JPH06509560A - タクサン類を単離するための方法および組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 タフサン類を単離するための方法および組成物発明の技術分野 本発明は、再生可能な植物源から粗製タフサン混合物を得るための方法および組 成物、並びにこのようなタフサン混合物および組成物を生成して特定のタフサン 類を得る方法に関する。より詳細にいえば、本発明はタフサン類の含量が維持さ れるように植物を処理する方法に関する。本発明はまた、溶媒を用いて植物から タフサン類を抽出し、水性溶媒中に粗製タフサン混合物が存在するタフサン類の 粗製混合物を製造する方法に関する。加えて、本発明は正常相クロマトグラフィ ーを用い、粗製タフサン混合物から特定のタフサン類を精製する方法に関する。

発明の背景 タフサン類（ｔｉＸ２ｎｅｔ　）は、タフサン核を有するアルカ口・イトである 。二のタフサン核は下記に示す３環構造を具備しており、」、５．１２．１５． １５−ペンタメチル−トリシクロ［９３゜１０”１ペンタデカンとしても定義さ れる。

文献においては、少なくとも５６種類の異なったタフサン類が同定されている。

例えば１９８０年に、Ｒ，Ｗ、　Ｍｉ　ｔｉｅｒは公知のイチイ属アルカロイド 類（Ｈｘｕｓ　ｇｌｋｘｌｏｉｄｓ　）および他のタフサン誘導体を研究し、こ れら化合物の構造式、ＨＮＭＲデータ、ＭＳデータおよびＸ線データを報告した 論文を著した。

Ｊ、　Ｎａｔ、　Ｐｒｔｄ、　４３　（４）　：４２５−４３７　（１９８０） に掲載されたＲ、Ｗ、Ｍｉｌｌｚｒのこの論文は、参照として本明細書中に組み 込まれる。以下の刊行物もまた、参照として本明細書中に組み込まれる。これら 刊行物はタフサン類を同定し、且つ説明している。

−Ｍ、Ｇ、Ｂｓｇｌｅ７．　Ｅ、Ａ、Ｆｔｅｔｋｎａｌｌ、ａｎｄ　Ｇ、Ｐｘｔ ｔｕ＋ｄＣｎ。

Ａｃ１ａ　Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ、　４０．　１７４５（１９８４）　；φＤ 、　Ｐ、　Ｄｅｌｔａ　Ｃｐｓ！　ｄｅＭａｒｃａｎｏ　ｕｄ　Ｔ、　Ｇ、　Ｂ ａ１ｓｘｌｌ。

Ｃｈｅｍ、Ｃｏｍｍ、　１３８２（１９７０）　；φＤ、　Ｇ、Ｉ、　Ｋｉｎｇ ｓｔｏｎ、　Ｄ、＾、Ｈｘｗｋｉｎｓ、ａｎｄ　Ｌ、Ｏｖｉｎｇｊｏｎ。

７、Ｎａｔ、Ｐｒｏｄ、　４５．４４６（１９ｇ２）　；ｅＦ、Ｇｕｓｒｉｌｌ ！−Ｖｏｓｇｌｅｉｎ、　Ｄ、Ｇｕｔｏｉｒｄ、ａｎｄ　Ｐ、Ｐｏ１ｔｅｒ。

１Ｎａ１．Ｐ＋ｏｄ、５０（１）、９−１１（１９８７）　：ΦＢ、Ｌ７ｔｈｇ ｏｅ　ｉｎ　”ＴｂｅＡｌｋａｌｏｉｄｓ″’　Ｅｄ、　ｂｙ　Ｒ，Ｈ，Ｆ、Ｍ ｘｎ＋に＊。

Ｖｏｌ、　１０．＾ｃａｄｐｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　１９６ ８．　ｐｐ、　５９７−６２６　；−Ｄ、　Ｐ、　Ｄｓｌｌａ　Ｃａ５ａ　ｄｓ 　Ｍｘｒｃａｎｏ　ａｎｄ　Ｔ、　Ｇ、　１ｌａｌｓａｌｌ。

Ｃｂｅｍ、　Ｃｏｍｍｕｎ、　１３８１　（１９７０）　；−Ｖ、Ｓｃ＋＋ｉｌ ｈ、　Ｓ、ＢＩｅｃｈｅｒｔ、　Ｍ、Ｃｏ１１ｎ、　Ｄ、Ｇｕｔｎａ＋ｄ、　Ｆ 、Ｐｉｅｏｊ。

Ｐ、Ｐｏｔｉｒｒ、ａｎｄ　Ｐ４ａｒｅｎｎｅ。

Ｊ、Ｎａ１．Ｐ「ｏｄ、　４７（１）、ｐｐ１３１−１３７（１９８４）　；― ｌ、Ｌ、ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ、　Ｒ，Ｗ、Ｍｉｌｌｕ、　Ｒ，Ｇ、Ｐｏｗｓｌ ｌ　ａｎｄＣ，Ｒ，Ｓｍ１ｔｈ、　Ｊｒ、　。

Ｊ、Ｎａｔ、Ｐｒｏｄ、４４：３２１−１９（１９８１）−Ｄ、　Ｐ、　Ｄｅｌ ｌｘ　ＣＪＩ！　ｄｔ　Ｍｘｒｅｘｎｏ　ｘｎｄ　Ｔ、　Ｇ、　１１１１１１１ １゜Ｃｈｅｍ、　Ｃｏｍｍ、　、　３６５　（１９７５）・Ｃ，Ｅｌ、０Ｉｉｖ ｅｒ　Ｅｕａｎｇ、Ｄ＊ｙｉｄ　Ｇ、　ｌ、Ｋｉｎｇｓｌｏｎ。

Ｎｅｘｌ　Ｆ、Ｍｘｇｒｉ、Ｇ、Ｓａｍａｒｘｎａ７ａｋｅｘｎｄ　Ｆ、Ｅ、Ｂ ｏ＠ｔｎｃｒ。

Ｊ、Ｎａ１．Ｐｒｏｄ、４９（４）：６６５−６６９（１９８６）タフサン系分 子は強力な抗腫瘍活性を有している。一般に、抗腫瘍活性について研究されたタ フサン類は、卵巣癌および白血病の治療に用いられている。タフサン類は、チュ ーブリンの重合を誘導し、タフサン感受性細胞に対して抗増殖作用を有する極め て安定で且つ非機能的な微小管を形成することによって、その抗腫瘍活性を発揮 すると思われる（Ｅｒｉｃ　Ｋ。

ン分子の中で、抗腫瘍活性について最もよく研究されているのはタフソールＣｌ ｌｌ０Ｉ）　、セファロマニン（ｃ＊ｐｈｘｌｏｍｘｎｎｉｎ＊）、デスアセチ ルセファロマニン（ｄｓｓｘｃ！ｔ７１ｃｅｐｈａｌｏｍｘｎｎｉｎｅ）、バッ カチンｍ　（ｔ＋ａｃｃａｌｉｎ　ＩＩＩ）、ＩＯ−デスアセチルバラ力チンｍ 　（１０−ｄｓｓａｃｒ１７１　ｂａｃｃａｌｉｎ　ＩＩＩ）及び１Ｆデスアセ チルタクソール（１０−＋１ｅｓａｃｓ１７１ｔａｘｏｌ）である。これらタフ サン類の構造を下記に示す。

ｏｃｃＣ＠Ｈ。

Ｒ，＝ＯＨ：　１０−デスアセチルバッカチン■１０−デスアセチルタクソール Ｒ，＝ＡＣ，Ｒ２＝ＣＨ３ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）：セファロマニン Ｒ，−ＯＨ，Ｒ２＝ＣＨ３ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）：ＩＯ−デスアセチルセファ０マ ニン タクソールとして公知のタフサン化合物が、最初に、成長の遅い針葉樹である西 洋イチイ（ｖｒｓｌｔｒｎ　７ｅｗ）のタフサス・、　（１９７１）　によって 明らかにされた。

シル類の濃度は極めて低い（例えば、タフソールは樹皮の乾燥重量を基準として 約０．００４％〜約０．０２％の濃度で存在する）ため、研究目的に必要とされ る通常の量のタフサン類を製造するためてさえ、大量の樹木を伐採しなければな らない。更に、野生の樹木は非常に異なった条件下で成育するため、樹皮中に産 生されるタフサン類の濃度レベルには著しい変化がもたらされる。加えて、野生 樹木の集団は森林火災、周年の季候変化、異なったケモタイプ（ｃｈｅｍｏｔｙ ｐｅ）の野生集団におけるタフソール含量の天然の変化のように、多くの不確実 性および危険をはらんでいるため、タフサン類の供給源としては信頼性に乏しい 。野生植物の伐採に関する環境問題の観点からの批判が増大していることも、タ フサン類の充分な供給るという事実である。このような伐採によって、疾病およ び害虫に対する耐性、耐寒性、高成長率、並びに日光、極度の干ばつや洪水に対 する耐性、タフソール／タフサンの高含量といった特性を与える蛋白をコードし ている野生型遺伝子の喪失がもたらされるかも知れない。これらの野生型遺伝子 を保存することは、タフソールおよび他のタフサン類のコスト的に効果的な製造 を長期的に開発するためには（植物栽培、組織培養または遺伝子改変微生物の何 れの手段を用いるとしても）、極めて重要であろう。将来的な生産戦略において 、野生型の生殖質は重要な役割を果たすであろうから、野生集団を保存すること は、タフソール及び他のタフサン類を製造するための開発戦略にとって必須の要 素とみなされなければ供給しか得られないので、タフソールの臨床実験は、数少 ない特定の化学療法的応用のみに制限されてきた。また、予測可能な費用で得る ことができると共に、安定でかつ信頼できるタフソールの供給源が存在しなけれ ば、その臨床的利用は著しく妨げられるであろう。維持することが可能で、しか も経済的且つ信頼できるタフサン類の供給源を開発することが緊急の課題である 。

タフソールの癌化学療法剤としての潜在的可能性、並びにタフソール分子の構造 的複雑さに刺激されて、その新規な合成に向けて多くの努力がなされてきた。し かしながら、タフソール分子の複雑さは、容易に入手可能な原料からのタクソ− ルの全合成は経済的に実行し得ないことを示唆している。

タフサン環骨格の合成は、Ｒ，Ａ、Ｈｏ１ｌｏｎ　ｅｌ　！１．　によって、Ｊ ｏｕｒｎａｌ　ｏｌ　ｔｂｔ　Ａｍｅ＋１ｃｉｎ　Ｃｈｅｍｉｃｘｌ　５ｏｃｉ ｅｌＹ、　１０６５７３１（１９８４）及び同書Ｖｏ１．１１０．　ｐＨ，６５ ５８−６５６０（１９８８）に報告された。

しかしながら、これらの合成は、最終生成物が有効な抗腫瘍剤として作用する充 分な薬理学的活性を欠いている点で不完全なものであった。

Ｔ、　ｂｘｃｃａｔａの葉から単離されたより豊富な前駆体（１ｇ／新鮮な葉１ ｋｇ）でちる１０−デスアセチルバラ力チン■を用いたタフソールの半合成が、 フランスの研究者によって報告よるヨーロッパ特許出願箱０２５３２７８号およ びＣｏ１１ｎ　ｅｌ　ａｌ。

によるヨーロッパ特許出願箱０２５３７３９号は、１０−デスアセチルバソ力チ ン■からのタフソールの半合成に言及している。

これらの方法はタフサン誘導体を出発物質に用いており、従って、このような方 法は、植物源からタフサンを単離および精製し、続いて精製したタフサンをタフ ソールに変換する必要があるという欠点を有している。このようなタフソールの 多段階製造は、タフソールを植物原料から直接単離するよりも費用がかかる。

タフソールのようなタフサン類を、植物原料から単離する新しい技術を開発する ための努力が行なわれている。しかしながら、再生可能な供給源からのタフサン の充分な抽出を与える方法は、現時点では未だ報告されていない。例えば、Ｍ、 Ｃ，Ｗａｎｉ　ｓｌ　ａｔ、ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ａｍｅｒｉｃｘｎ 　ＣｈｅｍｉｃｘｌＳｏｃｉｅ１７．　Ｖｏｌ、９３．　ｐｐ、２３２５−２３ ２７（１９７１）は、正常槽カラムク０？トゲラフイープロトコールを用いた、 Ｔａｘｕｓ　ｂｒｅｖｉｆｏｌｉｔの幹部樹皮からのタフサン類の精製について 言及している。

正常槽カラムクロマトグラフィーには、分子的分離を行なうために極性カラムバ ッキングを使用することが必要とされる。

１９８３年７月１５日付の国立癌研究所天然物部門の論文（ＮＳＣ１１２５９７ ３）もまた、Ｔａｘｕｓ　ｂｒｅｙｉｆｏｌｉｘの樹皮、樹皮のない木部、枝、 小技、針状葉、種子／果実、および根部がらのタフソールの精製について言及し ている。

ＮＳＣ［２５９７３論文および他の刊行物に記載されたタフソール単離法の欠点 は、抽出工程で塩化メチレンを用いることの信頼性である。塩化メチレン、並び にクロロホルムのような他の塩素化炭化水素は毒性であり、潜在的に発癌性であ ることが認識されている。従って、これらの方法を実行する人がこれら化学品に 曝されるという観点から、またタフサン医薬の最終的な投与形態において精製タ フサン類から除去されずに残存した痕跡量のこれら化学品に患者が曝さらされる 可能性があるという観点から、植物原料からのタフサン類の抽出および精製にこ れら溶媒を利用するのは回避することが望ましい。

Ｖ、５ｅｎｉｌｈ　ｅｌ　ａｌ、、Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｌ　Ｎｘ１ｕｒａｌ　Ｐ ｒｏｄｕｃｔｓ、Ｖｏｌ、４６゜Ｎｏ、　］、ｐｐ、　１３１−１３７　（１９ ８４）は、Ｔａｘｕｓ　ｂａｃｃａ＋ａ　Ｌ、の幹がらのタフソール及びセファ ロマニンの精製に言及している。５ｅｎｉｌｈｅｌ　ａｔ、により報告された精 製方法は、種々の正常用クロマトグラフィーバッキング上でタフサン類の多段階 溶出を行なった後でさえ、ＨＰＬＣまたは結晶化を用いて特定のタフサン類の更 なる精製が必要とされる点において不完全である。

逆相カラムクロマトグラフィープロトコールを用いて、植物からタフサン類を単 離する試みが行なわれている。例えば、Ｋｅｉｌｂ　Ｍ、Ｗｉｌｈｅｒｕｐ　ｅ ｌ　ａｌ、、　１ｏｕｒｎ　ｌ　０１　Ｎａ１ｕｒ　ｌ　Ｐｒｏｄｕｃｅｓ。

Ｖｏｌ、　５３．　Ｎｏ、　５．　ｐｐ、　１２４９−１２５３（１９９０）　 ；　Ｋｅｉｔｈ　ｉ＋１．Ｗｉｔｈ！＋ｕｐ　ｅｌａｌ、、ｊｏｕ「ｎａｌ　ｏ ｆ　Ｌｉｑｕｉｄ　Ｃｈｒｏｍａｌｏｇｒａｐｈ７．　Ｖｏｌ、１２．　Ｎｏ、 ｌｌ。

ｐｐ、　２１１７−２１３２　（１９８９）を参照されたい。これらの試みは、 タフサン類の単離収率が相対的に低い（タフサンの理論収率の略５０％）点て望 ましくない。

逆相カラムクロマトグラフィーは、分子的分離を行なうために非極性カラムバッ キングの使用を必要とする。逆相クロマトグラフィーの他の欠点は、水性溶出線 からのタフサン類の分離が困難なことである。水性媒質の蒸発には費用がかかり 、且つ時間がかかる。更に、水性媒質の使用によって不安定な結合が加水分解さ れ、これによってタフサン類の収率は低下する。また、逆相クロマトグラフィ一 工程で用いられる水性媒質は、Ｃ７立体異性中心を部分的にエピマー化する。

こうして精製したエピマーは、薬理学的性質が低いので望ましくない。更に、こ れらの望ましくないエピマー類を薬理学的に有用なタフサン類から分離するには 更に費用を要し、且つ困難である。

分離はさらに複雑である。なぜならば、逆層クロマトグラフィ一工程では所望の タフサン生成物は共溶比（ｃｏｅｌｕｊりされるためである。したがって、タフ サン類を完全に分離するためにさらにクロマトグラフィ一工程を経なければなら ず、費用と労力が増大する結果となる。

植物素材からタフサン類を分離するための公知の方法の他の欠点は、それらの方 法が、植物素材を実質的に乾燥された形で必要とすることである。現在の植物素 材乾燥法は、植物素材中に含まれるタフサン類の分解を促進する。そのため、乾 燥植物素材は、タフサンの収率の減少の要因となる。

発明の要約 本発明によると、限りある資源である野生植物とは対照的に、イチイ属植物の栽 培変種からの新規の再生可能なタフサン源が提供される。タフサン抽出のために 処理される植物は、好ましくは、多量の葉が幹に付いている本来のままの刈取物 （ｉｎｔａｃｔ　ｃｌｉｐｐｉｎｇ　）として供給される。次いで、この植物素 材は、タフサンに富む組成物を得るために１種以上の溶媒で処理される。

本発明はまた、装飾用イチイ属植物の１種以上の栽培変種から調製されるタフサ ンに富む組成物を提供する。タフサンに富む組成物は、１種以上の栽培変種から 本来のままの刈取物として与えられる植物素材を、１種以上の溶媒で処理するこ とにより調製される。溶媒処理に先立ち、任意１こ、植物素材を乾燥工程に送る ことができ、あるいは粉砕することができる。

加えて、本発明は、続くタフサンの抽出のための源として用いることができる植 物素材の作製方法を提供する。この方法は、タフサンの含量を維持し、タフサン 類を抽出し易くする。この方法は、タフサン含有植物素材の、幹に多量の葉が付 いた本来のままの刈取物を供給し、この本来のままの刈取物を乾燥させ、刈取物 の揮発物含量を減少させて実質的に乾燥した刈取物を作製し、この実質的に乾燥 した刈取物を回収することを具備する。この植物素材の作製方法は、好ましくは 、約７０℃未満の温度で行なわれ、直射日光を遮断しない条件下では行なわれな い。

タフサン類の源として用いることができ、本来のままの刈取物を供給し、この本 来のままの刈取物を乾燥させて揮発成分を減少させ、実質的に乾燥した刈取物を 作製し、この実質的に乾燥した刈取物を回収することを具備する本発明の方法に 従って作製された植物素材もまた、この発明の一部である。

この発明はまた、タフサン含有植物から粗タクサン混合物を得る方法にも関する 。この方法は、 Ａ、植物素材を有機溶媒と接触させることによりタフサン類を抽出し、実質的に 溶媒を含まないタフサンに富む第１の残渣を得る工程； Ｂ、第１の残渣を、タフサン類を溶解し得る有機溶媒とタフサンをほとんど溶解 しない水性溶媒との間で分配して有機相と水相とを生成させる工程； Ｃ０水相から有機相を分離し、実質的に水相を含まない有機相を回収する工程； Ｄ、第２の有機相から第２の残渣を生成させる工程；および この第２の残渣に最終処理を施す工程 を具備する初期溶媒処理を含む。

第２の残渣中に存在するタフサン類は、処理ＥまたはＦのいずれかから選択され る最終処理によりさらに精製される。

最終処理Ｅは、 タフサンを固体支持体に可逆的に付着させ得る溶媒に第２の残渣を溶解する工程 ； 溶解した第２の残渣を含む溶媒に固体支持体を導入し、この固体支持体に第２の 残渣のタフサン類を付着させる工程、固体支持体を溶媒から分離する工程； タフサン類が付着した固体支持体を、異なるタフサン溶出特性を有する溶媒系と 接触させる工程：および固体支持体からタフサンに富む分画を粗混合物として溶 出させる工程 を具備する。

最終工程Ｆは、第２の残渣を水性混合物と非極性非混和性有機溶媒との間で分配 し、水性混合物がら粗タクサン混合物を回収することを具備する。ここで、水性 混合物は、単層の水および水と混和し得る極性有機溶媒を含み、極性溶媒は、水 性混合物中に、第２の残渣中に存在するタフサン類を水性混合物に配するに十分 な量存在する。

粗タクサン混合物の調製方法に加えて、この発明はまた、ここに開示される方法 に従って調製される粗タクサン混合物組成物にも関する。

本発明はまた、タフソールおよびセファロマニンを含む２種以上のタフサン類を 分離する方法であって、正常相クロマトグラフィーカラムにのせるに適した溶媒 中に２種以上のタフサン類を含有する混合物を供給する工程；移動相として適し た溶媒中の固体支持体を充填した正常相クロマトグラフィーカラムにタフサン含 有混合物をのせる工程；および 十分な極性を有する移動相で正常相クロマトグラフィーカラムを溶出してタフソ ールおよびセファロマニンを別々に溶出することによりタフサン類を分離する工 程を具備する方法をも提供する。

さらに、本発明は、酢酸エチルおよび塩化メチレンの混合液を移動相として使用 する正常相クロマトグラフィーを用いて、セファロマニンからタフソールを分離 する方法を提供する。

タフサン含有植物素材からタフサンを得る方法およびタフサン類を分離する方法 も本発明の一部である。この方法は：タフサン含有植物素材の幹に多量の葉が付 いている本来のままの刈取物を供給し、この本来のままの刈取物を乾燥させてそ の揮発成分を減少させ、それにより実質的に乾燥した刈取物を作製し、およびこ の実質的に乾燥した刈取物を回収し； この実質的に乾燥した刈取物から下記工程に従ってタフサンを抽出し、 Ａ、植物素材を有機溶媒に接触させ、実質的に溶媒を含有しないタフサンに富む 第１の残渣を得る工程；Ｂ、第１の残渣を、タフサン類を溶解し得る有機溶媒と タフサンをほとんど溶解しない水性溶媒との間で分配して有機相と水相とを生成 させる工程； Ｃ１水相から有機相を分離し、実質的に水相を含まない有機相を回収する工程； Ｄ、第２の有機相から第２の残渣を生成させる工程；この第２の有機相に、 Ｅ、タフサンを固体支持体に可逆的に付着させ得る溶媒に第２の残渣を溶解し、 溶解した第２の残渣を含む溶媒に固体支持体を導入して、この固体支持体に第２ の残渣のタフサン類を付着させ、 固体支持体を溶媒から分離し、 続いて、タフサン順が付着した固体支持体を、異なるタフサン溶出特性を有する 溶媒系と接触させ、および固体支持体からタフサンに富む分画を粗混合物として 溶出させるか、または Ｆ、第２の残渣を水性混合物と非極性非混和性有機溶媒との間で分配し、ここで 、水性混合物は、単層の水および水と混和し得る極性有機溶媒を含み、極性溶媒 は、水性混合物中に、第２の残渣中に存在するタフサン類を水性混合物に配する に十分な量存在し、かつ 第２の水性混合物から粗タクサン混合物を回収する、 のいずれかから選択される最終工程を施し、処理ＥまたはＦのいずれかから得ら れた粗タクサン混合物を、正常相りロマトグラフィーカラムにのせるに適した溶 媒中に供給し、ここで粗タクサン混合物は２種以上のタフサン類を含有し、 移動相として適した溶媒中の固体支持体を充填した正常相クロマトグラフィーカ ラムにタフサン含有混合物をのせ；十分な極性を有する移動相で正常相クロマト グラフィーカラムを溶出してタフソールおよびセファロマニンを別々に溶出する ことによりタフサン類を分離する、ことを具備する。

したがって、本発明の目的は、不変かつ再生可能なタフサン源、およびタフサン 類を効率的に回収する方法を提供することにある。

本発明のさらなる目的は、種々の正常相クロマトグラフィーバッキング上での複 数回の溶出の必要性を減少させる、植物素材からのタフサンの単離方法を提供す ることにある。

塩化メチレンおよびクロロホルムのような特定の塩素化炭化水素の使用を回避し 、または最小にする、タフサンの単離方法を提供することは、本発明に付は加え られた目的である。

タフサンを高収率で生成する、植物素材からのタフサンの単離方法を提供するこ とも本発明の目的である。

タフサンの損失を最小にする、タフサン含有植物素材の乾燥方法を提供すること も本発明の他の目的である。本発明の他の目的は、タフサン類の源として用いる ことができる、実質的に乾燥した植物素材を提供することにある。

本発明のさらなる目的は、植物素材からの有機成分の除去に単純な撹拌を用いる ことができる、植物素材からのタフサン類の単離方法を提供することにある。

濾過工程の必要性をなくした、植物素材からのタフサン類の単離方法を提供する ことも本発明の目的である。

逆相クロマトグラフィーに見られるような水性溶出媒体の使用を必要としない、 植物素材からのタフサン類の単離方法を提供することは、本発明に付は加えられ た目的である。

本発明のさらなる目的は、Ｃ−７ステレオ中心のエピマー化を妨げる、植物素材 からのタフサン類の単離方法を提供することにある。

全てのタフサン類が正常相クロマトグラフィーにおいて実質的に異なる保持時間 を有する、植物素材からのタフサン類の単離方法を提供することは、本発明に付 は加えられた目的である。

本発明の他の目的は、粗タクサン混合物を得る方法を提供することにある。

本発明のさらなる目的は、粗タクサン混合物を含有する組成物を提供することに ある。

発明の詳細な説明 タフサン類を含有するいかなる植物素材も本発明の方法において有用である。さ らに、用いられる植物素材は、純粋な遺伝的起源のもの、混合遺伝的もしくはハ イブリッドな起源のもの、または未知の遺伝的起源のものであってもよい。自然 界で成長した植物から収穫した植物素材も、タフサン類の源として用いることが できる。その例には、Ｔ、ｂｒｅｗ百０１０、クサレ類の源として用いられる。

ここで用いられる場合、「栽培変種」は、あらゆる特性（形態学的、生理学的、 細胞学的、化学的、その他）により明瞭に区別され、（性的もしくは無性的に） 再生した場合に、その異なる特性を保持する栽培植物の集合を意味する。ＨＯ目 ｕｓ　Ｔｈ１ｒｄ：＾ＣｏｎｅｉｓｅＤｉｃｔｉｏｎａｒｙ　ｏｆ　Ｐｌａｎｔ ｓ　Ｃｕ１ｔｉｖａｔｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｕｎｉｔｅｄ　５ｌａｔｔｓ。

ＭａｃＭｉｌｌａｎ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏ８．　Ｉｎｃ、、１９７６゜ タフソール含量が新鮮な葉中に確認されることが見出された。

確認された変種の中には、Ｔ、　Ｘ　ｍｅｄｉａ　’Ｈｅｎｒｙｉ’、Ｔ、　Ｘ ｍｅｄｉａ　’Ｒｕｎｙａｎ’、Ｔ、ｃｕｓｐｉｄａｌａＳＴ、　Ｘ　ｍｅｄｉ ａ　’Ｂａ１ｌｏ＋ａｎ’、Ｔ、　Ｘ　ｍｅｄｉａ　’　Ｈａ山ｅｌｄ’、Ｔ、 　Ｘ　ｍｅｄｉａ　’Ｅｉｃｋｓｉｉ’　、Ｔ、　Ｘｍｅｄｉａ　’Ｎｉｇ＋ａ ’　、Ｔ、Ｘ　＋ｕｄｉｘ　’Ｔａｕｎｆｏｎｉｉ’　、Ｔ、Ｘ　ｍｅｄｉａ’ Ｄａｒｋ　Ｇｕｅｎ　Ｓｐ＋ｃａｄｅ＋’　および栽培　Ｔ、ｃｕｓｐｉｄａｌ ａＴ、Ｘ　ｍｅｄｉａ　’Ｒｕｎ７ａｎ’、Ｔ、Ｘ　ｍｅｄｉａ　’Ｂｒｏｗｎ ｉｉ’　、Ｔ、Ｘなから、最も好ましくは、その葉のタフサン含量がＴ、　ｂｒ ｅｖｉｆｏｌｉａの乾燥幹樹皮よりも高い栽培変種がタフサン類の源として用い られる。最も好ましい栽培変種は、きる。上述の栽培変種は、商業種苗園から入 手することができる。

本発明に用いられる植物素材は、タフサン類を含有する栽培変種のいかなる部分 でもよく、葉、幹、枝、樹皮、根またはそれらの混成体でもよい。本発明の好ま しい態様において、葉は、それらのタフソール含量を保持するために、小さな幹 に付いた状態で、本来のままの刈取物として乾燥する。ここで用いる場合には、 「本来のままの刈取物」は、元来の葉が多量に幹に付いたままになっている、い かなる刈取物をも含むことを意味する。刈取物（ｃｌｉｐｐｉｎｇ）は、当業者 によって、［刈込物（ｔ「ｉｍｍｉｎｇ）　Ｊとも呼ばれる。加えて、葉を有す る小輪のタフソール含量は葉の含量の約６０〜７０％であることが見出されてい る。

本発明に従って抽出される植物素材は、新鮮な、もしくは乾燥した形で用いられ る。ここで用いられる場合には、「新鮮」は、その揮発成分の全てを実質的に保 持する植物素材を含むことを意味する。好ましくは、植物素材は、約７０℃未満 の温度で、十分に照射されるか、遮光されるか、もしくは暗黒のいずれかの条件 下で乾燥され、直射日光を遮らない条件下では乾燥は行なわれない。ここで用い られる場合には、「十分な照射」は、直射日光のような大気可視光、またはグリ ーンハウスもしくは人工的に照射されるビルの内部で見出される光が、実質的に 遮られず、反射されず、もしくは他の方法で植物素材に到達することが妨げられ ない、いかなる条件をも含むことを意味する。より好ましくは、植物素材は、約 ６５℃ないし約２０℃の温度で、遮光された、もしくは暗黒条件下で乾燥される 。乾燥空気または低湿度が乾燥のために好ましい条件である。好ましくは、相対 湿度は８０％以下であり；より好ましくは、約５０％相対湿度以下である。ここ で用いられる場合には、「遮光条件」は、外部の遮られない可視日光の約４０％ ないし約７０％が、遮られ、反射され、もしくは他の方法で、乾燥される植物素 材に到達することが妨げられる環境を含むことを意味する。その代わり、植物に よって吸収されて熱に変換され、植物の温度を約７０℃より高温に上げる光を植 物素材に照射することは避けるべきである。好ましくは、乾燥工程において、植 物素材の重量が２５％減少する。より好ましい態様においては、植物素材は、約 ４０％ないし約７０％の重ｆｌｔＥｘ失が達成されるまで乾燥される。

理論によって結び付けられることを望むものではないが、本発明の条件下で植物 素材を乾燥することは、タフサンの分解を制限することによって植物素材のタフ サン含量を実質的に保持するものと信じられる。加えて、理論によって結び付け られることを望むものではないが、本発明による植物素材の乾燥方法は、メタノ ールおよび他のタフサン類を抽出し易くするものと信じられる。

乾燥温度と乾燥時間との間には相互関係があることは、当業者に認識されるであ ろう。例えば、比較的高い温度での乾燥では、比較的低い温度での乾燥よりも短 い時間で済むであろう。植物素材のタフサン含量には実質的に影響を与えないま ま、植物素材を上述の重量損失にまで乾燥する方法は、本発明の範囲内にある。

そのような方法には、凍結乾燥およびマイクロ波乾燥が含まれ得る。

植物素材が乾燥される際の圧力は重要ではないと思われるが、減少した大気圧を 用いることにより、より低い温度またはより短時間で、乾燥を促進し得ることは 理解される。したがって、従事者は、乾燥の種々の温度および大気圧の中から、 本発明の範囲を離れることなく選択することができる。

本発明の方法により作製された、実質的に乾燥した本来のままの刈取物を含む植 物素材は、タフサン類の源として用いることができる、本発明の一部でもある植 物素材を提供する。

乾燥工程に続いて、次にタフサン類の源として用いるために、刈取物が回収され る。

抽出される植物素材は、実質的に本来のままの形態で使用することができるが、 植物素材の表面積を増大させてそれによりタフサン抽出の速度を増大させること が好ましい操作である。より好ましくは、植物素材を切断し、破砕するかもしく は粉末を形成するよう細工する。最も好ましくは、手作業もしくは機械的手段の いずれかにより植物素材を粉砕する。

粉砕に適した方法には、混合器、ボールミル粉砕機、ウィリーミル（Ｗｉｌｅｙ 　Ｍｉｌｌ）またはフリッッミル（Ｆｒｉｌｒ　Ｍｉｌｌ）の使用が含まれる。

他の粉砕装置および方法も、この発明の範囲および精神から離れることなく用い ることができる。

好ましくは、植物素材は、約４０〜８０メツシユの粒子サイズに粉砕される。よ り好ましくは、植物素材は、約６０メツシユの粒子サイズに粉砕される。

タフサン類を抽出するために、抽出しようとする新鮮もしくは乾燥した上述の物 理形態の植物素材に、１種以上の初期溶媒処理を施す。この溶媒処理には、植物 素材を有機溶媒と接触させて抽出物を生成させることが包含される。この抽出物 から、タフサン類に富む、実質的に溶媒を含まない第１の残渣が得られる。有機 溶媒を用いて、植物素材を複数回抽出することにより、タフサンの抽出を高める ことができる。好ましくは、植物素材の対有機溶媒重量：容積比は、約ｌ：８な いし１・１２の範囲にある。より好ましくは、重ｉ！＝容積比は約１＝１０であ る。植物素材の、植物素材の抽出に用いられる有機溶媒の全容積に対する重ｆｉ ：容積比は、約１：１０ないし約１：Ｉ５０の範囲にある。植物素材の、有機溶 媒の全容積に対するより好ましい重量；容積比は、約１＝４０である。

好ましくは、植物素材と有機溶媒との接触は、パーコレーションまたはソックレ ー抽出により促進させる。より好ましくは、接触は振とうにより促進させる。最 も好ましくは、接触は、植物素材を、それが有機溶媒中に浸漬するように撹拌す ることにより達成される。この工程においては、タフサンを含む、実質的に全て の抽出可能な有機物質が植物素材から除去され、有機溶媒中に移される。

植物素材と接触する有機溶媒は、好ましくは、植物素材からの有機化学物質の抽 出に通常用いられるものである。好ましい有機溶媒には、エタノール、アセトン 、酢酸エチル、塩化メチレン、メタノール、メチルエチルケトン、メチルイソブ チルケトン、メチル（−ブチルエーテル、またはそれらの混合液が含まれる。好 ましくは、有機溶媒はエタノールである。

さらに、約８時間ないし約４８時間にわたって連続的に適用される、約４０ｍ１ ないし約２００ｍ　ｌの有機溶媒の約３ないし約６容積が、約１０ｇの植物素材 から全てのタフサン類の本質的に１００％を除去するに十分であることが見出さ れている。また、約８時間ないし約４８時間にわたって連続的に適用される、約 ２リツトルないし約５リツトルの有機溶媒の約３ないし約６容積が、約１０００ 　ｇの植物素材から全てのタフサン類の本質的に１００％を除去するに十分であ ることも見出されている。

別の好ましい態様において、最初に、任意に、植物素材をヘキサン、ヘキサン類 、ペンタン、石油エーテル、イソオクタン、もしくはそれらの混合液で脱脂し、 次いで、植物素材を有機溶媒に接触させる。例えば、約ｌｏｏｍ　１のへキサン ２容量を用いることが、約８時間ないし約２日にわたって、約１０ｇの粉砕乾燥 植物素材を脱脂するに十分であることが見出されている。

より好ましい態様においては、植物素材をまずヘキサンで脱脂し、次いで、有機 溶媒、エタノール、アセトンもしくは酢酸エチル、と共に２４時間（この期間に ４回溶媒を変える）振とうすることにより抽出する。

当業者は、物質の抽出において、比較的小容量の溶媒を複数回用いることが、よ り大容量の溶媒を１回用いるよりも効果的であることを認識するであろう。した がって、従事者は、抽出、分配、もしくはここに記述される他の方法での有機物 質の除去を含む工程の各々において用いられる溶媒量については、抽出の反復数 と同様に、本発明の範囲から逸脱することなく離れることができる。

有機溶媒によって植物素材から抽出された親水性部分は、その後、タフサン類か ら分離され、有機溶媒から得られた植物素材抽出物を、タフサン類が有機溶媒中 に止まり、親水性部分が水性溶媒中に除かれるような適切な組の有機および水性 溶媒の間で分配することにより除去される。有機および水性溶媒は、タフサン類 が有機溶媒中において、有機溶媒中に市まるに十分な溶解性を有している限りに おいて、互いに非混和性であり、分配の後に一方の相の純度が他方によって実施 的に汚染されない程度に互いに分離することができるものが適している。さらに 、適切な水性溶媒は、タフサン類を有意のＭ溶解すべきてはない。したがって、 この工程、および異なる２つの相の間での分配およびそれらのさらなる精製を含 むいかなる工程においても、精製するタフサン類と共に残留する先行工程からの 溶媒であって、後続工程における溶媒の作用を妨げる溶媒は除去される。例えば 、１つの工程からの溶媒であって、次の工程において、有機および水性溶媒の混 和性を増大させることによって有機および水性溶媒の分配を妨げる溶媒は、分配 しようとするタフサン類を有機および水性溶媒と接触させる前に除去される。

好ましくは、有機溶媒を用いた植物素材の抽出に続いて、溶媒留去の速度を高め るために加熱し、もしくは加熱せずに、抽出物を蒸発させて乾燥させ、第１の残 渣を形成させる。加熱する場合には、タフサン類のエピマー化を促進する温度は 避けるべきである。好ましくは、温度は約３５°Ｃないし約４０’Ｃを越えるべ きではない。

溶媒を留去した後、第１の残渣として残る物質を塩化メチレンもしくは、より好 ましくは、酢酸エチルのような有機溶媒に溶解して第２の抽出物を形成させる。

第１の残渣の有機溶媒に対する重量：容積比は、約１対約１０ないし２ｏである ことが好ましい。例えば、１ｇの残渣は約１０ないし２０ｍ　ｌの有機溶媒に溶 解する。第２の抽出物は、タフサン類をほとんど溶解しない水性溶媒成分で分配 することにより洗浄し、第２の抽出物中に残留する親水性部分を除去する。水、 類似の極性溶媒もしくはそれらの混合液が水性溶媒として適している。

好ましくは、水性溶媒は水である。一般に、第２の抽出物を洗浄するに十分な水 性溶媒の容積は、有機溶媒の容積の約１／２である。次いで、水性溶媒を第２の 抽出物から分離する。水性溶媒は捨ててしまってよい。

第２の抽出物はタフサン類を含有する。第２の抽出物を乾燥剤で任意に処理Ｉ７ て、抽出物中に見出される水を除去し、その後、乾燥剤を除去１７、溶媒を留去 して第２の残渣を形成させる。好ま１２い乾燥剤は、無水硫酸マグネシウム、４ Ａモレキユラーシーブ、塩化カルシウムもしくはそれらの混合物である。より好 ましい乾燥剤は、無水硫酸ナトリウムである。

従事者は、第２のタフサン含有残渣と乾燥剤とを組み合わせる前に、乾燥剤に小 容積の有機溶媒を添加することが有益であることを見出すてあろう。乾燥剤に有 機溶媒を添加することにより、タフサン類が乾燥剤に付着することを妨げる傾向 が生じ、それにより収率が完全される。乾燥剤は重力濾過、減圧濾過、もしくは 乾燥剤から溶媒をデカントすることにより除去する。第２の抽出物から残留水を 除去する他の方法は、第２の抽出物中の水を、有機溶媒を凍結させることなく凍 結状態にする温度に第２の抽出物を冷却することである。その後、液状の非水性 物質をデカントして水性物質から分離する。

本発明に従い、第２の残渣に最終処理を施すことにより、タフサン類のさらなる 精製を達成する。最終処理の１方法によると、固体支持体にタフサン類を可逆的 に付着させ得る溶媒に第２の残渣を溶解する。次いで、溶解した第２の残渣を含 有する溶媒に固体支持体を導入し、タフサン類を含む第２の残渣からの成分を固 体支持体に付着させる。好ましくは、セライト上に残渣が残り、残渣がタフサン を含有する被覆を形成するように溶媒を留去することによって、溶媒から固体支 持体を分離した後、固体支持体を一連の溶媒で連続的に溶出する。これにより、 タフサンに富む分画が溶出する。適切な固体支持体の例はセライトである。好ま しくは、セライトは、メタノールおよび酢酸エチルの混合液を含有する有機溶媒 中に溶解している第２の残渣の成分により、溶媒、第２の残渣およびセライトの 混合物から溶媒を留去することによって被覆されている。好ましくは、メタノー ルおよび酢酸エチルはｌ：３の容積−容積比で存在する。

被覆されたセライトは、最初に、タフサン類はほとんど溶出しないが他の極性の 低い分子を溶出するヘキサンで溶出することが好ましい。次いで、本発明の粗タ クサン混合物を、好ましくは塩化メチレンもしくは他の類似極性溶媒でセライト から溶出する。

第２の残渣中に存在するタフサン類をさらに精製するための他の最終工程は、第 ２の残渣を水性混合液と非極性非混和性有機溶媒との間で分配することを具備す る。好ましくは、まず第２の残渣を水性混合液に溶解し、次いでこの水性混合液 を非極性非混和性有機溶媒と合わせる。好ましい非極性非混和性有機溶媒は、ヘ キサン、ペンタン、石油、エーテル、ヘプタン、イソオクタン、およびそれらの 混合液のような溶媒である。好ましくは、非極性非混和性有機溶媒はへキサンで ある。非極性非混和性有機溶媒の水性混合液に対する好ましい比は、２対ｌであ る。水性混合液は、水および水と混和し得る極性有機溶媒を含む単−粗水性混合 液である。極性有機溶媒は、水性混合液中に、第２の残渣中に存在するタフサン 類を水性混合液に移行させるに十分な量存在する。好ましくは、水性混合液は、 約５０％を越える極性有機溶媒と残りの水とを含む。より好ましくは、水性混合 液は、約９部の極性有機溶媒と約１部の水とを含有する。好ましい態様において は、極性有機溶媒はアセトニトリルである。より好ましい態様においては、極性 有機溶媒はメタノールである。

粗タクサン混合物を含む本発明の水性混合液は、非極性非混和性有機溶媒から分 離する。この水性混合液を蒸発させて極性有機成分を除去し、粗タクサン混合物 を有機溶媒と合わせてタフサン類をさらに精製することができる。水性混合液は その組成において主としてアセトニトルもしくはメタノールであるので、直接蒸 発させて粗タクサン混合物を含有する第３の残渣を形成させることが好ましい。

水性混合液の温度が４０℃を越えない条件の下で、蒸発を促すために熱、減圧お よびそれらの組み合わせを用いることができる。水性混合液を直接蒸発させるこ とにより、不必要な抽出工程においてタフサン類が損失する可能性が回避される 。

粗タクサン混合物を得るための、前述した本発明のどの初期溶媒処理工程または 最終処理工程も、１回以上繰り返すことができる。例えば、前述したどの工程も 、少なくとも１．２．３もしくは４回繰り返すことができる。

結晶化または粉砕のような通常用いられる精製プロトコルによって、本発明の粗 タクサン混合物から特定のタフサン類を精製することができる。粗タクサン混合 物中に存在し、本発明の方法によってさらに精製し得る好ましいタフサンには、 メタノール、セファロマニン、デスアセチルセファロマニペバソ力チンＩＩＩ、 １０−デスアセチルバラ力チン■および１ｏ−デスアセチルメタノールが含まれ る。結晶化は、実質的に飽和した粗タクサン混合物の溶液がらの結晶形成を可能 にすることにより行なうことができる。その代わり、実質的に飽和した粗タクサ ンの溶液に、所望のタフサン生成物の種晶を添加することにより、結晶を成長さ せることもできる。本発明は溶媒混合液の使用を想定してはいるが、理想的には 、結晶化溶媒として単一の溶媒が用いられる。結晶化溶媒（単一もしくは複数） の温度は、実質的に純粋なタフサン類が得られる限りは重要なものではない。

本発明によると、一連の正常相クロマトグラフィーカラムを用いることによって も、特定のタフサン類を粗タクサン混合物から生成することができる。特定のタ フサン類は、溶出力（ｅｌｕｌｒｏｐｈｉｃ　ｐｏｗｅｒ）が徐々に増加する溶 媒混合液をカラムに通すことにより溶出させる。一般に、正常相カラムクロマト グラフィーにおいて、移動相は２成分系を有する。第１の成分は、化合物の溶出 速度を制御する非極性有機溶媒である。第２の成分は、分離しようとする化合物 を溶出させる極性有機溶媒である。移動相において第２成分の量を増加させるこ とにより、一般に、溶出する化合物のカラムバッキングとの接触時間が減少する 。したがって、高濃度の第２成分は、溶出時間を減少させる効果を有する。

本発明では全てを等しく溶出することも想定してはいるが、増加する溶出力の勾 配に従う移動相を用いることにより、タフサン類の分離を改良することができる 。１以上のクロマトグラフィーカラムの好ましい正常相カラムクロマトグラフィ ーバッキング材は、シリカゲル、フロリジル、アルミナおよびセライトからなる 群より選択することができる。特に好ましい正常相カラムクロマトグラフィーバ ッキング材は、Ｅ、　Ｍｅ＋ｃｋによって製造され、Ｂ目ｎｋｍｘｎ　ｌｎｓｔ ｒｕｍｃｎｌ　Ｃｏ、。

ＷｅｓｔｂｕＢ、　Ｎ、Ｙ、より入手可能なシリカゲル６０　（２３０−４００ メツシユ）である。

クロマトグラフィーカラムにかけるための粗タクサン混合物（第３の残渣）を調 製するために、タフサン類を溶解する有機溶媒で、第３の残渣を繰り返しくｌ− ５回）すり潰す（蒸解する）。このような有機溶媒は、エーテル、塩化メチレン 、メタノール、クロロホルム、酢酸エチルおよびアセトンからなる群より選択す ることができる。好ましい有機溶媒は、塩化メチレンである。有機溶媒中に溶解 した第３の残渣は、珪藻土もしくはセライトのような固体支持体に結合させ、次 いて蒸発させて乾燥し、それによりタフサン類を固体支持体に付着させる。

次いで、タフサン保持固体支持体を、充填された正常相クロマトグラフィーカラ ムの頂部に直接のせる。

充填された正常相クロマトグラフィーカラムの頂部に固体支持体を直装置いた後 、タフサン類を互いに分離し、かつ他の植物成分から分離することができる移動 相をクロマトグラフィーカラムに通す。移動相は、（１）ヘキサン、石油エーテ ル、イソオクタン、および類似の極性を有する溶媒からなる群より選択される非 極性成分、および（２）アセトン、酢酸エチル、エーテル、メチル　！−ブチル エーテル、クロロポルム、および類似の極性を有する溶媒からなる群より選択さ れる極性成分を含有する。好ましくは、移動相は、ヘキサンおよびアセトンを含 有する。

好ましい態様においては、移動相は、最初に約６０％ないし８５％のへ千サンと 約１５％ないし４０％のアセトンを含み、増加する溶出力の勾配に従う。移動相 は、タフサン類の効果的な分離が達成される限りにおいて、いがなる最終組成を とることもできる。しかしながら、最も好ましくは、移動相は、初期組成かへキ サン約７５％およびアセトン約２５％であり、最終組成かへキサン約０％および アセトン約１００％である。ヘキサン／アセトン混合液の場合には、溶出速度を 制御するのはヘキサンであり、タフサン類を溶出させるのはアセトンである。所 望のタフサン類は、約６０％のヘキサンおよび約４０％のアセトンを含む分画、 および約０％のへキサンおよび約１００％のアセトンを含む分画から溶出される 。代わりに、上述のヘキサン／アセトン混合液の極性と類似する極性を有する他 の一連の溶媒混合液も、第１の正常相りロマトグラフィー力うムカらタフサン分 子を溶出させるのに適している。

好ましくは、正常相クロマトグラフィーカラムには加圧下で流される。　１６０ ｇのシリカゲル６ｏを具備する５Ｘ１６ｃｍカラムでは、流速は、好ましくは約 １００ｍ１１５分である。

カラムから集めた分画におけるタフサン類の存在は、シリカゲルＧ　ＵＶ　（Ｍ ａｃｈｅｒ７　Ｎａｇｅｌ、　Ｄｕｕｎ）を用い、５％メタノール／クロロホル ムを展開剤として、かつ硫酸を視覚化剤（ｖｉｓｕａｌｉｘｉｎｇ　ｒｅｌｇｓ ｎｔ　）として利用する薄層クロマトグラフィー（Ｔ　Ｌ　Ｃ）によって検出す ることができる。メタノールおよびセファロマニンは、６０：４０および５５　 ：　４５のヘキサン／アセトン比で溶出した分画中に、Ｒ１値が０．６２の青み 掛った灰色のスポットとして現される。バッカチン■は、５０　：　５０および ４５　：　５５のヘキサン／アセトンで溶出した分画中に、Ｒ１値が０．５５の 青いスポットとして現われる。タクサンｌＯ−デスアセチルバッ力チン■は、０ ：１００のヘキサン／アセトンで溶出した分画中に、Ｒ，値が０．２８の紫がか ったスポットとして現われる。

タフサンに富む分画からのヘキサン／アセトン溶媒は蒸発させ、乾燥させてタフ サンに富む生成物を形成させる。

タフサン類、メタノールおよびセファロマニン、のさらなる精製は、メタノール およびセファロマニンを含有するタフサンに富む精製物を、およそ１％のメタノ ールおよび９９％の塩化メチレンと一緒に充填されたシリカゲル６０もしくは類 似物質を具備する他の正常相クロマトグラフィーカラムにかけることにより達成 することができる。移動相がおよそメタノール２．５％、塩化メチレン９７．５ ％の組成を有するまで約０．５％のメタノールを増量することでメタノールの濃 度を増加させることにより、移動相の溶出力を増加させる。移動相は、２ｃｍＸ ４０ｃｍカラムを、好ましくは約８ｍ１／分の流速で通過する。タフサン類タク ソールおよびセファロマニンは、およそメタノール２．５％および塩化メチレン ９７，５％で溶出した分画から集める。代わりに、メタノール／塩化メチレン溶 媒混合液に類似する極性を有する一連の溶媒混合液も、第２の正常相クロマトグ ラフィーカラムからタフサン類を溶出するのに適している。メタノール／塩化メ チレンカラムからのメタノール−セフ７０マニンに富む分画は蒸発させ、乾燥さ せて他のタフサンに富む生成物を形成する。

驚いたことに、本発明の方法に従い、正常相クロマトグラフィーカラムにのせる のに適した溶媒中に２種以上のタフサン類を含有する混合物を供給することによ り、セファロマニンからメタノールを分離することができる。このタフサン含有 混合物は、次いで、移動相として適した溶媒中の固体支持体を充填した正常相ク ロマトグラフィーカラムにのせる。その後、メタノールおよびセファロマニンを 含むタフサン類を、メタノールおよびセファロマニンを別々に溶出させるに十分 な極性を有する移動相を用いて、別々に溶出する。好ましくは、移動相として、 酢酸エチルと塩化メチレンとの混合液が用いられる。本発明の好まし・い態様に よると、第２のタフサンに富む生成物は、およそ酢酸エチル２０％および塩化メ チレン８０％の混合液に溶解し、およそ酢酸エチル２０％および塩化メチレン８ ０％を含有する移動相の存在下において、シリカゲル６０もしくは上記と同様の 固体支持体を充填した正常相クロマトグラフィーカラムにのせる。移動相がおよ そ酢酸エチル５０％、塩化メチレン５０％の組成を有するまで、約５％の酢酸エ チルを増量することで酢酸エチルの濃度を増加させることにより、移動相の溶出 力を増加させる。　ｌＸ３２ｃｍカラムでは、約８ｍ　ｌ　／分の流速が好まし い。純粋なメタノールは、実質的には、およそ酢酸エチル４５％、塩化メチレン ５５％で溶出した分画から集められる。純粋なセファロマニンは、実質的には、 およそ酢酸エチル５０％および塩化メチレン５０％を含有する移動相て溶出した 分画から集められる。代わりに、上述の酢酸エチル／塩化メチレン混合液と類似 の極性を有する他の一連の溶媒も、正常相クロマトグラフィーカラムからタフサ ン分子、メタノールおよびセファロマニン、を溶出するのに適している。

初期正常相クロマトグラフイ一工程の結果として得られた粗タクサン混合物中に 存在するタフサン類の分離の程度によるが、驚いたことには、移動相として酢酸 エチルおよび塩化メチレンを用いてさらにタフサン類をクロマトグラフィーにか けることにより、メタノール−塩化メチレンを用いる中間クロマトグラフィーに 対する要求を回避しつつ、セファロマニンからメタノールを分離することを含ん で、タフサン類を分離かつ精製することができる。

前述のいかなるクロマトグラフィ一工程も、１回以上、例えはｌ、２．３もしく は４回繰り返し、特定の工程でタフサン類をさらに精製もしくは分離することが できる。

カラムクロマトグラフィーは好ましい方法ではあるが、本発明の方法においては 、クロマトトロン（ｃｈｒｏｍａｌｏｌ＋ｏｎ）　（７）際に行なわれる放射状 正常用クロマトグラフィー（ｒａｄｉａｌｎｏｒｍａｌ　ｐｈａＳｅ　ｃｈ［ｏ ｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）のような他のクロマトグラフィーの構成も有用である。

また、他の適切な検出手段も、発明の範囲から離れることなく、タフサン類の同 定に用いる装飾用イチビの種々の栽培変種の刈取物がらの新鮮な葉を、それらの メタノール含量について、以下に概要を示す手順にａ、刈取物から採取したはを よく混合して秤量した。

ｂ、栽培装飾用イチビの各変種の試料１０ｇを、混合機中で、９５％エタノール １００ｍ　ｌと混合し、この混合物を２５０ｍ　ｌエーレンマイヤーフラスコに 定量的に移した。これらの葉およびエタノールを、パーコレーションにより２４ 時間抽出し、次いで、濯ぎながら（ＩＸ２５ｍｌ）濾過した。パーコレーション 処理はさらに３回繰り返した。

Ｃ３濾液を合イっせ（５００ｍ　ｌ）　、減圧下、４０　’Ｃを越えない温度で 蒸発させて乾燥した。エタノール抽出物、すなわち第１の残渣の重量を記録した 。

ＨＰＬＣ分析のためのエタノール抽出物の調製ａ、抽出物約ｌｏｏｍ　ｇを秤量 してスクリューキャップバイアルに入れた。キャップは、分配の間抽出物が被覆 ライニングと接触することを避けるために、アルミニウムボイルの断片で裏打ち した。

ｂ、水（１ｍｌ）および、塩化メチレン（２ｍｌＸ５）もしくは塩化メチレンが 無色になるまで、で抽出物を分配した。

合わせた塩化メチレン洗浄物をピペッティングにより２５ｍ　ｌエーレンマイヤ ーフラスコに加え、蒸発させて乾燥し、第２の残渣を生成させた。第２の残渣の 重量を記録した。

Ｃ７第２の残渣を、超音波処理により、酢酸エチル（５ｍｌ）およびメタノール （２ｍｌ）に溶解した。セライト（２００ｍｇないし６５０　ｇ　）を導入し、 抽出物質を被覆させた。減圧下で溶媒を留去して乾燥させ、第２の残渣で被覆さ れたセライト材を作製した。

ｄ、残渣被覆セライトをペトリ皿に定量的に移した。この皿を、溶媒の最後の痕 跡が除かれるまで（１０分間）、フードの下に放置した。最終生成物を自由流動 するまですり潰し、均一な粉末を１ヒた。得られた粉末を、カラムとして機能す るパスツールピペットに充填した。

ｅ、カラムをヘキサン（７ｍｌ、または溶出液が無色になるまで）、次いて塩化 メチレン（５−６ｍｌ）で溶出した。

ｆ、塩化メチレン溶出液を減圧下で蒸発させ、残留する残渣の重量を記録した。

ｇ、残留した残渣を、超音波処理により、メタノール（ＨＰＬＣ級）１ｍｌに溶 解した。この溶液を１ｍｌシリンジに引き入れ、マイレックス（Ｍｉｌｌｒｘ） 　ｄ過ユニット（０，４５μ）を通して濾過し、ライ−トンバイアル（Ｗｈｅａ ｌｏｎ　ｖｉａｌ）に入れて蓋をした。

カラム二μボンダバク（μＢｏｎｄａｐａｋ　）　Ｃ−１８（ｌｏμ、Ｗａｔｅ ｒｓ　Ａｓ５ｏｃｉａｔｅｓ　）移動相：メタノール／水（６５：　３５）維浬 ：１．２ｍｌ／分 鵠：Ｕ、　Ｖ、（２２７ｎｍ） これらの分析の結果を表１に示す。

表１　特定のｉｉｉ属栽培ｗ１やの新鮮な葉におけるタフソール含量ＬＸ　ｍｇ Ｊｊ４　’Ｈｉｃｋｓｉｉ”　１９．７１　＋　１．０１　０．００９３＋０． ００１３Ｃ，Ｖ、　＝１４％ ’　ｎ＝３　、Ｔ、　Ｘ　ｍｅｄｉａ　’１ｌｉｃｋｓｉｉ’　、’Ｆａｉ＋ｖ ｉｅｗ’を除くＣ，Ｖ、＝変動係数 ’Ｗｕｄｉｉ’および’　Ｓｐ＋ｅ＝ｄｕ’、ｎ＝４り ”１回の測定に基つく１個の値 例　２：葉を乾燥する前に幹から葉を採取することの、タフ特定の栽培変種の多 量の収集物（３−６ポンド）からの代表的な試料である、刈取物からの新鮮な葉 （１００ｇ）を、例１において記述した方法を用いて、それらのタフソール含量 について分析した。表２には、乾燥した葉から抽出されるタフソールと比較した 新鮮な葉から抽出されるタフソールのパーセンテージを示す。新鮮な葉素材につ いて決定された％タフソール含量および植物素材の％含水量に基づいて、乾燥植 物素材に期待される％タフソール含量を算出した。

％タフソール（算出）−％タフソール新鮮／［１−（％含水量／　＋００）コ。

％含水量は、乾燥前後の植物素材の重量の差から決定した。

次いで、実測乾燥％タフソール含量の、算出乾燥％タフソール含量に対する比を 算出したＣＦ／Ｃ）。この計算によると、１．００未満の数値は乾燥工程に置け るタフソールの損失を示しく例えば、０．９０は１０％の損失を示す）、１．０ ０より大きい数値は、感想方法が、新鮮な刈取物の抽出により見出されるよりも 多量のタフソールを生じせしめることを示す（例えば、１．２０は２０％の増大 を示す）。

２（ａ）同し栽培変種の新鮮な刈取物を、葉と小輪とに分離した。各栽培変種の 葉の一部（１０ｇ　）を例１の記述と同様に抽出し、分析した。結果を表２（ａ ）に示す。各栽培変種の葉の他の部分は、それ以上重量損失が観測されなくなる まで室温で乾燥させた。乾燥葉の試料をウィリーミルで粉砕し、１０ｇ部分を例 １の記述と同様に抽出し、分析した。その結果を表２（ａ）に示す。

２（ｂ）代わりに、Ｔ、　Ｘ　ｍｅｄｉａ　’Ｄａｒｋ　Ｇｒｅｅｎ　５ｐｒｔ ａｄ＊ｒ’　の刈取物を、それ以上重量損失が観測されな（なるまで、そのまま （すなわち、それらの幹から葉を分離することなく）室温で乾燥させた。次いで 、それらの幹から乾燥した葉を採取し、ウィリーミルで粉砕し、その１０ｇ部分 を例１の記述と同様に抽出して分析した。その結果を表２（ｂ）に示す。

表２（ｂ）のデータは、植物素材の大きな試料を１０回繰り返して分析すること により得られた。２（ａ）の方法により得られたタフソール含量における平均３ ３％の保持と比較される２（ｂ）の方法により得られたタフソール含量における １３１％の保持は再現性がある。驚いたことに、刈取物を本来のままに保つ方法 による乾燥は、幹から採取した後に乾燥された葉のエタノール抽出と比較して、 タフソールの回収を増大させる。刈取物を本来のまま乾燥することにより、葉を 採取した後の乾燥と比較して、タフソールの保持にほぼ４倍の増加が生じる。

例　４　：　（ａｌ　バーン乾燥した（ｂｕｎ−ｄ「１ｅｄ）非除葉（ｎｏｎ− ｓｔ＋１ｐｐｅｄ）刈取物の葉のタフソール含量の決定Ｔ、　Ｘ　ｍｅｄｉａ　 ’ＤＣｎｓｉｌｏｒｍｉｓ’　（表４　（Ａ））および丁、Ｘｍｅｄｉｘ　’Ｄ ａｒｋ　Ｇｒｕｎ　５ｐｒｅａｄｅｒ’　（表４　（Ｂ））の新鮮な本来のまま の刈取物（幹十葉）を、木製フレームに取り付けられたアルミニウムワイヤーク ロス（ａｌｕｍｉｎｕｍ　ｗｉ「ｅ　ｃｌｏｔｈ　）（１８Ｘ１６インチ、（１ ，０１０ゲージ・ウィンドウ・スクリーン）上に置いた。このフレームは、乾燥 バーン内の床上３０′の支持体上に置かれた。植物素材を、さらに加熱すること なく、暗所で乾燥させた。ファンで空気を流動させた。使用した乾燥装置は、［ ロアノーク（Ｒｏａｎｏｋり　ｊ形式モデル７、５−１Ｇバルク・キユアリング ・バーン（Ｂｕｌｋ　Ｃｕｒｉｎｇ　Ｂａｒｎ）（Ｇ＋ｃｇｏＢ　Ｍａｎｕｆａ ｃｔｕｒｉｎｇ　Ｃｏｍｐａｎ７．　Ｉｎｃ、、Ｌｅｗｉｓｌｏｖｎ。

Ｗｏｏｄｖｉｌｌｅ、　ＮＣ２７８４９）である。温度は、午前８時における３ ０°Ｃから午後３時３０分における４０°Ｃまでの範囲であった。乾燥は２日間 続けた。乾燥前の葉の含水量は、乾燥前後の葉の重量の差に基づいて、６４．５ ％（Ｔ、Ｘ　ｍ５ｄｉｘ　’Ｄｅｎｓｉｌｏ＋ｍｉｓ’　）および６６％（Ｔ、 　Ｘ　ｍ５ｄｉａ　’Ｄａｒｋ　Ｇｒｅｅｎ　５ｐｒｅａｄｅ＋’　）であると 決定された。分析の直前に乾燥した葉（１０ｇ）をそれらの幹から採取・回収し 、ウィリーミルを用いて粉砕し、エタノール、アセトンまたは酢酸エチルを用い るパーコレーションによって抽出した。分析は、例１の記述と同様に行なった。

乾燥した葉のタフソール含量を、採取した直後に抽出溶媒と混合することにより 処理した同種の新鮮な葉と比較した。

結果を表４に示す。算出乾燥％タフソール含ｉを、例２に記述した方法に従って 決定した。次いで、実測乾燥％タフソール含量の、算出乾燥％タフソール含量に 対する比（Ｆ／Ｃ）を、例２に記述した方法に従って算出した。

Ｇｒｅｅｎ　Ｓｐ「ｅａｄｅｒ″の新鮮な本来のままの刈取物（幹十葉）を、木 製フレームに取り付けられたアルミニウムワイヤークロス（１８ＸＩ６インチ、 ０．０１０ゲージψウインドウ・スクリーン）上に置いた。このフレームは、床 上３０″の支持体上に置かれた。この植物素材を、（遮光部材を用いて）約５５ ％遮光し、２つのアービンエアクーラー（Ａ丁ｖｉｎ　ａ目ｃｏｏｌｅｒ）をフ ァンのみて冷却パッドに水を加えることなく用いて換気したポリエチレン被覆グ リーンハウス（長さ６０′、幅２０′および高さ９′）内において乾燥させた。

温度は、午前８時における１５５℃から午後３時３０分における４４℃までの範 囲にわたった。

６日間乾燥を続けた。乾燥前の葉の含水量は、乾燥前後の葉の重量の差から、５ ２％（Ｔ、Ｘ　ｍｅｄｉａ　’Ｄｓｎｓｉｌｏ＋ｍｉｓ’　）および６６％（Ｔ 、Ｘ　ｍｅｄｉａ　’Ｄａｒｋ　Ｇｒｅｅｎ　５ｐｒｅａｄｅｒ’　）であると 決定された。乾燥した葉を回収して例４（ａ）と同様に処理し、例１の記述と同 様に分析した。結果を同種の新鮮な葉と比較し、表４に示した。

Ｇｒｅｅｎ　Ｓｐ＋ｅａｄｓｒ’　の新鮮な本来のままの刈取物（幹十葉）を、 木製フレームに取り付けられたアルミニウムワイヤークロス（１８Ｘ１６インチ 、［１，（１１０ゲージφウインドウ・スクリーン）上に置いた。このフレーム は、戸外の遮光構造の下で、地面上３０″の支持体上に置かれた。植物素材は、 地面上約７フイートの２′×６″の枠上に遮光部材を設けることにより構成され た構造体の下で乾燥させた。この遮光部材は、周囲の日光を約８０％減少させた 。ファンは使用しなかった。温度は、午前８時における平均２２℃から午後３時 における平均３６℃の範囲にわたった。１０日間乾燥を続けた。乾燥前の葉の含 水量Ｇ「ｅｅｎ　５ｐＩｅａｄｅｒ’　）であると決定された。乾燥した葉を回 収して例４（ａ）と同様に処理し、例１の記述と同様に分析した。

結果を同種の新鮮な葉と比較し、表４に示す。

（（１）屋内において室温で乾燥した非除葉刈取物の葉のタフソール含量の決定 丁、Ｘ　ｎｕｄｉ２’Ｄｅｎｓｉｆｏｒｍｉｓ’　およびＴ、　Ｘ　ｍｔｄｉａ 　’ＤａｒｋＧｒｅｅｎ　Ｓｐ＋ｅ２ｄｅ＋’　の新鮮な本来のままの刈取物（ 幹十葉）を、木製フレームに取り付けられたアルミニウムワイヤークロス（＋８ ＸＩ６インチ、　０．０１０ゲージ・ウィンドウ・スクリーン）上に置き、例２ （ｂ）に記述した手順に従って乾燥させた。乾燥前の葉の含水量は、乾燥前後の 葉の重量の差に基づいて、６３．３％（Ｔ、Ｘ　ｍｅｄｉａ　’ＤＣｎｓｉｆｏ ｒｍｉｓ’　）および６５％（丁、Ｘｍｒｄｉｚ　’Ｄａｒｋ　Ｇｒｕｎ　５ｐ ｕａｄｕ’　）であると決定された。この葉を回収して例４（３）に記述した手 順に従って処理し、例１に記述した手順に従って分析した。結果を同種の新鮮な 葉と比較し、表４に示した。

例　５：抽出の溶媒 Ｔ、　Ｘ　ｍｅｄｉａ　’Ｈｉｃｋｓｉｉ’から切り取った新鮮な小枝を葉と小 さい軸とに剥がし、次いで例２（ａ）に記載した条件下に室温で乾燥させた。分 析のために、乾燥された葉の一部（１０ｇ）を粉砕し、次いで例１の方法で用い た幾つかの有機溶媒の一つで浸出することにより抽出した。新鮮な葉の水分含有 率は６３％であった。分析は、例１に記載したようにして行なった。

結果を表５に示す。

例　６：抽出の方法 三つの抽出方法について、夫々を２回繰り返して比較した。

Ｔ、　Ｘ　ｍ５ｄｉａ　’Ｂｉｃｋｓｉｉ’の葉をその新鮮な小枝から剥がし、 例２（ａ）に記載した条件下に室温で乾燥させた。乾燥した葉（］Ｏｇ）を粉砕 し、アセトンを用いて、浸出、ソックスレー条件、または振蓋（撹拌を伴う浸潤 ）により抽出した。浸出による抽出は、例１に記載した方法に従って行なった。

ソックスレー条件下での抽出は、溶媒１部（１００ｍｌ）を用いて１２時間行な い、続いて４時間おきに新鮮な溶媒と交換した；２４時間の抽出操作に亘って、 夫々ＩＯｇの植物材料サンプルについて合計４００　ｍｌの溶媒が用いられた。

振擾（撹拌を伴う浸潤）による抽出は、ソックスレー条件で述べたと同じ溶媒交 換スケジュールを用いて行なった。次いで、例１に記載したようにして抽出物を 処理し、分析した。浸出法による抽出から得られた抽出物は合体され、分析され た。他の二つの抽出法により得られた抽出物は、抽出の夫々の工程において分析 された。その結果を表６に示す。

例　７：第一残渣の、水および塩化メチレン間での分配Ｔ、　Ｘ　ｍｅｄｉａ　 ’Ｎｉｇｒａ’から切除した新鮮な小枝を、例４　（ａ）に記載した方法に従っ て、バルクタバコの養生納屋で乾燥した。この小枝の一部をウィリー−ミル（Ｗ ｉｌｅ丁Ｍｉｌｌ）を用いて粉砕し、次いでエタノール、アセトン及び酢酸エチ ルから選ばれる溶媒を用い、且つ例１に記載した方法を用いた浸出によって抽出 した。前記小枝の他の一部を葉と軸とに分離し、この二つの部分を別々にウィリ ー・ミルを用いて粉砕した。

粉砕した夫々の部分を、エタノール、アセトン及び酢酸エチルから選ばれる溶媒 を用い、且つ例１に記載した方法を用いた浸出により抽出した。

既知重量のエタノール抽出残渣を、水（１ｍｌ）と塩化メチレン（２ｍｌｘ５） との間で分配させた。次いで、例１に記載した方法に従って、塩化メチレン相を 調製し、ＨＰＬＣによって分析した。その結果を表７ａに示す。

既知重量のアセトン抽出残渣を、水（１ｍｌ）と酢酸エチル（２ｍｌｘ５）との 間で分配させた。例１に記載した方法に従って、塩化メチレン相を調製し、ＨＰ ＬＣによって分析した。

その結果を表７ｂに示す。

既知重量の酢酸エチル抽出の第一残渣を、水（１ｍｌ）と塩化メチレン（２ｍｌ Ｘ５）との間で分配させた。例１に記載した方法に従って、塩化メチレン相を調 製し、ＨＰＬＣによって分析した。その結果を表７０に示す。

（ｂ）アセトン抽出第一残渣の水および酢酸エチル間での既知重量のアセトン抽 出残渣を、水（１ｍｌ）と酢酸エチル（２ｍｌＸ６）との間で分配させた。酢酸 エチル相を蒸発させ、次いで、この第二残渣をヘキサン２部とメタノール：水（ ９＋１．）１部との間で分配させた。メタノール：水の相を真空中で乾固した。

この残渣を音波処理しながら１ｍｌのメタノール（ＨＰＬＣ等級）中に溶解し、 １ｍｌのシリンジ中に抜き取り、マイレックス濾過ユニット（０，４５ミクロン ）を通してライ−トン瓶中に濾過し、蓋をした。次いで、例１に記載したように してＨＰＬＣ分析を行なった。その結果を表８ｂ既知重量の酢酸エチル抽出残渣 を、水（１ｍｌ）と酢酸エチル（２ｍｌＸ６）との間で分配させた。酢酸エチル 相を蒸発させ、次いて、この第二残渣をヘキサン２部とメタノール：水（９：１ ）１部との間で分配させた。メタノール：水の相を真空中で乾固した。この残渣 を音波処理しながら１ｍｌのメタノール（ＨＰＬＣ等級）中に溶解し、１ｍｌの シリンジ中に抜き取り、マイレックス濾過ユニット（０，４５ミクロン）を通し てライ−トン瓶中に濾過し、蓋をした。次いで、例１に記載したようにしてＨＰ 　Ｌ　Ｃ分析を行なった。その結果を表８Ｃに示す。

表７および表８を比較すれば、分配による精製によって、セライトを用いたより 費用のががる精製方法に匹敵する収率を得られることがわがる。

例　９：塩化メチレンの代わりに酢酸エチルを用いたセライに分離し、もはや重 量ロスが観察されなくなるまで室温で乾燥させた。次いで、この乾燥されたの葉 をウィリー・ミルで粉砕し、アセトンでの浸出によって抽出した。ｌｏｇの葉を 用いて繰り返し分析を行なった。塩化メチレンを酢酸エチルに置き換えた点を除 き、アセトン抽出物は例７（ｂ）に記載したようにして処理され、分析された。

その結果を表９に示す。

例　１０・　（ａ）アセトン浸出による抽出の前の、植物材料方法を用いて乾燥 し、粉砕した。乾燥し粉砕した葉（１０ｇ）を、溶媒を２４時間毎に交換しなか ら（２Ｘ１００　ｍｌ）　、２日間浸出することによりヘキサンで脱脂した。こ のヘキサン抽出液を合体し、乾固した（残渣平均は２００ｍｇで、これはへキサ ンおよびアセトン抽出物の合計の２１％である）。抽出かす（残存した残渣）を 定量的に２５０ｍ１のエルレンマイヤーフラスコに移し、溶媒を２４時間毎に交 換しながら（４Ｘ　１００　ｍｌ）４日間浸出することにより、アセトンで抽出 した。アセトン抽出液を合体させて乾固した。重量が分っているこのアセトン残 渣を、水（１ｍｌ）と塩化メチレン（２ｍｌＸ５）の間で分配させた。塩化メチ レン相を真空中で乾固し、残渣をメタノール（１ｍｌ）中で再構築した。このメ タノール溶液をマイレックス（Ｍｉｌｌｅｘ）濾過ユニットを用いて濾過し、メ タノールで１．１に稀釈し、例１に記載した方法に従ってＨＰＬＣ分析に用いた 。その結果を表１０に示す。

上記（ａ）のようにして乾燥し粉砕した葉（１０ｇ）を、溶媒を４時間毎に交換 しながら（１００Ｇ＋１Ｘ　２）　８時間、撹拌しつつ浸潤させることによりヘ キサンで脱脂した。ヘキサン抽出物の平均は１９４１１１ｇ、即ちヘキサンおよ びアセトン抽出物の合計の１２％であった。抽出かすを定量的に２５０ｍ１のエ ルレンマイヤーフラスコに移し、溶媒を１２時間、１６時間、２０時間および２ ４時間後の時点で交換しながら、２４時間に亘って撹拌しつつ浸潤させることに よりアセトン（４Ｘ　１００　ｍｌ）で抽出した。夫々の時点での抽出液を合体 させて真空中で乾固し、得られた残渣の既知部分を水（１ｍｌ）と塩化メチレン （２ｍｌｘ５）との間で分配させた。塩化メチレン相を乾固し、残渣をメタノー ル中で際構築咲いた。このメタノール溶液ををマイレックス（Ｍｉｌｌｅｘ）濾 過ユニットを用いて濾過し、メタノールで１：１に稀釈し、ＨＰＬＣ分析に用い た。その結果を表上記（ａ）のようにして乾燥し粉砕した葉（１０ｇ　）を、溶 媒を４時間毎に交換しながら（１００ｍ１ｘ２）　Ｂ時間、ソックスレー抽出に よりヘキサンで脱脂した。ヘキサン抽出物の平均は２９７ｍｇ、即ちヘキサンお よびアセトン抽出物の合計の２６％であった。ソックスレー抽出かすを、更に、 例６に記載した方法に従ってアセトン（４Ｘ　１００　ｍｌ）で更に抽出した。

例１０（ｂ）に記載したようにして抽出、分配及び分析を行なった。結果は表１ ０に示した通りである。

特表千６−５０９５６０　（２４） 例　１１：脱脂され得た植物材料のアセトン抽出物の、水と酢酸エチルとの間で の分配 Ｔ、　Ｘ　Ｍｓｄｉａ　’Ｈｉｃｋｘｉｉ’の葉のサンプルを、例９で記載した 方法を用いて乾燥し、粉砕した。乾燥し粉砕した葉（１０ｇ　）をヘキサンで脱 脂し、例１０（ａ）に記載した方法を用いて、アセトン浸出により抽出した。重 量が分っているこのアセトン残渣を、水（１ｍｌ）と酢酸エチル（２ｍｌＸ５） の間で分配させた。酢酸エチル相を真空中で乾固し、残渣をメタノール（１ｍｌ ）中で再構築した。このメタノール溶液を濾過し、稀釈し、例１０（ａ）に記載 したようにして分析した。その結果を表１１に示す。

この塩化メチレン層からの残渣は、次いで約５ｍｌの酢酸エチル及び約２ｍｌの メタノール中に溶解されされた。残渣の溶解を助けるために、フラスコを音波処 理した。残渣が完全に溶解したら、約６５０　ｍｇのセライトを添加した。減圧 下で溶媒を蒸発させることによって残渣はセライトに付着され、被覆セライトが 生成された。

この被覆セライトはペトリ皿に移され、自由流動性の粉末が得られるまで摩砕さ れた。次いで、この摩砕粉末をパスツールピペットに詰めた。

このカラムを、溶出物が無色になるまでヘキサン（７ｍｌ）を流して洗浄した。

次いで、タフサン類を溶出させるために塩化メチレンが用いられた。塩化メチレ ンを真空中で蒸発させ、粗製タフサン混合物を製造した。この混合物の重量は、 ３９、　Ｉｍｇ±７．４３　（Ｃ，Ｖ、　＝　１９％）　テあツタ。

この粗製タフサン類を、１ｍｌのＨＰＬＣ級のメタノール中に溶解した。粗製タ フサン類の溶解を補助するために、音波処理が用いられた。この溶液はマイレッ クス濾過ユニット（Ｍｉｌｌｕ　ｆｉｌｌｅｔｉｎｇ　ｕｎｉｔ；　０．４５　 ｕ）を通して濾過され、フラスコ内に回収された。

１０ｇのサンプルのＨＰＬＣ分析によって、上記溶液中に存在する特定のタフサ ン類が同定され、その量が測定された。

このＨＰＬＣ分析のために、ウォーターズ・アソシエーツ社（ｗａｔｅ［ｓ　Ａ ＋５ｏｃｉａｌｓｓ）から得たμボンダバックＣ−１８カラム（ｐ　Ｂｏｎｄ２ ｐａｃ　Ｃ−１８；　ＩＯμ）が用いられた。

移動相として、流速１．２ｍｌ／分のメタノール（６５％）および水（３５％） の混合物が用いられた。タフサン類は、２２７　ｎｍの波長に設定したＵ、　Ｖ 、検出器で検出された。

保持時間および溶液のパーセント組成は下記の表１２に示した通りである。

タフサン類のＲ１値およびパーセント組成）タフサン組成　Ｒ１値（分）　％ ・メタノール　１１．５　０．２９ト セファロマニン　１０．５　− −バッカチンＩ［Ｉ　４，７　− ・ＩＯ−デスアセチル　−− メタノール ・ｌＯ−デスアセチル　−− セファロマニン ・ｌＯ−デスアセチル　４．２− バソカチン■ 軸が付いたまま、ノースカロライナ州ウッドウィルのグレゴリ−・マニュファク チャリング・カンパニー社から入手した［ローノーク（Ｒｏａｎｏｘｋ）　Ｊ型 乾燥納屋（モデル７、５−１−Ｇバルクキユアリング納屋）の内部で、木枠に取 り付けられたアルミニウム製のワイヤクロス（１８インチＸ１６インチ）上に載 置した。枠は、床面から約３０インチ上に設けた支持体上に載置された。植物材 料は、暗い換気された納屋内で乾燥された。

乾燥工程の間に、温度は午前８時の約り０℃〜午後３時３０分の約４０℃の間で 変化した。乾燥は２日間続けられた。この切除された葉は、例１２で述べた方法 に従ってタフサン含量を分析された。次のタフサン類が検出された。タクソール ；セファロマニン；バソカチンｍ　；　１０−デスアセチルタクソール；ｌＯ− デスアセチルセファロマニン；ｌＯ−デスアセチルバラ力チン■。該組成物中に 存在するメタノールのバーセンテジはとに分離し、例２（ａ）で説明した方法に 従って室温で乾燥させた。乾燥した葉（５００ｇ、例１に記載した方法により測 定されたメタノール含有量０．００７４％）をウィリー・ミルの中で約６０のメ ツシュサイズに粉砕し、溶媒を２４時間毎に交換しながら（１，５ＬＸ５）　、 ９５％エタノールで浸出することによって抽出した。合体させたエタノール抽出 液は、減圧下に約４０°Ｃを越えない温度で、ブキ（Ｂｕｃｈｉ）　ロータリー エバポレータで蒸発された。

このエタノール残渣（１１２ｇ、残渣Ａ）は、水（約５００　ｍｌ）と下記８凰 の塩化メチレンとの間で分配された：夫々１×約１リットル、３×約５００　ｍ １ｂ 体し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。真空濾過を用いて、塩化メチレンから 乾燥剤を除去した。減圧下でブキ・ロータリーエバポレータを用いて塩化メチレ ン溶媒を蒸発させ、第二残渣を得た（２７．８ｇ、残渣Ｂ）。

この第二残渣（２７，８ｇ）を酢酸エチル／メタノールの混合液（３：１．６０ ０　ｍｌ）中に溶解し、得られた溶液を３００　ｍｌづつの二つの部分に分割し た。夫々の部分は、例１で説明したようにして、約２００ｇのセライト５４５（ フィッシャー社）上に均一に被覆された。

第二残渣（残渣Ｂ）で被覆されたセライトを二つのカラム（夫々５ｃｍＸ　３２ ｃｍ）中に充填した。夫々のカラムは、加圧下に、順次ヘキサン（２，２Ｌ）お よび塩化メチレン（１，２Ｌ）で洗い流された。このヘキサン洗浄液および塩化 メチレン洗浄液の夫々を真空で蒸発させて、夫々　１９．２５ｇ　（残渣Ｃ）お よび６１５ｇ（残渣Ｄ）を得た。

粗製タフサン混合物を含む残渣Ｄ　（６ｊ５ｇ）を２５０１１１ｆの酢酸エチル 中に溶解し、例１に記載した方法に従ってセライト（５０ｇ）上に吸着させた。

得られた物質を、ヘキサン／アセトン（７５：　２５）中で充填されたシリカゲ ル６０フラツシユカラム（１６０ｇ、５ｃｍｘ１５ｃｍ、２３０−４００メツシ ユ、Ｅ、　Ｍｓ＋ｃｋ社、１カラムの容量＝５００ｍｌ）にかけた。アセトンの 比率を５％づつ増大させることにより、移動相の極性をヘキサン／アセトン（５ ５：　４５）まで徐々に増大させた。加圧下に、１００ｍ１１５分の流速で両分 を回収した。まず、１カラム容量のヘキサン／アセトン（７５：　２５）で溶出 して５００ｍ１の１画分を回収し、続いて２カラム容量のヘキサン／アセトン（ ７０：　３０）で溶出して夫々２５０１の４画分を回収し、２カラム容量のへキ サン／アセトン（６５：　３５）で溶出して夫々２５０ｍ１の４画分を回収し、 １カラム容量のへキサン／アセトン（６０：　４０）で溶出して夫々２５０ｍ　 ｌの２画分を回収し、１カラム容量のヘキサン／アセトン（５５：　４５）で溶 出して夫々５００１１の１０画分を回収した。

回収した両分を、プレコートされたシリカゲルＧ−ＵＶ２５４（Ｍａｃｈｉｕ＋ ｙ　Ｎａｇｅｌ、　Ｄｕ＋ｅｎ）上での薄層クロマトグラフィーによって試験し た。ヘキサン／アセトン（６０；　４０．５００　ｍｌ）およびヘキサン／アセ トン（５５：　４５．１５０　［１１）で溶出された両分を合体し、真空中で乾 固した（画分Ｅ、　０．４２７　ｇ）。クロロホルム中の５％メタノールを展開 系に用い、ｐ−アニスアルデヒド／硫酸を可視化剤として用いた薄層クロマトグ ラフィーによって、この画分中に８種類の成分が同定された。タクソール／セフ ァロマニン混合物は、Ｒｆ値０．６２の青灰色のスポットとして現れた。

画分Ｅは、シリカゲル６０フラッジュカラム上で更に分画された。物質（４２７ ｍｇ）を１％メタノール／塩化メチレン（２ｍｌ）中に溶解し、１％メタノール ／塩化メチレン中で充填されたシリカゲル６０カラム（５５ｇ、２ｃｍＸ　４０ ｃｍ、　２３０−４００メツシユ、Ｅ、　Ｍｅｔｔｋ社、１力ラム容ｆｆｉ＝１ ２０ｍｌ）にかけた。８他（７分の流速を与える低圧において、順次下記の溶出 溶媒を用いてカラムを溶出させた。即ち、１％メタノール／塩化メチレン（２カ ラム容量、夫々Ｘｌ　ｍｌの２０画分）、１．５％メタノール／塩化メチレン（ １カラム容量、夫々１２１ｆＯ１Ｏ画分）、２％メタノール／塩化メチレン（１ カラム容量、夫々１２　ｍｌの１０画分）、２．５％メタノール／塩化メチレン （３カラム容量、夫々５　ｍｌの７４画分）である。これら画分は、上記で説明 したと同じ展開剤系および可視化側系を用いた薄層クロマトグラフィーでモニタ ーされた。タクソール／セファロマニン混合物は、２．５％メタノール／塩化メ チレンで溶出された画分７８−８６中で同定された。これらを合体し、真空中で 乾固して残渣を得た（４０．３５ｍｇ　、画分Ｆ）。ＨＰＬＣで試験したとき、 この両分はセファロマニンと共にメタノールの存在を示した。

画分Ｆ　（４０ｊ５ｇ）をメタノール中の２０％酢酸エチル混合溶媒１ｍｌに溶 解し、可溶化された画分Ｆを２０％酢酸エチル／塩化メチレン混合溶媒中で充填 されたシリカゲル６０フラツシユカラム（１０ｇ、１ｃｍＸ　３２ｃｍ、　２３ ０−４００メツシユ、Ｅ、　Ｍｔｒｃｋ社、１カラム容ｆｆ１＝２１　ｍｌ　） にかけることによって、メタノールをセファロマニンから分離した。８ｍｌ／分 の流速を与える低圧において、順次下記の溶出溶媒を用いてカラムを溶出させた 。即ち、２０％酢酸エチル／塩化メチレン（２カラム容量、夫々ＩＩ　ｍｌの４ 画分）、２５％酢酸エチル／塩化メチレン（１カラム容量、夫々ＩＱ　ｍｌの２ 画分）、３０％酢酸エチル／塩化メチレン（１カラム容量、夫々４　ｍｌの５画 分）、３５％酢酸エチル／塩化メチレン（２カラム容量、夫々４．５ｍｌの９画 分）、４０％酢酸エチル／塩化メチレン（１カラム容旦、夫々３ｍｌの７画分） および４５％酢酸エチル／塩化メチレン（２カラム容量、夫々２０１の１０画分 ）である。これら画分は、酢酸エチル／塩化メチレン（１：　１）を展開溶媒に 用い、ｐ−アニスアルデヒド／硫酸を可視化剤に用いた薄層クロマトグラフィー によってモニターされた。ＨＰＬＣ分析により測定すると、塩化メチレン中の４ ５％酢酸エチルで溶出された画分３５−５０の中に、メタノール（２６ｍｇ）が 純粋な形で得られた。

に記載したようにして納屋で乾燥した。この納屋乾燥された完全な小枝（５００ ｇ、例１の方法によってｐ］定された０、０４３％乾燥重量のメタノール含有量 を示す）をウィリー・ミルで約６０のメツシュサイズに粉砕し、９５％エタノー ル（８Ｌ）で浸出処理した。合体したエタノール抽出液を、４０℃を越えない温 度において、ブキ・ロータリーエバポレータ上で減圧下に乾固した。

エタノール残渣（１３４，４ｇ、第一残渣、残渣Ａ）を、水（約６００　ｍｌ） と下記容量の酢酸エチルとの間で分配させた：２×約１．２Ｌ、３Ｘ約６００　 ｍｌ。酢酸エチル層を分離し、合体し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。真空 濾過を用いて、乾燥剤を酢酸エチルから除去した。ブキ・ロータリーエ／くポレ ータを用いて酢酸エチル溶媒を蒸発させ、第二残渣（４４ｇ、残ｌ査Ｂ）を得た 。

残渣Ｂは、約１部の水、９部のメタノール（５００ｍｌ）および２容量のヘキサ ン（ｌｏｏＯｍｌ）の二相混合液の間で分配された。続いて、各相を反対の溶媒 （１００ｍｌＸ　５）で洗浄し、洗浄したものを夫々の相について合体させた。

合体されたヘキサン層を乾固して残渣（１７，７ｇ、残渣Ｃ）を得、また合体さ れた水／メタノール層を真空で蒸発させて粗製タフサン混合物の残渣（３１，１ ｇ、残渣Ｄ）を得た。

残渣Ｄ　Ｄｌ、１ｇ）を、塩化メチレン０００　ｍ１ｘ４）を用いて音波処理で 洗浄した。塩化メチレン洗浄液を合体し、真空で蒸発させて、残渣りの塩化メチ レン可溶部（１７ｊｇ、残渣５１例１の方法で測定されたメタノール含量１６７ ｍｇ）を得た。

残渣りの塩化メチレン不溶部の重量は１３．８ｇで、例１の方法で測定したメタ ノール含量は２０　ｍｇであった。

残渣Ｅ　（１７，３ｇ）を酢酸エチル２５０ｍ１中に溶解し、セライ）　Ｄｏｇ ）上に吸着させた。得られた物質を、ヘキサン／アセトン（７５：　２５）中で 充填されたシリカゲル６０フラツシユカラム０１５　ｇ、５ｃｍＸ　３２ｃｍ、 ２３０−４００メツシユ、Ｅ、　Ｍ＊ｒｃｋ社、１カラムの容量＝６００　ｍｌ ）にかけた。アセトンの比率を５％づつ増大させることにより、移動相の極性を ヘキサン／アセトン（４５：　５５）まで徐々に増大させた。加圧下に、１００ 　ｍ１１５分の流速で両分を回収した。まず、２カラム容量のへキサン／アセト ン（７０：　３０）で溶出して８画分ＤＯＯｍ１．　１００ｍ１゜１２５ｍ１． 　２００ｍ１．　１６０ｆｆ＋Ｉ、１９０ｍ１および２１０ｍ１　）を回収し、 続いて１カラム容量のへキサン／アセトン（６５：　３５）で溶出して２画分（ １７５ｍｌおよび３００　ｍｌ）を回収し、１カラム容量のへキサン／アセトン （６０：　４０）で溶出して５００ｍ１の１画分を回収し、１カラム容量のヘキ サン／アセトン（５０：　５０）で溶出して夫々　１００ｍ１の７画分を回収し 、１カラム容量のへキサン／アセトン（４５：　５５）で溶出して夫々　ｌ００ ｍ１の６画分を回収し、３カラム容量の１００％アセトンで溶出して夫々４５０ ｍ１の４画分を回収した。回収した画分を、クロロホルム中の５％メタノールを 展開溶媒として用い、またｐ−アニスアルデヒド／硫酸を可視化剤として用いて 、プレコートされたシリカゲルＧ−ＵＶ　（Ｍａｃｈｉ＋ｕｒ７　Ｌｇｒｌ、Ｄ ｕｒｒｎ）上での薄層クロマドグラフィーによって試験した。

ヘキサン／アセトン（５５：　４５．１００　ｍｌ）およびヘキサン／アセトン （５０：　５０．４５０　ｍｌ）で溶出された両分を合体し、真空中で乾固した （画分Ｆ、　１．６１ｇ）。

クロロホルム中の５％メタノールを展開系に用い、ｐ−アニスアルデヒド／硫酸 を可視化剤として用いた薄層クロマトグラフィーによって、この両分中に８種類 の成分が同定された。

タクソール／セファロマニン混合物は、Ｒ＋　４ａ　０．６２の青灰色のスポッ トとして現れた。

以上、本発明の幾つかの例を記載したが、本発明の方法を利用した他の態様を与 えるように、基本的な構成を変更し得ることは明らかである。従って、本発明の 範囲は例示として記載した特定の態様によってではなく、請求の範囲によって定 義されるべきものである。

、、、−＾−Ｎ、　ＰＣＴ／ＵＳ　９２１０３０８８フロントページの続き （７２）発明者　エルソーリー、マームード・ニーアメリカ合衆国、ミシシッピ ー州　３８６５５、オックスフォード、シープ・ドライブ　４１（７２）発明者 　マツケスニー、ジエイムズ・デーアメリカ合衆国、ミシシッピー州　３８６２ ７、ニック、ボックス　３４０、ルート　１

Claims (133)

【特許請求の範囲】
1. １．植物からタクサン類を得る方法であって、該方法が装飾用イチイ植物の１種 以上の栽培変種から植物素材の再生可能な源を提供することを具備し、該植物素 材が、多量の葉が幹に着いている本来のままの刈取物の形態にあり、かつこの植 物素材を１種以上の溶媒で処理してタクサンに富む生成物を得る方法。
2. ２．植物素材の再生可能な源が、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｈｅｎｒｙｉ′、Ｔ．Ｘ 　ｍｅｄｉａ′Ｄｅｎｓｉｆｏｒｍｉｓ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｈｉｃｋｓｉ ｉ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｄａｒｋ　Ｇｒｅｅｎ　Ｓｐｒｅａｄｅｒ′、Ｔ． Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｒｕｎｙａｎ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｂｒｏｗｎｉｉ′、Ｔ ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｗａｒｄｉｉ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｈａｌｌｏｒａｎ′ 、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｈａｔｆｉｅｌｄ′、Ｔ．Ｘｍｅｄｉａ′Ｎｉｇｒａ′ 、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｔａｕｎｔｏｎｉｉ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｆａｉｒ ｖｉｅｗ′、Ｔ．ｃｕｓｐｉｄａｔａ′Ｂｒｅｖｉｆｏｌｉａ′、Ｔ．ｃｕｓｐ ｉｄａｔａ、およびＴ．ｃｕｓｐｉｄａｔａ′Ｓｐｒｅａｄｅｒ′からなる群よ り選ばれるイチイ属の栽培変種である請求の範囲第１項記載の方法。
3. ３．植物素材の再生可能な源が、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｄｅｎｓｉｆｏｒｍｉｓ ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｈｉｃｋｓｉｉ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｄａｒｋ　 Ｇｒｅｅｎ　Ｓｐｒｅａｄｅｒ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｒｕｎｙａｎ′、Ｔ． Ｘｍｅｄｉａ′Ｂｒｏｗｎｉｉ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｗａｒｄｉｉ′、Ｔ． Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｈａｌｌｏｒａｎ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｈａｔｆｉｅｌｄ ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｎｉｇｒａ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｔａｕｎｔｏｎ ｉｉ′、Ｔ．ｃｕｓｐｉｄａｔａ′Ｂｒｅｖｉｆｏｌｉａ′、およびＴ．ｃｕｓ ｐｉｄａｔａからなる群より選ばれるイチイ属の栽培変種である請求の範囲第２ 項記載の方法。
4. ４．植物素材の再生可能な源が、Ｔ．ｃｕｓｐｉｄａｔａ、Ｔ．Ｘｍｅｄｉａ′ Ｈａｌｌｏｒａｎ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｈａｔｆｉｅｌｄ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅ ｄｉａ′Ｔａｕｎｔｏｎｉｉ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｎｉｇｒａ′、Ｔ．Ｘ　 ｍｅｄｉａ′ＤａｒｋＧｒｅｅｎ　Ｓｐｒｅａｄｅｒ′、およびＴ．Ｘ　ｍｅｄ ｉａ′Ｈｉｃｋｓｉｉ′からなる群より選ばれるイチイ属の栽培変種である請求 の範囲第２項記載の方法。
5. ５．溶媒処理に先立って、植物素材を乾燥工程にかける請求の範囲第１項記載の 方法。
6. ６．乾燥工程が、遮られていない直射日光の下では行なわれない請求の範囲第５ 項記載の方法。
7. ７．溶媒処理に先立って、植物素材を粉砕する請求の範囲第１項記載の方法。
8. ８．溶媒処理を施された植物素材が、その元来の揮発成分の実質的な部分を保持 する請求の範囲第１項記載の方法。
9. ９．装飾用イチイ植物の１種以上の栽培変種から植物素材の再生可能な源を提供 し、かつ該植物素材を１種以上の溶媒で処理してタクサンに富む生成物を得るこ とにより調製されるタクサンに富む組成物であって、該植物素材が、多量の葉が 幹に着いている本来のままの刈取物の形態にある組成物。
10. １０．植物素材の再生可能な源が、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｈｅｎｒｙｉ′、Ｔ． Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｄｅｎｓｉｆｏｒｍｉｓ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｈｉｃｋｓ ｉｉ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｄａｒｋ　Ｇｒｅｅｎ　Ｓｐｒｅａｄｅｒ′、Ｔ ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｒｕｎｙａｎ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｂｒｏｗｎｉｉ′、 Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｗａｒｄｉｉ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｈａｌｌｏｒａｎ ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｈａｔｆｉｅｌｄ′、Ｔ．Ｘｍｅｄｉａ′Ｎｉｇｒａ ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｔａｕｎｔｏｎｉｉ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｆａｉ ｒｖｉｅｗ′、Ｔ．ｃｕｓｐｉｄａｔａ′Ｂｒｅｖｉｆｏｌｉａ′、Ｔ．ｃｕｓ ｐｉｄａｔａ、およびＴ．ｃｕｓｐｉｄａｔａ′Ｓｐｒｅａｄｅｒ′からなる群 より選ばれるイチイ属の変種より選択されるイチイ属の栽培変種である請求の範 囲第９項記載の組成物。
11. １１．植物素材の再生可能な源が、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｄｅｎｓｉｆｏｒｍｉ ｓ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｈｉｃｋｓｉｉ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｄａｒｋ 　Ｇｒｅｅｎ　Ｓｐｒｅａｄｅｒ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｒｕｎｙａｎ′、Ｔ ．Ｘｍｅｄｉａ′Ｂｒｏｗｎｉｉ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｗａｒｄｉｉ′、Ｔ ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｈａｌｌｏｒａｎ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｈａｔｆｉｅｌ ｄ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｎｉｇｒａ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｔａｕｎｔｏ ｎｉｉ′、Ｔ．ｃｕｓｐｉｄａｔａＢｒｅｖｉｆｏｌｉａ′、およびＴ．ｃｕｓ ｐｉｄａｔａからなる群より選ばれるイチイ属の栽培変種である請求の範囲第９ 項記載の組成物。
12. １２．植物素材の再生可能な源が、Ｔ．ｃｕｓｐｉｄａｔａ、Ｔ．Ｘｍｅｄｉａ ′Ｈａｌｌｏｒａｎ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｈａｔｆｉｅｌｄ′、Ｔ．Ｘ　ｍ ｅｄｉａ′Ｔａｕｎｔｏｎｉｉ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｎｉｇｒａ′、Ｔ．Ｘ 　ｍｅｄｉａ′ＤａｒｋＧｒｅｅｎ　Ｓｐｒｅａｄｅｒ′、およびＴ．Ｘ　ｍｅ ｄｉａ′Ｈｉｃｋｓｉｉ′からなる群より選ばれるイチイ属の栽培変種である請 求の範囲第９項記載の組成物。
13. １３．溶媒処理に先立って、植物素材が粉砕される請求の範囲第９項記載の組成 物。
14. １４．溶媒処理を施された植物素材が、元来の揮発成分の実質的な部分を保持す る請求の範囲第９項記載の組成物。
15. １５．溶媒処理に先立って、植物素材が乾燥工程にかけられる請求の範囲第９項 記載の組成物。
16. １６．乾燥工程が、遮られていない直射日光の下では行なわれない請求の範囲第 １５項記載の組成物。
17. １７．タクサン類の源として利用可能な植物素材の調製方法であって、タクサン 含有植物素材の幹に多量の葉が付いている本来のままの刈取物を供給し、この本 来のままの刈取物を乾燥させてその揮発成分を減少させ、実質的に乾燥した刈取 物を作製し、この実質的に乾燥した刈取物を回収することを具備する調製方法。
18. １８．乾燥工程を約７０℃未満の温度で行なう請求の範囲第１７項記載の植物素 材の調製方法。
19. １９．乾燥工程を約２０℃ないし約６５℃の温度で行なう請求の範囲第１７項記 載の植物素材の調製方法。
20. ２０．乾燥工程が、遮られていない直射日光の下では行なわれない請求の範囲第 １７項記載の植物素材の調製方法。
21. ２１．乾燥工程において、可視日光の約４０％ないし約８０％を植物素材に到達 させない請求の範囲第２０項記載の植物素材の調製方法。
22. ２２．乾燥工程において、植物素材の少なくとも２５％の重量減少が達成される 請求の範囲第１７項記載の植物素材の調製方法。
23. ２３．乾燥工程において、植物素材の約４０％ないし約７０％の重量損失が達成 されるまで植物素材を乾燥させる請求の範囲第２２項記載の植物素材の調製方法 。
24. ２４．植物素材が装飾用イチイ属植物の１種以上の栽培変種から選択される請求 の範囲第１７項記載の植物素材の調製方法。
25. ２５．植物素材が、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｈｅｎｒｙｉ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ ′Ｄｅｎｓｉｆｏｒｍｉｓ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｈｉｃｋｓｉｉ′、Ｔ．Ｘ 　ｍｅｄｉａ′Ｄａｒｋ　Ｇｒｅｅｎ　Ｓｐｒｅａｄｅｒ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉ ａ′Ｒｕｎｙａｎ′、Ｔ．Ｘｍｅｄｉａ′Ｂｒｏｗｎｉｉ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉ ａ′Ｗａｒｄｉｉ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｈａｌｌｏｒａｎ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅ ｄｉａ′Ｈａｔｆｉｅｌｄ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｎｉｇｒａ′、Ｔ．Ｘ　ｍ ｅｄｉａ′Ｔａｕｎｔｏｎｉｉ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｆａｉｒｖｉｅｗ′、 Ｔ．ｃｕｓｐｉｄａｔａ′Ｂｒｅｖｉｆｏｌｉａ′、Ｔ．ｃｕｓｐｉｄａｔａ、 およびＴ．ｃｕｓｐｉｄａｔａ′Ｓｐｒｅａｄｅｒ′からなる群より選ばれるイ チイ属の１種以上の種である請求の範囲第２４項記載の植物素材の調製方法。
26. ２６．植物素材が、Ｔ．ｃｕｓｐｉｄａｔａ、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｈａｌｌｏ ｒａｎ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｈａｔｆｉｅｌｄ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｎ ｉｇｒａ′、Ｔ．Ｘｍｅｄｉａ′Ｔａｕｎｔｏｎｉｉ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′ Ｄａｒｋ　Ｇｒｅｅｎ　Ｓｐｒｅａｄｅｒ′、およびＴ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｈｉ ｃｋｓｉｉ′からなる群より選ばれるイチイ属の１種以上の種である請求の範囲 第２５項記載の植物素材の調製方法。
27. ２７．植物素材を約７０℃未満の温度での乾燥工程に処し、該乾燥工程が遮られ ていない直射日光の下では行なわれない請求の範囲第２６項記載の植物素材の調 製方法。
28. ２８．タクサン類の源として利用可能な植物素材であって、タクサン含有植物素 材の幹に多量の葉が付いている本来のままの刈取物を供給し、この本来のままの 刈取物を乾燥させてその揮発成分を減少させ、実質的に乾燥した刈取物を作製し 、この実質的に乾燥した刈取物を回収することを具備する方法によって調製され る植物素材。
29. ２９．乾燥工程を約７０℃未満の温度で行なう請求の範囲第２８項記載の植物素 材。
30. ３０．乾燥工程を約２０℃ないし約６５℃の温度で行なう請求の範囲第２９項記 載の植物素材。
31. ３１．乾燥工程が、遮られていない直射日光の下では行なわれない請求の範囲第 ２８項記載の植物素材。
32. ３２．乾燥工程において、可視日光の約４０％ないし約８０％を植物素材に到達 させない請求の範囲第３１項記載の植物素材。
33. ３３．乾燥工程において、植物素材の少なくとも２５％の重量減少が達成される 請求の範囲第２８項記載の植物素材。
34. ３４．乾燥工程において、植物素材の約４０％ないし約７０％の重量損失が達成 されるまで植物素材を乾燥させる請求の範囲第２８項記載の植物素材。
35. ３５．植物素材が装飾用栽培イチイ属の１以上の種から選択される請求の範囲第 ２８項記載の植物素材。
36. ３６．植物素材が、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｈｅｎｒｙｉ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ ′Ｄｅｎｓｉｆｏｒｍｉｓ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｈｉｃｋｓｉｉ′、Ｔ．Ｘ 　ｍｅｄ１ａ′Ｄａｒｋ　Ｇｒｅｅｎ　Ｓｐｒｅａｄｅｒ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉ ａ′Ｒｕｎｙａｎ′、Ｔ．Ｘｍｅｄｉａ′Ｂｒｏｗｎｉｉ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉ ａ′Ｗａｒｄｉｉ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｈａｌｌｏｒａｎ′Ｔ．Ｘ　ｍｅｄ ｉａ′Ｈａｔｆｉｅｌｄ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｎｉｇｒａ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅ ｄｉａ′Ｔａｕｎｔｏｎｉｉ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｆａｉｒｖｉｅｗ′、Ｔ ．ｃｕｓｐｉｄａｔａ′Ｂｒｅｖｉｆｏｌｉａ′、Ｔ．ｃｕｓｐｉｄａｌａ、お よびＴ．ｃｕｓｐｉｄａｔａ′Ｓｐｒｅａｄｅｒ′からなる群より選ばれるイチ イ属の１以上の種から選択される請求の範囲第２８項記載の植物素材。
37. ３７．植物素材が、Ｔ．ｃｕｓｐｉｄａｔａ、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｈａｌｌｏ ｒａｎ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｈａｔｆｉｅｌｄ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｎ ｉｇｒａ′、Ｔ．Ｘｍｅｄｉａ′Ｔａｕｎｔｏｎｉｉ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′ Ｄａｒｋ　Ｇｒｅｅｎ　Ｓｐｒｅａｄｅｒ′、およびＴ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｈｉ ｃｋｓｉｉ′からなる群より選択される請求の範囲第３６項記載の植物素材。
38. ３８．植物素材を約７０℃未満の温度での乾燥工程に処し、該乾燥工程が遮られ ていない直射日光の下では行なわれない請求の範囲第３７項記載の植物素材。
39. ３９．タクサン含有植物素材から粗タクサン混合物を得る方法であって、 Ａ．植物素材を有機溶媒と接触させることによりタクサン類を抽出し、実質的に 溶媒を含まないタクサンに富む第１の残渣を得る工程； Ｂ．第１の残渣を、タクサン類を溶解し得る有機溶媒とタクサンをほとんど溶解 しない水性溶媒との間で分配して有機相と水相とを生成させる工程； Ｃ．水相から有機相を分離し、実質的に水相を含まない有機相を回収する工程； Ｄ．第２の有機相から第２の残渣を生成させる工程；を具備する初期溶媒処理、 該第２の残渣に、 Ｅ．タクサンを固体支持体に可逆的に付着させ得る溶媒に第２の残渣を溶解し、 溶解した第２の残渣を含む溶媒に固体支持体を導入し、この固体支持体に第２の 残渣のタクサン類を付着させ、固体支持体を溶媒から分離し、 タクサン類が付着した固体支持体を、異なるタクサン溶出特性を有する溶媒系と 接触させ、かつ固体支持体からタクサンに富む分画を粗タクサン混合物として溶 出させ、または Ｆ．第２の残渣を水性混合物と非極性非混和性有機溶媒との間で分配し、ここで 、水性混合物は、単層の水および水と混和し得る極性有機溶媒を含み、極性溶媒 は、水性混合物中に、第２の残渣中に存在するタクサン類を水性混合物に配する に十分な量存在し、かつ 水性混合物から粗タクサン混合物を回収する、のいずれかから選ばれる最終処理 を施す、ことを具備する方法。
40. ４０．工程Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、ＥまたはＦのいずれも１回以上繰り返される請求の 範囲第３９項記載の方法。
41. ４１．工程Ａにおいて、植物素材を、エタノール、アセトン、酢酸エチル、塩化 メチレン、クロロホルム、四塩化炭素、メチルエチルケトン、メチルイソブチル ケトン、メチルｔ−ブチルエーテル、メタノールまたはそれらの混合物からなる 群より選ばれる有機溶媒と接触させる請求の範囲第３９項記載の方法。
42. ４２．工程Ａにおいて、植物素材を、アセトン、エタノールおよび酢酸エチルか らなる群より選ばれる有機溶媒と接触させる請求の範囲第４１項記載の方法。
43. ４３．工程Ａにおいて、植物素材をエタノールと接触させる請求の範囲第４２項 記載の方法。
44. ４４．工程Ａにおける植物素材と溶媒との接触を、浸漬、パーコレーション、ソ ックレー抽出、撹拌、またはそれらの組み合わせからなる群より選ばれる方法に よって促進する請求の範囲第３９項記載の方法。
45. ４５．工程Ａにおける植物素材と溶媒との接触を、振とうにより促進する請求の 範囲第４４項記載の方法。
46. ４６．工程Ａにおける植物素材と溶媒との接触を、有機溶媒中に植物素材を浸漬 し、かつ撹拌することにより促進する請求の範囲第４５項記載の方法。
47. ４７．工程Ａにおいて植物素材を溶媒と接触させる前に、ヘキサン、ヘキサン類 、ペンタン、石油エーテル、イソオクタン、またはそれらの混合液からなる群よ り選ばれる溶媒で植物素材を脱脂する請求の範囲第３９項記載の方法。
48. ４８．工程Ｂの有機溶媒が、塩化メチレンおよび酢酸エチルからなる群より選ば れる請求の範囲第３９項記載の方法。
49. ４９．工程Ｂの有機溶媒が酢酸エチルである請求の範囲第４８項記載の方法。
50. ５０．工程Ｂの水性溶媒が水である請求の範囲第３９項記載の方法。
51. ５１．工程Ｃの有機溶媒が、水性溶媒から有機溶媒を分離した後、乾燥剤もしく は方法で処理される請求の範囲第３９項記載の方法。
52. ５２．乾燥剤が、無水硫酸マグネシウム、無水硫酸ナトリウム、４Ａモレキュラ ーシーブ、塩化カルシウムもしくはそれらの混合物からなる群より選ばれ、かつ 乾燥方法が、水が凍結する温度以下に有機溶媒を冷却し、凍結した水から液状有 機溶媒を分離することを包含する請求の範囲第５１項記載の方法。
53. ５３．乾燥剤が無水硫酸ナトリウムである請求の範囲第５２項記載の方法。
54. ５４．植物素材が、装飾用イチイ属種の１種以上の栽培変種から選択される請求 の範囲第３９項記載の方法。
55. ５５．植物素材が、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｈｅｎｒｙｉ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ ′Ｄｅｎｓｉｆｏｒｍｉｓ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｈｉｃｋｓｉｉ′、Ｔ．Ｘ 　ｍｅｄｉａ′Ｄａｒｋ　Ｇｒｅｅｎ　ＳＰｒｅａｄｅｒ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉ ａ′Ｒｕｎｙａｎ′、Ｔ．Ｘｍｅｄｉａ′Ｂｒｏｗｎｉｉ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉ ａ′Ｗａｒｄｉｉ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｈａｌｌｏｒａｎ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅ ｄｉａ′Ｈａｔｆｉｅｌｄ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｎｉｇｒａ′、Ｔ．Ｘ　ｍ ｅｄｉａ′Ｔａｕｎｔｏｎｉｉ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｆａｉｒｖｉｅｗ′、 Ｔ．ｃｕｓｐｉｄａｔａ′Ｂｒｅｖｉｆｏｌｉａ′、Ｔ．ｃｕｓｐｉｄａｔａ、 およびＴ．ｃｕｓｐｉｄａｔａ′Ｓｐｒｅａｄｅｒ′からなる群より選ばれるイ チイ属の栽培変種から得られる請求の範囲第５４項記載の方法。
56. ５６．抽出しようとする植物素材を、抽出に先立って乾燥させる請求の範囲第３ ９項記載の方法。
57. ５７．乾燥工程に処される植物素材が、幹に多量の葉が付いている本来のままの 刈取物として供給される請求の範囲第５６項記載の方法。
58. ５８．乾燥工程を約７０℃未満の温度で行なう請求の範囲第５７項記載の方法。
59. ５９．乾燥工程が約２０℃ないし約６５℃の温度で行なわれる請求の範囲第５８ 項記載の方法。
60. ６０．乾燥工程は、遮られていない直射日光の下では行なわれない請求の範囲第 ５６項記載の方法。
61. ６１．乾燥工程において、可視日光の約４０％ないし約８０％を植物素材に到達 させない請求の範囲第６０項記載の方法。
62. ６２．乾燥工程において、植物素材の少なくとも２５％の重量減少が達成される 請求の範囲第５６項記載の方法。
63. ６３．乾燥工程において、植物素材の約４０％ないし約７０％の重量損失が達成 されるまで植物素材を乾燥させる請求の範囲第６２項記載の方法。
64. ６４．粗タクサン混合物が、タクソール、セファロマニン、デスアセチル−セフ ァロマニン、バッカチンＩＩＩ、１０−デスアセチルバッカチンＩＩＩおよび１ ０−デスアセチルククソールを含む請求の範囲第３９項記載の方法。
65. ６５．第２の残渣に工程Ｅの最終処理を施す請求の範囲第３９項記載の方法。
66. ６６．工程Ｄの第２の残渣を溶解するための工程Ｅの溶媒が酢酸エチルおよびメ タノールの混合液である請求の範囲第６５項記載の粗タクサン混合物を得るため の方法。
67. ６７．工程Ｄの第２の残渣を溶解するための工程Ｅの溶媒が酢酸エチルである請 求の範囲第６５項記載の粗タクサン混合物を得るための方法。
68. ６８．工程Ｅの固体支持体がセライトである請求の範囲第６５項記載の粗タクサ ン混合物を得るための方法。
69. ６９．第２の残渣が溶解している工程Ｅの溶媒に工程Ｅの固体支持体を加えるこ とによりタクサン類を可逆的に固体支持体に付着させ、該溶媒を蒸発させて該固 体支持体に付着する第２の残渣の成分を得る請求の範囲第６５項記載の粗タクサ ン混合物を得るための方法。
70. ７０．第２の残渣の成分が付着している工程Ｅの固体支持体を、固体支持体から 多量のタクサンを除去することのない溶媒で最初に溶出し、次いで、第１の溶出 に用いられる溶媒よりも極性の高い溶媒であって、固体支持体からタクサンに富 む分画を粗ククサン混合物として溶出する溶媒を用いる第２の溶出を行なう請求 の範囲第６５項記載の粗タクサン混合物を得るための方法。
71. ７１．第１の溶出に用いられる溶媒がヘキサンである請求の範囲第７０項記載の 粗タクサン混合物を得るための方法。
72. ７２．固体支持体からのタクサン類の溶出に用いられる溶媒が、酢酸エチルおよ び塩化メチレンからなる群より選ばれる請求の範囲第７０項記載の粗タクサン混 合物を得るための方法。
73. ７３．ヘキサンが第１の溶出に用いられ、酢酸エチルがタクサン類の溶出に用い られる請求の範囲第７０項記載の粗タクサン混合物を得るための方法。
74. ７４．第２の残渣に工程Ｆの最終処理を施す請求の範囲第３９項記載の方法。
75. ７５．工程Ｆの水性混合物が、約５０％の極性有機溶媒と残余の水とを含む請求 の範囲第７４項記載の方法。
76. ７６．工程Ｆの水性混合物が、約９部の極性有機溶媒と約１部の水とを含む請求 の範囲第７５項記載の方法。
77. ７７．工程Ｆの水性混合物の極性有機溶媒が、アセトニトリルおよびメタノール からなる群より選ばれる請求の範囲第７４項記載の方法。
78. ７８．工程Ｆの水性混合物の極性有機溶媒がメタノールである請求の範囲第７４ 項記載の方法。
79. ７９．工程Ｆの水性混合物が、約５０％をこえるメタノールと残余の水とを含む 請求の範囲第７４項記載の方法。
80. ８０．工程Ｆの水性混合物が、約９部のメタノールと約１部の水とを含む請求の 範囲第７９項記載の方法。
81. ８１．工程Ｆの有機溶媒が、ヘキサン、ペンタン、石油エーテル、ヘプタン、イ ソオクタンおよびそれらの混合物からなる群より選ばれる請求の範囲第７４項記 載の方法。
82. ８２．工程Ｆの有機溶媒がヘキサンである請求の範囲第８１項記載の方法。
83. ８３．第２の残渣を、ヘキサンを包含する非極性非混和性有機溶媒とメタノール および水を包含する水性混合物とで分配する請求の範囲第７４項記載の方法。
84. ８４．第２の残渣を、水性混合物よりも大容積の非極性非混和性有機溶媒との間 で分配する請求の範囲第７４項記載の方法。
85. ８５．第２の残渣を、約１部の第２の水性混合物と約２部の非極性非混和性有機 溶媒とで分配する請求の範囲第８４項記載の方法。
86. ８６．粗タクサン混合物が、タクソール、セファロマニン、デスアセチル−セフ ァロマニン、バッカチンＩＩＩ、１０−デスアセチルバッカチンＩＩＩおよび１ ０−デスアセチルタクソールからなる群より選ばれるタクサン類を含有する請求 の範囲第７４項記載の方法。
87. ８７．タクサン類を含有する植物素材由来の粗タクサン混合物であって、 Ａ．植物素材を有機溶媒と接触させることによりタクサン類を抽出し、実質的に 溶媒を含まないタクサンに富む第１の残渣を得る工程； Ｂ．第１の残渣を、タクサン類を溶解し得る有機溶媒とタクサンをほとんど溶解 しない水性溶媒との間で分配して有機相と水相とを生成させる工程； Ｃ．水相から有機相を分離し、実質的に水相を含まない有機相を回収する工程； Ｄ．第２の有機相から第２の残渣を生成させる工程；該有機相に、 Ｅ．タクサンを固体支持体に可逆的に付着させ得る溶媒に第２の残渣を溶解し、 溶解した第２の残渣を含む溶媒に固体支持体を導入し、この固体支持体に第２の 残渣のタクサン類を付着させ、固体支持体を溶媒から分離し、 タクサン類が付着した被覆固体支持体を、異なるタクサン溶出特性を有する溶媒 系と連続的に接触させ、かつ固体支持体からタクサンに富む分画を粗タクサン混 合物として溶出させ、または Ｆ．第２の残渣を水性混合物と非極性非混和性有機溶媒との間で分配し、ここで 、水性混合物は、単層の水および水と混和し得る極性有機溶媒を含み、極性溶媒 は、水性混合物中に、第２の残渣中に存在するタクサン類を水性混合物に配する に十分な量存在し、かつ 水性混合物から粗タクサン混合物を回収する、のいずれかから選ばれる最終溶媒 処理を施すこと、を具備する方法によって調製される粗タクサン混合物。
88. ８８．植物素材が、装飾用イチイ属植物の栽培変種の１以上の種から供給される 請求の範囲第８７項記載の粗タクサン混合物。
89. ８９．抽出しようとする植物素材が幹に多量の葉が付いた本来のままの刈取物と して供給され、かつ抽出に先立って乾燥工程に処される請求の範囲第８７項記載 の粗タクサン混合物。
90. ９０．第２の残渣に工程Ｅの最終処理を施す請求の範囲第８７項記載の粗タクサ ン混合物。
91. ９１．第２の残渣に工程Ｆの最終処理を施す請求の範囲第８７項記載の粗タクサ ン混合物。
92. ９２．工程Ｆの水性混合物が、約５０％をこえる極性有機溶媒および残余の水を 含む請求の範囲第９１項記載の粗タクサン混合物。
93. ９３．工程Ｆの水性混合物が、約９部の極性有機溶媒と約１部の水とを含む請求 の範囲第９２項記載の粗タクサン混合物。
94. ９４．工程Ｆの水性混合物の極性有機溶媒が、アセトニトリルおよびメタノール からなる群より選ばれる請求の範囲第９１項記載の粗タクサン混合物。
95. ９５．工程Ｆの水性混合物の極性有機溶媒がメタノールである請求の範囲第９４ 項記載の粗タクサン混合物。
96. ９６．工程Ｆの水性混合物が、約５０％のメタノールと残余の水とを含む請求の 範囲第９１項記載の粗タクサン混合物。
97. ９７．工程Ｆの水性混合物が、約９部のメタノールと約１部の水とを含む請求の 範囲第９６項記載の粗タクサン混合物。
98. ９８．工程Ｆの有機溶媒が、ヘキサン、ペンタン、石油エーテル、ヘプタン、イ ソオクタンおよびそれらの混合物からなる群より選ばれる請求の範囲第９１項記 載の粗タクサン混合物。
99. ９９．工程Ｆの有機溶媒がヘキサンである請求の範囲第９８項記載の粗タクサン 混合物。
100. １００．第２の残渣を、ヘキサンを包含する非極性非混和性有機溶媒とメタノー ルおよび水を包含する水性混合物とで分配する請求の範囲第９１項記載の粗タク サン混合物。
101. １０１．第２の残渣を、水性混合物よりも大容積の非極性非混和性有機溶媒との 間で分配する請求の範囲第９１項記載の粗タクサン混合物。
102. １０２．第２の残渣を、約１部の第２の水性混合物と約２部の非極性非混和性有 機溶媒とで分配する請求の範囲第１０１項記載の粗タクサン混合物。
103. １０３．粗タクサン混合物が、タクソール、セファロマニン、デスアセチル−セ ファロマニン、バッカチンＩＩＩ、１０−デスアセチルバッカチンＩＩＩおよび １０−デスアセチルタクソールからなる群より選ばれるタクサン類を含有する請 求の範囲第８７項記載の粗タクサン混合物。
104. １０４．タクソールおよびセファロマニンを包含する２種以上のタクサン類を分 離するための方法であって、正常相クロマトグラフィーカラムにのせるに適した 溶媒中に２種以上のタクサン類を含有する混合物を供給する工程；移動相として 適した溶媒中の固体支持体を充填した正常相クロマトグラフィーカラムにタクサ ン含有混合物をのせる工程；および 十分な極性を有する移動相で正常相クロマトグラフィーカラムを溶出してタクソ ールおよびセファロマニンを別々に溶出することによりタクサン類を分離する工 程を具備する方法。
105. １０５．移動相が酢酸エチルおよび塩化メチレンの混合液である請求の範囲第１ ０４項記載の方法。
106. １０６．タクサン類の混合物を、塩化メチレン中約２０％の酢酸エチルの混合液 を用いるクロマトグラフィーカラムにかける請求の範囲第１０５項記載の方法。
107. １０７．実質的に純粋なタクソールを、酢酸エチル約４５％および塩化メチレン 約５５％で溶出した分画から集める請求の範囲第１０４項記載の方法。
108. １０８．実質的に純粋なセファロマニンを、酢酸エチル約５０％および塩化メチ レン約５０％で溶出した分画から集める請求の範囲第１０４項記載の方法。
109. １０９．ククサン含有植物素材からタクサン類タクソールおよびセファロマニン を得、これを分離する方法であって：タクサン含有植物素材の幹に多量の葉が付 いている本来のままの刈取物を供給し、この本来のままの刈取物を乾燥させてそ の揮発成分を減少させ、それにより実質的に乾燥した刈取物を作製し、およびこ の実質的に乾燥した刈取物を回収する工程、 この実質的に乾燥した刈取物から下記工程に従ってタクサンを抽出する工程： Ａ．植物素材を有機溶媒に接触させ、実質的に溶媒を含有しないタクサンに富む 第１の残渣を得る工程；Ｂ．第１の残渣を、タクサン類を溶解し得る有機溶媒と タクサンをほとんど溶解しない水性溶媒との間で分配して有機相と水相とを生成 させる工程； Ｃ．水相から有機相を分離し、実質的に水相を含まない有機相を回収する工程； Ｄ．第２の有機相から第２の残渣を生成させる工程；この有機相に、 Ｅ，タクサンを固体支持体に可逆的に付着させ得る溶媒に第２の残渣を溶解し、 溶解した第２の残渣を含む溶媒に固体支持体を導入して、この固体支持体に第２ の残渣のタクサン類を付着させ、固体支持体を溶媒から分離し、 続いて、タクサン類が付着した固体支持体を、異なるタクサン溶出特性を有する 溶媒系と接触させ、および固体支持体からタクサンに富む分画を粗混合物として 溶出させるか、または Ｆ．第２の残渣を水性混合物と非極性非混和性有機溶媒との間で分配し、ここで 、水性混合物は、単層の水および水と混和し得る極性有機溶媒を含み、極性溶媒 は、水性混合物中に、第２の残渣中に存在するタクサン類を水性混合物に配する に十分な量存在し、かつ 第２の水性混合物から粗タクサン混合物を回収する、のいずれかから選択される 最終処理を施す工程、処理ＥまたはＦのいずれかから得られた粗タクサン混合物 を、正常相クロマトグラフィーカラムにかけるのに適した溶媒中に供給する工程 であって、ここで粗タクサン混合物は２種以上のタクサン類を含有し； 移動相として適した溶媒中の固体支持体を充填した正常相クロマトグラフィーカ ラムにタクサン含有混合物をかける工程； 十分な極性を有する移動相で正常相クロマトグラフィーカラムを溶出してタクソ ールおよびセファロマニンを別々に溶出することによりタクサン類を分離する工 程、を具備する方法。
110. １１０．乾燥工程を約７０℃未満の温度で行なう請求の範囲第１０９項記載の方 法。
111. １１１．乾燥工程を約２０℃ないし約６５℃の温度で行なう請求の範囲第１１０ 項記載の方法。
112. １１２．乾燥工程は、遮られていない直射日光の下ではおこなわない請求の範囲 第１０９項記載の方法。
113. １１３．乾燥工程において、可視日光の約４０％ないし約８０％を植物素材に到 達させない請求の範囲第１１２項記載の方法。
114. １１４．乾燥工程において、植物素材の少なくとも２５％の重量減少が達成され る請求の範囲第１０９項記載の方法。
115. １１５．乾燥工程において、植物素材の約４０％ないし約７０％の重量損失が達 成されるまで植物素材を乾燥させる請求の範囲第１１４項記載の方法。
116. １１６．植物素材が、Ｔ．ｃｕｓｐｉｄａｔａ、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｈａｌｌ ｏｒａｎ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｈａｔｆｉｅｌｄ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′ Ｎｉｇｒａ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′Ｔａｕｎｔｏｎｉｉ′、Ｔ．Ｘ　ｍｅｄｉ ａ′Ｄａｒｋ　Ｇｒｅｅｎ　Ｓｐｒｅａｄｅｒ′、およびＴ．Ｘ　ｍｅｄｉａ′ Ｈｉｃｋｓｉｉ′からなる群より選択される請求の範囲第１０９項記載の方法。
117. １１７．第２の残渣に工程Ｆの最終処理を施す請求の範囲第１０９項記載の方法 。
118. １１８．工程Ｆの水性混合物が、約５０％の極性有機溶媒と残余の水とを含む請 求の範囲第１１７項記載の方法。
119. １１９．工程Ｆの水性混合物が、約９部の極性有機溶媒と約１部の水とを含む請 求の範囲第１１８項記載の方法。
120. １２０．工程Ｆの水性混合物の極性有機溶媒が、アセトニトリルおよびメタノー ルからなる群より選ばれる請求の範囲第１１７項記載の方法。
121. １２１．工程Ｆの水性混合物の極性有機溶媒がメタノールである請求の範囲第１ ２０項記載の方法。
122. １２２．工程Ｆの水性混合物が、約５０％をこえるメタノールと残余の水とを含 む請求の範囲第１１７項記載の方法。
123. １２３．工程Ｆの水性混合物が、約９部のメタノールと約１部の水とを含む請求 の範囲第１２２項記載の方法。
124. １２４．工程Ｆの有機溶媒が、ヘキサン、ペンタン、石油エーテル、ヘプタン、 イソオクタンおよびそれらの混合物からなる群より選ばれる請求の範囲第１１７ 項記載の方法。
125. １２５．工程Ｆの有機溶媒がヘキサンである請求の範囲第１２４項記載の方法。
126. １２６．第２の残渣を、ヘキサンを包含する非極性非混和性有機溶媒とメタノー ルおよび水を包含する水性混合物とで分配する請求の範囲第１１７項記載の粗タ クサン混合物。
127. １２７．第２の残渣を、水性混合物よりも大容積の非極性非混和性有機溶媒との 間で分配する請求の範囲第１１７項記載の粗タクサン混合物。
128. １２８．第２の残渣を、約１部の第２の水性混合物と約２部の非極性非混和性有 機溶媒とで分配する請求の範囲第１２７項記載の方法。
129. １２９．粗タクサン混合物が、タクソール、セファロマニン、デスアセチル−セ ファロマニン、バッカチンＩＩＩ、１０−デスアセチルバッカチンＩＩＩおよび １０−デスアセチルタクソールからなる群より選ばれるタクサン類を含有する請 求の範囲第１１７項記載の方法。
130. １３０．得られ、かつ分離されるタクサンがタクソールである請求の範囲第１２ ９項記載の方法。
131. １３１．工程Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、ＥまたはＦのいずれもが、１、２、３もしくは４ 回繰り返される請求の範囲第４０項記載の方法。
132. １３２．２種以上のタクサン類を分離するための工程のいずれもが、１もしくは ２回繰り返される請求の範囲第１０４項記載の方法。
133. １３３．いずれの工程もが、１、２、３もしくは４回繰り返される請求の範囲第 １３２項記載の方法。