 応液の１マイクロリ、ターのアリコートを、１００１００ｐのＣβｉｎｔプライ マーおよびｌｏｏｐｍｏｌ（７）Ｖβ８、Ｖβ１７、もしくは５°Ｃβプライマ ー、または？ＯＯｐｍ。

ｌのＶβ１６璽ｅｒプライマーを含有する１００μｌの段階ＩＩ増幅反応液（Ｃ ｅｔｕｓ、　Ｇｅｎｅ−Ａｖｐ　Ｋｉｔ”″）に添加した。段階Ｉ＋増幅を上述 のように５０℃のアニーリング温度で行い、３７℃および４５℃でのランピング （ｒａｍｐｉｎｇ）は行わなかった。

１０１２１Ｌ２．　ｄ５および１００８．８培養物のＲＮＡ試料を、Ｖβ１６ｍ ｅｒおよびＣβｅｘｔプライマーを用いて段階■反応液中、およびＶβ１６ｍｅ ｒおよびＣβｉｎｔプライマーを用いて３５サイクルの段階［１反応液中で増幅 した。遺伝子クリーンガラスピーズ（Ｂｉｏ　ＩＤＩ、　Ｓａｎ　Ｄｉｅｇｏ、 ＣＡ）を用いて低融解アガロースゲル切片から精製した反応生産物を、塩基変性 し、Ｔ７ボリメラーゼ（シークエナーゼ、Ｕｎｉｔｅｄ　５ｔａｔｅｓ　Ｂｉｏ ｃｈｅｍ、　Ｃ１ｅｖｅｌａｎｄ、　０）Ｉ）を用いてＣβｓｅｑプライマーか らシーケンスした。単−Ｖβ１７再配列（表１４）に対応する優勢Ｖβ配列が、 １０１２１Ｌ２．　ｄ５試料中で明確に読み取れた。他のより少ない頻度でおき る再配列を、シーケンシングゲル中で弱い、解釈し得ないバックグラウンドバン ドとして検出した。補助細胞または抗原を添加しなかったＩＬ２含有培地中での これらの１０１２．　ｌＬ２ビーズの培養物は、Ｔ細胞の新たな（ｄｅ　ｎｏｖ ｏ）活性を誘導しないものと考えられる。よって、この試料中で単一のＶβ１７ 再配列が優勢であることは、この患者のＶβ１７＋Ｔ細胞のインビボでのクロー ナルな増加を反映している。細胞障害性Ｔ細胞クローン、１００８．８から増幅 したＴＣＲβ鎖ＤＮＡのＤＮＡ配列の決定もまた、Ｖβ１７再配列（表１４）を 示した。２人の別々のＲＡ患者に由来した、これら２つの異なるタイプの溝膜Ｔ 細胞試料中におけるＶβ１７再配列の存在は、Ｒ＾の病原中にＶβ１７を有する Ｔ細胞が存在することを意味している。

（以下余白） 表」」− １乞利 櫨料　ＶＢ　８　％キ １０１２　Ｙ　Ｌ　ＣＡ　Ｓ　Ｋ　Ｎ　Ｐ　Ｔ　Ｖ　Ｓ　Ｙ　Ｇ　Ｙ　Ｔ　Ｆ　 ３８ｄａｙ　５　ｔａｔｃｔｃｔｇｔｇｃｅａｇｔ　ａａａａａｔｃｃｃａｃｇ ｇｔｃｔｃｃ　ｔａｔｇｇｃｔａｃａｃｃｔｔｃ　コ９Ｖ８１７　ＪＢＬ、２ Ｙ　Ｌ　ＣＡ　Ｓ　Ｄ　Ｎ　Ｅ　Ｓ　Ｆ　Ｆ　Ｇ　Ｑ　Ｇ　４０１００Ｂ、８　 ｔａｔｃｔｃｔｇｔｇｃｃａｇｔ　ｇａｃａａｃｇａｇａｇｔ　ｔｔｃｔｔｔｇ ｇａｃａａｇｇｃ　４１ｖＢ１７　ＪＢＬ、１ １０１４　Ｙ　Ｌ　ＣＡ　Ｓ　Ｖ　ＲＤ　ＲＲＮ　Ｙ　Ｇ　Ｙ　Ｔ　４２工Ｌ− ２セａセｃｔｃｔｇｔｇｃｃａｑｔ　ｇｔｇａｑｇｇａｃａｇｇａｇａ　ａａｃ ｔａｔｇｇｃｔａｃａｃｃ　４３ＶＢ１７　ＪＢＬ、２ １０１５　Ｙ　Ｌ　ＣＡ　Ｓ　Ｓ　Ｓ　Ｘ　Ｄ　Ｓ　Ｓ　Ｙ　Ｅ　Ｑ　Ｙ　４４ 工Ｌ−２ｔａセｃｔｃｔｇｔｇｃｃａｇｔａｇｔ　ａｇｔａｔａｇａｃｔｃｃ　 ｔｃｃｔａｃｇａｇｃａｇｔａｃ　４５Ｖ８１７　Ｊ８２．７ Ｖβ１７再配列が他の磁気ビーズＲＮＡｇ製物中に存在する力）否かを決定する ために、ＴＣＲβ鎖遺伝子を、■β１６ｍｅｒを用（Ｘだ初期増幅後の第２段階 増幅中に、Ｖβ１７特異的プライマーを用いて増幅した。Ｖβ１７　ＴＣＲＤＮ Ａを、検査した４人の、叡者（ご由来する磁気ビーズ試料から増幅し得た。電気 泳動した反応生産物のエチジウムブロマイド染色により、ＩＬ−２Ｒ＋試料の（ １くつかにおいては、対応する対照におけるよりも多いＶβ１７増幅が見られる ことが判明した。従って、各対照およびＩＬ−２Ｒ＋試料におけるＶβ１．７　 ＴＣＲの相対量を以下のようにスロットプロットハイブリダイゼーション分析に より定量した。

磁気ビーズ調製物から得たＲＮＡを第１段階において、Ｖβ１６ｍｅｒおよびＣ βｅｘｔプライマーを用いて増幅し、次にＣβｊｎｔプライマーおよびＶβ１７ 、Ｂβ８および５°Ｃβプライマーのそれぞれを用いて２０サイクルで再増幅し た。増幅反応液を連続的に２゜Ｘ　ＳＣＣ中で希釈し、煮沸により変性し、そし てアイススラリー中で冷却した。試料をニトロセルロース膜上にロードし、ヒト ＴＣＲβ鎖不変領域プローブにハイブリダイズし、Ｏ，ｌＸ　ＳＳＣ。

０．１％のＳＤＳを用いて、５６℃で洗浄した。結合した放射能を液体シンチレ ーシコン分光学により定量し、そして最終希釈物は２ｏｏｃｐｍより少ない結合 を有する試料であった。合計４０サイクルで各プライマーの組み合せをそれぞれ 用いて生産した生産物の量は、生産物対サイクル数の定量曲線における直線部分 に該当している。

５°ＣβおよびＣβｉｎｔプライマー対を用いた増幅を各試料から増幅した全β 鎖を見積るために用い、各ＩＬ−２Ｒ＋および対照試料対（表１５）におけるＶ β１７および■β８の定量結果を標準化するために基準を提供した。増幅された ■β１７　ＤＮＡ量は、ＩＬ−２Ｒ＋試料中で、対照試料に対し、４人の患者の うち３人において増加した。増加の度合は、患者１０１５における５倍から、患 者１０１４における４０倍の範囲にあった（表１５）。増幅された■β８ＤＮＡ 量は、患者１０１５のみでＩＬ−ＺＲ＋画分で増加したので、この濃厚化は、単 離手順による産物ではなかった。

表±１ ＊■β８をシーケンスした追加研究において、このＶβの濃厚化は人工産物であ り、値は１以下であることが判明した。

濃厚化を示す、３人の患者のＩＬ−２Ｒ＋のＲＮＡがら得たＶβ１７再配列を、 Ｖβ１７およびＣβｉｎｔのプライマ一対を用いて増幅し、反応生産物をＣβｓ ｅｑプライマーを用いてシーケンスした。試料１０１２１Ｌ−２，ｄ５が示した ように、１０１４および１０１５は、Ｖβ１７Ｔ細胞のインビボでのクローナル な増加を示唆する、単一の配列（表１４）を含有していた。対照的に、Ｖβ８特 異的プライマーを用いて増幅した再配列の直接シーケンシングは、β鎖生産物に おける有意な不均質性のため不可能であった。

Ｄ、リウマチ　節−声　の）ＩＬＡ−ＤＲリウマチ様関節炎患者のＨＬＡ−ＤＲ 分析を以下のように行った。

各患者から得たＤＮＡを２００μｌのｄＨ２０中で１０’滑膜細胞を煮沸するこ とにより調製した。１０μｌを３５サイクルで、ＤＲＩ１およびＤＲＩ３として 表１６に示すＤＲ１３ＰＣＲプライマーをそれぞれ１１００ｐ＋０１含有する１ ００μｌの反応液（Ｃｅｔｕｓ、　Ｇｅｎｅ　Ａｍｐ　Ｋｉｔ”）中で増幅した 。この反応液の１／ｌＯμｌをＤＲβ２プライマーおよびｄＣＴＰの唯一の供給 源として１７ｐｍｏ＋のα３２Ｐ−ｄＣＴＰのみを含有する１０μｍ中で、１０ サイクルで再増幅した。反応液に２００μＭのｄＣＴＰを追加し、２サイクルの 間チェイスした。得られたネガティブストランドプローブを、本明細書に参照に よって援用した、Ａｍａｒら、Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３Ｂ＋１９４７　（ １９８７）に記載の既知の条件を用いて、ｌｏｐｍｏｌの肛Ａ−ＤＲ対立遺伝子 特異的オリゴ（ポジティブストランド）を含有するスロットプロットにハイブリ ダイズした。スロットを、２回、２０分間、テトラメチルアンモニウムクロライ ド（Ｗｏｏｄら、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｅｔ、　ＵＳＡ　８ ２＋１５８５　（１９８５）、本明細書に参照により援用）を用いて、６５−６ ８℃で洗浄し、Ｘ線フィルムに露出した。

今回の研究における患者はそれぞれ、ＲＡに感染しゃすいことが既知である、Ｈ ＬＡ−ＤＲ遺伝子のＤＲ４ｖ４、ＤＲＩ、　ＤＲ４ｗＬ４またはＤＲ４Ｗ１５の 少なくとも１つの対立遺伝子を有していた（表１６）。

また、Ｉ（ＬＡ−ＤＲ対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチドを表１６に示す。

（以下余白） 敷エエ ｍｓ。

ＨＬＡ−ＤＲ＊ｎｃ　＆Ｉ＊ｈ　−Ｊ）Ｗｈｑ　τ＋）コ”Ｌ７しＴＷト”以旦 Ｌ」３上 以ｄと 免疫原性である、または免疫原性になり得る、Ｖβ１７またはそのフラグメント を含有するＴ細胞レセプターは、実施例Ｖ＋ｌ！に示す方法でヒト患者を免疫す るために用いられ得る。そのような免疫化は有効な免疫反応を生じさせ得る。

大上り１盈」− 溝膜組織試料を、関節置換手術を受け、ＲＡであることが判明した患者から得た 。）ＩＬＡ−ＤＲ分析を実施例ＩＸ（Ｄ）に記載のように行った。

Ａ、　Ｔ　レセプ　−　゛　のポリメラーゼ　ＰＣ１１屋 Ｔ細胞レセプターβ鎖遺伝子を、二段階増幅反応液中で、図３に示す、ＨＰＬＣ 精製されたオリゴヌクレオチドブライマーのネストされた対（Ｍｉｄｌａｎｄ　 Ｃｅｒｔｉｆｉｅｄ　Ｒｅａｇｅｎｔｓ、　Ｍｉｄｌａｎｄ。

ＴＸ、　）を用いて増幅した。ＲＮＡ５をＣβｅｘｔプライマー（４０ｐ＋＊ｏ ｌ）を用いて、１２μｍの反応緩衝Ｔ＃Ｌ（Ｈａｒｔら、Ｌａｎｃｅｔ　ｉｉ： ５９６−５９９（１９８８））中で逆転写した（１時間、４２℃）。反応液をＶ βＣ０ｎ５プライマー（４０ｐｍｏｌ）　、ヌクレオチド、およびＭｇＣｌ２を 含まない反応緩衝液を含有するマスター混合物（８μｌ）を用いて希釈した（最 終Ｍｇ“２濃度−３，６ｍＭ）。試料を変性しく１５分、９５℃）、２０サイク ルのＰＣＲをＴａｑポリメラーゼ（１単位、ＣｅｔｕｓＡ＋ａｐｌ　１−ｔａｑ ）を用いて行った。各サイクルを、１分間の９５℃での変性、２分間のアニーリ ング温度、および２分間の７２℃での伸長で構成した。最初の２サイクルは、３ ７℃および４５℃でそれぞれアニールし、残りは５０℃でアニールした。これら の段階■反応液の１マイクロリツターのアリコートを、Ｃβｉｎｔブライｖ　− （１００ｐｍｏｌ）およびＶβ８、Ｖβ１２、Ｖβ１７、もしくは５゛Ｃβプラ イマーのいずれか（Ｌｏｏｐ■ｏｌ）、またはＶβｃａｎｓプライ７−　（１０ ０−７００ｐｍｏｌ）を含有する１００ｕｌの段階１■増幅反応液（Ｃｅｔｕｓ 　Ｇｅｎｅ−Ａｍｐ　Ｋｉｔ）に添加した。段階Ｉ＋増幅を指定されたサイクル 数で、５０℃のアニーリング温度で行い、３７℃および４５℃でのランピングは 行わなかった。

Ｂ、ｖ　１７Ｔ　は　・　に・して　で　る２つのパラレルの培養物を、患者１ ００８の溝膜組織から以下に記載のように酵素消化により得た、単膜細胞懸濁液 から確立した。第１の、全溝膜細胞のバルク培養物を、２Ｘ　１０’／■ｌで、 ＲＰＭＩ　１６４０．５％のＦＢ３．２０％のＨＬ−１（Ｖｅｎｔｒｅｘ　Ｌａ ｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ。

ＰｏｒｔｌａｎｄＳＭＥ）　、２５＋ｅＭのＨＥＰＥＳ、グルタミンおよび抗生 物質中にプレートした。培養物を、外性抗原も成長因子も存在しない、静かな状 態で２週間成長させた。第２の、滑脱細胞単層培養物を、上述のように生じさせ て、そして一様にトリプシン処理し、この２週間培養した。単層細胞を５Ｘ１０ ’細胞／ウエルで、平底９６ウエルマイクロタイタープレート中でプレートし、 −晩培養した。次に全溝膜細胞培養物から得た非付着性細胞を、１０細胞／ウエ ルで、単層上にプレートした。Ｔ細胞成長に陽性であるウェルを拡張し、ＩＬ− ２を含まない培地中で自家移植の滑脱単層と３日間、次いでリンフ才力イン活性 化キラー（ＬＡＮ）細胞から得た２０％上清、すなわちＩＬ−２の供給源（Ａ　 Ｉｌｅｇｒｅｔ　ｔａら、５ｃｉｅｎｃｅ　２４７：７１８−７２１　（１９９ ０））を含有する培地中での４日間培養を用いた通常の刺激により培養に適合さ せた。その後の培養は溝膜細胞単層の代わりに同種異系のＰＢＬｓおよび抗ＣＤ ３抗体（Ｃｏｕｌｔｅｒ　Ｉ＋ｏｍｕｎｏｌｏｇｙＳＨｉａｌｅａｈ、　ＰＬ） を用いての週単位の刺激に適合させた。

細胞障害性アッセイを、本明細書に参照により援用した、Ｓｔｅｄｍａｎら、Ｉ ｍｍｕｎｏｌ、　Ｍｅｔｈ、　１１９：２９１−２９４　（１９８９）に記載の ように、標的として３５Ｓ標識した滑脱単層細胞またはＥｔｌＶ形質転換したＢ 細胞を用いて行った。標的細胞を一晩標識し、トリプシン処理しく付着細胞のみ ）、洗浄し、９６ウエル丸底マイクロタイタープレート中にウェル当り２０００ 細胞でプレートした。Ｔ細胞を、アッセイの前に、同種異系のＰＢＬおよび抗Ｃ Ｄ３抗体を用いて、ＬＡＫ上清を含有する培地中、７日間で活性化し、指定され たエフェクター：標的比で標的に添加した。培養物を一晩３７℃でインキュベー トし、３００ｘｇで２分間遠心分離し、上清５０μｌ中の放射能を定量した。

界面活性剤で溶解した標的に対する、比溶解率を、本明細書に参照により援用し た、Ｔｏｗｎｓｅｎｄら、Ｃｅ１ｌ　４４：９５９−９６８　（１９８６）に記 載のように計算した。１．０．２．５および５０のエフェクター：標的比で、１ ｏ０８．８Ｔ細胞による溝膜付着細胞の溶解率は、それぞれ約４％、１４％およ び３３％であった。それに比べて、同じエフエクター二標的比では、１００８． ８Ｔ細胞はＥＢＶ形質転換したＢ細胞標的に対する効果を示さなかった。同様に 、同じエフェクター：標的比では、ＭＳ３細胞にょる溝膜付着細胞の溶解率は、 それぞれおよそ０％、０％および３％であった。

Ｔ細胞を、溝膜細胞単層を用いて同時培養することにより、患者１００８の溝膜 組織から単離した。ＲＡ中の病原性Ｔ細胞に認識される抗原は未知であるため、 溝膜細胞単層をインビトロ滑膜Ｔ細胞成長の刺激因子として用いた。相当する標 的細胞が病気である溝膜から得たバルク付着細胞培養物中に存在するものと想定 した。プレートした１９２マイクロウエルの同時培養物のうち、７つが１０−１ ４日内にＴ細胞成長に対し陽性を示した。Ｔ細胞を増殖させ、溝膜細胞単層、お よびＬＡＫ上清を含有する培地を代わるかわる用いて刺激することによりインビ トロで維持した。流動細胞計測法により、これら７つの培養物のそれぞれが１０ ０％ＣＤＪ＋であることが明らかになった。１００８８を表わす１つの培養物は 、とりわけ勢いよく成長し、顕微鏡評定によるように、単層細胞の破壊を促進し た。ＣＴＬアッセイにより、上述のようにこれら単層標的に対して１００８．８ が細胞障害性であることを確認した。細胞溶解は溝膜細胞樟的に対し特異的であ り、自家移植のＥｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウィルス形質転換したＢ細胞の溶解は なかった。標的はいずれも、ＣＤ４＋、ミニリン塩基性タンパク質反応性ヒトＣ ＴＬクローン、ＭＳ３により溶解せず、単層細胞が任意の活性化Ｔ細胞により溶 解を受ける可能性を排除した。１００８．８を用いて繰り返しアッセイを行って も、特異的溶解は決して３０−３５％を越えず、相当する滑膜標的細胞が、全単 層培養物のその比率をほぼ包含し、それは形態においては、多重細胞タイプの混 合物であることを示唆している。

１００８、８のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）β鎖遺伝子を、本明細書に参照によ り援用した、Ｍｕｌｌｉｓら、Ｍｅｔ工、」１Ｌ１−１５５：３３５−３５０　 （１９８７）に記載のようにポリメラーゼ鎖反応（ＰＣＩｌ）により増幅し、そ のＤＮＡ配列を決定した。増幅を、フンセンサスＶβプライマー（Ｖβｃａｎｓ ）すなわち、１６全での残基では７８％、１６残基のうち１５では９８％で既知 のヒトＴＣＲｖβ遺伝子と相同である、縮退１６ヌクレオチドブライマー（ｎＩ Ｉ２５６）を用いて行ったが、このプライマーはＫｉ＋５ｕｒａら、Ｊ、Ｉｍｍ ｏｌ、　１７：３７５−３８３　（１９８７）によって達成されたものである。

このプライマーは既知の■β遺伝子のいずれをも含有するβ鎖再配列を増幅する ために設計され、これにより、Ｖβ遺伝子の使用が論理に基づいて得られない場 合のＴ細胞クローンの分析を可能にした。１００８８のＶβｃｏｎｓ増幅したβ 鎖遺伝子の７−ケンシングは、表１６に示すように単一の■β１７−Ｊβ１．１ 再配列を明らかにした。続いて、患者１００８から得た残り６つの培養物を、表 １３に示すＶβ１７特異的プライマーを用いてＰＣＲ増幅により分析した。これ ら６つのうち３つから得たＴＣＲ遺伝子が増幅可能であり、この患者の滑膜から 得た７つのＴ細胞培養物のうち４つが再配列し、Ｖβ１７遺伝子を発現したこと を示している。

Ｃｖ　１７Ｔ　はＲＡ　の　Ｔ　の日で　される溝膜組織を、ＲＰＭＩ−１６４ ０、ならびにフラゲナーゼ（ＩＦｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ　Ｂｉｏｅｈｅｍｉｅａ ｌｓ、　Ｆｒｅｅｈｏｌｄ、　ＮＪ）４ｓ＋ｇ／ｍｌおよびＤＮＡｓｓ（Ｓｉｇ ｉ＋ａＣｈｅｍｉｃａ１．　Ｓｔ、　Ｌｏｕｔｓ、　ＭＯ）０．１５ｍｇ／ｍｌ を含む１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）中で３７℃で４時間、攪拌しながら消化し た。消化物を８０−メツシュのふるいに通し、フィコール密度勾配の界面から単 個細胞を収集し、洗浄し、そして５μｇ／ｍ　１の対照マウスＩｇＧ（Ｃｏｕｌ ｔｅｒ）を用いて、２％ＢＳＡを含有するＰＢＳ溶液中で、１０’／＊ｌ。

０℃で、３０分間インキュベートした。細胞を３回洗浄し、ヤギ抗−マウスＩｇ Ｇ（Ａｄｖａｎｃｅｄ　Ｍａｇｎｅｔｉｃｓ、　Ｃａ＋ｓｂｒｉｄｇｅ、　ＭＡ ）と結合した磁性ビーズと共に０°Ｃで３０分間インキュベートした。磁気でビ ーズを除去した後、残った細胞を５μｇ／＋ｓｌのマウス抗−ヒトＩＬ−２Ｒ（ Ｃｏｕｌｔｅｒ）と共に０℃で３０分間インキュベートし、洗浄し、そして上述 のように磁性ビーズを用いて選択した。ｍ１ｇＧ予備吸着から得られた細胞でコ ートされたビーズおよびＩＬ−２Ｒ抗体選択物を３回洗浄し、ただちに酸性化− グアニジニウム−フェノール−クロロホルムに再懸濁し、そしてＣｈｏ＋＊ｃｚ ｙｎｓｋｉら、Ａｎａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、１６２：１５６−１５９（１９８ ７）に記載されているようにＲＮＡを調製した。

磁性ビーズ調製物から得られたＲＮＡを逆転写し、段階Ｉの反応で、■βｃＯｎ ｓプライマーおよびＣβｅｘｔプライマーを用いて２０サイクル増幅した。それ ぞれの反応液の１μｌを、Ｖβ１７、Ｖβ８、■β１２および５°Ｃβプライマ ーと結合したＣβｉｎｔプライマーを含むそれぞれの段階Ｉ＋の反応で２０サイ クル再増幅した。それぞれの反応液の一部（アリフート）を２０Ｘ　ＳＳＣで希 釈し、煮沸して変性し、アイススラリー中で冷却した。試料をニトロセルロース 膜上に固定し、ヒ）　ＴＣＲβ鎖不変領域プローブとハイブリダイズして、そし て５６℃でＯ，ＬＸ　ＳＳＣ，０，１％ＳＤＳを用いて洗浄した。結合放射能を 、液体シンチレーション分光法を用いて定量化した。各プライマーの組合せのそ れぞれを合計４０サイクル行って製造された生成物の量は、生成物対サイクル数 の検量線の直線部分上にある。下記の表１７に示す値は、次式に従って算出され た、＋ｉ１ｇＧ対照に対するＩＬ２−Ｒ＋中の特異的Ｖβの、相対的な増加また は減少を表すニーＶ　ｃ＋ａｓ　ＩＬ２−Ｒ＋　Ｃｃｍｓ　ＩＬ２−Ｒ＋特異的 ＶβＣ１）Ｉｌｌｓ　（ｍｌｇＧ）　／　Ｃβｃｐ＋ｍｓ　（＋ａ１ｇＧ）　。

（以下余白） 轟−■ １　１．８Ｂ　０．４２　１．３５ ２　Ｌ、６０　０．３９　０．７２ コ２．ｕＱ、ｋＪＬＱ−ＪＡ Ｘ−ｔｓ、Ｄ、　Ｌ８６　±０．２５　０．４３　±０．０４　０．９００　＋ ０．３８Ｘ−”５．０．　３．４９±０．８８　１．１４±０．８２　０．９１ ±０．０６Ｘ−±ｓ、ｏ、　２．６６　ｆｌｊＥｌ　Ｏ，１０ｔｈｏ、０４　０ ．８３　±０．５８Ｘ−±Ｓ、Ｄ、　：１．１２　±０．５０　０ｊ８　ｆｏ、 １５　１−．３３　±０．６８次に、他のＲＡ患者の溝膜組織中の■β１７Ｔ細 胞の存在を測定した。リウマチ清勝は活性化Ｔ細胞および非活性化Ｔ細胞の混合 物を含有するので、活性化Ｔ細胞はこの疾病発生の開始および無期限化に最も関 連するものとして同定した。従って、溝膜組織の単細胞懸濁液から得られた活性 化Ｔ細胞を、磁性ビーズおよびヒトインターロイキン−２レセプター（ＩＬ−２ Ｒ）と反応する抗体を用いて選択した。それぞれの患者から得られた細胞懸濁液 を、インタイブで適合したマウスＩｇＧ（■ＩｇＧ）および磁性ビーズで前処理 して、非特異的吸着を制御した。ＲＮＡを、ＩＬ−２Ｒ＋および対照試料の細胞 から、インビトロで培養することな（直接抽出した。そのため、ＲＮＡは、外科 的な除去の際に清勝組織中のＴ細胞の分布を正確に表すことが予想される。

これらの磁性ビーズＲＮＡＭ製物の最初のＰＣＲ増幅は、１Ｌ２−Ｒ＋紙試料中 、対応する■ＩｇＧ対照中に含まれるよりも多い量のＶβ１７ＰＣＲ生成物を示 した。　ｉ＋１ｇＧ試料中のＴＣＲ＋１ＲＮＡの存在は、Ｔ細胞が、磁性ビーズ に非特異的に付着したことを示す。１Ｌ２−Ｒ＋紙試料おける明白な増加は、活 性化Ｔ細胞画分が、選択されなかった溝膜Ｔ細胞画分よりも多（のＶβ１７　Ｔ 細胞を含有することを示唆する。従って、定量的ＰＣＲ分析を用いて、ＩＬ−２ Ｒ＋およびｍ１ｇＧ対照試料中のＶβ１７Ｔ細胞の相対比率を公式に試験した（ 表１７）。磁性ビーズＲＮＡを逆転写し、ＶβｃｏｎおよびＣβｅｘｔで前増幅 し、そして不変領域プライマー（Ｃβ１ｎｔ）ならびにＶβ−特異的プライマー 、Ｖβ１７、■β８およびＶβ１２のそれぞれと、別々の反応で再増幅した。そ れぞれの試料に存在する総β鎖を評価し、およびＩＬ−２Ｒ＋および対照試料の それぞれの組の特異的Ｖβの定量結果を標準化するための基準を提供するために 、第２段階の増幅もまた、２つのＣβプライマー（５′ＣβおよびＣβ１ｎｔ） を用いて行った。Ｖβ１７ＤＮＡ比率は総Ｃβに対して、５人の被験患者のそれ ぞれについて、＋ｎ１ｇＧ対照試料において見いだされるよりもＩＬ−２Ｒ＋試 料において増加した。この増加は複数の分析で観察された。平均値を表１７に示 す。増幅された■β８またはＶβ１２　ＤＮＡの量がどの患者のＩＬ−２Ｒ＋画 分においても顕著に増加しなかったので、濃厚化は単離操作の結果ではない。

従って、リウマチ滑膜中の活性化Ｔ細胞は、存在し得るＶβファミリーすべての 断面を表すのではなく、Ｖβ１７Ｔ細胞を優先的に含み、そしてこの分析では定 量されなかった他のＶβファミリーを含み得る。

Ｄ、’ＶＩＴＴ　は　られた飄−を六すＲＮＡを逆転写し、Ｖβｃａｎｓおよび Ｃβｅｘｔプライマーを用いた２０サイクルの段階！の反応、ならびにＣβｉｎ ｔとＶβｃｏｎｓ（１００８゜８）またはＶβ８、Ｖβ１２、およびＶβ１７プ ライマー（磁性ビーズＲＮＡ調製物）を用いた３５サイクルの段階１■の反応に より、増幅した。二本鎖の反応生成物を、２％Ｎｕ−３ｉｅｖｅアガロースゲル で電気泳動した。Ｇｅｎｅ　Ｃ１ｅａｎ（Ｂｉｏ　１０１．　Ｓａｎ　Ｄｉｅｇ ｏ、　ＣＡ）を用いたゲル薄片から精製した後、試料を塩基変性し、直接シーケ ンスするか、またはプラスミド中にクローニングして、多重の独立再配列を７＝ ケンスした。いずれの場合も、試料を、Ｔ７ポリメラーゼ（Ｓｅｑｕｅｎａｓｅ 、　Ｕｎｉｔｅｄ　５ｔａｔｅｓ　Ｂｉｏｃｈｅｗｉｃａｌｓ。

Ｃ１ｅｖｅｌａｎｄ、　ＯＨ）を用いてＣβｓｅｑプライマー（図２）からシー ケンスした。

ＩＬ−２Ｒ＋　ＲＮＡに存在するＶβ１７再配列を、ＶβｅｏｎｓおよびＣβｅ ｘｔ前増幅からＶβ１７およびＣβｉｎｔのプライマー対を用いて増幅し、そし て反応生成物をシーケンスした。患者１０１４および１０１５から得られたＰＣ Ｒ生成物を直接シーケンスし、得られた結果はこれら増幅された試料のそれぞれ における単一のＶβ１７再配列の存在と一致した（表１７）。患者１０１３のＰ ＣＲ生成物をプラスミド中にクローニングし、シーケンスされた１３の単離物は 同一のＶβ１７再配列を含有した。患者１０１２からのプラスミドクローンをシ ーケンスすると、２つの優勢な再配列（それぞれの５つの単離物）および他の単 一な単離物が存在していた。従って、ＲＡ滑清勝Ｖβ１７レパートリーは、限ら れた不均質性を有し、インビボでＶβ１７Ｔ細胞のクローナルまたはオリゴクロ ーナルの増加を指示する。このことは、これらの同じ清勝調製物から得られたＶ β８およびＶβ１２のレパートリ−が顕著な不均質性を示したこととは対照的で ある。ＰＣＲ−増幅された■β８およびＶβ１２の分析された試料のいずれもが 直接シーケンス可能ではなく、そして患者１０１２から得られたＶβ８再配列の プラスミドクローニングは分析された５つのクローン中に４つの異なる配列を示 した。

患者１０１２から得られたＰＢＬ中の■β１７再配列はまた、清勝ＩＬ−２Ｒ十 試料中に見られるよりも大きい多様性を示した。Ｐ）ＩＡ／ＰＭＡで刺激された １０１２　ＰＢＬの３日間培養物から得られたＲＮＡを、清勝試料と同様に■β １７プライマーを用いて増幅し、生成物をプラスミド中にクローニングした。１ ０１２滑膜中に存在する再配列のいずれにも対応しない９つの異なる再配列を、 ソーケンスされた１０のクローン中に見いだした。従って、患者１０１２および 他の被験患者の活性化された清勝丁細胞の集団の中のＶβ１７再配列の制限され た不均質性は、おそらく、Ｔ細胞のランダム戸出入りによるのでは戸（、惟恩組 獄中でのそれらＶβ１７を担持するＴ細胞の選択的な増加による結果である。

実ｍ Ａ、Ｖ　−的ＰＣＲ−−を　いる　Ｔ　のＴｃＲ−１鼠旦且■ Ｔ細胞レセプターβ鎖遺伝子を、本明細書に参照として援用されたＷｕｃｂｅｒ ｆｐｅｎｎｉｇらの５ｃｉｅｎｃｅ　、　２４ｇ：１０１６−１０１９　（１９ ９０）に記載されたように、それぞれのＶβ−特異的プライマー、およびネスト したＣβプライマーを用いて２一段階反応で増幅した。

ＲＮＡをＣβｅｘｔブライ７−　（４０ｐ＋ｍｏｌ）を用いて１２μＩの反応緩 衝液（Ｈａｒｔら、前述）中で逆転写した（１時間、４２℃）。反応液を、ヌク レオチド、ＭｇＣ１２を含まない反応緩衝液（最終Ｍｇ“２濃度＝　３．６ｍＭ ）およびＴａｑポリメラーゼを含有するマスター混合物（ａ　＋ｍａｓｔｅｒ目 １ｘ）（８μｍ）で希釈し、それぞれのＶβプライマーを含む１９本のチューブ に配分した。試料を変性しく１５分間、９５’Ｃ）、そして２０サイクルのＰＣ Ｒを行った。それぞれのサイクルは、９５°Ｃで１分間の変性、２分間のアニー リング工程、そして７２℃で２分間の伸長から成る。最初の２サイクルは、３７ ℃および４５℃で、そして残りのサイクルは５０℃でアニーリングした。これら の段階Ｉの反応液の１マイクロリットル部分を、Ｃβｉｎｔプライマー（１００ ｐｍｏｌ）および対応する前増幅に用いたＶβプライマー１００　ｐｍｏｌを含 有する１００μｌの段階Ｉ＋の増幅反応液（Ｃｅｔｕｓ　Ｇｅｎｅ−Ａｍｐ　Ｉ （ｉｔ）に加えた。段階ＩＩの増幅は５ｏ″Ｃのアニーリング温度で、３７℃お よび４５°Ｃのランピングなしで２０サイクル行った。それぞれの反応液の５μ ｌを、２駕アガロースゲルで電気泳動し、ニトロセルロースに移し、そして３２ Ｐでｍｍしたβ鎖の不変領域プローブにハイブリダイズした。プロ。２トをＸ− 線フィルムに感光して、Ｖβ−特異的増幅の存在または非存在を評価した。

Ｂ、ｖ１７、■１４、ｖ　９およびｖ　３転　は活　Ｔ２澗ｊツリに邊」− 初期の研究における■β１７再配列の優勢がＶβ１６菖ｅｒプライマーの増幅の 偏りに起因するものではなかったことを確認するため、そして清勝中の他のＶβ 遺伝子の存在を評価するために、ＩＬ２−Ｒ＋試料中のＴＣＲ転写物を、公知の ヒ＋−Ｖβ遺伝子ファミリーに特異的な１９のＰＣＲプライマーのパネルを用い て分析した（表１８）。実施例Ｘ！のＶβｃｏｎｓプライマーは、Ｖβ１６ｍｅ ｒプライマーと等価である。これらの試料中に検出され得る■β遺伝子の数は、 ２から１２の範囲で変化し得た。Ｖβ１７が５人の患者中４人に見い出され、Ｖ β１６ｍａｒプライマーを用いる前述の分析を確証した。また、Ｖβ１４転写物 が、５人の患者中４人に見い出され、そしてＶβ３およびＶβ９転写物を５試料 中３試料に検出し得た。

従って、これら３つのＶβポリペプチドを有するＴ細胞もまた、清勝炎症に寄与 し得る。　（以下余白）轟−Ｖ それぞれのＶ　−１・プライマーを　いた１Ｌ−２Ｒ＋ＴΔ立丘 す１１ユユニ 爽施上−■■ ｖ８．２のＣＤＲ４ペプチドを用いたＥＡＥに・するワクチンＶβ８．２として 同定されたう、、）ＴＣＲβ鎖の第４高頻度可変領域まりＩｔ　ＣＤＲ４領域中 に見られる配列ＶＰＮＧＹＫＶＳＲＰＳＱＧＤＦＦＬＴＬ　（配列番号４６）を 含有する合成ペプチドｌｏｏμｇを用いて、ラットを免疫した。生理食塩水中に 溶解したペプチドを、等容量のヒト結核菌１０■ｇ／ｕｌを含有する完全Ｆｒｅ ｕｎｄアジュバンｌ−（ＣＦＡ）中に乳化した。３０日後、ＣＦＡ中のモルモッ トミニリン塩基性タンパク質５０μｇを、動物に抗原投与した。表１９に示され るように、臨床的および組織学的に測定したように、ＣＤＲ４ペプチドワクチン 投与は疾病の発生および重篤度を低減した。組織学的方法は、本質的に、本願に 参照として援用されたＨｕｇｈｅｓ　＆　ＰｏｔｅｌｌのＪ、　Ｎｅｕｒｏ　ａ ｔｈ、　Ｅｘ　、　Ｎｅｕｒｏｌ、　４３：１５４　（１９８４）に記載された ように行った。

（以下余白） 本発明は現時点で好ましい実施態様を参照して記載されているが、種々の改変が 本発明の精神から外れることな（行われ得ることが理解されるべきである。従っ て、本発明は以下のクレームによってのみ限定される。

５′３′ 補正書の写しく翻訳文）提出書（特許法第１８４条の８）婆 平成５年７月２２日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．脊椎動物においてＴ細胞媒介の病理症状を予防または治療するためのワクチ ンであって、少なくとも１種の実質的に純粋なＴ細胞レセプター、または該病理 症状を媒介するＴ細胞の表面に存在し、該Ｔ細胞レセプターに対応するフラグメ ントの免疫原性有効量、および薬学的に許容され得る媒体を含む、ワクチン。 ２．前記Ｔ細胞レセプターまたはそのフラグメントが、Ｖβ３、Ｖβ１４、Ｖβ １７またはその任意の組合せのアミノ酸配列を実質的に含む、請求項１に記載の ワクチン。 ３．前記Ｔ細胞レセプターが、Ｖβ１７のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載 のワクチン。 ４．前記Ｔ細胞媒介の病理症状がリウマチ様関節炎である、請求項３に記載のワ クチン。 ５．前記フラグメントが前記Ｔ細胞レセプターの可変領域配列を含む、請求項１ に記載のワクチン。 ６．前記可変領域配列がβ鎖可変領域である、請求項５に記載のワクチン。 ７．前記β鎖可変領域がＶβ１７またはそのフラグメントのアミノ酸配列を実質 的に含む、請求項６に記載のワクチン。 ８．前記β鎖可変領域が配列ＳＱＩＶＮＤＦＱＫを実質的に含む、請求項７に記 載のワクチン。 ９．前記β鎖可変領域がＶβ１４またはそのフラグメントのアミノ酸配列を実質 的に含む、請求項６に記載のワクチン。 １０．前記β鎖可変領域が配列ＳＭＮＶＥＶＴＤＫを実質的に含む、請求項９に 記載のワクチン。 １１．前記β鎖可変領域がＶβ３またはそのフラグメントのアミノ酸配列を実質 的に含む、請求項６に記載のワクチン。 １２．前記β鎖可変領域がアミノ酸配列ＳＹＤＶＫＭＫＥＫを実質的に含む、請 求項１１に記載のワクチン。 １３．前記フラグメントが、Ｖ（Ｄ）Ｊ結合配列を含む、請求項１に記載のワク チン。 １４．前記フラグメントが、結合（Ｊ）領域配列を含む、請求項１に記載のワク チン。 １５．さらにアジュバントを含む、請求項１に記載のワクチン。 １６．前記ワクチンが１種を越えるタイプのＴ細胞レセプターまたはそのフラグ メントを含む、請求項１に記載のワクチン。 １７．前記Ｔ細胞レセプターまたはそのフラグメントが、Ｖβ３、Ｖβ１４、ま たはＶβ１７の任意の組合せから選択される、請求項１６に記載のワクチン。 １８．前記ワクチンが、前記Ｔ細胞レセプターの異なる配列に対応する１種を越 えるフラグメントを含む、請求項１に記載のワクチン。 １９．前記フラグメントが、Ｖβ３、Ｖβ１４、またはＶβ１７の任意の組合せ から選択される、請求項１８に記載のワクチン。 ２０，前記ＴＣＲフラグメントが、前記Ｔ細胞病理症状に関連した超抗原と反応 するＴＣＲβ鎖領域から得られる実質的に純粋なペプチドを含む、請求項１に記 載のワクチン。 ２１．前記実質的に純粋なペプチドが、Ｘ１−ドＸ２−Ｅ−Ｘ３のアミノ酸配列 を有し、Ｘ１およびＸ３がそれぞれ単一のアミノ酸またはアミノ酸群であり、そ してＸ２がＲまたはＸである、請求項２０に記載のワクチン。 ２２．前記アミノ酸配列が実質的に配列ＥＧＹＳＶＳＲＥＫＫＥＳＦＰＬである 、請求項２１に記載のワクチン。 ２３．前記アミノ酸配列が実質的に配列ＥＧＹＫＶＳＲＫＥＫＲＮＦＰＬである 、請求項２１に記載のワクチン。 ２４．前記アミノ酸配列が実質的に配列ＥＧＹＳＶＳＲＥＫＫＥＲＦＳＬである 、請求項２１に記載のワクチン。 ２５．前記フラグメントが担体に結合している、請求項１に記載のワクチン。 ２６．前記Ｔ細胞媒介の病理症状が多発性硬化症であり、前記脊椎動物がヒトで あり、そして前記フラグメントが実質的に配列ＳＧＤＱＧＧＮＥを含み、配列Ｓ ＧＤＱＧＧＮＥを実質的に有するＴ細胞レセプターに対して免疫応答を誘発する 、請求項１に記載のワクチン。 ２７．前記Ｔ細胞レセプターが配列ＳＧＤＱＧＧＮＥを含む、請求項１に記載の ワクチン。 ２８．Ｔ細胞媒介の病理症状を示す、または示すおそれのある個体にワクチン投 与を行う方法であって、該個体に請求項１に記載のワクチンを投与する工程を包 含する、方法。 ２９．前記ワクチンが１回より多く投与される、請求項２８に記載の方法。 ３０．前記ワクチンがアジュバントを含む製剤で投与される、請求項２８に記載 の方法。 ３１．個体におけるＴ細胞クローンの制御されない複製を処置する方法であって 、請求項１に記載のワクチンを個体に投与する工程を包含する、方法。 ３２．Ｔ細胞媒介の病理症状の治療に用いるためのワクチンを選択する方法であ って、次の工程を包含する方法：ａ．該病理症状を媒介するＴ細胞クローンを得 る工程；ｂ．該病理症状に関連するＴ細胞クローンから得られるＴ細胞レセプタ ーまたはそのフラグメントのアミノ酸配列を決定する工程； ｃ．該病理症状に関連するＴ細胞レセプターには特有であるが、関連しないＴ細 胞レセプターには特有でない、該Ｔ細胞レセプターのセグメントを選択する工程 ；およびｄ．族Ｔ細胞レセプターに対する免疫応答を誘発し得る該選択された配 列のアミノ酸配列を選択し、それによってワクチンを選択する工程。 ３３．個体におけるＴ細胞媒介の病理症状に対する感受性を診断または予知する 方法であって、該個体から得られる試料中のＶβ３、Ｖβ１４、もしくはＶβ１ ７またはそのフラグメントのβ鎖可変領域を有するＴ細胞を検出する工程を包含 し、該Ｖβ含有Ｔ細胞の異常な発現の存在が、該病理症状または該病理症状に対 する感受性を示す、方法。 ３４．前記Ｔ細胞がβ１７またはそのフラグメントのβ鎖可変領域を有する、請 求項３３に記載の方法。 ３５．前記病理症状がリウマチ様関節炎である、請求項３３に記載の方法。 ３６．Ｔ細胞に媒介されない病理症状に関連するＴ細胞レセプター上には実質的 に見い出されない前記Ｖβ１７の部分を検出する工程を包含する、請求項３４に 記載の方法。 ３７．前記試料が滑膜組織から得られる、請求項３３に記載の方法。 ３８．前記Ｖβ１７が、該Ｖβ１７を検出可能なリガンドに接触させることによ って検出される、請求項３４に記載の方法。 ３９．前記Ｖβ１７の存在が、Ｖβ１７をコードするヌクレオチド配列に相補的 なヌクレオチドプローブによって検出される、請求項３４に記載の方法。 ４０．Ｔ細胞媒介の病理症状を予防または治療する方法であって、Ｔ細胞レセプ ターとその結合パートナーとの結合を阻害し、該Ｔ細胞媒介の病理症状に関連す るＴ細胞の増殖を予防する、方法。 ４１．前記結合の阻害が、前記Ｔ細胞レセプターの結合パートナーと反応するリ ガンドによって成し遂げられる、請求項４０に記載の方法。 ４２．前記リガンドが抗体である、請求項４１に記載の方法。 ４３．前記結合の阻害が、前記Ｔ細胞レセプター上の結合部位と反応するリガン ドによって成し遂げられる、請求項４０に記載の方法。 ４４．前記リガンドが抗体である、請求項４１に記載の方法。 ４５．前記Ｔ細胞レセプターがＶβ３−、マβ１４−、またはＶβ１７−含有Ｔ 細胞レセプターである、Ｔ細胞媒介の病理症状を予防または治療する請求項４０ に記載の方法。 ４６．前記Ｔ細胞レセプターがＶβ１７を含有する、請求項４５に記載の方法。 ４７．前記病理症状がリウマチ様関節炎である、請求項４５に記載の方法。 ４８．前記結合パートナーがリウマチ様関節炎の素因となるＨＬＡ−ＤＲである 、請求項４５に記載の方法。 ４９．Ｖβ１７にリガンドを結合させることによって付着が阻止される、請求項 ４６に記載の方法。 ５０．前記Ｖβ１７の結合パートナーにリガンドを結合させることによって付着 が阻止される、請求項４６に記載の方法。 ５１．個体において、Ｔ細胞媒介の病理症状を予防または治療する方法であって 、該個体中のＶβ３−、Ｖβ１４−、またはＶβ１７−含有Ｔ細胞を細胞傷害的 にまたは細胞増殖抑制的に処理する工程を包含する、方法。 ５２．前記Ｔ細胞がＶβ３、Ｖβ１４、またはＶβ１７の任意の組合せを含有す る、請求項５１に記載の方法。 ５３．前記Ｔ細胞がＶβ１７を含有する、請求項５１に記載の方法。 ５４．前記Ｔ細胞媒介の病理症状がリウマチ様関節炎である、請求項５１に記載 の方法。 ５５．前記Ｖβ１７含有Ｔ細胞が、Ｖβ１７と選択的に結合する細胞傷害因子ま たは細胞増殖抑制因子を用いて処理される、請求項５３に記載の方法。 ５６．前記因子が、放射性部分、化学療法性部分および化学毒性部分からなる群 から選択される部分に付着した抗体である、請求項５３に記載の方法。 ５７．脊椎動物におけるＴ細胞媒介の病理症状を予防または治療するためのワク チンであって、Ｔ細胞レセプターの内部イメージである抗イディオタイプ抗体、 または該病理症状を媒介するＴ細胞の表面に存在し、該Ｔ細胞レセプターに対応 するフラグメント、および薬学的に許容され得る媒体を含む、ワクチン。 ５８．前記フラグメントが前記Ｔ細胞レセプターの可変領域配列を含む、請求項 ５７に記載のワクチン。 ５９．前記フラグメントが、Ｖ（Ｄ）Ｊ結合配列を含む、請求項５７に記載のワ クチン。 ６０．さらにアジュバントを含む、請求項５７に記載のワクチン。 ６１．前記ワクチンが、１種を越えるＴ細胞レセプターまたはそのフラグメント の内部イメージである、抗イディオタイプ抗体を含む、請求項５７に記載のワク チン。 ６２．前記Ｔ細胞媒介の病理症状を示す、もしくは示すおそれのある個体にワク チン投与を行う方法であって、該個体に請求項５７に記載のワクチンを投与する 工程を包含する、方法。 ６３．前記フラグメントが結合領域配列を有する、請求項５８に記載のワクチン 。 ６４．個体における多発性硬化症に対する感受性を診断または予知する方法であ って、該個体から得られる試料中の配列ＳＧＤＱＧＧＮＥを実質的に有するＴ細 胞を検出する工程を包含し、そのようなＴ細胞の存在が多発性硬化症または多発 性硬化症に対する感受性を示す、方法。 ６５．前記配列が、該配列を検出可能なリガンドと接触させることによって検出 される、請求項６４に記載の方法。 ６６．前記配列の存在が、該配列をコードするヌクレオチド配列に相補的なヌク レオチドプローブによって検出される、請求項６４に記載の方法。 ６７．配列ＳＧＤＱＧＧＮＥを実質的に含むＴ細胞レセプターの、その結合パー トナーに対する付着を阻止する工程を包含する、多発性硬化症を予防または治療 する方法。 ６８．前記配列にリガンドを結合させることによって付着が阻止される、請求項 ６７に記載の方法。 ６９．前記Ｔ細胞レセプター結合パートナーにリガンドを結合させることによっ て付着が阻止される、請求項６７に記載の方法。 ７０．個体における多発性硬化症を予防または治療する方法であって、個体中の 、配列ＳＧＤＱＧＧＮＥを実質的に含むＴ細胞を、細胞傷害的にまたは細胞増殖 抑制的に処置する工程を包含する、方法。 ７１．前記Ｔ細胞を含む配列が、該配列と選択的に結合する細胞傷害因子または 細胞増殖抑制因子を用いて処理される、請求項７０に記載の方法。 ７２．前記因子が、放射性部分、化学療法性部分および化学毒性部分からなる群 から選択される部分に付着した抗体である、請求項７０に記載の方法。 ７３．実質的に純粋なＴ細胞レセプターまたは病理症状を媒介するＴ細胞の表面 上に存在し、該Ｔ細胞レセプターに対応するフラグメント、およびアジュバント を含む、組成物。 ７４．配列ＳＧＤＱＧＧＮＥを実質的に含む、実質的に純粋なペプチド。 ７５．Ｔ細胞病理症状に関連した超抗原と反応するＴＣＲβ鎖領域由来の、実質 的に純粋なペプチド。 ７６．前記Ｔ細胞病理症状がリウマチ様関節炎である、請求項７５に記載の実質 的に純粋なペプチド。 ７７．アミノ酸配列Ｘ１−Ｘ２−Ｅ−Ｘ３を実質的に含む実質的に純枠なペプチ ドであって、Ｘ１およびＸ３がそれぞれ１種のアミノ酸またはアミノ酸群であり 、そしてＸ２がＲまたはＫである、ペプチド。 ７８．前記アミノ酸配列が実質的に配列ＥＧＹＳＶＳＲＥＫＫＥＳＦＰＬである 、請求項７７に記載の実質的に純粋なペプチド。 ７９．前記アミノ酸配列が実質的に配列ＥＧＹＫＶＳＲＫＥＫＲＮＦＰＬである 、請求項７７に記載の実質的に純粋なペプチド。 ８０．前記アミノ酸配列が実質的に配列ＥＧＹＳＶＳＲＥＫＫＥＲＦＳＬである 、請求項７７に記載の実質的に純粋なペプチド。 ８１．脊椎動物において、Ｔ細胞媒介の病理症状、またはＴ細胞クローンの制御 されない複製を予防または処置するためのワクチンであって、Ｖβ３、Ｖβ１４ 、またはＶβ１７のβ鎖可変領域を含むレセプターを有するＴ細胞の免疫原性有 効量を含む、ワクチン。 ８２．前記β鎖可変領域がＶβ１７である、請求項８１に記載のワクチン。 ８３．前記Ｔ細胞媒介の病理症状がリウマチ様関節炎である、請求項８１に記載 のワクチン。 ８４．Ｔ細胞媒介の病理症状を示す、または示すおそれのある個体を予防または 治療する方法であって、該個体に請求項８１に記載のワクチンを投与する工程を 包含する、方法。 ８５．多発性硬化症を予防または治療するためのワクチンであって、配列ＳＧＤ ＱＧＧＮＥを実質的に含むレセプターを有するＴ細胞の免疫学的有効量を含む、 ワクチン。 ８６．多発性硬化症を予防または治療するための方法であって、個体に請求項８ ５に記載のワクチンを投与する工程を包含する、方法。 ８．７，Ｔ細胞媒介の病理症状におけるＴ細胞の増殖に関連するＴ細胞レセプタ ーの結合パートナーを決定する方法であって、次の工程を包含する方法： （ａ）該Ｔ細胞媒介の病理症状の成分であるＴ細胞を同定する工程； （ｂ）該Ｔ細胞の超抗原結合部位を決定する工程；（ｃ）試料を該超抗原結合部 位と接触させる工程；および（ｄ）該Ｔ細胞レセプターの結合パートナーと該超 抗原結合部位との結合を決定する工程であり、この結合が、該試料中に該Ｔ細胞 レセプターの結合パートナーが存在することを示す、工程。 ８８．前記Ｔ細胞レセプターの結合パートナーの有効量を個体に投与して、該Ｔ 細胞の増殖を阻止する工程をさらに包含する、請求項８７に記載の方法。 ８９．前記免疫原性フラグメントが、前記β鎖可変領域のＣＤＲ２領域のアミノ 酸配列を実質的に含む、請求項１のワクチン。 ９０．前記ＣＤＲ２６領域が、配列ＤＰＧＬＧＬＲＬＩＹＦＳＹＤＶＫＭＫＥＫ Ｇ（配列番号７５）またはその免疫原性部分を実質的に含む、請求項８９に記載 のワクチン。 ９１．前記ＣＤＲ２領域が、配列ＤＰＧＬＧＬＲＱＩＹＹＳＭＮＶＥＶＴＤＫＧ （配列番号７６）またはその免疫原性部分を実質的に含む、請求項８９に記載の ワクチン。 ９２．前記ＣＤＲ２領域が、配列ＤＰＧＱＧＬＲＬＩＹＹＳＱＩＶＮＫＦＱＫＧ （配列番号７７）またはその免疫原性部分を実質的に含む、請求項８９に記載の ワクチン。 ９３．前記病理症状がリウマチ様関節炎である、請求項８９に記載のワクチン。 ９４．前記アミノ酸配列が、Ｖβ３、Ｖβ１４、またはＶβ１７の配列を実質的 に含む、請求項９３に記載のワクチン。 ９５．前記病理症状が多発性硬化症である、請求項８９に記載のワクチン。 ９６．前記β鎖ＶＤＪ領域が、配列ＡＳＳＬＧＧＡＶＳＹＮ（配列番号３）を実 質的に含む、請求項１に記載のワクチン。 ９７．前記β鎖ＶＤＪ領域が、配列ＡＳＳＬＧＧＥＥＴＱＹＦ（配列番号４）、 配列ＡＳＳＬＧＧＦＥＴＱＹＦ（配列番号５）、または配列ＡＳＳＬＧＧＴＥＡ ＦＦ（配列番号６）を実質的に含む、請求項１に記載の方法。 ９８．前記β鎖ＶＤＪ領域が、配列ＣＡＩＧＳＮＴＥ（配列番号２）を実質的に 含む、請求項１に記載の方法。 ９９．個体においてＴ細胞媒介の病理症状を予防または治療する方法であって、 Ｔ細胞レセプターまたはその免疫原性フラグメントをコードする核酸を、該個体 中で発現され得る形態で該個体に投与する工程を包含する、方法。 １００．前記核酸がＤＭである、請求項９９に記載の方法。 １０１．前記核酸がＲＮＡである、請求項９９に記載の方法。 １０２．前記核酸が前記個体の筋肉中に投与される、請求項９９に記載の方法。 １０３．前記免疫原性フラグメントが、前記Ｔ細胞レセプターのβ鎖Ｖ（Ｄ）Ｊ 領域のアミノ酸配列を含む、請求項９９に記載の方法。 １０４．前記アミノ酸配列が、実質的にＶβ３、Ｖβ４、Ｖβ１２、Ｖβ１４、 またはＶβ１７のアミノ酸配列である、請求項１０３に記載の方法。 １０５．前記病理症状が関節炎または多発性硬化症である、請求項１０４に記載 の方法。 １０６．前記免疫原性フラグメントが、前記Ｔ細胞レセプターの可変領域のアミ ノ酸配列を含む、請求項９９に記載の方法。 １０７．前記可変領域がβ頭可変領域である、請求項１０６に記載の方法。 １０８．前記アミノ酸配列が、前記β鎖可変領域のＣＤＲ２領域の配列を実質的 に含む、請求項１０７に記載の方法。 １０９．前記アミノ酸配列が、前記β鎖可変領域の超抗原結合領域の配列を実質 的に含む、請求項１０７に記載の方法。 １１０．前記β領可変領域がＶβ３、Ｖβ４、Ｖβ１２、Ｖβ１４、またはＶβ １７である、請求項１０７に記載の方法。 １１１．前記病理症状がリウマチ様関節炎または多発性硬化症である、請求項１ ０６に記載の方法。 １１２．請求項９９に記載の核酸を含有する、ベクター。 １１３．請求項９９に記載のベクターおよび薬学的に許容され得る媒体を含む、 組成物。