JPH0656697A

JPH0656697A - Ｃｃ−１０６５のアナログ類および誘導体の細胞結合剤複合体

Info

Publication number: JPH0656697A
Application number: JP5065764A
Authority: JP
Inventors: Ravi V J Chari; ブイ．ジェイ．チャリラビ; Viktor S Goldmakher; エス．ゴールドマーカービクター; Walter A Blattler; エイ．ブラットラーウォルター
Original assignee: Immunogen Inc
Current assignee: Immunogen Inc
Priority date: 1992-03-25
Filing date: 1993-03-25
Publication date: 1994-03-01
Anticipated expiration: 2020-09-28
Also published as: CA2076465A1; DE69231123D1; US5846545A; US5475092A; EP0563475B1; HK1014674A1; JP3700091B2; US5585499A; CA2076465C; DK0563475T3; ES2149768T3; EP0563475A1; DE69231123T2

Abstract

(57)【要約】（修正有）【構成】細胞結合剤（たとえばモノクローナル抗体ある
いはメラニン細胞刺激ホルモン（ＭＳＨ）、甲状腺刺激
ホルモン（ＴＳＨ）、形質転換成長因子アルファ（ＴＧ
Ｆ−α）などのホルモン類）と１または２以上のＣＣ−
１０６５のアナログまたは誘導体（たとえば化合物７、
化合物１８等）を化学的に結合させた細胞障害剤および
細胞集団を殺す治療剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、新規な細胞障害剤及び
その治療用途に関する。より詳しくは、本発明は、ＣＣ
−１０６５のアナログ類およびＣＣ−１０６５の誘導体
およびその治療用途からなる新規な細胞障害剤に関す
る。これらの新規な細胞障害剤は、該アナログ類および
誘導体を細胞結合剤に化学的に連結することにより標的
化の様式で特定の細胞集団に該アナログ類および誘導体
を送達させる結果、治療用途を有する。

【０００２】

【従来の技術およびその問題点】近年、モノクローナル
抗体−薬物複合体を用いた腫瘍細胞の特異的標的化の試
みについて、無数の報告がなされている〔（セラら、イ
ン・イムノコンジュゲーツ、ページ１８９−２１６（シ
ー．ボーゲル編、１９８７）；ゴースら、イン・ターゲ
ッティッド・ドラッグズ、ページ１−２２（イー．ゴー
ルドバーグ編、１９８３）；ディーナーら、イン・アン
チボディー・メディエーティッド・デリバリー・システ
ムズ、ページ１−２３（ジェイ．ロッドウェル編、１９
８８）；ピーターツら、イン・アンチボディー・メディ
エーティッド・デリバリー・システムズ、ページ２５−
５３（ジェイ．ロッドウェル編、１９８８）；ブモル
ら、イン・アンチボディー・メディエーティッド・デリ
バリー・システムズ、ページ５５−７９（ジェイ．ロッ
ドウェル編、１９８８）。

【０００３】メトトレキセート、ダウノルビシン、ドキ
ソルビシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メルフ
ァラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシルおよびメイ
タンシノイド類などの細胞障害薬（cytotoxic drugs ）
は、種々のマウスモノクローナル抗体と結合されてい
る。ある場合には、薬物分子は、血清アルブミン〔（ガ
ーネットら、４６キャンサー・リサーチ、２４０７−２
４１２（１９８６）；オーカワら、２３ Cancer Immun
ol. Immunother., ８１−８６（１９８６）；エンドウ
ら、４７キャンサー・リサーチ、１０７６−１０８０
（１９８０）〕、デキストラン〔ハ−ウィッツら、２
Appl. Biochem. ２５−３５（１９８０）；マナビら、
３４バイオケミカル・ファーマコロジー、２８９−２
９１（１９８５）；ディルマンら、４６キャンサー・
リサーチ、４８８６−４８９１（１９８６）；ショーバ
ルら、８５プロシーディングス・オブ・ナショナル・
アカデミー・オブ・サイエンシーズ・ユー．エス．エ
ー．、８２７６−８２８０（１９８８）〕またはポリグ
ルタミン酸〔ツカダら、７３ J. Natl. Canc. Inst.７
２１−７２９（１９８４）；カトーら、２７ジャーナ
ル・オブ・メディシナル・ケミストリー、１６０２−１
６０７（１９８４）；ツカダら、５２ Br. J.Cancer
１１１−１１６（１９８５）〕のような中間のキャリア
ー分子を介して結合された。

【０００４】リンカー技術の広範な進展が、上記のよう
な免疫複合体の調製に利用され、開裂性及び非開裂性リ
ンカーが詳細に検討された。しかしながら、多くの場
合、薬物の最大細胞障害活性は、薬物分子が標的部位で
非修飾形として複合体（conjugate)から放出された場合
にのみ観察される。

【０００５】抗体−薬物複合体の調製に用いられる開裂
性リンカーの１つは、シス−アコニット酸に基づく酸開
裂性リンカーであり、該リンカーはレセプターで介在さ
れたエンドサイトーシス中に遭遇するエンドソームおよ
びリソソームのような異なる細胞内コンパートメントの
酸性環境を利用できる。シェンおよびライサーは、この
方法をダウノルビシンと高分子担体との複合体の調製に
導入した（１０２バイオケミカル・アンド・バイオフ
ィジカル・リサーチ・コミュニケーション１０４８−
１０５４（１９８１））。ヤングおよびライスフェル
ドは、同じ技術をダウノルビシンと−抗メラノーマ抗体
との複合体に使用した（８０ J. Natl.Canc. Inst.
１１５４−１１５９（１９８８））。ディルマンらも、
ダウノルビシンと−抗Ｔ細胞抗体との複合体の調製に同
様の方法で酸開裂性リンカーを使用した（４８キャン
サー・リサーチ、６０９７−６１０２（１９８８）。

【０００６】もう１つのアプローチは、トロートらによ
り開拓され、ペプチドスペーサーアームを介してダウノ
ルビシンを抗体と結合させることに関する〔７９プロ
シーディングス・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ
・サイエンシーズ・ユー．エス．エー．、６２６−６２
９（１９８２）〕。この方法は、遊離の薬物がリソソー
ムのペプチダーゼの作用により複合体から放出され得る
という前提の下になされる。

【０００７】しかしながら、インビトロでの細胞障害性
試験では、抗体−薬物複合体はめったに遊離の非結合性
薬物と同じ細胞障害活性を示すことはない。このこと
は、薬物分子が抗体から放出されるメカニズムは、非常
に非効率的であることを示唆している。イムノトキシン
の領域では、モノクローナル抗体と触媒的に作用するタ
ンパク質トキシンの間のジスルフィド結合を介して形成
される複合体は、他のリンカーを含有する複合体よりも
より細胞障害性が強いことが示された。ランバートら、
２６０ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミスト
リー、１２０３５−１２０４１（１９８５）；ランバー
トら、イン・イミノトキシンズ、１７５−２０９（エ
ー．フランケン編１９８８）；ゲーテら、４８キャ
ンサー・リサーチ、２６１０−２６１７（１９８８）参
照。これは、抗体分子とトキシンとの間のジスルフィド
結合の効率的開裂に高い細胞内濃度を有するグルタチオ
ンが寄与するからである。これにもかかわらず、薬物と
高分子の間の複合体形成にジスルフィド結合を利用した
例は、ごくわずかしか報告されていない。シェンらは、
メトトレキセートをメルカプトエチルアミド誘導体に変
換し、次いでジスルフィド結合を介してポリーＤ−リシ
ンとの複合体とすることを記載している（２６０ジャー
ナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー、１０９０
５−１０９０８（１９８５））。最近の報告は、３つの
スルフィドを含有する細胞障害性薬物カリケアマイシン
と抗体との複合体の調製を記載している（メネンデツ
ら、フォース・インターナショナル・カンファレンス・
オン・モノクローナル・アンチボディ・イムノコンジュ
ゲーツ・フォー・キャンサー、サンジエゴ、アブストラ
クト８１（１９８９））。

【０００８】ジスルフィド結合で連結された抗体−薬物
複合体のない１つの理由は、薬物を抗体とジスルフィド
結合を介して連結するのに容易に使用できる硫黄原子を
含む基を有する細胞障害性薬物を利用できなかったこと
にある。さらに、現存する薬物の化学修飾は、細胞障害
活性を減少することなく行うのは困難である。

【０００９】現在の抗体−薬物複合体の他の主要な欠点
は、標的抗原の数が限られていることおよびメトトレキ
セート、ダウノルビシンおよびビンクリスチンのような
静ガン性薬物の比較的温和な細胞障害性のために、十分
量の薬物を標的部位に送達することができないことによ
る。十分な細胞障害性を発揮させるために、数多くの薬
物分子を直接に、または高分子担体分子を通して抗体と
結合させることが必要になる。しかしながら、そのよう
に高度に修飾された抗体は、標的抗原に対してしばしば
不十分な結合性しか示さず、生体内で血流から急速に除
去される。

【００１０】ＣＣ−１０６５は、ストレプトマイセス・
ゼレンシス（Streptomyces zelensis）の培養物から単
離された強力な抗腫瘍抗生物質であり、インビトロで特
に優れた細胞障害性を示す。

【００１１】ＣＣ−１０６５（化合物１、Ｆｉｇ．１
Ａ）の構造は、Ｘ線結晶解析によって決定された〔マー
チン、ディー．ジー．ら、３３ジャーナル・オブ・ア
ンチバイオティクス、９０２−９０３（１９８０）、お
よびチデスター、シー．ジー．ら、１０３ジャーナル
・オブ・アメリカン・ケミカル・ソサエティー、７６２
９−７６３５（１９８１）〕。ＣＣ−１０６５分子は、
アミド結合によって連結された３つの置換されたピロロ
インドール部分からなる。“Ａ”サブユニットは、分子
中の唯一の不斉炭素を含むシクロプロピル環を有する。
一方、これら炭素の相対配置だけが、Ｘ線データから利
用でき、絶対配置は、ＤＮＡをキラル試薬として用いる
ことにより、３ｂＲ、４ａＳと推定されている（ハーレ
イ、エル．エイチ．ら、２２６サイエンス、８４３−
８４４（１９８４））。“Ｂ”および“Ｃ”サブユニッ
トは、同一のピロロインドール部分である。

【００１２】ＣＣ−１０６５の細胞障害活性は、ＣＣ−
１０６５のアルキル化活性及びＤＮＡ−結合性またはＤ
ＮＡ−インターカレート活性と相関する。２種の活性
は、該分子の２つの分離した部分に帰属する。アルキル
化活性は、ＣＰＩユニットＡ（シクロプロピルピロロイ
ンドール・ユニット）に含まれ、ＤＮＡ−結合性は、２
つのサブユニットＢおよびＣに含まれる（Ｆｉｇ．１Ａ
参照）。

【００１３】ＣＣ−１０６５は、メトトレキセート、ダ
ウノルビシンおよびビンクリスチンのような公知のガン
化学療法剤よりも１００〜１０００倍細胞障害性が強い
（ビー．ケイ．ブーヤンら、４２キャンサー・リサー
チ、３５３２−３５３７（１９８２））。しかしなが
ら、マウスに対するＣＣ−１０６５の投与は、１２．５
μｇ／ｋｇの単回静注後５０日で死に至る遅延性肝障害
を引き起こす（ブイ．エル．レイノルズら、ＸＸＸＩＸ
ジャーナル・オブ・アンチバイオティクス、３１９−
３３４（１９８６））。マウスに対する遅延性致死を起
こすことなく親薬物のインビトロでの高い細胞障害性を
保持したＣＣ−１０６５のいくつかの新規アナログ（Ｆ
ｉｇ．１Ｂおよび１Ｃ参照）の合成が最近報告された
（エム．エイ．ワーペホスキら、３１ジャーナル・オ
ブ・メディシナル・ケミストリー、５９０−６０３（１
９８８））。ＣＣ−１０６５のように、これらのアナロ
グは、ＤＮＡと共有結合の様式で結合し、細胞死を引き
起こすアルキル化剤である。これらの化合物は、Ｌ１２
１０ネズミ白血病細胞の成長を、インビトロでのＩＣ₅₀
が１×１０^-10から１×１０^-11Ｍの範囲で抑制する。
これら化合物のいくつかは、マウスの生体内でＰ３８８
白血病に効果を示す。最も効果のあるアナログＵ−７３
９７５（Ｆｉｇ．１Ｃ）は、１日目、５日目および９日
目に最適用量０．０５ｍｇ／ｋｇを腹腔内投与すること
で、無処理のコントロールの生存期間を１７０％延長す
る。しかしながら、この用量では、６匹中の１匹の処理
マウスが３０日を超えて生存したにすぎない。これらの
薬物は、治療効果を発揮するのに必要な濃度での高い毒
性のために、ごくわずかな治療価値しか持たない。

【００１４】従って、ＣＣ−１０６５およびそのアナロ
グの治療効率を改善し、該化合物の細胞障害性を保持し
つつ全身に対する毒性を軽減する必要性が存在する。

【００１５】

【発明の開示】本発明の目的は、細胞結合剤と共有結合
することのできる、ＣＣ−１０６５のアナログおよび誘
導体を提供することにある。該細胞結合剤複合体は、実
質的にその細胞障害性を妨げることなく該アナログおよ
び誘導体を標的送達し、それにより非標的細胞への毒性
を低下させ、従って全身毒性を低下させる。

【００１６】上記の及び他の目的は、１または２以上の
ＣＣ−１０６５のアナログおよび誘導体を連結した細胞
結合剤からなる細胞障害剤を提供することにより達成さ
れ、細胞結合剤に該アナログおよび誘導体を連結させる
前に、該アナログおよび誘導体は、Ａサブユニットのピ
ロール部分の２級アミノ基とＢ−サブユニットのＣ−２
カルボキシル基とのアミド結合を介して、式（Ｆ−
１）、（Ｆ−２）、（Ｆ−３）、（Ｆ−４）、（Ｆ−
５）、（Ｆ−６）、（Ｆ−７）、（Ｆ−８）、（Ｆ−
９）または（Ｆ−１０）のＢ−サブユニットまたはＢ−
Ｃサブユニットと共有結合した式（Ａ−１）、（Ａ−
２）、（Ａ−３）または（Ａ−４）のＡサブユニットか
らなる群から選ばれ、式（Ａ−１）から（Ａ−４）は以
下に示すものであり、

【００１７】

【化１９】

【００１８】及び、式（Ｆ−１）から（Ｆ−１０）は以
下に示すもの、

【００１９】

【化２０】

【００２０】

【化２１】

【００２１】〔式中、ＲおよびＲ´またはＲ₄のいずれ
かはＣＣ−１０６５のアナログまたは誘導体と細胞結合
剤との連結を可能にする基を示し；ＲまたはＲ´が連結
を可能にする基を示すときには、Ｒ₁からＲ₆は同一ま
たは異なって、水素原子、Ｃ₁-C₃直鎖アルキル基、メ
トキシ基、ヒドロキシル基、１級アミノ基、２級アミノ
基、３級アミノ基またはアミド基を示し；Ｒ₄が連結を
可能にする基を示すときには、Ｒ、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、
Ｒ₅およびＲ₆は同一または異なって、水素原子、Ｃ₁
−Ｃ₃直鎖アルキル基、メトキシ基、ヒドロキシル基、
１級アミノ基、２級アミノ基、３級アミノ基またはアミ
ド基を示し、Ｒ´はＮＨ₂、アルキル基、Ｏ−アルキル
基、１級アミノ基、２級アミノ基、３級アミノ基または
アミド基を示す。〕である。

【００２２】本発明はまた、（ａ）１または２以上の上
記細胞障害剤の細胞障害量、および（ｂ）薬学的に許容
される担体、希釈剤または賦形剤を含む選択された細胞
集団を殺す治療薬を提供するものである。

【００２３】本発明の他の目的は、選択された細胞集団
（cell population ）由来の細胞を含むと推測される細
胞集団または組織を、細胞障害量の１または２以上の上
記細胞障害剤と接触させることからなる選択された細胞
集団を殺す方法を提供するものである。

【００２４】本発明のさらなる目的は、Ａサブユニット
のピロール部分の２級アミノ基とＢ−サブユニットのＣ
−２カルボキシル基とのアミド結合を介して、式（Ｆ−
１）、（Ｆ−２）、（Ｆ−３）、（Ｆ−４）、（Ｆ−
５）、（Ｆ−６）、（Ｆ−７）、（Ｆ−８）、（Ｆ−
９）または（Ｆ−１０）のＢ−サブユニットまたはＢ−
Ｃサブユニットと共有結合した式（Ａ−１）、（Ａ−
２）、（Ａ−３）または（Ａ−４）のＡサブユニットか
らなる群から選ばれ、式（Ａ−１）から（Ａ−４）は以
下に示すものであり、

【００２５】

【化２２】

【００２６】及び、式（Ｆ−１）から（Ｆ−１０）は以
下に示すもの、

【００２７】

【化２３】

【００２８】

【化２４】

【００２９】〔式中、ＲおよびＲ´またはＲ₄のいずれ
かはＣＣ−１０６５のアナログまたは誘導体と細胞結合
剤との連結を可能にする基を示し；ＲまたはＲ´が連結
を可能にする基を示すときには、Ｒ₁からＲ₆は同一ま
たは異なって、水素原子、Ｃ₁-C₃直鎖アルキル基、メ
トキシ基、ヒドロキシル基、１級アミノ基、２級アミノ
基、３級アミノ基またはアミド基を示し；Ｒ₄が連結を
可能にする基を示すときには、Ｒ、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、
Ｒ₅およびＲ₆は同一または異なって、水素原子、Ｃ₁
−Ｃ₃直鎖アルキル基、メトキシ基、ヒドロキシル基、
１級アミノ基、２級アミノ基、３級アミノ基またはアミ
ド基を示し、Ｒ´はＮＨ₂、アルキル基、Ｏ−アルキル
基、１級アミノ基、２級アミノ基、３級アミノ基または
アミド基を示す。〕であるＣＣ−１０６５のアナログま
たは誘導体を提供することにある。

【００３０】本発明者は、ＣＣ−１０６５およびそのア
ナログの治療効果が、薬物を腫瘍部位に標的送達するこ
とで生体内での分布を変更することにより改善し、その
結果非標的組織への毒性を低下させ、全身に対する毒性
も低下されることにを見出した。この目的を達成するた
め、本発明者は薬物のインドリルまたはベンゾフラニル
末端部分のＣ−５位に置換基を有するチオール基または
ジスルフィド基を含有する細胞障害薬２および３（Ｆｉ
ｇ．１Ｂおよび１Ｃ）のアナログを合成した。これらの
化合物は、親薬物の高い細胞障害性を保持しているだけ
でなく、ジスルフィド結合を介して細胞結合剤と結合す
ることができる。本発明者は既に高い細胞障害性を有す
る薬物をジスルフィド結合のような開裂性の結合を用い
て抗体と連結することで、細胞内で最大の活性を有する
薬物を放出させ得ること、およびそのような複合体が抗
原特異的な様式で細胞障害性を有することを示した（ア
ール．ブイ．ジェイ．カリら、５２キャンサー・リサ
ーチ、１２７−１３１（１９９２）；ともに係属する米
国特許出願第０７／４２６，２４７号）。本出願におい
て、本発明者は、新規薬物アナログの合成、モノクロー
ナル抗体との複合体形成の手順、これらの複合体のイン
ビトロでの細胞障害性および特異性について記載する。
本発明は、ＣＣ−１０６５のアナログおよび誘導体が、
その活性を保持し、無差別な細胞障害性のいくつかをな
くす。この様に、本発明は、最小の副作用を示しなが
ら、腫瘍細胞、ウイルス感染細胞、微生物感染細胞、寄
生虫感染細胞、自己免疫細胞（自己抗体を産生する細
胞）、活性化細胞（移植片拒絶または移植片対宿主病に
関連するもの）、または他の任意の病気のまたは異常な
細胞型のような殺されまたは消化されるべき病気のまた
は異常な細胞の除去に有用な薬剤を提供するものであ
る。

【００３１】この様に、本発明は、細胞結合剤と化学的
に結合でき、親化合物ＣＣ−１０６５の高い細胞障害性
を維持するＣＣ−１０６５のアナログおよび誘導体の合
成を開示する。さらに、これらの化合物は、細胞結合剤
と結合したとき、細胞結合剤が結合する細胞に対しての
み高い細胞障害性を有し、非特異的細胞には相当少ない
障害性しか示さない。高い細胞障害性とは、インビトロ
で薬物に対し２４時間さらしたときのＳＷ２細胞につい
て測定したＩＣ₅₀が約１０^-9Ｍ以下であることで定義さ
れる。親化合物は、これらの条件下で２×１０^-10Ｍの
ＩＣ₅₀を示す。

【００３２】細胞障害剤本発明の細胞障害剤は、細胞結合剤と結合した１または
２以上のＣＣ−１０６５のアナログまたは誘導体を含
む。

【００３３】本発明によると、ＣＣ−１０６５のアナロ
グおよび誘導体は、ＡサブユニットＣＰＩ（シクロプロ
パピロロインドールユニット）を天然の閉環したシク
ロプロピル形態または開環したクロロメチルの形態で含
むか、または密接に関連したＣＢＩユニット（シクロプ
ロピルベンズインドールユニット）を天然の閉環した
シクロプロピル形態または開環したクロロメチルの形態
で含む必要がある。ＣＣ−１０６５のＢおよびＣサブユ
ニットは、非常に類似しており、いずれも２−カルボキ
シ−インドール誘導体である。ＣＣ−１０６５のアナロ
グは、活性発現のために２−カルボキシ−インドールサ
ブユニットまたは２−カルボキシ−ベンゾフランサブユ
ニットの少なくとも１種を必要とするが、２つのサブユ
ニットを含む（即ち、ＢおよびＣ）ほうがより強力なア
ナログである。天然のＣＣ−１０６５および刊行物に記
載されたアナログ（例えば、ワーペホスキら、３１ジ
ャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー、５９０
−６０３（１９８８））から明らかなように、Ｂおよび
Ｃサブユニットは、インドールまたはベンゾフラン環の
異なる位置に、異なる置換基を有することもできる。

【００３４】ＣＣ−１０６５と細胞結合剤を連結するた
めに、ＣＣ−１０６５は最初に、ジスルフィド結合、酸
−開裂性基、光−開裂性基、ペプチダーゼ−開裂性基ま
たはエステラーゼ−開裂性基を介して細胞結合剤と連結
し得る誘導体となるような基（moiety）を含むように誘
導体化しなければならない。該アナログは、ジスルフィ
ド結合、酸−開裂性基、光−開裂性基、ペプチダーゼ−
開裂性基またはエステラーゼ−開裂性基を介して該アナ
ログを細胞結合剤と連結するのに必要な基をすでに含有
するように調製される。

【００３５】より詳しくは、本発明によれば、ＣＣ−１
０６５のアナログまたは誘導体は、Ａサブユニットのピ
ロール部分の２級アミノ基と、式（Ｆ−１）〜（Ｆ−１
０）を有する以下のＢまたは共有結合したＢ及びＣサブ
ユニットのＣ−２カルボキシル基とのアミド結合を介し
て共有結合した式（Ａ−１）〔ＣＰＩ（シクロプロピル
型）〕、（Ａ−２）〔ＣＰＩ（クロロメチル型）〕、
（Ａ−３）〔ＣＢＩ（シクロプロピル型）〕および（Ａ
−４）〔ＣＢＩ（クロロメチル型）〕の以下の任意のＡ
サブユニットである。

【００３６】Ａサブユニット

【００３７】

【化２５】

【００３８】Ｂまたは共有結合したＢ及びＣサブユニッ
ト

【００３９】

【化２６】

【００４０】

【化２７】

【００４１】〔式中、ＲおよびＲ´またはＲ₄のいずれ
かはＣＣ−１０６５のアナログまたは誘導体と細胞結合
剤との連結を可能にする基を示し；ＲまたはＲ´が連結
を可能にする基を示すときには、Ｒ₁からＲ₆は同一ま
たは異なって、水素原子、Ｃ₁−Ｃ₃直鎖アルキル基、
メトキシ基、ヒドロキシル基、１級アミノ基、２級アミ
ノ基、３級アミノ基またはアミド基を示し；Ｒ₄が連結
を可能にする基を示すときには、Ｒ、Ｒ₁、Ｒ₂、
Ｒ₃、Ｒ₅およびＲ₆は同一または異なって、水素原
子、Ｃ₁−Ｃ₃直鎖アルキル基、メトキシ基、ヒドロキ
シル基、１級アミノ基、２級アミノ基、３級アミノ基ま
たはアミド基を示し、Ｒ´はＮＨ₂、アルキル基、Ｏ−
アルキル基、１級アミノ基、２級アミノ基、３級アミノ
基またはアミド基を示す。〕。

【００４２】１級アミノ基の例としては、メチルアミ
ン、エチルアミンおよびイソプロピルアミンが挙げられ
る。

【００４３】２級アミノ基の例としては、ジメチルアミ
ン、ジエチルアミンおよびエチルプロピルアミンが挙げ
られる。

【００４４】３級アミノ基の例としては、トリメチルア
ミン、トリエチルアミンおよびエチルイソプロピルメチ
ルアミンが挙げられる。

【００４５】アミド基の例としては、Ｎ−メチル−アセ
トアミド、Ｎ−メチル−プロピオンアミド、Ｎ−アセト
アミドおよびＮ−プロピオンアミドが挙げられる。

【００４６】Ｒ´で示されるアルキル基としては、Ｒ´
が連結基（linking group ）でないときには、Ｃ₁〜Ｃ
₅の直鎖または分枝を有するアルキル基が挙げられる。

【００４７】Ｒ´で示されるＯ−アルキル基としては、
Ｒ´が連結基でないときには、アルキル基の部分がＣ₁
〜Ｃ₅の直鎖または分枝を有するアルキル基である化合
物が挙げられる。

【００４８】好ましい実施態様としては、Ｒ₁〜Ｒ₆は
すべて水素原子であり、ＲおよびＲ´はＣＣ−１０６５
の誘導体またはＣＣ−１０６５のアナログの誘導体がジ
スルフィド結合を介して細胞結合剤と連結し得る基を示
す。

【００４９】特に好ましい実施態様としては、Ｒまたは
Ｒ₄がＮＨＣＯ（ＣＨ₂）_lＳＺ₀、ＮＨＣＯＣ₆Ｈ₄
（ＣＨ₂）_lＳＺ₀またはＯ（ＣＨ₂）_lＳＺ₀、およ
びＲ´が（ＣＨ₂）_lＳＺ₀、ＮＨ（ＣＨ₂）_lＳＺ₀
またはＯ（ＣＨ₂）_lＳＺ₀〔式中、Ｚ₀は、Ｈまたは
ＳＲ₇を示し、Ｒ₇はメチル基、直鎖アルキル基、分枝
を有するアルキル基、環状アルキル基、無置換または置
換されたアリール基、または複素環を示し、ｌは１〜１
０の整数を示す。〕である。

【００５０】Ｒ₇で示される直鎖アルキル基としては、
メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル
基およびヘキシル基が挙げられる。

【００５１】Ｒ₇で示される分枝を有するアルキル基と
しては、イソプロピル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチ
ル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、イソペンチル基および１−
エチルプロピル基が挙げられる。

【００５２】Ｒ₇で示される環状アルキル基としては、
シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基
およびシクロヘキシル基が挙げられる。

【００５３】Ｒ₇で示される無置換アリール基として
は、フェニル基およびナフチル基が挙げられる。

【００５４】Ｒ₇で示される置換されたアリール基とし
ては、アルキル基、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆなどのハロゲン原
子、ニトロ基、アミノ基、スルホン酸基、カルボン酸
基、ヒドロキシ基またはアルコキシ基で置換されたフェ
ニル基およびナフチル基などのアリール基が挙げられ
る。

【００５５】Ｒ₇で示される複素環としては、ヘテロ原
子がＯ、ＮおよびＳから選ばれた化合物であり、例え
ば、フリル基、ピロリル基、ピリジル基およびチオフェ
ンが挙げられる。

【００５６】本発明のジスルフィド基を含有した、およ
びメルカプト基を含有したＣＣ−１０６５のアナログお
よび誘導体は、インビトロで種々の望ましくない細胞系
の増殖を抑制する能力で評価することができる。例え
ば、ヒト類表皮カルチノーマ系ＫＢ、ヒト胸腫瘍系ＳＫ
ＢＲ３、およびバーキットリンパ腫系ナマルワ（Namalw
a ）のような細胞系をこれら化合物の細胞障害性の評価
に使用することができる。評価されるべき細胞は、該化
合物に２４時間さらし、生存している細胞のフラクショ
ンが公知の方法による直接試験で測定される。ＩＣ₅₀値
は、次いで、試験結果から計算される。

【００５７】モノインドリルＣＣ−１０６５アナログ
６、インドリル−ベンゾフラニル−ＣＰＩ化合物１８お
よびビス−インドリルＣＰＩ誘導体２２のヒトガン細胞
系に対するインビトロでの細胞障害性が、測定された。
その結果、モノインドリル化合物６は、異なる細胞系試
験（ＳＷ２、ナマルワおよびＡ−３７５）に対しＩＣ₅₀
値が２．０−７．０×１０^-10Ｍの間であった。ＣＰＩ
誘導体１８は、ヒト小細胞（small cell）肺ガン細胞系
ＳＷ２およびヒトバーキットリンパ腫細胞系ナマルワに
対して高度に細胞障害性であり、薬物に２４時間さらし
た後のＩＣ₅₀値は各々５×１０^-12Ｍおよび１×１０
^-11Ｍであった。ビス−インドリルＣＰＩ誘導体２２も
非常に細胞障害性であり、ＳＷ２細胞に対するＩＣ₅₀値
は４×１０^-11Ｍであった。

【００５８】上記のＣＣ−１０６５のアナログおよび誘
導体は、天然物からの単離、引き続く修飾、合成的調製
またはこれらの組み合わせを含む公知の方法により調製
できる。

【００５９】代表的な合成例を、以下に記載する合成例１Ｂサブユニットのインドール基のＣ−５位の側鎖上にチ
オール置換基を有するモノ−インドリルＣＣ−１０６５
アナログ７の合成は、スキーム１（Ｆｉｇ．２）に略記
される。フェニルジチオプロピオン酸４をトリエチルア
ミンの存在下にイソブチルクロロホルメートと処理して
混合酸無水物を得、次いで５−アミノインドール−２−
カルボン酸と反応させて、アミド５を得る。アミド５と
ＣＰＩのカップリングは、上記のようにエチル−ジアミ
ノプロピル−カルボジイミド（ＥＤＣ）〔エム．エイ．
ワーペホスキら、３１ジャーナル・オブ・メディシナ
ル・ケミストリー、５９０−６０３（１９８８）〕の存
在下に行い、フェニルジチオ基を含有するＣＰＩ誘導体
６を得た。該誘導体６のチオール含有誘導体７への還元
は、４℃で１．１当量のジチオスレイトールの存在下で
円滑に進行した。該反応は、１時間で完結したと判断さ
れ、生成物は、逆相Ｃ−１８カラムを用いるＨＰＬＣに
より精製された。

【００６０】合成例２活性化されたジスルフィド基を有するインドリル−ベン
ゾフラニル−ＣＰＩ誘導体１８の調製の合成工程は、ス
キーム２および３（Ｆｉｇ．３Ａ、３Ｂおよび３Ｃ）に
略記される。ｔｅｒｔ−ブチル５−アミノインドール−
２−カルボキシレート１０は、エチル５−ニトロインド
ール−２−カルボキシレート８から調製された（スキー
ム２ａ；Ｆｉｇ．３Ａ）。５−（２´−ピリジル−ジチ
オ−メチル）ベンゾフラン−２−カルボン酸１５は、５
−メチルベンゾフラン−２−カルボン酸１１から調製さ
れた（スキーム２ｂ；Ｆｉｇ．３Ｂ）。カルボン酸１１
は、ｔｅｒｔ−ブチルエステルに変換され、次いでベン
ジル位をＮ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）でブロム
化されてモノブロモメチル化合物１２を得た。臭素をチ
オ酢酸により置換し、次いで水素化ホウ素ナトリウムで
還元して、遊離のチオール基を２−ピリジルジスルフィ
ドと反応させてエステル１４を得た。ｔｅｒｔ−ブチル
エステルのトリフルオロ酢酸での加水分解は０℃で円滑
に進行して化合物１５を得た。化合物１５のｔｅｒｔ−
ブチル−５−アミノインドール−２−カルボキシレート
１０とのカップリングは、ジシクロヘキシルカルボジイ
ミド／４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＣＣ／
ＤＭＡＰ）またはカルボニルジイミダゾールを用いて行
われ、インドリル−ベンゾフラニル化合物１６を得た。
ｔｅｒｔ−ブチルエステルを加水分解してカルボン酸１
７を得、次いでＣＰＩとＥＤＣの存在下にカップリング
して薬物１８を得た（スキーム２ｃ；Ｆｉｇ．３Ｃ）。

【００６１】合成例３チオール含有ビス−インドリルＣＰＩ誘導体２２は、ス
キーム３（Ｆｉｇ．４）に略記される工程により合成さ
れた。フェニルジチオプロピオン酸４をイソブチルクロ
ロホルメートで活性化し、次いでｔｅｒｔ−ブチル−５
−アミノインドール−２−カルボキシレート１０と反応
させてエステル１９を得た。ｔｅｒｔ−ブチルエステル
をトリフルオロ酢酸で加水分解し、次いでＤＣＣの存在
下にもう１分子の化合物１０とカップリングして、ビス
−インドリルエステル２０を得た。再度エステル２０を
加水分解し、次いでＣＰＩとカップリングして、薬物２
１を得た。フェニルジチオ保護基のジチオスレイトール
による開裂は、０℃でモノ−インドリル−ＣＰＩ化合物
６のジスルフィド基の還元のために用いた上記の条件と
同じ条件で行い、チオール含有薬物２２を得た。

【００６２】連結基（linking group) 上記合成例で記載されたものの他の連結基も、本発明の
ＣＣ−１０６５の誘導体またはＣＣ−１０６５のアナロ
グの調製に使用できる。

【００６３】好ましい連結基は、当該分野で良く知られ
ており、それは、ジスルフィド基、チオエーテル基、酸
−開裂性基、光−開裂性基、ペプチダーゼ−開裂性基お
よびエステラーゼ−開裂性基が挙げられ、好ましくはジ
スルフィド基である。

【００６４】本発明によれば、連結基は上記の常法によ
り、ＣＣ−１０６５またはＣＣ−１０６５のアナログと
共有結合する化学基の一部である。該化学基は、末端の
インドールまたはベンゾフラン基のＣ−４またはＣ−５
位で、アルキル基、アミノ基、アミド結合またはエーテ
ル結合を介してＣＣ−１０６５またはＣＣ−１０６５の
アナログと共有結合できる。好ましい実施態様におい
て、該化学基はＣＣ−１０６５またはＣＣ−１０６５の
アナログと、末端のインドールまたはベンゾフラン基の
Ｃ−５位に、メチレン基（ＣＨ₂）またはアミド基（Ｎ
ＨＣＯＣＨ₂ＣＨ₂）基を介して共有結合できる。

【００６５】細胞結合剤の調製治療剤としての本発明の化合物の効果は、適当な細胞結
合剤の注意深い選択に依存する。細胞結合剤は、現在知
られまたは知られるようになるペプチドおよび非ペプチ
ドを含む任意のもので良い。一般に、これらは、抗体
（特にモノクローナル抗体）、リンホカイン、ホルモ
ン、成長因子、栄養物−輸送因子（たとえばトランスフ
ェリン）または他の任意の細胞結合分子または物質で良
い。

【００６６】細胞結合剤のより詳しい例は、以下のもの
を含む。

【００６７】− モノクローナル抗体； − 単一鎖抗体（single chain antibody ）； − Ｆａｂ、Ｆａｂ´、Ｆ（ａｂ´）₂およびＦ_Vのよ
うな抗体フラグメント（パーハム、１３１ジャーナル
・オブ・イムノロジー、２８９５−２９０２（１９８
３）；スプリングら、１１３ジャーナル・オブ・イム
ノロジー、４７０−４７８（１９７４）；ニソノフら、
８９ Arch. Biochem. Biophys. 、２３０−２４４（１
９６０）； − インターフェロン（例えば、α、β、γ）； − ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６のような
リンホカイン； − インシュリン、ＴＲＨ（甲状腺刺激ホルモン放出ホ
ルモン）、ＭＳＨ（メラニン細胞刺激ホルモン）、アン
ドロゲンおよびエストロゲンのようなステロイドホルモ
ン等のホルモン類； − ＥＧＦ、ＴＧＦ−α、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦおよ
びＧＭ−ＣＳＦ〔バーゲス、５イムノロジー・トゥデ
イ、１５５−１５８（１９８４）〕；及び − トランスフェリン〔オケフら、２６０ジャーナル
・オブ・バイオロジカル・ケミストリー、９３２−９３
７（１９８５）〕。

【００６８】モノクローナル抗体の技術により、特異的
なモノクローナル抗体の形態で高度に特異的な細胞結合
剤を製造することができる。マウス、ラット、ハムスタ
ーまたは他の任意の哺乳動物を無傷標的細胞、標的細胞
からから単離された抗原、ウイルス全体（whole virus
）、弱毒化したウイルス全体およびウイルスコート蛋
白質のようなウイルス蛋白質等の関連する抗原で免疫化
することにより産生される、モノクローナル抗体の製造
技術が、当該分野で特によく知られている。

【００６９】適当な細胞結合剤の選択は、標的化される
特別な細胞集団に依存する選択の問題であるが、一般に
は、適当なものが利用できるのであれば、モノクローナ
ル抗体が好ましい。

【００７０】例えば、モノクローナル抗体Ｊ５は、コモ
ン・アキュート・リンホブラスティック・ロイケミア・
アンチゲン（Common Acute Lymphoblastic Leukemia An
tigen ）（ＣＡＬＬＡ）〔リッツら、２８３ネイチャ
ー５８３−５８５（１９８０）〕に特異的に結合する
マウスＩｇＧ_2a抗体であり、もし標的細胞が急性リンパ
芽球性白血病の疾患のようにＣＡＬＬＡを発現するとき
には使用できる。同様に、モノクローナル抗体、抗−Ｂ
４はマウスＩｇＧ₁であり、Ｂ細胞上のＣＤ１９抗原に
結合し（ナドラーら、１３１ジャーナル・オブ・イム
ノロジー、２４４−２５０（１９８３））、もし標的細
胞がＢ細胞、または非ホジキンリンホーマ（non-Hodgki
n's lymphoma) または慢性リンパ芽球性白血病のような
この抗原を発現する病気の細胞であれば使用できる。

【００７１】さらに、骨髄性細胞に結合するＧＭ−ＣＳ
Ｆは、急性骨髄性白血病由来の病気の細胞に対する細胞
結合剤として使用できる。活性化されたＴ細胞に結合す
るＩＬ−２は、移植片拒絶を阻止し、移植片対宿主疾患
の治療及び予防し、および急性Ｔ−細胞白血病を治療す
るのに使用できる。メラニン細胞に結合するＭＳＨは、
メラノーマの治療に使用できる。

【００７２】胸および精巣のガンは、エストロゲン（ま
たはエストロゲンアナログ）またはアンドロゲン（また
はアンドロゲンアナログ）を細胞結合剤として各々使用
して、好ましく標的化できる。

【００７３】細胞障害剤（複合体）の調製本発明のＣＣ−１０６５のアナログおよび誘導体と細胞
結合剤との複合体は、現在知られており、または将来開
発される任意の技術を用いて形成できる。ＣＰＩまたは
ＣＢＩと結合したインドリル、ベンゾフラニル、ビス−
インドリル、ビス−ベンゾフラニル、インドリル−ベン
ゾフラニル、またはベンゾフラニル−インドリル誘導体
は、遊離のアミノ基（例えば化合物１０で出発する）を
含むように調製でき、次いで酸開裂性リンカーまたは光
開裂性リンカーを介して抗体または他の細胞結合剤と結
合される。細胞障害性の化合物は、ペプチドと縮合さ
れ、次いで細胞結合剤と連結されてペプチダーゼ開裂性
リンカーを製造することができる。細胞障害性の化合物
は、１級ヒドロキシル基（例えば化合物１２で出発す
る）を有するように調製でき、該１級ヒドロキシル基は
スクシニル化され、細胞結合剤と連結されて、細胞内エ
ステラーゼで開裂されて遊離の薬物を放出する複合体を
製造することができる。最も好ましくは、細胞障害性化
合物は、遊離のまたは保護されたチオール基を付与する
ように処理され、次いで１または多数のジスルフィドま
たはチオール含有誘導体が、ジスルフィド結合を介して
細胞結合剤と共有結合的に連結される。

【００７４】本発明の代表的な複合体は、ＣＣ−１０６
５のアナログまたは誘導体と抗体、抗体フラグメント、
表皮成長因子（ＥＧＦ）、メラニン細胞刺激ホルモン
（ＭＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、エストロ
ゲン、エストロゲンアナログ、アンドロゲンおよびアン
ドロゲンアナログとの複合体である。

【００７５】ＣＣ−１０６５のアナログおよび誘導体と
細胞結合剤の種々の複合体製造の代表例が、以下に記載
される。

【００７６】ジスルフィドリンカー小細胞肺ガン細胞（small cell lung cancer cells）
〔ジェイ．ディー．グリフィン、ティー．ハーセンド、
アール．ベバリッジアンドエス．エフ．シュロスマ
ン、ジャーナル・オブ・イムノロジー、１３０：２９４
７（１９８３）〕の表面に発現されるＣＤ−５６抗原に
結合する抗体Ｎ９０１が、複合体の調製に用いられた。
抗体は、Ｎ−スクシンイミジル−３−ピリジルジチオプ
ロピオネートを用いて上記のように修飾し〔ジェイ．カ
ールソン、エイチ．ドレビンアンドアールアクセ
ン、Biochem. J. 、１７３：７２３（１９７８）〕、抗
体１分子当たり平均して４つのピリジルジチオ基を導入
した。修飾された抗体は、チオール含有ＣＣ−１０６５
アナログ７と反応させてジスルフィド結合で連結した複
合体を製造した。結合された薬物分子の数は、抗体分子
に導入されたピリジルジチオ基と非常に近いものであっ
た。ビス−インドリル−ＣＰＩ薬物２０は、同様に抗体
との複合体とされた（方法Ａ、Ｆｉｇ．５Ａ参照）。

【００７７】活性化されたジスルフィド含有インドリル
−ベンゾフラニルＣＰＩ誘導体１８（Ｆｉｇ．３Ｃ）の
複合体を調製するために、抗体を以前に記載されている
ように〔ジェイ．エム．ランバートら、ジャーナル・オ
ブ・バイオロジカル・ケミストリー、２６０；１２０３
５（１９８５）〕２−イミノチオランで修飾し、抗体１
分子当たり平均して４〜６のスルフヒドリル基を導入し
た。薬物１８との反応により、抗体１分子当たり平均し
て３〜４分子の薬物を含む複合体を製造した（方法Ｂ、
Ｆｉｇ．５Ｂ参照）。

【００７８】酸−開裂性リンカーＣＰＩは、末端のインドリルまたはベンゾフラニル部分
のＣ−５位に保護アミノ基を含有する置換基を有するイ
ンドリル、ベンゾフラニル、ビス−インドリル、ビス−
ベンゾフラニル、インドリル−ベンゾフラニル、または
ベンゾフラニル−インドリル誘導体と結合できる。保護
基は、温和な酸性条件下で開裂し、遊離のアミノ基を生
じることのできるｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルまたは
ビフェニルプロピルオキシカルボニルなどの官能基が挙
げられる。このアミノ基を含有するＣＣ−１０６５のア
ナログまたは誘導体は、上記のように酸−開裂性リンカ
ーを介して抗体または他の細胞結合剤と連結できる〔ダ
ブリュー．エイ．ブラッターら、バイオケミストリー
２４、１５１７−１５２４（１９８５）；米国特許第
４，５４２，２２５，４，５６９，７８９，４，６
１８，４９２，４，７６４，３６８〕。

【００７９】同様に、ＣＰＩは、末端のインドリルまた
はベンゾフラニル部分のＣ−５位に保護ヒドラジド基を
含有する置換基を有するインドリル、ベンゾフラニル、
ビス−インドリル、ビス−ベンゾフラニル、インドリル
−ベンゾフラニル、またはベンゾフラニル−インドリル
誘導体と結合できる。保護基はまた、温和な酸性条件下
で開裂し、遊離のヒドラジド基を生じることのできるｔ
ｅｒｔ−ブトキシカルボニルまたはビフェニルプロピル
オキシカルボニルなどの官能基が挙げられる。このヒド
ラジド基を含有するＣＣ−１０６５のアナログまたは誘
導体は、酸−開裂性ヒドラゾンリンカーを介して抗体ま
たは他の細胞結合剤の炭水化物部分と連結できる〔ヒド
ラゾンリンカーの例としては、ビー．シー．ラグザら、
ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー、３
２、５４８−５５５（１９８９）；アール．エス．グリ
ーンフィールドら、キャンサー・リサーチ、５０、６６
００−６６０７（１９９０）参照〕。

【００８０】光−開裂性リンカー前記のアミノ基を含有するＣＣ−１０６５のアナログま
たは誘導体は、上記のように光開裂性リンカーを介して
抗体または他の細胞結合剤と連結できる〔ピー．センタ
ーら、フォトケミストリー・アンド・フォトバイオロジ
ー、４２、２３１−２３７（１９８５）；米国特許第
４，６２５，０１４号〕。

【００８１】ペプチダーゼ−開裂性リンカー前記のアミノ基を含有するＣＣ−１０６５のアナログま
たは誘導体もまた、ペプチドスペーサーを介して細胞結
合剤と連結できる。薬物と高分子量タンパク質担体の間
の短いペプチドスペーサーは血清中では安定であるが細
胞内ペプチダーゼにより容易に加水分解されることがす
でに示されている〔エー．トロウトら、プロシーディン
グズ・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエン
シーズ、７９、６２６−６２９（１９８２）〕。アミノ
基を含有するＣＣ−１０６５のアナログまたは誘導体
は、Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、および
Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕなどのペプチドと１−
エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジ
イミド−ＨＣｌ（ＥＤＣ−ＨＣｌ）などの縮合剤の存在
下に縮合させて細胞結合剤と連結したペプチド誘導体を
得ることができる。

【００８２】エステラーゼ−開裂性リンカーＣＰＩは、末端のインドリルまたはベンゾフラニル部分
のＣ−５位にヒドロキシアルキル基を含有する置換基を
有するインドリル、ベンゾフラニル、ビス−インドリ
ル、ビス−ベンゾフラニル、インドリル−ベンゾフラニ
ルまたはベンゾフラニル−インドリル誘導体と結合でき
る。このＣＣ−１０６５のアナログまたは誘導体は、コ
ハク酸無水物でスクシニル化し、次いで細胞結合剤と連
結することにより、細胞内エステラーゼで加水分解され
て遊離の薬物を放出する複合体を製造できる〔例えば、
イー．アボウド−ピラクら、Biochem. Pharmacol., ３
８、６４１−６４８（１９８９）〕。

【００８３】上記方法により製造された複合体は、標準
的なカラムクロマトグラフィーまたはＨＰＬＣにより精
製される。

【００８４】モノクローナル抗体または細胞結合剤とＣ
Ｃ−１０６５のアナログまたは誘導体の間の複合体は、
好ましくは、上記のようにジスルフィド結合を介して連
結され、ＣＣ−１０６５またはそのアナログを送達でき
るものである。そのような細胞結合性複合体は、モノク
ローナル抗体をスクシンイミジルピリジル−ジチオプロ
ピオネート（ＳＰＤＰ）で修飾するような公知の方法に
より調製される〔カールソンら、１７３ Biochem. J.,
７２３−７３７（１９７８）〕。得られたチオピリジ
ル基は、次いでチオール基を含有するＣＣ−１０６５ま
たはそのアナログで処理することにより置換され、ジス
ルフィドで連結された複合体を得る。または、アリルジ
チオ−ＣＣ−１０６５のアナログまたは誘導体の場合に
は、細胞結合性複合体の形成は、ＣＣ−１０６５誘導体
のアリル−チオール基を、抗体分子にあらかじめ導入さ
れていたスルフヒドリル基で直接置換することにより行
われる。ジスルフィド結合を介して連結された１〜１０
個のＣＣ−１０６５薬物を含む複合体は、いずれかの方
法により容易に調製される。

【００８５】より詳しくは、１ｍＭのＥＤＴＡを含有す
る０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）中のジ
チオピリジル基で修飾された抗体の１ｍｇ／ｍｌの濃度
の溶液を、チオール含有ＣＣ−１０６５またはそのアナ
ログ（１．２５モル当量／ジチオピリジル基）と処理す
る。修飾された抗体からのチオピリジンの放出は、３４
３ｎｍで分光学的にモニターされ、約３０分で完結す
る。抗体−ＣＣ−１０６５複合体は、未反応の薬物及び
他の低分子量物質をセファデックスＧ−２５カラムを通
すゲル濾過により除去して精製する。抗体分子当たりに
結合するＣＣ−１０６５分子またはＣＣ−１０６５アナ
ログ分子の数は、２５２ｎｍと２８０ｎｍの吸光度の比
率を測定することにより決定される。平均１〜１０個の
ＣＣ−１０６５分子またはそのアナログ／抗体分子が、
この方法によりジスルフィド結合を介して連結できる。

【００８６】非開裂的に連結された抗体とＣＣ−１０６
５のアナログまたは誘導体の複合体を調製することもで
きる。該抗体は、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミ
ドメチル）シクロヘキサン１−カルボキシレート（ＳＭ
ＣＣ）、スルホ−ＳＭＣＣ、ｍ−マレイミドベンゾイル
−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、
スルホ−ＭＢＳまたはスクシンイミジル−ヨードアセテ
ートのような架橋試薬を用い、文献の記載に従い修飾
し、１〜１０個の反応性基を導入する。ヨシタケら、１
０１ユーロピアン・ジャーナル・オブ・バイオケミス
トリー、３９５−３９９（１９７９）；ハシダら、J. A
pplied. Biochem., ５６−６３（１９８４）；およびリ
ウら、１８バイオケミストリー、６９０−６９７（１
９７９）参照。修飾された抗体は、次いでＣＣ−１０６
５のチオール含有アナログまたは誘導体と反応させ、複
合体を調製する。該複合体は、セファデックスＧ−２５
を通すゲル濾過により精製する。

【００８７】修飾された抗体は、チオール含有ＣＣ−１
０６５（１．２５モル当量／マレイミド基））と処理す
る。該混合物は、約１時間、約４℃でインキュベートす
る。抗体とＣＣ−１０６５のアナログまたは誘導体の複
合体は、セファデックスＧ−２５カラムを通すゲル濾過
により精製する。典型的には、平均１〜１０個のＣＣ−
１０６５分子またはアナログ／抗体が、連結される。

【００８８】好ましい方法は、抗体をスクシンイミジル
４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン１−カル
ボキシレート（ＳＭＣＣ）で修飾してマレイミド基を導
入し、次いで修飾された抗体を、チオール基を含有する
ＣＣ−１０６５のアナログまたは誘導体で修飾し、チオ
エーテル基で連結された複合体を得る。抗体分子当たり
１〜１０の薬物分子を有する複合体になる。

【００８９】細胞結合剤とＣＣ−１０６５のアナログま
たは誘導体の複合体のインビトロでの細胞障害性ＣＣ−１０６５のアナログまたは誘導体並びにその細胞
結合剤との複合体の、ナマウラおよびＳＷ２のような非
粘着細胞系に対する細胞障害性は、ゴールドマッヒャー
ら、１３５ジャーナル・オブ・イムノロジー、３６４
８−３６５１（１９８５）の記載のような細胞増殖の逆
−外挿（back-extrapolation）により測定される。これ
らの化合物のＡ−３７５やＳＣａＢＥＲのような粘着細
胞系に対する細胞障害性は、ゴールドマッヒャーら、１
０２ J. Cell Biol., １３１２−１３１９（１９８
６）に記載されたようなクローン原性試験（clonogenic
assay）により測定される。

【００９０】選択された細胞集団を殺す治療剤及び方法本発明はまた、以下のものからなる選択された細胞集団
を殺す治療剤も提供する：（ａ）細胞結合剤と結合した
１または２以上の上記ＣＣ−１０６５のアナログまたは
誘導体の細胞障害量、および（ｂ）薬学的に許容される
担体、希釈剤および賦形剤。

【００９１】同様に、本発明は、選択された細胞集団か
らの細胞を含むと推測される細胞集団または組織を細胞
結合剤と結合した１または２以上の上記ＣＣ−１０６５
のアナログまたは誘導体からなる細胞障害剤の細胞障害
量と接触させることからなる選択された細胞集団を殺す
方法を提供するものである。

【００９２】該細胞障害剤は、上記のようにして調製さ
れる。

【００９３】好ましい薬学的に許容される担体、希釈剤
および賦形剤は周知であり、臨床的位置付けを保証する
よう当業者が決定できる。

【００９４】好ましい担体、希釈剤および／または賦形
剤の例としては、（１）ヒト血清アルブミンを約１ｍｇ
／ｍｌ〜２５ｍｇ／ｍｌを含むドゥルベコのリン酸緩衝
生理食塩水（ｐＨ７．４）、（２）０．９％生理食塩水
（０．９％Ｗ／ＶＮａＣｌ），および（３）５％（Ｗ
／Ｖ）デキストロースが挙げられる。

【００９５】選択された細胞集団を殺す方法は、インビ
トロ、インビボまたはイクスビボ（ex vivo ）で実施さ
れる。

【００９６】インビトロでの使用例としては、標的抗原
を発現しない目的とするバリアント（variant ）を除く
すべての細胞殺すため；または望ましくない抗原を発現
するバリアントを殺すために細胞培養物を処理すること
が挙げられる。

【００９７】インビトロでの使用の非臨床的条件は、当
業者により容易に決定される。

【００９８】イクスビボでの使用例としては、病気のま
たは悪性の細胞を殺すために、同じ患者への移植に先立
ち自己骨髄を処理すること：コンピテントＴ細胞を殺
し、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を防止するために、該
移植の前に骨髄を処理することが挙げられる。

【００９９】ガン治療または自己免疫疾患の治療におい
て、自己移植の前に骨髄から腫瘍細胞またはリンパ系細
胞を除去するため、またはＧＶＨＤを防止するために移
植の前に同種間（allogeneic）骨髄または組織からＴ細
胞または他のリンパ系細胞を除去するため、処理が以下
のようにしてなされる。骨髄は、患者または他の個人か
ら集められ、次いで本発明の細胞障害剤を約１０μＭ〜
１ｐＭの範囲の濃度で加えた血清を含む培地を約３０分
〜約４８時間、約３７℃でインキュベートされる。イン
キュベーションの正確な濃度及び時間条件（＝用量(dos
e)）は、当業者により容易に決定される。インキュベー
ションの後、骨髄細胞は血清を含む培地で洗浄され、公
知の方法に従い静脈注入により患者に戻される。患者
が、骨髄を採取してから処理された細胞を再注入するま
でに間に切除的化学療法（ablativechemotherapy ）ま
たは全身照射のコースのような他の治療を受けている環
境下では、処理された骨髄は標準的な医療器具を用い、
液体窒素で凍結して保存される。

【０１００】臨床的なインビボの使用では、本発明の細
胞障害剤は、無菌性（sterility ）およびエンドトキシ
ンレベルが試験された溶液として、あるいは注射用滅
菌水に溶解できる凍結乾燥固体として供給できる。複合
体投与の好ましいプロトコールの例を、以下に示す。複
合体は、静注ボーラス（i.v. bolus）として毎日５日間
投与するか、５日間持続的に注入するなどの方法で、５
日間毎日投与される。ボーラスの用量は、ヒト血清アル
ブミン（例えば、ヒト血清アルブミンの濃縮溶液の０．
５〜１ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ）が添加された通常生理
食塩水（normalsaline ）の５０〜１００ｍＬを投与さ
れる。持続注入の場合には、２４時間当たり、ヒト血清
アルブミンの上記濃縮溶液の２．５〜５ｍＬが添加され
た２５０〜５００ｍＬの通常生理食塩水が投与される。
投与量は、静注で１日当たり１０μｇ〜１００ｍｇ／ｋ
ｇ体重である（１日当たり１ｎｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの範
囲）。治療の１〜４週間後に、患者は第２コースの治療
を受ける。投与経路、賦形剤、希釈剤、用量、時間など
に関する特別な臨床的プロトコールは、臨床立場を保証
するように当業者により決定される。

【０１０１】選択された細胞集団を殺すインビボまたは
イクスビボの方法に従い処理できる医学的条件の例とし
ては、肺ガン、乳ガン、結腸ガン、前立腺ガン、腎臓ガ
ン、すい臓ガン、卵巣ガンおよびリンパガンなどの任意
の型のガン、メラノーマ、自己免疫疾患、慢性関節リウ
マチなどの全身性狼瘡、および多発性硬化症、腎臓移植
片拒絶、肝臓移植片拒絶、肺移植片拒絶、心臓移植片拒
絶および骨髄移植片拒絶などの移植片拒絶（transplant
rejection）、移植片対宿主病、ＣＭＶ感染、ＨＩＶ感
染、ＡＩＤＳなどのウイルス感染、細菌感染、ジアルジ
ア鞭毛虫症、アメーバ症、住血吸虫症などの寄生虫感染
および当業者により決定されるその他のものが挙げられ
る。

【０１０２】

【実施例】本発明は、非限定的な実施例を参照して例示
される。特に言及しない限り、すべてのパーセント、比
率、部などは重量による。

【０１０３】物質及び方法融点は、電熱装置を用いて測定され、補正はされていな
い。ＮＭＲスペクトルは、Hitachi 1100 連続波長（６
０ＭＨｚ）装置またはBruker AM300 （３００ＭＨｚ）
分光計で記録した。ケミカルシフトは、内部標準として
のＴＭＳに対する相対的なｐｐｍで記録する。紫外線ス
ペクトルは、Hitachi U1200 分光計で記録した。ＨＰＬ
Ｃは、Gilsonの可変波長検出器およびWaters Radialpak
逆相Ｃ−１８カラムを備えたRainin HPLC システムを
用いて行われた。薄層クロマトグラフィーは、Analtech
GF シリカゲルＴＬＣプレート上で行われた。フラッシ
ュカラムクロマトグラフィー用のシリカゲルは、Baker
から得た。テトラヒドロフランは、リチウムアルミニウ
ムヒドリドを用いて蒸留することにより乾燥した。ジメ
チルアセトアミドおよびジメチルホルムアミドは、減圧
下にカルシウムヒドリド上で蒸留することにより乾燥し
た。使用した他のすべての溶媒は、試薬級またはＨＰＬ
Ｃ級であった。

【０１０４】ヒト小細胞肺ガン細胞系ＳＷ２は、ダナ−
ファーバー・キャンサー・インスティテュート（Dana-F
arber Cancer Institute）から得た。ヒトガン細胞系ナ
マルワ（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ１４３２）、Ａ−３７５
（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ１６１９）、およびＳＣａＢＥＲ
（ＡＴＣＣＨＴＢ３）は、アメリカン・タイプ・カル
チャー・コレクション（ＡＴＣＣ）、ベテスダ、エムデ
ィー（Bethesda、MD）から各々得た。

【０１０５】実施例１モノインドリルＣＣ−１０６５アナログ７の合成モノインドリルＣＣ−１０６５アナログ７は、Ｆｉｇ．
２に示されたスキーム１に従い合成された。

【０１０６】３−（フェニルジチオ）プロピオン酸
（４）ジフェニルジスルフィド（９．３３ｇ、４２．６ｍｍｏ
ｌ）をＴＨＦ（４０ｍＬ）に溶解し、３−メルカプトプ
ロピオン酸（１．５１ｇ、１４．２ｍｍｏｌ）のメタノ
ール（４０ｍＬ）溶液および１０ＭＮａＯＨ（１．４
ｍＬ）溶液で順に処理した。反応混合物を窒素雰囲気下
に室温で３時間撹拌した。次いで溶液を減圧下に留去
し、白色の残渣を酢酸エチルに再溶解し、シリカゲル上
フラッシュクロマトグラフィーで精製した。生成物は、
５％酢酸を含有する酢酸エチル：ヘキサンで溶出し、化
合物４を白色固体として得た（１．８２ｇ、６０％）、
融点５８〜５９℃。ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ ２．５−
３．０（ｍ，４Ｈ）、７．１−７．６（ｍ，５Ｈ）およ
び１０．８（ｓ，１Ｈ）。

【０１０７】５−〔３−（フェニルジチオ）プロピオニ
ルアミノ〕−インドール−２−カルボン酸（５）化合物４（５３５ｍｇ、２．５０ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨ
Ｆ（１０ｍＬ）溶液を、アルゴン雰囲気下に−２３℃に
冷却した。トリエチルアミン（２５３ｍｇ、２．５０ｍ
ｍｏｌ）およびイソブチルクロロホルメート（３４０ｍ
ｇ、２．５０ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で３
０分間撹拌した。５−アミノ−インドール−２−カルボ
ン酸〔エム．エイ．ワーペホスキら、３１、ジャーナル
・オブ・メディシナル・ケミストリー、５９０−６０３
（１９８８）；およびエス．エム．パーメーターら、８
０、J. Med. Chem. Soc., ４６２１（１９５８）〕（５
４５ｍｇ、３．１ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（２ｍＬ）溶
液を加え、反応混合物を室温まで暖め、さらに４５分間
撹拌した。次いで、沈殿を濾過により除去し、濾液を減
圧下に留去し、褐色の残渣を得た。５％酢酸を含有する
酢酸エチル：ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロ
マトグラフィーにより、褐色生成物として化合物４を得
た（１８５ｍｇ、２０％）。ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）
δ ２．２７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）、３．０６
（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）、７．００（ｓ，１Ｈ）、
７．１−７．７（ｍ，８Ｈ）、７．９８（ｓ，１Ｈ）、
９．９２（ｓ，１Ｈ）、１１．６２（ｓ，１Ｈ）。

【０１０８】モノ−インドリルＣＣ−１０６５アナログ
６ＣＰＩをカルボン酸５と結合し、生成物を上記のように
して精製した〔エム．エイ．ワーペホスキら、３１、ジ
ャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー、５９０
−６０３（１９８８）〕。ＮＭＲ（アセトン−ｄ₆）δ
２．４２（ｓ，３Ｈ）、２．８３（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７
Ｈｚ）、３．１５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）、３．５０
−３．６５（ｍ，１Ｈ）、３．８５−４．２０（ｍ，２
Ｈ）、４．５０−４．８５（ｍ，２Ｈ）、７．００−
８．９５（ｍ，１１Ｈ）、８．１６（ｓ，１Ｈ）、９．
１７（ｓ，１Ｈ）、９．９３（ｓ，１Ｈ）、１０．７５
（ｓ，１Ｈ）。

【０１０９】モノ−インドリルＣＣ−１０６５アナログ
７ジスルフィド６（１．４μｍｏｌ）の試料をアセトニト
リル（０．２６ｍＬ）に溶解し、アルゴン雰囲気下に４
℃に冷却した。ジチオスレイトール（１．５μｍｏｌ）
の０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（０．０６ｍＬ，ｐＨ
７．５）を加え、反応の進行（１時間で完結する）をWa
ters radialpak 逆相Ｃ−１８カラムを用い、アセトニ
トリル：水（５０％ＣＨ₃ＣＮ０−８分、５０−１０
０％ＣＨ₃ＣＮ８−１２分；流速＝１．５ｍＬ／ｍｉ
ｎ）で溶出するＨＰＬＣによりモニターした。出発物質
６は、保持時間が１２．３分であったが、生成物７は
５．７分で溶出した。生成物７のチオール含量は、エル
マン（Ｅｌｌｍａｎ´ｓ）比色試験を用いて測定し、分
光学的に測定した薬物濃度と正確に比例した。

【０１１０】実施例２インドリル−ベンゾフラニルＣＣ−１０６５アナログ１
８の合成インドリル−ベンゾフラニルＣＣ−１０６５アナログ１
８は、Ｆｉｇ．３Ａ、３Ｂおよび３Ｃに示されたスキー
ム２ａ、２ｂおよび２ｃに従い合成された。

【０１１１】ｔ−ブチル５−ニトロインドール−２−
カルボキシレート（９）エチル５−ニトロインドール−２−カルボキシレート
（８）（４．３ｇ、１９．５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ−メタ
ノール（１：１、ｖ／ｖ）（１００ｍＬ）撹拌溶液に、
アルゴン下に室温でＮａＯＨ（１２ｇ，３００ｍｍｏ
ｌ）の水（３００ｍＬ）溶液を加えた。得られた深い赤
−褐色の溶液を３時間撹拌し、希塩酸でｐＨ１まで酸性
化して反応を停止した。析出した生成物を吸引濾過で集
め、溶解したままの生成物をＴＨＦ：酢酸エチル（１：
１、ｖ／ｖ）で抽出した。沈殿をＴＨＦに溶かし、この
溶液を抽出からの有機層と合わせた。硫酸マグネシウム
で乾燥し、溶媒を留去して５−ニトロインドール−２−
カルボン酸（３．６ｇ、収率９０％）を淡褐色固体とし
て得た。ＮＭＲ（アセトン−ｄ₆）δ ７．０−９．０
（ｍ，４Ｈ）、δ ９．５（ｓ，１Ｈ）、δ １２．５
（ｓ，１Ｈ）。５−ニトロインドール−２−カルボン酸
（３．１ｇ、１５ｍｍｏｌ）の１５０ｍＬＴＨＦ撹拌
溶液に、アルゴン下にオキザリルクロリド（４．８ｇ、
３７．６ｍｍｏｌ）を加え、次いでＤＭＦを０．１ｍＬ
加えることにより、激しくガスが発生した。４０分後、
反応混合物を蒸発乾固した。得られた固体を１００ｍＬ
のＴＨＦに溶解し、−２３℃に冷却してアルゴン下に撹
拌した。カリウムｔ−ブトキシド（１．０ＭＴＨＦ
中、４５ｍＬ、４５ｍｍｏｌ）溶液を３０分かけて滴下
し、さらに２０分間撹拌した。反応を５倍量の水で停止
し、希塩酸で中和して、酢酸エチルで抽出した。有機層
を飽和炭酸水素ナトリウム及び水で洗浄し、硫酸マグネ
シウムで乾燥し、濾過し、次いで濃縮して６（３．２４
ｇ、収率８３％）を褐色固体として得た。ＮＭＲ（アセ
トン−ｄ₆）δ １．６（ｓ，９Ｈ）、δ ７．４−
８．９（ｍ，５Ｈ）。

【０１１２】ｔ−ブチル５−アミノインドール−２
カルボキシレート（１０）化合物９（３．５ｇ、１３．３ｍｍｏｌ）および１００
ｍＬ乾燥ＴＨＦを加えたフラスコをアルゴンガスで置換
（purged）した。次いでこの溶液にパラジウム水素添加
触媒（炭素上１０％、０．６ｇ）を加え、該反応混合物
を水素で２．５日間バブリングした。触媒を濾過で除去
し、溶媒を留去して化合物１０（２．８ｇ、収率９１
％）を褐色固体として得た。ＮＭＲ（アセトン−ｄ₆）
δ １．６（ｓ，９Ｈ）、δ ６．６−７．６（ｍ，４
Ｈ）。

【０１１３】なお、この生成物は不安定であるが、暗
所、−２０℃で不活性ガス雰囲気下に貯蔵できる。

【０１１４】ｔ−ブチル５−（ブロモメチル）ベンゾ
フラン２−カルボキシレート（１２）５−メチルベンゾフラン−２−カルボン酸（１１）を、
最初に以下のようにしてｔ−ブチルエステルに変換し
た。化合物１１（２０ｇ、１１４ｍｍｏｌ）の２５０ｍ
Ｌ乾燥ＴＨＦ撹拌溶液に、アルゴン下にオキザリルクロ
リド（４５ｇ、３５６ｍｍｏｌ）を加え、次いでＤＭＦ
を０．２５ｍＬ加えることにより、激しくガスが発生し
た。４０分後、該溶液を蒸発乾固した。固体残渣を２５
０ｍＬの乾燥ＴＨＦに再溶解し、アルゴン下に撹拌しな
がら−２３℃に冷却した。次いで、カリウムｔ−ブトキ
シド（１．０ＭＴＨＦ中、２８０ｍＬ、２８０ｍｍｏ
ｌ）溶液を１時間かけて滴下した。反応混合物を６００
ｍＬの水に注ぎ、次いで酢酸エチルで抽出した。有機層
を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び水で洗浄し、硫酸
マグネシウムで乾燥し、留去して該エステル（２４．４
ｇ、収率９３％）を黄色液体として得、−２０℃に冷却
して固体とした。ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ １．６
（ｓ，９Ｈ）、δ ２．４（ｓ，３Ｈ）、δ ７．１−
７．６（ｍ，４Ｈ）。

【０１１５】このエステル（１０ｇ、４３．１ｍｍｏ
ｌ）の１００ｍＬ蒸留四塩化炭素撹拌溶液に、Ｎ−ブロ
モスクシンイミド（９．２ｇ、５１．７ｍｍｏｌ）およ
びベンゾイルペルオキシド（０．２ｇ、０．８１ｍｍｏ
ｌ）を加えた。該反応混合物を１時間加熱還流した。ジ
ブロム化した化合物の十分な形成が起こる前に反応を止
めるのが重要であるため、反応の進行は、ＮＭＲ（メチ
ル：δ ２．４；ブロモメチル：δ ４．６；ジブロモ
メチル：δ ６．８）によりモニターした。沈殿したス
クシンイミドは、溶液から濾別し、濾液を水、飽和炭酸
水素ナトリウム、水の順で洗浄した。四塩化炭素溶液を
硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、留去して化合物１
２（１２．９ｇ、収率９６％）を黄−白色固体として得
た。ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ １．６（ｓ，９Ｈ）、δ
４．６（ｓ，２Ｈ）、δ ７．３−７．９（ｍ，４
Ｈ）。

【０１１６】ｔ−ブチル５−（Ｓ−アセチルチオメチ
ル）ベンゾフラン−２−カルボキシレート（１３）化合物１２（１０ｇ、３０．６ｍｍｏｌ）の１００ｍＬ
乾燥アセトン撹拌溶液に、アルゴン下室温でカリウムチ
オアセテート（６．１１ｇ、５３．５ｍｍｏｌ）を加え
た。３．５時間後、該反応混合物を４００ｍＬの飽和炭
酸水素ナトリウム水溶液で処理し、クロロホルムで抽出
した。クロロホルム層を炭酸水素ナトリウム水溶液及び
水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮
して濃厚黒色オイルを得た。粗生成物をシリカゲルカラ
ムクロマトグラフィーで酢酸エチル：ヘキサン（１０：
９０）で溶出しながら精製して化合物１３（５．２ｇ、
収率５５％）を淡赤色固体として得た。ＮＭＲ（アセト
ン−ｄ₆）δ １．６（ｓ，９Ｈ）、δ ２．３（ｓ，
３Ｈ）、δ ４．２（ｓ，２Ｈ）、７．２−７．７
（ｍ，４Ｈ）。

【０１１７】ｔ−ブチル５−（２−ピリジルジチオメ
チル）ベンゾフラン−２−カルボキシレート（１４）化合物１３（１．０ｇ、３．３ｍｍｏｌ）の５０ｍＬ無
水エタノール溶液をアルゴン下室温で撹拌し、水素化ホ
ウ素ナトリウム（２．５ｇ、６５ｍｍｏｌ）の７５ｍＬ
エタノール溶液で処理した。反応混合物のＴＬＣ分析
（シリカゲル、クロロホルム：ヘキサン６０：４０）
で出発物質のエステルが消失したとき（〜２時間）反応
混合物を０℃に冷却し、３０ｍＬの水で処理した。溶液
のｐＨは氷酢酸を加えて４にした。次いで溶液を３Ｍの
ＮａＯＨを添加してｐＨを５とし、２−ピリジル−ジス
ルフィド（２．８７ｇ、１３ｍｍｏｌ）の１０ｍＬ無水
エタノール溶液を加え、反応混合物を室温で２時間撹拌
した。反応を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて停
止し、該混合物をクロロホルムで抽出した。クロロホル
ム層を炭酸水素ナトリウム水溶液及び水で洗浄し、硫酸
マグネシウムで乾燥し、濾過し、留去した。粗生成物を
シリカゲルカラムクロマトグラフィーで酢酸エチル：ヘ
キサン（２０：８０）で溶出しながら精製し、純粋な生
成物１４を白色固体として回収した。ＮＭＲ（ＣＤＣｌ
₃）δ １．６（ｓ，９Ｈ）、δ ４．１（ｓ，２
Ｈ）、６．８−７．６（ｍ，７Ｈ）、８．３−８．５
（ｍ，１Ｈ）。

【０１１８】５−（２−ピリジルジチオメチル）ベンゾ
フラン−２−カルボン酸（１５）トリフルオロ酢酸１５ｍＬに、アルゴン下０℃で撹拌し
ながらエステル１４（２．２ｇ、５．９ｍｍｏｌ）を加
えた。１．５時間後、トリフルオロ酢酸を反応混合物か
ら留去し、化合物１５（１．８ｇ、収率９７％）を白色
固体として得た。ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆） δ ４．
３（ｓ，２Ｈ）、７．０−７．８（ｍ，７Ｈ）、８．３
−８．５（ｍ，１Ｈ）。

【０１１９】ｔ−ブチル５−〔（５−（２−ピリジル
ジチオメチル）ベンゾフラン−２−イルカルボニル）ア
ミノ〕インドール−２−カルボキシレート（１６）化合物１５（２４７ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）の３０ｍ
Ｌ乾燥ＴＨＦ溶液に、アルゴン下室温で撹拌した溶液
を、ジシクロヘキシルカルボジイミド（１７７ｍｇ、
０．８６ｍｍｏｌ）の５ｍＬ塩化メチレン溶液、４−
（ジメチルアミノ）−ピリジン（２９ｍｇ、０．２３ｍ
ｍｏｌ）の２ｍＬ塩化メチレン溶液、および化合物１０
（２００ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ）の５ｍＬ塩化メチレ
ン溶液の順で処理した。反応混合物を１昼夜撹拌した。
ジシクロヘキシルウレアを反応混合物から濾別し、濾液
を水、冷０．１Ｍ塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液
および水で洗浄した。有機溶液を硫酸マグネシウムで乾
燥し、濾過し、濃縮して暗色オイルを得た。粗生成物を
さらにシリカゲルカラムクロマトグラフィーで、酢酸エ
チル：ヘキサンで溶出しながら精製し、化合物１６をオ
フホワイト固体として得た。ＮＭＲ（アセトン−ｄ₆）
δ １．６（ｓ，９Ｈ）、δ ４．３（ｓ，２Ｈ）、δ
７．０−８．６（ｍ，１２Ｈ）。

【０１２０】５−〔（５−２−ピリジルジチオメチル）
ベンゾフラン−２−イル−カルボニル）アミノ〕インド
ール−２−カルボン酸（１７）４ｍＬのトリフルオロ酢酸を０℃に冷却し、アルゴン下
撹拌しながら化合物１６（１２０ｍｇ、０．２３ｍｍｏ
ｌ）を加えた。２時間後、トリフルオロ酢酸を減圧下に
除去し、化合物１７をオフホワイト固体として得た。Ｎ
ＭＲ（アセトン−ｄ₆）δ ４．３（ｓ，２Ｈ）、δ
７．３−８．７（ｍ，１２Ｈ）。

【０１２１】インドリル−ベンゾフラニル−ＣＣ−１０
６５アナログ１８ＣＰＩを上記のＥＤＣの存在下に化合物１７と結合さ
せ、化合物１８を得た。化合物１８の分析は、Waters
逆相Ｃ−１８ＨＰＬＣカラムでアセトニトリルと水の
混合物を溶出液（プログラム：０−４分、６０％ＣＨ₃
ＣＮ；４−５分、０−１００％ＣＨ₃ＣＮ；５−１５
分、１００％ＣＨ₃ＣＮ；流速１．５ｍｌ／分）とし
て用いて行い、８．２分に単一ピークを得た。

【０１２２】実施例３ビス−インドリルＣＣ−１０６５アナログ２２の合成ビス−インドリル−ＣＣ−１０６５アナログ２２は、Ｆ
ｉｇ．４に示すスキーム３に従い合成された。

【０１２３】ｔ−ブチル（３´−フェニルジチオプロ
ピオニル）−５−アミノインドール−２−カルボキシレ
ート（１９）３−フェニルジチオプロピオン酸（４）（１．４０ｇ、
６．５４ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１５ｍＬ）撹拌溶液
に、−２３℃でイソブチルクロロホルメート（０．９３
ｍＬ、７．１９ｍｍｏｌ）を加え、その直後にトリエチ
ルアミン（１．０１ｍＬ、７．１９ｍｍｏｌ）を加え
た。−２３℃で１５分間撹拌後、ｔ−ブチル−５−アミ
ノインドール−２−カルボキシレート（１０）（１．５
２ｇ、６．５４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン
（０．９２ｍＬ、６．５４ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１
５ｍＬ）溶液を５分間かけてゆっくり滴下した。反応混
合物を−２３℃で３０分間撹拌後、周囲の温度でさらに
３０分間撹拌した。反応混合物に０．５Ｍ塩酸を５０ｍ
Ｌ加えて酸性とし、酢酸エチルで抽出した。有機層を
水、飽和ＮａＨＣＯ₃、水の順で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で
乾燥し、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグ
ラフィーで、酢酸エチルのヘキサン溶液のグラジエント
で溶出しながら精製し、生成物１９をオフホワイト固体
として得た（１．４３ｇ、収率５１％）。ＮＭＲ（アセ
トン−ｄ₆）δ １．６（ｓ，９Ｈ）、δ２．９−３．
３（ｍ，４Ｈ）、δ ７．０−８．１（ｍ，９Ｈ）、
９．１５（ｓ，１Ｈ）。

【０１２４】ｔ−ブチル５−〔（３´−フェニルジチ
オプロピオニル）インドール−２−イルカルボニルアミ
ノ〕インドール−２−カルボキシレート（２０）エステル１９（１．４ｇ、３．３ｍｍｏｌ）をトリフル
オロ酢酸（１４ｍＬ）と０℃でアルゴン雰囲気下に処理
した。反応混合物をこの温度で１時間撹拌した。次いで
該溶液を減圧下に蒸発乾固し、得られたカルボン酸をさ
らに精製することなく次の工程に使用した。

【０１２５】上記の得られたカルボン酸（２５０ｍｇ、
０．６４ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解し、
アルゴン雰囲気下に撹拌し、アミノエステル１０（１４
９ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（０．５ｍＬ）溶
液およびＥＤＣ（１２４ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）のＤ
ＭＦ（０．５ｍＬ）溶液で処理した。反応混合物を室温
で４８時間撹拌した。次いで、冷０．５ＭＨＣｌ（２
５ｍＬ）を加え、混合物をＴＨＦ：酢酸エチル（１：１
（ｖ／ｖ）、４×５０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わ
せて順に水（４×１００ｍＬ）、飽和炭酸水素ナトリウ
ム水溶液（２×１００ｍＬ）および水（２×１００ｍ
Ｌ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ₄で乾燥し、濾過
し、溶媒を減圧下蒸発乾固した。残渣をシリカゲルカラ
ムクロマトグラフィーで、アセトン：トルエン（３０：
７０ｖ／ｖ）で溶出しながら精製し、純粋な生成物２
０（２００ｍｇ、収率５２％）を得た。ＮＭＲ（ＤＭＳ
Ｏ−ｄ₆）δ：８．１２−７．１０（ｍ，１３Ｈ）、
３．３−２．７７（ｍ，４Ｈ）、１．５８（ｓ，９
Ｈ）。

【０１２６】２０のビス−インドリル−ＣＣ−１０６５
アナログ２１への変換上記エステル１９の加水分解と同様にして、エステル２
０を０℃でトリフルオロ酢酸を用いて０℃でカルボン酸
に加水分解した。得られたカルボン酸を上記のように
〔エム．エイ．ワーペホスキら、ジャーナル・オブ・メ
ディシナル・ケミストリー、５９０−６０３（１９８
８）〕ＥＤＣを用いてＣＰＩと結合させ、ビス−インド
リル−ＣＣ−１０６５アナログ２１を得た。アセトニト
リルと水の混合液を溶出液（プログラム：６０−１００
％ＣＨ₃ＣＮで１０分間、１００％ＣＨ₃ＣＮで５分
間、流速２．５ｍＬ／分）として用いたWaters 逆相
Ｃ−１８カラム上での化合物２１のＨＰＬＣによる分析
では、１０．１分の保持時間に化合物２１の単一ピーク
が得られた。

【０１２７】２１のチオール含有ＣＣ−１０６５アナロ
グ２２への還元ビス−インドリル−ＣＣ−１０６５アナログ２１（．０
４μｍｏｌ）のアセトニトリル：ＴＨＦ（０．０８ｍ
Ｌ）（１：１、ｖ／ｖ）溶液を、２ｍＭＥＤＴＡを含
有する０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．５；
０．０１４ｍＬ）に溶解したジチオスレイトール（．０
６μｍｏｌ）で処理した。反応混合物をアルゴン雰囲気
下に４℃で４時間維持した。このとき、ジチオスレイト
ール（０．１８μｍｏｌ）の追加分を加えた。３０分
後、反応混合物をＨＰＬＣ（上記化合物２１の精製条件
と同じ）で精製した。保持時間８．０分の新たなピーク
をチオール含有ＣＣ−１０６５アナログ２２として同定
した。このピークは、特徴的な吸収スペクトルを有し、
エルマン試験（Ellman's assay）〔ジー．エル．エルマ
ン、８２、Arch. Biochem. Biophys., ７０（１９５
９）〕を用いるチオール試験に陽性であった。

【０１２８】実施例４抗体に対する薬物複合体抗体に対する薬物複合体は、以下のようにして得られ
た。

【０１２９】方法Ａ薬物は、チオール基を含有する：抗体は、ＳＰＤＰ〔Ｎ
−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）−プ
ロピオネート〕で修飾して、ジチオピリジル基を導入し
た。チオール基を含有する薬物と修飾された抗体との反
応により、ジスルフィド基で結合された複合体を製造し
た。

【０１３０】方法Ｂ薬物は、活性化されたジスルフィド基を含有する：抗体
は、２−イミノチオランで修飾し、チオール基を導入し
た。修飾された抗体の薬物との反応により、ジスルフィ
ド基で結合された複合体を製造した。

【０１３１】方法Ａ抗体Ｎ９０１を前述のように〔ジェイ．カールソンら、
１７３ Biochem. J.,７２３（１９７８）〕ＳＰＤＰで
修飾して、抗体分子当たり平均して４〜６個のジチオピ
リジル基を導入した。２ｍＭＥＤＴＡを含有するｐＨ
７．０の０．１Ｍリン酸カリウム中の、４ｍｇ／ｍＬの
濃度の抗体溶液を１０倍モル過剰のＳＰＤＰのエタノー
ル溶液で処理し、該混合物を３０℃で３０分間インキュ
ベートした。修飾された抗体は、セファデックスＧ−２
５カラムを通すゲル濾過で精製し、次いで１０倍モル過
剰のチオール含有薬物のジメチルアセトアミド（ＤＭ
Ａ）溶液で、ＤＭＡの最終濃度が１０％以下になるよう
にインキュベートした。複合体混合物は、アルゴン雰囲
気下に暗所、２０℃で３時間インキュベートし、次いで
セファデックスＧ−２５カラムを通すゲル濾過で精製
し、複合体になっていない薬物及び他の低分子量物質を
除去した。抗体分子当たり平均４分子の薬物を含む複合
体が、この方法により得られた。

【０１３２】方法Ｂ抗体Ｎ９０１を２−イミノチオラン（２−ＩＴ）を用い
て修飾し、前述のように〔ジェイ．エム．ランバート
ら、２６０ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミ
ストリー、１２０３５（１９８５）〕抗体分子当たり平
均して４〜６個のチオール基を導入した。２ｍＭＥＤ
ＴＡを含有するｐＨ８．０の０．１Ｍのトリエタノール
アミン緩衝液中の、４ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体溶液を２
−イミノチオラン（最終濃度＝１．５ｍＭ）溶液で処理
し、アルゴン雰囲気下に４℃で９０分間インキュベート
した。修飾された抗体は、セファデックスＧ−２５カラ
ムを通すゲル濾過で精製した。チオール基の導入は、エ
ルマン試験（８２、Arch. Biochem. Biophys., ７０
（１９５９））を用いて決定した。修飾された抗体に、
化合物１６のＤＭＡ溶液を、化合物１６が１０倍モル過
剰になるように、且つＤＭＡの最終濃度が１０％以下に
なるように加えた。複合体形成用混合物は、濁った状態
になり、アルゴン雰囲気下に暗所、２０℃で３時間イン
キュベートした。遠心分離で該溶液を透明にし、次いで
セファデックスＧ−２５カラムにかけて未反応の薬物を
除去した。得られた複合体は、抗体分子当たり平均３〜
５分子の薬物を含んでいた。

【０１３３】実施例５抗体−ＳＳ−薬物複合体のインビトロでの細胞障害性及
び特異性Ｎ９０１−ＳＳ−薬物７のインビトロでの細胞障害性ジスルフィドで連結されたモノ−インドリルＣＰＩ誘導
体７の抗体Ｎ９０１との、抗体分子当たり平均３．３個
の薬物分子を含有する複合体のインビトロでの細胞障害
性を、抗原陽性ＳＷ２細胞および抗原陰性ナマルワ細胞
について測定した。細胞は、該複合体と３７℃で２４時
間さらされ、生き残った細胞フラクションを成長逆−外
挿試験（growth back-extrapolation assay)〔ブイ．エ
ス．ゴールドマッヒャーら、１３５、ジャーナル・オブ
・イムノロジー、３６４８−３６５１（１９８５）〕を
用いて測定した。

【０１３４】結果をＦｉｇ．６に示す。Ｆｉｇ．６にお
いて、横軸は、薬物濃度を示し、縦軸は生存細胞のフラ
クションを示す。●は、ＳＷ２細胞を示し、○はナマル
ワ細胞を示す。

【０１３５】この結果は、該複合体は抗原陽性ＳＷ２細
胞に対する細胞障害性は、ＩＣ₅₀値が１．４×１０^-11
Ｍと、非常に強いことを示している。一方、この複合体
は抗原陰性ナマルワ細胞に対し、ＩＣ₅₀値が１×１０^-9
Ｍと非障害性でさえあり、細胞障害効果の特異性を示し
ている。１０００倍過剰の非複合体抗体を添加するとＳ
Ｗ２細胞に対する細胞障害性は消滅した。これは、さら
に細胞障害効果の抗原特異性を示している。

【０１３６】上記のジスルフィドで連結された複合体の
インビトロでの細胞障害性は、抗原陽性Ａ３７５細胞お
よび抗原陰性ＳｃＡＢＥＲ細胞についても測定された。
細胞は、該複合体と３７℃で２４時間さらされ、生き残
った細胞フラクションをクローン原性試験（clonogenic
assay）〔シー．エフ．スコットら、２５、Cancer Imm
unol. Immunother., ３１−４０（１９８７）〕を用い
て測定した。

【０１３７】結果をＦｉｇ．７に示す。Ｆｉｇ．７にお
いて、横軸は、薬物濃度を示し、縦軸は生存細胞のフラ
クションを示す。●は、Ａ３７５細胞を示し、○はＳｃ
ＡＢＥＲ細胞を示す。

【０１３８】この結果は、該複合体はメラノーマ細胞系
のＡ３７５に対し幾分細胞障害性が低い（ＩＣ₅₀＝２×
１０^-10Ｍ、Ｆｉｇ．７）ことを示している。減少した
細胞障害性は、この細胞系がＮ９０１よりもずっと少な
い抗原しか発現しない事実と矛盾しない。ここでも再
び、該複合体は抗原陰性のヒト膀胱ガン細胞系ＳＣａＢ
ＥＲに対し、非障害性である（１×１０^-9Ｍでの生存フ
ラクション＝１００％）。Ｎ９０１−ＳＳ−薬物１８
のインビトロでの細胞障害性ジスルフィドで連結されたインドリル−ベンゾフランＣ
Ｃ−１０６５アナログ１８と抗体Ｎ９０１の、抗体分子
当たり平均２個の薬物分子を含有する複合体のインビト
ロでの細胞障害性を、抗原陽性ＳＷ２細胞および抗原陰
性ナマルワ細胞について測定した。細胞は、該複合体と
３７℃で２４時間さらされ、生き残った細胞フラクショ
ンを成長逆−外挿試験〔ブイ．エス．ゴールドマッヒャ
ーら、１３５、ジャーナル・オブ・イムノロジー、３６
４８−３６５１（１９８５）〕を用いて測定した。

【０１３９】結果をＦｉｇ．８に示す。Ｆｉｇ．８にお
いて、横軸は、薬物濃度を示し、縦軸は生存細胞のフラ
クションを示す。●は、ＳＷ２細胞を示し、○はナマル
ワ細胞を示す。

【０１４０】この結果は、該複合体は抗原陽性ＳＷ２細
胞に対する細胞障害性は、ＩＣ₅₀値が１×１０^-10Ｍ
（１×１０^-9Ｍで９９．９％の細胞を殺す）と、非常に
強いが、一方、この複合体は抗原陰性ナマルワ細胞に対
し、試験された最高の濃度である１００倍の濃度（１×
１０^-8Ｍ）でさえ非障害性でさえあり、１００％の細胞
が生存した。

【０１４１】Ｎ９０１−ＳＳ−薬物２２のインビトロで
の細胞障害性ジスルフィドで連結されたインドリル−ベンゾフランＣ
Ｃ−１０６５アナログ２２と抗体Ｎ９０１の、抗体分子
当たり平均４個の薬物分子を含有する複合体のインビト
ロでの細胞障害性を、抗原陽性ＳＷ２細胞および抗原陰
性ナマルワ細胞について測定した。細胞は、該複合体に
３７℃で２４時間さらされ、生き残った細胞フラクショ
ンを成長逆−外挿試験〔ブイ．エス．ゴールドマッヒャ
ーら、１３５、ジャーナル・オブ・イムノロジー、３６
４８−３６５１（１９８５）〕を用いて測定した。

【０１４２】結果をＦｉｇ．９に示す。Ｆｉｇ．９にお
いて、横軸は、複合体または薬物濃度を示し、縦軸は生
存細胞のフラクションを示す。●は、抗原陽性ＳＷ２細
胞に対する複合体のデータを示し、▲は遊離のＣＣ−１
０６５アナログ２２を示し、■は遊離の抗体の存在下で
の複合体のデータを示し、◆は、抗原陰性ナマルワ細胞
の複合体のデータを示す。

【０１４３】この結果は、該複合体は抗原陽性ＳＷ２細
胞に対する細胞障害性は、ＩＣ₅₀値が１．９×１０^-11
Ｍ（２×１０^-9Ｍで９９．９％の細胞を殺す）と、非常
に強いが、一方、この複合体は抗原陰性ナマルワ細胞に
対し、１００倍高い濃度（１×１０^-9Ｍ）でさえずっと
弱い障害性しか示さない。

【０１４４】本発明は、具体的な実施例を用いて説明さ
れたけれども、当業者であれば、本発明の精神及び範囲
から離れないで種々の変更及び修飾を行えることは自明
である。

【図面の簡単な説明】

【図１】Ｆｉｇ．１Ａは、ＣＣ−１０６５およびそのサ
ブユニットＡ、ＢおよびＣの構造を示す。Ｆｉｇ．１Ｂ
およびＦｉｇ．１Ｃは、２種の公知のＣＣ−１０６５ア
ナログの構造を示す。

【図２】Ｆｉｇ．２は、本発明のモノ−インドリルＣＣ
−１０６５アナログ７を製造する合成スキームである。

【図３】Ｆｉｇ．３ＡおよびＦｉｇ．３Ｂは、本発明の
インドリル−ベンゾフラニルＣＣ−１０６５アナログ１
８を製造する合成スキームの一部を示す。

【図４】Ｆｉｇ．３Ｃは、本発明のインドリル−ベンゾ
フラニルＣＣ−１０６５アナログ１８を製造する合成ス
キームの一部を示す。

【図５】Ｆｉｇ．４は、本発明のビス−インドリルＣＣ
−１０６５アナログ２２を製造する合成スキームを示
す。

【図６】Ｆｉｇ．５ＡおよびＦｉｇ．５Ｂは、本発明の
複合体を調製する方法のダイアグラムである。Ｆｉｇ．
５Ａは、チオール含有ＣＣ−１０６５アナログを用いる
方法のダイアグラムであり、Ｆｉｇ．５Ｂは、活性化さ
れたジスルフィド含有ＣＣ−１０６５アナログを用いる
方法のダイアグラムである。

【図７】Ｆｉｇ．６は、本発明の複合体の誘導体薬物７
のＳＷ２およびナマルワ細胞に対するインビトロでの細
胞障害性および特異性を示すグラフである。横軸は、複
合体の濃度を示し、縦軸は細胞の生存フラクションを示
す。●は、抗原陽性ＳＷ２細胞のデータを示し、○は抗
原陰性ナマルワ細胞のデータを示す。

【図８】Ｆｉｇ．７は、本発明の複合体の誘導体薬物７
の抗原陽性Ａ−３７５および抗原陰性ＳＣａＢＥＲ細胞
に対するインビトロでの細胞障害性および特異性を示す
グラフである。横軸は、複合体の濃度を示し、縦軸は細
胞の生存フラクションを示す。●は、Ａ−３７５細胞の
データを示し、○はＳＣａＢＥＲ細胞のデータを示す。

【図９】Ｆｉｇ．８は、本発明のＣＣ−１０６５アナロ
グ１８複合体のＳＷ２およびナマルワ細胞に対するイン
ビトロでの細胞障害性および特異性を示すグラフであ
る。横軸は、複合体の濃度を示し、縦軸は細胞の生存フ
ラクションを示す。●は、抗原陽性ＳＷ２細胞のデータ
を示し、○は抗原陰性ナマルワ細胞のデータを示す。

【図１０】Ｆｉｇ．９は、本発明のＣＣ−１０６５アナ
ログ２２複合体のＳＷ２およびナマルワ細胞に対するイ
ンビトロでの細胞障害性および特異性を示すグラフであ
る。横軸は、複合体または遊離のＣＣ−１０６５アナロ
グ２２の濃度を示し、縦軸は細胞の生存フラクションを
示す。●は、抗原陽性ＳＷ２細胞に対する複合体のデー
タを示し、▲は遊離のＣＣ−１０６５アナログ２２のデ
ータを示し、■は遊離の抗体の存在下での複合体のデー
タを示し、◆は、抗原陰性ナマルワ細胞の複合体のデー
タを示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ０７Ｄ 491/048 7019−4Ｃ 519/00 ３０１ 8415−4Ｃ (72)発明者ビクターエス．ゴールドマーカーアメリカ合衆国 02159 マサチューセッツニュートンセンターペルバムストリート 74 (72)発明者ウォルターエイ．ブラットラーアメリカ合衆国 02146 マサチューセッツブルックリンマーソンテラス 197

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】１または２以上のＣＣ−１０６５のアナロ
グまたは誘導体と連結された細胞結合剤からなり、細胞
結合剤に該誘導体を連結させるに先立ち、該誘導体は、
Ａサブユニットのピロール部分の２級アミノ基とＢ−サ
ブユニットのＣ−２カルボキシル基とのアミド結合を介
して、式（Ｆ−１）、（Ｆ−２）、（Ｆ−３）、（Ｆ−
４）、（Ｆ−５）、（Ｆ−６）、（Ｆ−７）、（Ｆ−
８）、（Ｆ−９）または（Ｆ−１０）のＢ−サブユニッ
トまたはＢ−Ｃサブユニットと共有結合した式（Ａ−
１）、（Ａ−２）、（Ａ−３）または（Ａ−４）のＡサ
ブユニットからなる群から選ばれ、式（Ａ−１）から（Ａ−４）は以下に示すものであり、【化１】及び、式（Ｆ−１）から（Ｆ−１０）は以下に示すも
の、【化２】【化３】〔式中、ＲおよびＲ´またはＲ₄のいずれかは、ＣＣ−
１０６５のアナログまたは誘導体と細胞結合剤との連結
を可能にする基を示し；ＲまたはＲ´が連結を可能にす
る基を示すときには、Ｒ₁からＲ₆は同一または異なっ
て、水素原子、Ｃ₁−Ｃ₃直鎖アルキル基、メトキシ
基、ヒドロキシル基、１級アミノ基、２級アミノ基、３
級アミノ基またはアミド基を示し；及びＲ₄が連結を可
能にする基を示すときには、Ｒ、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ
₅およびＲ₆は同一または異なって、水素原子、Ｃ₁−
Ｃ₃直鎖アルキル基、メトキシ基、ヒドロキシル基、１
級アミノ基、２級アミノ基、３級アミノ基またはアミド
基を示し、Ｒ´はＮＨ₂、アルキル基、Ｏ−アルキル
基、１級アミノ基、２級アミノ基、３級アミノ基または
アミド基を示す。〕である細胞障害剤。
【請求項２】ＲおよびＲ´が連結を可能にする基を示
し、Ｒ₁からＲ₆が水素原子を示す請求項１に記載の細
胞障害剤。
【請求項３】ＲおよびＲ´がＣＣ−１０６５のアナログ
または誘導体と細胞結合剤をジスルフィド結合を介して
連結することを可能にする基を示す請求項１または２に
記載の細胞障害剤。
【請求項４】Ｒが、ＮＨＣＯ（ＣＨ₂）_lＳＺ₀、ＮＨ
ＣＯＣ₆Ｈ₄（ＣＨ₂）_lＳＺ₀またはＯ（ＣＨ₂）_l
ＳＺ₀を示し、Ｒ´が（ＣＨ₂）_lＳＺ₀、ＮＨ（ＣＨ
₂）_lＳＺ₀またはＯ（ＣＨ₂）_lＳＺ₀を示し、〔式
中、Ｚ₀は、ＨまたはＳＲ₇を示し、Ｒ₇はメチル基、
直鎖アルキル基、分枝を有するアルキル基、環状アルキ
ル基、無置換または置換されたアリール基、または複素
環を示し、およびｌは１〜１０の整数を示す。〕である
請求項１または２に記載の細胞障害剤。
【請求項５】Ｚ₀は水素原子を示し、ｌは２を示す請求
項４に記載の細胞障害剤。
【請求項６】Ｚ₀はＳＲ₇を示し、Ｒ₇は複素環を示
し、ｌは１を示す請求項４に記載の細胞障害剤。
【請求項７】Ｒ₇が、２位で置換されたピリジン基であ
る請求項６に記載の細胞障害剤。
【請求項８】ＣＣ−１０６５のアナログが、化合物７：【化４】である請求項２に記載の細胞障害剤。
【請求項９】ＣＣ−１０６５のアナログが、化合物１
８：【化５】である請求項２に記載の細胞障害剤。
【請求項１０】ＣＣ−１０６５のアナログが、化合物２
２：【化６】である請求項２に記載の細胞障害剤。
【請求項１１】ＲおよびＲ´が、ＣＣ−１０６５のアナ
ログまたは誘導体と細胞結合剤との酸−開裂性基、光−
開裂性基、ペプチダーゼ−開裂性基またはエステラーゼ
−開裂性基を介した連結を可能にする基を示す請求項１
または２に記載の細胞障害剤。
【請求項１２】前記細胞結合剤がペプチドまたは非ペプ
チドである請求項１または２に記載の細胞障害剤。
【請求項１３】前記細胞結合剤がポリクローナル抗体ま
たはモノクローナル抗体である請求項１または２に記載
の細胞障害剤。
【請求項１４】前記細胞結合剤がモノクローナル抗体で
ある請求項１３に記載の細胞障害剤。
【請求項１５】前記細胞結合剤が少なくとも１種の前記
抗体との結合部位を有する請求項１３に記載の細胞障害
剤。
【請求項１６】前記細胞結合剤が少なくとも１種の前記
抗体との結合部位を有する請求項１４に記載の細胞障害
剤。
【請求項１７】前記細胞結合剤がホルモンである請求項
１または２に記載の細胞障害剤。
【請求項１８】前記ホルモンがメラニン細胞刺激ホルモ
ン（ＭＳＨ）またはそのアナログである請求項１７に記
載の細胞障害剤。
【請求項１９】前記ホルモンが甲状腺刺激ホルモン（Ｔ
ＳＨ）またはそのアナログである請求項１７に記載の細
胞障害剤。
【請求項２０】前記細胞結合剤が成長因子である請求項
１または２に記載の細胞障害剤。
【請求項２１】前記成長因子が表皮成長因子（ＥＧＦ）
である請求項２０に記載の細胞障害剤。
【請求項２２】前記成長因子が形質転換成長因子アルフ
ァ（ＴＧＦ−α）である請求項２０に記載の細胞障害
剤。
【請求項２３】選択された細胞集団を殺す治療薬であっ
て、（ａ）請求項１に記載の１または２以上の細胞障害
剤の細胞障害量、および（ｂ）薬学的に許容される担
体、希釈剤または賦形剤を含む治療薬。
【請求項２４】ＲおよびＲ´が連結を可能にする基を示
し、Ｒ₁からＲ₆が水素原子を示す請求項２３に記載の
選択された細胞集団を殺す治療薬。
【請求項２５】ＲおよびＲ´がＣＣ−１０６５のアナロ
グまたは誘導体と細胞結合剤をジスルフィド結合を介し
て連結することを可能にする基を示す請求項２３または
２４に記載の選択された細胞集団を殺す治療薬。
【請求項２６】Ｒが、ＮＨＣＯ（ＣＨ₂）_lＳＺ₀、Ｎ
ＨＣＯＣ₆Ｈ₄（ＣＨ₂）_lＳＺ₀またはＯ（ＣＨ₂）
_lＳＺ₀を示し、Ｒ´が（ＣＨ₂）_lＳＺ₀、ＮＨ（Ｃ
Ｈ₂）_lＳＺ₀またはＯ（ＣＨ₂）_lＳＺ₀を示し、
〔式中、Ｚ₀は、ＨまたはＳＲ₇を示し、Ｒ₇はメチル
基、直鎖アルキル基、分枝を有するアルキル基、環状ア
ルキル基、無置換または置換されたアリール基、または
複素環を示し、およびｌは１〜１０の整数を示す。〕で
ある請求項２３または２４に記載の選択された細胞集団
を殺す治療薬。
【請求項２７】Ｚ₀は水素原子を示し、ｌは２を示す請
求項２６に記載の選択された細胞集団を殺す治療薬。
【請求項２８】Ｚ₀はＳＲ₇を示し、Ｒ₇は複素環を示
し、ｌは１を示す請求項２６に記載の選択された細胞集
団を殺す治療薬。
【請求項２９】Ｒ₇が、２位で置換されたピリジン基を
示す請求項２８に記載の選択された細胞集団を殺す治療
薬。
【請求項３０】ＣＣ−１０６５のアナログが、化合物
７：【化７】である請求項２４に記載の選択された細胞集団を殺す治
療薬。
【請求項３１】ＣＣ−１０６５のアナログが、化合物１
８：【化８】である請求項２４に記載の選択された細胞集団を殺す治
療薬。
【請求項３２】ＣＣ−１０６５のアナログが、化合物２
２：【化９】である請求項２４に記載の選択された細胞集団を殺す治
療薬。
【請求項３３】ＲおよびＲ´が、ＣＣ−１０６５のアナ
ログまたは誘導体と細胞結合剤との酸−開裂性基、光−
開裂性基、ペプチダーゼ−開裂性基またはエステラーゼ
−開裂性基を介した連結を可能にする基を示す請求項２
３または２４に記載の選択された細胞集団を殺す治療
薬。
【請求項３４】前記細胞結合剤がペプチドまたは非ペプ
チドである請求項２３または２４に記載の選択された細
胞集団を殺す治療薬。
【請求項３５】前記細胞結合剤がポリクローナル抗体ま
たはモノクローナル抗体である請求項２３または２４に
記載の選択された細胞集団を殺す治療薬。
【請求項３６】前記細胞結合剤がモノクローナル抗体で
ある請求項３５に記載の選択された細胞集団を殺す治療
薬。
【請求項３７】前記細胞結合剤が少なくとも１種の前記
抗体との結合部位を有する請求項３５に記載の選択され
た細胞集団を殺す治療薬。
【請求項３８】前記細胞結合剤が少なくとも１種の前記
抗体との結合部位を有する請求項３６に記載の選択され
た細胞集団を殺す治療薬。
【請求項３９】前記細胞結合剤がホルモンである請求項
２３または２４に記載の選択された細胞集団を殺す治療
薬。
【請求項４０】前記ホルモンがメラニン細胞刺激ホルモ
ン（ＭＳＨ）またはそのアナログである請求項３９に記
載の選択された細胞集団を殺す治療薬。
【請求項４１】前記ホルモンが甲状腺刺激ホルモン（Ｔ
ＳＨ）またはそのアナログである請求項３９に記載の選
択された細胞集団を殺す治療薬。
【請求項４２】前記細胞結合剤が成長因子である請求項
２３または２４に記載の選択された細胞集団を殺す治療
薬。
【請求項４３】前記成長因子が表皮成長因子（ＥＧＦ）
である請求項４２に記載の選択された細胞集団を殺す治
療薬。
【請求項４４】前記成長因子が形質転換成長因子アルフ
ァ（ＴＧＦ−α）である請求項４２に記載の選択された
細胞集団を殺す治療薬。
【請求項４５】選択された細胞集団由来の細胞を含むと
推測される細胞集団または組織を請求項１に記載の細胞
障害剤の細胞障害量と接触させる工程を含む選択された
細胞集団を殺す方法。
【請求項４６】ＲおよびＲ´が連結を可能にする基を示
し、Ｒ₁からＲ₆が水素原子を示す請求項４５に記載の
選択された細胞集団を殺す方法。
【請求項４７】ＲおよびＲ´がＣＣ−１０６５のアナロ
グまたは誘導体と細胞結合剤をジスルフィド結合を介し
て連結することを可能にする基を示す請求項４５または
４６に記載の選択された細胞集団を殺す方法。
【請求項４８】Ｒが、ＮＨＣＯ（ＣＨ₂）_lＳＺ₀、Ｎ
ＨＣＯＣ₆Ｈ₄（ＣＨ₂）_lＳＺ₀またはＯ（ＣＨ₂）
_lＳＺ₀を示し、Ｒ´が（ＣＨ₂）_lＳＺ₀、ＮＨ（Ｃ
Ｈ₂）_lＳＺ₀またはＯ（ＣＨ₂）_lＳＺ₀を示し、
〔式中、Ｚ₀は、ＨまたはＳＲ₇を示し、Ｒ₇はメチル
基、直鎖アルキル基、分枝を有するアルキル基、環状ア
ルキル基、無置換または置換されたアリール基、または
複素環を示し、およびｌは１〜１０の整数を示す。〕請
求項４５または４６に記載の選択された細胞集団を殺す
方法。
【請求項４９】Ｚ₀は水素原子を示し、ｌは２を示す請
求項４８に記載の選択された細胞集団を殺す方法。
【請求項５０】Ｚ₀はＳＲ₇を示し、Ｒ₇は複素環を示
し、ｌは１を示す請求項４８に記載の選択された細胞集
団を殺す方法。
【請求項５１】Ｒ₇が、２位で置換されたピリジン基を
示す請求項５０に記載の選択された細胞集団を殺す方
法。
【請求項５２】ＣＣ−１０６５のアナログが、化合物
７：【化１０】である請求項４６に記載の選択された細胞集団を殺す方
法。
【請求項５３】ＣＣ−１０６５のアナログが、化合物１
８：【化１１】である請求項４６に記載の選択された細胞集団を殺す方
法。
【請求項５４】ＣＣ−１０６５のアナログが、化合物２
２：【化１２】である請求項４６に記載の選択された細胞集団を殺す方
法。
【請求項５５】ＲおよびＲ´が、ＣＣ−１０６５のアナ
ログまたは誘導体と細胞結合剤との酸−開裂性基、光−
開裂性基、ペプチダーゼ−開裂性基またはエステラーゼ
−開裂性基を介した連結を可能にする基を示す請求項４
５または４６に記載の選択された細胞集団を殺す方法。
【請求項５６】前記細胞結合剤がペプチドまたは非ペプ
チドである請求項４５または４６に記載の選択された細
胞集団を殺す方法。
【請求項５７】前記細胞結合剤がポリクローナル抗体ま
たはモノクローナル抗体である請求項４５または４６に
記載の選択された細胞集団を殺す方法。
【請求項５８】前記細胞結合剤がモノクローナル抗体で
ある請求項５７に記載の選択された細胞集団を殺す方
法。
【請求項５９】前記細胞結合剤が少なくとも１種の前記
抗体との結合部位を有する請求項５７に記載の選択され
た細胞集団を殺す方法。
【請求項６０】前記細胞結合剤が少なくとも１種の前記
抗体との結合部位を有する請求項５８に記載の選択され
た細胞集団を殺す方法。
【請求項６１】前記細胞結合剤がホルモンである請求項
４５または４６に記載の選択された細胞集団を殺す方
法。
【請求項６２】前記ホルモンがメラニン細胞刺激ホルモ
ン（ＭＳＨ）またはそのアナログである請求項６１に記
載の選択された細胞集団を殺す方法。
【請求項６３】前記ホルモンが甲状腺刺激ホルモン（Ｔ
ＳＨ）またはそのアナログである請求項５７に記載の選
択された細胞集団を殺す方法。
【請求項６４】前記細胞結合剤が成長因子である請求項
４５または４６に記載の選択された細胞集団を殺す方
法。
【請求項６５】前記成長因子が表皮成長因子（ＥＧＦ）
である請求項６４に記載の選択された細胞集団を殺す方
法。
【請求項６６】前記成長因子が形質転換成長因子アルフ
ァ（ＴＧＦ−α）である請求項６４に記載の選択された
細胞集団を殺す方法。
【請求項６７】Ａサブユニットのピロール部分の２級ア
ミノ基とＢ−サブユニットのＣ−２カルボキシル基との
アミド結合を介して、式（Ｆ−１）、（Ｆ−２）、（Ｆ
−３）、（Ｆ−４）、（Ｆ−５）、（Ｆ−６）、（Ｆ−
７）、（Ｆ−８）、（Ｆ−９）または（Ｆ−１０）のＢ
−サブユニットまたはＢ−Ｃサブユニットと共有結合し
た式（Ａ−１）、（Ａ−２）、（Ａ−３）または（Ａ−
４）のＡサブユニットからなる群から選ばれ、式（Ａ−１）から（Ａ−４）は以下に示すものであり、【化１３】及び、式（Ｆ−１）から（Ｆ−１０）は以下に示すも
の、【化１４】【化１５】〔式中、ＲおよびＲ´またはＲ₄のいずれかは、ＣＣ−
１０６５のアナログまたは誘導体と細胞結合剤との連結
を可能にする基を示し；ＲまたはＲ´が連結を可能にす
る基を示すときには、Ｒ₁からＲ₆は同一または異なっ
て、水素原子、Ｃ₁−Ｃ₃直鎖アルキル基、メトキシ
基、ヒドロキシル基、１級アミノ基、２級アミノ基、３
級アミノ基またはアミド基を示し；Ｒ₄が連結を可能に
する基を示すときには、Ｒ、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₅お
よびＲ₆は同一または異なって、水素原子、Ｃ₁−Ｃ₃
直鎖アルキル基、メトキシ基、ヒドロキシル基、１級ア
ミノ基、２級アミノ基、３級アミノ基またはアミド基を
示し、Ｒ´はＮＨ₂、アルキル基、Ｏ−アルキル基、１
級アミノ基、２級アミノ基、３級アミノ基またはアミド
基を示す。〕であるＣＣ−１０６５のアナログまたは誘
導体。
【請求項６８】ＲおよびＲ´が連結を可能にする基を示
し、Ｒ₁からＲ₆が水素原子を示す請求項６７に記載の
誘導体。
【請求項６９】ＲおよびＲ´がＣＣ−１０６５のアナロ
グまたは誘導体と細胞結合剤をジスルフィド結合を介し
て連結することを可能にする基を示す請求項６７または
６８に記載の誘導体。
【請求項７０】Ｒが、ＮＨＣＯ（ＣＨ₂）_lＳＺ₀、Ｎ
ＨＣＯＣ₆Ｈ₄（ＣＨ₂）_lＳＺ₀またはＯ（ＣＨ₂）
_lＳＺ₀を示し、Ｒ´が（ＣＨ₂）_lＳＺ₀、ＮＨ（Ｃ
Ｈ₂）_lＳＺ₀またはＯ（ＣＨ₂）_lＳＺ₀を示し、
〔式中、Ｚ₀は、ＨまたはＳＲ₇を示し、Ｒ₇はメチル
基、直鎖アルキル基、分枝を有するアルキル基、環状ア
ルキル基、無置換または置換されたアリール基、または
複素環を示し、およびｌは１〜１０の整数を示す。〕で
ある請求項６７または６８に記載の誘導体。
【請求項７１】Ｚ₀は水素原子を示し、ｌは２を示す請
求項７０に記載の誘導体。
【請求項７２】Ｚ₀はＳＲ₇を示し、Ｒ₇は複素環を示
し、ｌは１を示す請求項７０に記載の誘導体。
【請求項７３】Ｒ₇が、２位で置換されたピリジン基で
ある請求項７２に記載の誘導体。
【請求項７４】ＣＣ−１０６５のアナログが、化合物
７：【化１６】である請求項６８に記載の誘導体。
【請求項７５】ＣＣ−１０６５のアナログが、化合物１
８：【化１７】である請求項６８に記載の誘導体。
【請求項７６】ＣＣ−１０６５のアナログが、化合物２
２：【化１８】である請求項６８に記載の誘導体。
【請求項７７】ＲおよびＲ´が、ＣＣ−１０６５のアナ
ログまたは誘導体と細胞結合剤との酸−開裂性基、光−
開裂性基、ペプチダーゼ−開裂性基またはエステラーゼ
−開裂性基を介した連結を可能にする基を示す請求項６
７または６８に記載の誘導体。