JPH06508026A - 診断と治療に用いるｈｃｖゲノム配列 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 診断と治療に用いるＨＣＶゲノム配列 本願は、１９９１年５月８日付けで出願された、標題が”Ｐｏ１ｙｎ＋」ｃｌｅ ｏｔｉｄｅ　Ｐｒｏｂｅｓ　Ｕｓｅｆｕｌ　ｆｏｒ　Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｆｏ ｒ　Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　ＣＶｉｒｕｓ”である米国特許出願第０７７６９７． ３２６号の一部継続出願で本発明は、以前は血行性非Ａ非Ｂ型肝炎ウィルス（Ｎ ＡＮＢＶ）感染症と呼ばれていたＣ型肝炎ウィルス（ＨＣＶ）感染症を検出し処 置するのに用いる組成物および方法に関する。より具体的には、本発明の実施態 様は、ＨＣＶの検出、ＨＣＶ感染症の予防処置用のワクチンの開発、およびＨｃ ｖに対する受動免疫を伝達する抗体産物の開発のための組成物および方法を特徴 とする。

免乳旦互景 ＨＣＶの原型分離株は、米国特許願第１２２．７１４号（ヨーロッパ特許公開策 ３１８．２１６号も参照のこと）において特性が記載されている。”ＨＣＶ”と いう用語には、本願で用いる場合、同じウィルス種の新しい分離株も含まれる。

”ｕｃｖ−ｉ“という用語は、米国特許願第１２２，７１４に引用されている。

ＨＣＶは、他の形態のウィルス関連肝臓疾患とは区別できる伝播性の疾患である 。他の形態としては、公知の肝炎ウィルス、すなわち、Ａ型肝炎ウィルス（ｌ（ ＡＹ）、Ｂ型肝炎ウィルス（ＨＢ■）、およびデルタ肝炎ウィルス（ＨＤＶ）を 原因とする肝臓疾患、ならびにサイトメガロウィルス（ＣＭＶ）またはエプスタ インパールウィルス（ＥＢＶ）によって誘発される肝炎が含まれる。

ＨＣＶは輸血を受けた個体内で最初に同定された。

ＨＣＹのキャリア、およびＨＣｖで汚染された血液もしくは血液製剤ラスクリー ニングおよび同定するために用いられる、鋭敏で特異的な方法が強（要望されて いる。輸血後肝炎（ＰＴＨ）は輸血を受けた患者の約１０％に起こり、これらの 症例の９０％までがＨＣＶが原因である。この疾患は慢性肝臓障害へ進行するこ とが多い（２５〜５５％）。

患者の医療、および血液と血液製剤または対人的な接触によるＨＣＶの伝播の予 防には、ＨＣＶに関連する核酸、抗原および抗体を検出するための、信頼できる スクリーニング、診断および予後の手段が必要である。

本願の情報は、ＨＣＶが複数の遺伝子型を有することを示唆する。すなわち、Ｈ ＣＶウィルスの遺伝情報は、すべてのＨＣＶについて必ずしも全く同一ではなく 、異なる遺伝情報を有する複数の群が含まれている。

遺伝情報はＤＮＡとＲＮＡの糸状分子中に記憶される。ＤＮＡはデオキシリボヌ クレオチドの共有結合鎖で構成され、ＲＮＡはリボヌクレオチドの共有結合鎖で 構成される。各ヌクレオチドは、４種の塩基：アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ） 、チミン（Ｔ）およびシトシン（Ｃ）のうちの１つによって特徴付けられる。こ れらの塩基は、官能基の配向のために、特定の塩基対が水素結合とπ−スタッキ ング相互作用によって互いに引き合って結合するという点で、相補的である。Ｄ ＮＡの一方の鎖の中のアデニンは、対向する相補的な鎖の中のチミンと対を作る 。ＤＮＡの一方の鎖の中のグアニンは、対向する相補的な鎖の中のシトシンと対 を作る。ＲＮＡ中、チミン塩基はウラシル（Ｕ）で置換され、このウラシルは対 向する相補的な鎖の中のアデニンと対を作る。

生物の遺伝暗号は塩基対の配列中に保持される。生きている細胞は、核酸の情報 を解釈１７、転写し、そして翻訳してタンパク質およびペプチドを作る。

ＨＣ’／のゲノムはＲＮＡの一本の正鎖で構成される。そのＨＣＶゲノムは、約 ３０００個のアミノ酸のポリタンパク質をコードする連続したオープンリーディ ングフレーム（ＯＲＦ）を有する。ＯＲＦ中において、構造タンパク質はＮ末端 領域のほぼ最初の１／４部分にコードされているようであり、ポリタンパク質の 大部分は非構造タンパク質に関与している。

ＨＣＶのポリタンパク質は、アミノ末端からカルボキシ末端まＣの間に、ヌクレ オキャプシドタンパク質（Ｃ）、エンベロープタンパク質（Ｅ）、ならびに非構 造タンパク質（ＮＳ）　ｌ、　２　（ｂ）　、　３．４　（ｂ）、および５を含 む。

異なる遺伝子型のＨＣｖには、宿主の免疫系に変化した応答を与えるタンパク質 がコードされ得る。異なる遺伝子型のＨＣＶを、このような遺伝子型に対して特 異的でない免疫診断法および核酸プローブ法によって検出することは困難であり 得る。

本願で用いる選択された用語の定義を、本発明の理解を容易にするために以下に 説明する。′対応する”という用語は核酸の特定の配列に対して相同的もしくは 相補的であることを意味する。核酸とペプチド間の場合、″対応する”という用 ｇ５は、ペプチドのアミノ酸が核酸の配列またはその相補体に由来する順序にあ ることを指す。

”非天然型の核酸”という用語は、ゲノムの核酸、ｃＤＮＡ、半合成核酸または 合成起源の核酸の一部であって、その起源もしくは処理によって、（１）それが 天然において結合しているすべての核酸とは結合していないか、（２）それが天 然において連結しているのど異なる核酸もしくは他の化学試薬に連結しているか 、または（３〉天然には存在しないものを指す。

同様に”非天然型のペプチド”という用語は、天然型の大きなペブチ闘もしくは タンパク質または半合成もしくは合成ペプチドの一部であって、その起源または 処理によって、（１）それが天然において結合しているすべてのペプチドとは結 合していないか、（２）それが天然において連結しているのと異なるペプチド、 官能基もしくは化学試薬に連結しているか、または（３）天然には存在しないも のを指す。

”プライマー”という用語は、適正な条件下に置かれた場合により大きな核酸の 合成を開始させ得る核酸を指す。プライマーは、コピーされるべき核酸の領域に 完全にまたは実質的に相補的である。したがって、ハイブリッド形成を誘導する 条件下では、プライマーはより大きな核酸の相補的領域に対してアニーリングす る。適切な反応物を添加すると、プライマーはその重合試薬によって伸長されて より大きな核酸のコピーを作る。

”結合対”という用語は、相互の親和性または結合能力を示す分子の対を指す。

本願の目的に関して、′リガンド”という用語は結合対の一方の分子を意味し、 ′抗リガンド”または”受容体”または”標的”という用語は結合対の反対側の 分子を指す。例えば核酸については、結合対は２つの相補的な核酸を含む。それ らの核酸の一方はリガンドと呼ばれ、他方の鎖は抗リガンド受容体もしくは標的 と呼ばれる。リガンドもしくは抗リガンドの呼称は、任意の便宜上の問題である 。他の結合対としては、少数の例を挙げるならば、抗原と抗体、医薬と医薬受容 体部位、および酵素と酵素基質がある。

”標識”という用語は検出可能な分子の部分を指し、例えば、放射性同位元素、 酵素、発光剤、沈澱剤および染料があるが、これらに限定はされない。

”支持体”という用語には、フィルターおよび膜などの慣用的な支持体、および 、媒体中に実質的に分散させ、次いで、固定化、濾過、分配などによってその媒 体から取り出すかまたは分離し得る回収可能な支持体が含まれる。”支持体手段 ”という用語は、結合パートナ−１または共有結合もしくは非共有結合によって 核酸、ペプチドまたは抗体に結合し得る支持体を指す。

多数のＨＣＶの株と分離株が同定されている。ＵＳＡから得た最初の分離株（” ＨＣＶ−１−；　Ｑ、−Ｌ、　Ｃｈｏｏら、５ｃｉｅｎｃｅ、　２４４巻、３５ ９〜３６２頁、１９８９年；　Ｑ、−Ｌ、　Ｃｈｏｏら、Ｂｒ１ｔ、　Ｍｅｄ、 　Ｂｕｌｌ、、４６巻、４２３−４４１頁、１９９０年；　Ｑ、−Ｌ、　Ｃｈｏ ｏら、Ｐｒｏｅ、　Ｎａｔｌ、　Ａｅａｄ、　Ｓｃｉ、。

［１８Ｊ１！、２４５１〜２４５５頁、１９９１年；および上述のヨーロッパ特 許公開第３１８．２１６号を参照）の配列と比べると、日本の分離株（”ＢＣＶ 　Ｊｌ“）は、ＮＳ３およびＮＳ４の領域内においてヌクレオチドおよびポリペ プチドの両方の配列がかなり異なることが見出された。この結論はその後に、Ｎ Ｓ５およびエンベロープの領域（Ｅｌ／Ｓおよび８２／Ｎ５Ｉ）まで拡大された Ｃ　Ｌ　Ｔａｋｅｕｃｈｊら、二ｅｎ、　Ｖｉｒｏｌ、、７１巻、３０２７〜３ ０３３頁、１９９０年；　Ｙ、　Ｋｕｂｏ、Ｎｕｃｌ。

Ａｃ１ｄｓ、　Ｒｅｓ、、１７巻、１０３６７〜１０３７２頁、１９８９年；お よびに、　Ｔａｋｅｕｃｈｉら、Ｇｅｎｅ、９１巻、２８７〜２９１頁、１９９ ０年参照）。前者のグループの分離株は、最初に米国で同定されたものであり、 本明細書では”遺伝子型１　（Ｇｅｎｏｔｙｐｅ　Ｉ）”と呼ぶ。後者のグルー プの分離株は、最初に日本で同定されたものであり、本願では”遺伝子型■”と 呼ぶ。

免且ユｌ星呈笠ユ 本発明は、異なる遺伝子型を規定するＨＣＶウィルスゲ／ムに対応する核酸およ びペプチドを含む組成物を特徴とする。また本発明は、本願に記載の異なる遺伝 子型を規定するＨＣＶウィルスゲノムの配列に対応する組成物の使用方法を特徴 とする。

Ａ、ｕ旦底且 本発明の核酸、すなわち異なる遺伝子型を規定するＨＣＶウィルスゲ／ムに対応 する核酸は、核酸ハイブリッド形成アッセイ法のプローブとして、核酸の合成に 関する反応に用いるプライマーとして、存在し得る他の成分からＨＣＶウィルス 核酸を分離するための結合パートナ−として、および、ウィルス核酸の転写もし くは翻訳を阻害するためのアンチセンス核酸として有用である。

本発明の１つの実施態様は、Ｃ型肝炎ウィルスゲノムの非ＨＣＶ−１ヌクレオチ ド配列に対応する少なくとも８個のヌクレオチドからなる核酸配列を有する非天 然型の核酸を含む組成物を特徴とする。このヌクレオチド配列は、好ましくは、 ＮＳ５領域、エンベロープｌ領域、５°ＵＴ領域およびコア領域からなる少なく とも１つの領域中に存在する配列から選択される。

ＮＳ５の領域に対応する配列については、その配列は配列番号２〜２２の配列内 の配列から選択されることが好ましい。配列番号ｌの配列は）ＩＣＶ−１に対応 する。配列番号１〜２２の配列は本願の配列表に規定されている。

エンベロープ１領域に対応する配列については、その配列は配列番号２４〜３２ の配列内の配列から選択されるのが好ましい。配列番号２３の配列はＨＣＶ−１ に対応する。配列番号２３〜３２の配列は本願の配列表に記載されている。

５＝ＵＴ領域に対応する配列については、その配列は配列番号３４〜５１の配列 内の配列から選択されるのが好ましい。配列番号３３の配列はＨＣＶ−１に対応 する。配列番号３３〜５１の配列は本願の配列表に記載されている。

コア領域に対応する配列については、その配列は配列番号５３〜６６の配列内の 配列から選択されるのが好ましい。配列番号５２の配列ＨＣＶ−１に対応する。

配列番号５２〜６６の配列は本願の配列表に記載されている。

本発明の組成物は、ＨＣＶの異なる遺伝子型に対応する核酸とハイブリット生産 物を形成する。

ＨＣＶは少なくとも５種の遺伝子型を有する。これらの遺伝子型を、本願ではＧ Ｉ−ＧＶ　と呼ぶ。第１の遺伝子型であるＧｌは、配列番号１〜６．２３〜２５ ．３３〜３８および５２〜５７の配列で例示される。第２の遺伝子型であるＧ１ １は、配列番号７〜１２．２６〜２８．３９〜４５および５８から６４の配列で 例示される。第３の遺伝子型であるＧＩＩ［は、配列番号１３〜１７．３２．４ ６〜じおよび６５〜６６の配列で例示される。第４の遺伝子型であるＧｒＶは、 配列番号２０〜２２および２９〜３１および４８〜４９の配列で例示される。第 ５の遺伝子型であるＧＶは、配列番号１８．１９．５０および５１の配列で例示 される。

本発明の１つの実施態様は、ＨＣＶの遺伝子型を例示する１つ以上の配列に対応 する配列を有する核酸を含む組成物を特徴また本発明の実施態様は、ＨＣＶ核酸 に対応する配列を有する核酸とのハイブリ、ド生産物の製造方法も特徴とする。

１つの方法は、ＨＣＶ核酸に対応する非ＨＣＶ−１配列を有する非天然型の核酸 を、ハイブリッド形成が起こり得る条件下に置（工程を含む。その非天然型の核 酸は、〕＼イブリッド形成条件下で、ＨＣＶ核酸とハイブリッド生産物を形成し 得る。この方法は、さらに、ＨＣＶゲノムの１つの領域に対応する核酸の存在下 で、ハイブリッド形成条件を確立させてハイブリッド生産物を形成する工程を含 む。

ハイブリッド生産物の形成は、ＨＣＶの１つ以上の遺伝子型の存在を検出するた めに有用である。非天然型の核酸は、好ましくは、ＮＳ５領域、エンベロープ１ 領域、５−ＵＴ領領域よびコア領域を含む１つ以上の領域内のＨＣＶの核酸とハ イブリッド生産物を形成する。ハイブリッド生産物を検出するには、非天然型の 核酸に標識を結合させることが有用である。ハイブリッド生産物の形成は、ハイ ブリッド生産物を形成しなかった標識された非天然型の核酸から、ハイブリッド 形成生産物を分離することによって検出される。

ハイブリ、ド生産物の形成は、存在する可能性がある他の成分から、ＨＣｖ核酸 の１つ以上の遺伝子型を分離する手段として有用である。このような用途の場合 、形成したＩ＼イブリ・ノド生産物を他の成分から分離するために、非天然型の 核酸を支持体と結合させることが有用である。

核酸の“サンドイッチアッセイ”では、標識を結合させた１つの核酸、および支 持体と結合させた第２の核酸を利用する。

本発明の１つの実施態様は、２種の核酸からなるサントイ・／チア、セイを特徴 とする。この２種の核酸は両者ともＨＣＶ核酸に対応する配列を有する。しかし 、少なくとも一方の非天然型核酸は、非ＨＣＶ−Ｉ　ＨＣＶ核酸に対応する配列 を有する。少なくとも一方の核酸は標識と結合し得る。他方の核酸は支持体と結 合し得る。支持体に結合された非天然型の核酸は、ＨＣＶ核酸と、非ＨＣＶ−１ 配列を有する非天然型の核酸とを含有するハイブリッド生産物を分離するのため に使用される。

本発明の１つの実施態様は、ＨＣｖの１つ以上の遺伝子型の検出方法を特徴とす る。この方法は、ハイブリ、ド形成が起コり得る条件下に非天然型核酸を置く工 程を含む。その非天然型の核酸は、ＨＣＶの１つ以上の遺伝子型由来の核酸とハ イブリ２ド生産物を形成し得る。第１の遺伝子型であるＧＩは、配列番号１〜６ ．２３〜２５．３３〜３８および５２〜５７の配列で例示される。

第２の遺伝子型であるＧｎは、配列番号７〜１２．２６〜２８．３９〜４５およ び５８〜６４の配列で例示される。第３の遺伝子型であるＧＩＯは、配列番号１ ３〜１７．３２．４６〜４７および６５〜６６の配列にで例示される。第４の遺 伝子型であるＧｒＶは、配列番号２０〜２２および２９〜３１の配列で例示され る。第５の遺伝子型であるＧＶは、配列番号１８．１９．５０および５１の配列 で例示される。

ＨＣＶ核酸と、ＨＣＶゲノム内の配列に対応する非ＨＣＶ−１配列を有する非天 然型の核酸とのハイブリッド生産物は、核酸を合成する反応を開始するのに有用 である。

ＨＣＶ核酸と、ＨＣＶの特定の遺伝子型に対応する配列を有する非天然型の核酸 とのハイブリッド生産物は、そのような遺伝子型の核酸を合成する反応を開始す るのに有用である。１つの実施態様において、合成された核酸は、）ＩＣＶの１ つ以上の遺伝子型の存在を示す。

また核酸の合成によって、ウィルスタンパク質を合成する発現ベクター中への、 その核酸のクローン化が容易になる。

本発明の実施態様は、ウィルス核酸の転写もしくは翻訳を阻害するためのアンチ センス剤として有用である。Ｈｃｖゲノム配列の特定の遺伝子型に対応する配列 を有する非天然型の核酸と、ＨＣＶ核酸とがハイブリッド生産物を形成すると、 そのような遺伝子型の翻訳または転写を阻止する。５種の遺伝子型をすべて含有 させて治療剤を作り得る。

Ｃ，ペプチドおよび　の 本発明の別の実施態様は、非ＨＣＶ、−１配列を有する核酸に対応する、３個以 上のアミノ酸からなる非天然型のペプチドを含む組成物を特徴とする。その非Ｈ ＣＶ−１配列は、好ましくは、ＮＳＳ領域、エンベロープｌ領域、５−ＵＴ領領 域よびコア領域からなる１つ以上の領域内の配列と対応する。

ＮＳ５領域の非ＨＣＶ−１配列を有する核酸に対応するペプチドについては、そ の配列は配列番号２〜２２の配列内にあることが好ましい。配列番号工の配列は ＨＣＶ−１に対応する。配列番号１〜２２の配列は配列表に記載されている。

エンベロープ１領域の非ＨＣＶ−１配列を有する核酸に対応するペプチドについ ては、その配列は配列番号２４〜３２の配列内にあることが好ましい。配列番号 ２３の配列はＨＣＶ−１に対応する。

配列番号２３〜３２の配列は配列表に記載されている。

コア領域に関する非ＨＣＶ−１配列を有する核酸に対応するペプチドについては 、その配列は配列番号５３〜６６の配列内にあることが好ましい。配列番号５２ の配列はＨＣＶ−１に対応する。配列番号５２〜６６の配列は配列表に記載され ている。

本発明の別の実施態様は、ＨＣＶの１つの遺伝子型の核酸配列に対応するペプチ ド組成物を特徴とする。第１の遺伝子型であるＧＩは、配列番号１〜６．２３〜 ２５．３３〜３８および５２〜５７の配列で例示される。第２の遺伝子型である ＧＩ［は、配列番号７〜１２．２６〜２８．３９〜４５および５８〜６４の配列 で例示される。第３の遺伝子型であるＧＩｌｌは、配列番号１３〜１７．３２． ４６〜４７および６５〜６６の配列で例示される。第４の遺伝子型であるＧＩＶ は、配列番号２０〜２２．２９〜３１．４８および４９の配列で例示される。第 ５の遺伝子型であるＧＶは、配列番号１８．１９．５０および５１の配列で例示 される。

本発明の非天然型のペプチドはワクチンの成分として有用である。本発明の配列 の情報によって、ＨＣＶの異なる遺伝子型のすべてまたはいくつかに対するワク チンを設計することができる。ワクチンを特定の遺伝子型に指向させると、遭遇 する可能性がある因子に対して最大の防護を行うように、予防治療を適合させる ことができる。ワクチンを１種以上の遺伝子型に指向させると、そのワクチンを 一層包括的なものにすることができる。

また本発明のペプチド組成物は、ＨＣＶタンパク質に対して特異的な抗体を開発 するためにも有用である。本発明の１つの実施態様は、組成物として、ＨＣＶゲ ノムの非ＨＣＶ−１配列に対応するペプチドに対する抗体を特徴とする。この非 ＨＣＶ−１配列は、好ましくは、ＮＳ５領域、エンベロープ１領域およびコア領 域からなる領域内の配列から選択される。未翻訳５−ＵＴ領領域関連するペプチ ドはない。

ＮＳ５領域のペプチドに対する抗体については、そのペプチドは配列番号２〜２ ２の配列内の配列に対応することが好ましい。

エンベロープ１領域に対応するペプチドに対する抗体については、そのペプチド は配列番号２４〜３２の配列内の配列に対応することが好ましい。コア領域に対 応するペプチドに対する抗体については、そのペプチドは配列番号５３〜６６の 配列内の配列に対応することが好ましい。

特定の遺伝子型を反映するペプチドに対する抗体は、ＨＣＶのそのような遺伝子 型の検出、および治療剤のために有用である。

本発明の１つの実施態様は、特定の遺伝子型の配列を有する核酸に対応するペプ チドに対する抗体を特徴とする。第１の遺伝子型であるＧｌは、配列番号１〜６ ．２３〜２５．３３〜３８および５２〜５７の配列で例示される。第２の遺伝子 型であるＧｎは、配列番号７〜１２．２６〜２８．３９〜４５および５８〜６４ の配列で例示される。第３の遺伝子型であるＧｍは、配列番号１３〜１７．３２ ．４６〜４７および６５〜６６の配列で例示される。第４の遺伝子型であるＧ■ は、配列番号２０〜２２．２９〜３１．４８および４９の配列で例示される。第 ５の遺伝子型であるＧＶは、配列番号１８．１９．５０および５１の配列で例示 される。

本発明の組成物が、核酸のハイブリッド形成または免疫化学的反応を行うための キットの形態で、使用説明書とともに包装され得ることを、当業者は容易に理解 する。

本発明を、ＨＣｖの遺伝子型を示す配列を図示した以下の図面を用いてさらに説 明する。これらの配列は１〜１４５の数字で呼ばれ、これらの数字および配列は 配列表に記載の数字および配列と一致する。配列１４６および１４７は、ア／セ イの考察を容易にする。その数字および配列は、配列表に記載されている数字お よび配列と一致する。

および　夕１　の　な雷日 図１はＨＣＶの遺伝子の構造を示す。

図２はＨＣＶウィルスゲノムのＮＳ５領域に由来する配列番号１〜２２の核酸配 列を示す。

図３はＨＣＶウィルスゲノムのエンベロープ１領域に由来する配列番号２３〜３ ２の核酸配列を示す。

図４はＨＣＶウィルスゲノムの５’ＵＴ領域に由来する配列番号３３〜５１の核 酸配列を示す。

図５はＨＣＶウィルスゲノムのコア領域に由来する配列番号５２〜６６の核酸配 列を示す。

配列表は配列番号１〜１４７の配列を示す。

魚豆旦延曵呈翌里 本発明を、診断と治療の用途に関する、ＨＣ■ゲノムおよび関連ペプチドおよび 結合パートナ−に対応する配列を有する核酸として詳細に説明する。

本発明を実施するために、特にことわりがない限り、当該技術分野の技術の範囲 内にある、化学、分子生物学、微生物学、組換えＤＮＡおよび免疫学の慣用的な 手法が用いられる。このような手法は文献に充分説明されている。例えば、Ｍａ ｎｉａｔｉｓ、　ＦｉｔｓｃｈおよびＳａｍｂｒｏｏｋ、　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ 　Ｃｌｏｎｉｎｇ；　Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ、　１９８２年 ；　ＤＮＡ　Ｃｌｏｎｉｎｇ、Ｉおよび１１巻（Ｄ、　Ｎ、　Ｇｌｏｖｅｒ編、 １９８５年）　；　Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ　（ Ｍ、Ｊ、Ｇａｌｔ編、１９８４年）　；　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄ　ｔｌｙｂ ｒｉｄｉｚａｔｆｏｎ　（Ｂ、Ｄ、ＨａｍｅｓおよびＳ、　Ｊ、　Ｈｉｇｇｉｎ ｓ編、１９８４年）　；　ｔｈｅ　５ｅｒｉｅｓ、　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅ ｎｚｙｍｏｌｏｇｙ　（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、　Ｉｎｃ、）特に１５ ４巻および１５５巻（ＷｕおよびＧｒｏｓｓｍａｎ編）を参照のこと。

ｃＤＮＡライブラリーを、ＨＣＶに感染させたチンパンジーの血漿中に存在する 核酸配列から誘導する。これらのライブラリーの１つである“Ｃ″ライブラリー ＡＴＣＣＮｏ、　４０３９４）の構築は、ＰＣＴ公開番号Ｗ０９０／１４４３６ に記載されている。本発明に関連するライブラリーの配列は、配列番号１１２３ ．３３および５２の配列として記載されている。

本発明の特徴にしたがって単離もしくは合成される核酸は、本発明を限定しない 例として、プローブ、プライマーおよびアンチセンス遺伝子として、およびその ような配列に対応するペプチドを合成する発現系を開発するために有用である。

記載した核酸配列は、ウィルスゲノムの４つの領域についてＨＣＶの遺伝子型を 規定する。図１はＨＣｖの構造を示す。特に重要な４つの領域はＮＳ５領域、エ ンベロープｌ領域、５°ＵＴ領域およびコア領域である。

配列番号１〜２２の配列として本願に記載されている配列は、Ｎ　Ｓ　Ｓ　Ｑ　 域ニおいて、少なくとも５つの遺伝子型を示唆する。配列番号１〜２２の配列は 、図２および配列表に示される。配列番号１〜２２の各配列は、ＮＳ５領域由来 の３４０個のヌクレオチドを有する核酸から誘導される。

５つの遺伝子型は、配列番号１〜２２の配列によって規定される配列をグループ 分けすることによって規定される。便宜上、本願では、異なる遺伝子型にローマ 数字およびアルファベント文字“Ｇ′を与える。

第】の遺伝子型（ＧＩ）は、配列番号１〜６の配列内の配列で例示される。第２ の遺伝子型（Ｇ　ＩＩ）は、配列番号７〜１２の配列内の配列で例示される。第 ３の遺伝子型（Ｇｌｌｌ）は、配列番号１３〜１７の配列内の配列で例示される 。第４の遺伝子型（Ｇｌｌ／）は、配列番号２０〜２２の配列内の配列で例示さ れる。

第５の遺伝子型（ＧＶ）は配列番号１８と１９の配列内の配列で例示される。

配列番号２３〜３２の配列として本願に記載されている配列（よ、ＨＣＶのエン ベロープ１領域において、少なくとも４つの遺伝子型を示唆する。配列番号２３ 〜３２の配列は、図３および配列表に示される。配列番号２３〜３２の各配列は 、エンベロープ１領域由来の１００個のヌクレオチドを有する核酸から誘導され る。

第１のエンベロープｌ遺伝子型グループ（Ｇｌ）は、配列番号２３〜２５の配列 内の配列で例示される。第２のエンベロープ１遺伝子型（Ｇ１１）領域は、配列 番号２６〜２８の配列内の配列で例示される。第３のエンベロープ１遺伝子型（ Ｇｉｌｌ）ｌよ、配列番号３２の配列内の配列で例示される。第４のエンベワー ブ１遺伝子型（ＧＩＶ）は配列番号２９〜３１の配列内の配列で例示される。

配列番号３３〜５１の配列として本願に記載されている配列は、ＨＣＶの５°Ｕ Ｔ領域において、少なくとも３つの遺伝子型を示唆する。配列番号３３〜５１の 配列は、図４および配列表に示される。

配列番号３３〜５１の各配列は、５”ＵＴ領域由来の２５２個のヌクレオチドを 有する核酸から誘導されるが、配列５０と５１はそのヌクレオチドが約１８０個 でありいくぶん短い。

第１の５’ＵＴ遺伝子型（ＧＩ）は、配列番号３３〜３８の配列内の配列で例示 される。第２の５°ＵＴ遺伝子型（Ｇｌｌ）は配列番号３９〜４５の配列内の配 列で例示される。第３の５’ＵＴ遺伝子型（Ｇｉｌりは、配列番号４６〜４７の 配列内の配列で例示される。

第４の５°ＵＴ遺伝子型（Ｇ　ＩＶ）は、配列番号４８および４９の配列内の配 列で例示される。第５の５°ＵＴ遺伝子型（ＧＶ）は、配列番号５０および５１ の配列内の配列で例示される。

配列番号４８〜６２の配列は、ＨＣＶのコア領域内において、少なくとも３つの 遺伝子型を示唆する。配列番号５２〜６６の配列は、図５および配列表に示され る。

第１のコア領域遺伝子型（Ｇｌ）は、配列番号５２〜５７の配列内の配列で例示 される。第２のコア領域遺伝子型（Ｇｉｌ）は、配列番号５８〜６４の配列内の 配列で例示される。第３のコア領域遺伝子型（Ｇｉｌｌ）は、配列番号６５およ び６６の配列内の配列で例示される。配列番号５２〜６５の配列は５４９個のヌ クレオチドで構成される。配列番号６６の配列は５１０個のヌクレオチドで構成 される。

各領域について記載した種々の遺伝子型は一致する。すなわち、ＮＳ５領域につ いて第１の遺伝子型の特徴を有するＨＣＶは、エンベロープｌ領域、５’ｔｌＴ 領域およびコア領域の第１の遺伝子型の特徴と実質的に一致する。

配列番号１〜６６の配列中に記載された配列にしたがって単離もしくは合成され る核酸は、プローブ、プライマー、捕獲リガンドおよびアンチセンス剤として有 用である。プローブ、プライマー、捕獲リガンドおよびアンチセンス剤としての 核酸は、特異性および安定なハイブリッド生産物を形成する能力のため、通常約 ８個以上のヌクレオチドを含有する。

工三ニ１皿 ＨＣＶゲ／ムの１つの領域の特定の遺伝子型を規定する配列にしたがって単離も しくは合成される核酸は、プローブとして使用してそのような遺伝子型を検出し 得るし、または他の核酸のプローブと組合わせて用いて実質的にＨＣＶのすべて の遺伝子型を検出し得る。

本願に記載される配列の情報によって、ＨＣＶ内の各種の遺伝子型およびハイブ リッド形成条件中に遭遇する可能性がある外来の核酸配列に対して所望の包含性 と排他性を与える８個以上のヌクレオチドの配列が同定される。

当業者は、プローブとして用いる核酸配列には、ハイブリ７ド生産物の検出を容 易にするために標識を与え得ることを容易に理解する。

ｆｆｉ互ヱ上 捕獲リガンドとして用いるため、プローグについて先に述べた方式で選択された 核酸は容易に支持体に結合させ得る。

核酸を支持体に結合させる方法は公知である。配列番号１〜６６の配列内の配列 に対応する配列を有する核酸は、１つの遺伝子型のウィルス核酸を異なる遺伝子 型のＨＣＶの核酸から分離するのに有用である。配列番号１〜６６の配列内の配 列にしたがって単離もしくは合成される核酸は、組合わせて用いれば、ＨＣＶの すべての遺伝子型の実質的にすべての核酸を捕獲するのに有用である。

プライマー 本願に記載された配列にしたがって単離または合成される核酸は、ＨＣＶ配列の 増幅のためのプライマーとして有用である。

ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）法に関して、配列番号１〜６６の配列の１つ以 上の配列に対応する８個以上のヌクレオチドの核酸配列は、適切な酸素および試 薬と組み合せて、ウィルス核酸のコピーを作るのに有用である。１つ以上の遺伝 子型に対応する異なる配列を有する複数のプライマーは、がような遺伝子型につ いてウィルス核酸のコピーを作るのに使用し得る。

そのコピーはＨＣＶウィルスを検出する診断検定法に使用し得る。またそのコピ ーは、クローニングベクターおよび発現ベクターに組込んで、ＰＣＲで合成した 核酸に対応するポリペプチドを製造することができる。以下にさらに詳細に述べ る。

アンチセンス 本願明細書に記載した配列に従って単離もしくは合成した核酸は、ＨＣＶの発現 を阻害するアンチセンス遺伝子として有用である。

ＨＣＶの遺伝子型に対応する核酸は、ＨＣＶに感染している細胞内に導入するた めリポソームのような適切な担体に負荷され得る。８個又はそれ以上のヌクレオ チドを有する核酸はウィルス核酸またはウィルスメツセンジャーＲＮＡに結合す ることができる。好ましくはアンチセンス核酸は、３０個又はそれ以上のヌクレ オチドからなり、ウィルス核酸またはウィルスメツセンジャーＲＮＡのノーイブ リッド生成物に必要な安定性を提供するものが好ましい。アンチセンス核酸を負 荷する方法は当該技術分野で公知であるが、例えばＰａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌ ｏｓらに１９８０年１２月２３日付で付与された米国特許第４．２４１，０４６ 号がある。

ペプチドの合成 本願に記載の配列に従って単離もしくは合成される核酸はペプチド製造に有用で ある。配列番号１〜３２および５２〜６６の配列で例示される配列は、適切なベ クター内にクローン化され得、または核酸の単離に使用し得る。単離された核酸 は、適切なりＮＡリンカ−に結合され、適切なベクター中にクローン化される。

そのベクターは、イー・コリ（Ｅ、ｃｏｌｉ）のような適切な宿主生物を形質転 換するのに用いられ得、その配列によってコードされるペプチドが単離され得る 。

分子クローニング法は、テキストＭｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｃ１ｏｎｉｎ　：　Ａ　 Ｌａｂｏｒａｔｏｒ　ＭａｎｕａＬＭａｎｉａｔｉｓら、Ｃｏｌｄｓｐｒｆｎｇ 　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔ。

ｒｙ１９８２年に記載されている。

その単離されたペプチドは、ＨＣＶの特定の遺伝子型に対するワクチン、および 抗体を製造するのに用いる抗原物質として有用である。

ニムｉヱ立仄止 本発明のペプチド物質は、抗体およびワクチンを製造するのに有用である。

ｃＤＮＡ配列またはそれから誘導されるヌクレオチド配列（配列のセグメントも しくは修飾物を含む）を入手できれば、いづれかのストランドにコードされてい るペプチドの抗原として活性な領域をコードする発現ベクターを構築し得る。抗 原として活性な領域は、ＮＳ５領域、エンベロープ１領域およびコード領域から 誘導され得る。

所望のペプチドをコードするフラグメントは、通常の制限酵素による消化法を用 いるかまたは合成法によって、ｃＤＮＡクローンから誘導され得、次に、例えば β−ガラクトシダーゼもしくはスーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）、（７ ）ようす融合配列の一部分を含有しているベクターに連結され得る。好ましくは ＳＯＤに連結され得る。ＳＯＤの融合配列を含有しているポリペプチドを製造す るのに有用な方法とベクターは、１９８６年１０月１日付で公開されたヨーロッ パ特許公開筒０１９６０５６号ニ記載されている。

いづれかのセンスストランドにある、オープン・リーディングフレームを含有す るＨＣＶ　ｃＤＮＡの所望の部分は、成熟タンパク質もしくは融合タンパク質の ような組換えペプチドとして得られ得る。あるいはｃＤＮＡにコードされている ペプチドは化学合成して得られ得る。

所望のペプチドを含有するＤＮＡは、融合型もしくは成熟型であるとを問わず、 および分泌を可能にするシグナル配列を含有もしくは含有していないとを問わず 、あらゆる好適な宿主に適した発現ベクターに連結し得る。現在、真核および原 核の宿主系の両方が、組換えペプチドを製造するのに用いられている。ペプチド は、細胞を溶解し、または培地から単離され、次いでその意図する用途に必要な 純度まで精製され得る。

精製は当該技術分野で公知の方法、例えば分別抽出法、塩分画法、イオン交換樹 脂によるクロマトグラフィー、アフィニティー・クロマトグラフィー、遠心分離 法などによって行い得る。例えば、タンパク質の各種精製法ついては、Ｍｅｔｈ ｏｄｓｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｓｙを参照。このようなペプチドは診断剤として 使用し得、あるいは中和抗体を生成するペプチドはワクチンとして処方し得る。

また、これらのペプチドに対して生成する抗体は、診断剤として使用可能であり 、または受動免疫治療法もしくはＨＣＶの単離と固定に用い得る。

ペプチドの抗原領域は一般に比較的小さく、長さは典型的には８〜１０個あるい はそれ以下のアミノ酸である。５個の小数のアミノ酸からなるフラグメントが抗 原領域の特徴である。

これらのセグメントはＨＣＶゲノムのＮＳ５領域、エンベロープ１領域およびコ ア領域に対応する。５’ＵＴ領域は翻訳されないことが知られている。したがっ て、このような領域のｃＤＮＡを使用して、この領域に対応するＨＣＶペプチド の短いセグメントをコードするＤＮＡは、融合タンパク質としであるいは単離さ れたペプチドとして組換え法によって発現され得る。さらに、短いアミノ酸配列 は、化学合成法によって容易に得られ得る。

合成されたペプチドが、正しいエピトープを提供するように正しく形成されてい るが、小さすぎて免疫原性がない場合、そのペプチドは適切なキャリアーに連結 され得る。

このような連結を行う多数の方法が当該技術分野では公知であり、Ｎ−スクシン イミジル−３−（２−ピリジルチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）およびスクシ ンイミジル−４−（Ｎ−マレイミド−メチル）シクロへ牛サンー１−カルボキシ レー）　（ＳＭＣＣ）　（米国、イリノイ州、ロックフォード、Ｐｉｅｒｃｅ　 Ｃｏｗｐａｎｙから入手した）を用いジスルフィド結合を生成させる方法がある （ペプチドにスルフヒドリル基がない場合はジスルフィド結合はシスティン残基 を付加することによって得られる）。これらの試薬は、それ自体の間で、および 一方のタンパク質のペプチドシスティン残基と、他方のタンパク質のリンノのε −アミノを介するアミド結合もしくは他の遊離アミノ基トの間でジスルフィド結 合を生成する。このようなジスルフィド／アミド形成試薬は種々のものが公知で ある。（例えば１ｍｍｕｎ　Ｒｅｖ、６２巻１８５頁、１９８２年参照）。他の 二宮能カップリング剤はジスルフィド結合ではなくてチオエーテル結合を形成す る。このようなチオエーテル形成試薬の多くハ、市販されており、６−マレイミ ドカプロン酸、２−ブ０％酢酸、２−ヨード酢酸、４−Ｎ−マレイミド−メチル ）シクロヘキサン−１−カルボン酸などの反応性エステルがある。カルボキシル 基は、それをスクシンイミドもしくはｌ−ヒドロキシル−２−二トロー４−スル ホン酸ナトリウム塩と結合することによって活性化し得る。抗原をカップリング する別の方法としては、ヨーロッパ特許出願公開２５９．１４９号に記載されて いるロタウィルス／結合ペプチドシステムが利用され得る。この開示事項は本願 に文献として援用する。上記のリストは網羅的なものではな（、上記化合物の修 飾物も使用し得ることは明かである。

それ自体が宿主に対して有害な抗体の産生を誘発しないキャリアーはいずれも使 用し得る。適切なキャリアーは、一般に大きく、ゆっ（り代謝される巨大分子で あり、例えばタンパク質類；ラテックスで官能性を与えられたセファロース、ア ガロース、セルロース、セルロースビーズなどのような多糖類；ポリグルタミン 酸、ポリリンノなどのようなアミノ酸ポリマー；アミノ酸コポリマー；および不 活性ウィルス粒子がある。特に有用なタンパク質の基質は、血清アルブミン、キ ーホールソンペソトヘモシアニン、免疫グロブリン分子、チログロブリン、オバ ルブミン、破傷風菌毒素、および当業者によく知られているタンパク質である。

ＮＳ５、エンベロープ１およびコアの領域由来の少なくとも１っのウィルスエピ トープをコードにするＨＣＶアミノ酸配列配列有するペプチドは有用な免疫試薬 である。５°ＵＴ領域は翻訳されないことが知られている。例えば、末端を切取 られた配列を有するペプチドは免疫検定法の試薬として使用できる。またこれら のペプチドは、抗血清製造用組成物あるいはワクチンの候補となり得るサブユニ ット抗原である。この末端を切取られた配列は未変性のウィルスタンパク質を各 種の公知の方法で処理することによって製造し得るが、ＨＣＶ配列を有する合成 もしくは組換えによるペプチドを作る方が一般に好ましい。これらの末端を切取 られたＨｖｃ配列を有するペプチドは、全体が■Ｃｖ配列（連続もしくは非連続 である１つまたはそれ以上のエピトープ）、またはＨＣＶ配列と異種タンパク質 との融合タンパク質を含有し得る。有用な異種タンパク質は組換え宿主から分泌 され、ＨＣｖエピトープの免疫反応性を強化し、またはポリペプチドが、免疫検 定法の支持体もしくはワクチンの担体と容易にカップリングする配列である。（ 例えばヨーロッパ特許公開第１１．６，２０１号、米国特許第４．７２２，８４ ０号、ヨーロッパ特許公開第２５９，１４９号、米国特許第４，６２９．７８３ 号）。

末端を切取られたＨＣＶ配列を含有するペプチドの大きさは広範囲に変え得、そ の最小の大きさは１つのＨＣＶエピトープを与えるのに充分な大きさの配列であ るが、最大の大きさは重要ではない。便宜上、最大の大きさは、たとえあるとし ても、通常、所望のＨＣＶエピトープを提供し、異種配列の機能を与えるのに必 要な大きさより実質的に大きいことはない。典型的、０は、末端を切取られたＨ ＣＶのアミノ酸配列は長さが約５〜約ｌｏｏ個のアミノ酸の範囲内にある。しか し、さらに典型的には１１Ｃ’／配列長さが最大約５０個のアミノ酸であり、好 ましくは最大３０個のアミノ酸である。少なくとも約１０．１２または１５個の アミノ酸、最大約２０個もしくは２５個までのアミノ酸を有するＨＣＶ配列を選 択することが通常望ましい。

エピトープを含有するＨＣＶアミノ酸配列配列数の方法で同定することができる 。例えばＮＳ５、エンベロープおよびコアの各領域に対応する全タンパク質配列 は、このような領域の全タンパク質配列にわたる一連の短いペプチドを作ること によってスクリーニングし得る。例えば、はぼ１００個のアミノ酸のペプチドか ら出発することによって、所望の反応性を示すエピトープの存在について各ペプ チドを試験し、次に１００個のアミノ酸からなる同定されたペプチドを次第に小 さくした、かつ重複しているフラグメントを試験し、目的とするエピトープをマ 、ブすることは日常的に行われる。免疫検定法でこのようなペプチドをスクリー ニングすることは、当業者に容易である。タンパク質配列のコンビ二−タ分析を 実施して潜在的なエピトープを同定し、その同定された領域を含有するペプチド を調製してスクリーニングに用いることも公知である。

また、ＨＣＶのエピトープの免疫原性は、例えばＢ型肝炎表面抗原に関連する粒 子形成性タンパク質と融合もしくは会合した形で、哺乳類もしくは酵母の系で調 製することによっても強化し得る。例えば米国特許第４，７２２，８４０号参照 。ＨＣＶエピトープが粒子形成性タンパク質をコードする配列に直接結合された 構築物はＨＣＶエピトープに対して免疫原性な融合体を産生ずる。さらに、製造 されたすべてのベクターは、ＨＢＶに特異的なエピトープを含有し、例えばプレ ーＳ−ペプチドのように種々の異なる免疫原性をもっている。したがって、ＨＣ ｖ含有する粒子形成性タンパク質で構成された粒子はＨＣＶとＨＢＶとに対して 免疫原性である。

肝炎表面抗原（ＨＢＳＡｇ）は、ニス・セレビシェ（Ｓ、　ｃｅｒｅｖｉｓｉａ ｅ）中で形成され、集合して粒子になること（Ｐ、　Ｖａｌｅｎｚｕｅｌａらの １９８２年の報告）、および、例えば哺乳類細胞中で形成され、集合して粒子に なること（Ｐ、　Ｖａｌｅｎｚｕｅｌａらの１９８４年の報告）が報告されてい る。このような粒子が生成するとそのモノマーサブユニットの免疫原性が増大さ れることが報告されている。またその構造体は、プレサーフェイス（プレーＳ） 領域の５５個のアミノ酸を含有する、ＨＢＳＡｇの免疫優性エピトープを有して いる（　Ｎａｕｒａｔｈらの１９８４年の報告）。酵母中で発現可能なプ’、７ −　Ｓ　−ＨＢＳＡｇ粒子の構築物は１９８６年３月１９日付で公開されたヨー ロッパ特許公開第１７４．４４４号に開示され、また酵母で発現される異種ウィ ルス配列を含有するハイブリッドが、１９６６年３月２６日付で公開されたヨー ロッパ特許第１７５゜２６１号に開示されている。またこれらの構築物は、５Ｖ ４０−ジヒドロ葉酸レダクターゼベクターを用いてチャイニーズハムスター卵巣 （ＣＩＯ）細胞のような哺乳類細胞内で発現きせ得る。（Ｍｉｅｈｅｌｌｅらの １９８４年の文献）。

その上、粒子形成性タンパク質をコードする配列の一部分は、　ＨＣＶエピトー プをコードするコドンと置換し得る。この置換で、哺乳動物の酵母の中でユニッ トの集合を仲介して免疫原性粒子を形成するのに必要とされない領域を削除して 、付加的なＨＢＶ抗原部位がＨＣＶエピトープと競合しないようにし得る。

二？ｆコニ版 ワクチンは、ＨＣＶ由来の１つ又はそれ以上の免疫原性ペプチドからＨ製し得る 。ＨＣＶとフラビウィルス間にみられる相同性から、ワクチンとして最も有効で あると思われるペプチドと、これらのペプチドがコードされるゲノムの領域とに 関する情報が得られる。

ＨＣＶに対する多価ワクチンは、ＮＳ５、エンベロープ１、オヨびコアの領域か ら誘導された１つ又はそれ以上のタンパク質由来の１つ又はそれ以上のエピトー プで構成され得る。特に、ＮＳ５、エンベロープｌおよびコアの領域由来の１つ 又はそれ以上のＨＣＶタンパク質もしくはサブユニット抗原を有するワクチンが 考えられる。５’ＵＴ領域は翻訳されないことが知られている。

免疫原性ペプチドを活性成分として含有するワクチンの製造法は当業者には公知 である。典型的には、このようなワクチンは注射用薬剤の液状の溶液もしくは懸 濁液として製造され得る。また注射する前に液体の溶液もしくは懸濁液にするの に適した固体の形態のものも製造し得る。またその製剤は乳化させ得、または、 そのタンパク質はリポソーム内に封入し得る。活性な免疫原性成分は、医薬とし て許容されかつ活性成分と相溶性のある賦形剤と混合され得る。適切な賦形剤と しては、例えば、水、食塩水、デキストロース、グリセリン、エタノールなどお よびそれらの組合せがある。さらに、所望により、本発明のワクチンは、少量の 補助物質、例えば、湿潤剤もしくは乳化剤、ｐＨ緩衝剤および／またはワクチン の有効性を増大するアジュバントを含有し得る。有効なアジュバントの例として は、限定はないが以下のものがある。すなわち水酸化アルミニウム、Ｎ−アセチ ル−ムラミル−し−トレオニルーＤ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ− アセチル−ツルームラミル−Ｌ−アラニル−〇−イソグルタミン（ＣＧＰ１１６ ７３）、ｎ。

ｒ−ＭＤＰ　（！：いつ）、Ｎ・−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソ グルタミニルーし一アラニンー２−（１，２−ジパルミトイル＝ｓｎ−グリセロ −３−ヒドロキシホスボリルオキシ）−エチルアミン（ＣＧＰ１９８３５Ａ９Ｍ ＴＰ−ＰＥという）、およびＲＩＢ＋である。

なおＲＩＢ＋は、細菌から抽出された３成分、すなわちモノホスホリル脂質Ａ、 トレハロースジミコレート（ｔｒｅｈａｌｏｓｅ　ｄｉ＋ｗｙｃｏ１ａｔｅ）、 および細胞壁骨格＜ＭＰＬ＋ＴＤＭ＋ＣＷＳ）を２％スクアレン／Ｔｗｅｅｎ８ ０エマルジョン中に含有している。アジュバントの有効性は、抗体の量を測定す ることによって決定し得、該抗体は種々のアジュバントを含有するワクチン中に 存在するＨＣＶ抗原配列を有する免疫原性ペプチドを投与した結果、該ペプチド に対して生産され得る。

本発明のワクチンは、通常非経口で、例えば、皮下もしくは筋肉内に注射するこ とによって投与され得る。他の投与法に適した別の製剤としては串刺、および、 ある場合には経口用製剤がある。串刺の場合、伝統的な結合剤と担体、例えばポ リアルキレンゲリコール類もしくはトリグリセリドを含有し得る。このような串 刺は、活性成分を０．５％〜１０％好ましくは１％〜２％の範囲で含有する混合 物から製造され得る。経口製剤は、例えば医薬グレードのマンニトール、ラクト ース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、す、カリンナトリウム、セルロー ス、炭酸マグネシウムなどの通常用いられる賦形剤を含有し得る。

下記の実施例は例示を目的とし提供するものであり、本発明の範囲を限定するも のではない。

Ｌ　ｌからノＨｃＶ　ＲＮＡ（７） ＲＮＡの血清からの抽出は、キｙ　ト（ＲＮＡＺ。１（登録商標）Ｂキノｌ−、 Ｃ１ｎｎａ　／Ｂｉｏｔｅｃｘ）の製造者の指示に従って、グアニジニウム塩、 フェノールおよびクロロホルムを使用して行った。

抽出したＲＮＡをインプロパツールで沈澱させ、次いでエタノールで洗浄した。

合計２５μｌの血清をＲＮＡ単離のために処理し、精製したＲＮＡを、ピロ炭酸 ジエチルで処理した水５μｍ中に再懸濁し、次のｃＤＮＡ合成を行った。

Ｕ、　ｃＤＮＡのＡ　とポリメラーゼ　応ＰＣＨによる　−表１に、この実施例 に用いたすべてのＰＣＲプライマーとプローブの配列と位置（ＨＣＶＩについて ）を示す。ヌクレオチドに対するアルファベット文字による名称は米国特許法施 行規則！ｉ　ｌ　１．８２１〜１．８２５と同じである。即ちアルファべ、ト文 字Ａ１Ｃ％Ｇ、ＴおよびＵは、アデニン、シトシン、グアニン、チミンおよびウ ラシルという通常の意味で用いられる。文字ＭはＡまたはＣを意味し；ＲはＡま たはＧを意味し；ＷはＡまたはＴ／Ｕを意味し；ＳはＣまたはＧを意味し；Ｙは ＣまたはＴ／Ｕを意味し；にはＧまたはＴ／Ｕを意味し；■はＡまたはＣまたは Ｇを意味し、Ｔ／Ｕを意味しない；ＨはＡまたはＣまたはＴ／ＩＪを意味し、Ｇ を意味しない；ＤはＡまたはＧまたはＴ／Ｕを意味し、Ｃを意味しない；ＢはＣ またはＧまたはＴ／Ｕを意味し、Ａを意味しない；Ｎは（ＡもしくはＣもしくは ＧもしくはＴ／υ）または（未知のものなど）を意味する。表１は下記のとおり である。

（以下余白） 表１ ら亡７１シ号　１３す１　（５°−３’）　７りしにＦＦ’　襦ｆ化６８　ＡＣ ＡＧＡＹＣＣＧＣＡＫＡＧＲＴＣＣＣＣＣＡＣＧ　１１９２−４１６９フ３　Ｔ ＧＧＡＣＡＴＧＡＴＣＧＣＴＧＧＷＧＣＹＣＡＣＴＧＧＧＧ　１３フ５−１４０ ２フ４　ＴＧＧＡＹＡＴＧＧＴＧＧＹＧＧＧＧＧＣＹＣＡＣＴＧＧＧＧ　１３７ ５−１４０２７５　ＡＴＧＡＴＧＡＡＣＴＧＧＴＣＶＣＣＹＡＣ１３０Ｂ−１３ ２７７６ＡＣＣＴＴＶＧＣＣＣＡＧＴＴＳＣＣＣＲＣＣＡＴＧＧＡ　１４５３− ４４２８７７　ＭＣＣＣＡＣＴＣＴＡＴＧＹＣＣＧＧＹＣＡＴ　２０５−２２６ フ１１　ＧＡＡＴＣＧＣＴＧＧＧＧＴＧＡＣＣＧ　１７１−１８８ｃＤＮＡの合 成およびＰＣＨによる増幅については、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｓｅｒ／Ｃｅｔｕｓ 　［ＧｅｎｅＡｗ＋ｐ　（登録商標）　ＲＮＡ　ＰＣＲｋｉｔ］によって開発さ れたプロトコルを用いた。ランダムヘキサマー（ｒａｎｄｏｍ　ｈｅｘａｍｅｒ ）およびＨＣＶに対して特異的な相補的配列を有するプライマーの両者を、逆転 写（ＲＴ）反応を開始するために使用した。反応成分の添加と混合を除いて、す べての工程は熱サイクラ−（ｔｈｅｒｍａｌ　ｃｙｃｌｅｒ）（ＭＪ　Ｒｅ５ｅ ａｒｃｈ、ｌｎｃ、）内で実施した。第１ストランドｃＤＮＡの合成反応は９９ °Ｃ５分間処理して不活性化し、ついで５０°Ｃで５分間冷却してから次の増幅 を行うための反応成分を添加した。９７℃で１分間、５０°Ｃで２分間および７ ２℃で３分間のサイクルを最初５回行へっぎに、９４℃で１分間、５５℃で２分 間および７２℃で３分間のサイクルを３０回行い、次いで最後の７２°Ｃで７分 間の延伸を行った。

遺伝子型分析（ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ　ａｎａｌｙｓｉｓ）を行うのに、配列６ ７と６８とをＰＣＲ反応のプライマーとして用いた。これらのプライマーは、コ アとエンベロープの領域に対応するセグメントを増幅する。増幅後、反応生成物 をアガロースゲルで分離し、ついでナイロン膜に転写した。その固定化された反 応生成物を、遺伝子型■（コアもしくはエンベロープ１）、または、遺伝子型■ （コアもしくはエンベロープｌ）に対応する３２ｐ標識核酸とハイブリッドさせ た。遺伝子型Ｉに対応する核酸は、６９ｉｔ　（）７）　、７１番（エンベロー フ）オよヒフ３番（エンベロープ）の配列を含有していた。遺伝子型Ｈに対応す る核酸は７０番（コア）　、７２８　（エンベローフ）オよヒ１４ｔｉ　（エン ベロープ）の配列を含有していた。

遺伝子型ｌのプローブは、遺伝子型Ｉの配列を有する分離株由来の増幅した生成 物とだけハイブリッドした。同様に、遺伝子型Ｈのプローブは、遺伝子型■の配 列を有する分離株由来の増幅した生成物とだけハイブリ、ドを形成した。

他の実験では、ＰＣＲ生成物は配列７９と８０を用いて製造した。

配列７３番を遺伝子型Ｉを検出するのに用い、配列７４番を遺伝子型■を検出す るのに用い、配列７７番（５’ＵＴ）を遺伝子型■を検出するのに用い、および 配列７８番（５’ＵＴ）を遺伝子型１ｖを検出するのに用いたことを除いて、前 述したのと同様にして生成物を分析した。各配列は、遺伝子型に特異的な方法で ハイブリッドを形成した。

ｍ、　ＨＣＶ　ＲＮＡについてのサントイ・チハイブ１ツド２　。

を　いるＨＣＶ　Ｇｌ−ＧＩＶ（７） 増幅された溶液相の核酸サンドイッチハイブリッド形成検定法の方式をこの実施 例で説明する。この検定法の方式では、捕獲と検出を達成するために数種の核酸 プローブを使用する。

捕獲プローブ核酸は固体担体に結合した相補的プローブ及びＨＣＶ核酸と会合し 得、核酸は捕獲を行うことができる。検出プローブ核酸は、ＨＣＶ核酸に結合す る第１セグメント（Ａ）と、第２の増幅核酸とハイブリッドする第２セグメント （Ｂ）とをもっている。

増幅核酸は、第１セグメント（Ｂ”）を有し、そのセグメントはプローブ核酸の セグメント（Ｂ）とハイブリッドし、かっ１５のセグメン）　（Ｃ）の反復を有 している。増幅核酸のセグメントＣは、３種の標識核酸とハイブリッドし得る。

グループＩのＨＣＶ単離株のエンベロープ１遺伝子のヌクレオチド配列に対応す る核酸配列は８１〜９９番の配列内に記載されている。表２には、その核酸配列 が対応するｌ（Ｃ’／ゲノムの領域と、その配列の好ましい用途を記載している 。

（以下余白） 表２ フ。。−７・・Ｙｊ　船！’ＩＩ”！　和傘１苓りメ７し才七Ｆ省号誼諺＃ｓＩ 婁諺露禦諺雪寓諺禦禦　諺璽雪言奪禽−諺諺婁畠罵禦冨寥璽禦冨雪富−謁■３婁 鍵冨冒諺■璽諺−ラヘＩＶ　８１　１１フ９−９１１ うへ゛山　８４　９フｌｌ−Ｘ０ＩＯ ラベ’＋Ｖ　ｓｓ　１ｏｌｌ−１０４３ラベ’＋Ｖ　８６　１０４４−１０７６ ラヘ　１し　８フ　１０フフー１１０９ｆｉｔ＋’　ａ＊　８８　１１１０−１ １４２ラヘ゛１Ｖ１１９　１１４３−１１７５ゑ２７プ・芝 フＣ０−’７　ｚ　ｉｖ＋・Ｊｌ　オ伸ネ勃゛（手すクレＸケト審号うベＶ　９ ０　Ｘｌ）６−１２０８ ラベ１し　タｚ　１２０９−１２４１ うＮ’　＋ｖ　ｇ２　１２４２■１２フ４主１゛鳴菓　９３　１２フ５−１３０ フチ〜゛ｌ”　９４　１３０Ｂ−１３４０ラベ′１し　９５　１３４１−１３フ ３ラペ”ＩＶ　タ５　１３フ４−１４０６ラヘ１し　９フ　１４０フ−１４３９ １山゛＾＊　９８　１４４０−１４フ２ラペ・ＩＶ　タ９　１４フ３−４５０５ グループＨのＨＣＶ単離株のエンベロープ１遺伝子のヌクレオチド配列に対応す る核酸配列は１００〜１１８番の配列中に記載されている。表３には、核酸が対 応するＩＩＣＶゲノムの領域と、その配列の好ましい用途が記載されている。

表３ つ７＼Ｉし　Ｚｏｏ　８７９−９１１ ／へＣし　１０１　９１２−９４４ 抽”ｚｌ　１０２　９４５−９７７ ラヘｆし　１０３　９７Ｂ−１０１０ ）Ａ・し　１０４　１０１１−１０４３′７６　＝　１０５　１０４４−１０７ ６つへ１１／　ｌｏ６　１０７７−１１０９１飴％１　１０７　ｚｏｏ−ｕ４２ ｑｑ゛ｙ　１０８　１１４３−１１７５づ７へ１し　１０９　１１７６−１２０ ８−７へ＋し　１１０　１２０９−１２４１今ＡＩ’−１１１１２４２＝１２７ ４ 猶賃　１１２　１２７５−１３０７ ９Ａ′’＋５１１３　１３０８−１３４０−へル　１１４　１３４１−１３フ３ ラヘ１し　１１５　１３７４−１４０６う八°＋Ｌ　１１６　１４０フー１４３ ９すｉ５覧　１１フ　１４４０−１４フ２）べ　１し　１１８　１４７３−１５ ０５Ｃ遺伝子と５’ＵＴ領域中のヌクレオチド配列に対応する核酸配列は配列１ １９〜１４５に記載されている。表４に、その配列と好ましい用途を示す。

表４ 一７’ｏ−１’慴　１４１帖 １＃″＊（１１９ −棟　１２３ １繭）覧　１２フ 挿’＋１　１３１ １駒碌　１３６ うへ゛ＣＬ−１３フ ラヘ”ｌし　１３８ 尤２　４　フッ゛′ざ ラヘ゛ｌし　１３９ 挿り覧　１４０ 検出及び捕獲プローブのＨＣＶ特異的セグメントおよび、このアッセイで使用さ れるそれぞれの名称は次のとおりである。

捕獲配列は１１９〜１２２番および１４１〜１４４番の配列である。

検出配列は１１９〜１４０番の配列である。

各検出配列は、ＨＣＶ配列に対して実質的に相補的な配列に加えて、５′伸長部 （Ｂ）を有し、その伸長部（Ｂ）は第２増幅核酸のセグメントに相補的である。

その伸長部（Ｂ）の配列は、配列番号１４６として配列表に記載されているが以 下に再度示す。

ＡＧＧＣＡＴＡＧＧＡＣＣＣＧＴＧＴＣＴＴ各捕獲配列は、ＨＣＶ配列に対して 実質的に相補的な配列に加えて、固体相に結合されたＤＮＡに相補的な配列を含 有している。

固定支持体に結合されたＤＮＡに相補的な配列は、捕獲配列の下流に保持されて いる。支持体に結合されたＤＮＡに相補的な配列は１４７番の配列として記載さ れているが、以下に再度示す。

ＣＴＴＣＴＴＴＧＧＡＧＡＡＡＧＴＧＧＴＧマイクロタイタープレートを以下の ように調製した。Ｗｈｉｔｅ　Ｍｉｃｒｏｌｉｔｅ　Ｉ　Ｒｅｍｏｖａｖｅｌｌ 　５ｔｒｉｐｓ　（ポリスチＬ／７製微量滴定プレート、９６ウエル／プレート ）はＤｙｎａｔｅｃｈ　Ｉｎｃ、から購入した。

各ウェルにＩ　Ｎ　ＨＣＩ　２００μｌを添加し、室温で１５〜２ｏ分間インキ ュベートした。次ぎにプレートをＩＸＰＢＳで４回洗浄し、つぎにウェルを吸引 して液体を除いた。ウェルにＩ　Ｎ　ＮａＯＨ２００μｌを添加し、室温で１５ 〜２０分間インキュベートした。プレートを再びＩＸＰＢｓで４回洗い、吸引し て液体を除いた。

ポリ（ｐｈｅ−１ｙｓ）をＳｉｇ＋＊ａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｉｎｃ、社から 購入した。このポリペプチドは、ｐｈｅ：ｌｙｓのモル比が１＝１であり、平均 分子量が４７，９００ｇｍ１モルである。またこのペプチドは平均長が３０９個 のアミノ酸の長さであり、１５５個のアミン７モルを含有している。このポリペ プチドの１ｍｇ／ｍｌ溶液を２　Ｍ　ＮａＣ１／Ｉ　Ｘ　ＰＢＳと混合して最終 濃度を０．１ｍｇ／ｍｌ　（ｐＨ６，０）にした。この溶液２００μｌづつを各 ウェルに添加した。このプレートをプラスチックで包んで乾燥を防止し、３０℃ で一夜インキユベートした。

そのプレートをＩＸＰＢＳで４回洗浄し、ウェルを吸引して液体を除いた。

以下の方法を用いて、核酸１４７番の配列に相補的な配列をプレートに結合させ た（以後固定化核酸と呼称する）。１３３番の配列に相補的な配列を有する固定 化核酸の合成は、ヨーロッパ特許第８８３０９６９７６号に記載されている。ジ スクシンイミジルスベレート２０ｍｇをジメチルポルムアミド（ＤＭＦ）３００ μｌ１ｍ溶解した。固定化核酸の２６０Ｄ２６１１単位を連結用緩衝液１ｏｎｕ ｌ　（５０ｍＭ　リン酸ナトリウムｐＨ７，８）に添加した。つぎにその連結混 合物をＤＳＳ−ＤＭＦ溶液に添加しマグネティックスタラ−で３０分間撹拌した 。ＮＡＰ−２５のカラムを１０ｍＭのリン酸ナトリウムｐＨ６。

５で平衡化した。連結混合物のＤＳＳ−ＤＭＦ溶液を、４℃にて、１０■Ｍリン 酸ナトリウムｐＨ６，５２ｍｌに添加した。得られた混合物を撹拌して混合し、 上記の平衡化したＮＡＰ−２５カラムにロードした。ＤＳＳで活性化された固定 化核酸ＤＮＡを、３．５ｎｌのｌｏｍＭリン酸ナトリウムｐ）１６．５で上記カ ラムから溶離した。溶離された、ＤＳＳ活性化固定化核酸ＤＮＡの５．６０Ｄ２ ６１！単位の量を、５０＋１Ｍリン酸ナトリウムｐＨ７，８１５００＋＋１に添 加した。この溶液５０μｌづつを各ウェルに添加し、そのプレートを一夜インキ ュベートした。

次にプレートをＩＸＰＢＳで４回洗浄し、ウェルを吸引して液体を除いた。

プレートの最終のストリッピングを次のようにして行った。

０．５％（Ｗ／Ｖ）ＳＤＳを含有する０、２Ｎ　ＮａＯＨ２００μｍづつを各ウ ェルに添加した。そのプレートをプラスチックで包み６５°Ｃで６０分間インキ ュベートした。次いでプレートをＩＸＰＢｓで４回洗浄し、ウェルを吸引し液体 を除去した。ストリッピングしたプレートを乾燥剤のビーズとともに２〜８℃で 貯蔵した。

検定すべき血清試料は、ＰＣＲとそれに続く配列分析法を用いて分析して遺伝子 型を測定した。

試料は、血清試料５０μｌとＰ−に緩衝液１５０μｍを各ウェルに添加すること によって調製した。Ｐ−に緩衝液は、５３＋＋Ｍ　トリス−ＨＣｌ　ｐＨ８，０ 中２　Ｂ／＋ｅｌのプロティナーゼＫ　；　０．６Ｍ　ＮａＣ１；　０．０６Ｍ クエン酸ナトリウム；　８　＋＊Ｍ　ＥＤＴＡ％ｐＨ８，０；　１．３％ＳＤＳ ；１６□ｇ／ｍｌの超音波処理サケ精子ＤＮＡ；７％ホルムアミド；　５０ｆｍ ｏｌｅ捕獲プローブ；　１６０ｆｍｏｌｅ検出プローブで構成されている。プレ ートを振とうし、ウェルの内容物を混合し、カバーして１６時間６２℃でインキ ュベートした。

さらに１０分間室温で保持した後、各ウェルの内容物を吸引してすべての流体を 除き、ウェルを、洗浄緩衝Ｍ（０，１％ＳＤＳ；　Ｏ，０１５Ｍ　ＮａＣ１；　 Ｏ，００１５Ｍクエン酸ナトリウム）で２回洗浄した。つぎに増幅核酸を各ウェ ル（０，０４８Ｍ　ＮａＣ１；　０．０４１３Ｍクエン酸ナトリウム；０．１％ ＳＤＳ　、　０．５％”ブロッキング剤″（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｍａｎｎｈ ｅｉｍ社、カタログ番号１０９０１７６）の０．７ｆｍｏｌｅ／μｌ溶液５０μ ｌ）に添加したプレートにふたをし、ウェルの内容物を撹拌混合して、プレート を３０分間５２℃でインキュベートした。

さらに１０分間室温に保持した後、ウェルを上記と同様にして洗浄した。

アルカリホスターゼ標識をした核酸（これはヨーロッパ特許８８３０９６９７６ 号に開示されている）、を各ウェルに添加したく２、６６ｆｍｏｌｅ／μｌをウ ェル当り５０μｌ）　、　５２℃で１５分間、つぎに室温で１０分間インキュベ ートした後、ウェルを前に述べたと同様に２回洗浄し、次に、０．０１５ＭＮａ Ｃｌ１０．００１５Ｍクエン酸ナトリウムで３回洗浄した。

酵素でトリガーされた（　ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ）ジオキセタン（Ｓｃｈａａｐら 、Ｔｅｔ、Ｌｅｔｔ、２８巻、１１５９〜１１６２頁、１９８７年およびヨー口 。

パ特許公開第０２５４０５１号）をＬｕｍｉｇｅｎ、　Ｉｎｃから入手して利用 した。Ｌｕｍ１ｐｈｏｓ　５３０（Ｌｕｍｉｇｅｎ）　５０　ｕ　ｌづつを各ウ ェルに添加した。ウェルを軽くたたいて試薬を底部に落下させ、かつゆるやかに 旋回させて試薬を底部に均一に分布させた。ウェルにふたをし、３７℃で２０〜 ４０分間インキュベートした。

プレートを、次に、Ｄｙｎａｔｅｃｈ　ＭＬ　１０００ルミノメータ（ｌｕ＋１ ｉｎＯ■ｅｔｅｒ）で読み取った。出力は反応中に発生した光の全合計として示 された。

この検定法は、遺伝子型のいかんにかかわらず、各血清試料を確実に検出した。

ＩＶ、　なる°　五　型で　された　１にフードされたポリベニｉヱ立且ユ １〜６６番の配列内の配列でコードされるＨＣＶポリペプチドは、スーパーオキ シドジスムターゼ（ＳＯＤ）を用いて融合ポリペプチドとして発現される。これ らの配列を保持するｃＤＮＡを、発現ベクターｐｓＯＤｃｆｌ　（Ｓｔｅｉｍｅ ｒらの１９８６年の文献）中にサブクローン化する。

まずｐｓＯＤｃｆ　１から単離されたＤＮＡをＢａｍ旧とＥｃｏＲＩで処理し、 ついで、これら制限酵素によって生成された線状ＤＮＡに下記のリンカ−を連結 した。

５　ＧＡ！Ｔ　ＣＣＴ　ＧＧＡ　ＡＴＴσＧλτＡλＧＡＣＣ”Ｘ’　ＴＡＡ　 （込Ｃ？ＡＴ−蔀　３クローン化した後、挿入断片を含有するプラスミドを単離 した。

挿入断片を含有するプラスミドをＥｃｏＲｌで切断する。コノＥｃｏＲＩで線状 にしたプラスミドＤＮＡに、ＨＣＶｃＤＮＡを連結する。得られたＤＮＡ混合物 を用いてイー・コリ菌株Ｄ１２１０を形質転換する（Ｓａｄｌｅｒらの１９８０ 年の文献）。ポリペプチド類はゲル状テ単離する。

■、　ポリペプチド　の セクションＩＶで製造されたポリペプチドの抗原性を以下の方法で評価する。８ １２アレー（オーストラリア、ビクトリア州、Ｃｏ５ｅｌｃｏ　Ｍｉｍｅｔｏｐ ｅｓ）中のブロック上に配列したポリエチレン製のピンはジメチルポルムアミド （ＤＭＦ）の２ｏ％Ｖ／Ｖ％のピペリジン溶液に３０分間室温で置くことによっ て調製する。そのピンを取り出しＤＭＦ中で５分間洗浄し、ついでメタノール中 で４回洗浄する（２分間／洗浄）。そのピンを少なくとも１０分間空気乾燥し、 ＤＭＦ中で（５分間）最終回の洗浄を行う。ｌ−ヒロトキシヘンゾトリアゾー／ しくＨＯＢｔ、　３６７ｍｇ）をＤＭＦ（８０ｕ　Ｌ）　１ｍ溶解し、セクショ ン１ｖで製造したＦ＋ｉｏｃで保護したポリペプチドの結合に使用する。

保護されたアミノ酸を、　ＨＯＢｔとともに、マイクロタイタープレートのウェ ル内に入れ、前記ピンブロックをプレートの上においてピンをウェル内で浸漬さ せる。集合体をプラスチ、り袋内に密封し、２５℃で１８時間反応させて第１ア ミノ酸をピンに結合させる。次いでブロックを取り出し、ピッをＤＭＦ　（２分 間）　、ＭｅＯＨ（４回、２分間づつ）および再びＤＭＦ　（２分間）で洗って 、結合したアミノ酸を洗浄して脱保護する。この手順を、個々の付加するアミノ 酸を結合させる際に繰り返し、８回体を製造した。

大部分のエピトープはＮ末端には見られないため正の電荷をもっていないので、 遊離のＮ末端はアセチル化して遊離のアミドを保護する。アセチル化反応は、マ イクロタイタープレートのウェルをＤＭＦ／無水酢酸／トリエチルアミン（５： ２：ｌ　Ｖ／Ｖ／Ｖ）で満たし、ピンをウェル中で９０分間２０℃にて反応させ ることによって達成される。次いでピンをＤＭＦ　（２分間）、ＭｅＯＨ（４回 、２分間）で洗浄し、少なくとも１０分間空気乾燥する。

側鎖の保護基は、ポリプロピレンの袋内で４時間室温で、ピンをトリフルオロ酢 酸／フェノール／ジチオエタン（９５：２．５：　１．５．　Ｖ／Ｖ／Ｖ）で処 理して除かれる。ついでピンは、ジクロロメタン（２回、２分間）、５％ジ−イ ソプロピルエチルアミン／ジクロロメタン（２回、５分間）およびジクロロメタ ン（５分間）中で洗い、次いで、少なくとも１０分間空気乾燥を行う。その後、 ピンを水（２分間）およびＭｅＯＨ（１８時間）中で洗浄し、減圧乾燥し、シリ カゲルの入ったプラスチック製袋内に密封して貯蔵する。

ＩＶＢ、１５．６　ペプチドノ ８回体を有するピンを、破壊（ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ）緩衝液（１％ドデシル硫 酸ナトリウム、０．１％２−メルカプトエタノール、０、１Ｍ　ＮａＨ２ＰＯ４ ）中、６０°Ｃで３０分間超音波で処理する。つぎニヒンを数回、水（６０°Ｃ ）中に浸漬し、続いて沸騰ＭｅＯＨ（２分間）中に浸漬し、次いで空気乾燥させ る。

つぎにピンをプレコートするが、それはピンを、２００μＬのブロッキング緩衝 液（１％オバルブミン、１％ＢＳＡ、　０．１％Ｔｗｅｅｎ、および０．０５％ ＮａＮ３を含有するＰＢＳ）が入っているマイクロタイターウェル中で、撹拌し ながら、２５℃にて１時間行う。

次ぎにピンを、ＨＣＶに感染していると診断されたヒトの患者から得た抗血清１ ７５ｍ１が入って入る微量滴定用ウェルに中に浸漬し、−夜４°Ｃでインキユベ ートする。血清中のポリクローナル抗体とポリペプチド間の複合体が生成して、 ペプチドがインビボで免疫応答を起こしはじめる。このようなペプチドは、ワク チン開発の候補である。

上記のように本発明を説明し例証してきた。本願明細書に添付した請求の範囲か ら逸脱することなく、かつ本発明の教示事項と適用範囲から逸脱することなく多 くの変更と改変を行うことができることは当業者にとっては明かなことである。

（以下余白） 配列表 （１）一般的情報・ （ｉ）出願人：　タイ−アノ　チ１ （１、発明の名称：　診断と治療に用いるＨＣＶゲノム配９＋１（ｉｉｉ）配列 数：１４７ （８１番地　：　Ｔトラノティテク　Ｔへ゛ニスー　６００（Ｃ）市　二　本′ ストｌ （Ｆ）ｗ６便番号：　０２２１０ （Ｖ）コンピューター読み出し形態： （＾）媒体型　テ　ィスク、５．２５イノチ（Ｂ）　＋７ビエーター　１８Ｍ互 換用（Ｃ）操作システム：　ＭＳ−ＤＯＳ　ハ゛−ノ゛遺ノ３３（Ｄ）ソ７トウ １７・　ワードへ°−７！クト５１ｈｉ）現在の出願ｔ′−タ： （＾）出願番号：　未定 ＣＢ）出願日：　未定 （Ｃ）分類：　未定 （ｖｉｉ）光重データ： （Ａ、出願番号：　０７／６９７．３ｔ６（Ｂ）出願日：　１９９１年５月８日 （ｖｉｉｉ）代理人／事務所情報； （＾）氏名：　ヤニラック、　アノソニー　ノ゛工仁＜８）登録番号：　２９． ８０９ （Ｃ）照会／記録番号：　ＣＯ７？２／７０００（ＩＸ）電話回線情報： （へ゛電話：　＋６１７）’　７２０−３５００（Ｂ）テレ１ｖｑクス：　（６ １７）　フ２Ｏ−２４４１（Ｃ：テｋｄス：　ＥＺＥＫＩＥＬ （２）配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）＋１の情報：（１）配列めｉｌｔ！！・ （Ａ）長さ：３４０ヌクレオチド （Ｂ）盟：核酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （１１）配列の種類：　ＤＮＡ （ｖｆ）起源：　（ＡＴＣＣ１１４０３９４）（Ｃ）単離生物名：　ｎ５５ｈｃ ｖｌ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：１（２）配列番号（ＳＥＱ 　ＩＤ　Ｎｏ）：２（７）情報：（ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ：３４０ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （百）配列の種類：　ＤＮＡ （ｖｌ）起源： （Ｃ）単離生物名：　ｎ５５ｉ２１ （ｘｉ）配列：　配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：２コ コ ］ （２）配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ）：３の情報：（り配列の特色： （Ａ）長さ；３４０ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｖｉ）起源： （Ｃ）単離生物８二ｎ５５ｐｔｌ （ｘｉ）配列　、配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：３ＡＣＧＣＧＧＣＧＡＧ　 ＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣ３４０（２）配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：４の情報 ：（ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ＝３４０ヌクレオチド （８）型：核酸 （Ｃ’ｌ鎖の数ニ一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｖｉ）起源： （Ｃ）単離生物名：　ｎ５５ｇｍ２ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥｏ　１０　Ｎｏ）：４ＣＴＣＴＡＣＡＧτＣＡ ＣＴＧＡＧＡ７にＧ　ＡＣＡ’ｌ”ＣＣＧＴＡＣＧＧＡＧＧＡＧＧＣＡ　４０Ａ ＴＴＴＡＣＣＡＡＴ　ＧＴＴＧＴＧＡＣＣＴ　ＧＧＡＣＣＣＣＣＡＡ　ＧＣＣＣ ＧＣＧＴＧＧ　８０ＣＣＡτｃＡＡＧＴＣＣσにλＣＴＧλＧ　ＡＧＧＣＴＴ？ ＡτＧ　’ｌ’ＴＧＧＧＧＧｃｃｃ　１２０（２）配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎ ｏ）：５の情報：（１〉配列の特色： （Ａ）長さ：３４０ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本鎖 〈Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉ　ｉ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｖｉ）起源： （Ｃ）単離生物名：　ｎ５５ｕｓ１７ （ｘｌ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：５ＴＧＣＣＧＣＧＣＡＡ　 ＧＣＧＧＣＧＴＡＣＴ　ＧＡＣＡＡＣＴＡＧＣＴＧＴＧＧτ入ＡＣＡ　２００Ｃ ＣＣＴＣＡＣＴＴＧ　Ｔ？Ａ（：ＡＴＣＡＡＧ　ＧＣＣＣＡＡＧＣＡＧ　ＣＣＴ ＧＴＣＧＡＧＣ２４０ＡＴαコ、ＧＣＧＡＡ　ＣＣＴａＧＡＧＣＣ３４Ｇ（２） 配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：６の情報：（ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ：３４０ヌクレオチド ＣＢ）型；核酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （１１）配列の種類：ＤＮＡ （ｖｌ）起源；゛ （Ｃ）単離生物名：　ｎ５５ｓｐ２ （ｘｉ）配列：　配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ）：６ＣＧＣＡＧＧＧＣＴＣＣ ＡＧＧＡＣＴＧＣＡ　ＣＣＡＴＧＣＴＣＧＴ　ＧＴＧＴＧＧＣＧＡＣ２８０Ｇ入 ＣＣＴＡＧＴＣＧ　ＴＴＡＴＣＴＧＣＧＡλＡＧＴＧＣＧＧＧＧ　ＧＴＣＣＡＧ ＧＡＧＧ　３２０（２）配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）・７の情報：（ｉ）配 列の特色： （Ａ）長さ：３４０ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （１１）配列の種類：　ＤＮＡ （ｖｉ）起源： （Ｃ）単離生物名：ｎ５Ｓｊｌ （ｘｉ）配列　；配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）ニアＡＣＧＣＧＧＣＡＡＧ　 ＣＣＴＡＣＧＡＧＣＣ３４０（２）配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）・８の情報 ：（１）配列の特色： （Ａ）長さ：３４０ヌクレオチド （ｉ　＋）配列の種類：　ＤＮＡ （ｖｉ）起源： （Ｃ）単離生物名：　ｎ５ｓｋｌ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ＞：８ＡＴＧＣＧＧＣＧＡＧ　 ＣＣＴＡＣＧＡＧＴＣ３４０（２）配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：９の情報 ：（ｉ）配列の特色； （＾）長さ・３４０ヌクレオチド （Ｂ）型：　手亥酸 （Ｃ）鎖の数ニー重鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （Ｉｉ）配列の！ｌ類：　ＤＮＡ （ｖｉ）起源： ＜Ｃ＞単離生物名：　ｎ５５ｋ１．１ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：９（２）配列番号（ＳＥＱ 　ＩＤ　Ｎｏ）：１０の情報：（ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ＝３４０ヌクレオチド ＣＢ）型・核酸 （Ｃ）鎖の数−一本鎖 （Ｄ）トポロジー・直鎖状 （ｉ　ｉ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ）：１０ＡＣＧＣＧＧＣＧＡＧ 　ＣＣＴＡＣＧＡＧＴＣ３４０（２）配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：１１の 情報：（＋）配列の特色： （Ａ）長さ：３４０ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数−一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （１１）配列の種類：ＤＮＡ （ｖｉ）起源： （Ｃ）単離生物名：　ｎ５５ｓｐｌ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）＋１１（２）配列番号＋ＳＥ Ｑ　ＩＤ　Ｎｏ）：１２の情報：（１）配列の特色： （Ａ）長さ＝３４０ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニー重鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｔ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｖｉ）起源； （Ｃ）単離生物名：　ｎ５５ｓｐ３ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：１２（２）配列番号（ＳＥ Ｑ　ＩＤ　Ｎｏ）：１３の情報：（＋）配列の特色： （Ａ）長さ・３４０ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニー重鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （１１）配列の種類：　ＤＮＡ （ｖｉ）起源： （Ｃ）単離生物名：　ｎｓ５に２ （旧）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：１３ＣＴＣＡＡＣＣＧＴＣλ ＣＴＧＡＧＡＧＡＧ　λＣＡＴＣＡＧＡＡＣＴＧＡＧＧ入ＧτＣＣ４０（２）配 列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）・１４の情報：＜ｉ　＋）配列のｆｉｌｌ：ＤＮ Ａ （ロ）起＃： 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（Ｃ）単離生物名：１１０ （水Ｆ零〇） （ｘｉン配列：配列番号（ＳＥＱ　ＩＩ）　ＮＯ）：４６ＡＧＡＣＣＧＴＧＣＡ 　ＴＣ２５２ （２）配列番号（ＳＥＱ　ｔｏ　Ｎｏ）：４７の情報：（ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ：２５２ヌクレオチド ＣＢ）型：核酸 （ＣＡＭの数ニ一本積 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｌ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：４７ＡＣＴＣＴＡ’ｌ’Ｇ ＣＣＣＡＧＣＣＡＴＴＴＧ　ＧＧＣＧＴＧＣＣＣＣＣＧＣＡＡＧＡＣＴＧ　１６ ０Ｃ？ＡＧＣＣＧＡＧＴ　ＡＧＣＧＴ？ＧＧＧＴ　ＴＧＣＧＡＡＡＧＧＣＣＴＸ ’ＧＴＧＧＴＡ０　２００人＋１３ＡｃｃＧＴＧｃＡ　’ｉ’ｃ　２５２（２） 配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ）：４８の情報：（ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ：２５２ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本積 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｖｉ）起源ニー （Ｃ）単離生物名：５２１ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：４８λＧＡＣＣＧＴＧＣＡ 　ＡＣ２５２ （２）配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）＋４９（７）情報：（１）配列の特色： （Ａ）長さ：２５２ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本積 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｔ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｖｉ）起源： （Ｃ）単離生物名：　ｇｊ６１３２９ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：４９λＧＡＣＣＧＴＧＣＡ 　ＡＣ２５２ （２）配列番号（ＳＥｏ　１０　Ｎｏ）＋５０の情報：（ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ：１８０ヌクレオチド （Ｂ）盟：核酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本積 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｖｉ）起源： （Ｃ）単離生物名：　５ａ３ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）＋５０（２）配列番号（ＳＥ Ｑ　ＩＤ　Ｎｏ）：５１の情報：（ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ：１８０ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本積 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｖＤ起源： （Ｃ）単雌生物名：　５ａ４ （ｘｌ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：５１（２）配列番号（ＳＥ Ｑ　ＩＤ　Ｎｏ）：５２のｔ前転：（１１）配列の種類二ＤＮＡ （ｖｌ）起源：　（ＡＴＣＣ＃　４０３９４）（私モ羞り （ｘｉ）配列　°　配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：５２（２）配列番号（Ｓ ＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：５３の情報：（ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ：５４９ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本積 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｖｉ）起源： （Ｃ）単離生物名：　ＵＳＳ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：５３ＴＣＴＣＴＡＴＣＴＴ 　ＣＣＴＴＣＴＧＧＣＣＣＴＧＣＴＣＴＣＴ　５４９（２）配列番号（ＳＥＱ　 ＩＤ　Ｎｏ）：５４の情報：（ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ：５４９ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本積 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｔ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｖｉ）起源： （ｘｉ）配列　；配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：５４（２）配列番号（ＳＥ Ｑ　ＩＤ　ＮＯ）：５５の情報：（Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：　ＤＮＡ （２）配列番号（ＳＥｏ　１０　Ｎｏ）・５６の情報：（１）配列の特色： （Ａ）長さ：５４９ヌクレオチド ＣＢ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本積 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （１１）配列の種類：　ＤＮＡ （ｖｉ　）起源： （Ｃ）単離生物名：ｇｍ２ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ）：ｔ６（２）配列番号（ＳＥ ｏ　１０　Ｎｏ）：５７＋７）情報：（＋＞配列の特色： （Ａ）長さ：５４９ヌクレオチド （ｉｉ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｖｔ）起源： （Ｃ）単離生物名＝１２１ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）＋５７（２）配列番号（ＳＥ Ｑ　ＩＤ　Ｎｏ）：５Ｂの情報：（ｖｉ）起源： （Ｃ）単離生物名：　ｕｓ４ （ｘｉ）配列　：配列番号（Ｓ！：Ｑ　ＩＩ）　Ｊｉｏ＞＋５ｌｌ（２）配列番 号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）・５９の情報：（１１）配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｉ）配列　；配列番号＜ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）＋５９ＧＧＣＧＴＧＡＡＣＴ 　ＡＴＧＣＡＡＣＡＧＧ　ＧＡＡＴＴＴＧＣＣＣＧＧＴＴＧＣＴＣＴＴ　５２０ ’！’ＣＴＣ？Ａ？Ｃ？Ｉ’　ＣＣＴＣＴＴＧＧＣＴ　ＣＴＧＣＴＧＴＣＣ５４ −イ（２）配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：６０の情報：（＋）配列の特色： （Ａ）長さ：５４９ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニー重鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｖｉ）起源： （Ｃ）単離生物名：　ｎａｃ５ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：６０τＧＧＧＧＴＡＣＡＴ 　ＴＣＣＧＣＴＣＧＴＣＧにＣＧＣＣＣＣＣＣＴＡＧＧＧＧＧＣ’（３Ｃ４４０ （２）配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　＋１０）＋６１の情報：（ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ：５４９ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （１１）配列の種類：　ＤＮＡ （ｖｉ）起ｍ： （Ｃ）単離生物名：　ａｒｇ２ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：６１ＣＡＧＧＧＴＧＧＣＴ 　ＣＣＴＧＴＣＣＣＣＣＣＧＣＧＧＣＴＣＣＣＧＧＣＣＴＡＧＴＴＧ　３２０Ｇ ＧＧＣＣＣＣＡＣＡ　ＧＡＣＣＣＣＣＧＧＣＧＴＡＧＧＴＣＧＣＧ　黒ｆｆ１Ｇ ＧＧＴ　３５０（２）配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ）・６２の情報二　−（ｉ ）配列の特色： （Ａ）長さ＝５４９ヌクレオチド （ｉｉ）配列のｆｉ類：　ＤＮＡ （ｖｉ）起源： （Ｃ）単離生物名：　５ｐｌ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ）：６２ＴＸＴＯＣＴ’ｌ’Ｇ ＧＣＣＣＣＴＣＴＡＴＧＧ　ＣＡＡＴＧＡＧＧＧＴ　ＣＴＧＧＧＧＴＧＧＧ　２ ８０ＣＡＧＧＡＴＧＧＣ’！’　ＣＣＴＧＴＣＡＣＣＣＣＧＣＧＧＣＴＣＴＣＧ ＧＣＣτＡＧＣＴＧ　３２０（２）配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：６３の情 報：（ｉｆ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｖｉ）起ｆＲ： （Ｃ）単離生物名：　ｇｈｌ （ｘｌ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）＋６３ＡＧＣＧＧＴＣＧＣＡ 　ＡＣＣＴＣＧＴＧＧＡ　ＡＧＧＣＧＡＣＡＡＣＣＴＡＴＣＣＣＣＡＡ　２００ ＧＧＣ’ＴＣＧＣＣＧＧ　ＣＣＣＧＡＧＧＧＣＡ　ＧＧＧＣＣＴＧＧＧＣ’ｌ’ ｃＡＧｃｃｃＧＧＧ　２４０（２）配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：６４ノ情 報：（ｉ）配列の特色： （Δ）長さ＝５４９ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本積 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｆ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｖｉ）起源： （Ｃ）単離生物名：１１５ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）＋６４ＴＧＧＴＣＡＧＡＴＣ ！　ＧＴＴＧＧＴＧＧＡＧ　’ｆｆＴＡｃ’ｃＴＧＴＴ　ＧＣＣＧＣＧＣＡＧＧ 　１２０ＧＧＣＣＣＣＡＧＧＴ　ＴＧＧＧＴＧＴＧＣＧ　ＣＧＣＧＡＣＴＡＧＧ 　ＭＧＡＣＴＴＣＣＧ　１６０（２）配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：６５の 情報：＜ｉｔ１配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：６５人ＴＧＡＧＣＡＣＡＡ 　Ａ’ｌ’ＣＣＴＡＡＡＣＣＴＣＡ７ｕＧＡＡＡＡ　ＡＣＣＡＡＡ入Ｇ入Ａ　４ ０ＡＣＡＩＣＣＧ　ＣＣＧＣＣＣＡＣＡＧ　ＧＡＣＧＴＣＡＡＧＴ　’Ｉ’（ズ ＣＧＧＧＣＧＧ　８０（２）配列番号（ＳＥｏ　１０　Ｎｏ）コロ６の情報：（ Ｈ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：６６（２）配列番号（ＳＥ Ｑ　ＩＤ　Ｎｏ）：６７の情報；（１１）配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）＋６７ＣＡＡＡＣＧＴＡＡＣ ＡＣＣＡＡＣＣＧＲＣＧＣα：ＡＣＡＧＧ　２９（２）配列番号（ＳＥｏ　１０ ８０）：６ｇの情報：（ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ：２４ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本積 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （Ｈ）配列のｌｉ類：　ＤＮＡ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ）：６８人ＣＡＧＡＹＣＣＧＣ ＡＫＡＧＲＴＣＣＣＣＣＡＣＧ　２４（２）配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ）： ６９ノ情報：（＋）配列の特色： （Ａ）長さ：３０ヌクレオチド （ｌｉ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｌ＞配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：ｌ１９ＣＧＡＡＣＣＴＣＧ Ａ　ＧＧＴＡＧＡＣＧＴＣＡＧＣＣＴＡＴＣ：ＣＣ３０（２）配列番号（ＳＥＱ 　ＩＤ　Ｎｏ）ニア０の情報：（ｉ）配列の特色： （＾）長さ＝３０ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本積 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｌ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　［ＯＮＯＩニア０ＧＣＡＡＣＣＴＣＧＴ　 ＧＧＡＡＧＧＣＧＡＣＡＡＣＣＴＡ’ｒＣＣＣ（２）配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　 Ｎｏ）＋７１ノ情報；（＋）配列の特色： （Ａ）長さ＝３０ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数−一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｔ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｌ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）＋７１ＧＴｃ）ｈＣＣＡＡＴ ＧλＴＴＧＣＣＣＴＡＡ　ＣＴＣＧＡＧ’ｒＡ’ｌ”！’（２）配列番号（ＳＥ Ｑ　ＩＤ　Ｎｏ）ニア２（Ｄ情報：（１）配列の特色： （Ａ）長さ：２６ヌクレオチド ＣＢ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本積 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｌ＞配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　［Ｄ　Ｎｏ）ニア２ＧＴＣＡＣＧＡＡＣＧ 　ＡＣ’ＴＧＣＴＣＣＡＡ　Ｃ’ｒＣＡＡ０　２６３０　（２）配列番号（ＳＥ Ｑ　ＩＤ　Ｎｏ）ニア３の情報：（＋）配列の特色： （Ａ）長さ：２８ヌクレオチド ＣＢ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本積 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｌ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｉ）配列　；配列番号（ＳＥＱ　ｌ［ｌ　Ｎｏ）＋７３ＴＧＧＡＣＡＴＧＡ Ｔ　ＣＧＣＴＧＧＷＧＣＹ　ＣＡＣＴＧＧＧＧ　２８３ｏ（２）配列番号（ＳＥ Ｑ　ＩＤ　ＮＯ）ニア４（Ｄ情報゛（Ｃ）鎖の数ニー重鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｔ）配列の種＠：　ＤＮＡ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）　：”ＩＳωＱＴＣＧＣＴＧ Ｇ　ＧＧ’！’ＧＡＣＣＧ（２）配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）ニア９の情報 ：（Ｈ）配列のｌ￥ｉｉ：ＤＮＡ （ｘｌ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ）ニア５ＣＣＡＴＧＡＡＴＣＡ 　ＣＴＣＣＣＣＴＧＴＧ　ＡＧＧＡＡＣＴＡ（２）配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎ ｏ）・８０の情報：（＋）配列の特色： （Ａ）長さ：１８ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニー重鎖 りＤ）トポロジー；直鎖状 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （１１）配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）＋８０’！’ＴＧＣＧＧＧＧ ＧＣＡＣＧＣＣＣＡＡ　１ｍ１Ｂ　（２）配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ）＋８ １の情報：（ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ：３３ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニー重鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｔ１配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｌ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：８１ＹＧＭＧＣＧＧＧＣＡ ＣＡＧｔＴＣＡＲＲＣＡＡＧＡＲＡＧＣＡＧ　ＧＧＣ３３（２）配列番号（ＳＥ Ｑ　ＩＤ　Ｎｏ）＋８２の情報：（ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ：３３ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニー重鎖 １１０１列のｊｌ額：　ＤＮＡ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：８６ＣＧＴＲＧＧＧＧＴＹ 　ＡＹＣＧＣＣＡＣＣＣＭＣＡＣＣＴＣＧＡ　ＧＲＣ（２）配列番号（ＳＥＱ　 ＩＤ　ＮＯ）：８７の情報：（ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ：３３ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本積 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：８７ＣＧＴｈ’ＧＹＧＧＧ Ｇ　ＡＧＴＴＴＧＣＣＲ’ｌ’　ＣＣＣＴＧＧＴＧＧＣＹＡＣ（２）配列番号（ ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：８！ｌの情報：（＋）配列の特色： （Ａ）長さ＝３３ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （１１）配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：８ｇＣＣＣＧＡＣＡＡＧＣ ＡＧＡＴＣＧＡ’ｒＧ’ｌ’　ＧＡＣＧＴＣＧＭＧ　ＣＴ：Ｇ　３３（２）配列 番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：８９の情報：（＋＞配列の特色： （Ａ）長さ：３３ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本積 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｉ＞配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ）：８９ＣＣＣＣＡＣＧＴＡＧ 　ＡＲＧＧＣＣＧＡＲＣＡＧＡＧＲＧＴＧＧＣαテ　３３（２）配列番号（ＳＥ Ｑ　ＩＤ　ＮＯ＞・９０の情報：（１）配列の特色： （Ａ）長さ：３３ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本積 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：９０ＹＴＧＲＣＣＧＡＣＡ 　ＡＧＡＡＡＧＡＣ，ＩＩＧ　ＡＣＣＣＧＣＡＹＡＲＧＴＣ３３（１）配列の特 色： （Ａ）長さ：３３ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本積 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：９５ＧＡＴＧＯＣＴＴＧ’ ｌ”　ＧＧＧＡＴＣＣＧＧＡ　ＧＹＡＳＣＴＧＡＧＣＹＡＹ（２）配列番号（Ｓ ＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：９６の情報：（ｉ）配列の特色： （＾）長さ＝３３ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本積 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｔ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）＋９６ＧＡＣＴＣＣＣＣＡＧ 　ＴＧＲＧＣｋ℃ＣＡＧ　ＣＧＡＴＣＡＴＲＴＣＣＡＮ（２）配列番号（ＳＥＱ 　ＩＤ　Ｎｏ）：９７の情報：（＋）配列の特色： （Ａ）長さ：３３ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本積 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：　ＤＮＡ （！Ｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：９７ＣＣＣＣＡＣＣＡ’ｌ 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（ｐ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｌ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）＋１１２（ＪｋＴＡＴＣＣＣ ＡＡ　ＧＣＣＡＴＲＣＧＲＴ　ＧＧＣＣＴＧＡＹＡＣＣＴＧ（２）配列番号（Ｓ ＥＱ　ＩＤ　ＮＯ）＋１１３の情報：（ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ：３３ヌクレオチド （ＢＪ型：核酸 （Ｃ）鎖の数−一本鎖 （Ｄ）トポロジー二直鎖状 （ＩＩ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｌ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ＞＋１１３ＣＡＣＴＡＲＧＧＣ Ｔ　ＧＹＹＧＴＲＧＧＹＧ　ＡＣＣＡＧＴＴＣＡＴ　ＣＡＴ（２）配列番号（Ｓ Ｅｏ　１０　ＮＯ）：１１４の情報：（ｉ）配列の特色； （Ａ）長さ：３３ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （ｉｉ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）＋１１４ＧＡＣＲＧＣＴＴＧ Ｔ　ＧＧＧＡ’！’ＣＣＧＧＡ　Ｇ’ｌ’ＡＡＣ’！’ＧＣＧＡ　ＹＡＣ３３（ ２）配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）・１１５の情報：（＋）配列の特色； （＾）長さ：３３ヌクレオチド （ＢＪ型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本積 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｊｉ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｉ）配列　１配列番号（ＳＥｏ　１０　Ｎｏ）：１１５ＧＡＣＴＣＣＣＣＡ Ｇ　’ｌ’ＧＲＧｃｃｃｃｃＧ　ＣＣＡＣＣＡＴＲＴＣＣＡＴ　３３（２）配列 番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：１１Ｂの情報：（＋）配列の特色： （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （１１）配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｉ）配列　：配列番Ｐ（３ｔ０１０　Ｎｏ＞　＋１２０λ？ＧＧＣＴＡＧＡ ＣＧＣＴＴＴＣＴＧＣＧ　ＴＧＡＡＧＡＣＡＧ丁入ＧＴ（２）配列番号（ＳＥＱ 　ＩＤ　ＮＯ）：１２１の情報：（１）配列の特色： （Ａ）長さ：３３ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニー木端 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｔ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ）＋１２１ＧＣＣＴＧＧＡＧＧ ＣＴＧＣＡＣＧＲＣＡＣＴＣＡＴＡＣＴＡＡＣＧＣＣ（２）配列番号（ＳＥＱ　 ＩＤ　Ｎｏ）・１２２の情報：（ｉ　＋）配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：１２２ＣＧＣＡＧ）’ｋｃ ｃＡｃ　ＴＡ？ＧＧＣＴＣＴＹ　ＣＣＧＧＧＡＧＧＧＧ　ＧＧＧ　３３３３　（ ２）配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）＋１２３の情報：（ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ：３３ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニー木端 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｆ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｉ＞配列　；配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）　＋１２３ＴＣＲＴＣＣＹＧ ＧＣＡＡＴＴＣＣＧＧＴＧ　ＴＡＣＴＣＡＣＣＧＧ　ＴＴＣ３３３３（２）配列 番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：１２４ノｆｉ報：（＋）配列の特色： （Ａ）長さ：３３ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニー木端 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 ＜ｉｉ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｉｌ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：１２１１ＹＧＴＧＣＴＣＡ ＴＧ　ＲＴＧＣＡＣＧＧＴＣＴＪｋＣＧＡＧＡＣ（”ｌ’　ＣｅＣ（２）配列番 号（ＳＥＱ　！Ｄ　ＮＯ）＋１２９の情報：（＋）配列の特色： （Ａ）長さ：３３ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本積 （０）トポロジー：直鎖状 （Ｈ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ）：１２９ＧＴＴＡＣＧＴＴＴ Ｇ　ＫＴＴＹＴＴＹＴＴＴ　ＧＲＧＧＴＴＴＲＧＧλ社（２）配列番号（ＳＥＱ 　ＩＤ　Ｎｏ）：１３０の情報：（＋）配列の特色： （Ａ）長さ＝３３ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本積 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｆ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：１３０３３ＣＧＧＧＡＡＣ ＴＴＲＡＣＧＴＣＣＴＧＴＧ　ＧＧＣＧＲＣＧＧＴ？　ＧＧＴ　３３（２）配列 番号（ＳＥｏ　１０　Ｎｏ）＋１３１の情報：（ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ：３３ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本積 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （Ｈ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：１３１３３ＣＡＲＧＴＡＭ ＣＴ　ＣＣＡＣＣＲＡＣＧＡ　’１’ＣＴＧＲＣＣＲＣＣＲＣＣ３３（Ｚ）配列 番号（ＳＥｏ　１０　Ｎｏ）：１３２（７）情報：（ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ：３３ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本積 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 ＜Ｉ＋）配列のｉｌ類：　ＤＮＡ （２）配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）＋１３７の情報：（１）配列の特色： （Ａ）長さ：３３ヌクレすチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニー末鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉ　＋）配列の種類：　ＤＮＡ （ｆｌ＞配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）＋１３７ｎｓｙｃｃｃ’ｒｃ 罠ＴτＲＣＣＲＴＡＧＡ　ＧＧＧＧＣＣＡＤＧＧ　ＲＴ入（２）配列番号（ＳＥ Ｑ　ＩＤ　Ｎｏ）・１３８の情報：（＋）配列の特色： （Ａ）長さ：３３ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニー末鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （１１）配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ）＋１３８ＧＣＣＲＣＧＧＧ開 ＧＡＣＡＧＧＡＧＣＣＡＴＣＣＹＧＣＣＣＡ　ＣＣＣ（２）配列番号（ＳＥＱ　 ＩＤ　ＮＯ）：１３９ノ情報：（ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ＝３３ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニー末鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：１３９（＋）配列の特色： （Ａ）長さ；３３ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニー末鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （１１）配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ）＋１４０ＡＴＣＧＡＴＧＡＣ ＣＴＴＡＣＣＣＡＡＲＴ　ＴＲＣＧＣＧＡＣＣＴ　ＲＣＧ　３３（２）配列番号 （ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：１４１ノ情報：（ｉ）配列の特色： （Ｈ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ）＋１４５ＣＡｌｉ！Ｊ！ＡＧ ＧＡＡＧ　ＪｌｎＧＡＧＡＡＸＧ　ＡＧ（Ｊ講Ｃ（：ＲＧＧ　彫頃３３（２）配 列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：１４６の情報：ｍ配列の特色： （Ａ）長さ：２０ヌクレオチド ＣＢ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本積 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｉ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）＋１４６λＧＧＣ入τＡＧＧ Ａ　ＣＣＣＧＴＧＴＣＴ’！’　２０（２）配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）： １４７の情報：（ｉ）配列の特色： （Ａ）長さ：２０ヌクレオチド （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数：〜本積 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：　ＤＮＡ （Ｘｌ）配列　：配列番号（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ）：１４７ＣＴＴＣＴｒＴＧｆ Ｊ　ＧＡＡＡＧＴＧＧＴＧ　２０特表十６−５０８０２６　（４２） Ｆｉｇ、　４ｅ ｓ”ｕ’ｒ　９１ｔａＭ　（５）Ｓ） ｇｉ’＋的　１ミ１型 自土　２５２ 補正書の写しく翻訳文）提出書（特許法第１８４条の８）願 平成５年１１月８日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．Ｃ型肝炎ウイルスゲノム中のヌクレオチド配列に対応する８個またはそれ以 上のヌクレオチドの非ＨＣＶ−１ヌクレオチド配列を有する非天然型の核酸を含 む、組成物。 ２．前記Ｃ型肝炎ウイルスゲノム中の非ＨＣＶ−１ヌクレオチド配列に対応する ヌクレオチド配列が、ＮＳ５領域、エンベロープ１領域、５′ＵＴ領域、および コア領域からなる領域群から選択される、請求項１に記載の組成物。 ３．前記Ｃ型肝炎ウイルスゲノム中の非ＨＣＶ−１ヌクレオチド配列に対応する ヌクレオチド配列が、ＮＳ５領域の配列に対応する、請求項１に記載の組成物。 ４．前記Ｃ型肝炎ウイルスゲノム中の非ＨＣＶ−１配列に対応するヌクレオチド 配列が、配列番号２−２２の配列内の配列から選択される、請求項３に記載の組 成物。 ５．前記Ｃ型肝炎ウイルスゲノム中の非ＨＣＶ−１ヌクレオチド配列に対応する ヌクレオチド配列が、エンベロープ１領域の配列に対応する、請求項１に記載の 組成物。 ６．前記Ｃ型肝炎ウイルスゲノム中の非ＨＣＶ−１配列に対応するヌクレオチド 配列が、配列番号２４−３２の配列内の配列に対応する、請求項５に記載の組成 物。 ７．Ｃ型肝炎ウイルスゲノム中の非ＨＣＶ−１ヌクレオチド配列に対応する少な くとも１つのヌクレオチド配列が、５′ＵＴ領域の配列に対応する、請求項１に 記載の組成物。 ８．前記Ｃ型肝炎ウイルスゲノム中の非ＨＣＶ−１配列に対応するヌクレオチド 配列が、配列番号３４−５１の配列内の配列に対応する、請求項７に記載の組成 物。 ９．前記Ｃ型肝炎ウイルスゲノム中の非ＨＣＶ−１ヌクレオチド配列に対応する ヌクレオチド配列が、コア領域の配列に対応する、請求項１に記載の組成物。 １０．前記Ｃ型肝炎ウイルスゲノム中の非ＨＣＶ−１配列に対応するヌクレオチ ド配列が、配列番号５３−６６の配列内の配列に対応する、請求項９に記載の組 成物。 １１．前記非天然型の核酸が、Ｃ型肝炎ウイルスの１つまたはそれ以上の遺伝子 型に対応するヌクレオチド配列を有する、請求項１に記載の組成物。 １２．前記非天然型の核酸が、第１の遺伝子型の配列に対応する配列を有し、該 第１の遺伝子型が、ＮＳ５領域中の配列番号１−６、エンベロープ１領域中の２ ３−２５、５′ＵＴ領域中の３３−３８、およびコア領域中の５２−５７の配列 によって実質的に定義される、請求項１１に記載の組成物。 １３．前記非天然型の核酸が、第２の遺伝子型の配列に対応する配列を有し、該 第２の遺伝子型が、ＮＳ５領域中の配列番号７−１２、エンベロープ１領域中の ２６−２８、５′ＵＴ領域中の３９−４５、およびコア領域中の５８−６４の配 列によって実質的に定義される、請求項１１に記載の組成物。 １４．前記非天然型の核酸が、第３の遺伝子型の配列に対応する配列を有し、該 第３の遺伝子型が、ＮＳ５領域中の配列番号１３−１７、エンベロープ１領域中 の３２、５′ＵＴ領域中の４６−４７、およびコア領域中の６５−６６の配列に よって実質的に定義される、請求項１１に記載の組成物。 １５．前記非天然型の核酸が、第４の遺伝子型の配列に対応する配列を有し、該 第４の遺伝子型が、ＮＳ５領域中の配列番号２０−２２、エンベロープ１領域中 の２９−３１、および５′ＵＴ領域中の４８−４９の配列によって実質的に定義 される、請求項１１に記載の組成物。 １６．前記非天然型の核酸が、第５の遺伝子型の配列に対応する配列を有し、該 第５の遺伝子型が、ＮＳ５領域中の配列番号１８−１９、および５′ＵＴ領域中 の５０−５１の配列によって実質的に定義される、請求項１１に記載の組成物。 １７．前記非天然型の核酸が、Ｃ型肝炎ウイルスに対応するヌクレオチド配列を 有する核酸を形成するための核酸の合成反応を開始させ得る、請求項１に記載の 組成物。 １８．前記非天然型の核酸が、ハイブリツド生産物を検出するための標識手段を 有する、請求項１に記載の組成物。 １９．前記非天然型の核酸が、溶液からハイブリッド生産物を分離するための支 持手段を有する、請求項１に記載の組成物。 ２０．前記非天然型の核酸が、ウイルスの核酸の転写あるいは翻訳を阻害する、 請求項１に記載の組成物。 ２１．Ｃ型肝炎ウイルスの核酸と共にハイブリッド生産物を形成する方法であっ て、以下の工程を包含する方法：ａ．Ｃ型肝炎ウイルスのゲノム中の非ＨＣＶ− １配列に対応する８個またはそれ以上のヌクレオチドのヌクレオチド配列を有す る非天然型の核酸を、ハイブリッド形成条件を確立させ得る条件に置く工程であ って、該非天然型の核酸が、ハイブリッド形成条件下で該Ｃ型肝炎ウイルスの核 酸と共にハイブリッド生産物を形成し得る工程；およびｂ．ハイブリッド形成条 件を確立させて、Ｃ型肝炎ウイルスの核酸の存在下でハイブリッド生産物を形成 する工程。 ２２．前記Ｃ型肝炎ウイルスのゲノム中の非ＨＣＶ−１配列に対応するヌクレオ チド配列が、ＮＳ５領域、エンベロープ１領域、５′ＵＴ領域、およびコア領域 から実質的になる領域群のうち少なくとも１つの領域内の配列に対応する、請求 項２１に記載の方法。 ２３．前記ヌクレオチド配列が、ＮＳ５領域内の配列に対応する非ＨＣＶ−１配 列に対応する、請求項２１に記載の方法。 ２４．前記ヌクレオチド配列が、配列番号２−２２の配列内の配列に対応する非 ＨＣＶ−１配列に対応する、請求項２３に記載の方法。 ２５．前記ヌクレオチド配列が、エンベロープ１領域内の配列に対応する非ＨＣ Ｖ−１配列に対応する、請求項２１に記載の方法。 ２６．前記ヌクレオチド配列が、配列番号２４−３２の配列内の配列から選択さ れる非ＨＣＶ−１配列に対応する、請求項２５に記載の方法。 ２７．前記ヌクレオチド配列が、５′ＵＴ領域内の配列に対応する非ＨＣＶ−１ 配列に対応する、請求項２１に記載の方法。 ２８．前記ヌクレオチド配列が、配列番号３４−５１の配列内の配列から選択さ れる非ＨＣＶ−１配列に対応する、請求項２７に記載の方法。 ２９．前記ヌクレオチド配列が、コア領域内の配列に対応する非ＨＣＶ−１配列 に対応する、請求項２１に記載の方法。 ３０．前記ヌクレオチド配列が、配列番号５３−６６の配列内の配列から選択さ れる非ＨＣＶ−１配列に対応する、請求項２９に記載の方法。 ３１．前記ヌクレオチド配列が、Ｃ型肝炎ウイルスの１つまたはそれ以上の遺伝 子型に対応する非ＨＣＶ−１ヌクレオチド配列に対応する、請求項２１に記載の 方法。 ３２．前記非天然型の核酸が、第１の遺伝子型の配列に対応する配列を有し、該 第１の遺伝子型が、ＮＳ５領域中の配列番号１−６、エンベロープ１領域中の２ ３−２５、５′ＵＴ領域中の３３−３８、およびコア領域中の５２−５７の配列 によって実質的に定義される、請求項２１に記載の方法。 ３３．前記非天然型の核酸が、第２の遺伝子型の配列に対応する配列を有し、該 第２の遺伝子型が、ＮＳ５領域中の配列番号７−１２、エンベロープ１領域中の ２６−２８、５′ＵＴ領域中の３９−４５、およびコア領域中の５８−６４の配 列によって実質的に定義される、請求項２１に記載の方法。 ３４．前記非天然型の核酸が、第３の遺伝子型の配列に対応する配列を有し、該 第３の遺伝子型が、ＮＳ５領域中の配列番号１３−１７、エンベロープ１領域中 の３２、５′ＵＴ領域中の４６−４７、およびコア領域中の６５−６６の配列に よって実質的に定義される、請求項２１に記載の方法。 ３５．前記非天然型の核酸が、第４の遺伝子型の配列に対応する配列を有し、該 第４の遺伝子型が、ＮＳ５領域中の配列番号２０−２２、エンベロープ１領域中 の２９−３１、および５′ＵＴ領域中の４８−４９の配列によって実質的に定義 される、請求項２１に記載の方法。 ３６．前記非天然型の核酸が、第５の遺伝子型の配列に対応する配列を有し、該 第５の遺伝子型が、ＮＳ５領域中の配列番号１８−１９、および５′ＵＴ領域中 の５０−５１の配列によって実質的に定義される、請求項２１に記載の方法。 ３７．前記ハイブリッド生産物が、核酸の合成反応を開始させ得る、請求項２１ に記載の方法。 ３８．前記非天然型の核酸が、ハイブリッド生産物を検出するための標識手段を 有する、請求項２１に記載の方法。 ３９．前記非天然型の核酸が、溶液からハイブリッド生産物を分離するための支 持手段を有する、請求項２１に記載の方法。 ４０．前記非天然型の核酸が、ウイルスの核酸の転写あるいは翻訳を阻害する、 請求項２１に記載の方法。 ４１．９個またはそれ以上のヌクレオチドの非ＨＣＶ−１ヌクレオチド配列に対 応する非天然型のポリペプチドを含む組成物であって、該９個またはそれ以上の ヌクレオチドの配列がＣ型肝炎ウイルスゲノムの配列の中の配列に対応する、組 成物。 ４２．前記非ＨＣＶ−１配列が、ＮＳ５領域、エンベロープ１領域、およびコア 領域からなる領域群の１つから選択される、請求項４１に記載の組成物。 ４３．前記非ＨＣＶ−１ヌクレオチド配列が、ＮＳ５領域中の配列に対応する、 請求項４１に記載の組成物。 ４４．前記非ＨＣＶ−１配列が、配列番号２−２２の配列内の配列から選択され る、請求項４３に記載の組成物。 ４５．前記非ＨＣＶ−１配列が、エンベロープ１領域中の配列に対応する、請求 項４１に記載の組成物。 ４６．前記非ＨＣＶ−１配列が、配列番号２４−３２の配列内の配列から選択さ れる、請求項４５に記載の組成物。 ４７．前記非ＨＣＶ−１配列が、コア領域中の配列に対応する、請求項４１に記 載の組成物。 ４８．前記非ＨＣＶ−１配列が、配列番号５２−６６の配列内の配列から選択さ れる、請求項４７に記載の組成物。 ４９．前記非ＨＣＶ−１ヌクレオチド配列が、Ｃ型肝炎ウイルスの１つまたはそ れ以上の遺伝子型に対応するヌクレオチド配列を有する、請求項４１に記載の組 成物。 ５０．前記非ＨＣＶ−１ヌクレオチド配列が、第１の遺伝子型の配列に対応する 配列を有し、該第１の遺伝子型が、ＮＳ５領域中の配列番号１−６、エンベロー プ１領域中の２３−２５、およびコア領域中の５２−５７の配列によって実質的 に定義される、請求項４１に記載の組成物。 ５１．前記非ＨＣＶ−１ヌクレオチド配列が、第２の遺伝子型の配列に対応する 配列を有し、該第２の遺伝子型が、ＮＳ５領域中の配列番号７−１２、エンベロ ープ１領域中の２６−２８、およびコア領域中の５８−６４の配列によって実質 的に定義される、請求項４１に記載の組成物。 ５２．前記非ＨＣＶ−１ヌクレオチド配列が、第３の遺伝子型の配列に対応する 配列を有し、該第３の遺伝子型が、ＮＳ５領域中の配列番号１３−１７、エンベ ロープ１領域中の３２、およびコア領域中の６５−６６の配列によって実質的に 定義される、請求項４１に記載の組成物。 ５３．前記非ＨＣＶ−１ヌクレオチド配列が、第４の遺伝子型の配列に対応する 配列を有し、該第４の遺伝子型が、ＮＳ５領域中の配列番号２０−２２、エンベ ロープ１領域中の２９−３１、および５′ＵＴ領域中の４８−４９の配列によっ て実質的に定義される、請求項４１に記載の組成物。 ５４．前記非ＨＣＶ−１ヌクレオチド配列が、第５の遺伝子型の配列に対応する 配列を有し、該第５の遺伝子型が、ＮＳ５領域中の配列番号１８−１９、および ５′ＵＴ領域中の５０−５１の配列によって実質的に定義される、請求項４１に 記載の組成物。 ５５．前記ポリペプチドが、宿主の中で免疫反応を生じさせ得る、請求項４１に 記載の組成物。 ５６．選択的に請求項４１の組成物と結合し得る抗体。 ５７．Ｃ型肝炎ウイルスの１つまたはそれ以上の遺伝子型を検出する方法であっ て、以下の工程を包含する方法：ａ．Ｃ型肝炎ウイルスの１つまたはそれ以上の 遺伝子型に対応する８個またはそれ以上のヌクレオチドのヌクレオチド配列を有 する非天然型の核酸を、ハイブリッド形成条件を確立させ得る条件下に置く工程 、 ｂ．ハイブリッド形成条件を確立させて、Ｃ型肝炎ウイルスの核酸の存在下でハ イブリッド生産物を形成する工程、；および、 ｃ．ハイブリッド生産物の形成に関して、天然に存在しない核酸をモニターする 工程であって、該ハイブリッド生産物がＣ型肝炎ウイルスの遺伝子型の存在を示 す、工程。 ５８．前記非天然型の核酸が、第１の遺伝子型の配列に対応する配列を有し、該 第１の遺伝子型が、ＮＳ５領域中の配列番号１−６、エンベロープ１領域中の２ ３−２５、５′ＵＴ領域中の３３−３８、およびコア領域中の５２−５７の配列 によって実質的に定義される、請求項５７に記載の方法。 ５９．前記非天然型の核酸が、第２の遺伝子型の配列に対応する配列を有し、該 第２の遺伝子型が、ＮＳ５領域中の配列番号７−１２、エンベロープ１領域中の ２６−２８、５′ＵＴ領域中の３９−４５、およびコア領域中の５８−６４の配 列によって実質的に定義される、請求項５７に記載の方法。 ６０．前記非天然型の核酸が、第３の遺伝子型の配列に対応する配列を有し、該 第３の遺伝子型が、ＮＳ５領域中の配列番号１３−１７、エンベロープ１領域中 の３２、５′ＵＴ領域中の４６−４７、およびコア領域中の６５−６６の配列に よって実質的に定義される、請求項５７に記載の方法。 ６１．前記非天然型の核酸が、第４の遺伝子型の配列に対応する配列を有し、該 第４の遺伝子型が、ＮＳ５領域中の配列番号２０−２２、エンベロープ１領域中 の２９−３１、および５′ＵＴ領域中の４８−４９の配列によって実質的に定義 される、請求項５７に記載の方法。 ６２．前記非天然型の核酸が、第５の遺伝子型の配列に対応する配列を有し、該 第５の遺伝子型が、ＮＳ５領域中の配列番号１８−１９の配列によって実質的に 定義される、請求項５７に記載の方法。 ６３．前記非天然型の核酸が、配列番号６７−１４５の配列に対応する配列を有 する、請求項５７に記載の方法。 ５４．前記非天然型の核酸が、ＨＣＶゲノムのコアおよび領域においてグループ Ｉ遺伝子型を同定するための、配列番号６９、７１、７３、および８１−９９の 配列に対応する配列を有する、請求項５７に記載の方法。 ６５．前記非天然型の核酸が、ＨＣＶゲノムのコアおよびエンベロープ領域にお いてグループＩＩ遺伝子型を同定するための、配列番号７０、７２、７０、およ び１００−１１８の配列に対応する配列を有する、請求項５７に記載の方法。 ６６．前記非天然型の核酸が、ＨＣＶゲノムの５′ＵＴ領域においてグループＩ ＩＩ遺伝子型を同定するための、配列番号７７の配列に対応する配列を有する、 請求項５７に記載の方法。 ６７．前記非天然型の核酸が、ＨＣＶゲノムの５′ＵＴ領域においてグループＩ Ｖ遺伝子型を同定するための、配列番号７９の配列を有する、請求項５７に記載 の方法。