TR201902180T4 - Tek adimli bi̇r i̇şlem i̇le maytansi̇noi̇d anti̇kor konjugatlarinin hazirlanmasi - Google Patents

Tek adimli bi̇r i̇şlem i̇le maytansi̇noi̇d anti̇kor konjugatlarinin hazirlanmasi Download PDF

Info

Publication number
TR201902180T4
TR201902180T4 TR2019/02180T TR201902180T TR201902180T4 TR 201902180 T4 TR201902180 T4 TR 201902180T4 TR 2019/02180 T TR2019/02180 T TR 2019/02180T TR 201902180 T TR201902180 T TR 201902180T TR 201902180 T4 TR201902180 T4 TR 201902180T4
Authority
TR
Turkey
Prior art keywords
approximately
cell
antibody
cytotoxic agent
binding agent
Prior art date
Application number
TR2019/02180T
Other languages
English (en)
Inventor
Li Xinfang
M Worful Jared
Original Assignee
Immunogen Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Immunogen Inc filed Critical Immunogen Inc
Publication of TR201902180T4 publication Critical patent/TR201902180T4/tr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5365—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68033—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a maytansine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6807—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug or compound being a sugar, nucleoside, nucleotide, nucleic acid, e.g. RNA antisense
    • A61K47/6809—Antibiotics, e.g. antitumor antibiotics anthracyclins, adriamycin, doxorubicin or daunomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6817—Toxins
    • A61K47/6819—Plant toxins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6867—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from a cell of a blood cancer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/107—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides
    • C07K1/113—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides without change of the primary structure
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)

Abstract

Buluş, bir hücre bağlama ajanı sitotoksik ajan konjugatının hazırlanmasına yönelik olarak, hücre bağlama ajanını ve sitotoksik ajanı içeren bir birinci karışımı oluşturmak üzere bir hücre bağlama ajanının bir sitotoksik ajan ile temas ettirilmesini ve hücre bağlama ajanını ve sitotoksik ajanı içeren bir birinci karışımın hücre bağlama ajanı sitotoksik ajan konjugatını içeren bir ikinci karışımı sağlamak üzere yaklaşık 4 ila yaklaşık 9?luk bir pH?a sahip olan bir çözelti içinde bir birleştirici sağlayan bir iki fonksiyonlu çapraz birleştirme reaktifi ile temas ettirilmesini içeren bir adımlı işlemi sağlar, burada hücre bağlama ajanı birleştirici vasıtasıyla sitotoksik ajana, serbest sitotoksik ajana ve reaksiyon yan ürünlerine kimyasal olarak bağlanır. İkinci karışım daha sonra isteğe bağlı olarak bir saflaştırılmış hücre bağlama ajanı sitotoksik ajan konjugatı sağlamak üzere saflaştırmaya maruz bırakılır.

Description

Tarifname TEK ADIMLI BIR ISLEM ILE MAYTANSINOID ANTIKOR KONIUGATLARININ HAZIRLANMASI ILGILI BASVURULARA ÇAPRAZ REFERANS Mevcut patent basvurusu, 29 Mart 2011'de basvurusu yapilan U.S. Provizyonel Patent No. 61/468,981'in rüçhanini talep eder. BULUSUN ALT YAPISI Kanser ve diger hastaliklarin tedavisine yönelik olarak faydali olan Antikor-llaç- Konjugatlari [ADC'ler] yaygin olarak üç ayri elementten olusur: bir hücre baglama ajani; bir birlestirici; ve bir sitotoksik ajan. Bir antikor gibi bir hücre baglama ajaninin bir sitotoksik ajana konjuge edilmesinin geleneksel yöntemi, antikor ile iki farkli reaksiyon adimini kullanir. Birinci reaksiyon adiminda (modifikasyon adimi), antikor, bir birlestirici modifiye edilmis antikor üretmek üzere bir heteroikifonksiyonlu birlestirici ile reaksiyona sokulur. Modifiye edilmis antikor ürünü daha sonra istege bagli olarak fazla birlestirici veya hidrolize edilmis birlestirici reaktifinden saflastirilir. Ikinci reaksiyon adiminda (konjugasyon adimi), birlestirici-modifiye edilmis antikor, ilave bir saflastirma adiminda tekrar saflastirilan antikor-sitotoksik ajan konjugatini üretmek üzere tiyol gibi bir reaktif grup içeren sitotoksik ajan ile reaksiyona sokulur. Bunlar, optimal olarak istenilenden daha az saf veya daha az stabil olan immünokonjugatlari gerçeklestirmek veya üretmek üzere elverissiz olan adimlar ile doldurulduklarindan, antikor-sitotoksik ajan konjugatlarinin imalatina yönelik olarak daha önce açiklanmis olan islemler karmasiktir. Bu nedenle, saflik ve/veya stabilite gibi ürün kalitesi iyilestirilirken bir veya daha fazla imalat adiminin modifiye edilmesi veya ortadan kaldirilmasi istenecektir. Yukaridakilerin isiginda, teknikte, büyük ölçüde yüksek saflikta olan ve elverissiz adimlardan kaçinilarak ve zaman ve kullaniciya yönelik maliyet azaltilarak hazirlanabilen hücre baglama ajani-sitotoksik ajan konjugatlarinin hazirlanmasina yönelik olarak iyilestirilmis islemlerin gelistirilmesine yönelik bir ihtiyaç mevcuttur. Bulus bu tür bir islemi saglar. Bulusa ait ilave özelliklerin yani sira, bunlar ve bulusun diger avantajlari, bulusun burada saglanan açiklamasindan anlasilacaktir. BULUSUN KISA AÇIKLAMASI Bulus, bir hücre baglama ajani sitotoksik ajan konjugatinin, diger bir ifadeyle bir antikor maytansinoid konjugatinin hazirlanmasina yönelik olarak, hücre baglama ajani ve sitotoksik ajan içeren bir birinci karisimi olusturmak üzere bir hücre baglama ajaninin, diger bir ifadeyle bir antikor, bir sitotoksik ajan, diger bir ifadeyle bir maytansinoid, ile temas ettirilmesi ve daha sonra (i) hücre baglama ajani sitotoksik ajan konjugatini içeren bir karisim saglamak üzere 4 ila 9'luk bir pH'a sahip olan bir çözeltide, hücre baglama ajani ve sitotoksik ajan içeren birinci karisimin bir birlestirici içeren bir iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi ile temas ettirilmesi adimini içeren bir islemi saglar, burada hücre baglama ajani birlestirici vasitasiyla sitotoksik ajana, (ii) serbest sitotoksik ajana ve (iii) reaksiyon yan ürünlerine kimyasal olarak baglanir. Islem ayrica, bir saflastirilmis hücre baglama ajani sitotoksik ajan konjugati saglamak üzere karisimin saflastirilmasi adimini da içerebilir. Mevcut bulusun islemleri, yüksek saflik ve/veya stabiliteye sahip hücre baglama ajani sitotoksik ajan konjugati saglar. Konjugatin yüksek saflik ve/Veya stabilitesini elde etmek üzere, karisimin bir iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi ile temas ettirilmesinden önce, hücre baglama ajani ve sitotoksik ajani içeren bir karisim olusturmak üzere sitotoksik ajanin önce hücre baglama ajani ile temas ettirilmesi esastir. Mevcut bulus ayni zamanda, burada açiklanan islemlere göre hazirlanmis bir hücre baglama ajani sitotoksik ajan konjugatini da içerir. Burada yer alan açiklamaya bagli olarak, mevcut bulus, bir antikor maytansinoid konjugatinin hazirlanmasina yönelik olarak asagidaki adimlari içeren bir islemi saglar: (a) antikor ve maytansinoid içeren bir birinci karisimi olusturmak üzere bir antikorun bir maytansinoid ile temas ettirilmesi, daha sonra (i) antikor maytansinoid konjugatini içeren bir ikinci karisim saglamak üzere 4 ila 9'luk bir pH'a sahip olan bir çözeltide birinci karisimin bir birlestirici içeren bir iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi ile temas ettirilmesi, burada antikor birlestirici vasitasiyla maytansinoide, (ii) serbest maytansinoide ve (iii) reaksiyon yan ürünlerine kimyasal olarak baglanir. Mevcut bulus ve bunun düzenlemeleri, ekteki istemlerde ileri sürülür. BULUSUN DETAYLI AÇIKLAMASI Bulus, bir hücre baglama ajani sitotoksik ajan konjugatinin, diger bir ifadeyle bir antikor maytansinoid konjugati, hazirlanmasina yönelik olarak bir adimli bir islemi saglar. Bulus, hücre baglama ajani ve sitotoksik ajan içeren bir birinci karisimi olusturmak üzere bir hücre baglama ajaninin (diger bir ifadeyle, bir antikor] bir sitotoksik ajan, diger bir ifadeyle bir maytansinoid, ile temas ettirilmesini ve daha sonra hücre baglama ajani sitoksik ajan konjugati, serbest sitotoksik ajan ve reaksiyon yan ürünleri içeren bir ikinci karisimi saglamak üzere 4 ila 9'1uk bir pH'a sahip olan bir çözeltide hücre baglama ajani ve sitoksik ajan içeren birinci karisimin bir birlestirici içeren bir iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi ile temas ettirilmesini içerir, burada hücre baglama ajani birlestirici vasitasiyla sitotoksik ajana kimyasal olarak baglanir. Ikinci karisim daha sonra, bir saflastirilmis hücre baglama ajani sitotoksik ajan konjugati saglamak üzere saflastirmaya tabi tutulur. Bir düzenlemede, temas ettirme, hücre baglama ajaninin saglanmasi, daha sonra hücre baglama ajaninin hücre baglama ajani ve sitotoksik ajan içeren bir birinci karisim olusturmak üzere sitotoksik ajan ile temas ettirilmesi ve daha sonra hücre baglama ajani ve sitotoksik ajan içeren birinci karisimin iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi ile temas ettirilmesi ile gerçeklestirilir. Örnegin, bir düzenlemede, hücre baglama ajani bir reaksiyon kabinda saglanir, sitotoksik ajan reaksiyon kabina [böylece hücre baglama ajanina temas ederek) ilave edilir ve daha sonra iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi, hücre baglama ajani ve sitotoksik ajan içeren karisima [böylece hücre baglama ajani ve sitotoksik ajan içeren karisima temas ederek] ilave edilir. Bir düzenlemede, hücre baglama ajani bir reaksiyon kabinda saglanir ve sitotoksik ajan, hücre baglama ajaninin kaba saglanmasini takiben hemen reaksiyon kabina ilave edilir. Bir baska düzenlemede, hücre baglama ajani bir reaksiyon kabinda saglanir ve hücre baglama ajaninin kaba saglanmasini takip eden bir zaman araligindan sonra (örnegin, hücre baglama ajaninin alana saglanmasindan yaklasik 5 dakika, yaklasik 10 dakika, yaklasik 20 dakika, yaklasik 30 dakika, yaklasik 40 dakika, yaklasik 50 dakika, yaklasik 1 saat, yaklasik 1 gün veya daha uzun sonra) sitotoksik ajan reaksiyon kabina ilave edilir. Sitotoksik ajan hizli bir sekilde (diger bir ifadeyle, yaklasik 5 dakika, yaklasik 10 dakika gibi kisa bir zaman araliginda] veya yavas bir sekilde [örnegin bir pompa kullanarak] ilave edilebilir. Hücre baglama ajani ve sitotoksik ajan içeren karisim daha sonra, ya hücre baglama ajaninin sitotoksik ajan ile temas ettirilmesinden hemen sonra ya da hücre baglama ajaninin sitotoksik ajan ile temas ettirilmesinden sonra sonraki bir noktada (örnegin, yaklasik 5 dakika ila yaklasik 8 saat veya daha uzun) iki fonksiyonlu çapraz birlestirme ajani ile temas ettirilebilir. Örnegin, bir düzenlemede, sitotoksik ajanin hücre baglama ajanini içeren reaksiyon kabina ilave edilmesinden hemen sonra iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi hücre baglama ajani ve sitotoksik ajani içeren karisima ilave edilir. Alternatif olarak, hücre baglama ajanini ve sitotoksik ajani içeren karisim, hücre baglama ajaninin sitotoksik ajan ile temas ettirilmesinden sonra iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi ile yaklasik 5 dakika, yaklasik 10 dakika, yaklasik 20 dakika, yaklasik 30 dakika, saat, yaklasik 7 saat, yaklasik 8 saat veya daha uzun temas ettirilebilir. Baska düzenlemede, sitotoksik ajan ve iki fonksiyonlu ajan, çoklu döngülerle (örnegin, 1, 2, 3, 4, 5 veya daha fazla döngü] ilave edilir. Örnegin, bulus, asagidaki adimlari içeren bir islem saglar: a] hücre baglama ajani ve sitotoksik ajan içeren bir birinci karisimi olusturmak üzere bir hücre baglama ajaninin, diger bir ifadeyle bir antikor, bir sitotoksik ajan, diger bir ifadeyle bir maytansinoid, ile temas ettirilmesi, ve sonra hücre baglama ajani sitotoksik ajan konjugati, serbest sitotoksik ajan ve reaksiyon yan ürünleri içeren bir ikinci karisimi saglamak üzere 4 ila 9'luk bir pH'a sahip olan bir çözeltide birinci karisimin bir birlestirici içeren bir iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi ile temas ettirilmesi, burada hücre baglama ajani birlestirici vasitasiyla sitotoksik ajana kimyasal olarak baglanir; b) bir üçüncü karisim olusturmak üzere ikinci karisimin sitotoksik ajan ile temas ettirilmesi ve daha sonra üçüncü karisimin, bir dördüncü karisim saglamak üzere 4 ila 9'luk bir pH'ta iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi ile temas ettirilmesi; ve c) saflastirilmis hücre baglama ajani sitotoksik ajan konjugatini saglamak üzere dördüncü karisimin saflastirilmasi. Bir düzenlemede, b) adimi, a) adimini takiben bir zaman araligindan sonra [örnegin, yaklasik 1 saat, yaklasik 2 saat, yaklasik 3 saat veya daha uzun) yürütülür. Baska düzenlemede, b] adimi, c) adiminin yürütülmesinden önce birkaç kez [örnegin, 1, 2, 3, 4 veya daha fazla kez) tekrarlanabilir. Ilave b] adimi, baslangiç b) adimini takiben bir zaman araligindan (örnegin, yaklasik 1 saat, yaklasik 2 saat, yaklasik 3 saat veya daha uzun] sonra yürütülebilir. Baska düzenlemede, iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi, sitotoksik ajanin tamamen ilave edilmesinden önce ilave edilir. Örnegin, bir düzenlemede, hücre baglama ajani ve Sitotoksik ajan içeren bir karisim olusturmak üzere Sitotoksik ajan hücre baglama ajanina bir zaman araligi boyunca sürekli olarak ilave edilir [örnegin, yaklasik 5 dakika, yaklasik dakika, yaklasik 30 dakika, yaklasik 1 saat, yaklasik 2 saat, yaklasik 3 saat veya daha uzun). Sitotoksik ajanin ilave edilmesinin tamamlanmasindan önce, Sitotoksik ajanin iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifinin molar fazlasinda oldugu herhangi bir zamanda olma sartiyla, iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi, hücre baglama ajani ve Sitotoksik ajan içeren karisima ilave edilir. Bir düzenlemede, iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi bir zaman araligi boyunca sürekli olarak ilave edilir [örnegin, yaklasik 5 dakika, yaklasik 10 dakika, yaklasik 30 dakika, yaklasik 1 saat, yaklasik 2 saat, yaklasik 3 saat veya daha uzun boyunca). Hücre baglama ajani ve Sitotoksik ajan içeren karisimin iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi ile temas ettirilmesinden sonra, reaksiyonun yaklasik 1 saat, yaklasik 2 saat, yaklasik 24 saat veya daha uzun (örnegin, yaklasik 30 saat, yaklasik 35 saat, yaklasik 40 saat, yaklasik 45 saat veya yaklasik 48 saat) boyunca devam etmesine izin verilir. Hücre baglama ajaninin Sitotoksik ajan ve daha sonra iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi ile temas ettirilmesi (diger bir ifadeyle, reaksiyon adimi), 4 ila 9'luk [örnegin, 4, yaklasik 8, yaklasik 8.5 veya 9) bir pH'a sahip olan bir çözeltide meydana gelir. Bir düzenlemede, reaksiyon adimi, yaklasik 6 veya daha az [örnegin, 4 ila yaklasik 6, 4 ila yaklasik 5.5 veya yaklasik 4.5 ila yaklasik 5.5) olan bir pl-l'a sahip olan bir çözeltide meydana gelir. Baska düzenlemede, bulusa ait islem, yaklasik 6 veya daha fazla [örnegin, yaklasik 6 ila 9, bir çözelti içinde bir hücre baglama ajaninin, diger bir ifadeyle bir antikor, bir Sitotoksik ajan, diger bir ifadeyle bir maytansinoid, ve daha sonra bir iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi ile temas ettirilmesini içerir. Örnegin, bulusa ait islem. yaklasik 6.0, yaklasik 8.9, veya 9.0'luk bir pH'a sahip bir çözelti içinde bir hücre baglama ajaninin, diger bir ifadeyle bir antikor, bir sitotoksik ajan, diger bir ifadeyle bir maytansinoid, ve bir iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi ile temas ettirilmesini içerir. Spesifik bir düzenlemede, bulusa ait islem, yaklasik 7.8'lik (örnegin, 7.6 ila 8.0'lik bir pH veya 7.7 ila 7.9'1uk bir pH) bir pH'a sahip olan bir çözelti Içinde bir hücre baglama ajaninin, diger bir ifadeyle bir antikor, bir sitotoksik ajan, diger bir ifadeyle bir maytansinoid, ve bir iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi ile temas ettirilmesini içerir. Bulusa ait islem, bir adimli reaksiyonun (diger bir ifadeyle, bir hücre baglama ajaninin, diger bir ifadeyle bir antikor, bir sitotoksik ajan, diger bir ifadeyle bir maytansinoid, ve bir iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi ile temas ettirilmesi] teknikte bilinen herhangi uygun sicaklikta gerçeklestirilmesini içerir. Örnegin, bir adimli reaksiyon, yaklasik 20 °C veya daha azinda (örnegin, yaklasik -10 °C [çözeltinin donmasinin, örnegin sitotoksik ajani ve iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifini çözmek üzere kullanilan organik çözücünün varligi ile önlenmesi sartiyla) ila yaklasik 20 °C, yaklasik 0 °C ila yaklasik 18 °C, yaklasik 4 °C ila yaklasik 16 °C), oda sicakliginda (örnegin, yaklasik 20 °C ila yaklasik 30 °C ila yaklasik 20 °C ila yaklasik 25 °C) veya yükseltilmis bir sicaklikta (örnegin, yaklasik 30 °C ila yaklasik 37 °C) meydana gelebilir. Bir düzenlemede, bir hücre baglama ajaninin, diger bir ifadeyle bir antikor, bir sitotoksik ajan, diger bir ifadeyle bir maytansinoid, ve bir iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi ile temas ettirilmesi, bir yaklasik 16 °C ila °C) sicakliginda meydana gelir. Baska düzenlemede, bir hücre baglama ajaninin, diger bir ifadeyle bir antikor, bir sitotoksik ajan, diger bir ifadeyle bir maytansinoid, ve bir iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi ile temas ettirilmesi, bir yaklasik 15 °C veya daha az (örnegin, yaklasik -10 °C ila yaklasik 15 °C, veya yaklasik 0 °C ila yaklasik 15 °C) sicakliginda meydana gelir. Bu bakimdan, bulusa ait islem, çözeltinin donmasinin, örnegin iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifini çözmek üzere kullanilan organik çözücünün [çözücülerinj varligi ile önlenmesi sartiyla, bir hücre baglama ajaninin, diger bir ifadeyle bir antikor, bir sitotoksik ajan, diger bir ifadeyle bir maytansinoid, ve daha sonra bir iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi ile yaklasik 15 °C, yaklasik 14 °C, yaklasik 13 °C, yaklasik 12 °C, yaklasik -7 °C, yaklasik -8 °C, yaklasik -9 °C, veya yaklasik -10 °C'lik bir sicaklikta temas ettirilmesini içerir. Bir düzenlemede, bulusa ait islem, bir hücre baglama ajaninin, diger bir ifadeyle bir antikor, bir sitotoksik ajan, diger bir ifadeyle bir maytansinoid, ve daha sonra bir iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi ile yaklasik -10 °C ila yaklasik 15 °C, yaklasik yaklasik 10 °C'lik bir sicaklikta temas ettirilmesini içerir. Baska düzenlemede, bulusa ait islem, bir hücre baglama ajaninin, diger bir ifadeyle bir antikor, bir sitotoksik ajan, diger bir ifadeyle bir maytansinoid, ve daha sonra bir iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi ile yaklasik 10 °C'lik (örnegin, 8 °C ila 12 °C'lik bir sicaklik veya 9 °C ila 11 °C'lik bir sicaklik) bir sicaklikta temas ettirilmesini içerir. Bir düzenlemede, bulusa ait islem, bir hücre baglama ajaninin, diger bir ifadeyle bir antikor, bir sitotoksik ajan, diger bir ifadeyle bir maytansinoid, ve daha sonra bir iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi ile bir düsük sicaklikta (örnegin, yaklasik 15 °C veya daha düsük] yüksek bir pH'a [örnegin, yaklasik 7 veya daha fazla) sahip olan bir çözeltide temas ettirilmesini içerir. Örnegin, bir düzenlemede, bulusa ait islem, bir hücre baglama ajaninin, diger bir ifadeyle bir antikor, bir sitotoksik ajan, diger bir ifadeyle bir maytansinoid, ve daha sonra bir iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi ile yaklasik 15 °C'lik bir sicaklikta yaklasik 75'lik bir pH'a sahip olan bir çözeltide, yaklasik 10 °C'lik bir sicaklikta yaklasik 7.8'lik bir pH'a sahip olan bir çözeltide, yaklasik 0 °C'lik bir sicaklikta yaklasik 82'lik bir pH'a sahip olan bir çözeltide veya yaklasik 0 °C'lik bir sicaklikta yaklasik 85'lik bir pH'a sahip olan bir çözeltide temas ettirilmesini içerir. Baska düzenlemede, bulusa ait islem, bir hücre baglama ajaninin, diger bir ifadeyle bir antikor, bir sitotoksik ajan, diger bir ifadeyle bir maytansinoid, ve daha sonra bir iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi ile yaklasik 5 °C ila 15 °C'lik bir sicaklikta yaklasik 7.0 ila 8.5'lik (örnegin 7.5 ila 8.0'lik bir pH] bir pH'a sahip olan bir çözeltide temas ettirilmesini içerir. Bir düzenlemede, bulusa ait islem ayrica, herhangi bir reaksiyona girmemis sitotoksik ajan ve/veya reaksiyona girmemis iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifini söndürmek üzere bir söndürme adimini da içerir. Söndürme adimi, hücre baglama ajani sitotoksik ajanin saflastirilmasindan önce gerçeklestirilir. Örnegin, bulusa ait islem, [a] hücre baglama ajani ve sitotoksik ajan içeren bir birinci karisimi olusturmak üzere bir hücre baglama ajaninin, diger bir ifadeyle bir antikor, bir sitotoksik ajan, diger bir ifadeyle bir maytansinoid, ile temas ettirilmesini ve daha sonra (i) hücre baglama ajani sitotoksik ajan konjugatini içeren bir karisim saglamak üzere 4 ila 9'luk bir pl-l'a sahip olan bir çözeltide, hücre baglama ajani ve sitotoksik ajan içeren birinci karisimin bir birlestirici içeren bir iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi ile temas ettirilmesini, burada hücre baglama ajani birlestirici vasitasiyla sitotoksik ajana, (ii) serbest sitotoksik ajana ve (iii) reaksiyon yan ürünlerine kimyasal olarak baglanir, [b] herhangi bir reaksiyona girmemis sitotoksik ajan ve/veya reaksiyona girmemis iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifini söndürmek üzere (a) adiminda hazirlanan bilesimin söndürülmesini ve (c) bir saflastirilmis hücre baglama ajani sitotoksik ajan konjugati saglamak üzere karisimin saflastirilmasini içerir. Bir düzenlemede, karisim, karisimin bir söndürme reaktifi ile temas ettirilmesiyle söndürülür. Burada kullanildiginda, "söndürme reaktifi", serbest sitotoksik ajan ve/veya iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi ile reaksiyona giren bir reaktife refere eder. Bir düzenlemede, sitotoksik ajanda herhangi bir reaksiyona girmemis grubun (tiyol gibi] söndürüldügünü garanti altina almak üzere 4-maleimid0bütirik asit, 3- maleimidopropiyonik asit, N-etilmaleimid, iyodoasetamid veya iyodoasetamidopropiyonik asit gibi maleimid veya haloasetamid söndürme reaktifleri kullanilabilir. Söndürme adimi, sitotoksik ajanin, özellikle bir reaksiyona girmemis tiyol grubuna [DMl gibi] sahip olan sitotoksik ajanin dimerizasyonunun önlenmesine yardimci olabilir. Dimerize edilmis sitotoksik ajanin çikartilmasi zor olabilir. Söndürme adimi ayni zamanda dogal antikor disülfit gruplari ile herhangi bir istenmeyen tiyol-disülfür degisim reaksiyonunu da en aza indirebilir. Polar, yüklü tiyol söndürme reaktifleri (4-maleimidobutirik asit veya 3- maleimidopropiyonik asit gibi] ile söndürülmenin üzerine, fazla, reaksiyona girmemis sitotoksik ajan, saflastirma adimi sirasinda kovalent olarak bagli konjugattan kolayca ayrilabilen bir polar. yüklü, suda çözünebilir eklentiye dönüstürülür. Ayni zamanda polar olmayan ve nötr tiyol söndürme reaktifleri ile söndürme de kullanilabilir. Bir düzenlemede, karisim, karisimin reaksiyona girmemis çift fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi ile reaksiyona giren bir söndürme reaktifi ile temas ettirilmesiyle söndürülür. Örnegin, herhangi bir reaksiyona girmemis iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifini söndürmek üzere karisima nükleofiller ilave edilebilir. Nükleofil tercih edildigi üzere lisin, taurin ve hidroksilamin gibi nükleofil içeren bir amino grubudur. Tercih edilen bir düzenlemede, reaksiyonun (diger bir ifadeyle, bir hücre baglama ajaninin, diger bir ifadeyle bir antikor, bir sitotoksik ajan, diger bir ifadeyle bir maytansinoid, ve daha sonra bir iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi ile temas ettirilmesi] karisimin bir söndürme reaktifi ile temas ettirilmesinden önce tamamlanmasina devam edilmesine izin verilir. Bu baglamda, söndürme reaktifi karisima, hücre baglama ajani ve sitotoksik ajan içeren karisimin iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi ile temas ettirilmesinden yaklasik 1 saat ila yaklasik 48 saat [örnegin, yaklasik 1 yaklasik 23 saat, yaklasik 24 saat, veya yaklasik 25 saat ila yaklasik 48 saat) sonra ilave Bulusa ait islem istege bagli olarak, hücre baglama ajani-sitotoksik ajan konjugatlarinin çözünebilirligini ve geri kazanimini arttirmak üzere reaksiyon adimina (diger bir ifadeyle, bir hücre baglama ajaninin, diger bir ifadeyle bir antikor, bir sitotoksik ajan, diger bir ifadeyle bir maytansinoid, ve bir iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi ile temas ettirilmesi) sükroz ilavesini içerebilîr. Istenildigi üzere, sukroz, bir yaklasik %0.1 (a/h) ila (a/h] veya %20 [a/h]) konsantrasyonunda ilave edilir. Tercih edildigi üzere sukroz, bir yaklasik %1 (a/h) ila yaklasik %10 (a/h] (örnegin, yaklasik %05 [a/h), yaklasik %1 (a/h], yaklasik %10 (a/h) veya yaklasik %11 (a/h)] konsantrasyonunda ilave edilir. Ilave olarak, reaksiyon adimi ayni zamanda bir tamponlama ajaninin ilave edilmesini de içerebilir. Teknikte bilinen herhangi bir uygun tamponlama ajani kullanilabilir. Uygun tamponlama ajanlari, örnegin bir sitrat tamponunu, bir asetat tamponunu, bir süksinat tamponu ve bir fosfat tamponunu içerir. Bir düzenlemede, tamponlama ajani, HEPPSO (N-(Z- hidroksietiljpiperazin-N'-(2-hidroksipropansülfonik asit]), POPSO (piperazin-1,4-bis-(2- hidroksi-prOpan-sülfonik asit] dehidrat), HEPES [4-(2-hidr0ksietil]piperazin-1- etansülfonik asit), HEPPS (EPPS) [4-(2-hîdroksietilinperazin-1-propanesülfonik asit), TES (N-[tris[hidroksimetiDmetil]-2-amin0etansülf0nik asit) ve bunlarin bir kombinasyonundan olusan gruptan seçilir. Reaksiyon adimini takiben, hücre baglama ajani sitotoksik ajan konjugati bir saflastirma adimina tabi tutulur. Bu baglamda, hücre baglama ajani sitotoksik ajan konjugati, bunlarin kombinasyonlarinin yani sira, bir membran bazli tegetsel akis filtrasyon islemi olan tegetsel akis filtrasyonu (TFF), adsorptif olmayan kromatografi, adsorptif kromatografi, adsorptif filtrasyon, seçici çökeltme veya diger uygun saflastirma islemleri kullanilarak karisimin diger bilesenlerinden [örnegin, serbest sitotoksik ajan ve reaksiyonu yari ürünleri) saflastirilabilir. Bulusun bir düzenlemesinde, hücre baglama ajani sitotoksik ajan konjugati, tek bir saflastirma adimi (örnegin, TFF) kullanilarak sailastirilir. Tercih edildigi üzere, konjugat saflastirilir ve tek bir saflastirma adimi (örnegin, TFF) kullanilarak uygun formülasyonla degistirilir. Bulusun baska düzenlemesinde, hücre baglama ajani sitotoksik ajan konjugati, iki ardisik saflastirma adimi kullanilarak saflastirilir. Örnegin, konjugat ilk önce, TFF tarafindan takip edilen seçici çökeltme, adsorptif filtrasyon, adsorptif kromatografi veya adsorptif olmayan kromatografi ile saflastirilabilir. Teknikte siradan uzmanliga sahip biri, hücre baglama ajani sitotoksik ajan konjugatinin saflastirilmasinin, kimyasal olarak sitotoksik ajana baglanmis hücre baglama ajani içeren stabil bir konjugatin izolasyonuna olanak sagladigini kabul edecektir. Bir Pellicon tipi sistem (Millipore, Billerica, MA), bir Sartocon Kaset sistemi [Sartorius AG, Edgewood, NY] ve bir Centrasette tipi sistem [Pall Corp., East Hills, NY) dahil olmak üzere saflastirmaya yönelik olarak herhangi bir uygun TFF sistemleri kullanilabilir. Saflastirmaya yönelik olarak herhangi bir uygun adsorptif kromatografi reçinesi kullanilabilir. Tercih edilen adsorptif kromatografi reçineleri hidroksiapatit kromatografisi, hidrofobik yük indüksiyon kromatografisi (HCIC), hidrofobik etkilesim kromatografisi (HIC), iyon degisim kromatografisi, karisik mod iyon degisim kromatografisi, immobilize metal afinite kromatografisi (IMAC), boya ligand kromatografisi, afinite kromatografi ve bunlarin kombinasyonlarini içerir. Uygun hidroksiapatit reçinelerinin örnekleri seramik hidroksiapatit [CHT Tip I ve Tip II, Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA), HA Ultrogel hidroksiapatit [Pal] Corp., East Hills, NY] ve seramik floroapatiti [CFT Tip I ve Tip [I, Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA) içerir. Uygun bir HCIC reçinesinin bir örnegi, MEP Hypercel reçinesidir [Pal] Corp., East Hills, NY). Uygun HIC reçinelerinin örnekleri, Makro-Prep Metil ve Makro-Prep t-Butil reçinelerinin (Biorad Laboratories, Hercules, CA) yanisira, Butil-Sefaroz, Heksil-Sefaroz, Fenil-Sefaroz ve Oktil Sefaroz reçinelerini [tümü GE Healthcare, Piscataway, NI'den) içerir. Uygun iyon degisim reçinelerinin örnekleri SP-Sefaroz, CM-Sefaroz ve Q-Sepharose reçinelerini (tümü GE Healthcare, Piscataway, Nj'den) ve Unosphere S reçinesini (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA] içerir. Uygun karisik mod iyon degistiricilerin örnekleri Bakerbond ABX reçinesini [JT Baker, Phillipsburg NI] içerir. Uygun [MAC reçinelerinin örnekleri Selat Olusturucu Sefaroz reçinesini [GE Healthcare, Piscataway, N]) ve Profinity IMAC reçinesini (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA] içerir. Uygun boya ligand reçinelerinin örnekleri Mavi Sefaroz reçinesini (GE Healthcare, Piscataway, N]) ve Affi-jel Blue reçinesini [Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA) içerir. Uygun afinite reçinelerinin örnekleri, hücre baglama ajaninin bir antikor oldugu Protein A Sefaroz reçinesini [örnegin, MabSelect, GE Healthcare, Piscataway, NI) ve hücre baglama ajaninin uygun lektin baglama bölgeleri tasidigi lektin afinite reçinelerini, Örnegin Mercimek Sefaroz reçinesi (GE Healthcare, Piscataway, NI] içerir. Alternatif olarak, hücre baglama ajanina özgü bir antikor kullanilabilir. Bu tür bir antikor, örnegin, Sefaroz 4 Hizli Akis reçinesine [GE Healthcare, Piscataway, NI] immobilize edilebilir. Uygun ters faz reçinelerinin örnekleri C4, C8 ve C18 reçinelerini [Grace Vydac, Hesperia, CA] içerir. Sailastirmaya yönelik olarak herhangi bir uygun adsorptif olmayan kromatografi reçinesi kullanilabilir. Uygun adsorptif olmayan kromatografi reçinelerinin örnekleri, bunlarla sinirli olmamak üzere, SEPHADEXTM G-25, G-50, G-100, SEPHACRYLTM reçineleri [örnegin, uzmanliga sahip olanlarca bilinen digerlerini içerir. Bir düzenlemede, bulusa ait islem ayrica stabil olmayan bir sekilde baglanmis birlestiricileri hücre baglama ajanindan serbest birakmak üzere bir tutma adimini da içerir. Tutma adimi, hücre baglama ajani-sitotoksik ajan konjugatinin saflastirilmasindan önce (örnegin, reaksiyon adimindan sonra, reaksiyon adimi ve söndürme adimi arasinda veya söndürme adimindan sonra) karisimin tutulmasini içerir. Örnegin, bulusa ait islem, (a) hücre baglama ajani ve sitotoksik ajan içeren bir birinci karisimi olusturmak üzere bir hücre baglama ajaninin, diger bir ifadeyle bir antikor, bir sitotoksik ajan, diger bir ifadeyle bir maytansinoid, ile temas ettirilmesini ve daha sonra (i) hücre baglama ajani sitotoksik ajan konjugatini içeren bir karisim saglamak üzere 4 ila 9'1uk bir pH'a sahip olan bir çözeltide, hücre baglama ajani ve sitotoksik ajan içeren birinci karisimin bir birlestirici saglayan bir iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi ile temas ettirilmesini, burada hücre baglama ajani birlestirici vasitasiyla sitotoksik ajana, (ii) serbest sitotoksik ajana ve (iii) reaksiyon yan ürünlerine kimyasal olarak baglanir, (b) stabil olmayan bir sekilde baglanmis birlestiricileri hücre baglama ajanindan serbest birakmak üzere [a] adiminda hazirlanan karisimin tutulmasini ve (c) bir saflastirilmis hücre baglama ajani sitotoksik ajan konjugati saglamak üzere karisimin saflastirilmasini içerir. Baska düzenlemede, bulusa ait islem, (a) hücre baglama ajani ve sitotoksik ajan içeren bir birinci karisimi olusturmak üzere bir hücre baglama ajaninin, diger bir ifadeyle bir antikor, bir sitotoksik ajan, diger bir ifadeyle bir maytansinoid, ile temas ettirilmesini ve daha sonra [i] hücre baglama ajani sitotoksik ajan konjugatini içeren bir karisim saglamak üzere 4 ila 9'luk bir pH'a sahip olan bir çözeltide, hücre baglama ajani ve sitotoksik ajan içeren birinci karisimin bir birlestirici saglayan bir iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi ile temas ettirilmesini, burada hücre baglama ajani birlestirici vasitasiyla sitotoksik ajana, (ii) serbest sitotoksik ajana ve (iii) reaksiyon yan ürünlerine kimyasal olarak baglanir, (b) herhangi bir reaksiyona girmemis sitotoksik ajan ve/veya reaksiyona girmemis iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifini söndürmek üzere (a) adiminda hazirlanan bilesimin söndürülmesini, (c) stabil olmayan bir sekilde baglanmis birlestiricileri hücre baglama ajanindan serbest birakmak üzere [b] adiminda hazirlanan karisimin tutulmasini ve (d) bir saflastirilmis hücre baglama ajani sitotoksik ajan konjugati saglamak üzere karisimin saflastirilmasini içerir. Alternatif olarak, tutma adimi, bir ilave saflastirma adimi tarafindan takip edilen, hücre baglama ajani-sitotoksik ajan konjugatinin saflastirilmasindan sonra gerçeklestirilebilir. Tercih edilen bir düzenlemede, reaksiyonun (diger bir ifadeyle, bir hücre baglama ajaninin, diger bir ifadeyle bir antikor, bir sitotoksik ajan, diger bir ifadeyle bir maytansinoid, ve daha sonra bir iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi ile temas ettirilmesi) tutma adimindan önce tamamlanmasina devam edilmesine izin verilir. Bu baglamda, tutma adimi, hücre baglama ajani ve sitotoksik ajani içeren karisimin iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi ile temas ettirilmesinden yaklasik 1 saat ila yaklasik 48 saat (örnegin, yaklasik 1 saat, yaklasik 2 saat, yaklasik 3 saat, yaklasik 4 saat, ila yaklasik 48 saat] sonra gerçeklestirilebilir. Tutma adimi, stabil bir sekilde baglanmis birlestiricileri hücre baglama ajanindan büyük ölçüde serbest birakmayarak, stabil olmayan bir sekilde baglanmis birlestiricileri hücre baglama ajanindan serbest birakmak üzere, çözeltinin uygun bir sicaklikta [örnegin, yaklasik 0 °C ila yaklasik 37 °C] uygun bir süre boyunca [örnegin, yaklasik 1 saat ila yaklasik 1 hafta, yaklasik 1 saat ila yaklasik 24 saat, yaklasik 1 saat ila yaklasik 8 saat, veya yaklasik 1 saat ila yaklasik 4 saat) muhafaza edilmesini içerir. Bir düzenlemede, tutma adimi, çözeltinin yaklasik 20 °C veya daha azinda [örnegin, yaklasik 0 °C ila yaklasik 18 °C, yaklasik 4 °C ila yaklasik 16 °C), oda sicakliginda (örnegin, yaklasik 20 9C ila yaklasik 30 9C veya yaklasik 20 °C ila yaklasik 25 °C] veya yükseltilmis bir sicaklikta [örnegin, yaklasik 30 °C ila yaklasik 37 °C) muhafaza edilmesini içerir. Bir düzenlemede, tutma adimi, çözeltinin yaklasik 24 °C, veya yaklasik 25 °C] sicakliginda muhafaza edilmesini içerir. Baska düzenlemede, tutma adimi, çözeltinin bir yaklasik 2 °C ila yaklasik 8 °C (örnegin, yaklasik 0 yaklasik 7 °C, yaklasik 8 °C, yaklasik 9 °C, veya yaklasik 10 °C] sicakliginda muhafaza edilmesini içerir. Baska düzenlemede, tutma adimi, çözeltinin bir yaklasik 37 °C (örnegin, ila yaklasik 40 °C) sicakliginda muhafaza edilmesini içerir. Tutma adiminin süresi, tutma adiminin gerçeklestirildigi sicakliga ve pH'a baglidir. Örnegin, tutma adiminin süresi, tutma adiminin, hücre baglama ajani-sitotoksik ajan konjugatinin stabilitesi tarafindan sinirlanan maksimum sicaklik ile, yükseltilmis sicaklikta gerçeklestirilmesiyle büyük ölçüde azaltilabilir. Tutma adimi, çözeltinin 1 saat ila yaklasik 1 gün (örnegin, yaklasik 1 saat, yaklasik 2 saat, yaklasik 3 saat, yaklasik 4 saat, yaklasik 5 saat ila yaklasik 1 hafta, yaklasik 20 saat ila yaklasik 1 hafta, yaklasik 12 saat ila yaklasik 1 hafta [örnegin, yaklasik 12 saat, yaklasik 16 saat, yaklasik 20 saat, yaklasik 24 saat, yaklasik 2 gün, yaklasik 3 gün, yaklasik 4 gün, yaklasik 5 gün, yaklasik 6 gün, veya yaklasik 7 gün), veya yaklasik 1 gün ila yaklasik 1 hafta boyunca muhafaza edilmesini içerebilir. Bir düzenlemede, tutma adimi, çözeltinin bir yaklasik 2 °C ila yaklasik 8 °C sicaklikta bir haftaya kadar en az yaklasik 12 saatlik bir süre boyunca muhafaza edilmesini içerir. Baska bir düzenlemede, tutma adimi, çözeltinin bir yaklasik 2 °C ila yaklasik 8 °C sicaklikta gece boyunca (örnegin, yaklasik 12 ila yaklasik 24 saat, tercih edildigi üzere yaklasik 20 saat] muhafaza edilmesini içerir. Tutma adimina yönelik pH degeri tercih edildigi üzere yaklasik 4 ila yaklasik 10'dur. Bir düzenlemede, tutma adimina yönelik pH degeri yaklasik 4 veya daha fazla, ancak yaklasik 6'dan (örnegin, 4 ila 5.9) daha az veya yaklasik 5 veya daha fazla, fakat yaklasik 6'dan daha azdir [örnegin, 5 ila 5.9). Baska düzenlemede, tutma adimina yönelik pH degerleri yaklasik 6 ila yaklasik 10 (örnegin, yaklasik 6.5 ila yaklasik 9, yaklasik 6 ila yaklasik 8) araliginda degisir. Örnegin, tutma adimina yönelik pH degerleri yaklasik 6, yaklasik 6.5, yaklasik 7, Spesifik düzenlemelerde, tutma adimi, karisimin 25 °C'de yaklasik 6-7.5'lik bir pH'ta yaklasik 12 saat ila yaklasik 1 hafta boyunca inkübe edilmesini, karisimin 4 °C'de yaklasik 4.5-5.9'luk bir pH'ta yaklasik 5 saat ila yaklasik 5 gün boyunca inkübe edilmesini veya karisimin 25 °C'de yaklasik 4.5-5.9'luk bir pH'ta yaklasik 5 saat ila 1 gün boyunca inkübe edilmesini içerebilir. Bulus, bilesimlerin stabil olmayan konjugatlardan büyük ölçüde arindirildigi, bir sitotoksik ajana, diger bir ifadeyle bir maytansinoid, kimyasal olarak baglanmis bir hücre baglama ajanini, diger bir ifadeyle bir antikor, içeren stabil konjugatlarin bilesimlerinin hazirlanmasina yönelik bir islem saglar. Bu bakimdan, bulus, büyük ölçüde yüksek saflikta ve stabilitede olan hücre baglama ajani-sitotoksik ajan konjugatinin hazirlanmasina yönelik bir islem saglar. Bu tür bilesimler, konjugatlarin yüksek safligi ve stabilitesi nedeniyle hastaliklarin tedavi edilmesine yönelik olarak kullanilabilir. Bir maytansinoid gibi bir sitotoksik ajana kimyasal olarak baglanmis bir antikor gibi bir hücre baglama ajanini içeren bilesimler, örnegin U.S. Patent 7,374,762`de açiklanir. Bulusun bir bakis açisinda, büyük ölçüde yüksek saflikta olan bir hücre baglama ajani-sitotoksik ajan konjugati, asagidaki özelliklerden birine veya daha fazlasina sahiptir: [a] konjugat yaklasik %95'ten daha fazlasi monomeriktir, (b) konjugat preparasyonundaki konjuge edilmemis birlestirici seviyesi yaklasik %10'dan daha azdir (örnegin, yaklasik %9, %8, serbest sitotoksik ajan seviyesi yaklasik %2'den daha azdir (örnegin, yaklasik %15, %14, depolama üzerine serbest sitotoksik ajan seviyesinde büyük ölçüde artis yoktur (örnegin, yaklasik 4 yil veya yaklasik 5 yil sonra). Serbest sitotoksik ajan seviyesindeki "büyük ölçüde artis", belirli bir depolama süresinden sonra (örnegin, yaklasik 1 hafta, yaklasik 2 yil), serbest sitotoksik ajan seviyesindeki artisin yaklasik %0.1, yaklasik %02, yaklasik Burada kullanildiginda, "konjuge edilmemis birlestirici" terimi, iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi ile kovalent olarak baglanan hücre baglama ajanina refere eder, burada hücre baglama ajani sitotoksik ajana iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifinin birlestiricisi vasitasiyla kovalent olarak baglanmaz (diger bir ifadeyle, "konjuge edilmemis birlestirici", CBA-L ile temsil edilebilir, burada CBA hücre baglama ajanini temsil eder ve L bifonksiyonel çapraz birlestirme reaktifini temsil eder. Buna karsilik, hücre baglama ajani sitotoksik ajan konjugati; CBA-L-D ile temsil edilebilir, burada D sitotoksik ajani temsil Bir düzenlemede, sitotoksik ajanin hücre baglama ajani sitotoksik ajan konjugatindaki hücre baglayici ajana ortalama molar orani yaklasik 1 ila yaklasik 10, yaklasik 2 ila yaklasik 7, yaklasik 3 ila yaklasik 5, yaklasik 2.5 ila yaklasik 45 [örnegin yaklasik 2.5, Mevcut bulus, bir sitotoksik ajana, diger bir ifadeyle bir maytansinoid, kimyasal olarak baglanmis bir hücre baglama ajanini, diger bir ifadeyle bir antikor, içeren stabil konjugatlarin bilesimlerinin hazirlanmasina yönelik olarak daha etkili bir islem saglar. Bir düzenlemede, bir hücre baglama ajani ve bir sitotoksik ajanin konjugatlarinin hazirlanmasina yönelik geleneksel islemlerle karsilastirildiginda, konjugatlara yönelik olarak sitotoksik ajanin hücre baglama ajanina ayni ortalama molar oranini elde etmek üzere daha az miktarda sitotoksik ajan gerekir. Uygun hücre baglama ajanlari, antikorlari [örnegin, monoklonal antikorlar ve bunlarin parçalari) içerir. Hücre baglama ajaninin bir antikor oldugu durumlarda, bir polipeptit veya bir glikoptop olan bir antijene baglanir ve bir transmembran molekülü (örnegin, reseptör] veya bir büyüme faktörü gibi bir ligand olabilir. Örnekleyici antijenler renin gibi moleküller; insan büyüme hormonu ve sigir büyüme hormonu dahil olmak üzere bir büyüme hormonu; büyüme hormonu salgilama faktörü; paratiroid hormonu; tiroid uyarici hormon; lipoproteinler; alfa-l-antitripsin; insülin A-zinciri; insülin B zinciri; proinsülin; folikül uyarici hormon; kalsitonin; lüteinlestirici hormon; glukagon; faktör vmc, faktör IX, doku faktörü (TF) ve von Willebrands faktörü gibi pihtilasma faktörleri; Protein C gibi pihtilasma önleyici faktörler; atriyal natriüretik faktör; akciger sürfaktani; ürokinaz veya insan idrar veya doku tipi plazminojen aktivatörü (t-PA) gibi bir plazminoien aktivatörü; bombesin; trombin; hemopoietik büyüme faktörü; tümör nekroz faktörü-alfa ve -beta; enkefalinaz; RANTES (normal olarak T hücresi ekspreseli ve salgili aktivasyon üzerinde düzenlenmis]; insan makrofaj enflamatuar proteini (MIP-l-alfa); insan serum albümini gibi bir serum albümini; Muellerian inhibe edici substans; relaksin A-zinciri; relaksin B zinciri; prorelaksin; fare gonadotropin ile iliskili peptid; beta-laktamaz gibi bir mikrobiyal protein; DNaz; IgE; CTLA-4 gibi bir sitotoksik T-lenfosit ile iliskili antijen [CTLA); inhibin; aktivin; vasküler endotel büyüme faktörü (VEGF): hormonlar veya büyüme faktörlerine yönelik reseptörler; protein A veya D; romatoid faktörler; kemikten türetilmis nörotrofik faktör [BDNF], nörotrofin-S, -4, -5 veya -6 (NT-3, NT4, NT-5 veya NT-6] gibi bir nörotrofik faktör veya NGF-ß gibi bir sinir büyüme faktörü; platelet kaynakli büyüme faktörü (PDGF]; aFGF ve bFGF gibi fibroblast büyüme faktörü; epidermal büyüme faktörü (EGF); TGF-ß1, TGF-gZ, TGF-g3, TGF-g4, or TGF-gS dahil olmak üzere TGF-alfa ve TGF-beta gibi dönüstürücü büyüme faktörü (TGF]; insülin benzeri büyüme faktörü-l ve -ll (IGF-l ve IGF- ll]; des(1-3]-lGF-l [beyin [GF-1); insülin benzeri büyüme faktörü baglayici proteinler; EpCAM; GD3; FLT3; PSMA; PSCA; MUCl; MUC16; STEAP; CEA; TENBZ; EphA reseptörleri; EphB reseptörleri; folat reseptörü; FOLR1; mezotelin; kripto; alfavbetaß; integrinler; VEGF, VEGFR; EGFR; transferrin reseptörü; lRTAl; IRTAZ; lRTA3; IRTA4; IRTAS; CD2, CD3, CD4, reseptörüne baglanan bir antikor; eritropoietin; osteoindüktif faktörler; immünotoksinler; bir kemik morfogenetik proteini (BMP); interferon-alfa, -beta ve -gama gibi bir interferon; koloni uyarici faktörler (CSF'ler), örnegin M-CSF, GM-CSF ve G-CSF; interlökinler [lL'ler), örnegin, IL-1 ila IL-10; süperoksit dismutaz; T-hücresi reseptörleri; yüzey membran proteinleri; çürüme hizlandirici faktör; örnegin HIV zarfinin bir kesiti gibi viral antijen; tasima proteinleri; homing reseptörleri; adressinler; düzenleyici proteinler; CD1 la, CDllb, CDllc, CD18, bir ICAM, VLA-4 ve VCAM gibi integrinler; HERZ, HER3 veya HER4 reseptörü gibi bir tümörle iliskili antijen; endoglin; c-Met; lGFlR; PCAS, PSA, PSGR, NGEP, PSMA, PSCA, TMEFFZ ve STEAPl gibi prostat antijenleri; LGRS; B7H4; ve yukarida listelenen polipeptitlerin herhangi birinin parçalarini içerir. Ilave olarak, miyeloid hücrelere baglanan GM-CSF, akut miyeloid lösemiden hastalikli hücrelere bir hücre baglama ajani olarak kullanilabilir. Aktive T-hücrelerine baglanan IL-2, nakil greft reddinin engellenmesine yönelik olarak, greft versus-host hastaliginin terapisine ve engellenmesine yönelik olarak ve akut T-hücreli löseminin tedavisine yönelik olarak kullanilabilir. Melanositlere baglanan MSl-I, melanomlara yönelik antikorlar gibi melanom tedavisine yönelik olarak kullanilabilir. Folik asit, over ve diger tümörler üzerinde eksprese edilen folat reseptörünü hedeflemek üzere kullanilabilir. Epidermal büyüme faktörü, akciger, bas ve boyun gibi skuamöz kanserleri hedeflemek üzere kullanilabilir. Somatostatin, nöroblastomlari ve diger tümör tiplerini hedeflemek üzere kullanilabilir. Burada kullanildiginda "antikor" terimi, bir hücrenin yüzeyi üzerinde bir antijene baglanabilen (örnegin, bir tamamlayicilik belirleme bölgesi (CDR) içeren) herhangi bir immünoglobüline, Fab, Fab', F(ab')2, dst, st, mini cisimler, dia cisimler, tri cisimler, tetra bir immünoglobulin parçasina veya immünoglobulin kimeraya refere eder. Herhangi bir uygun antikor, hücre baglama ajani olarak kullanilabilir. Teknikte siradan uzmanliga sahip birisi, uygun bir antikorun seçimini hedeflenen hücre popülasyonuna bagli olacagini kabul edecektir. Bu baglamda, belirli bir hücre popülasyonunda (tipik olarak ve tercih edildigi üzere hastalikli bir hücre popülasyonu) seçici olarak eksprese edilen hücre yüzeyi moleküllerinin (diger bir ifadeyle, antijenlerin) tipi ve sayisi, bulusa ait bilesimde kullanima yönelik olarak uygun bir antikorun seçimini yönetecektir. Hücre yüzeyi ekspresyon profilleri, tümör hücresi tipleri dahil olmak üzere genis çesitlilikte hücre tiplerine yönelik olarak bilinir veya, bilinmemesi halinde, rutin moleküler biyoloji ve histokimya teknikleri kullanilarak belirlenebilir. Antikor poliklonal veya monoklonal olabilir, fakat en çok tercih edildigi üzere bir monoklonal antikordur. Burada kullanildiginda "poliklonal" antikorlar, tipik olarak immünize edilmis hayvanlarin serumlarinda bulunan, heterojen antikor molekülleri popülasyonlarina refere eder. "Monoklonal" antikorlar, belirli bir antijene spesifik olan homojen antikor molekülleri popülasyonlarina refere eder. Monoklonal antikorlar tipik olarak tek bir B lenfosit klonu ("B hücreleri") tarafindan üretilir. Monoklonal antikorlar, standart hibridoma teknolojisi (bakiniz, örnegin, Köhler and Milstein, Eur. I. Immunol., 5: (1988), ve C.A. Janeway et al. (eds.), Immunobiology, 5th Ed., Garland Publishing, New York, NY (2001)) de dahil olmak üzere teknikte uzman olanlarca bilinen çesitli teknikler kullanilarak elde edilebilir. Kisaca, monoklonal antikorlarin üretilmesinin hibridoma yöntemi tipik olarak herhangi bir uygun hayvana, tipik olarak ve tercih edildigi üzere bir fare, bir antijenin (diger bir ifadeyle, bir "immünojen") enjekte edilmesini içerir. Bundan sonra hayvan öldürülür ve dalagindan izole edilen B hücreleri insan miyelom hücreleri ile kaynastirilir. Süresiz olarak çogalan ve sürekli olarak test tüpü içinde istenen spesifiklige sahip bir antikorun yüksek titrelerini salgilayan bir hibrit hücre (diger bir ifadeyle, bir tanimlamak üzere teknikte bilinen herhangi bir uygun yöntem kullanilabilir. Bu tür yöntemler örnegin enzime bagli immünosorbent deneyi (ELISA), Western blot analizi ve radyoimmunoanalizi içerir. Hibridomalarin popülasyonu, her biri antijene tek bir antikor türü salgilayan ayri klonlari izole etmek üzere elenir. Her bir hibridoma, tek bir B hücresine sahip füzyondan türetilmis bir klon oldugundan, ürettigi tüm antikor molekülleri antijen baglanma bölgeleri ve izotipleri dahil olmak üzere yapi bakimindan özdestir. Monoklonal antikorlar ayni zamanda EBV-hibridom teknolojisi [bakiniz, örnegin, parçalarini içeren faj görüntüleme kütüphaneleri (tek zincirli degisken bölge] (bakiniz, üretilebilir. Monoklonal antikor herhangi bir uygun hayvandan izole edilebilir veya üretilebilir, ancak tercih edildigi üzere bir memelide, daha fazla tercih edildigi üzere bir fare veya insanda ve en fazla tercih edildigi üzere bir insanda üretilir. Farelerde bir antikorun üretilmesine yönelik yöntemler teknikte uzman olanlarca iyi bilinir ve burada açiklanir. Insan antikorlarina iliskin olarak, teknikte siradan uzmanliga sahip birisi, poliklonal antikorlarin uygun bir antijen ile asilanmis veya immunize edilmis insan deneklerin serumundan izole edilebilecegini kabul edecektir. Alternatif olarak, insan antikorlari, fareler gibi insan olmayan hayvanlarda insan antikorlarinin üretilmesine yönelik olarak bilinen tekniklerin Insanlarda terapötik uygulamalara yönelik olarak ideal seçim olurken, insan antikorlarinin, özellikle insan monoklonal antikorlarinin, üretilmesi fare monoklonal antikorlarindan tipik olarak daha zordur. Bununla birlikte, fare monoklonal antikorlari, insanlara uygulandiginda, antikor-sitotoksik ajan konjugatinin terapötik veya tanisal potansiyelini azaltabilerek, hizli bir konakçi antikor tepkisi yaratir. Bu komplikasyonlarin üstesinden gelmek üzere, bir monoklonal antikor tercih edildigi üzere insan immün sistemi tarafindan "yabanci" olarak taninmaz. Bu amaçla, antikor üretmek üzere faj gösterimi kullanilabilir. Bu baglamda, standart moleküler biyoloji ve rekombinant DNA teknikleri [bakiniz, örnegin, Sambrook et al. (eds.], Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 3rd Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York (2001]) kullanilarak antikorlarin antijen baglama degisken (V) alanlarini kodlayan faj kütüphaneleri üretilebilir. Istenen spesifiklige sahip bir degisken bölgeyi kodlayan faj, istenen antijene spesifik baglanmaya yönelik olarak seçilir ve seçilen degisken alani içeren bir tam insan antikoru yeniden yapilandirilir. Yeniden yapilandirilmis antikoru kodlayan nükleik asit sekanslari, hibridoma üretimine yönelik olarak kullanilan bir miyelom hücresi gibi bir uygun hücre hattina sokulur, bu sekilde monoklonal antikorlarin özelliklerine sahip olan insan antikorlari hücre tarafindan salgilanir (bakiniz, örnegin yukarida zikredilen Ianeway et al., yukarida zikredilen Huse et al., ve U.S. Patent 6,265,150). Alternatif olarak, monoklonal antikorlar spesifik insan agir ve hafif zincir immünoglobulin genlerine yönelik olarak transgenik olan farelerden üretilebilir. Bu tür yöntemler teknikte bilinir ve, örnegin, U.S. Patentleri 5,545,806 ve ,569,825, ve yukarida zikredilen Ianeway et al.'de açiklanir. En çok tercih edildigi üzere antikor, bir insanlastirilmis antikordur. Burada kullanildiginda, bir "insanlastirilmis" antikor, antikorun antijen baglanma halkalarini olusturan bir fare monoklonal antikorunun tamamlayicilik belirleyici bölgelerinin (CDR), bir insan antikor molekülünün çerçevesine asilandigi olandir. Fare ve insan antikorlarinin çerçevelerinin benzerligi nedeniyle, bu yaklasimin bir insan antikoruna antijenik olarak özdes olan, ancak CDR sekanslarinin türetildigi fare monoklonal antikoruyla ayni antijeni bagladigi bir monoklonal antikor ürettigi genel olarak teknikte kabul edilir. Insanlastirilmis antikorlarin üretilmesine yönelik yöntemler teknikte iyi bilinir ve örnegin, açiklanir. Insanlastirilmis antikorlar ayni zamanda U.S. Patenti 5,639,641 ve Pedersen et teknolojisi kullanilarak da üretilebilir. Bulusa ait bilesimin konjugatinda kullanilan antikor en çok tercih edildigi üzere bir insanlastirilmis monoklonal antikor iken, yukarida açiklandigi gibi bir insan monoklonal antikoru ve bir fare monoklonal antikoru da bulusun kapsami içerisindedir. Ayni zamanda en az bir antijen baglanma bölgesine sahip olan ve bu nedenle bir hedef hücrenin yüzeyi üzerinde mevcut olan en az bir antijen veya reseptörü taniyan ve bunlara baglanan antikor parçalari da bulusun kapsami içerisindedir. Bu bakimdan, bir bozulmamis antikor molekülünün proteolitik bölünmesi, antijenleri tanima ve baglama yetenegini sürdüren çesitli antikor parçalarini üretebilir. Örnegin, proteaz papaine sahip bir antikor molekülünün sinirli sekilde sindirimi tipik olarak, ikisi özdes olan ve ana antikor molekülünün antijen baglama aktivitesini sürdürdüklerinden Fab parçalari olarak refere edilen, üç parçayi üretir. Bir antikor molekülünün pepsin enzimi ile bölünmesi normal olarak, biri antikor molekülünün her iki antijen baglayici kolunu tutan ve bu nedenle F(ab']2 parçasi olarak refere edilen iki antikor parçayi üretir. F(ab')2 parçasinin ditiyotreitol veya merkaptoetilamin ile azaltilmasi, bir Fab' parçasi olarak refere edilen bir parça üretir. Sentetik bir peptid vasitasiyla bir hafif antikor zincirinin bir V alanina baglanan bir antikor agir zincirinin degisken (V) alanini içeren bir kesilmis Fab parçasindan olusan bir tek Zincirli degisken bölge parçasi (st) antikor parçasi rutin rekombinant DNA teknolojisi tekniklerinin kullanilmasiyla [bakiniz, Örnegin, yukarida zikrediIen Janeway et al.) üretilebilir. Benzer bir sekilde, disülfit stabilize edilmis degisken bölge parçalari (dst), rekombinant DNA teknolojisi (bakiniz, örnegin, Reiter et al., Protein antikor parçalari, bu örnekleyici antikor parçalari tipleri ile sinirli degildir. Istenen bir hücre yüzeyi reseptörünü veya antijenini taniyan ve buna baglanan herhangi bir uygun antikor parçasi kullanilabilir. Antikor parçalari ayrica, örnegin Parham, ]. lmmunol., 131: radioimmunoassay (RIA), ELISA, Western blot, immüno-çökeltme ve rekabetçi inhibisyon analizleri gibi teknikte bilinen herhangi bir uygun yöntem kullanilarak analiz edilebilir (bakiniz, örnegin, yukarida zikredilen Ianeway et al., ve U.S. Patent Basvurusu Yayin No. Ek olarak, antikor bir kimerik antikor veya bunun bir antijen baglayici parçasi olabilir. immünoglobülin veya bunun parçalarini (örnegin, bir murin immünoglobülin degisken bölge ile birlestirilmis bir insan immünoglobülin sabit bölgesi gibi iki farkli immünoglobülin] içerdigi kastedilir. Antikor ayni zamanda bir alan antikoru [dAb) veya, örnegin bir camelid antikoru (bakiniz, örnegin, Desmyter et al., Nature Struct. Biol., 3: 752, (1996]) gibi bunun bir antijen baglayici parçasi veya, örnegin bir yeni antijen reseptörü (IgNAR) gibi bir köpekbaligi antikoru (bakiniz, örnegin, Greenberg et al., Nature, 374: 168 Herhangi bir uygun antikor bulusun baglaminda kullanilabilir. Örnegin, monoklonal antikor 15, Yaygin Akut Lenfoblastik Lösemi Antijenine (CALLA) özgü olan bir murin lgGZa hücreleri (örnegin, akut lenfoblastik lösemi hücreleri) hedeflemek üzere kullanilabilir. Monoklonal antikor MY9, spesifik olarak CD33 antijenine baglanan bir murin IgGl hücreleri (örnegin, akut miyelojen lösemi (AML]) hedeflemek üzere kullanilabilir. Benzer bir sekilde, monoklonal antikor anti-B4 [ayni zamanda B4 olarak da refere edilir), B hücreleri üzerindeki CD19 antijenine baglanan bir murin lgGl antikorudur (Nadler et al., hücreleri (örnegin, Hodgkin's olmayan lenfoma hücreleri ve kronik lenfoblastik lösemi hücreleri) hedeflemek üzere kullanilabilir. N901, ilaçlari nöroendokrin kökenli hücrelere hedeflemek üzere konjugatta kullanilabilen küçük hücreli akciger tümörü dahil olmak üzere nöroendokrin kökenli hücrelerde bulunan CD56 (nöral hücre yapisma molekülü) antijenine baglanan bir murin monoklonal antikorudur. 15, MY9 ve B4 antikorlari tercih edildigi üzere konjugatin bir parçasi olarak kullanilmalarindan önce yeniden yüzeylendirilir veya insanlastirilir. Antikorlarin yeniden yüzeylenmesi veya açiklanir. Ek olarak, monoklonal antikor C242 CanAg antijenine baglanir (bakiniz, örnegin, U.S. Patent 5,552,293) ve konjugati kolorektal, pankreatik, küçük olmayan hücreli akciger ve gastrik kanserler gibi CanAg eksprese eden tümörlere hedeflemek üzere kullanilabilir. HuC242, monoklonal antikor C242'nin bir insanlastirilmis formudur [bakiniz, örnegin, U.S. ile doldurulur. HuC242, CDR asilama metodolojisi (bakiniz, örnegin, U.S. Patentleri kolorektal, pankreatik, küçük hücreli olmayan akciger ve gastrik kanseri hücreleri gibi CanAg antijenini eksprese eden tümör hücrelerine hedeflemek üzere kullanilabilir. Yumurtalik kanseri ve prostat kanseri hücrelerini hedeflemek üzere, konjugattaki hücre baglayici ajan olarak bir anti-MUCI antikoru kullanilabilir. Anti-MUCl antikorlari, örnegin, anti-HMFG-Z (bakiniz, örnegin, Taylor-Papadimitriou et al., lnt. ]. Cancer, 28: 17-21 DSö'yi içerir. Prostat kanseri hücreleri ayni zamanda, hücre baglama ajani olarak ]591 gibi bir anti-prostat spesifik membran antijeni (PSMA) kullanilarak, konjugat ile hedeflenebilir yumurtalik kanserleri gibi Her2 antijenini eksprese eden kanser hücreleri, hücre baglama ajani olarak anti-Herz antikorlari, örnegin trastuzumab kullanilarak konjugat ile hedeflenebilir. Epidermal büyüme faktörü reseptörünü (EGFR) ve bunlarin tip [II silme mutanti, EGFvalI gibi varyantlari eksprese eden hücreler, anti-EGFR antikorlari kullanilarak konjugat ile hedeflenebilir. Anti-EGFR antikorlari, U.S. Patentleri 7,736,644 ve insülin benzeri büyüme faktörü reseptörüne baglanan anti-lGF-IR antikorlari da konjugatta kullanilabilir. CD27L, Cripto, CD138, CD38, EphAZ, integrinler, CD37, folat, CDZO, PSGR, NGEP, PSCA, TMEFFZ, STEAPl, endoglin ve Her3'e baglanan antikorlar da konjugatta kullanilabilir. Bir düzenlemede, antikor, huN901, huMy9-6, huB4, huC242, bir anti-HERZ antikoru (örnegin, trastuzumab], bivatuzumab, sibrotuzumab, rituksimab, huDSö, Uluslararasi PCT/U, U.S. Patentler, integrin avße antikorlari (örnegin, CNT095); ve Uluslararasi Patent Basvurusu Yayini WO Özellikle tercih edilen antikorlar, burada açiklanan insanlastirilmis monoklonal antikorlardir. Örnekler, bunlarla sinirli olmamak üzere, huN901, huMy9-6, huB4, huC242, bir insanlastirilmis monoklonal anti-HerZ antikoru [örnegin, trastuzumab), bivatuzumab, iliskin olan), Uluslararasi (PCT) Patent Basvurusu Yayini WC 02/ 16401, yukarida zikredilen Pedersen et al., yukarida zikredilen Roguska et al., yukarida zikredilen Liu et al., antikorlar teknikte bilinir ve bulusla baglantili olarak kullanilabilir. Bir düzenlemede, hücre baglama ajani, bir insan folat reseptörü 1'e spesifik olarak baglanan bir insanlastirilmis anti-folat antikoru veya bunun antijen baglama parçasidir, burada antikor asagidakileri içerir: (a) GYFMN`yi içeren bir agir zincir CDR1; RlHPYDGDTFYNQXaaiFXaa2Xaa3'ü içeren bir agir zincir CDR2; ve YDGSRAMDY'yi içeren bir agir zincir CDR3; ve (b) KASQSVSFAGTSLMl-l içeren bir hafif zincir CDR1; RASNLEA içeren bir hafif zincir CDR2; ve QQSREYPYT içeren bir hafif zincir CDR3; burada Xaai K, Q, H ve R'den seçilir; Xaaz Q, H, N ve R'den seçilir; ve Xaag G, E, T, S, A ve V'den seçilir. Tercihen, agir zincir CDR2 sekansi, RIHPYDGDTFYNQKFQG'yi içerir. Baska düzenlemede, anti-folat antikoru, asagidaki amino asit sekansina sahip olan agir zinciri içeren insan folat reseptörü 1'i spesifik olarak baglayan bir insanlastirilmis antikor veya bunun antijen baglanma parçasidir. Baska düzenlemede, anti-folat antikoru, 7 Nisan 2010'da ATCC ile doldurulan ve ATCC kodlanan bir insanlastirilmis antikor veya bunun antijen baglanma parçasidir. Baska düzenlemede, anti-folat antikoru, QVQLVQSGAEVVKPGASVKISCKASGYTFTGYFMNWVKQSPGQSLEWIGRIHPYDG DTFYNQKFQGKATLTVDKSSNTAHMELLSLTSEDFAVYYCTRYDGSRAMDYWGQG TTVTVSS'a en azindan yaklasik %90, %95, %99 veya %100 özdes olan bir agir zincirli degisken alani ve asagidakine en azindan yaklasik %90, %95, %99 veya %100 özdes olan bir hafif Zincirli degisken alani içeren bir insanlastirilmis antikor veya bunun antijen baglanma parçasidir. Sitotoksik ajan, maytansinol ve maytansinol analoglar dahil olmak üzere bir maytansinoiddir. Maytansinoidler, mikrotübül olusumunu inhibe eden ve memeli hücrelere yönelik olarak oldukça toksik olan bilesiklerdir. Uygun maytansinol analoglarinin örnekleri, bir modifiye edilmis aromatik halkaya sahip olanlari ve baska pozisyonlarda modifikasyonlara sahip olanlari içerir. Bu tür maytansinoidler, örnegin, U.S. Modifiye edilmis bir aromatik halkaya sahip olan maytansinol analoglarinin örnekleri indirgemesi ile hazirlanmistir), (2) C-ZO-hidroksi (veya C-20-demetil] +/- C-19-dekloro demetilasyon veya LAH kullanilarak deklorinasyon ile hazirlanmistir) ve (3] C-20- demethoksi, C-ZO-asiloksi [-OCOR], +/-deklor0 (U.S. Patenti 4,294,757) [asil klorürler kullanilarak asilasyon ile hazirlanmistir). Bir aromatik halkadan ziyade pozisyonlarda modifikasyonlara sahip olan maytansinol analoglarinin örnekleri asagidakileri içerir: (1) C-9-SH [U.S. Patent 4,424,219] (maytansinolün st veya P2$5 ile reaksiyonu ile hazirlanmistir), (2) C-14-alk0ksimethil hidroksi/asiloksi (U.S. Patent 4,364,866) (maytansinolün Streptomyces tarafindan triklorür/LAH azaltmasi ile hazirlanmistir). Bulusun tercih edilen bir düzenlemesinde, konjugat, sitotoksik ajan olarak ayni zamanda N2`-deasetil-NZ'-(3-merkapt0-1-0ksopr0pil)-maytansin olarak da bilinen tiyol içeren maytansinoid DM1'i kullanir. DMl'in yapisi formül (I) ile temsil edilir: Bulusun tercih edilen baska düzenlemesinde, konjugat, sitotoksik ajan olarak ayni zamanda NZ'-deasetil-Nzl-(4-metil-4-merkapt0-1-0ksopentil)-maytansin olarak da bilinen tiyol içeren maytansinoid DM4'ü kullanir. DM4'ün yapisi, formül ([1) ile temsil edilir: Örnegin, sülfür atomunu tasiyan karbon atomu üzerinde bir mono veya di-alkil substitüsyonunu tasiyan tiyol ve disülfid içeren maytansinoidler dahil olmak üzere, diger maytansinoidler bulusun kapsaminda kullanilabilir. Özellikle tercih edildigi üzere, 03 pozisyonunda (a) C-14 hidroksimetil, C-15 hidroksi veya C-20 desmetil fonksiyonelligine ve (b) bir engellenmis sülfhidril grubunu tasiyan bir asil grubuna sahip bir asîllenmis amino asit yan zincirine sahip olan bir maytansinoiddir, burada tiol fonksiyonelligini tasiyan asil grubunun karbon atomu bir veya iki sübstitüe ediciye sahiptir, söz konusu sübstitüe ediciler CH3, Csz, 1 ila 10 karbon atomuna sahip olan dogrusal veya dallanmis alkil veya alkenil, 3 ila 10 karbon atomuna sahip olan siklik alkil veya alkenil, fenil, sübstitüe edilmis fenil veya heterosiklik aromatik veya heterosikloalkil radikaldir ve ayrica burada sübstitüe edicilerden biri H olabilir ve burada asil grubu, karbonil fonksiyonellik ile kükürt atomu arasinda en azindan üç karbon atomluk bir dogrusal zincir uzunluguna sahiptir. Bulusun kapsaminda kullanima yönelik ilave maytansinoidler, asagidaki formül [[11] tarafindan temsil edilen bilesikleri içerir: burada Y' (CRnCRiRgSZ'yi temsil eder, burada R1 ve Rz'nin her biri bagimsiz olarak CH3, C2H5,1 ila 10 karbon atomuna sahip olan dogrusal alkil veya alkenil, 3 ila 10 karbon atomuna sahip olan dallanmis veya siklik alkil veya alkenil, fenil, sübstitüe edilmis fenil veya heterosiklik aromatik veya heterosikloalkil radikaldir ve burada R2 ayrica H de olabilir, burada A, B, D, 3-10 karbon atomuna sahip olan sikloalkil veya sikloalkenil, basit veya sübstitüe edilmis aril veya heterosiklik aromatik veya heterosikloalkil radikalidir, Csz, 1 ila 10 karbon atomuna sahip olan dogrusal alkil veya alkenil, 3 ila 10 karbon atomuna sahip olan dalli veya siklik alkil veya alkenil, fenil, sübstitüe edilmis fenil veya heterosiklik aromatik veya heterosikloalkil radikalidir, burada 1, m, n, 0, p, q, r, s ve t'nin her biri bagimsiz olarak sifir veya, 1, m, n, o, p, q, r, s ve t'nin en azindan ikisinin herhangi bir zamanda sifir olmamasi sartiyla, 1'den 'e bir tamsayidir, ve burada Z H, SR veya COR'dir, burada R 1 ila 10 karbon atomuna sahip olan dogrusal alkil veya alkenil, 3 ila 10 karbon atomuna sahip olan dalli veya siklik alkil veya alkenil veya basit veya sübstitüe edilmis aril veya heterosiklik aromatik veya heterosikloalkil radikaldir. Tercih edilen formül (111] düzenlemeleri, (a) Ri'in H, Rz'nin metil ve Z'nin H oldugu, [b] Ri'in ve Rz'nin metil ve Z'nin H oldugu, (c) Ri'in H oldugu, Rz'nin metil oldugu ve Z'nin - SCH3 oldugu ve (d) R1 ve Rz'nin metil oldugu ve Z'nin -SCH3 oldugu [III] formülü bilesiklerini içerir. Bu tür ilave maytansinoidler ayni zamanda formül (IV-L), [IV-D), veya (IV-D,L] tarafindan temsil edilen bilesikleri de içerir: burada Y, (CR7R3)1[CR5R6}m(CR3R4)nCR1RZSZ'yi temsil eder, burada R1 ve Rz'nin her biri bagimsiz olarak CHg, C2H5,1 ila 10 karbon atomuna sahip olan dogrusal alkil veya alkenil, 3 ila 10 karbon atomuna sahip olan dallanmis veya siklik alkil veya alkenil, fenil, sübstitüe edilmis fenil veya heterosiklik aromatik veya heterosikloalkil radikaldir ve burada R2 ayrica H de olabilir, burada R3, R4, R5, R6, R7 ve Rg'in her biri bagimsiz olarak H, CH3, Csz, 1 ila 10 karbon atomuna sahip olan dogrusal alkil veya alkenil, 3 ila 10 karbon atomuna sahip olan dalli veya siklik alkil veya alkenil, fenil, sübstitüe edilmis fenil veya heterosiklik aromatik veya heterosikloalkil radikalidir, burada 1, m ve n'nin her biri bagimsiz olarak 1'den 5'e bir tam sayidir ve ek olarak n sifir olabilir, burada Z H, SR veya COR'dir, burada R 1 ila 10 karbon atomuna sahip olan dogrusal veya dallanmis alkil veya alkenil, 3 ila 10 karbon atomuna sahip olan siklik alkil veya alkenil veya basit veya sübstitüe edilmis aril veya heterosiklik aromatik veya heterosikloalkil radikalidir ve burada May, C-3, C-14 hidroksimetil, C-15 hidroksi veya C-ZO desmetilde yan zinciri tasiyan bir maytansinoidi temsil Tercih edilen formüller (IV-L), (IV-D) ve [IV-D, L] düzenlemeleri, [a] Ri'in H oldugu, Rg'nin metil oldugu, R5, R6. R7, ve Rg'in her birinin H oldugu, 1 ve m'nin her birinin 1 oldugu, n'nin 0 oldugu, ve Z'nin H oldugu, (b) R1 ve Rz'nin metil oldugu, R5, R6, R7, Rg'in her birinin H oldugu, 1 ve m'nin 1 oldugu, n'nin 0 oldugu, ve Z'nin H oldugu, [c] Ri'in H oldugu, Rz'nin metil oldugu, R5, R6, R7, ve Rg'in her birinin H oldugu, 1 ve m'nin her birinin 1 oldugu, n'nin 0 oldugu, ve Z'nin -SCH3 oldugu, veya (d) R1 ve Rz'nin metil oldugu, R5, R6, R7, Rg'nin her birinin H oldugu, 1 ve m'nin 1 oldugu, n'nin 0 oldugu, ve Z'nin -SCH3 oldugu formüller [IV- L), [IV-D) ve [IV-D, L) bilesiklerini içerir. Tercih edildigi üzere sitotoksik ajan, formül [IV-L] tarafindan temsil edilir. Tercih edilen ilave maytansinoidler ayni zamanda formül (V) tarafindan temsil edilen bilesikleri de içerir: burada R1 ve Rz'nin her biri bagimsiz olarak CH3, C2H5,1 ila 10 karbon atomuna sahip olan dogrusal alkil veya alkenil, 3 ila 10 karbon atomuna sahip olan dallanmis veya siklik alkil veya alkenil, fenil, sübstitüe edilmis fenil veya heterosiklik aromatik veya heterosikloalkil radikaldir ve burada R2 ayrica H de olabilir, burada R3, R4, R5, R6, R7 ve Rg'in her biri bagimsiz olarak H, CH3, Csz, 1 ila 10 karbon atomuna sahip olan dogrusal alkil veya alkenil, 3 ila 10 karbon atomuna sahip olan dalli veya siklik alkil veya alkenil, fenil, sübstitüe edilmis fenil veya heterosiklik aromatik veya heterosikloalkil radikalidir, burada l, m ve n'nin her biri bagimsiz olarak 1'den 5'e bir tam sayidir ve ek olarak n sifir olabilir, burada Z H, SR veya COR'dir, burada R 1 ila 10 karbon atomuna sahip olan dogrusal veya dallanmis alkil veya alkenil, 3 ila 10 karbon atomuna sahip olan siklik alkil veya alkenil veya basit veya sübstitüe edilmis aril veya heterosiklik aromatik veya heterosikloalkil radikalidir. Tercih edilen formül (V) düzenlemeleri, (a) Ri'in H oldugu, Rz'nin metil oldugu, R5, R6, R7 ve Rg'in her birinin H oldugu; 1 ve m'nin her birinin 1 oldugu; n'nin 0 oldugu; ve Z'nin H oldugu, (b) R1 ve Rz'nin metil oldugu; R5, R6, R7, Rg'in her birinin H oldugu, 1 ve m'nin 1 oldugu; n'nin 0 oldugu; ve Z'nin H oldugu, (C) Ri'in H oldugu, Rz'nin metil oldugu, R5, R6, R7, ve Rg'in her birinin H oldugu, 1 ve m'nin her birinin 1 oldugu, n'nin 0 oldugu, ve Z'nin -SCH3 oldugu, veya [d] R1 ve Rz'nin metil oldugu, R5, R6, R7, Rg'in her birinin H oldugu, 1 ve m'nin 1 oldugu, n'nin 0 oldugu, ve Z'nin -SCH3 oldugu formül [V] bilesiklerini içerir. Yine baska tercih edilen maytansinoidler, formül [VI-L), (VI-D) veya [VI-D, L] tarafindan temsil edilen bilesikleri içerir: burada Yz [CR7R8)i(CR5R6)m(CR3R4)"CRistZz'yi temsil eder, burada R1 ve Rz'nin her biri bagimsiz olarak CHg, C2H5,1 ila 10 karbon atomuna sahip olan dogrusal alkil veya alkenil, 3 ila 10 karbon atomuna sahip olan dallanmis veya siklik alkil veya alkenil, fenil, sübstitüe edilmis fenil veya heterosiklik aromatik veya heterosikloalkil radikaldir ve burada R2 ayrica H de olabilir, burada R3, R4, R5, R6, R7 ve Rg'in her biri bagimsiz olarak H, CHg, Czl'ls, 1 ila 10 karbon atomuna sahip olan dogrusal alkil veya alkenil, 3 ila 10 karbon atomuna sahip olan dalli veya siklik alkil veya alkenil, fenil, sübstitüe edilmis fenil veya heterosiklik aromatik veya heterosikloalkil radikalidir, burada 1, m ve n'nin her biri bagimsiz olarak 1'den 5'e bir tam sayidir ve ek olarak n sifir olabilir, burada ZZ SR veya COR'dir, burada R 1 ila 10 karbon atomuna sahip olan dogrusal veya dallanmis alkil veya alkenil, 3 ila 10 karbon atomuna sahip olan siklik alkil veya alkenil veya basit veya sübstitüe edilmis aril veya heterosiklik aromatik veya heterosikloalkil radikalidir ve burada May maytansinoidin makrosiklik halka yapisidir. Tercih edilen ek maytansinoidler, formül [VII] tarafindan temsil edilen bilesikleri içerir: burada Yz; temsil eder, burada R1 ve Rz'nin her biri bagimsiz olarak CH3, C2H5,1 ila 10 karbon atomuna sahip olan dogrusal alkil veya alkenil, 3 ila 10 karbon atomuna sahip olan dallanmis veya siklik alkil veya alkenil, fenil, sübstitüe edilmis fenil veya heterosiklik aromatik veya heterosikloalkil radikaldir ve burada R2 ayrica H de olabilir, burada A, B ve D'nin her biri bagimsiz olarak 3 ila 10 karbon atomuna sahip olan sikloalkil veya sikloalkenil, basit veya sübstitüe edilmis aril veya heterosiklik aromatik veya heterosikloalkil radikalidir, Csz, 1 ila 10 karbon atomuna sahip olan dogrusal alkil veya alkenil, 3 ila 10 karbon atomuna sahip olan dalli veya siklik alkil veya alkenil, fenil, sübstitüe edilmis fenil veya heterosiklik aromatik veya heterosikloalkil radikalidir, burada 1, m, n, o, p, q, r, s ve t'nin her biri bagimsiz olarak sifir veya, 1, m, n, o, p, q, r, s ve t'nin en azindan ikisinin herhangi bir zamanda sifir olmamasi sartiyla, 1'den 'e bir tamsayidir, ve burada 22 SR veya -COR'dir, burada R 1 ila 10 karbon atomuna sahip olan dogrusal alkil veya alkenil, 3 ila 10 karbon atomuna sahip olan dalli veya siklik alkil veya alkenil veya basit veya sübstitüe edilmis aril veya heterosiklik aromatik veya heterosikloalkil radikaldir. Tercih edilen formül [VII] düzenlemeleri, Ri'in H oldugu ve Rz'nin metil oldugu formül (VII) bilesiklerini içerir. Hücre baglama ajani sitotoksik ajan konjugatlari test tüpü içindeki yöntemlerle hazirlanabilir. Bir sitotoksik ajani antikora birlestirmek üzere, bir birlestirme grubu kullanilir. Uygun birlestirme gruplari teknikte iyi bilinir ve ayrilabilir olmayan bilestirme gruplarinin yani sira disülfit gruplari, asit labil gruplari, fotolabil gruplari, peptidaz labil gruplari ve esteraz labil gruplari içerir. Örnegin, hücre baglama ajani, disülfit baglari, asit labil baglari, fotolabil baglari, peptidaz labil baglari, tiyoeter baglari ve esteraz labil baglarindan olusan gruptan seçilen kimyasal baglar vasitasiyla sitotoksik ajana kimyasal olarak baglanabilir. Bulusa uygun olarak, hücre baglama ajani bir iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi vasitasiyla sitotoksik ajan ile baglanir. Burada kullanildiginda, bir "iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi", biri hücre baglama ajani ile reaksiyona girebilirken, digeri hücre baglama ajanini sitotoksik ajan ile birlestirmek üzere sitotoksik ajan ile reaksiyona girebilen, böylece bir konjugat olusturan iki reaktif gruba sahip olan bir reaktife refere Herhangi bir uygun iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi, birlestirici reaktif, gereksiz toksisite olmadan sirasiyla sitotoksik ajanin ve hücre baglama ajaninin terapötik, örnegin sitotoksisite ve hedefleme özelliklerinin tutulmasini sagladigi sürece bulus ile baglantili olarak kullanilabilir. Tercih edildigi üzere, birlestirici molekül, sitotoksik ajani kimyasal baglar [yukarida açiklandigi gibi) yoluyla hücre baglanma ajanina birlestirir, bu sekilde sitotoksik ajan ve hücre baglama ajani kimyasal olarak birbirine baglanir (örnegin, kovalent olarak baglanir). Bir düzenlemede, iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi ayrilabilir olmayan birlestiricileri içerir. Ayrilabilir olmayan bir birlestirici, bir maytansinoid, bir taksan veya bir CC-1065 analogu gibi bir sitotoksik ajani bir stabil, kovalent sekilde bir hücre baglama ajanina birlestirebilen herhangi bir kimyasal kisimdir. Bu nedenle, ayrilabilir olmayan birlestiriciler, sitotoksik ajan veya hücre baglama ajaninin aktif kaldigi kosullarda asit indüklü ayirma, isik indüklü ayirma, peptidaz indüklü ayirma, esteraz indüklü ayirma ve disülfit bag ayirmaya büyük ölçüde dirençlidir. Bir sitotoksik ajan ve hücre baglama ajani arasinda ayrilabilir olmayan birlestiriciler olusturan uygun çapraz birlestirme reaktifleri teknikte iyi bilinir. Bir düzenlemede, sitotoksik ajan bir tiyoeter bagi yoluyla hücre baglama ajanina birlestirilir. Ayrilabilir olmayan birlestiricilerin örnekleri sitotoksik ajan ile reaksiyona yönelik olarak bir maleimido veya haloasetil bazli kisma sahip olan birlestiricileri içerir. Bu tür iki fonksiyonlu çapraz birlestirme ajanlari teknikte iyi bilinir [bakiniz U.S. Patent Basvurusu ve, bunlarla sinirli olmamak üzere, N-süksinimidil 4- (maleimidometil) sikloheksankarboksilat [SMCCj, SMCC'nin bir "uzun Zincirli" analogu olan N-süksinimidil-4-[N-maleimidometil)-sikloheksan-1-karb0ksi-(6- amidokaproat] (LC-SMCC], K-maleimidoundekanoik asit N-süksinimidil ester [KMUAJ, y-maleimidobütirik asit N-süksinimidil ester (GMBS), s-maleimidokaproik asit N-hidroksisüksinimid ester (EMCS), m-maleimidobenzoil-N-hidroksisüksinimit ester (MBS), N-[cx- maleimidoasetoksi]-süksinimid ester (AMAS), süksinimidil-ö-(ß- maleimidopropionamido)heksanoat (SMPH), N-süksinimidil 4-(p-maleimidofenil]-bütirat (SMPB), ve N-(p-maleimidofenil] izosiyanati (PMPI) içerir. Bir haloasetil-bazli kisim içeren çapraz birlestirme reaktifleri N-süksinimidil-4-[iyodoasetil]-aminobenzoat [SlABj, N- süksinimidil iyodoasetat (SlA), N-süksinimil bromoasetat [SBA] ve N-süksinimil 3- (bromoasetamido) propiyonat [SBAP), bis-maleimidopolietilenglikol [BMPEO), BM maleimidovalerik asit NHS, HBVS, 4-[4-N-maleimid0fenil)-bütirik asit hidrazitHCl (MPBH), Süksinimidil-[4-vinilsülf0nil)benzoat [SVSB], ditiobis-maleimidoetan (DTME), maleimidoheksan (BMH), bis-maleimidoetan (BMOE), sülfosüksinimidil 4-[N-maleimido- metil]sikloheksan-1-karboksilat (sülfo-SMCC), sülfosüksinimil (4-i0doasetil]amin0benzoat (sülfo-SIAB], m-Maleimidobenzoil-N-hidroksisülfosüksinimid ester (sülfo-MBS], N-[y- maleimidobutiloksi]sülfosüksinimid ester (sülfo-GMBS], N-(s-maleimidokaproiloksi- sülfosüksimido ester (sülfo-EMCS], N-(K-maleimidoundekanoil0ksi)sülfosüksinimid ester (sülfo-KMUS), sülfosüksinimidil 4-(p-maleimidofenil)bütirat (sülfo-SMPB), CX1-1, sülfo- Mal ve PEGn-Mal'i içerir. Tercih edildigi üzere, iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi SMCC'dir. Bir düzenlemede, birlestirici reaktif ayrilabilir bir birlestiricidir. Uygun ayrilabilir birlestiricilerin örnekleri disülfit birlestiriciler, asit labil birlestiriciler, fotolabil birlestiriciler, peptidaz labil birlestiriciler ve esteraz labil birlestiricileri içerir. Disülfit içeren birlestiriciler, fizyolojik kosullar altinda meydana gelebilen disülfit degisimi yoluyla ayrilabilen birlestiricilerdir. Asit labil birlestiriciler, asit pH'sinda ayrilabilir birlestiricilerdir. Örnegin, endozomlar ve lizozomlar gibi bazi hücre içi bölmeler asidik bir pH'a (pH 4-5) sahiptir ve asit labil birlestiricileri ayirmak üzere uygun kosullari saglar. Foto labil birlestiriciler, vücut yüzeyinde ve isiga erisilebilir olan birçok Vücut boslugunda yararlidir. Üstelik, kizilötesi isik dokuya nüfuz edebilir. Peptidaz labil birlestiriciler, belirli peptitleri hücrelerin içinde veya disinda ayirmak üzere kullanilabilir [bakiniz, örnegin, diger bir ifadeyle sitotoksik ajanin aktivitesinin etkilenmedigi bir hücre içerisindeki kosullar altinda ayrilir. Baska düzenlemede, sitotoksik ajan disülfit bagi vasitasiyla bir hücre baglama ajanina, diger bir ifadeyle bir antikora, birlesir. Birlestirici molekül, hücre baglama ajani ile reaksiyona girebilen bir reaktif kimyasal grup içerir. Hücre baglama ajani ile reaksiyona yönelik olarak tercih edilen reaktif kimyasal gruplar, N-süksinimidil esterleri ve N- sülfosüksinimidil esterleridir. Ek olarak, birlestirici molekül, bir disülfit bag olusturmak üzere sitotoksik ajan ile reaksiyona girebilen bir reaktif kimyasal grup, tercih edildigi üzere bir ditiyopiridil grubu içerir. Hücre baglama ajaninin sitotoksik ajan ile disülfit baglari vasitasiyla birlesmesine olanak saglayan iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifleri teknikte bilinir ve örnegin N-süksinimidil 3-(2-piridilditio)pr0piy0nat (SPDP) piridildiyo]pentanoat (SPP) (bakiniz, örnegin, CAS Registry number 341498-08-6), ve N- süksinimidi1-4-(2-piridildiyo)2-sülfo bütanoat (sülfo-SPDB] (bakiniz, örnegin, U.S. Basvuru iki fonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifleri teknikte bilinir ve U.S. Patent 6,913,748, Ayrilabilir olmayan birlestiricileri olusturan bir kükürt atomunundan mahrum olan diger çapraz birlestirme reaktifleri de bulusa ait yöntemde kullanilabilir. Bu tür birlestiriciler dikarboksilik asit bazli kisimlardan türetilebilir. Uygun dikarboksilik asit bazli kisimlar, bunlarla sinirli olmamak üzere, asagidaki genel formülün (IX) ohm-dikarboksilik asitlerini Hooc-xi-Yn-zm-coou burada X 2 ila 20 karbon atomuna sahip olan bir dogrusal veya dallanmis alkil, alkenil veya alkinil grubudur, Y 3 ila 10 karbon atomu tasiyan bir sikloalkil veya sikloalkenil grubudur, Z 6 ila 10 karbon atomu tasiyan bir sübstitüe edilmis veya sübstitüe edilmemis aromatik grup veya bir sübstitüe edilmis veya sübstitüe edilmemis heterosiklik gruptur, burada hetero atom N, 0 veya S'den seçilir ve burada 1, m ve n'nin her biri, 1, m, ve n'nin tümünün ayni anda sifir olmamasi sartiyla, 0 veya 1'dir. Burada açiklanan ayrilabilir olmayan birlestiricilerin çogu, U.S. Patent Basvuru Yayini No. Asagidaki örnekler bulusu daha fazla açiklar, ancak, elbette ki, bunun kapsamini sinirlayici herhangi bir sekilde yorumlanmamasi gerekir. lnsanlastirilmis CD37-3 antikoru, mevcut basvurunun konusu olan bir adimli islemin yani sira, daha önceden açiklanan bir islem [örnegin, U.S. Patenti 5,208,020) kullanilarak heteroikifonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi SMCC ve maytansinoid DM1 ile reaksiyona sokulmustur. Daha önce açiklanan isleme yönelik olarak, huCD37-3 [15 mg/mL) ilk önce modifiye edilmis antikoru olusturmak üzere SMCC (antikorun miktarina göre 6.5 kat molar fazla) ile reaksiyona sokulmustur. Modifikasyon reaksiyonu, 90 dakika boyunca 2 mM EDTA ve gerçeklestirilmistir. Reaksiyon pH'i 4.5'e ayarlamak üzere 1 M asetat ile söndürülmüstür ve modifiye edilmis antikor 2 mM EDTA içeren 20 mM sodyum asetat [pH 4.5) içinde dengelenmis ve elüte edilmis bir Sephadex G-25F reçinesi kolonu kullanilarak saflastirilmistir. Saflastirmadan sonra, modifiye edilmis antikor (5 mg/mL) konjuge edilmis antikoru olusturmak üzere maytansinoid DM1 [antikorun miktarina göre 6.8 kat molar fazlasi; antikor üzerindeki ölçülen birlestirici miktarina göre 1.3 kat fazla) ile reaksiyona sokulmustur. Konjugasyon reaksiyonu yaklasik olarak 20 saat boyunca 2 mM EDTA ve %5 DMA içeren 20 mM sodyum asetat tamponu [pH 5.0) içinde 20 °C'de gerçeklestirilmistir. Reaksiyon karisimi daha sonra, 10 mM sodyum süksinat (pH 5.0) içinde dengelenmis ve elüte edilmis bir Sephadex G-ZSF reçinesi kolonu kullanilarak saflastirilmistir. Bulusa ait isleme yönelik olarak, huCD37-3 [2.5 mg/mL), DM1 (antikor miktarina göre 6.2 kat molar fazla) ve daha sonra SMCC (antikor miktarina göre 5.2 kat fazla) ile karistirilmistir. Reaksiyon, yaklasik olarak 4 saat boyunca 2 mM EDTA ve %10 DMA içeren 50 mM EPPS [4-(2-Hidroksietil)-1-piperazinepropansülfonik asit] tamponu [pH 8.1) içinde 20 °C'de gerçeklestirilmistir. Reaksiyon, pH'i 5.0'a ayarlamak üzere 1 M asetat ilave edilerek söndürülmüstür. Reaksiyon karisimi daha sonra yaklasik olarak 20 saat boyunca 2 - 8 °C'de tutulmustur. Tutulduktan sonra, reaksiyon karisimi, bir 0.2 um'lik PVDF filtresinden süzülmüstür ve saflastirilmistir ve Tangential Akis Filtrasyonu (TFF) kullanilarak 10 mM sodyum süksinat (pH 5.0) içerisine diyasüzülmüstür. Iki islemden türetilmis konjugat asagidaki sekilde analiz edilmistir: konsantrasyon ve sitotoksik madde yüklemesine yönelik olarak UV spektroskopisi (Antikora Maytansinoid Orani, MAR]; konjuge edilmemis birlestirici seviyesinin belirlenmesine yönelik olarak Kütle Spektrometresi; indirgenemez türlerin seviyesinin belirlenmesine yönelik olarak indirgenmis SDS PAGE elektroforezi; konjuge edilmis monomerin ve konjugat monomeri ve serbest maytansinoid salinimina göre depolamada kararliligin belirlenmesine yönelik olarak SEÇ-HPLC. Konsantrasyon ve Antikora Maytansinoid Orani (MAR), UV-VIS spektrofotometresinde 252 ve 280 nm'de konjugatin absorbansinin ölçülmesiyle ve antikorun ve DMl'in molar konsantrasyonlarini hesaplamak üzere iki dalga boyunda DM1 ve antikorun molar sönme katsayilari kullanilarak belirlenmistir. Konjugatlarin konjuge edilmemis birlestirici seviyesi kütle spektrometrisi ile analiz edilmistir: ayri konjugat türlerinin pik alanlari [konjuge edilmemis birlestiricileri içeren veya içermeyen konjugatlar dahil olmak üzere) ölçülmüstür; konjuge edilmemis birlestirici seviyesi, konjuge edilmemis birlestiricileri içeren alanlarin toplaminin (birlestiricilerin sayisiyla agirliklandirilmistir] tüm konjugat türlerin alanlarinin toplamina (ayni zamanda birlestiricilerin sayisiyla agirliklandirilmistir) orani ile hesaplanmistir. Konjugatlarin indirgenemeyen türlerinin seviyesi, indirgenmis SDS jel elektroforezi ile analiz edilmistir: ayri indirgenmis konjugat türlerin pik alanlari [indirgenmis hafif zincir, indirgenmis agir zincir, çapraz birlesik hafif-hafif zincirler, çapraz birlesik hafif-agir zincirler, vb. dahil olmak üzere] ölçülmüstür; indirgenemeyen türlerin seviyesi indirgenemeyen türlerin alanlarinin toplaminin tüm türlerin alanlarinin toplamina orani ile hesaplanmistir. Konjugatlarin monomer seviyesi, boyut dislama HPLC ile analiz edilmistir: monomer, dimer, agregatlar ve düsük molekül agirlikli türlerin pik alanlari, 252 nm veya 280 nm'lik bir dalga boyuna ayarlanmis bir absorbans detektörü kullanilarak ölçülmüstür; monomer seviyesi monomer alaninin toplam alana orani ile hesaplanmistir. Konjugatta mevcut olan serbest maytansinoid miktari, çift kolon (HiSep ve C18 kolonlari] HPLC ile analiz edilmistir: toplam serbest maytansinoid türlerinin pik alanlari (gradyanda elüte edilmistir ve elüsyon süresinin bilinen standartlar ile karsilastirilmasiyla tanimlanmistir) 252 nm'lik bir dalga boyuna ayarlanmis bir absorbans dedektörü kullanilarak ölçülmüstür; serbest maytansinoidin miktari bilinen standartlarin miktardaki pik alanlari tarafindan olusturulmus bir standart egri kullanilarak hesaplanmistir. Asagidaki Tablo 1'de gösterildigi gibi, bulusa ait islem kullanilarak üretilen konjugat, konjuge edilmemis birlestirici, indirgenemeyen türler ve konjugat monomerine göre daha önceden açiklanan islem kullanilarak üretilmis olandan üstün olmustur. Ek olarak, bulusa ait islemle yapilan konjugatin stabilitesi, 4 °C'de bes ay boyunca depolamadan sonra serbest maytansinoid salimina göre önemli ölçüde üstün olmustur. Her iki islem tarafindan yapilan konjugatlarin monomer seviyeleri stabil olmustur. Tablo 1. Bulusa ait islemle imal edilen CD37-3 konjugatinin temel özelliklerinin önceki islemlere kiyasla karsilastirilmasi Önceki Islem Bulusa Ait Islem Konjugat konsantrasyonu 3.9 8.1 Antikora Maytansinoid orani 4.1 3.4 Konjuge edilmemis Birlestirici (%] 12 < 1 indirgenemeyen türler [%] 9.4 0.9 Konjugat monomeri, [%] (t=0) 97.8 98.9 Konjugat monomeri, (%J (4°C'de 5 aydan sonra] 97.8 98.4 Serbest Maytansinoid, [%] [t=0) 0.4 0.2 Serbest Maytansinoid, (%] (4°C'de 5 aydan sonra] 3.3 0.5 Bu örnekte yansitilan deneylerin sonuçlari, büyük ölçüde yüksek saflikta olan hücre baglama ajani-sitotoksik ajan konjugatlarinin hazirlanmasina yönelik olarak iyilestirilmis bir islemi gösterir. Bulusa ait islemin kullanilmasindan dolayi konjugat safligi ve stabilitesindeki gelismelere ek olarak, iki islem adiminin [modifikasyon reaksiyonu ve modifiye edilmis antikorun saflastirilmasi) ortadan kaldirilmasi nedeniyle isleme süresi ve uygunlugunda da iyilesmeler mevcuttur. Insanlastirilmis Folat Reseptör antikoru huM0v19 (bakiniz, U.S. Uygulama Yayini önceden açiklanan islem kullanilarak heteroikifonksiyonlu çapraz birlestirme reaktifi sülfo-SPDB ve maytansinoid DM4 ile reaksiyona sokulmustur. Daha önce açiklanan Islem A'ya (iki adimli islem, örnegin Chari et al., US 5,208,020) yönelik olarak, huM0v19 antikoru (20 mg/mL) ilk önce modifiye edilmis antikoru olusturmak üzere sülfo-SPDB [DMA, dimetilasetamit içinde çözülmüs antikorun miktarina göre 5.7 kat molar fazla) ile reaksiyona sokulmustur. Modifikasyon reaksiyonu, 180 dakika boyunca %5 DMA içeren 50 mM EPPS (4-(2-hidroksietil]piperazin-1-propanesülf0nik asit) tamponu [pH 8.1) içinde 20 °C'de gerçeklestirilmistir. Modifiye edilmis antikor 2 mM EDTA (Etilenediaminetetraasetik asit) içeren 50 mM EPPS (pH 8.1) içinde dengelenmis ve elüte edilmis bir Sephadex G-25F reçinesi kolonu kullanilarak saflastirilmistir. Saflastirmadan sonra, modifiye edilmis antikor [5.0 mg/mL) konjuge edilmis antikoru olusturmak üzere maytansinoid DM4 (antikorun miktarina göre 9.7 kat molar fazla; antikor üzerindeki ölçülen birlestirici miktarina göre 1.7 kat fazla) ile reaksiyona sokulmustur. Konjugasyon reaksiyonu yaklasik olarak 18 saat boyunca 2 mM EDTA ve %5 DMA içeren 50 mM sodyum EPPS [pH 8.1) içinde oda sicakliginda gerçeklestirilmistir. Reaksiyon karisimi daha sonra, 10 mM sodyum süksinat (pH 5.0) içinde dengelenmis ve elüte edilmis bir Sephadex G-25F reçinesi kolonu kullanilarak saflastirilmistir. Daha önceden açiklanan Islem B'ye [tek kap islemi, Dai et al., U.S. Patent 7,811,572) yönelik olarak, huMOV19 antikoru (10 mg/mL) ilk önce modifiye edilmis antikoru olusturmak üzere sülfo-SPDB (DMA'da çözülmüs antikorun miktarina göre 4.9 kat molar fazla) ile reaksiyona sokulmustur. Modifikasyon reaksiyonu 60 dakika boyunca 2 mM EDTA ve %10 DMA içeren 50 mM EPPS tamponu [pH 7.5) içinde 20 °C'de gerçeklestirilmistir. Modifiye edilmis antikor, konjugasyon reaksiyonundan önce saflastirilmamistir. Bunun yerine, saflastirilmamis modifiye edilmis antikor, konjuge edilmis antikoru olusturmak üzere maytansinoid DM4 (DMA'da çözünmüs, antikor miktarina göre 8.3 kat molar fazla) ile 10 mg/mL'de reaksiyona sokulmustur. Konjugasyon reaksiyonu, yaklasik olarak 18 saat boyunca 2 mM EDTA ve yaklasik %10 DMA içeren 50 mM EPPS tamponu (pH 7.5) içinde oda sicakliginda gerçeklestirilmistir. Reaksiyon karisimi daha sonra 10 mM sodyum süksinat [pH 5.0) içinde dengelenmis ve elüte edilmis bir Sephadex G-ZSF reçinesi kolonu kullanilarak saflastirilmistir. Konjugati saflastirmak üzere Sephadex G-25'in kullanildigi [Islem C, bir adimli islem) bulusa ait isleme yönelik olarak, huM0v19 antikoru (6.0 mg/mL), DM4 [DMA içinde çözülmüs antikor miktarina göre 9.7 kat molar fazla) ile karistirilmistir ve daha sonra sülfo-SPDB (DMA içinde çözünmüs, antikor miktarina göre 5.7 kat fazla) ilave edilmistir. Reaksiyon yaklasik olarak 20 saat boyunca 2 mM EDTA ve %10 DMA içeren 50 mM EPPS tamponu (pH 8.1) içinde 20 °C'de gerçeklestirilmistir. Reaksiyon karisimi daha sonra 10 mM sodyum süksinat [pl-l 5.0) içinde dengelenmis ve elüte edilmis bir Sephadex G-25F reçinesi kolonu kullanilarak saflastirilmistir. Konjugati saflastirmak üzere tegetsel akis filtrasyonunun (TFF) (Islem D, bir adimli islem] kullanildigi bulusa ait isleme yönelik olarak, huMov19 antikoru [5.0 mg/mL), DM4 (DMA'da çözünmüs, antikorun miktarina göre 10.2 kat molar fazla] ile ve daha sonra sülfo- SPDB ile (DMA'da çözünmüs, antikorun miktarina göre 6.0 kat fazla] karistirilmistir. Reaksiyon yaklasik olarak 20 saat boyunca 2 mM EDTA ve %10 DMA içeren 50 mM EPPS tamponu (pH 8.5] içinde 20 °C'de gerçeklestirilmistir. Reaksiyon karisimi daha sonra saflastinlmistir ve bir TFF kullanilarak 10 mM sodyum süksinat [pH 5.0) içine diyafiltrelenmistir. Farkli islemlerden türetilen konjugat asagidaki sekilde analiz edilmistir: UV spektroskopisi (konsantrasyon ve antikora maytansinoid oranina yönelik olarak, MAR); Serbest Maytansinoidin belirlenmesine yönelik olarak ters fazli HPLC; konjuge edilmemis birlestirici seviyesi ve kütle dagilim profilinin belirlenmesine yönelik olarak Kütle Spektrometresi; indirgenemeyen türlerin seviyesinin belirlenmesine yönelik olarak indirgenmis SDS PAGE elektroforezi; parçalanma seviyesinin belirlenmesine yönelik olarak indirgenmemis SDS PAGE elektroforezi; konjugat monomerin belirlenmesine yönelik olarak SEÇ-HPLC. Depolamada stabilite, konjugat monomeri ve serbest maytansinoid salimina göre degerlendirilmistir. Analitik metodolojiler hakkindaki ilave detaylar Örnek 1'de saglanir. Asagidaki Tablo 2'de gösterildigi gibi, bulusa ait islem kullanilarak üretilen konjugat, monomere göre daha önceden açiklanan islemler kullanilarak üretilenden üstün olmustur. Konjugatin nihai saflastirmasinin, sirasiyla, Sephadex G-25, Islemler B ve C kullanilarak gerçeklestirildigi, tek kapli ve bir adimli islemler kullanilarak imal edilen konjugat, iki adimli islem olan Islem A kullanarak imal edilen konjugattan daha yüksek bir serbest maytansinoid seviyesine sahipti. Bununla birlikte, farkli bir nihai saflastirma islemi olan TFF kullanildiginda (Islem D), serbest maytansinoidin seviyesi, hem ilk saflastirma isleminden sonra hem de alti hafta boyunca 4 °C'de depolamadan sonra oldukça düsük ve iki adimli islem ile görülene kiyaslanabilir olmustur. Diger önemli konjugat niteliklerine (örnegin parçalama, indirgenemeyen türler, kütle dagilim profili ve konjuge edilmemis birlestirici) göre, bulusa ait islem kullanilarak imal edilen konjugat daha önceden açiklanan islemler tarafindan imal edilenle özdes olmustur. Tablo 2. Bulusa ait islemle imal edilen huM0v19 konjugatinin temel özelliklerinin önceki islemlere kiyasla karsilastirilmasi Ünite Operasyonlarinin Sayisi 5 4 3 3 Konsantrasyon (mg/mL) 1.0 1.0 1.0 4.2 Konjugat Monomeri, (%) t = 6 hafta, 4°C'de Serbest Maytansinoid, (%) t = 0'da 0.6 6.3 3.1 0.1 Indirgenmeyen jel çipi ile parçalama (%) 10 14 14 12 Indirgeyici jel çipi ile indirgenemeyen türler (%) 0.7 0.8 0.7 0.5 Kütle Dagitim Profili (MDF) Karsilastirilabilir Konjuge Edilmemis Birlestirici (MDF) Algilanamaz *Sephadex G-25 ile saflastirilmistir ** TFF kullanilarak saflastirilmistir Bu örnekte yansitilan deneylerin sonuçlari, büyük ölçüde yüksek saflikta olan hücre baglama ajani-sitotoksik ajan konjugatlarinin hazirlanmasina yönelik olarak iyilestirilmis bir islemi gösterir. Bulusa ait islemin kullanilmasindan dolayi konjugat safligi ve stabilitesindeki gelismelere ek olarak, iki islem adiminin [modifikasyon reaksiyonu ve modifiye edilmis antikorun saflastirilmasi) ortadan kaldirilmasi nedeniyle isleme süresi ve uygunlugunda da iyilesmeler mevcuttur. Bu örnek, burada açiklanan bir adimli islemin, çesitli birlestiririciler ve maytansinoid sitotoksik ajanlari ile baslayan konjugatlari yapmak üzere kullanilabilecegini gösterir. Insanlastirilmis huN901 antikoru, Maytansinoid [DM1 veya DM4) ve daha sonra Birlestirici (Sülfo-SMCC, SMCC, SPDB veya SPP) ile karistirilmistir. Reaksiyon, yaklasik olarak 20-24 saat boyunca 2 mM EDTA ve %10 DMA içeren 50 mM fosfat tamponu [pH 7.5) içinde 20 °C`de gerçeklestirilmistir. Reaksiyon karisimi daha sonra 10 mM sodyum süksinat (pH 5.0) içinde dengelenmis ve elüte edilmis bir Sephadex G25F reçinesi kolonu kullanilarak saflastirilmistir. Asagidaki Tablo 3'te gösterildigi gibi, bir adimli reaksiyon farkli birlestirici ve maytansinoid kombinasyonlari üzerinde gerçeklestirilebilir ve iyi MAR ve monomer seviyelerine sahip konjugat verir. Tablo 3. Farkli birlestirici ve maytansinoid kombinasyonlari kullanarak koniugat yapimi Birlestirici DMx Konjugat MAR Konjugat Monomeri(%) lkiadimli SPP DM1 3.5 96.8 Biradimli Bulusun açiklanmasi baglaminda (özellikle asagidaki istemlerin baglaminda] "bir" ve "bir" ve "bir" terimlerinin ve benzer referanslarin kullanimi, burada aksi belirtilmedigi veya baglam tarafindan açikça çeliskilendirilmedigi sürece, hem tekil hem de çogullari kapsayacak sekilde anlasilir. "Içeren", "sahip olan", "dahil olmak üzere" ve "içeren" terimlerinin, aksi not edilmedigi sürece, açik uçlu terimler (diger bir ifadeyle, "dahil olmak üzere, ancak bunlarla sinirli olmamak üzere" anlamina gelir] olarak anlasilir. Buradaki deger araliklarinin okunmasinin yalnizca, burada aksi belirtilmedigi sürece, araliga düsen her bir ayri degere ayri ayri refere edilmesinin kisa bir yöntemi olarak kullanilmasi tasarlanir ve her bir ayri deger burada spesifikasyona ayri ayri okunmus gibi dahil edilir. Burada açiklanan tüm yöntemler, burada aksi belirtilmedigi veya aksi baglam tarafindan açikça çeliskilendirilmedigi sürece herhangi bir uygun sirada gerçeklestirilebilir. Burada saglanan örneklerin herhangi birinin veya tümünün veya örnekleyici dilin [örnegin, "gibi"] kullaniminin yalnizda bulusu daha iyi aydinlatmasi tasarlanir ve aksi talep edilmedigi sürece bulusun kapsami üzerinde bir sinirlama teskil etmez. Tarifnamedeki hiçbir dil, talep edilmeyen herhangi bir elemani bulusun pratigine yönelik esas olarak belirttigi seklinde yorumlanmamalidir. Bu bulusun tercih edilen düzenlemeri, bulusun yürütülmesine yönelik olarak bulusçular tarafindan bilinen en iyi mod dahil olmak üzere, burada açiklanir. Bu tercih edilen düzenlemelerin varyasyonlari, yukaridaki açiklamanin okunmasi üzerine teknikte uzman olanlarca anlasilabilir. Bulusçular yetenekli zanaatkarlarin bu tür varyasyonlari uygun oldugu sekilde kullanmalarini bekler ve bulusçular bulusun burada spesifik olarak açiklanandan baska bir sekilde uygulanmasini tasarlar. Buna göre, bu bulus yürürlükteki yasalarin izin verdigi sekilde buraya eklenen istemlerde okunan ana fikrin tüm modifikasyonlarini ve esdegerlerini içerir. Dahasi, yukarida açiklanan elemanlarin bunun bütün olasi varyasyonlarindaki herhangi bir kombinasyonu, burada aksi belirtilmedigi veya aksi baglam tarafindan açikça çeliskilendirilmedigi sürece bulus tarafindan kapsanir. TR TR TR TR TR TR TR TR TR
TR2019/02180T 2011-03-29 2012-03-29 Tek adimli bi̇r i̇şlem i̇le maytansi̇noi̇d anti̇kor konjugatlarinin hazirlanmasi TR201902180T4 (tr)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161468997P 2011-03-29 2011-03-29

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TR201902180T4 true TR201902180T4 (tr) 2019-03-21

Family

ID=46928080

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TR2019/02180T TR201902180T4 (tr) 2011-03-29 2012-03-29 Tek adimli bi̇r i̇şlem i̇le maytansi̇noi̇d anti̇kor konjugatlarinin hazirlanmasi

Country Status (26)

Country Link
US (7) US8795673B2 (tr)
EP (2) EP3545977A1 (tr)
JP (5) JP6000329B2 (tr)
KR (6) KR102351886B1 (tr)
CN (2) CN107537040A (tr)
AU (5) AU2012236398B2 (tr)
CA (1) CA2831467C (tr)
CY (1) CY1121321T1 (tr)
DK (1) DK2691155T3 (tr)
EA (2) EA201991268A3 (tr)
ES (1) ES2709577T3 (tr)
HR (1) HRP20190243T1 (tr)
HU (1) HUE041384T2 (tr)
IL (3) IL228559A (tr)
LT (1) LT2691155T (tr)
ME (1) ME03353B (tr)
MX (2) MX369659B (tr)
NZ (1) NZ726386A (tr)
PL (1) PL2691155T3 (tr)
PT (1) PT2691155T (tr)
RS (1) RS58367B1 (tr)
SI (1) SI2691155T1 (tr)
SM (1) SMT201900114T1 (tr)
TR (1) TR201902180T4 (tr)
UA (1) UA116524C2 (tr)
ZA (1) ZA201605918B (tr)

Families Citing this family (54)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5149620B2 (ja) 2004-07-23 2013-02-20 エンドサイト，インコーポレイテッド ２価リンカーおよびその結合体
US20110166319A1 (en) * 2005-02-11 2011-07-07 Immunogen, Inc. Process for preparing purified drug conjugates
EP3539572A1 (en) 2005-08-24 2019-09-18 ImmunoGen, Inc. Process for preparing maytansinoid antibody conjugates
CN104127878A (zh) 2007-03-14 2014-11-05 恩多塞特公司 结合配体连接的微管溶素递药缀合物
BRPI0812970A2 (pt) 2007-06-25 2019-09-24 Endocyte Inc conjugados contendo espaçadores hidrofílicos
US9877965B2 (en) 2007-06-25 2018-01-30 Endocyte, Inc. Vitamin receptor drug delivery conjugates for treating inflammation
BRPI1010620B8 (pt) 2009-06-03 2021-05-25 Immunogen Inc métodos de conjugação
CN103037900B (zh) 2010-02-24 2016-04-06 伊缪诺金公司 叶酸受体1抗体与免疫缀合物以及其用途
SG183542A1 (en) 2010-03-12 2012-10-30 Immunogen Inc Cd37-binding molecules and immunoconjugates thereof
RS58367B1 (sr) 2011-03-29 2019-03-29 Immunogen Inc Priprema konjugata antitela i majtanzinoida jednostepenim postupkom
IL281714B2 (en) * 2011-04-01 2023-11-01 Immunogen Inc Methods for increasing the effectiveness of FOLR1 cancer therapy
US10080805B2 (en) 2012-02-24 2018-09-25 Purdue Research Foundation Cholecystokinin B receptor targeting for imaging and therapy
US20140080175A1 (en) 2012-03-29 2014-03-20 Endocyte, Inc. Processes for preparing tubulysin derivatives and conjugates thereof
HUE049693T2 (hu) 2012-08-31 2020-10-28 Immunogen Inc Diagnosztikai ASSAY-k és készletek a folát receptor 1 kimutatására
WO2014055842A1 (en) * 2012-10-04 2014-04-10 Immunogen, Inc. Process for preparing stable antibody maytansinoid conjugates
MX2015004258A (es) * 2012-10-04 2015-09-25 Immunogen Inc Uso de una membrana de intercambio iónico para retirar impurezas de conjugados de agentes de unión celular y agentes.
WO2014055877A1 (en) 2012-10-04 2014-04-10 Immunogen, Inc. Use of a pvdf membrane to purify cell-binding agent cytotoxic agent conjugates
EP2908818A4 (en) 2012-10-16 2016-07-13 Endocyte Inc CONJUGATES OF DRUG DELIVERY CONTAINING ARTIFICIAL AMINO ACIDS AND METHODS OF USE
US8769557B1 (en) 2012-12-27 2014-07-01 The Nielsen Company (Us), Llc Methods and apparatus to determine engagement levels of audience members
WO2014134486A2 (en) 2013-02-28 2014-09-04 Immunogen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
JP6494533B2 (ja) 2013-02-28 2019-04-03 イミュノジェン・インコーポレーテッド 細胞結合剤及び細胞毒性剤としてのマイタンシノイドを含む複合体
US9498532B2 (en) 2013-03-13 2016-11-22 Novartis Ag Antibody drug conjugates
NZ710929A (en) 2013-03-15 2018-02-23 Novartis Ag Antibody drug conjugates
WO2014194030A2 (en) 2013-05-31 2014-12-04 Immunogen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
AU2014312086B2 (en) 2013-08-30 2020-03-12 Immunogen, Inc. Antibodies and assays for detection of folate receptor 1
TWI541022B (zh) * 2013-12-18 2016-07-11 應克隆公司 針對纖維母細胞生長因子受體－３（ｆｇｆｒ３）之化合物及治療方法
AU2015229591B2 (en) * 2014-03-11 2020-10-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-EGFRvlll antibodies and uses thereof
EP3160513B1 (en) 2014-06-30 2020-02-12 Glykos Finland Oy Saccharide derivative of a toxic payload and antibody conjugates thereof
KR20170040249A (ko) 2014-08-12 2017-04-12 노파르티스 아게 항-cdh6 항체 약물 접합체
WO2016065456A1 (en) * 2014-10-31 2016-05-06 Formation Biologics Inc. Egfr antibody-based combination therapy
CN106267225B (zh) * 2015-05-29 2020-03-06 上海新理念生物医药科技有限公司 三马来酰亚胺型连接子及其应用
TW201711702A (zh) 2015-06-04 2017-04-01 應克隆公司 使用針對纖維母細胞生長因子受體３（ｆｇｆｒ３）之化合物的療法
SG10202108116SA (en) 2015-06-08 2021-08-30 Debiopharm International S A Anti-cd37 immunoconjugate and anti-cd20 antibody combinations
EP3310813A1 (en) 2015-06-17 2018-04-25 Novartis AG Antibody drug conjugates
US11104740B2 (en) 2015-08-28 2021-08-31 Debiopharm International, S.A. Antibodies and assays for detection of CD37
AU2016323968B2 (en) 2015-09-17 2023-07-06 Immunogen, Inc. Therapeutic combinations comprising anti-FOLR1 immunoconjugates
PT3380525T (pt) 2015-11-25 2024-02-05 Immunogen Inc Formulações farmacêuticas e métodos que as utilizam
SG11201806478PA (en) * 2016-02-05 2018-08-30 Immunogen Inc Efficient process for preparing cell-binding agent-cytotoxic agent conjugates
CN108421048B (zh) * 2016-09-28 2021-04-20 首都医科大学附属北京世纪坛医院 纳米活性碳靶向药物递送系统、制备方法及其用途
US11278629B2 (en) 2016-11-02 2022-03-22 Debiopharm International, S.A. Methods for improving anti-CD37 immunoconjugate therapy
US10864279B2 (en) 2016-12-16 2020-12-15 Industrial Technology Research Institute Linker-drug and antibody-drug conjugate (ADC) employing the same
JOP20190187A1 (ar) 2017-02-03 2019-08-01 Novartis Ag مترافقات عقار جسم مضاد لـ ccr7
KR20250171447A (ko) * 2017-02-28 2025-12-08 이뮤노젠 아이엔씨 자기희생적 펩티드 링커 및 이들의 접합체를 갖는 메이탄시노이드 유도체
WO2018185618A1 (en) 2017-04-03 2018-10-11 Novartis Ag Anti-cdh6 antibody drug conjugates and anti-gitr antibody combinations and methods of treatment
CN111867621A (zh) * 2018-01-18 2020-10-30 美真达治疗公司 用于耗尽cd134+细胞的组合物和方法
EP3552631A1 (en) 2018-04-10 2019-10-16 Inatherys Antibody-drug conjugates and their uses for the treatment of cancer
US12144818B2 (en) 2018-05-30 2024-11-19 Debiopharm International, S.A. Method for treating cancer in a human patient by administering an anti-CD37 immunoconjugate using various dosing regimens
CN111620927B (zh) * 2019-05-20 2022-11-11 烟台迈百瑞国际生物医药股份有限公司 一种抗体药物偶联物中间体的一锅法制备工艺
US20220257766A1 (en) * 2019-06-25 2022-08-18 Tva (Abc), Llc Sstr-targeted conjugates and formulations thereof
CN114341162B (zh) 2019-07-10 2025-10-17 赛博克萨2公司 作为治疗剂的细胞毒素的肽缀合物
TW202116356A (zh) 2019-07-10 2021-05-01 美商斯布雷克薩三號公司 作為治療劑之微管靶向藥劑之肽結合物
US20230181756A1 (en) 2020-04-30 2023-06-15 Novartis Ag Ccr7 antibody drug conjugates for treating cancer
AU2022441090A1 (en) 2022-02-17 2024-08-22 Novelty Nobility Inc. Antibody-drug conjugate.
AU2024292473A1 (en) 2023-07-19 2026-01-29 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of cancer patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies in combination with trop-2 targeting adc

Family Cites Families (166)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US1043543A (en) 1912-02-15 1912-11-05 Robert H Shaw Poultry-house door.
SE430062B (sv) 1977-03-04 1983-10-17 Pharmacia Fine Chemicals Ab Kopplings- eller tioleringsreagens
US4137230A (en) * 1977-11-14 1979-01-30 Takeda Chemical Industries, Ltd. Method for the production of maytansinoids
US4307016A (en) 1978-03-24 1981-12-22 Takeda Chemical Industries, Ltd. Demethyl maytansinoids
US4256746A (en) 1978-11-14 1981-03-17 Takeda Chemical Industries Dechloromaytansinoids, their pharmaceutical compositions and method of use
JPS55102583A (en) 1979-01-31 1980-08-05 Takeda Chem Ind Ltd 20-acyloxy-20-demethylmaytansinoid compound
JPS55162791A (en) 1979-06-05 1980-12-18 Takeda Chem Ind Ltd Antibiotic c-15003pnd and its preparation
JPS5645483A (en) 1979-09-19 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd C-15003phm and its preparation
JPS5645485A (en) 1979-09-21 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd Production of c-15003pnd
EP0028683A1 (en) 1979-09-21 1981-05-20 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibiotic C-15003 PHO and production thereof
WO1982001188A1 (en) 1980-10-08 1982-04-15 Takeda Chemical Industries Ltd 4,5-deoxymaytansinoide compounds and process for preparing same
US4450254A (en) 1980-11-03 1984-05-22 Standard Oil Company Impact improvement of high nitrile resins
US4313946A (en) 1981-01-27 1982-02-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Chemotherapeutically active maytansinoids from Trewia nudiflora
US4315929A (en) 1981-01-27 1982-02-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Method of controlling the European corn borer with trewiasine
US4563304A (en) 1981-02-27 1986-01-07 Pharmacia Fine Chemicals Ab Pyridine compounds modifying proteins, polypeptides or polysaccharides
JPS57192389A (en) 1981-05-20 1982-11-26 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid
US4664911A (en) 1983-06-21 1987-05-12 Board Of Regents, University Of Texas System Immunotoxin conjugates employing toxin B chain moieties
EP0192009B1 (fr) 1985-01-22 1991-09-04 Saint-Gobain Vitrage International Procédé de prèparation d'un poudre à base de formiate d'indium pour la formation d'une couche mince sur un substrat, notamment en verre.
GB8600582D0 (en) 1986-01-10 1986-02-19 Ca Minister Nat Defence Purifying biological materials
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US4859449A (en) 1987-09-14 1989-08-22 Center For Molecular Medicine And Immunology Modified antibodies for enhanced hepatocyte clearance
US5241078A (en) 1988-06-14 1993-08-31 Cetus Oncology Coupling agents and sterically hindered disulfide linked conjugates prepared therefrom
US5024834A (en) 1988-07-12 1991-06-18 Cetus Corporation Thioether linked immunotoxin conjugates
CA2006408A1 (en) 1988-12-27 1990-06-27 Susumu Iwasa Bispecific monoclonal antibody, its production and use
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5714149A (en) 1989-02-10 1998-02-03 Celltech Therapeutics Limited Crosslinked antibodies and processes for their preparation
CA2026147C (en) 1989-10-25 2006-02-07 Ravi J. Chari Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US6316003B1 (en) 1989-12-21 2001-11-13 Whitehead Institute For Biomedical Research Tat-derived transport polypeptides
US5137877B1 (en) 1990-05-14 1996-01-30 Bristol Myers Squibb Co Bifunctional linking compounds conjugates and methods for their production
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
ATE300615T1 (de) 1990-08-29 2005-08-15 Genpharm Int Transgene mäuse fähig zur produktion heterologer antikörper
CA2048078A1 (en) * 1990-11-15 1992-05-16 Wolfgang A. Wrasidlo Chemical modification of antibodies for creation of immunoconjugates
US5252714A (en) * 1990-11-28 1993-10-12 The University Of Alabama In Huntsville Preparation and use of polyethylene glycol propionaldehyde
SE9102074D0 (sv) 1991-07-03 1991-07-03 Kabi Pharmacia Ab Tomour antigen specific antibody
SE470006B (sv) * 1991-09-26 1993-10-25 Corline Systems Ab Nytt konjugat, dess framställning och användning samt substrat preparerat med konjugatet
ES2341666T3 (es) 1991-12-02 2010-06-24 Medimmune Limited Produccion de autoanticuerpos de repertorios de segmentos de anticue rpos expresados en la superficie de fagos.
ES2149768T3 (es) 1992-03-25 2000-11-16 Immunogen Inc Conjugados de agentes enlazantes de celulas derivados de cc-1065.
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
US5556623A (en) * 1993-03-30 1996-09-17 Eli Lilly And Company Antibody-drug conjugates
IL111748A0 (en) 1993-12-03 1995-01-24 Zeneca Ltd Proteins
US5580853A (en) 1994-03-22 1996-12-03 New England Deaconess Hospital Modified polypeptides with increased biological activity
US5919758A (en) 1994-03-22 1999-07-06 Beth Israel Deaconess Medical Center Modified polypeptides with altered biological activity
US5747446A (en) 1994-03-22 1998-05-05 Beth Israel Deaconess Medical Center Modified polypeptides with increased biological activity
US5612474A (en) 1994-06-30 1997-03-18 Eli Lilly And Company Acid labile immunoconjugate intermediates
WO1996039183A1 (en) * 1995-05-31 1996-12-12 Fred Hutchinson Cancer Research Center Compositions and methods for targeted delivery of effector molecules
US6265150B1 (en) 1995-06-07 2001-07-24 Becton Dickinson & Company Phage antibodies
US5714352A (en) 1996-03-20 1998-02-03 Xenotech Incorporated Directed switch-mediated DNA recombination
US5958872A (en) 1996-04-01 1999-09-28 Apoptosis Technology, Inc. Active survival domains of IGF-IR and methods of use
WO1998026747A2 (en) 1996-12-17 1998-06-25 Terman David S Superantigen based methods and compositions for treatment of diseases
US6462070B1 (en) * 1997-03-06 2002-10-08 The General Hospital Corporation Photosensitizer conjugates for pathogen targeting
US6371975B2 (en) * 1998-11-06 2002-04-16 Neomend, Inc. Compositions, systems, and methods for creating in situ, chemically cross-linked, mechanical barriers
AU736707B2 (en) * 1997-06-11 2001-08-02 Anaphore, Inc. Trimerising module
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
US5958677A (en) 1997-07-28 1999-09-28 The New York Blood Center, Inc. Method for purifying viral nucleic acids
CA2297070A1 (en) 1997-08-01 1999-02-11 Morphosys Ag Novel method and phage for the identification of nucleic acid sequences encoding members of a multimeric (poly)peptide complex
US5965714A (en) 1997-10-02 1999-10-12 Connaught Laboratories, Inc. Method for the covalent attachment of polysaccharides to protein molecules
ES2245805T3 (es) * 1997-10-03 2006-01-16 Galenica Pharmaceuticals, Inc. Polisacaridos que forman iminas, preparacion de los mismos y el uso de los mismos como adyuvantes de inmunoestimulantes.
US6121236A (en) * 1998-03-24 2000-09-19 The Children's Medical Center Corporation Multivalent ligands which modulate angiogenesis
CA2329897A1 (en) * 1998-04-28 1999-11-04 Galenica Pharmaceuticals, Inc. Polysaccharide-antigen conjugates
US5981564A (en) * 1998-07-01 1999-11-09 Universite Laval Water-soluble derivatives of paclitaxel, method for producing same and uses thereof
US7067109B1 (en) 1998-07-13 2006-06-27 Board Of Regents, The University Of Texas System Cancer treatment kits comprising therapeutic conjugates that bind to aminophospholipids
TW593241B (en) 1999-04-20 2004-06-21 Hoffmann La Roche Carbamic acid derivatives
AUPQ014799A0 (en) * 1999-05-04 1999-05-27 Access Pharmaceuticals Australia Pty Limited Amplification of folate-mediated targeting to tumor cells using polymers
AU775373B2 (en) 1999-10-01 2004-07-29 Immunogen, Inc. Compositions and methods for treating cancer using immunoconjugates and chemotherapeutic agents
ES2276708T3 (es) 1999-11-24 2007-07-01 Immunogen, Inc. Agentes citotoxicos que comprenden taxanos y su uso terapeutico.
ATE344801T1 (de) 1999-12-29 2006-11-15 Immunogen Inc Doxorubicin- und daunorubicin-enthaltende, zytotoxische mittel und deren therapeutische anwendung
WO2001058479A1 (en) 2000-02-08 2001-08-16 The Penn State Research Foundation Immunotherapy using interleukin 13 receptor subunit alpha 2
US7097840B2 (en) * 2000-03-16 2006-08-29 Genentech, Inc. Methods of treatment using anti-ErbB antibody-maytansinoid conjugates
US6632979B2 (en) 2000-03-16 2003-10-14 Genentech, Inc. Rodent HER2 tumor model
US6596503B1 (en) 2000-08-18 2003-07-22 East Carolina University Monoclonal antibody DS6, tumor-associated antigen CA6, and methods of use thereof
US6333410B1 (en) 2000-08-18 2001-12-25 Immunogen, Inc. Process for the preparation and purification of thiol-containing maytansinoids
US20060062786A1 (en) 2000-11-08 2006-03-23 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies that immunospecifically bind to TRAIL receptors
BRPI0116728B1 (pt) 2001-01-05 2018-10-30 Pfizer Inc. anticorpos para receptor de fator de crescimento i semelhante à insulina
BR0206985A (pt) 2001-01-29 2005-04-19 Idec Pharma Corp Anticorpos modificados e métodos de uso
WO2002098885A1 (en) * 2001-02-07 2002-12-12 Beth Israel Deaconess Medical Center Modified psma ligands and uses related thereto
US20030003048A1 (en) 2001-04-26 2003-01-02 Chun Li Diagnostic imaging compositions, their methods of synthesis and use
EP1392361A4 (en) 2001-05-11 2009-08-05 Univ Texas ANTI-CD26 MONOCLONAL ANTIBODIES FOR THE TREATMENT OF DISEASES ASSOCIATED WITH CD26 EXPRESSIVE CELLS
EP1258255A1 (en) 2001-05-18 2002-11-20 Boehringer Ingelheim International GmbH Conjugates of an antibody to CD44 and a maytansinoid
US6441163B1 (en) 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
EP2277542B1 (en) 2001-06-01 2014-04-16 Cornell Research Foundation Inc. Modified antibodies to prostrate-specific membrane antigen and uses thereof
US6576802B2 (en) 2001-06-04 2003-06-10 Shell Oil Company One-step production of 1, 3-propanediol from ethylene oxide and syngas with a catalyst with a phospholanoalkane ligand
JP2005532415A (ja) 2001-12-11 2005-10-27 メルク　エンド　カムパニー　インコーポレーテッド スタフィロコッカス・アウレウスエキソポリサッカライド及び方法
US6716821B2 (en) 2001-12-21 2004-04-06 Immunogen Inc. Cytotoxic agents bearing a reactive polyethylene glycol moiety, cytotoxic conjugates comprising polyethylene glycol linking groups, and methods of making and using the same
AU2003201824A1 (en) 2002-01-03 2003-07-24 Smithkline Beecham Corporation Methods for preparing immunoconjugates
US7591994B2 (en) * 2002-12-13 2009-09-22 Immunomedics, Inc. Camptothecin-binding moiety conjugates
US8877901B2 (en) 2002-12-13 2014-11-04 Immunomedics, Inc. Camptothecin-binding moiety conjugates
US6534660B1 (en) 2002-04-05 2003-03-18 Immunogen, Inc. CC-1065 analog synthesis
US6756397B2 (en) 2002-04-05 2004-06-29 Immunogen, Inc. Prodrugs of CC-1065 analogs
CA2478925C (en) 2002-04-26 2016-06-07 Robert Lee Fahrner Non-affinity purification of proteins
SI2371392T1 (sl) 2002-05-02 2015-10-30 Wyeth Holdings Llc Konjugati derivat-nosilec kaliheamicina
US20090068178A1 (en) 2002-05-08 2009-03-12 Genentech, Inc. Compositions and Methods for the Treatment of Tumor of Hematopoietic Origin
US6596757B1 (en) 2002-05-14 2003-07-22 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising polyethylene glycol-containing taxanes and their therapeutic use
WO2004001007A2 (en) 2002-06-21 2003-12-31 Idec Pharmaceuticals Corporation Buffered formulations for concentrating antibodies and methods of use thereof
US7390898B2 (en) 2002-08-02 2008-06-24 Immunogen Inc. Cytotoxic agents containing novel potent taxanes and their therapeutic use
JP2006500364A (ja) 2002-08-16 2006-01-05 イムノージェン インコーポレーテッド 高い反応性と溶解度を有する架橋剤および小分子薬物の標的化送達用コンジュゲートの調製におけるそれらの使用
ATE409048T1 (de) * 2002-10-08 2008-10-15 Fresenius Kabi De Gmbh Pharmazeutisch aktive oligosaccharid-conjugate
PT2348125T (pt) * 2002-10-30 2017-08-29 Nuevolution As Método para a síntese de um complexo bifuncional
BR0316101A (pt) 2002-11-07 2005-09-27 Immunogen Inc Anticorpos anticd33 e processo para tratamento de leucemia melóide aguda usando os mesmos
US8088387B2 (en) 2003-10-10 2012-01-03 Immunogen Inc. Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
KR101424624B1 (ko) 2003-05-14 2014-07-31 이뮤노젠 아이엔씨 약물 콘쥬게이트 조성물
US7276497B2 (en) 2003-05-20 2007-10-02 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising new maytansinoids
PL3524611T3 (pl) 2003-05-20 2021-06-14 Immunogen, Inc. Udoskonalone czynniki cytotoksyczne zawierające nowe maitansynoidy
CN102558352A (zh) 2003-06-27 2012-07-11 艾默根佛蒙特有限公司 针对表皮生长因子受体的缺失突变体的抗体及其使用
US20050074425A1 (en) * 2003-07-02 2005-04-07 Polycord, Inc. Method for delivering polymerized therapeutic agent compositions and compositions thereof
WO2005044998A2 (en) * 2003-11-05 2005-05-19 Palingen, Inc. Enhanced b cell cytotoxicity of cdim binding antibody
US20050175619A1 (en) 2004-02-05 2005-08-11 Robert Duffy Methods of producing antibody conjugates
US20110064754A1 (en) 2005-03-03 2011-03-17 Center For Molecular Medicine And Immunology Immunoconjugates Comprising Poxvirus-Derived Peptides and Antibodies Against Antigen-Presenting Cells for Subunit-Based Poxvirus Vaccines
EP1610818A4 (en) 2004-03-03 2007-09-19 Millennium Pharm Inc MODIFIED ANTIBODIES AGAINST A PROSTATE-SPECIFIC MEMBRANE-ANTIGEN AND USE THEREOF
WO2005115477A2 (en) 2004-04-13 2005-12-08 Quintessence Biosciences, Inc. Non-natural ribonuclease conjugates as cytotoxic agents
US20060073528A1 (en) * 2004-05-14 2006-04-06 Jean-Michel Lecerf Measurement methods
RU2402548C2 (ru) 2004-05-19 2010-10-27 Медарекс, Инк. Химические линкеры и их конъюгаты
JP4806680B2 (ja) 2004-05-19 2011-11-02 メダレックス インコーポレイテッド 自己犠牲リンカー及び薬剤複合体
KR20120064120A (ko) 2004-06-01 2012-06-18 제넨테크, 인크. 항체 약물 접합체 및 방법
CA2486285C (en) 2004-08-30 2017-03-07 Viktor S. Goldmakher Immunoconjugates targeting syndecan-1 expressing cells and use thereof
GT200500283A (es) 2004-10-08 2006-05-08 Inmunoterapia de desordenes autoinmunes
EP1817341A2 (en) 2004-11-29 2007-08-15 Seattle Genetics, Inc. Engineered antibodies and immunoconjugates
PL1819359T3 (pl) 2004-12-09 2015-08-31 Janssen Biotech Inc Immunokoniugaty skierowane przeciw integrynie, metody ich wytwarzania oraz ich zastosowanie
US7408030B2 (en) 2005-01-13 2008-08-05 North Carolina State University Purification of immunoglobulins using affinity chromatography and peptide ligands
US20110166319A1 (en) * 2005-02-11 2011-07-07 Immunogen, Inc. Process for preparing purified drug conjugates
CA2597407C (en) * 2005-02-11 2013-09-10 Immunogen, Inc. Process for preparing stable drug conjugates
CA2600929A1 (en) 2005-03-04 2006-09-14 Biogen Idec Ma Inc. Methods of humanizing immunoglobulin variable regions through rational modification of complementarity determining residues
EA200702239A1 (ru) 2005-04-15 2008-10-30 Иммьюноджен, Инк. Уничтожение гетерогенной или смешанной клеточной популяции в опухолях
GB2427360A (en) * 2005-06-22 2006-12-27 Complex Biosystems Gmbh Aliphatic prodrug linker
JP5436856B2 (ja) 2005-07-15 2014-03-05 アンジオケム インコーポレーティッド 薬学的複合体における担体としてのアプロチニンポリペプチドの使用
WO2007019232A2 (en) * 2005-08-03 2007-02-15 Immunogen, Inc. Immunoconjugate formulations
EP1940442A4 (en) * 2005-08-04 2009-08-19 Einstein Coll Med Phosphorylation of tau by abl
EP3539572A1 (en) * 2005-08-24 2019-09-18 ImmunoGen, Inc. Process for preparing maytansinoid antibody conjugates
CN101443044A (zh) * 2005-09-22 2009-05-27 哈达斯特医学研究服务与开发有限公司 治疗活性化合物的葡聚糖和阿拉伯半乳聚糖结合物
BRPI0617546A2 (pt) 2005-09-26 2011-07-26 Medarex Inc conjugado de fÁrmaco-anticorpo, formulaÇço farmacÊutica, mÉtodo para matar uma cÉlula de tumor, mÉtodo para retardar ou interromper o crescimento de um tumor em um sujeito mamÍfero e composto
EP2298308B1 (en) 2005-11-14 2013-01-16 University Of Southern California Integrin-binding small molecules
US7964415B2 (en) * 2006-04-26 2011-06-21 Cardiogenics Inc. Stable water-soluble polyethylenimine conjugates and methods of use thereof
ES2567402T3 (es) 2006-05-30 2016-04-22 Genentech, Inc. Anticuerpos anti CD22, sus inmunoconjugados y usos de los mismos
ES2673822T3 (es) 2006-07-18 2018-06-25 Sanofi Anticuerpo antagonista contra EphA2 para el tratamiento de cáncer
US20080213349A1 (en) * 2006-09-11 2008-09-04 Deepak Ramesh Thakker Liposome Complexes Containing Pharmaceutical Agents and Methods
US8969532B2 (en) 2006-10-03 2015-03-03 Novo Nordisk A/S Methods for the purification of polypeptide conjugates comprising polyalkylene oxide using hydrophobic interaction chromatography
EP1914242A1 (en) 2006-10-19 2008-04-23 Sanofi-Aventis Novel anti-CD38 antibodies for the treatment of cancer
PL2019104T3 (pl) 2007-07-19 2014-03-31 Sanofi Sa Środki cytotoksyczne obejmujące nowe pochodne tomaymycyny i ich zastosowanie terapeutyczne
KR20200058590A (ko) * 2008-04-30 2020-05-27 이뮤노젠 아이엔씨 가교제 및 그 용도
EP2276506A4 (en) 2008-04-30 2014-05-07 Immunogen Inc EFFICIENT CONJUGATES AND HYDROPHILIC BINDER
GB0811743D0 (en) * 2008-06-26 2008-07-30 Hemosol Biopharma Inc Composition
CA2742846A1 (en) * 2008-11-17 2010-05-20 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Releasable fusogenic lipids for nucleic acids delivery systems
CN102365021B (zh) 2009-02-05 2015-07-15 伊缪诺金公司 新型苯并二氮杂*衍生物
AR076284A1 (es) 2009-04-29 2011-06-01 Bayer Schering Pharma Ag Inmunoconjugados de antimesotelina y usos de los mismos
BRPI1010620B8 (pt) 2009-06-03 2021-05-25 Immunogen Inc métodos de conjugação
FR2947269B1 (fr) 2009-06-29 2013-01-18 Sanofi Aventis Nouveaux composes anticancereux
AR078471A1 (es) 2009-10-02 2011-11-09 Sanofi Aventis COMPUESTOS MAITANSINOIDES Y EL USO DE ESTOS PARA PREPARAR CONJUGADOS CON UN ANTICUERPO LOS CUALES SE UTILIZAN COMO AGENTES ANTICANCERIGENOS Y EL PROCEDIMIENTO DE PREPARACIoN DE ESTOS CONJUGADOS
TW201116297A (en) 2009-10-02 2011-05-16 Sanofi Aventis Antibodies that specifically bind to the EphA2 receptor
CN103037900B (zh) 2010-02-24 2016-04-06 伊缪诺金公司 叶酸受体1抗体与免疫缀合物以及其用途
SG183542A1 (en) 2010-03-12 2012-10-30 Immunogen Inc Cd37-binding molecules and immunoconjugates thereof
KR20110103182A (ko) 2010-03-12 2011-09-20 삼성전자주식회사 입체 영상 표시 장치
WO2012019024A2 (en) 2010-08-04 2012-02-09 Immunogen, Inc. Her3-binding molecules and immunoconjugates thereof
US20120149732A1 (en) * 2010-12-14 2012-06-14 Alexander Chucholowski Multifunctional linkers and methods for the use thereof
JP6049642B2 (ja) * 2011-02-15 2016-12-21 イミュノジェン・インコーポレーテッド 複合体の調製方法
MX2013011201A (es) 2011-03-29 2013-12-16 Immunogen Inc Proceso para la elaboracion de conjugados de mejor homogeneidad.
RS58367B1 (sr) * 2011-03-29 2019-03-29 Immunogen Inc Priprema konjugata antitela i majtanzinoida jednostepenim postupkom
WO2012135517A2 (en) 2011-03-29 2012-10-04 Immunogen, Inc. Preparation of maytansinoid antibody conjugates by a one-step process
IL281714B2 (en) 2011-04-01 2023-11-01 Immunogen Inc Methods for increasing the effectiveness of FOLR1 cancer therapy
US20130071482A1 (en) * 2011-09-20 2013-03-21 The University Of Kentucky Research Foundation Block copolymer cross-linked nanoassemblies as modular delivery vehicles
US20140350228A1 (en) 2011-12-13 2014-11-27 Immunogen, Inc. Use of n-hydroxysuccinimide to improve conjugate stability
MX2015004258A (es) 2012-10-04 2015-09-25 Immunogen Inc Uso de una membrana de intercambio iónico para retirar impurezas de conjugados de agentes de unión celular y agentes.
WO2014055877A1 (en) 2012-10-04 2014-04-10 Immunogen, Inc. Use of a pvdf membrane to purify cell-binding agent cytotoxic agent conjugates
WO2014055842A1 (en) 2012-10-04 2014-04-10 Immunogen, Inc. Process for preparing stable antibody maytansinoid conjugates
TR201905612T4 (tr) * 2012-12-05 2019-05-21 Univ Heidelberg Ruprecht Karls Proteinlerin ve çok değerlikli, hücreye nüfuz eden peptitlerin konjugatları ve bunların kullanımları.

Also Published As

Publication number Publication date
EP3545977A1 (en) 2019-10-02
EP2691155B1 (en) 2018-11-14
KR20220009505A (ko) 2022-01-24
AU2024200123A1 (en) 2024-01-25
BR112013025225A2 (pt) 2018-09-25
IL258929A (en) 2018-07-31
CY1121321T1 (el) 2020-05-29
DK2691155T3 (en) 2019-03-04
US20180273581A1 (en) 2018-09-27
KR102351886B1 (ko) 2022-01-17
KR20210082267A (ko) 2021-07-02
JP2023083504A (ja) 2023-06-15
AU2018211331A1 (en) 2018-08-23
RS58367B1 (sr) 2019-03-29
UA116524C2 (uk) 2018-04-10
AU2012236398A1 (en) 2013-05-16
AU2018211331B2 (en) 2020-05-14
JP6000329B2 (ja) 2016-09-28
IL258929B (en) 2019-03-31
KR20140019414A (ko) 2014-02-14
KR20200042965A (ko) 2020-04-24
CN103717262B (zh) 2017-09-15
JP2014514294A (ja) 2014-06-19
HUE041384T2 (hu) 2019-05-28
US8795673B2 (en) 2014-08-05
CA2831467C (en) 2020-03-24
ME03353B (me) 2019-10-20
NZ616509A (en) 2015-10-30
SI2691155T1 (sl) 2019-03-29
JP2021035990A (ja) 2021-03-04
EA201391398A1 (ru) 2014-02-28
AU2016202832A1 (en) 2016-05-19
US10435432B2 (en) 2019-10-08
PT2691155T (pt) 2019-02-19
NZ726386A (en) 2022-09-30
US20140309406A1 (en) 2014-10-16
ES2709577T3 (es) 2019-04-16
NZ712414A (en) 2016-12-23
KR102103302B1 (ko) 2020-04-23
JP2016204385A (ja) 2016-12-08
SMT201900114T1 (it) 2019-02-28
MX2013011215A (es) 2013-10-30
AU2012236398B2 (en) 2016-02-11
AU2020217301B2 (en) 2023-10-19
KR20230128583A (ko) 2023-09-05
CN103717262A (zh) 2014-04-09
JP6456885B2 (ja) 2019-01-23
IL250723A0 (en) 2017-06-29
JP6797885B2 (ja) 2020-12-09
PL2691155T3 (pl) 2019-06-28
IL228559A0 (en) 2013-12-31
US20200330604A1 (en) 2020-10-22
JP7269210B2 (ja) 2023-05-08
LT2691155T (lt) 2019-02-25
CN107537040A (zh) 2018-01-05
EA201991268A2 (ru) 2019-10-31
KR20220123130A (ko) 2022-09-05
MX339927B (es) 2016-06-16
IL228559A (en) 2017-03-30
AU2016202832B2 (en) 2018-05-10
EA033468B1 (ru) 2019-10-31
US11090390B2 (en) 2021-08-17
US9428543B2 (en) 2016-08-30
US9914748B2 (en) 2018-03-13
MX369659B (es) 2019-11-15
JP2019056003A (ja) 2019-04-11
ZA201605918B (en) 2021-07-28
EP2691155A2 (en) 2014-02-05
US20120253021A1 (en) 2012-10-04
CA2831467A1 (en) 2012-10-04
US11744900B2 (en) 2023-09-05
US20240156976A1 (en) 2024-05-16
AU2020217301A1 (en) 2020-08-27
EA201991268A3 (ru) 2020-01-31
KR102272828B1 (ko) 2021-07-05
IL250723B (en) 2018-05-31
US20170037080A1 (en) 2017-02-09
US20220133899A1 (en) 2022-05-05
HRP20190243T1 (hr) 2019-03-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11744900B2 (en) Preparation of maytansinoid antibody conjugates by a one-step process
RU2661083C2 (ru) Использование пвдф-мембраны для очистки конъюгатов клеточно-связывающий агент - цитотоксический агент
KR20140019415A (ko) 향상된 균질성의 접합체를 제조하기 위한 방법
JP2009506032A (ja) メイタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ）抗体複合体の調製方法
JP2009506032A5 (tr)
WO2012135517A2 (en) Preparation of maytansinoid antibody conjugates by a one-step process
JP2015504869A (ja) 複合体安定性を改善するためのｎ−ヒドロキシスクシンイミドの使用
CN105208876A (zh) 离子交换膜的从细胞结合剂细胞毒性剂缀合物中去除杂质的用途
NZ616509B2 (en) Preparation of maytansinoid antibody conjugates by a one-step process
NZ712414B2 (en) Preparation of antibody maytansinoid conjugates
HK1194700A (en) Preparation of maytansinoid antibody conjugates by a one-step process
HK1194700B (en) Preparation of maytansinoid antibody conjugates by a one-step process