JPH06509584A - 鏡像異性体ヒドロキシル化キサンチン化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 アテローム硬化症； 再狭窄。 冠状動脈疾患： 血管疾患； ヒト免疫不全ウィルス感染症； ＩＬ−１、ｍｔｐ−１．７、ＰＤＧＦもしくはＦＧＦに応答した、腎臓糸球体間 質細胞の増殖； 炎症； ／クロスボリンＡ又はアンホテリシンＢ治療に反応した腎臓糸球体もしくは尿細 管中毒； 細胞減少治療に応答した臓器中毒； 非アルキル化抗癌剤の抗癌作用の増強：細胞表面メタロプロテアーゼの産生又は ＩｇＨに反応したマスト細胞および好塩基球の脱顆粒反応を特徴とする炎症刺激 に反応したアレルギー；破骨細胞による破骨細胞活性化因子（ＯＡＦ）の過剰産 生によって惹起される骨疾患： 神経伝達物質のエピネフリン及びアセチルコリンのシグナル導入減少によって惹 起される中枢神経系（ＣＮＳ）疾患：及びこれらの組合せ： から成る群から選択される疾患を治療するための薬剤の製造への請求項１記載の 置換キサンチン化合物の使用。 ９、敗血症性ショックを含めた敗血症症状を治療又は予防するための薬剤の製造 への請求項１記載の置換キサンチン化合物の使用。 １０　細胞減少療法によって惹起される造血毒性又は器官毒性を治療又は予防す るための薬剤の製造への請求項１記載の置換キサンチン化合物の使用。 １１　ツクロスポリンＡ及びＦＫ５０６を含めた免疫抑制剤療法によって惹起さ れる副作用を治療又は予防するための薬剤の製造への請求項１記載の置換キサン チン化合物の使用。 １２。細胞減少療法によって惹起される疾患、禿頭症、脱毛又はアロベシア（１ １０ｐｅｃｉｉ）を治療するだめの薬剤の製造への請求項１記載の置換キサンチ ン化合物の使用。 １３　１１瘍に伴う苦痛、ホルモン関連障害、神経障害、自己免疫疾患、炎症、 再狭窄、高血圧、好ましくない免疫反応、ウィルス感染症、腎炎、結膜炎、アレ ルギー反応、及び中枢神経系の障害から成る群から選択される疾患を治療するｊ ：めの薬剤の製造への請求項１記載の置換キサンチン化合物の使用。 明細書 鏡像異性体ヒドロキシル置キサンチン化合物発明の分野 本発明は、ヒドロキシル置換キサンチン化合物の異性体（ｉｓｏｍｅｒ）は立体 特異的な細胞二次伝達経路を介した刺激に対する細胞応答を調節するのに有効な 薬剤であるという発見に関する。具体的には、本発明の化合物は、３，７−ジ置 換キサンチンの１位において置換された、直鎖アルキル（ＣＳ−Ｓ）のω−１ア ルコールのＲまたはＳ（好ましくはＲ）鏡像異性体（ｅｎａｎｔ　ｔａｍｅｒ） である。本発明の化合物は、特異的なｓｎ−２不飽和ホスフアチジン酸、および 細胞増殖刺激に応答してホスファチジン酸（ＰＡ）経路を介して生産される対応 するホスファチジン酸由来のジアシルグリセロールの細胞内レベルを制御するた めの有効な拮抗薬である。 背景技術 ベントキンフィリン（１−（５−オキソヘキシツリー３．７−シメチルキサンチ ン）（以下、ＰＴＸと呼ぶ）は、キサンチン誘導体で、血流増加のための医幕用 途に広く使用されている。ＰＴＸは米国特詐第３，４２２，３０７号および第３ ，７３７、４３３号に開示されている。ＰＴＸの代謝物については、Ｄａｖｉｓ らのＡｐｐｌｉｅｄ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．　４８： ３２７。 １９８４に総説が述べられている。ＰＴＸの代謝物の一つは１−（５−ヒドロキ シ・＼キシツリー３，７−シメチルキサンチン（以下、Ｍｌと呼ばれている）で あり、ラセミ混合物（ｒａｃｅｍｉｃ　ｍｉｘｔｕｒｅ）として得られている。 Ｍｔ（ラセミ混合物）もまた、（単に血流を増加するというのではなく）大脳の 血流を増加するものとして、米国特許第４，５１５，７９５号および第４，５　 ７　６，９　４　７号に開示されている。さらに、米国特許第４，８３３，１４ ６号および第５，０３９。 ６６６号は、大脳血流を増強するために、キサンチンのより短い炭素鎖を有する 第三アルコール類似体の使用を開示している。続く代謝の研究では、ＰＴＸはＳ 鏡像異性体に代謝されることが発見されている。 さらに、米国特許第４，６３６，５０７号は、ＰＴＸおよびＭｌ（ラセミ混合物 ）は走化性刺激因子に応答して多形核白血球に化学走性を引き起こす能力を有す ることが記載されている。ＰＴＸおよび関連する第三アルコール−置換キサンチ ンはある種のサイトカインの活性を抑制し、化学走性に影響を与える（米国特許 第４，９６５，２７１号および米国特許第５，０９６，９０６号）。同種異系骨 髄移植を受けた患者にＰＴＸおよびＧＭ−Ｃ３Ｆを投与すると、患者の腫瘍壊死 因子（ＴＮＦ）のレベルが下がる（Ｂ　ｉ　ａ　ｎ　ｃ　ｏら、　Ｂｌｏｏｄ　 ７６：Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ　１（５２２Ａ）、１９９０）。ＴＮＦの検出可能 なレベルでの減少に伴い、骨髄移植に関連する合併症も減少した。しかし、健常 な志願者では、ＰＴＸ投与を受けた者のＴＮＦレベルは高かった。従って、ＴＮ Ｆレベルの上昇はこれらの合併症の主要な要因ではない。 キラル中心を有する薬剤は、通常ラセミ化合物として販売される。どの開示を見 てもＭ１代謝物１ま立体特異性である。実際、（人体内の代謝により）ＭｌはＳ 異性体のみまたは主にＳ異性体として生産されるようである。薬剤をラセミ混合 物として製造し服用することは、薬剤の各服用量に、通常は治療上の価値がなく 予想外の副作用を引き起こす可能性のある異性体が等景況ざっていることを意味 する。例えば、鎮静剤のサリドマイドはラセミ混合物として販売された。望みの 鎮静活性はＲ異性体が有していｔ；が、混ざっているＳ異性体は催奇物質で、こ の薬剤を使用している母親から生まれた赤ん坊に先天的欠損症を引き起こす。結 核菌抑制剤のエタンブトールのＲ，Ｒ−鏡像異性体は失明を引き起こす可能性が ある。非ステロイド系抗炎症剤ベノキサプロフエン（Ｏｒａｆｌｅｘ”）の致死 に至らしめる副作用は、もしこの薬剤が純粋な鏡像異性体として販売されていた ならば避１すら１１ｆ二かもしれない。 鏡像異性体の純度の課題は医薬の分野に限られない。例えば、ＡＳＡＮＡ　（’ Ｐ、＝イソプロピル）は二つの非対称中心を有する合成ピレスロイド殺昆虫剤で ある。有効な殺昆虫活性の大半は、可能性のある４種類の立体異性体のうちのた だ一種類にのみ存在する。さらに、殺昆虫作用を有しない３種類の立体異性体は ある種の植物種に対して細胞毒性を示す。従って、ＡＳＡＮＡは、立体異性体の 混合物は適当でないので、単一の立体異性体としてのみ販売され得る。 従って、人間または動物に安全かつ効果的に投与でき、種々の炎症性刺激に対し て恒常性（ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ）を維持でき、そして、単一の異性体に存在 する活性を有するように鏡像異性体として純粋な効果的な治療用の化合物を発　 □見することが、当該分野において必要である。本発明は、そのような化合物を 探す過程において行われた。 発明の概要 本発明者らは、本明細書中に記載されている化合物は、種々の炎症性および増殖 刺激を受けた非常に多様な細胞において恒常性の維持に使用することができるこ とを発見した。さらに、本発明の化合物および医薬組成物は、通常の薬剤投与経 路（例えば、経口投与、局所投与、非経口投与など）に適しており、有効な投与 量を提供することができることを発見した。 本発明の化合物および医薬組成物は、３，７−ジ置換キサンチンの１位において 置換された直鎖アルキル（Ｃｓ−ａ）のω−１アルコールの、分離されたＲまた はＳ（好ましくはＲ）鏡像異性体である。本発明の化合物は、このような化合物 を有効量投与する特定の投与方式と同様に、外部刺激またはｉｎ　５ｉｔｕ−次 刺激に対する細胞応答を調節するのに有効である。 本発明の化合物は、下記の式： ［式中、Ｒ１は独立に、ω−１第ニアルコールで置換されたアルキル（Ｃ５−Ｓ ）の実質的に他の鏡像異性体を含まない分離された鏡像異性体であり、Ｒ２およ びＲ１は独立に、所望により炭素原子の代わりに１つ、または隣接しない２つの 酸素原子を含んでいてもよいアルキル（Ｃ＋−１りである〕のキサンチンコアか ら成る化合物および該化合物を有する医薬組成物を構成する。Ｒ，は、好ましく はＲ鏡像異性体として水酸基を有するＣ、アルキルである。 本発明はさらに、本発明の化合物および薬学的に受容可能な助剤から成り、患者 に経口的、非経口的、または局所的な投与により処方される、医薬組成物を提供 する。 本発明はさらに、外部からの若しくはｉｎ　５ｉｔｕの一次刺激に対する免疫応 答若しくは（細胞の細胞膜の内部葉状組織の隣接部で機能する、特異的なリン脂 質ベースの第二メツセンジャーによって媒介される）細胞性応答が抑制されるこ とにより特徴付けられる、または、そのような抑制により治療される、種々の病 気を有する患者を治療する方法を提供する。第二伝達経路は、種々の病状に特徴 的な種々の有毒なまたは増殖的な刺激に応答して活性化される。この第二伝達経 路の生化学について本明細書に記載する。より具体的には、本発明（′ｉ、ここ に記載される第二伝達経路をプルだ細胞シグナルを抑制することｌこよって、種 々の病状の臨床上の症状を治療若しくは予防する、または他の治療による毒性を 緩和する方法に関する。病状または治療による毒性は、下記のものからなるグル ープから選択される。 活性化癌遺伝子に応答した癌細胞の増殖；細胞減少治療（ｃｙｔｏｒｓｄｏｃｌ ｉｖｅｌｈｅｒｚｐｉｅｓ）又は微生物性病原体の感染による血球細胞欠損（ｂ Ｃｍａｔｏｃｙｔｏｐｅｎｉａ）　；Ｔ細胞応答若しくはＢ細胞応答、および抗 体の生産による自己免疫疾、咀；敗血性ソヨック； 腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）に対する間葉細胞の耐性；ＰＤＧＦ−ＡＡ、ＢＢ、ＦＧ Ｆ、ＥＧＦ等の成長因子ｌこ応答しｔこ平滑筋細胞、内皮細胞、繊維芽細胞およ びその他の細胞種の増殖のような、細胞増殖まＩこ１よ細胞活性の税制ｉ！１（ 例えば、アテローム硬化、再狭窄、卒中および冠状動脈疾、も）： ヒト免疫不全ウィルス感染（ＡＩＤＳおよびＡＩＤＳ関連合併症）；ＩＬ−１、 ｍ１ｐ−１＋ｙ、ＰＤＧＦ、またはＦＧＦＩこ応答しＩコ腎糸球体間質細胞の、 種々の炎症性腎臓疾患を引き起こす増殖；炎症； ７・タロ又ポリｚＡ（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎ　Ａ）まｔこｌ′ｉアムホテ１ノ シンＢ（ａｍｐｈｏｔｅｒ　ｉｃ　ｉｎ　Ｂ）治療に応答する腎臓糸球体まｌこ （よ腎臓管の毒性； 細胞減少治療（例えば、細胞毒性薬剤または放射線）に反応した器官中毒（′例 えば、胃腸上皮または肺上皮）； 非アルキル化抗癌剤の抗癌作用の増強：細胞表面メタロプロテアーゼの生産また はＩｇＥに反応したマスト細胞および好塩基球の脱顆粒反応（ｄｅｇｒａｎｕｌ ａｔ　１ｏｎ）を特徴とする、炎症性刺激（例えば、ＴＮＦ、ＩＬ−１およびこ れらに類するもの）への反応したアレルギー； 破骨細胞による破骨細胞活性化因子（ＯＡＦ）の過剰生産による骨の疾患；神経 伝達物質エピネフリンおよびアセチルコリンによるシグナル伝達の減少による中 枢神経系（ＣＮＳ）疾患；並びにこれらの組み合わせ。 特定のサイトカインを発現するように、または、増殖刺激若しくは有毒な刺激に 応答して増殖するように細胞が刺激される場合、この刺激は特異的なリン脂質ベ ースの第二メツセンジャーシグナル伝達経路を介して伝達される。この第二伝達 経路により、５ｎ−２非アラキドン酸不飽和化合物を含む一群のホスファチジン 酸（ＰＡ）のレベルが上昇し、該ホスファチジン酸（ＰＡ）は対応するジアシル グリセロール（ＤＡＧ）に迅速に変換される。本発明の化合物および医薬組成物 は、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）経路のような、細胞の正常な調節機能 に関与する他の第二伝達経路に影響を与える二となく、この第二伝達経路に関与 する立体特異的な酵素を特異的に抑制する。ここに記載する、該第二伝達経路に 関与する１つまたは複数の酵素の抑制による効果は、刺激、特に有害な刺激に対 する標的細胞の応答を”調節”することである。この生化学な現象（即ち、サイ トカインのような一次刺激に応答する、第二伝達経路酵素の活性の抑制）は細胞 シグナルに影響を与え、異常な、炎症性のまたは有害な細胞シグナル機構による 多くの多様な病状に効果を及ぼす。 図面の簡単な説明 図１は、ＣＴ　１５０１　Ｒ（Ｒ−（−Ｘ５−ヒドロキシヘキシル）テオブロミ ン）およびＰＴＸに対する混合リンパ球反応を示すｅ混合リンパ球反応は、ツー ウエイ方式の混合リンパ球反応によって調べたところ、同種異系刺激に対してＰ ＢＭＣ（末梢血単核細胞）の増殖反応を示す。ＣＴ１５０１ＲおよびＰＴＸは共 に、この免疫調節活性測定方法において用量作用活性を示した。 図２は、抗ミュー抗体、ＩＬ−４、または抗ミュー抗体にＩＬ−４をクロスリン クしたものによって刺激されたマウスＢ細胞の増殖のＣＴｌ５０１Ｒによる抑制 効果を示す。 図３は、コンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）とインターロイキン−１α（Ｉ　Ｌ−１ σ若しくはインターロイキン−２（ＩＬ−２）による増殖のＣＴ１５０１Ｒによ る抑制効果を示す。ＣｏｎＡとＩＬ−１α若しくはＩＩ、−２による活性化の２ 時間前に、ＣＴ１５０１Ｒを示した用量だけ加えた。図３に示されるように、Ｃ Ｔ１５０１Ｒは胸腺細胞の増殖を用量依存的に抑制した。バックグランドは２０ ０ｃｐｍより小さかっに。 図４は、ＰＤＧＦ　（血小板由来成長因子）およびＩＬ−１によって刺激された 平滑筋の増殖のＣＴ１５０１ＲおよびＰＴＸによる抑制効果を示す。ＰＤＧＦお よびＩＬ−１による活性化の２時間前にＣＴ１５０１ＲおよびＰＴＸを別々に加 えた。図４に示されるように、両薬剤共、テストした中で高い用量を用いた場合 に平滑筋細胞の増殖を抑制した。ＣＴ１５０１ＲはＰＴＸよりも活性が高かった 図５は、マウスのエンドトキシンによる致死のＣＴ１５０１Ｒによる抑制を、最 大６回の独立した実験における生存マウスの累積パーセントで示す（Ｎ−実験回 数）。動物に１０μｇ／ｇｍのＬＰＳを投与した（静脈注射）。ＬＰＳを与えた 直後（１＝０）、２時間後（ｔ＝２）、または４時間後（ｔ−４）にマウスにＣ Ｔ１５ＱＩＲ（ｌｏｏｍｇ／ｋｇ、腹腔内投与）の１回目の投与を行った。その 後、マウスにＣＴ１５０１Ｒを１日に３回投与し、動物の生存率をモニターしｔ 二。 図６は、エンドトキシン処理後のマウス血清ＴＮＦ−ａレベルを示す。多値は、 ２回のＥＬＩＳＡ測定の平均からなる、２回の実験の平均値を示しており、各点 は３匹のマウスからプールした血漿について価を示す。 図７は、マウス血漿Ｉ　Ｌ　−１ａＥＬ　Ｉ　ＳＡ測測定データを示す。データ は、２回のＥＬＩ　ＳＡ測測定平均からなる、１回の実験の平均値を示しており 、各点は３匹のマウスからプールした血漿について価を示す。 図８は、マウス血漿ＩＬ−６ＥＬＩＳＡ測定のデータを示す。データは、２回の ＥＬＩＳＡ測定の平均からなる、１回の実験の平均値を示しており、各点は３匹 のマウスからプールした血漿について価を示す。 図９は、ＣＴ１５０１Ｒの大量合成工程の流れ５！Ｊ（７０−チャート）を示す 。 図１Ｏは、５−フルオロウラシルで処理し／：ｆｉ（Ｏ８目）、１８目がらＣＴ ｌ５０１Ｒまたは媒体コントａ−ルを２回７日投与したマウスの平均ＷＢＣを示 す。この実験は、図１０−１３で述べられるように造血のｉＨＶｉＶＯモデルで ある。各時点において４匹のマウスのグループを瀉血した。グラフの多値は平均 値±ＬＳＤを示す。 図１１は、５−フルオロウラシル ５０１Ｒまたは媒体コントロールを２回７日投与したマウスの平均血小板数を示 す。各時点において４匹のマウスのグループを瀉血した。グラフの多値は平均値 ±ＩＳＤを示す。 図１２は、０８目からＣＴ１５０１Ｒまたは媒体コントロールを２回７日投与し たマウスの平均好中球数を絶対値で示す。各時点に８いて４匹のマウスのグルー プを瀉血した。グラフの多値は平均値±ＩＳＤを示す。 図１３は、５−７ルオロウラシル ５０１Ｒまたは媒体コントロールを２回／日投与したマウスの平均ＣＦＵ−ＧＭ ／大腿骨を示す。各時点において４匹のマウスのグループを殺し、一本の大腿骨 を採集する。グラフの多値は、三回の培養でテストした各個体光たりのコロニー 数の平均値±ＩｓＤを示す。 図１５および１６は、ＣＴ１５０１Ｒを、別の敗血症ショック薬剤である、二官 能性ＴＮＦ受容体（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社）（Ａｓｈｋｅｎａｚｉら．、Ｐｒｏ ｃ．Ｎａ　ｔ　１．Ａｃａｄ．Ｓｃ　ｉ．ＵＳＡ　８８：１０５３５，１９９１ ）の公表されている値と比較したものである。両薬剤は、致死量のＬＰＳ　（エ ンドトキシン）投与とほぼ同時に（図１５）、または２時間後に（図１６）投与 した。このｉｎ　ｖｉｖｏ実験の比較ンリ〜ズでは、薬剤投与の時間に関係なく 、ＣＴ１５０１Ｒの方がＧｅｎｅｎｔｅｃｈ社製ＴＮＦ受容体よりも一貫して生 存率の増加を促進した。 図１７は、ＣＴ１５０１Ｒ，そのＳ異性体であるＣＴ１５０１Ｓ，およびＰＴＸ のリソホスファチジン酸アシルトランスフェラーゼ（ＬＰＡＡＴ）（第二メ・ソ セノソ゛ヤー／グナル伝達に関与する酵素）に対するｉｌ　ｖｉｖｏ抑制一つし １での比較を示している。図かられかるように、臨床現場で達成可能なＩＣ５０ 濃度においてＣＴ１５０１Ｒのみが酵素活性を著しく阻害した。ＬＰＡＡＴ活性 １ま■Ｌ−１βで刺激した３Ｔ３　Ｒａｓ形質転換繊維芽細胞を用し゛て決定し ｔ；。 図１８は、ＬＰＳ活性化マウス腹腔マクロファージからのＴＮＦ−σの遊離のＣ Ｔ１５０１Ｒによる抑制の用量作用曲線を示す。細胞を単離し、ＬＰＳ活性化（ 　ｌ　Ｏ　ｍ　ｇ　／ｍ　ｌ　）の１時間前に種々の濃度のＣＴ１５０１Ｒの処 理をする力）、または処理を行わなかった。２４時間後に上清を集め、ＥＬＩＳ ＡＩこよってＴＮＦ−αについて分析した（＋，／ーＳＤ）。 図１９は、ＬＰＳ活性化ＰＥＣにおけるＩＬ−１σの遊離のＣＴ１５０１Ｒｉこ よる抑制を示す。細胞を単離し、ＬＰＳ活性化（１０μｇ／ｍＩ）の１時間前番 二ＣＴ１５０１Ｒ　（２５０μＭ）の処理するか、または処理を行わな力１つｊ こ。所定の時間経過後に上溝を集め、ＥＬＩＳＡによってＩＬ−１α番二つｌ／ 〜て分析しＩこ（↓・−ＳＤ）。 図２０は、ＩＬ−１σ活性化マウス腹腔マクロフアージからのＴＮＦ−σの遊離 の抑制を示す。細胞を単離し、ＩＬ−１σ活性化の１時間前番二ＣＴ１５０１Ｒ （２５０ＩＩＭ）の処理をするか、または処理を行わなかった。活性化力１ら２ ４、４８、または７２時間経過後に上清を集め、ＥＬＩＳＡｉこよってＴＮＦ− αについて分析した（＋／−ＳＤ）。 図２１は、Ｕ９３７細胞の活性化ＨＵＶＥＣへの接着の抑制を示す。ＨＵＶＥＣ に２５０μＭＣＴ１５０１Ｒを加えた後１時間後に、また１よ加え泊こ、ＩＬ− ｌａ　（１００ｎｇ／ｍ＋）；ＴＮＦ−ａ　（Ｌｏｎｇ／ｍｌ）若しく（よＬＰ Ｓ　（１０ｍｇ／ｍｌ）で刺激した。１２時間後に、細胞のＢＣＥＣＦラベルし にＵ９３７細胞への接着について分析しｔ：。図２２は、各処理グルリーグの相 対ＢＣＥＣＦ蛍光（＋／−ＳＤ）を示す。 々の濃度のＩＬ−１αで刺激した。１２時間後に、Ｕ９３７細胞をＢＣＥＣＦで 標識し、ＨＵＶＥＣへ接着させた。図２１は、各処理グループの相対ＢＣＥＣＦ 蛍光（＋／−ＳＤ）を示す。 発明の詳細な説明 本発明は、第二メンセンジャー伝達系（Ｂｕｒｓｔｅｎら．、Ｊ．Ｂｉｏｌ。 Ｃｈｅｍ．２６６：２０７３２，１９９１）の特定の段階において細胞の反応を 制御することができる一群の特定化合物に向けられている。第二メツセンジャー は脂質またはリン脂質であり、以下の略語を使用する。 ＰＥ−ホス７アチジルエタノールアミンＬＰＥ−リソホス７オエタノールアミン ＰＡ＝ホスフアチジン酸 ＬＰＡ＝リソホスファチジン酸 ＤＡＧ＝ジアシルグリセロール ＬＰＬＤ＝リソホス７オリバーゼーＤ ＬＰＡＡＴ−リソホスファチジン酸アシルトランスフェラーゼＰＡＰＩ＝ホスフ ァチジン酸ホスフォヒドロラーゼＰＬＡ２＝ホスフォリパーゼＡ−２ ＰＬＤ＝ホスフオリパーゼＤ ＦＡＡ−ホス７オアラキドン酸 ＰＬＡ−２−ホスフォリパーゼＡ２ ＰＣ−ホスファチジルコリン ”再生成”ＰＡサイクリック経経路断所定ｓｎ−１及びｓｎ−２位置において， Ｌ飽和の２−リルオイルまたは１．２−ジレオリル／　１　、　２　−　ｓ　ｎ −シリルオイルで置換されたＰＡＤ、ＬＰＡ％ＦＡおよびＤＡＧ中間体”古典的 ＰＩ経路”−ｌ−ステアロイル、２−アラキトメイル脂肪酸アシル側鎖で置換さ れたＰＩ，ＤＡＧ１ＰＡ中間体”　ＰＬＤによって生成されるＰＡ”−例えば、 １．２−ｓｎ−ジオレオイル、ｌ−アルキル、２−リルオイル、および１−アル キル、２−ドコサヘキサノイル側鎖によって置換されているＰＥＳＰＣ，ＬＰＡ ％ＰＡ．およびＤＡＣ中間体　リソホスファチジン酸トランスフェラーゼ（ＬＰ ＡＡＴ）は、アシルＣｏＡからアシル基を導入することによって、リソホスファ チジン１（ＬＰＡ）からのホスファチジン酸（ＰＡ）への合成に関与する。ＰＡ ホスフォヒドロラーゼ（ＰＡＰＨ）によるホスフェート部分の加水分解によって ＤＡＣが生成される。経路のこれらの現象は、細胞表面上の受容体に働く一次刺 激（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２またはＴＮＦなどのサイトカイン）による刺激 によって直ちに（１分以内）誘導されると思われる。迅速な検出可能な効果とし ては、ＰＡおよびＤＡＣレベルの上昇がある。本発明の化合物の投与によってこ の上昇が抑制される。 本発明の化合物および医薬組成物は、１．２−シネ飽和およびｌ−アルキル。 ２−不飽和亜種を有する中間体に対する基質特異性を有する、ＰＡＰＨ酵素のＬ ＰＡＡＴ亜種のインヒビターを含む。そのようなインヒビターの代表的な例の１ つは（本発明の化合物には含まれないが）ＰＴＸである。ＰＩは含まず、主に１ ．２−シネ飽和および１−アルキル、２−不飽和亜種からなるＰＡに由来する特 異的な活性経路において、ＰＴＸｌｉＰＡＰＨをブロックする。これは、例えば 、ＴＮＦで刺激されたヒト糸球体間質細胞はＰＩからＤＡＣを生産し、ＰＴＸ非 存在下および存在下でＰＩを再生する現象によって示される。後者の機構でＰＡ またはＤＡＣがＰＩ以外のソース（ｓ　ｏ　ｕ　ｒ　ｃ　ｅ）から由来すること を示唆する証拠は何もない。本発明の化合物は、５ｎ−２位置にアラキドン酸以 外の不飽和脂肪酸を有する基質に関与する一部のＰＡＰＨおよびＬＰＡＡＴに影 響を与えるが、これらの酵素のＰＩ経路に関与する調節機能型には与えないこと を強調したい模１Ｂ脂質の各サブクラス（例えば、ＰＡＳＰＩ、ＰＥ％ＰＣおよ びＰＳ）は、各サブクラスの代謝回転（ｔｒｕｎｏｖｅｒ）と共に原形質膜の循 環再生産にＪ、って、−＝定量の特徴的な脂肪性アシル側鎖を有する。ＰＡはお おむね安定であるが、比較的少量しか存在しない。休止細胞中のＰＡは、主に、 通常ミリスチン酸、ステアリン酸およびバルミヂ）酸からなる飽和アシル側鎖か ら構成される。 休止細胞では、ＰＣのアシル側鎖は、５ｎ−１位置のアシルパルミチン酸およ５ ｎ−＝２２位置すレイン酸からなる。ＰＥおよびＰＩは主に、５ｎ−１ステアリ ン酸および５ｎ−２アラギドン酸からなる。 このように特徴的アシル基を５ｎ−１８よび５ｎ−２の位置に有することがら、 ＰＡ種の由来は、５ｎ−１および５ｎ−２の位置のアシル基の化学的性質から導 き出すことができる。例えば、ＰＡが酵素ＰＬＤの働きによってＰＣに由来する 場合には、第二伝達経路を経由したＰＣ基質に特徴的なアシル側鎖を含むであろ う。さらに、全ての１，２ｓｎ−基質種の由来は、その由来に従って識別される であろう。しかし、各リン脂質種がＤＡＣに加水分解される前にＰＡの型を経由 するか否かを知ることが重要である。ＰＡに、続いてＤＡＣに変換されるリソ− ＰＡが示されるであろう。この第二伝達経路の複雑さについては、第二メツセン ジャーの刺激の後、所定の時間経過後の細胞における中間体の脂肪性アシル側鎖 化学（即ち、薄層クロマトグラフィーまたは高圧液体クロマトグラフィー）の適 切な分析によって解決することができる。 好中球、並びに、ラット若しくはヒト糸球体間質細胞のようなある種の糸球体間 質細胞においては、数種のシグナル伝達経路が直列的に、同時に、またはその両 方で活性化されると考えられる。例えば、好中球においては、Ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅ ｕ−ＰｈｅはＰＬＤの作用を介してＰＡの形成を刺激し、やがて、ひき続いてＰ ＡＰＨの作用を介してＤＡＣが形成される。数分後、古典的ホスフォイノシトー ル経路を通してＰＩからＤＡＣが生成される。多くの細胞では、ＤＡＣは、ＰＡ ＡかＰＬＡ−２によって５ｎ−２加水分解され続いてＬＰＡＡＴによって５ｎ− ２トランスアンル化されるサイクルによって再生成されたＰＡ、並びにＰＬＤに よってＰＥ、ＰＣまたはその双方の基質から生成されたＰＡからのＰＬＤ経路の 両方から生成される。 ここに記載される方法は、ＰＡおよびＤＡＣの多様な亜種をア／ル鎖組成に基づ いて識別することを可能にする。この方法によって、本発明の第二伝達経路を古 典的ＰＩ経路のような他の経路と区別して活性化する（および活性を抑制する） 化合物を区別することができる。本発明の第二伝達経路は、５ｎ−２位置にアラ キドン酸塩以外の不飽和脂肪酸を有する基質、並びに、古典的ＰＩ経路の一部で ある正常な細胞調節機構に関与しないＰ　Ａ　Ｐ　ＨおよびＬＰＡＡＴの亜種を 含む。本発明の第二伝達経路に関与するＰＡＰＨおよびＬＰＡＡＴ酵素は、基質 の異なるアシル側鎖および異性体型に対し精密に立体特異的である。従って、本 発明の化合物は、実質的に純粋な鏡像異性体であり、好ましくは水酸基に結合し たキラル炭素原子においてＲ鏡像異性体である。例えば、ＣＴ１５０１のＲとＳ の異性体は、区１２に示したように異なるＬＰＡＡＴ抑制活性を持っている。さ らに、ＣＴ１５０１のＲ鏡像異性体（例えば、ＣＴ１５０１Ｒ）は、ラセミ混合 物（以下、Ｍｌと呼ぶ）より２−３倍、そして、対応するＳ鏡像異性体よりさら にその何倍もの効果を及ぼず。さらにまた、ＰＴＸはヒト体内で代謝されると、 はとんとがＭｌのＳエナチオマー、またはＣＴ１５０１Ｓに変換される。 ＰＴＸ（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）は（用量限度副作用を起こさずに患者に与えられる 濃度を越えた）高い濃度において、ＬＰＡＡＴにおけるＰＡ亜種の生成を阻害す ることによってＰＡ／ＤＡＣ経路を介した再生成ＰＡの形成を阻害する。ＰＴＸ の存在下においてさえも、細胞はＰＬＤの働きによってＰＡを生産し続け、また ＤＡＣもホスフォリパーゼＣの作用によってＰＣＢよびＰＩから生成される。 後者の経路は本発明の化合物またはＰＴＸによって抑制されない。ＰＴＸ処理し た細胞では、再生成またはＰＬＡによって生成されるＰＡに由来するＤＡＣ（例 えは、１．２−ｓｎ−ジオレオイルＤＡＧ、ｌ−アルキル、２−リルオイルＤＡ Ｇ、および１−アルキル、２−ドコサヘキサンオリルＤＡＧ）は消失する。従っ て、本発明の化合物およびＰＴＸは、有害な刺激によって細胞内で活性化される が、正常な細胞調節機構のノブナル伝達には利用されない、特異的な第二伝達経 路を選択的に抑制することによって、特定の種のＰＡおよびＤＡＣの生成のみを 抑制する。 本発明の化合物の治療上の用途 主に種々の有害な刺激によって活性化される特異的な第二伝達経路の活性化のｒ ｆ異的な抑制は、本発明の化合物に多様な臨床適応症を治療するのに使用できる 可能性を提供する。さらに、例えば炎症性サイトカインを介した有害刺激によっ て活性化されるが、本発明の化合物によって特異的に抑制される、特異的な第二 メツセンジャーの活性化という共通点を共にする、多様な臨床適応症の予想デー タが、ここに示されたｉｎ　ｖｉｔｒｏおよび！ｎ　ｖｉｖＯのデータによって 提供される。実際、本発明の化合物が多様な異なる臨床適応を有することができ る理由は、本発明の化合物のこの活性機構によって説明される。本発明の第二伝 達経路の活性化は、有害な刺激に対する応答の主要な媒体であり、例えば、炎症 、免疫応答、血球細胞の再生の抑制および癌細胞の増殖を引き起こす細胞シグナ ルとなる。しかし、全てのインヒビターがこの第二伝達経路の全ての酵素を阻害 するわけではない。本発明の化合物は、炎症および血球細胞再生抑制の最も効果 的な媒体である。本発明の第二伝達経路によって伝達されるシグナルには、例え ば、ＬＰＳによる直接の細胞応答、抗原によるＴ細胞活性化、抗原によるＢ細胞 活性化、ＩＬ−１タイプ１受容体によって伝達される（ＩＬ−１タイプ２受容体 によっては伝達されない）ＩＬ−１に対する細胞応答、ＴＮＦ　タイプ１受容体 、活性化癌遺伝子（例えば、ｒａｓ、ａｂｌ、ｈｅｒ２−ｎｅｕ等）、低親和性 ＧＭ−Ｃ５Ｆ　（顆粒球マクロファージコロニー刺激因子）受容体、並びに、Ｐ ＤＧＦ、ｂ−ＦＧＦおよびＩＬ−１によって刺激された平滑筋細胞増殖が含まれ る。本発明の第二伝達経路を介しては伝達されないシグナルもあり、これらのシ グナルには、例えば、Ｇ−Ｃ３Ｆ　（ｆｉｔ粒球コロニー刺激因子）、インター ロイキン−３（ＩＬ−３）　、ＳＣＦ　（幹細胞因子）およびＧＭ−Ｃ５Ｆによ って誘導された造血細胞の増殖：インターロイキン−８（ＩＬ−８）またはロイ コトリエンＢ４によって誘導された好中球活性、ＩＬ−２に応答したＴ細胞増殖 ；並びに酸性ＦＧＦ　（繊維芽細胞成長因子）に応答した上皮細胞増殖、が含ま れる。 Ｉｎ　ｖｉｔｒｏでは本発明の化合物は下記の機能を有する：（１）例えば、Ｉ Ｌ−１、およびＰＤＧＦ　（血小板由来成長因子）を加えたＩＬ−１によって誘 導される平滑筋細胞および腎臓糸球体間質細胞の増殖の抑制によって示されるよ うに、ＩＬ−１シグナルのタイプ１受容体を介した伝達を阻止する； （２）例えば、好中球のＣＤ１８の上皮細胞における管細胞接着分子（ＶＣＡＭ ）の阻止によって示されるように、接着分子の調節を抑制する；（３）ＴＮＦお よびＩＬ−１によって誘導されるメタロプロテアーゼを抑制する（炎症のモデル ）； （４）ＬＰＳ誘導細胞活性化を阻止する（敗血症ショックの予防および治療）； （５）抗原または架橋ＣＤ複合体によるＴ細胞およびＢ細胞の活性化を抑制する ； （６）ＩｇＧによるマスト細胞活性化を抑制する：そして（７）形質転換細胞お よび癌細胞系の悪性表現型を抑制する。 前述のｉｌ　ｖｉｔｒｏ効果から、以下のようなｉｎ　Ｖ！ＶＯ生物学的効果が 得られる。該ｉｎ　ｖｉｖｏ生物学的効果には、内毒素ショックの予防および治 療、癌細胞増殖の抑制、細胞減少治療後の造血細胞の刺激、ＧＶＨＤ　（移植細 胞対宿主病）予防のための相乗的免疫抑制、および細胞枯死過程（ａｐｏｐｔｏ ｔｉｃ　ｐｒｏｃｅｓｓ）の抑制を介した育毛の刺激が含まれるがこれらに限ら れない。内毒素ショックの治療および予防、細胞減少治療後の造血細胞の刺激、 およびヌードマウスにおける育毛の刺激に関するｉｎ　ｖｉｖｏのデータをここ に示す。本発明の化合物、特にＣＴ１５０１Ｒは、造血の刺激、敗血症ショック の予防および治療、並びに局所的に育毛の刺激に利用するために適用した場合に 最も効果かある。本発明の第二伝達経路の抑制剤は免疫抑制、急性炎症、慢性炎 症およびＧ　Ｖ　ＨＤに対しても活性を有するが、本発明の化合物は、これらに 対しては前述の症状に対する程有効でなく、より高い分子濃度を必要とする。 本発明の化合物はさらに、本発明の第二伝達経路を通じて伝達される薬剤の副作 用を抑制する補助剤として有用である。これらの副作用には、例えば、インター ロイキン−２（ＩＬ−２）の副作用、シクロスポリンＡおよびＦＫ５０６の腎臓 副作用、並びにアンホテリシンＢの副作用が含まれる。本発明の化合物は、抗原 誘導されるＴ細胞の活性化を抑制する点はシクロスポリンまたはＦＫ５０６と共 通するが、ＮＫおよびＬＡＫ細胞の生成を阻害せず、Ｔ細胞からのＩＬ−２の遊 離およびＩＬ−８の遊離を抑制しない点は異なることに注目すべきである。 メタロプロテアーゼは、腎糸球体疾患、関節炎による関節破壊、および気腫によ る肺破壊のような組織破壊を媒介し、癌転移に関与する。メタロプロテアーゼの ３種類の例として、ＴＮＦ、ＩＬ−１，およびＰＤＧＦ＋ｂＦＧＦによって誘導 される９２ｋＤタイプ■ゼラチナーゼ、通常は構成酵素であり、ＴＮＦ若しくは ＩＬ−１によって誘導もされる７２ｋＤタイグ■コラゲナーゼ、並びに、ＴＮＦ 若しくはＩＬ−１によって誘導されるストロメリシン／ＰＵＭＰ−１が挙げられ る。本発明の化合物は、ＴＮＦまたは！Ｌ−１による９２ｋＤタイプ■ゼラチナ ーゼ誘導性メタログロチアーゼを抑制することができる。さらに、ＣＴ１５０１ Ｒは１００Ｕ／ｍｌのＩＬ−１によって誘導されたＰＵＭＰ−１活性をコントー ル値の１５％に減少させた。同じ実験によって対照してみると、ＰＴＸはコント ール値の９５％にしか減少させず、この値は存意ではなかった。従って、本発明 の化合物は、ＩＬ−１若しくはＴＮＦによって誘導されるある種のメタロプロテ アーゼの誘導を阻害するが、正常な組織再生成に関与する構成性のプロテアーゼ （例えば、７ＺｋＤタイプ■コラゲナーゼ）には関与しない。 本発明の化合物はタイプＩＩＬ−１受容体を介したシグナル伝達を阻害するので 、ＩＬ−１アンタゴニストであると考えられる。′疾患におけるインターロイキ ン−１の機能”　（Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ　とＷｏｌｆｆ　Ｎ、Ｅｎｇｌ、Ｊ、Ｍ ｅｄ、３２８，１０６．Ｊａｎ、１４．１９９３）という題名の最近の総説には 、ＩＬ−１の機能は″疾患の重要、迅速かつ直接的な決定因子”であると記載さ れている。″例えば、敗血症では、ＩＬ−１は血管に直接働きかけて血小板活性 化因子および一酸化窒素の迅速な生産を介して血管拡張を誘導する。一方、自己 免疫疾患では、他の細胞を刺激して標的細胞に働くサイトカインまたは酵素を生 産させる。”この総説は、ＩＬ−１によって媒介される一部の病気について記載 している。それらには、敗血症症候群、関節リウマチ、炎症性腸疾患、急性およ び骨髄性白血病、インシュリン依存性真性糖尿病、アテローム硬化、並びに、移 植拒絶、移植細胞対宿主ｔｇ（ＧＶＨＤ）、乾Ｎ、ぜん息、オステオポローシス 、歯根膜疾患、自己免疫甲状腺炎、アルコール性肝炎、子宮感染に伴う早期分娩 、さらに睡眠障害までも含むその他の病気、が含まれる。本発明の化合物はＩＬ −１タイプ■受容体を介した細胞シグナルを抑制するＩｔ−１アンタゴニストな ので、上述した全ての疾患の治療に有用である。 例えば、敗血症症候群では、ｒｌＬ−１誘導シヨツクの機構は、血小板活性化因 子、グロスタグランジンおよび一酸化窒素のような小さな媒介分子の原形質濃度 を増加させることができるＩＬ−１の機能によると思われる。これらは、効果的 な血管拡張因子であり、研究用動物にショックを引き起こす。ＩＬ−１の活性を 阻止するとこれらの媒介分子の合成および放出が防止される。動物では、ＩＬ− １を一回静脈注入すると、平均動脈圧が減少し、全身血管抵抗が下がり、そして 白血球減少および血小板減少が引き起こされる。ヒトにおいても、ＩＬ−１を静 脈投与すると、同様に急速に血圧が下がり、１日に体重１ｋｇあたり３００Ｒｇ 以上服用すると著しい低血圧が引き起こされる。Ｊ　ｒｌＬ−１活性を阻止する 治療上の利点は、恒常性に関与する分子の生成に影響を与えずに、有害な生物学 的作用を防止できる点にある。ｊ本発明の化合物は、ＩＬ−１タイプ■受容体を 介した細胞シグナルに影響を与えずに、ＩＬ−１タイプ■受容体を介した細胞、 グナルのみを抑制することによって、Ｄｉｎａｒｅｌｌｏによって見いだされｌ 二要求を満ｌ二している。 関節リウマチについては、Ｄｉｎａｒｅｌｉｏは以下のように述べている；　［ イ）ターロイキン−１が、関節リウマチの患者の溝膜（ｓｙｎｏｖｉａｌ　ｌｉ ｎｉｎｇ）および清液に存在し、そのような患者由来の溝膜組織の組織片は１ｎ ｖｉｔｒｏでＩＬ−１を生産する。関節内にインターロイキン−１を注入すると 、白血球浸潤、軟骨破壊、および関節周囲の骨の再生が動物に誘導される。単離 されｌ；軟骨細胞および骨細胞においてｉｎ　ｖｉｔｒｏで、インターロイキン −１は、ホスフォリパーゼおよびシクロオキラゲナーゼの遺伝子、並びにフラゲ ナーゼの遺伝子の発現の引き金となり、その活性を阻止することによって、ラッ トの細菌−細胞壁誘導関節炎か減少される。」　従って、本発明の化合物はＩＬ −１アンタゴニストとして関節リウマチの治療および予防に有用である。 炎症性腸疾患については、潰瘍性大腸炎およびクローン病（限局性回腸炎）は、 活性化された好中球およびマクロファージを含む、腸の浸潤性病巣によって特徴 付けられる。ＩＬ−１は、グロスタグランジンＥ２（ＰＧＥＺ）およびロイコト リエンＢ−（ＬＴＢＩ）のような炎症性エイコサノイド（ｅ　１ｃｏｓａｎｏ　 ｉｄ）、並びにＩＬ−８（好中球化学訴因機能および好中球刺激機能を有する炎 症性サイトカイン）の生成を誘導することができる。ＰＧＥ２およびＬＴＢ、の 組織内濃度は潰瘍性大腸炎を病む患者の重病度と関連し、炎症性腸疾患を病む患 者では■Ｌ−１８よびＩ　Ｌ−８の組織内濃度が高い。従って、本発明の化合物 のようなＩＬ−１アンタゴニストは炎症性腸疾患の治療に効果的であろう。 急性および慢性の骨髄性白血病については、ＩＬ−１がこのような癌細胞に対す る増殖因子として機能することを示す証拠が次々と得られている。従って、本発 明の化合物は、急性および慢性の骨髄性白血病が悪化するのを防止するのに効果 的であると！、われる。 インシュリン依存性真性糖尿病（ＩＤＤＭ）は、ランゲルハンス島のβ細胞の破 壊による自己免疫疾患で、免疫担当細胞によって媒介されると考えられているつ 自然発生のＩＤＤＭ動物（ＢＢクラットたはＮＯＤマウス）のランゲルハンス島 は、ＩＬ−１を含む炎症性細胞を有する。従って、本発明の化合物は、ＩＤＤ〜 １の予防および治療に有用であると思われる。 ＩＬ−１はアテローム硬化症の発生にも関与している。内皮細胞はＩＬ−１の標 的である。ＩＬ−１は管状平滑筋細胞の増殖を刺激する。高コレステロール症ウ サギ由来の脂肪性動脈プラークから単離された気泡細胞は、ＩＬ−１βおよびＩ Ｌ−１βメツセンジヤーＲＮＡを含んでいる。末梢血液単球に取り込まれると、 これらの細胞によるＩＬ−１が生産が開始される。ＩＬ−１はＰＤＧＦの生産も Ｉｔ激する。これらのことを合わせて考えると、ＩＬ−１はアテローム硬化病変 の進行に関与しているといえる。従って、本発明の化合物のようなＩＬ−１アン タゴニストは、アテローム硬化の予防および治療に有用であると思われる。 本発明の化合物の生理学的Ｂよび薬理学的効果のＩｎ　ｖｉｔｒｏアッセイ本発 明の化合物の、免疫活性を調節し抗癌活性を有する作用についての測定には、様 々の細胞系を用いた多様なｉｎ　ｖｉｔｒｏ分析を用いることができる。 例えば、混合白血球反応（ＭＬＲ）は本発明の各化合物の生物学的活性を決定す るための有効なスクリーニング法を提供する。ＭＬＲにおいて、ＰＢＭＣｓ（末 梢血液単球細胞）は、健常な志願者の全血液を凝血防止のためにヘパリンを含ん だ容器に採血し、等量のハンクス塩平衡化溶液（ＨＢＳＳ）で希釈することによ って得る。この混合物をＦｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ”勾配（比重１．０８） のような／ヨ糖密度勾配に上層し、室温または冷却して１１０００Ｘで２５分間 遠心する。ＰＢＭＣを血漿−フィコール界面のバンドから得て分離し、ＨＢＳＳ なとの塩溶液で少なくとも２回は洗浄する。混入している赤血球細胞をＡＣＫ溶 解（３７°Ｃ，１０分）などによって溶解し、ＰＢＭＣｓをＨＢ　Ｓ　Ｓ中で２ 回洗浄する。精１１ＰＢＭｃｓのペレットを完全培地、例えばＲＰＭＩ１６４０ に２０％ヒト不活性化血清を加えたもの、に再懸濁する。９６穴マイクロタイタ ープレート中で行う２種類のＭＬＲによって、同種異系刺激に対するＰＢＭＣの 増殖反応を決定する。簡単に述べると、完全培地２００μ！中の約１０″個のテ スト用精製ＰＢＭＣ細胞を、約１０’個の自己由来（コントロール培養物）また はＨＬＡの異なる個体に由来する同種異系（刺激培養物）のＰＢＭＣ細胞と共培 養する。細胞をマイクロタイタープし・−トに加える時に、種々の用量の化合物 （薬剤）を添加する。培％物を５％Ｃ０２条件下、３７℃で６日間インキュベー トする。インキコベー　／コ〉の最後にトリチウム−チミジンを加え（例えば、 ４Ｏ−６０Ｃｉ’ｍｍ　ｏ　ｌ　ｅのものを１ｌｌｃｉ／ウエル）、液体ノンチ レーンヨンカウンターで増殖を調べる５、 ＣｏＡどインターロイキン−１（ＩＬ−１）またはインターロイキン−２（ＩＬ −２）の刺激によって誘導された胸腺細胞の活性化および増殖の、本発明の化合 物による抑制効果を評価するために胸腺細胞共刺激因子分析を行う。マウス（例 えば、Ｂａ１ｂ／Ｃマウスのメス）の胸腺を回収し、培養培地（例えば血清を加 えなし・ＲＰＭ１１６４０）に分離する。分離された胸腺組織および細胞懸濁液 を遠心管に移して静置し、ＨＢ　Ｓ　Ｓ洗浄し、血清を加えた培養培地（例えば 、１０％胎児つ、血清を加えたＲＰＭ１１６４０）に再懸濁する。混入している 赤血球細胞を全て溶解させ、生存している細胞を再懸濁して数を数える。胸腺細 胞をプレートしく例えば、９６穴プレートに密度２Ｘ１０″細胞／穴）、刺激剤 、例えば、Ｃｏｎ　Ａ、ＩＬ−１（例えばＩＬ−１α）またはＩＬ−２、をウェ ルに加える。細胞を３７℃で４日間インキュベートする。４日目に細胞をトリチ ウム−チミジンでパルスし、増殖を調べる。本発明の化合物は刺激剤添加と共に 加える。 生物学的活性測定に適当な用量を決定し、活性の性質を調べるときの１ｎｖｉｔ ｒｏ分析における細胞毒性反応を防ぐために、本発明の各化合物の細胞毒性につ いて調べた。細胞（例えば、ＮＩＨ−３Ｔ３、Ｒａｓ形質転換３Ｔ３細胞、悪性 メラノーマＬＤ２細胞等）をマイクロタイタープレートに加え、プレートの２日 後に薬剤を加えた。薬剤添加の２４．４８または７２時間後に、蛍光生存力染色 （例えば、２’、７’−ビス−（２−カルボキシエチル）−５−（および−６） −カルボキシフルオレセインアセトキシメチルエステル、ＢＣＥＣＦ励起４８８ ｎｍおよび発光５２５ｎｍ）によって細胞生存力を調べる。 本発明の化合物の活性の別の測定法は、ヒト由来の間質細胞を用いたＰＤＧＦ（ 血小板由来成長因子）増殖反応を調べることを含む。ヒト間質細胞を所定の培地 （例えば、６９％マックコイ培地、１２．５％胎児ウシ血清、１２．５％ウマ血 清。１％抗生物質、１％グルタミン、１％添加ビタミン、０．８％必須アミノ酸 、１％ピルビン酸ナトリウム、１％重炭酸ナトリウム、０．４％非必須アミノ酸 、および０．３６％ヒドロコルチゾン）にプレートする（例えば、２０００細胞 ／穴）。２−３日後、間質細胞を血清を含まない培地で枯渇させる６２４時間後 に、ｒＬ−１α若しくはＴＮＦを加えた、若しくは加えていないＰＤＧＦ−ＡＡ 。 ＰＤＧＦ−ＢＢまたは塩基性ＦＧＦ　（繊維芽細胞成長因子）のような増殖因子 、およびトリチウムチミジンで細胞を処理する。液体シンチレーションカウンタ ーで細胞増殖を測定する。 Ｂ細胞増殖アッセイによって、抗ミュー抗体（４０μｇ／ｍｌ）、ＩＬ−４また はＰＭＡ　（２，５ｎＭ）で刺激されたＢ細胞の増殖を抑制する本発明の化合物 の効果を調べることができる。ラモス（Ｒａｍｏｓ）Ｂ細胞腫瘍細胞、またはマ ウス牌細胞を刺激剤、本発明の化合物およびトリチウムチミジンと共にインキュ ベートし、刺激剤によって誘導された細胞増殖の抑制を測定することができる薬 剤抑制活性は、刺激された細胞中の管細胞接着分子（ＶＣＡＭ）のレベルを調べ ることによって測定することもできる。初期継代ヒト謄静脈内皮細胞（ＨＵＶＥ Ｃ）（Ｃｅｌｌ　Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｉｎｃ、またはＣ１ｏｎｅｔ　ｉｃｓのよう な企業から入手した）を１０％胎児ウン血清を含む培地（例えば、Ｈｅｐｅｓ緩 衝培地、Ｃｅ１ｌ　Ｓｙｓｔｅｍｓ）に、繊維芽細胞成長因子（酸性ＦＧＦ、Ｃ ｅ１ｌ　Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｉｎｃ、）またはＴＮＦのような刺激剤を添加したも ので培養する。細胞をマイクロタイタープレートのウェルにプレートシ（例えば 、５　Ｘ　ｌ　Ｏ’、、、、’穴）、３７°Ｃで７２２時間インキュベートる。 休止細胞を回収しく例えば、０．４％ＥＤＴＡで２０−３０分処理）、培地中（ 例えば、０．０１％ナトリウムア７ｒドを含む、０１％ウソ血清アルブミンを加 えたリン酸塩緩衝液）で洗浄し、水冷下、ヒｌ−ＶＣＡＭを認識するモノクロー ナル抗体（′°−次抗体′″）（例；ｊは、ヒトＶＣＡＭを認識するマウスモノ クローナル抗体１μｇ、Ｇｅｎｚｙｍｅ）で標識する。６０分の水冷後、細胞を 冷却洗浄培地で洗浄しく好ましくは２回）、−次抗体を認識する抗体（例えば、 フィコエリトリンを結合したヤギ抗マウスＩｇＧ　ｌｐｇ、ＣａｌＴａｇ、Ｉｎ ｃ、）と共にインキュベートする。氷ｆ４３０分後、細胞を２回洗浄し、フロー サイトメーター　（Ｃｏｕｌｔｅｒ　Ｅｌｉｔｅ”）を用い、適当な励起波長お よび発光波長で（例えば、フィコ１１月・す〉を用いた場合は、励起が４８８ｎ ｍ、発光が５２５ｎｍ）分析する。 関連する２種の酵素、リソホスファチジン酸アシルトランスフェラーゼ（ＬＰＡ 　Ａ　Ｔ　）とホスファチン゛ン酸ホスフォリルヒドロラーゼ（ＰＡＰＨ）の抑 制を、１つのｉｎ　ｖｉｔｒｏア、・セイによって調べることができる。このア ッセイは、−次刺激（例えば、種々のサイトカイン、成長因子、癌遺伝子産物、 推定される治療剤、放射線照射、ウィルス感染、毒素、細菌感染およびその産物 、並びに標的細胞に（妨害まではしないとしても）有害な影響を与えるあらゆる 刺激）を加えた標的細胞を、種々の用量の本発明の化合物の存在下または非存在 下でインキュベートする二どを含む。標的細胞には、例えば、以下のような亜細 胞性物質が含まれる。 開票細胞および７・′または外胚葉由来のミクロソーム、特に骨髄間質細胞また は、ヒト若しくはラット糸球体細胞由来のミクロソーム：脳由来のミクロソーム またはシナブトソーム：富原形質膜ミクロソーム、Ｂｕｒｓｔｅｎら（Ｊ、Ｂｉ ｏｌ、Ｃｈｅｍ、２２６：２０７３２−２０７４３．１９９１）に記載されたよ うにして得られた原形質膜、または界面活性剤で溶解させたミクロソーム；／ナ プトソーム、および、例えば、ＮＰ−４０、ミラナル（Ｍｉｒａｎａｌ）、ＳＤ Ｓ若しくはその他の中性界面活性剤を用いて溶解された膜またはその他の細胞調 製品：そして 界面活性剤で溶解され、組み換えられ、または、さらに精製された細胞蛋白質の 調製品（ＬＰＡＡＴおよび／またはＰＡＰＨ蛋白質を含む）短時間インキュベー トした後、細胞脂質を抽出し、標準的な方法に従って薄層りロマトグラフィーで 分析する。間単に述べると、例えばクロロホルム／メタノール　２：１（ｖ／ｖ ）を用いて脂質を抽出し、抽出物を、Ｂｕｒｓｔｅｎ　ａｎｄＨａｒｒｉｓ、Ｂ ｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　３０：６１９５−６２０３．１９９１に記載されたよ うにＨＰＬＣにかける。Ｒａ１ｎｉｎｌｌ　ｍｕ−Ｐｏｒａｓｉｌカラムを使用 し、３：４ヘキサンニブロバノ一ル有機担体を用い、および、分離の初めの１０ 分間は１−１０％水勾配を用いて行った。溶出パターンのピークの検出は離れた 二重結合を検出する紫外線範囲で行った。不飽和ＰＡおよびＤＡＧに相当するピ ークが抽出パターンに示される。この方法はＰＡおよびＤＡＣの多様な型を区別 できるので、本発明の（Ｒ）または（Ｓ）化合物によって影響を受ける経路にお ける相当する型も直接測定できることが重要である。これらの化合物のアシル置 換体の性質の確認は、ファスト−アトムボンバードマススペクトロスコピー（ｆ ａｓｔ−ａｔｏｍ　ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ　ｍａｓｓ　５ｐｅｃｔｒｏｓｃｏ ｐｙ）によって行うことができる。このようにして、関連する不飽和（非アラキ ドン酸）ＦＡおよびＤＡＧ亜種を検出できる。使用する時間は、サイトカインな との一次刺激による活性化から５−６０秒である。この技術によって、種々の脂 質成分のレベルを時間の関数として調べることができる。 ＴＮＦを介した細胞毒性に対する、本発明の化合物による抑制活性を調べること ができる。この分析では、Ｌ９２９マウス繊維芽細胞（１０４細胞／穴）を種々 の用量の各化合物および培地コントロールと共に２時間インキュベートする。 ＴＮＦ−ａ　（Ｒ＆Ｄ　Ｓｙｓ　ｔｅｍｓ）を５００ｐｇ／ｍ＋の濃度（ＴＮＦ のＬＤ５０（１２５ｐｇ／ｍｌ）の４倍）で添加する。細胞十薬剤（または−薬 剤）＋ＴＮＦを３７°Ｃで４０時間インキュベートする。培地を取り除いて２％ 血清および１０μｇ／ｍｌのＢＣＦ４ＣＦ蛍光色素を含む新たな培地と交換し、 ３０分間インキュベートする。蛍光色素を含む培地を取り除き、ＰＢＳ　（リン 酸塩緩衝液）と交換し、各ウェルの蛍光を分析した。 さらに別の方法により、ＴＮＦ−活性化ＨＵＶＥＣ細胞に対するＵ９３７細胞の 接着の、薬剤による抑制の効果を調べることができる。この実験では、ＨＵＶＥ Ｃ細胞をヒトＴＮＦ−σ（２０ｎｇ／ｍ＋）および種々の濃度の薬剤と共に１４ −１６時間インキュベートする。Ｕ９３７細胞（ヒト単核細胞系）を、蛍光色素 、ＢＣＥＣＦ　（１０μｇ／ｍｌ）と共にインキュベートして標識する。Ｕ９３ ７細胞調製品（２，５ＸＩＯ’細胞／穴）を活性化ＨＵＶＥＣ細胞の上に上層す る。細胞を逆遠心して、部分的に接着していたり、全く接着していないＵ９３７ 細胞を取り除く。蛍光プレートリーダーを用い、接着したＵ９３７細胞の蛍光を 測定する。 本発明の化合物 本発明の化合物および医薬組成物は、３，７−ジ置換キサンチンの１位において 置換された直鎖アルキル（ＣＳ−＊）のω−１アルコールの分離されたＲまたは Ｓ（好ましくはＲ）鏡像異性体である。本発明の化合物は、このような化合物を 有効量投与する特定の投与方式と同様に、外部刺激またはｉｎ　５ｉｔｕ−次刺 激に対する細胞応答を調節するのに有効である。 本発明の化合物は、下記の式： ［式中、Ｒ２は独立に、ω−１第ニアルコールで置換されたアルキル（ＣＳ−ａ ）の実質的に他の鏡像異性体を含まない分離されｔ；鏡像異性体であり、Ｒ３お よびＲ１は独立に、所望により炭素原子の代わりに１つ、または隣接しない２つ の酸素原子を含んでいてもよいアルキルＣＣ＋−＋□）である］のキサンチンコ アから成る化合物および医薬組成物を構成する。Ｒ１は、好ましくはＲ鏡像異性 体として水酸基を有するＣ、アルキルである本発明はさらに、本発明の化合物お よび薬学的に受容可能な助剤から成り、患者に経口的、非経口的、または局所的 な投与により処方される、医薬組成物を提供する。 本発明はさらに、１つまたは複数の本発明の化合物および薬学的に受容可能な担 体若しくは賦形剤からなる医薬組成物を含む。本発明の化合物または医薬組成物 を用いて患者を治療するには、体外療法としてｉｎ　ｖｉｔｒｏ培養で患者に接 触させるか、または、治療すべき細胞を有する患者に本発明の化合物または医薬 組成物を（経口的、非経口的、または局部的に）投与する。 １−（５−ヒドロキシ−ｎ−ヘキシル）−３，７−ジメチルキサンチンの（Ｒ） または（Ｓ）鏡像異性体は周知であり、以下のような当該分野において知られて いる慣用技術によって調製される。 Ｄａｖｉｓら、、Ｘｅｎｏｂｉｏｔ　ｉｃａ、１５　：　１００１，１９８５お よびＤａｖｉｓら、、Ａｐｐｌｉｅｄ　ａｎｄ　Ｅｎｖｉｒｏｍｅｎｔａｌ　Ｍ ｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　４８：３２７，１９８４に記載されている、例えばＲ ｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ　ｒｕｂｒａを用いた微生物学的技術：Ｄａｖｉｓら（１ ９８４）（前述）の（Ｒ）−アル７アーメトキシーアルフアートリフルオロメチ ルーフエニル酢酸（（ｒ　）−ＭＴ　Ｆ　Ｐ　Ａ）のような光学活性化酸、その 他の光学活性化酸から形成させたジアステレオマーエステルのラセミ体を分離す るヨーロッパ特許公開第０４３５１５３号に記載されているように、（Ｒ）また は（Ｓ　）−５−ヒドロキシ−ｎ−ヘキシル基をジメチルキサンチンの１位に導 入することによる直接的化学合成： 鏡像異性体選択的変換（例えば、鏡像異性体エステルを第三ホスフィン、アゾジ カルボン酸ジアルキルエステルおよびカルボン酸と共に加熱するか、または鏡像 異性体アルコールを、所望により塩基を含んだ中性溶媒中で有機スルホン酸エス テルに変換する。）： 得られた脂肪族カルボン酸エステルを加熱し、塩基を含むアルコール性または水 性の溶媒で加溶媒分解（例えば、炭酸カリウムを含むメタノール分解）を行い、 ヨーロッパ特許公開第４３５１５３号または第４３５１５２号に記載されたよう な鏡像異性体アルコールを得る。 （Ｒ）または（Ｓ）鏡像異性体を得るための特に好ましい方法は、Ｊ、Ｏｒｇ、 Ｃｈｅｍ、５５　：２２７４，１９９０に記載された方法の変型に基づく直接合 成である（図９）。この方法では、４−プロモーｌ−ブテンを、ポロントリクロ ライドおよびトリエチルンランと共にペンタンのような不活性炭化水素溶媒中で 約−１Ｏ°Ｃから一７８℃の低温条件下で熱し、４−ブロモ−１（ジクロロ）ポ ロブタンを得る。この産物を同程度の低温下でジエチルエーテルまたはジグリム （ｄｉｇｌ　ｙｍｅ）のような不活性溶媒中、（Ｒ）−または（Ｓ）−ピナンジ オールで処理し、（Ｒ）−または（Ｓ）−ピナンジオール４−ブロモブチルポレ ートを得る。この産物を、アルゴンのような不活性な寡囲気下、−１００°Ｃ（ またはもう少し高い温度）において、テトラヒドロフランのような不活性な溶媒 中、Ｌ　ｉＣＨＣ＋　！で処理し、つづいて無水塩化亜鉛を加えて（Ｒ）−また は（Ｓ）−ピナンジオール５−ブロモー１−クロロペンチルポレートを得る。こ の産物を、テトラヒドロ７ラン中、約−１Ｏ℃から約−７８℃において、メチル マグネシウム臭化物で処理し、ＲまたはＳ−ピナンジオール５−ブロモ−１−メ チルペンチルポレートを得る。この産物を、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ） 中、約−１０℃から約Ｏ℃において、テオブロミンで処理し、続いて約２８℃、 ５トルにおいてＤＭＳＯを留去し、約９５％の非常に高い収率で相当する１−Ｎ −アルキル化キサンチンを得る。続いて過剰量の水酸化ナトリウム溶液のように 強い塩基性溶液中で酸化加水分解を行うと、ホウ素原子および（Ｒ）−または（ Ｓ）−ピナンジオール残基が取り除かれる。インプロパツール等の溶媒からの再 結晶化といった慣用の回収法によって産物を得ることができる。下記にこの好ま しい合成法を図示する。 “ブ０モアセテート″およびテオブロミンからのＣＴ−１５０１Ｒの合成の概要 ：”ＣＴ−１ｓＯＩＲ１１塩″ Ｖ テオブロミンナトリウム（＋＋）の合成の概要：テオブロミン（出発材料） テオブロミンナトリウム ＋＋ ブロモアセテート（Ｉ）の合成の概要：ＭＢ（＋Ｂ　Ｃｌ　３　＋　Ｅ　Ｌ　３ 　Ｓ　＋　ＨＶｌｌ　＋　ＣＨ２Ｃ１２＋　（（ＣＨ３）ＩｃＨ）ｚＮＬｉ■、 ＋　メタノール ４−プロ％−１−（ジメトキシポロン）−ブタン４−ブロモ−１−（ピナンジオ キソポロン）−ブタンｌｌ Ｘ 前述の合成法においてはビナンジオールをキラルディレクターとして使用する。 ビナンジオールは以下の合成工程に従って合成できる・ビナンジオール（キラル ディレクター）の合成の概要：（ＩＲ，２Ｒ，３Ｓ、５Ｒ）−（）−ビナンジオ ール１σｌ”＝−８，６’　（ｃ−６，５）ルエン）（〉９９％ｅｅの物質に対 する） 合成過程は−（−）−α−ピネンを利用するが、これは商業的スケールの量で入 手できない場合がしばしばある。しかし、下記の工程に従って、−（−）−β〜 ピネンかも−（−）−σ−ピネンを合成することができる。 α−ピネン合成の概要： 反応ｌａにおいてビナンジオールを再生成し、この重要な、出発材料およびキラ ルディレクターを再循環させて何回もの反応で繰り返し用いることが重要である Ｏビナンジオールを再生成するための望ましい再循環法を以下に示す：反応１０ においてビナンジオールはこの形で遊離される・ビナンジオール（有機層） 本発明の化合物と薬剤組成物の用途 本発明の化合物は一次刺激が接触する細胞中のホメオスタシスを、−次刺激後の 数秒以内に招来される第２シグナル伝達経路に対するこれらの一次刺激の影響を 和らげることによって、維持する機構を提供する。例えば、ｉｎ　ｖ、ｉｖｏ又 はｅｘ　ｖｉｖｏでの本発明の化合物の投与は、その挙動を改良すべき細胞を本 発明の化合物又はその薬剤組成物の有効量と接触させることを含む細胞挙動の改 良方法を提供する、前記方法は： （１）＠癌細胞の増殖を抑制する方法であり、前記量は前記増殖を抑制するため に充分である；又は （２）造血幹細胞から赤血球、血小板、リンパ球及び顆粒球への分化を促進する 方法であり、前記量は前記増殖を抑制するために充分である；又は（３）抗原も しくはＩＬ−２刺激によるＴ細胞の活性化を抑制する方法であり、前記量は前記 活性化を促進するために充分である；又は（４）内毒素、ＴＮＦ、ＩＬ−１もし くはＧＭ−Ｃ３Ｆ刺激による単球／マクロファージ細胞の活性化を抑制する方法 であり、前記量は前記活性化を抑制するために充分である；又は （５）腫瘍壊死因子の細胞毒性効果に対する開業細胞の耐性を強化する方法であ り、前記量は前記耐性を強化するために充分である：又は（６）抗原、Ｉ　Ｌ− ４もしくはＣＤ４０リガンドに反応したＢ細胞の抗体産生を抑制する方法であり 、前記量は前記抗体産生を抑制するために充分である：又は （７）平滑筋細胞の増殖を刺激することができる成長因子に反応した平滑筋細胞 の増殖を抑制する方法であり、前記量は前記増殖を抑制するために充分である； 又は （８）内皮細胞によって与えられる全身血管の抵抗を弱める方法であり、前記量 は高血圧誘導物質の放出を減するために充分である；又は（９）内皮細胞によっ て与えられる全身血管の抵抗を弱める方法であり、前記量は抗高血圧性誘導物質 の放出を強化するために充分である；又は（ｌＯ）そのエンハンサ−によって誘 導される接着分子の発現を減する方法であり、前記量は前記発現を減するために 充分である；又は（１１）ＨＩＶによるＴ細胞の活性化を抑制する方法であり、 前記量は前記活性化を抑制し、従ってウィルス複製を抑制するために充分である ：又は（１２）［Ｌ−１及び／又はｍ１ｐ−１ｃｒ及び／又はＰＤＧＦ及び／又 はＦＧＦによる刺激に反応した腎臓糸球体間質細胞の増殖を抑制する方法であり 、前記量は前記増殖を抑制するために充分である；又は（１３）ンクロスボリン Ａもしくはアンホテリ７ンＢに対する腎臓糸球体細胞又は尿細管細胞の抵抗を強 化する方法であり、前記量は前記抵抗を強化するために充分である；又は （１４）ＴＮＦ処理骨髄間質細胞における成長刺激因子産生の抑制を防止する方 法であり、ＷＩ記量は前記抑制を防止するために充分である；又は（１５）ＩＬ −１、ＴＮＦ、もしくは内毒素刺激単球及びマクロファージによるｍ　ｉ　ｐ　 −１σ放出を防止する方法である；又は（１６）ＩＬ−１，ＴＮＦ、もしくは内 毒素処理巨核球、繊維芽細胞及びマクロノア−・２゛による血小板活性化因子の 放出を防止する方法である；又は（１７）ＴＮＦ処理造血前駆細胞中のサイトカ イン受容体のダウンレギュレーションを防止する方法であり、１１１記量が前記 ダウンレギュレーションを防止すＳために充分である；又は （１８）ｌ−１刺激されたもしくはＴＮＦ刺激された糸球体上皮細胞又は溝膜細 胞にＪりけるメタロプロテアーゼの産生を抑制する方法であり、前記量は前記産 生を強化するために充分である；又は（１９）細胞毒性薬物もＬ＜は放射線に対 する胃腸もしくは肺の上皮細胞の抵抗を強化する方法であり、前記量は前記抵抗 を強化するために充分である；又は （２０）非アルキル化抗Ｉｌｌ瘍剤の抗腫瘍効果を強化する方法であり、前記量 は前記効果を強化するために充分である：又は（２１）ＩＬ−１に反応した破骨 活性化因子の産生を抑制する方法であり、前記量は前記産生を抑制するために充 分である；又は（２２）［ｇＥに反応した脱顆粒を抑制する方法であり、前記量 は前記脱顆粒を抑制側るために充分である：又は （２３）アドレナリン作動性神経伝達物質、ドーパミン、ノルエピネフリンもし ぐはエピ不プリン、又は神経伝達物質であるアセチルコリンの放出を強化する方 法であり、前記量は前記放出を強化するために充分である；又は（２４）アドレ ナリン作動性神経伝達物質、ドーパミン、ノルエピネフリンもしくはエピネフリ ン、又は神経伝達物質であるアセチルコリンのシナプス後の“遅い電流（ｓｌｏ ｗ　ｃｕｒｒｓｏｔ）”効果を調節する方法であり、前記量はこのような遅い電 流を調節するために充分である。 例えば、本発明の化合物は骨髄移植（ＢＭＴ）を受ける患者に関して、ＢＭＴが 適合同種異系、不適合同種異系又は自己由来のいずれであるかに関係なく、用い られる。自己由来移植片を受容する患者は、対宿主移植片病（ＧＶＨＤ）を発現 しないので必ずしも免疫抑制剤を投与される必要がないとしても、本発明の化合 物による治療によって援助される。しかし、移植を実施した対象の疾患に関連し て用いられる化学療法又は放射線療法の有害な効果は、患者の細胞に対する負の 刺激を構成する。 一般に、ＢＭＴを受ける患者は全て、全身照射の有無に拘わらず、正常な骨髄回 復のために致死量を越える化学療法の投与を必要とする。このことは患者を救う ために貯蔵された患者骨髄又はドナー骨髄を用いることに合理的根拠を与える。 一般に、新しい又は貯蔵された骨髄を注入する前の連続した７〜ｌＯ日間、患者 に化学療法又は放射線療法を行う。患者に骨髄を投与する日は移植の０日と表さ れる。患者が化学／放射線療法（ｃｈｅｍｏ／ｒａｄｉａｌｉｏ＋ｉ）を受容す る、その前の日々は負数で表される。その後の日々は正数で表される。 ＢＭＴ受容者にマイナスの応答が生ずる時間の中央値（＋ａｅｄｉａｉ　ｔｉ鳳 Ｃ）は移植後の最初の１００日間内である。それ故、統計的には、患者が１００ 日目まで生存するならば、これらの患者が生存し続けるチャンスは有意に強化さ れる。本発明の化合物は患者の生存率を高めることができる。受容可能と考えら れる、最初の１００日間の致死率は“良好な危険性（Ｈｏｏｄ　ｒｉｓｋ）”患 者の１５〜２０％であり、“高危険性”患者の３０〜４０％である。これらの致 死率は化学／放射線療法の高い投与量の直接的な影響によるものである。さらに 、ＧＶＨＤは同種異系の骨髄受容者における死亡率にも寄与する。 本発明の化合物の投与が有用である他の適応症には、腫瘍に伴う苦痛の存在、ホ ルモン関連障害、神経障害、自己免疫疾患、炎症、再狭窄、冠状動脈疾患、アラ −ローム硬化症、高血圧、望まＩ、＜ない免疫応答、ウィルス感染症、腎炎、粘 膜炎（ｍｎｃｏｓＮｉｓ）、及び種々なアレルギー反応がある。アレルギー反応 の予防は急性アレルギー反応の予防、並びに、鼻漏、シナスドレナージ（ｓｉｎ ｕｓ　ｄｒａｉａａｔｅ）、牧在性組織浮膿及び全身化そう痒症の緩和又は予防 を含む。慢性アレルギー反応の他の症状は、Ｆ２症状の他に、めまい感、下痢、 組織充血及び、局在化白血球浸潤を伴う涙腺腫脹（ｌａｃｒｉｍａｌ　ｓｗｅｌ ｌｉｎｇ）を含む。アレルギー反応はまた、ロイコトリエン放出とその遠位効果 をも付随し、気道閉塞の発現を含む喘息症状、ＦＥＶ［の減少、生体能力の変化 及び大量の粘液産生を含む。 本発明の化合物の投与に適した、他の対象は例えば化学療法剤又は照射療法の、 Ｖうな陣痛の治療のための細胞減少（ｃｙｔｏｒｅｄｕｃｊ　１ｖｅ）剤を投与 され、並びに例えはＩ　Ｌ　−２のような生物学的反応調節剤及び例えはリンホ カイン活性化キラー細胞（ＬＡＫ）と腫ｆｌｂ浸潤リンパ球ｃＴｒｔ、細胞）と のような腫瘍抑制細胞による治療を受ける患者、他の方法で治療されたか否かに 拘わらず、急性及び慢性の骨髄性白血病、ヘアリー・セル白血病、リンパ種、巨 核球白血病等を含めた、一般に新生物に罹患した患者；細菌、真菌類、原生動物 もしくはウィルス感染によって生ずる疾患状態に罹患１．た患者：心臓手術を受 けた患者のような、例えば再狭窄としての不快な平滑筋細胞増殖を示す患者；自 己免疫疾患に罹患し、Ｔ細胞及びＢ細胞の不活化を必要とする患者；及び神経障 害を有する患者を含む。 本発明の化合物はさらに、アセチルコリン及び／またはエピネフリンによるシナ コトソームの刺激に起因する関連したＰＡ及びＤＡＣの強化されたレベルを減す ることかで声る。このことは、本発明の化合物の効果が例えばドーパミンのよう な抑制的神経伝達物質の放出を強化することと、このような神経伝達物質の遠位 の°゛遅い電流″効果を調節することの両方であることを示唆する。 このように、本発明の薬物は発作閾値を高め、例えばストリキニーネのような神 経毒に対してシナプスを安定化し、例えばＬ−ドーパのような抗パーキンソン病 薬の効果を強化し、催眠性化合物の効果を強化し、トランキライザーの投与に起 因する運動障害を軽減−例えは発作（ｓｔｒｏｋｅ）のような脳血管イベント後 の進行性神経死を付随するニューロン過度燃焼を軽減又は防止するためにも有用 である。さらに、本発明の化合物はノルエピネフリン欠乏うつ病及び内因性グル ココル千コイドの放出に関連したうつ病の治療に有用であり、デキサメタシン又 はメチルプレドニソロンの中枢神経系に対する毒性を防止し、この薬物への嗜癖 なしに慢性疼痛を治療することができる。さらに、本発明の化合物は学習及び注 意力欠陥を有する小児の治療に有用であり、一般に、例えばアルツハイマー病患 者を含めた器官的欠陥を有する対象における記憶を改良する。 投与量は変化するが、本発明の化合物をこのような治療を必要とするヒト対象に 、患者の体重に依存して、約２００ｍｇ〜約ｓｏｏｏｍｇ／日の、有効な経口、 非経口、又は静脈内の致死下投与量として投与する場合には、治療効果が達せら れる。白血病の治療における特に好ましい使用計画（ｒｅｇｉ＋５ｅａ）は４〜 ５０ｍｇ／体重ｋｇである。しかし、如何なる特定の対象に対しても、個人のニ ーズと、本発明の化合物を投与する又は本発明の化合物の投与を指図する大の専 門的判定とに合わせて特定の投与計画を調節しなければならないことを理解すべ きである本発明の化合物を１’−４５０抑制剤と共にｉｎ　ｖｉｖｏ同時投与す ることは、本発明の化合物の長い半減期による効果の強化を生ずる。このｉｎ　 ｖｉｖ。 効果は本発明の化合物の分解経路の阻害による；特に、キサンチン環のＮ７位置 における脱アルキル化によるものである。例えば、ＮＩＨ３Ｔ３−Ｄ５Ｃ３細胞 を用いて、形質転換の表現型制御、本発明の化合物単独によるインキュベーショ ン、及び本発明の化合物とＰ−４５０抑制剤との同時インキュベーションを比較 することによって、本発明の化合物単独又はＰ−４５０抑制剤との併用との効果 を比較することができる。 Ｐ−４５０を抑制する化合物には、例えば、（ｍｇ範囲の一日投与量）で、プロ プラノール（２ｏ−ｉｏｏ）、メタプロロール（２０−１００）；ヴエラパミル （１００−４００）、ディルチアゼム（１００−４００）　、ニフェジピン（６ ０−１００）；’／メチシン（４００−２，４００）；シブロア０キサジン（５ ００−２，０００）、二ノキサシン（５００−２，０００）、ノルフロキサシン （５００−２，０００）、オフロキサシン（５００−２，０００）、パーフロキ サノン（５００−２，０００）；エリスロマイシン（１００−１，０００）、ト ロレアンドマイノン（ｔｏｏ−ｔ、ｏｏｏ）；ケトコニゾール（Ｚｏｏ−２，０ ００）、チアベンザドール（Ｚｏｏ−１，０００）；イソニアシト（１００−１ ゜０００）：メキルチン（１００−１，０００）及びデキサメタシン（１−１０ ０ｍ　ｇ　）かある。 適当な処方は治療すべき障害の性質、選択した薬物の性質、及び主治医（ｉｔｔ ｅｎｄｉｏｇ　ｐｈｙｓｉｃｉ■）の判定に依存する。一般に、本発明の化合物 は注射用又は経口投与用のいずれかのために処方されるが、例えば経粘膜もしく は経皮経路のような、他の投与形式も使用可能である。これらの化合物の適当な 処方は、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　５ｃ ｉｅｎｃｅ（最新版）、マノク　バブリッンユイング　カンパニー（Ｍｌｃｋ　 ＰｕｂｌｉｓｈｉＢ　Ｃｏ＋ａｐｓｎｙ）、イーストン、ＰＡに見い出すことが できる。 選択した本発明の化合物に依存して、例えはキノロンのようなＰ−４５０抑制剤 の同時投与によって、投与量レベルをかなり減することができる。或いは、この ようなキノロンによって強い相乗効果を得ることができる。 下記実施例によって本発明を説明するが、これらの実施例を、本発明を限定する ものと見なすべきではない。これらの実施例において、ＰＴＸはペントキシフィ リンを意味する。 実施例１ この実施例はラセミＭＩの分解によるＣＴ１５０１Ｒの合成を説明する。反応バ イアル中のＭｌによって飽和されたエーテルに、３．０当量のピリジン（水素化 カル／ラムから新たに蒸留したもの）及び３．０当量のＲ−（＋）−１−メトキ ＞−１トリフルオロメチル−フェニル酢酸Ｃ（＋）−ＭＴＦＰＡ）の酸塩化物を 加えた。この反応バイアルを密封し、５０°Ｃに１時間加温し、乾燥するまで窒 素流下に置き、次に７５％Ｍ　ｅ　ＯＨ／　Ｈ２０中で再構成した。（７５％Ｍ ｅＯＨ／Ｈ２０）９０％、アセトニトリル（ＡｃＮ）３％、水７％から成るイソ クラデック（ｉｓｏｃ＋＊ｔｉｃ）系を３．０ｍｌ／分の流量で２５０ｘｌＯｍ ｍウルトレメツクス（旧Ｄｅｍｕ）５　Ｃ−１８カラム［フエノメ不ツクス（Ｐ ｈｅａｏｍｅｎｅｘ）、カリフォルニア州、１−−ランス、９０５０１］に通す ことによって、分離を行った。サンプルを７５％Ｍ　ｅ　ＯＨ／　Ｈ２０中のＭ ＴＦＰＡ−Ｍｌの１０％溶液として調製して、】００μｍアリコートを７分間毎 に２１分間注入した（４回注入）。化合物は２９．８分間目［（Ｓ−Ｍｌ）−Ｍ ＴＦＰＡＩ　、及び３１．４分間目［（Ｒ−Ｍｌ）−ＭＴＦＰＡＩに溶離して、 ９５％分離した。ダール（Ｄ！ｌｅ）等が述べているようＥ（Ｊ、Ｏｒｇ、Ｃｈ ｅｍ、３４　：　２５４３，１９６９年）、ＮＭＲに基づいて無水構造を割り当 てた。回収された画分を一緒にし、回転蒸発（ｒａｔｏｖ峠）によって量を減し た。最初に、サンプルをＭ　ｅ　ＯＨとＡｃＮとを除去するためにのみ蒸発させ 、その後にこれらをクロロホルムによって抽出した。この溶媒を乾燥させ、真空 下で除去した。後に、該エステルが水の除去に必要な軽度の（膳ｉ＋＋ｏｒ）温 度上昇に安定であることが研究によって示された後に、この抽出工程は省略しｔ ；。 （＋）−ＭＴＦＰＡ−ＭＩ立体異性体の加水分解ＭＴＦＰＡエステルの加水分解 の進行を監視するために、直接Ｍｌと、存在する総エステルとを定量する分析法 を開発することが必要であった。傾斜プログラムを用いて、注入後１．０〜８． ０分間から可動相を（７５％ＭｅＯＨ／水）４０％、ＡｃＮ４０％、水１０％か ら（７５％ＭｅＯＨ／水）４０％、ＡｃＮ６０％までに変えた。最終条件を３分 間維持し、その後、カラムを再平衡化した。溶出液を２８０ｎｍにおいて監視し 、遊離Ｍｌと誘導体化ＭＩとの保持時間はそれぞれ６．５分間と１２，３分間で あった。この系を用いて、誘導体化Ｍｌの立体異性体は分離されなかったので、 この系はＭＴＦＰＡエステルの加水分解を監視するための分析手段として用いる ことができた。 ＥｔＯＨ４，０ｍｌ中の純粋なＭＴＦＰＡ−Ｍｌ−１−ステル（Ｒ又はＳ誘導体 ）３０ｍｇに、水素化ホウ素ナトリウム（Ｎ　ａ　Ｂ　Ｈ）約４０　ｍ　ｇを加 え、この混合物を油浴中で７０°Ｃに加熱した。日中４時間毎にさらに水素化ホ ウ素ナトリウム（２ｏｍｇ）を加えた。５４時間後に反応は、ＭＩ＋ＭＩエステ ルの総ピーク面積の損失なく、約９０％完成した（ＨＰＬＣによる）。反応を一 塩基性リン酸ナトリウム／水によって停止させ、ＭＣＩによってｐＨ３，５に調 節し、ＥｔＯＨを真空下で除去し、未反応エステルとＭｌとをクロロホルム中に 抽出した。このクロロホルムを硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空下で除去した 。粗生成物を分取りロマトグラフィーを用いて、２５０ｘｌＯｍｍカラムによっ て３．０ｍｌ／分の流量を用いる、Ｍｌに関して上述した溶媒傾斜法（ｓｏｌｖ ｃ＋＋ｔ　ｇｒｓｄｉｅａｌ）によって、精製した。回収した画分を真空下で蒸 発乾固させ、エーテルを加えて磨砕し、鏡像異性体の過剰度（ｅｎｉｌｉｏｍｅ ｒｉｃ　ｅｘｃｅｓｓ）に関して分析した（両異性体に関して〉９５％）。エー テルを窒素下で除去し、得られた結晶を最少量の標準生理食塩水中に溶解した。 この標準化溶液を標準生理食塩水によって希釈して、各鏡像異性体の１０ｍＭ溶 液を調製した。再形成ＭＴＦＰＡエステルのＨＰＬＣによって鏡像異性体のアイ デンティティ（ｉｄｅｎｔｉｔｙ）を確認した。 実施例２ この実施例は、実験室規模でのキラル　ディレクター（ｃｈｉｒａｌ　ｄｉｒｅ ｃｔｏｒ）としてＲビナン、′オールを用いる（Ｒ）−１−（５−ヒドロキシヘ キシル）−３，７−ジメチルキサンチン（ＣＴ１５０１Ｒ）の製造方法を説明す る。、５００ｍ１丸代フラスコ中でトリエチルノラン（８３，４９ｇ、０．７１ ８モル）と４−ブロモ−１−ブテン（９７ｇ、０．７１８モル）とを混合し、− ７８°Ｃに冷却した。 １リツトル丸底フラスコ中で三塩化ホウ素（８４，１３ｇ、０．７１８モル）ガ スを一７８°Ｃにおいて凝縮させ、ペンタン４００ｍ１を加えた。シラン／ブテ ン混合物を三塩化ホウ素溶液に、アルゴン下で撹拌しなから、カニユーレを介し て流加し、この間内部温度を一７８℃に維持した。添加の終了時に、３当量のメ タノールを溶液に流加した。次に、溶液を室温に加温し、ペンタン、ＨＣＩ及び 過剰なメタノールを大気圧においてアルゴン下で留去した。残渣を真空蒸留して 、７゛メチル　４−ブロモブチルポロネート（０，９ｔｏｒｒにおいてｂｐ７０ −７９°Ｃ９収量１２７．５ｇ、収率８５％）を得た。 ５００ｍ１丸底フラスコ中で、（Ｒ）−ピナンジオール（６２ｇ、０．３６５モ ル）とジメチル　４−ブロモブチルポロネート（７５ｇ、０．３５９モル）とを ２００ｍ１のジエチルエーテルと共に撹拌した。３０分間後に、エーテルを真空 下で除去して、残渣を蒸留して、（Ｒ）−ピナンジオール−４−ブロモブチルポ ロネート（１，６−１，９ｔｏｒｒにおいてｂｐ１３４−１４１℃、１１０゜８ ５ｇ、収率９８％）を得た。 同族体化反応を実施するために、塩化メチレン（３１，４７ｇ、０．３７０モル ）と無水ＴＨＦ　５００ｍ　ｌとをサイドアーム付き１リツトル丸底フラスコ中 でアルゴン下において、撹拌しなから一１００℃に冷却した。この冷却した溶液 に、アルゴン下で撹拌しながら、ｎ−ブチルリチウム（ヘキサン中１．４Ｎ）２ １２ｍｌをフラスコの側面に沿って４５分間かけて流加し、この間内部温度を一 １００°Ｃに維持した。添加の終了後、溶液を２０分間撹拌させた。ピナンジオ ール−４−フロモブチルボ口不一ト（７７，８２ｇ、０．２４７モル）に、無水 ＴＨＦ１００ｍｌを混合し、−７８°Ｃに冷却し、次に内部温度を１００℃に維 持しながら、リチウムメチルシ：クロリド溶液に加えた。添加の終了時に、完全 に乾燥した塩化亜鉛（３０，２９ｇ、０．２２２モル）を加えた。この溶液をア ルゴン下で１０時間撹拌し、室温に加温した。溶媒を真空下で除去した。この残 渣に、石油エーテル５００ｍ１と飽和塩化アンモニウム水溶液３００ｍ１とを加 えた。有機相を分離し、飽和塩化アンモニウム溶液（２ｘ２５０ｍｌ）によって 洗浄した。水層を一緒にし、石油エーテル（２ｘ２５０ｍｌ）で洗浄した。有機 相を一緒にし、硫酸ナトリウムによって乾燥させ、濾過し、蒸発させて、粗ピナ ンジオール（Ｒ）ブロモペンチルポロネート、粗重量９２．１３ｇ　（１０２％ ）を得た。 ５００ｍ１丸底フラスコ中で、無水ＴＨＦ３００ｍｌと前の反応からの粗ビナン ジオール（Ｒ）−１−クロロ−５−ブロモペンチルポロネート（推定ｓ９ｇ。 ０．２４７モル）とを混合し、アルゴン下で撹拌しなから一７８°Ｃに冷却した 。 この溶液に臭化メチルマグネシウム（３，２６Ｎ、７９．６ｍ１）を加えた。こ の溶液を一晩かけて室温に加温した。石油エーテル（５００ｍｌ）と飽和塩化ア ンモニウム（２５０ｍｌ）とを加えて、エマルジョンを形成した。水相を分離し た。有機相を飽和塩化アンモニウム溶液（２ｘ２５０ｍｌ）で洗浄し、エマルジ ョンを消失させた。−緒にした水相を石油エーテル（２ｘ２５０ｍｌ）によって 洗浄した。−緒にした有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、真空下で 蒸発させて、粗ビナンジオール（Ｒ）−５−ブロモ−１−メチルペンチルポロネ −）８５．８５ｇを得た。 ５リットル−フラスコ中で、０ＭＳ０２リツトルのＤＭＳＯとテオブロミン（４ ４，５１ｇ、０．２４７モル）とをアルゴン下で撹拌しながら混合した。この溶 液に水素化ナトリウム（９，９ｇ、０．２４７モル）を２アリコートとして加え 、テオブロミンが溶解するまで撹拌させた。３時間後に、この溶液に前の反応か らのピナンジオール（Ｒ）−５−ブロモ−１−メチルペンチルポロネート（８４ ，７５ｇ、０．２４７モル）を正確に（ｎｅａｔ）流加し、１２時間撹拌させｔ こ。 溶液からＤＭＳＯを蒸留した（再循環可能）。残渣を塩化メチレン５００ｍ１と 水５００ｍ１とによって処理した。水相を除去し、有機相を水（３ｘ７５０ｍｌ ）によって洗浄した。水相を一緒にし、塩化メチレン２ｘ５００ｍｌによって洗 浄した。有機相を一緒にして、硫酸ナトリウムによって乾燥させ、濾過して、溶 媒を真空下で除去し、ビナンジオール（Ｒ）−５−（３，７−シメチルギサンチ ン）−１−メチルペンチルポロネート（８８，１４ｇ、収率８０％）を得た。　 このポロネートを次にＴ　ＨＦ　／水（各３００ｍ１）中に溶解し、混合物をア ルゴン下で撹拌しなから０°Ｃに冷却した。内部温度を０℃に維持しながら、３ Ｎ水酸化カリウム９５ｍ１を滴加し、その後に３０％過酸化水素３２．３ｍｌを 滴加した。混合物を２時間撹拌し、固形物を濾別した。水と塩化メチレン（各３ ００ｍ１）を加えた。相を分離し、水相を塩化メチレン（４ｘｌＯＯｍｌ）によ って洗浄した。−緒にした有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、蒸発 させた。残渣を少量の塩化メチレンとそれより多量のエーテルとによって再結晶 させた。収量は（Ｒ）−１−（５−ヒドロキシヘプチル）−３，７−シメチルキ サンチン（ｍ、ｐ、１０５−１．０８°Ｃ）４６．３ｇ　（８７％）であった、 　［α］　Ｄ＝−５，６３，約９６％ｅ　ｅ　。 実施例３ この実施例はキラル　ディレクターとしてＤＩＣＨＥＤを用いる（Ｒ）−１−（ ５−ヒドロキシヘキシル）−３，７−シメチルキサンチン（ＣＴｉｓｏｔＲ）の 製造方法を説明する。実施例２に述べたビナンジオール　キラル　ディレクター の代オ）りに（ＩＳ、２５）−（１，２）−シンクロヘキシルエタンジオール（ ＤＩＣＨＥＤ）を用いることができる。このキラル　ディレクターはビナンジオ ールよりも容易に回収される（９５％）。ＤＩＣＨＥＤはシャープレス（Ｓｂｓ ｒｐｌｅｓｓ）Ｗ、Ｊ、Ｏｒｇ、Ｃｈｅｍ、５７　：　２７６８，１９９２年に 述べられている方法に従って製造することかできる。上述したように製造された ジメチル−４−ブ［１モブチルボロ不一ト（１０，１ｇ、４８．０６ミリモル） に、エーテル１００ｍ１中の（ｓ、５）−ＤＩＣＨＥＤ　１０．ｓ４ｇ　（４６ ，６ミリモル）を混合した。３０分間後に、エーテルを除去し、残渣をシリカゲ ルｌＯｇの短いカラムに通し、石油エーテル／エーテル（９：　ｔ）で溶出し、 （Ｓ、５）ＤＩＣＨＥＤ類似体４−プロモブブルボロ不一ト１７．８ｇを得た。 実風例２に述へたように、下記量：ＤＩＣＨＥＤ４−ブロモブチルポロネート１ ７．８ｇ；塩化メチレン６、ｌ１ｇ；１．４Ｎ　ｎ−ブチルリチウム４１．２ｍ ｌ　；−ＴＨＦｌｏｏｍｌ及び無水塩化亜鉛５．８９ｇを用いて、同族体化反応 を実施した。 実施ｆＭ２におけるように、下記量：ＤＩＣＨＥＤ　（Ｒ）−１−クロロ−５− ブロモペンチルポロネート２０．０４ｇ、３．ＯＮ臭化メチルマグネシウム１６ ゜７ｍ！；及びＴＨＦ１５０ｍｌを用いて、グリニヤール反応を実施した。　５ ０ｍ１７ラスコにおいてＴＨＦ　（ｌＯｍｌ）中にＤＩＣＨＥＤ５−ブロモ−１ −メチルペンチルポロネートを溶解することによって、（Ｒ）−６−プロモヘキ サンー２−オールを得るためのＤＩＣＨＥＤポロネートの酸化を実施した。水（ ｌＯｍｌ）を溶液に加えた。この溶液をアルゴン下で撹拌しなから０°Ｃに冷却 した。 炭酸ナトリウム（３Ｍ溶液１６．５ｍ１）を加えた後に、３０％過酸化水素　８ ｍｌを加えた。溶液を濾過し、ペンタン２０ｍ１を加え、再び濾過した。水相を 分離し、ペンタン（２ｘｌＯｍｌ）によって洗浄した。有機相を硫酸ナトリウム 上で乾燥させ、濾過し、溶媒を蒸発させて、（Ｒ）−６−プロモーヘキサン−２ −オールを粗収量８．９ｇで得た。真空蒸留によって、旋光度−１３，８９［σ ］１６．を有する純粋物質を収量７．１ｇ（８４％）で得た。 （Ｒ）−ブロモアルコールをテオプロミンに加えた。テオブロミン（２，０２ｇ 、１１．２ミリモル）の混合物をＤＭＳＯ（３０ｍｌ）中で撹拌し、水素化ナト リウム２８２ｍｇ　（１１，８ミリモル）を加えた。この反応混合物を８０分間 、激しく撹拌した。ブロモアルコール（２，０３ｇ、１１．２ミリモル）ヲ流加 し、撹拌を２１時間続けた。ＤＭＳＯを完全なポンプ真空下で留去した。水（１ ００ｍｌ）を加えた。混合物を２５％エタノール／塩化メチレン（３ｘ５０ｍｌ ）によって抽出し、−緒にした抽出物を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、蒸発させ た。残渣を塩化メチレン２０ｍＩ中に入れ、エーテル１５０ｍ１を加えた。（Ｒ ）−１−（５−ヒドロキシヘキシル）−３，７−シメチルキサンチン（１，５ｇ 、５．３６ミリモル、収率４７．８％）のベージュ色結晶が形成された。生成物 の他の５００ｍｇを次の２４時間にわたって結晶化させて、キラル　クロマトグ ラフィーによって９４％より大きいｅｅを有する総収量２ｇ（全体で６４％）こ の実施例は（Ｒもしくは５）−１−（６−ヒドロキシヘプチル）−３，７−・′ メチル−１Ｏ−キサ〉′チン又は（Ｒもしくは５）−７−ヒトロキンオクチル− ３．７−ソ゛メチルキサン千ンの合成法を説明する。これらの化合物は上述の適 当なピナンジオール／ＤＩＣＨＥＤ方法を用いて、出発物質として長鎖ブロモー オレフィ〉、５−ブロモ−１−ペンテン及び６−−−ｊロモー１−ヘキセン、１ ５をそれぞれ用いることによって、製造した。 実施例５ この実施例はＣＴ１５０１ＲとＰＴＸとの混合リンパ球反応を説明する。この混 合リンパ球反応は、ツーウェイ（ｔ　ｗ　ｏ　−ｗ　ａ　ｙ　）混合リンパ球反 応において測定される、同種異系やＩ激に対するＰＢＭＣ（末梢血単核細胞）の 増殖反応を示−１ｏｃＴＩ５０１ＲとＰＴＸとの両方は図１に示した、この免疫 調節活性分析法において活性を示した。 実施例に の実施例は架矯した抗マウス（ｘｎｔｉ−ｍｕ）抗体及び／又はインターロイキ ン−４（ＩＬ−４）によって刺激されたマウスＢ細胞増殖の抑制に対するＣＴ１ ５０ＩＲの効果を示す。図２は、指示された増殖シグナルによって惹起されるＢ 細胞増殖をＣＴ１５０１Ｒが抑制したことを示す。 図３は、コンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）及びインターロイキン−１α（Ｉ　Ｌ− １σ）若しくはインターロイキン−２（ＩＬ−２）によって惹起される増殖を抑 制するＣＴ１５０１Ｒの効果を示す。ＣＴ１５０１Ｒ１：ｔｃｏｎＡ及びＩＬ− １ａ若しくはＩＬ−２による活性化の２時間前に指示用量で細胞に加えた。ＣＴ １５０１Ｒは、図３に示した用量−反応関係で胸腺細胞増殖を抑制した。バンク グラウンド　カラ〉・トは２００ｃｐｍ未満であつｔこ。 図４は、ＰＤＧＦ　（血小板由来増殖因子）及びＩＬ−１によって刺激された平 滑筋増殖の抑制に対するＣＴ１５０１ＲとＰＴＸとの効果を示す。ＰＤＧＦとＩ Ｌ　−１とによる活性化の２時間前に、ＣＴ１５０１ＲとＰＴＸとを別々に細胞 に加えた。両方の薬物は図４に示したように高い試験用量で平滑筋細胞増殖を抑 制し、ＣＴ１５０１ＲはＰＴＸよりも高活性であった。 実施例７ この実施例はサイトカイン放出と細胞接着との抑制を含めた、ＣＴ１５０１Ｒの ｉｎ　ｖｉｔｒｏ効果を説明する。我々は内毒素、ＴＮＦ−σ又はＩＬ−１σに よって刺激された、サイトカイン放出と活性化ヒト謄（ｎ　ｌｌＩｂ目１ｃａｌ ）内皮細胞への接着とに対するＣＴ１５０１Ｒの効果を測定した。 マウス腹腔滲出細胞マクロファージ（ＰＥＣ）をマウス腹腔の潅流によって単離 し、９６孔トレー中において５ｘｌＯ’細胞／孔で培養した。刺激物の添加の１ 時間前に培養物にＣＴ１５０１Ｒを添加して又は添加せずに、細胞をサルモネラ 　アボルタス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　ａｂｏ＋ｔｕｓ）に等しく由来する（ｅ ｑｕｉ−ｄｅｒｉｖｅｄ）内毒素［ＬＰＳ；／グマケミカル社（Ｓｉｇｍａ　Ｃ ｈｅｍｉｃｉｌ　Ｃｏ、）、　Ｌ−１８８７］　５ｇｇ／ｍｌ又はＩＬ−１σ［ ゲンザイム（Ｇｅｎｚｙｍｅ）　；マサチューセッツ州、ケンブリッジ］５０　 ｎ　ｇ／ｍ　＋によって刺激した。その後の種々な時間に、上澄み液を取り出し て、市販用の９６孔マイクロタイター免疫検定キツト　［ゲンザイム、ＴＮＦ、 エンドゲン（Ｅａｄｏ（ｃｎ）、マサチューセノツ州、ボストン、ＩＬ−１α］ を用いて、製造者の仕様書に従ってＴＮＦ−ａ又はＩＬ−１σのレベルを分析し た。接着検査のためには、早期継代（ｅａｒｌｙ　ｐａｓｓｅｓ）ヒト済静脈内 皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を商業的供給者［クロー不チノクス（Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ ）、カリフォルニア州、サンジエゴ又はセル　システムス（Ｃｅｌｌ　Ｓｙｓｔ ｅｍｓ）、ワシントン州、シアトル］から入手して、酸性ＦＧＦ　（セル　シス テムズ　ｃａｔ４０１−１１１）を補充した、一定のヘペス（［Ｉｅｐｅｓ）緩 衝化無血清培地（セル　システムズ　ｃａｔ３０１−１８０）中で培養した。９ ６孔マイクロタイタープレートの各孔中で４０００細胞を培養し、３７°Ｃにお いて７２時間インキュベートさせた。組織球白血病細胞ラインＵ９３７を１０％ ウシ胎児血清補充ＲＰＭＩ　１６４０培地中で刺激した。ＨＵＶＥＣ又はＵ９３ ７細胞をＬＰＳ、！Ｌ−１σ又はＴＮＦ−σによって１２時間刺激した。接着分 析のために、Ｕ９３７細胞を蛍光生死判別（ｖｉａｂｉｌｉｔｙ）スティン、２ ’　、７’−ヒス−（２−カルポキンエチノリ−５−（及び−６）−力ルボキ／ フルオレセインアセトキンメチルエステル（ＢＣＥＣＦ）によって標識した。 簡単には、細胞をＲＰＭＩ−１６４０培地＋１０％ウシ胎児血清中でＢＣＥＣＦ １０μｇ／ｍｌによって３７°Ｃにおいて３０分間標識した。細胞を完全培地に よって１回洗浄し、ＨＵＶＥＣ培養物にｓｏ、ｏｏｏ細胞細胞全孔えた。サンプ ルを３７°Ｃにおいて３０分間インキュベートし、インバートしく１ｎｖｅｒｔ ｅｄ）、４００ｘｇで１０分間遠心した。ハンクス平衡塩類溶液（■ｕｋ’ｓ　 Ｂｓ１ｓｎｃｅｄ　５ａｌｔ　Ｓｏｌｌｉｏｎ）（ＨＢＳＳ）１００ｍｌを添加 した後に、このマイクロタイタープレートを次にミリポアーサイトフルオール（ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ　Ｃｙｊｏｌｌｕｏｒ）蛍光プレートリーダー上で分析した （励起４８８ｎｍ；発光５２５ｎｍ）。細胞の連続希釈物の蛍光は２０〜ｔｏｏ 、ｏｏｏ細胞／孔の広範囲な細胞濃度にわたって直線的な濃度関係を示した（デ ータを示さず）。全ての実験は少なくとも２回繰り返し、全ての結果は上述の実 験の結果を実証しｊ−０ ＣＴ１５０１．ＲはＬＰＳ刺激ＰＥＣ細胞からのＴＮＦ−α放出を抑制した。細 胞は２５０ｍＭ　ＣＴ１５０１Ｒによって前処理し、上澄み液をＥＬ　Ｉ　ＳＡ によってＬＰＳ刺激後の時間の関数としての放出ＴＮＲ−σに関して分析した。 ＣＴ１５０１Ｒは、６〜２４時間目に間口るＬＰＳ誘導レベルの約５０％から４ ８時間間口おける約７０％までの範囲にわたって、あらゆる時点においてＴＮＦ −α放出を有意に抑制した。図１８には、放出ＴＮＦに対するＣＴ１５０１Ｒの 効果の用量−反応を示す。種々な濃度のＣＴ１５０１Ｒによる処理の１時間後に 、ＰＥＣ細胞をＬ　Ｐ　Ｓによって刺激した。５０％抑制のＣＴ１５０１Ｈ濃度 は約３０μＭてあった。５００７７Ｍでは、ＣＴ１５０１Ｒの抑制効果は最大Ｌ ＰＳ刺激（１４２８ｐｇ／ｍｌ）の約４０％であった。 Ｌ　Ｐ　Ｓはプ腔マケロ７アージにおけるＩ　Ｎ−−１σ放出を刺激し、Ｉ　Ｔ −−１α放出はＬ　Ｐ　Ｓ刺激後１２時間までに２４　ｐ　ｇ／ｍ　ルベルに増 加し、４８時間まで１１３１　ｐ　ｇ／ｍ　ｌに増加する（図１９）、ＣＴ１５ ０１Ｈの添加は１２−４８時間間口Ｉ　Ｌ　−１σ放出を有意に減じ、２４時間 間口約５０％の最大抑制を示した６Ｂ腔マクロフアー７゛をＬＰＳではなく　Ｎ 　Ｎ−−１ａ　５０　ｎ　ｇ　／　ｍ　＋によって刺激しｊ：場合には（図２０ ）、ＣＴ１５０１ＲはＴＮＦ−σの放出をも抑制した（図２０）、ＣＴ１５０１ Ｒの添加は試験した時点におけるＴＮＦ−σの誘導レベルの５０〜７０％抑制を 生した。 免疫系統の細胞は血管内皮細胞を識別し、結合することによって血液から出る。 その後、免疫細胞は内皮細胞と周囲の組織との間を移動する。免疫細胞の内皮細 胞接着と血管外溢出とのモデルは、炎症とアテローム発生反応とのｉｎ　ｖｉｖ ｏ処理（ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ）の予測モデルを提供する。、ＴＮＦ−ａ、 Ｔ　Ｉ−−１σ又はＬ　Ｐ　Ｓによる内皮細胞の活性化はある種の接着分子をア ソプーレギコレート（ｕｐ−＋ｅｇｕｌａｔｅ）Ｌ−で、す〉バ球、単球、好酸 球及び好中球へのそれらの接着性を高め乙。細胞ライ−Ｕ９３７を用いて、活性 化ＨＵＶＥＣへの接着の抑制に対するＣＴ１５−０１Ｈの効果を試験した。Ｕ９ ３７細胞は、内皮細胞上に表現される免疫グロブリン　スーパーファミリー（ｓ ａｐｅｒｆｓ組１ｙ）のメンバーである血管接着分子１　（ＶＣＡＭ）を介する 内皮細胞への単球接着を仲介するインテグリンＶＬＡ−４の発現を含む、単球の 特徴的な、多くの表現型を表現する。ＨＵ　Ｖ　Ｅ　ＣをＴＮＦ−σ、ＩＬ−１ σ又はＬＰＳから選択した活性剤によって、活性剤の添加の１時間前に２５０Ｈ Ｍ　ＣＴ１５０１Ｒを添加して又は添加せずに、処理した。図２１に示すように 、ＣＴ１５０１Ｒ（７）添加によってＨＵＶＥｃへ（’）Ｕ９３７細胞のハック グラウンド結合に対する有意な影響は存在しなかった。しかし、ＣＴ１５０１Ｒ によって前処理した活性化ＨＵＶＥＣの相対的接着性には顕著な抑制が存在した 。ＣＴ１５０１Ｒによるこの抑制はＴＮＦ−σ、ＩＬ−１σ又はＬＰＳのいずれ かによるＨＵＶＥＣの刺激によって観察されｊ−０逆にいえは、１１、−】σに よるＵ９３７細胞の活性化は非刺激ＨＵＶＥＣへのそれらの接着性をも高めた（ 図２２）。２５０ＨＭ　ＣＴ１５０１ＲによるＵ９３７細胞の前処理はＨＵＶＥ Ｃへの接着のＩＬ−１σ仲介増加をバックグラウンド　レベル近くまで効果的に 阻止した。 ＣＴ１５０１Ｒは、腹腔マクロファージ、ヒトＵ９３７組織球性白血病細胞ライ ン、及びヒト済静脈内皮細胞において、ＬＰＳ、ＴＮＦ−σ及びＩＬ−１α−仲 介炎症シグナル形成経路と、同時に生ずる細胞反応とを抑制した。ＣＴ１５０Ｉ ＲはＬ　Ｐ　Ｓによって刺激された腹腔マクロファージからの炎症前サイトカイ ンのＴＮＦ−ａ及びＩＬ−１αの放出を有意に減少させた。　ＬＰＳ　１０μｇ ／ｍｌ刺激を用いたＴＮＦ−σ抑制のＩＣ５０は約３０μＭであった。ＣＴ１５ ０ＩＲはＩＬ−１σ活性化ＰＥＣからのＴＮＦ−α放出を阻止した。ＣＴ１５０ １ＲはＴ　Ｎ　Ｆ　−ａ、Ｉ　Ｌ　−１ａ又はＬＰＳ活性化ＨＵＶＥＣへ（７） Ｕ９３７細胞の接着増加を阻止した。最後に、ＣＴ１５０１Ｒは、ＩＬ−１σ誘 導活性化と１．Ｊ　９３７細胞の非刺激ＨＵＶＥＣへの接着性上昇とを阻止した 。 実施例８ この実施例は、ＣＴ１５０１Ｒの局所塗布を含む、ヌードマウスのヘア試験を説 明する。チャールス　リバー　ラボラトリーズ（Ｃｈａｒｌｅｓ　Ｒｉｖｅｒ　 Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）からの生後６〜８週間の雌のｎ　ｕ　／　ｎ　ｕマ ウスをバイオサポート　リサーチ　サポー　ト　サービス（Ｂｉｏｓａｐｐｏｒ Ｌ　Ｒｅ５ｅｘｒｃｈ　５ｕｐｐｏｒｔ　５ｅｒｖｉｃｅｓ）　（ワシントン州 、シアトル）において加圧滅菌しｔ−マイクロアイソレーター（ｍｉｃｒｏ　１ ｓｏｌｉｔｏｒ）装置に収容し℃、高塩素処理しＩ−加圧滅菌水、照射した鰯歯 類食餌を与え、層流フード下に保持した。ケージ（ｃａｇｉｎに）は毎週交換し 、水は週２回交換した。各試験の開始前、５日間マウスを順化させた。 加熱した親水性軟膏（ＵＳＰ）にＣＴ１５０１Ｒを１％濃度で加えることによ− ）で、最初の局所製剤を調製【７、凝固させた。 −の最初のＣＴ１５０１Ｈ局所製剤をヌードマウスの左わき腹に１日に２回、１ ６１１間滅菌アブ１１ケータ−によって塗布し、右わき腹ｌこは同し基剤中の別 の化合物を塗布しｔ二。マウスは層流フード下で、顔面マスクと滅菌手袋を着用 した塗布者によ−）で取り扱っｔ二。１６日間後に、マウス１匹を頚部脱臼によ って殺し、贋／わき腹の処置部分と背側骨盤（臀部）の非処置部分とから皮膚生 検材料（ｂｉ。 ｐｓｙ）を採取し、た。試験片を１０５６緩衝化ホルマリン中に入れた。生検材 料は組織病理学のために獣医の皮膚病理学者に送った。この処置の６週間後に、 第２マウスを安楽死させ、第１マウスと同様に生検材料を採取した。組織病理学 のためにす〉プルを送った。 第１実験からの結果は、処置部分が非処置部分よりも有意により正常な外観の毛 包を有することを示す。ＣＴ１５０１Ｒと他方の化合物との両方に関して、処置 部分では無数の毛鞘が毛包かも出ているのが見られ、これに対して非処置部分で は毛鞘が全く見られなかった。 第２実験では、育毛適応に関して認可されている、市販の局所ミノキンジル（ｍ ｉｎａｘｉｄｉｌ）製剤［ｒＪゲイン（ＲｏｇＡｉｎｅ）　（登録開襟）、アブ ジョーン（口ｐｊｏｈｎ）］　と共に、ＣＴ１５０１Ｒの局所塗布を実施した。 パンチン　アンド　キングマン　ユニ″−叶ル（Ｂａｎ＋ｉｎ　ａｎｄ　Ｋｉｎ ｇｍａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ）からの生後５〜６週間の雌のｎｕ／ｎｕマウス をバイオサポート　リサーチ　サポート　サービス（ワシントン州。 ／アトル）において加圧滅菌したマイクロアイソレーター装置に収容して、高塩 素処理した加圧滅菌水、照射した薩歯類食餌を与え、層流フード下に保持した。 ケー、゛は毎週交換し、水は週２回交換した。試験の開始前、７日間マウスを順 化させた。 ＣＴ１５０１Ｒと他の２種の化合物どをＥＴＯＨ６０％、水１０％及びＰＥＧ３ ０％の局所製剤として、ビヒクルのみと共に調製した。ミノキンジルは地方の薬 局から市販製剤ロゲイン（登録商標）として購入した。ロゲイン（登録商標）は 同一の製剤ベース（Ｉｏｒｍａｌｚｊｉｏｎ　ｂａｓｅ）で販売されている。マ ウスは各供試品に特有の、固有尾標識によって確認した。マウス２匹／群はＣＴ １５０１Ｒと他の１種の化合物によって処置した。マウス１匹はビヒクルとミノ キシジルの各々によって処置した。マウスは層流フード下で、顔面マスクと滅菌 手袋を着用した塗布者によって取り扱った。溶液又はマウスの汚染を避けるため に、各マウスは別々の滅菌アプリケーターによって１日に２回処置した。全ての マウスに頭蓋骨の基部から尾の基部まで背中の中心線に沿って、約１．５ｃｍ幅 に、適当な供試品をストリンプ状に塗布した。３４日間後に、全てのマウスをハ ロタン麻酔薬の過剰量によって安楽死させた。皮膚生検材料を肩甲骨の間の頚部 の首筋に沿ってマウス７匹の各々から採取した（およそのサイズはｌｘｌ、、５ ｃｍであった）。全ての試験片をガーゼ上に置いて血液と流体を除去し、木製舌 圧子の切片に固定し、側面を下にして試験片を１０％緩衝化ホルマリンを含む、 別々に標識した容器に入れた。定性的組織病理学的検査のために、試験片を獣医 の皮膚病理学者に送つＩ；。 主観的検査は、ヒヒクル処置マウス（対照）が最低に毛包を発現させたことを明 らかにした。ミノキシジル処置マウスでは処置に対するヘア反応が明らかであっ た。ＣＴ１５０１Ｒと他方の化合物によって処置されたマウスは毛包の最大濃度 を有した。さらに、マウスの目視検査は、ＣＴ１５０１ＲマウスはＣＴ１５０Ｉ Ｒ、ミノキシジル及び対照から成る群の中で最大に毛深い″ことを示した。 それ故、ＣＴ１５０１Ｒはこのモデルにおける育毛促進に少なくともミノキシジ ルと同程度に良好であった。従って、１〜４％ＣＴ１５０１Ｒ（重量による）の 局所製剤は禿頭症を治療し、育毛を促進するための有効な治療組成物である。 実施例９ この実施例は内毒素の致死量を投与されたマウスの生存率（ｓｕｒｖｉｖａｌ） に対するＣＴ１５０１Ｒの効果を説明する。我々は、ＣＴ１５０１Ｒがマウス　 モデルにおける内毒素誘導致死を防止するかどうかを判定した。バイオメンプラ ン　インスチチュート（ＢｉｏｍｅＩＩｂｒａｎｅ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ）　（ ワシントン州、シアトル）のアニマルユース　フミテイ（Ａｎｉｍａｌ　Ｕｓｅ 　Ｃｏｍｅ口Ｌｕ）によって認可されたプロトコール下で、既に発表された報告 ［アンユケナジ（Ａｓｈｋｅｏａｚｉ）等、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ　１．Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、Ｕ、Ｓ、Ａ、８８：１０５３５−１０５３９．１９９１年］と同様に、 生後６〜８週間の雌のＢａ１ｂ／（マウスに内毒素を注入することによって、敗 血症性ショックをモデル化した。リン酸塩緩衝化生理食塩水（Ｐ　Ｂ　Ｓ）中の サルモネラ　アポルタス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌｉ　ａｂｏｒＬａｓ）に等しく由 来する内毒素（シグマケミカル社、Ｌ−１８８７）の約ＬＤ、。。量（１０μｇ ／ｇ）を動物に峠脈内注入（ｉ、ｖ、）Ｌ＋’ｈ。ｔｏｏμｇ／ｋｇの用量のＣ Ｔ１５０１Ｒを１日３回腹腔内に注入した（１００ｍｌ／注入）。対照マウスに は同時に同量のビヒクル対照（Ｐ　Ｂ　Ｓ）を注入した。生存率を少なくとも７ ２時間追跡した。 血漿中ノサイトカイン　レベルのＥＬＩＳＡ測定のために、麻酔したマウスの眼 窩後方（ｒｅｔｒｏｏｒｂｉＬｓｌ）又は心臓穿刺によって血液を回収し、直ち に遠心し、ＥＤＴＡ血禁を一７０°Ｃにおいて貯蔵した。粒子を含量ない血漿を 氷上で解凍し、標準マウス血漿を用いて標準曲線を形成して、商業的ＥＬ　Ｉ　 ＳＡ検定法を用いてサイトカイン　レベルを測定した。マウス腫瘍壊死因子αキ ットとインターロイキン−１αキットとけ、ゲンザイム（マサチューセッツ州、 ケンブリッジ）とエンドゲン（マサチューセソツ州、ボストン）とからそれぞれ 購入した。各データ点はマウス３匹からプールしたＥＤＴＡ血清から得た、２つ のＥＬＩ　ＳＡ測定値の平均値であった。表３に要約したデータは独立した２回 の実験から集めたものであり一表４と５からのデータはｌデータ点につきマウス ３匹の単回実験から得たものである。 １９１１０匹を実験マウスと同じスケジュールでＰＢＳ単独又はＣＴ１５０１Ｒ ｊｌｉ独でそれぞれ処置した。不利な効果は認められず、生存率は実験の過程を 通して１００％であった（データは示さず）。内毒素の生存率データは全体で６ 回の独立した実験から要約した。要約の表１は６回の実験の各々の結果を列挙す る。累積生存率を表２に示し、図５としてプロットする。図５において、各時点 はマウス少なくとも２０匹／群を含む、少なくとも３回の実験を表す。フィッシ ャーの完全片側検定を用いた生存データの確率分析は表３として示す。ＬＰＳ処 置の直後にＣＴ１５０１Ｒを投与した場合には、有意な保護が与えられた。ＬＰ Ｓ処置後７２時間目間口積生存率は、ＬＰＳ単独処置動物の７％に比べて、６０ ％であった（ｐ＝＜ｏ、ｏｏｏｓ　Ｈ表３）。 ＬＰＳ処置後のＣＴ１５０１Ｒ投与時間遅延の効果も図５に示す。動物をＬＰＳ で処置し、このＬＰＳ処置の２時間後又は４時間後に、ＣＴ１５０１Ｒを投与し た。この場合にも、ＣＴ１５０１Ｒは有意な保護を与えた。ＣＴ１５０１Ｒｆｉ 置マウスの生存率は、ＬＰＳ単独処置動物の７％に比べて、２時間目に５５％で あり、４時間目１こは３７％であっに（それぞれ、ｐ−ｏ、ｏｏｏｓとｐ−ｏ、 。 ０１；表３）。 Ｓ、アボルタス内毒素による処置後の時間の関数として、マウスの血漿内のＴＮ Ｆ−α、ＩＬ−１α及びＩＬ−６のレベルを測定した。これらのデータを内毒素 による処置直後にＣＴ１５０１Ｒの単回ｔ、　ｐ、注入によって処置した動物と 比較した。ＴＮＦ−αレベルは内毒素処置の１時間以内にピークに達した（表４ と図６）。ＣＴ１５０１Ｒによるマウス処置は、測定したあらゆる時点において 内毒素処置マウスのＥＤＴＡ血漿中のＴＮＦ−αレベルを減じた。特に、内毒素 後の０．５時間目及び１時間目のＴＮＦ−ａピークレベルは、ＣＴ１５０１Ｒ飽 置マウスではそれぞれ２，５分の１と２．６分の１に減少した。 ＩＬ−１αの血漿レベルも内毒素直後のＣＴ１５０１Ｒ処置によって減少しＩ； （表５；図７）。特に、内毒素後の６．１２及び１８８時間目観察されたピーク レベルは、それぞれ１．２分の１．４．３分の１及び３．２分の１に減少した。 最後に、Ｉ　Ｌ−６測定を同じやり方で実施した（表６；図８）。３．６及び１ ２２時間目おけるピーク血漿レベルもＣＴ１５０１Ｒ処置動物では減少した（そ れぞれ、１．７分の１，２．０分の１及び４．１分の１に減少）。 マウス４４匹中の４１匹には致死量であった内毒素量を受容したマウスの生存率 を、ＣＴ１５０１Ｒは有意に強化した。ＣＴ１５０１Ｒを内毒素と同時に、又は 内毒素処置の２時間後又は４時間後に投与した場合には、対照と比べて、生存率 が改良された。内毒素直後のＣＴ１５０１Ｈの１回量の投与は、ＴＮＦ−σ、Ｉ Ｌ−１σ及びＩＬ−６のピーク血漿レベルを有意に減少した。 表１．独立したマウス敗血症実験６回からの生存率データｌ　ＬＰＳのみ　２／ ４　０／４　０／４ｔ−０時間　４１５　４１５　４１５ ｔ−２時間　４１５　３１５　３１５ ２　ＬＰＳのみ　Ｏ１５０１５０１５ 【−０時間　５１５　５１５　５１５ ｔ−２時間　５１５　５１５　５１５ ３　ＬＰＳのみ　１１５　１１５　１１５ｔ−４時間　５１５　３１５　３１５ ４　ＬＰＳのみ　ｔ／ｌｏ　１／１０　１／１０ｔ−４時間　７／１０　５／１ ０　５／１０５　ＬＰＳのみ　０／１０　０／１０　０／１０１−０時間　９／ １０　７／ＬＯ３／１０ｔ−２時間　５／１０　３／１０　３／１０ｔ−４時間 　７／１０　４／１０　２／１０６　ＬＰＳのみ　３／１０　１／１０　１／１ ０ｔ−４時間　３／１０　３／１０　３／１０表２２表１に基づくデータからの 累積マウス生存率ｎ＝６　ＬＰＳのみ　７／４４　３／４４　３／４４ｎ＝３　 ｔ−０時間　１８／２０　１６／２０　１２／２０ｎ＝３　ｔ−２時間　１４／ ２０　１１／２０　１１／２０ｎ＝４　ｔ−４時間　２２／３５　１５／３５　 １３／３５ｎ＝６　ＬＰＳのみ ｎ＝３　ｔ＝ｏ時間　＜０．０００５　（０，０００５＜０．０００５ｎ＝３　 ｔ−２時間　（０，０００５０，０００５０，０００５ｎ−４ｔ−４時間　＜０ ．１１００５　０．０００！　０．００１表４．マウス血漿ＴＮＦ−αＥＬＩＳ Ａ測定値からの平均化データ０．５　９９０　３９０ 表５．マウス血漿ＩＬ−１σＥＬＩＳＡ測定値からのデータ０、　５　０．　０ １　２２ １　２．２５　１０．８ ３　４１．３　３３．２ １２　１３９　３２．３ １８　１５０　４６．７ ２４　１６．６　４３．５ ３６　全て死亡　１８．８ ４８　全て死亡　０ 表６．？ウス血漿ＩＬ−６ＥＬＩＳＡ測定値がらのデータ０．１７　０．２　０ ．１４ ０、５　３．８６　１ １　２４　３１、８ ６　２４７　・　１２１ １２　１１９　２９．６ １８　５９　１９．８ ２４　３１　２５．６ ３６　０　１、６４ ４８　２　０、　４ 実施例１０ この実施例はマウスにおける５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）誘導骨髄抑圧に 対するＣＴ１５０１Ｒの効果を説明する。我々は、マウスモデルにおける細胞毒 性化学療法後の造血再形成のために必要な時間にＣＴ１５０１Ｒが影響するか否 かを判定した。雌のＢａ１ｂ／Ｃマウス［ＶＡＦ、チャールス　リバー　ラボラ トリーズ（Ｃｈａｒｌｅｓ　Ｒｉｖｅｒ　Ｌｓｂｏｒｓｌｏｒｉ！ｓ）、生後６ 〜８週間、約１７．３−１８．５ｇ］を５−ＦＵによって、実験ｌでは２００ｍ ｇ／ｋｇ又は実験２では１９０μｇ／ｋｇの用量で、腹腔内（ｉ、ｐ、）処置し た。ＣＴ１５０１Ｒ又はビヒクル対照を５−ＦＵ投与の１日前から出発して１０ ０μｇ／ｋｇの用量でｉ、ｐ、投与して、実験ｌでは１３３日目、実験２では１ ５５日目最後のマウスを殺すまで続けた。対照には、５−ＦＵを含まないＣＴ１ ５０１Ｒ又はビヒクルによって処置したマウスを含めた。５−ＦＵ投与の２日間 後から出発して、マウス（４匹／群）をハロタン麻酔下での心臓穿刺後の頚部脱 臼によって殺し、総白血球算定と血球分画（ｄｉｆｌｅｒｅ＋＋ｔｉａｌ　ｃｏ ｕｎｔ）を実施した。血小板算定は位相対比顕微鏡を用いて２回実施した。大腿 骨を回収し、大腿骨あたりの顆粒球−マクロファージコロニー形成細胞（ＣＦＵ −ＧＭ）数を成長因子としてホークライードマイトジェン（ｐｏｋｅｖｅｅｄ　 ｍｉ＋ｏｇｅｎ）肺臓ならし培地を用いる標準検定法［テリー　フォックス　ラ ボラトリーズ（Ｔｅｒｒｙ　Ｆ６Ｘ　Ｌａｂｏｒｘｔｏｒｉｅｓ）　；ブリティ ッシュコロンビア州。 ヴアンクーバ−１を用いて測定した。各大腿骨は別々に３回培養し、各実験時点 の平均値を算出した。統計分析に用いた標準偏差は各大腿骨に関して測定された 平均コロニー数の偏差であった。 ビヒクル対照又はＣＴ１５０１Ｒによって処置したマウスは明らかな不利な影響 を受けなかった。ビヒクル対照のみで処置されたマウスは、時間と共に、絶対好 中球数（ＡＮＣ）及び白血球数（ＷＢＣ）の増加を示したが、これはＣＴ１５０ １Ｒ処置マウスでは見られなかった。これらの差は０日目の値と４日目及び８日 目の値とは有意に異なった（それぞれ、ｐ−０，０１２とｐ−０，０１６；両側 スチューデント検定）。ＣＴ１５０１Ｒ投与マウスに比較しｔ；場合に、対照処 置マウスは４日目に有意に高い白血球数を有しくｐ−０，００９）、１２２日目 有意に高い好中球数を有した（ｐ＝０．０２８）。対照処置マウスは０日目の値 に比べて、１２２日目顆粒球数の有意な上昇を示した（ｐ−０，０２８）。ＣＴ １５０１Ｒ処置マウスのＷＢＣとＡＮＣは対照値のＩＳＤ内に留まった。 ５−ＦＵ処置マウスのＷＢＣは、６日目及び１００日目、ＣＴ１５０１Ｒ処置マ ウスにおけるよりもビヒクル処置対照マウスにおいて有意に低かった（それぞれ 、ｐ＝０．０１９とｐ＝０．０３６）Ｃ図１０）。血球分画では、全ての血球（ ｅｅ　１１）は６日目と８日目に両群においてリンパ球の形状を有した。ＣＴ１ ５０１Ｒ処置マウスでは１００日目幾つかの単球が認められ、顆粒球は稀に認め られた。　１３３日目、４４０土１７／ｍｍ”の平均値上ＳＤ　ＡＮＣを有した が、対照マウスは１８０±１０／ｍｍ３を有した（ｐ−ｏ、ｏｓ）ｃ図１０）。 造血前駆細胞の回復はＣＦＵ−ＧＭ数数人大腿骨測定によって推定される。５− ＦＵ処置後に、ビヒクル対照とＣＴ１５０１Ｒ処置マウスの両方は、回復の開始 時の８日目までに測定不能なレベル近くにＣＦＵ−ＧＭを抑圧した（図１３）。 １３３日目でに、有意な分散が存在した。ＣＴｌ５ＯＩＲ処置マウスはビヒクル 対照動物（ｐ−ｏ、０２４）及び０日目に処置前に殺した動物（ｐ−０，ｏｓ） よりも有意に多いＣＦＵ−ＧＭ数数人大腿骨１３３日目有し、このことは前駆細 胞回復のオーパーンニー）（ｏｖｅｒｓｈｏｏｔ）が存在することを実証した。 実験２は下記事項：　（１）５−ＦＵ用量を１８５ｍｇ／ｋｇに減じた；　（２ ）１００日目ら１５５日目で毎日採血（ｂｌｏｏｄ　ｄｒｓマ）を実施しＩ；； 及び（３）血小板算定を実施したことを除いて、実験１と同様であった。実験２ からの結果は、図１０−１３にグラフとして示す。第１実験と同様に、ＣＴ１５ ０１Ｒによって処置したマウスは有意に高いＷＢＣを有した（図１０）。ＣＴ１ ５０１Ｒ処置マウスでは、好中球回復が増進された（図１２）。血小板最低数（ ＋５ｄｉｒ）と回復率もビヒクル対照動物に比べて増加した（図１１）。細胞数 ／大腿骨は造血回復中に、ＣＦＵ−ＧＭ数数人大腿骨同様に、対照動物に比べて 増加した（図１３）。 ５−ＦＵの高度骨髄抑圧量を受容したマウスでは、ＣＴ１５０１Ｒ処置が好中球 数の上昇率と、関連する骨髄性前駆細胞による骨髄再集団（墓ａｒｒｏ豐ｒｓｐ ｏｐ＋＋１ｓＬｉｏ＋＋）率とを増加させた。ＣＴ１５０１Ｒは各測定時点にお いて総ＷＢＣの５−ＦＵ誘導抑制を阻止した。しかし、ｌＯ０日目でに、小リン パ球の形態学的出現によって細胞は増加した。実験１では１３３日目、実験２で は１００日目ＣＴ１５０１Ｒ処置マウス中の好中球はビヒクル対照処置マウスに おけるよりも有意に増加した。ＣＴ１５０１Ｒによる造血回復の刺激は巨核球系 統にも影響を与えた。 試験動物は対照動物よりも有意に高い血小板最低数を有し、ビヒクル対照よりも 迅速な血小板数上昇と大きなオーバーシュートとを示した。 造血の刺激は骨髄細胞充実性（ｍｉｒｒｏｖ　ｃｅｌｌａｒｎｌｉＬｙ）の回復 と骨髄前駆細胞の定量化との両方によっても証明された。ＣＴ１５０１Ｒ処置マ ウスは造血回復中に、対照動物に比べて、ＣＦＵ−ＧＭ数数人大腿骨約２倍の増 加を示した。 ５−ＦＵを受容しなかった動物では、ＣＴ１５０１Ｒによる処置がビヒクル対照 に付随するＡＮＣ上昇とＣＦＵ−ＧＭ／大腿骨上昇の両方を阻止した。ＣＴｌ５ ０１Ｒ処置動物の全てが非注入対照の１標準偏差以内にＡＮＣを維持した。ＣＴ １５０１Ｒが１日２回のｉ、ｐ、注入に対するストレス誘導反応と恐らくサイト カイン誘導反応をも阻止したように思われる。 総合的に、上記データは細胞毒性薬物又は細胞減少治療後の造血再構成を促進す るためのＣＴ１５０１Ｒと本発明化合物との使用方法を支持する。 浄書（内容に変更なし） 醜　１ 混合リンパ球反応 ｏ、ｏ　０．２　０．４　０．６　０．８　１．０　１．２濃　度　（ｍＭ） 図１ Ｂ細胞増殖 濃　度　（ｕＭ） 胸腺細胞の増殖 濃　度　（ＬＩＭ） 留１ ＰＤＧＦ　＋　ＩＬ−１に応答した平滑筋細胞の増殖濃度（ｍＭ） 四９ ＬＰＳ後の時間 包も ０　０．１７０．５　１　２　４　６ １ンドトキシン処理後の時間 口・７ エンドトキシン処理後の時間 ８ン エンドトキシン処理後の時間 四ｃ１ ＣＴ−＋５０１Ｒ合成の概要フローチャート塩酸塩 １”ｎ＋＋ 回（Ｏ 化学治療後の全白血球数に対するＣＴ−１５０１Ｒの効果５−ＦＵ処理後の日数 化学治療後の大腿骨ＣＦＩＪ−ＧＭＩこ対するＣＴ−１５０１Ｒの効果５−ＦＵ 処理後の日数 １１ｔ＋ Ｉｌ　１ｒ エンドトキシン処理後の時間 口＼も エンドトキシン処理後の時間 拐１１１ リソホスファチジン酸アシルトランスフェラーゼＩＣ５゜図１１ ＣＴ１５０１Ｒ（μＭ） □□□１１ ＬＰＳ活性化後の時間 １劇ユＱ ＩＬ−１活性化後の時間 国：ｌＬｌ 四ｍ１ 手続補正書

Claims (13)

【特許請求の範囲】
1. １．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒ１は独立に、ω−１第二アルコールで置換されたアルキル（Ｃ５−６ ）の実質的に他の鏡像異性体を含まない分離された鏡像異性体であり、Ｒ２およ びＲ３は独立に、所望により炭素原子の代りに１つ、又は隣接しない２つの酸素 原子を含んでいてもよい、アルキル（Ｃ１−１２）である］で示される化合物を 含む置換キサンチン化合物。
2. ２．Ｒ１がＲ鏡像異性体として水酸基を含むＣ６アルキルである請求項１記載の 化合物。
3. ３．Ｒ−１−（５−ヒドロキシヘキシル）テオブロミンである請求項２記載の化 合物。
4. ４．Ｒ１が６−ヒドロキシヘプチル又は７−ヒドロキシオクチルのＲ異性体であ る請求項１記載の化合物。
5. ５．患者への経口投与、非経口投与、ｅｘ　ｖｉｖｏ投与又は局所投与用に処方 された、請求項１記載の化合物と薬剤学的に受容される助剤とを含む薬剤組成物 。
6. ６．化合物の経口投与量が約５００ｍｇ〜約１５００ｍｇ１日２回又は３回であ り、非経口投与量が２４時間の過程にわたって投与される（静脈内注射、腹腔内 投与、筋肉内注射又は皮下注射）約１．０ｇ〜約５．０ｇであり、局所製剤濃度 が約１重量％〜約４重量％であり、ｅｘ　ｖｉｖｏ培養濃度が約１０μＭ〜約５ ００μＭである請求項５記載の薬剤組成物。
7. ７．増強した第二メッセンジャー活性によって仲介される疾患を治療する薬物を 製造するための請求項１記載の置換キサンチン化合物の使用において、該疾患が 外部の又はｉｎ　ｓｉｔｕの第１刺激に対する免疫応答又は細胞反応を抑制する ことを特徴とする又は抑制することによって治療されることができ、該細胞反応 が細胞の細胞膜の内部リーフレットに隣接して作用する特異的なリン脂質ベース の第２メッセンジャーによって仲介される前記使用。
8. ８．活性化癌遺伝子に応答した癌細胞の増殖：細胞減少治療によって惹起される 血球細胞欠損（ｈｅｍａｔｏｃｙｔｏｐｅｎｉａ）；Ｔ細胞応答若しくはＢ細胞 応答、および抗体の産生によって惹起される自己免疫疾患； 敗血症性ショック； 腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）に対する間葉細胞の耐性；成長因子に応答した平滑筋細 胞、内皮細胞、繊維芽細胞及びその他の種類の細胞の増殖； アテローム硬化症； 再狭窄； 冠状動脈疾患； 血管疾患； ヒト免疫不全ウイルス感染症； ＩＬ−１、ｍｉｐ−１α、ＰＤＧＦもしくはＦＧＦに応答した、腎臓糸球体間質 細胞の増殖； 炎症； シクロスポリンＡ又はアンホテリシンＢ治療に反応した腎臓糸球体もしくは尿細 管中毒； 細胞減少治療に応答した臓器中毒； 非アルキル化抗癌剤の抗癌作用の増強；細胞表面メタロプロテアーゼの産生又は ＩｇＥに反応したマスト細胞および好塩基球の脱顆粒反応を特徴とする炎症刺激 に反応したアレルギー；破骨細胞による破骨細胞活性化因子（ＯＡＦ）の過剰産 生によって惹起される骨疾患； 神経伝達物質のエビネフリン及びアセチルコリンのシグナル導入減少によって惹 起される中枢神経系（ＣＮＳ）疾患；及びこれらの組合せ： から成る群から選択される疾患を治療するための薬剤の製造への請求項１記載の 置換キサンチン化合物の使用。
9. ９．敗血症性ショックを含めた敗血症症状を治療又は予防するための薬剤の製造 への請求項１記載の置換キサンチン化合物の使用。
10. １０．細胞減少療法によって惹起される造血毒性又は器官毒性を治療又は予防す るための薬剤の製造への請求項１記載の置換キサンチン化合物の使用。
11. １１．シクロスポリンＡ及びＦＫ５０６を含めた免疫抑制剤療法によって惹起さ れる副作用を治療又は予防するための薬剤の製造への請求項１記載の置換キサン チン化合物の使用。
12. １２．細胞減少療法によって惹起される疾患、禿頭症、脱毛又はアロベシア（ａ ｌｏｐｅｃｉａ）を治療するための薬剤の製造への請求項１記載の置換キサンチ ン化合物の使用。
13. １３．腫瘍に伴う苦痛、ホルモン関連障害、神経障害、自己免疫疾患、炎症、再 狭窄、高血圧、好ましくない免疫反応、ウイルス感染症、腎炎、粘膜炎、アレル ギー反応、及び中枢神経系の障害から成る群から選択される疾患を治療するため の薬剤の製造への請求項１記載の置換キサンチン化合物の使用。