JPH0657151B2 - 酵素の安定化法 - Google Patents
酵素の安定化法Info
- Publication number
- JPH0657151B2 JPH0657151B2 JP61109567A JP10956786A JPH0657151B2 JP H0657151 B2 JPH0657151 B2 JP H0657151B2 JP 61109567 A JP61109567 A JP 61109567A JP 10956786 A JP10956786 A JP 10956786A JP H0657151 B2 JPH0657151 B2 JP H0657151B2
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- Japan
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- enzyme
- inhibitor
- acid
- protease
- stabilization method
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- Detergent Compositions (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 この発明は酵素の安定化法、詳しく言えば特に洗剤中の
プロテアーゼの安定化法に関するものである。
プロテアーゼの安定化法に関するものである。
［従来の技術］ 近年、通常の洗剤のみでは充分に洗浄することができな
い生体の蛋白質（垢、血液等）に由来する汚れを洗浄す
る目的で、酵素の蛋白分解作用を加味した酵素入り洗剤
が脚光を浴びている。
い生体の蛋白質（垢、血液等）に由来する汚れを洗浄す
る目的で、酵素の蛋白分解作用を加味した酵素入り洗剤
が脚光を浴びている。
酵素入り洗剤は、一般の洗剤基材、例えばアニオン系界
面活性剤を洗剤主剤とし、ビルダーとしてトリポリ燐酸
ナトリウム、硫酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロ
ース、ケイソウ土等を添加したものに酵素を配合したも
のである。酵素としては一般に洗剤水溶液のpH条件下で
活性なアルカリプロテアーゼが使用されている。
面活性剤を洗剤主剤とし、ビルダーとしてトリポリ燐酸
ナトリウム、硫酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロ
ース、ケイソウ土等を添加したものに酵素を配合したも
のである。酵素としては一般に洗剤水溶液のpH条件下で
活性なアルカリプロテアーゼが使用されている。
［発明が解決しようとする問題点］ 洗剤の主剤であるアニオン系界面活性剤は、酵素の部分
的失活を招き、酵素の安定性を弱める傾向がある等の好
ましくない性質を伴なっており、このため実用上は保存
時の活性低下をできるだけ少なくすることが望まれ、種
々の安定化法が提案されている。
的失活を招き、酵素の安定性を弱める傾向がある等の好
ましくない性質を伴なっており、このため実用上は保存
時の活性低下をできるだけ少なくすることが望まれ、種
々の安定化法が提案されている。
酵素は通常乾燥状態では安定であるため、粒剤とした場
合には比較的容易に安定化できるが、水の存在下では不
安定となりやすく、特に液体洗剤の場合には種々の提案
にもかかわらず充分な解決には至っていないのが実情で
ある。
合には比較的容易に安定化できるが、水の存在下では不
安定となりやすく、特に液体洗剤の場合には種々の提案
にもかかわらず充分な解決には至っていないのが実情で
ある。
［問題点を解決するための手段］ 本発明者は、各種洗剤に配合される酵素の失活を抑制す
る化合物を探索し、酵素に対してその可逆的阻害剤を結
合させた場合には溶液および粉末状態において酵素の安
定性が向上することを見出し、本発明を完成した。
る化合物を探索し、酵素に対してその可逆的阻害剤を結
合させた場合には溶液および粉末状態において酵素の安
定性が向上することを見出し、本発明を完成した。
すなわち、本考案は、プロテアーゼと結合してその作用
を阻害する可逆的阻害剤を、該プロテアーゼに対して0.
5当量から使用条件下で実際上阻害効果を示さない範囲
までの量添加することを特徴とする該プロテアーゼの安
定化法を提供したものである。
を阻害する可逆的阻害剤を、該プロテアーゼに対して0.
5当量から使用条件下で実際上阻害効果を示さない範囲
までの量添加することを特徴とする該プロテアーゼの安
定化法を提供したものである。
本発明の酵素安定化法においては、酵素の可逆的阻害剤
として一般にしられているものが使用可能であるが、特
にキモスタチン、ロイペプチン、アンチパイン、ホスホ
ラミドン等のペプチド性低分子量阻害剤、大豆トリプシ
ンインヒビター（以下、STIと略す。）ストレプトマイ
セススブチリシンインヒビター、オボインヒビター 等
のタンパク性高分子量阻害剤、およびカルボベンジルオ
キシフェニルアラニン（以下、Z-Pheと略す。）、フェ
ニルホウ酸、N,N-ジベンジル尿素等の非生物起源で酵素
の可逆的阻害作用のある化合物が洗剤中の酵素の安定化
にすぐれた効果を示し、これらを酵素とともに洗剤に添
加した場合に酵素と阻害剤が複合体を形成し活性が長時
間持続し、酵素活性の低下が少なく、酵素入り洗剤とし
て十分に実用化できることを見出した。
として一般にしられているものが使用可能であるが、特
にキモスタチン、ロイペプチン、アンチパイン、ホスホ
ラミドン等のペプチド性低分子量阻害剤、大豆トリプシ
ンインヒビター（以下、STIと略す。）ストレプトマイ
セススブチリシンインヒビター、オボインヒビター 等
のタンパク性高分子量阻害剤、およびカルボベンジルオ
キシフェニルアラニン（以下、Z-Pheと略す。）、フェ
ニルホウ酸、N,N-ジベンジル尿素等の非生物起源で酵素
の可逆的阻害作用のある化合物が洗剤中の酵素の安定化
にすぐれた効果を示し、これらを酵素とともに洗剤に添
加した場合に酵素と阻害剤が複合体を形成し活性が長時
間持続し、酵素活性の低下が少なく、酵素入り洗剤とし
て十分に実用化できることを見出した。
洗剤用として使用される蛋白分解酵素（プロテアーゼ）
には種々のものがあり、工業的資源として、食品工業、
皮革工業、医薬品工業、繊維工業、水産加工業などの各
方面において用いられているプロテアーゼはいずれも使
用可能であるが、特に洗剤水溶液のアルカリ性条件下で
活性なアルカリプロテアーゼ、例えばスブチリシン・カ
ールスベルグ（Subtilisin Carlsberg），スブチリシン
BPN′（以下BPN′と略記する。）、API-21等が敵してい
る。
には種々のものがあり、工業的資源として、食品工業、
皮革工業、医薬品工業、繊維工業、水産加工業などの各
方面において用いられているプロテアーゼはいずれも使
用可能であるが、特に洗剤水溶液のアルカリ性条件下で
活性なアルカリプロテアーゼ、例えばスブチリシン・カ
ールスベルグ（Subtilisin Carlsberg），スブチリシン
BPN′（以下BPN′と略記する。）、API-21等が敵してい
る。
本発明では、酵素の可逆的阻害剤に加えて、更にカルシ
ウム塩、例えば酢酸、硫酸、炭酸、塩酸、硝酸および燐
酸のカルシウム塩、好ましくは硫酸カルシウム塩を併用
することにより、酵素の保存安定性を一層向上させるこ
とができる。
ウム塩、例えば酢酸、硫酸、炭酸、塩酸、硝酸および燐
酸のカルシウム塩、好ましくは硫酸カルシウム塩を併用
することにより、酵素の保存安定性を一層向上させるこ
とができる。
本発明の酵素安定化法で用いる酵素の可逆的阻害剤の添
加量は、保存状態では阻害剤として有効に働き、希釈さ
れた実使用条件下では実際上阻害効果を示さない濃度で
あり、例えば酵素としてAIP-21、阻害剤としてキモスタ
チンを組合わせた場合、酵素に対して0.5当量以上か
ら、実使用条件下での酵素阻害剤濃度が１μＭ以下とな
る範囲の量である。
加量は、保存状態では阻害剤として有効に働き、希釈さ
れた実使用条件下では実際上阻害効果を示さない濃度で
あり、例えば酵素としてAIP-21、阻害剤としてキモスタ
チンを組合わせた場合、酵素に対して0.5当量以上か
ら、実使用条件下での酵素阻害剤濃度が１μＭ以下とな
る範囲の量である。
また、安定化助剤であるカルシウム塩は、酵素に対して
０〜40重量％添加して用いるのが好ましい。
０〜40重量％添加して用いるのが好ましい。
本発明による酵素の安定化は、具体的には酵素と酵素の
可逆的阻害剤を混合し、酵素−阻害剤複合体を形成し、
更に所望によりカルシウム塩を加えて安定化された酵素
組成物とすることにより行なわれる。このようにして得
られる安定化された組成物は、これを洗剤用またはその
他の用途、例えば絹精練、皮革加工、衣料のり抜き等に
用いることができる。
可逆的阻害剤を混合し、酵素−阻害剤複合体を形成し、
更に所望によりカルシウム塩を加えて安定化された酵素
組成物とすることにより行なわれる。このようにして得
られる安定化された組成物は、これを洗剤用またはその
他の用途、例えば絹精練、皮革加工、衣料のり抜き等に
用いることができる。
［実施例］ 以下、実施例によって本発明の酵素安定化法の効果を、
粉末洗剤および液体洗剤の場合につき具体的に説明す
る。
粉末洗剤および液体洗剤の場合につき具体的に説明す
る。
(1)粉末洗剤 酵素（BPN′）0.05ｇと、表１に示すような阻害剤／酵
素当量比となる量の阻害剤（キモスタチンおよびZ-Ph
e）および硫酸ナトリウムの混合物とを容器にとり、よ
く混合し、これに洗剤（市販洗剤：ニュービーズ）５ｇ
を加え混合し、温度40℃、相対湿度80％の恒温恒湿槽に
入れて40時間後、110時間後および160時間後に各試料の
酵素の残存活性を測定し（特公昭60−55118号参照）、
表１に示す結果を得た。表１には硫酸カルシウムを添加
した場合および比較のために阻害剤を使用しない場合の
結果をも示した。
素当量比となる量の阻害剤（キモスタチンおよびZ-Ph
e）および硫酸ナトリウムの混合物とを容器にとり、よ
く混合し、これに洗剤（市販洗剤：ニュービーズ）５ｇ
を加え混合し、温度40℃、相対湿度80％の恒温恒湿槽に
入れて40時間後、110時間後および160時間後に各試料の
酵素の残存活性を測定し（特公昭60−55118号参照）、
表１に示す結果を得た。表１には硫酸カルシウムを添加
した場合および比較のために阻害剤を使用しない場合の
結果をも示した。
(2)液体洗剤 LAS 10重量％、アルコキシエトキシレート33重量％、ト
リエタノールアミン８重量％、エタノール８重量％およ
び水41重量％からなる液体洗剤30mlに、酵素（BPN′お
よびトリプシン）30mgと、表２に示すような阻害剤／酵
素当量比となる量の阻害剤（キモスタチン、ロイペプチ
ン、STI）を加え、よく混合し、温度45℃の恒温槽に入
れて48時間後、90時間後および187時間後に各試料の酵
素残存活性を測定し、表２に示す結果を得た。表２には
比較のために阻害剤を使用しない場合の結果をも示し
た。
リエタノールアミン８重量％、エタノール８重量％およ
び水41重量％からなる液体洗剤30mlに、酵素（BPN′お
よびトリプシン）30mgと、表２に示すような阻害剤／酵
素当量比となる量の阻害剤（キモスタチン、ロイペプチ
ン、STI）を加え、よく混合し、温度45℃の恒温槽に入
れて48時間後、90時間後および187時間後に各試料の酵
素残存活性を測定し、表２に示す結果を得た。表２には
比較のために阻害剤を使用しない場合の結果をも示し
た。
表１および表２から、酵素阻害剤を用いることによって
洗剤中での酵素の安定性が向上することが明らかであ
り、その結果はカルシウム塩の添加により一層顕著とな
っている。
洗剤中での酵素の安定性が向上することが明らかであ
り、その結果はカルシウム塩の添加により一層顕著とな
っている。
Claims (6)
- 【請求項１】プロテアーゼと結合してその作用を阻害す
る可逆的阻害剤を、該プロテアーゼに対して0.5当量か
ら使用条件下で実際上阻害効果を示さない範囲までの量
添加することを特徴とする該プロテアーゼの安定化法。 - 【請求項２】可逆的阻害剤がペプチド性低分子量阻害剤
である特許請求の範囲第１項に記載の安定化法。 - 【請求項３】可逆的阻害剤がタンパク性高分子量阻害剤
である特許請求の範囲第１項に記載の安定化法。 - 【請求項４】可逆的阻害剤が非生物起源の化合物である
特許請求の範囲第１項に記載の安定化法。 - 【請求項５】更にカルシウム塩を、プロテアーゼに対し
て40重量％までの量添加する特許請求の範囲第１項〜第
４項のいずれかに記載の安定化法。 - 【請求項６】カルシウム塩が、酢酸、硫酸、炭酸、塩
酸、硝酸、燐酸、およびポリ燐酸のカルシウム塩から選
ばれる少なくとも１種類以上の塩である特許請求の範囲
第５項に記載の安定化法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61109567A JPH0657151B2 (ja) | 1986-05-15 | 1986-05-15 | 酵素の安定化法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61109567A JPH0657151B2 (ja) | 1986-05-15 | 1986-05-15 | 酵素の安定化法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62269689A JPS62269689A (ja) | 1987-11-24 |
| JPH0657151B2 true JPH0657151B2 (ja) | 1994-08-03 |
Family
ID=14513515
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61109567A Expired - Lifetime JPH0657151B2 (ja) | 1986-05-15 | 1986-05-15 | 酵素の安定化法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0657151B2 (ja) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4914031A (en) * | 1987-04-10 | 1990-04-03 | Amgen, Inc. | Subtilisin analogs |
| US5527487A (en) * | 1991-11-27 | 1996-06-18 | Novo Nordisk A/S | Enzymatic detergent composition and method for enzyme stabilization |
| TW306932B (ja) * | 1993-08-27 | 1997-06-01 | Holland Sweetener Co | |
| EP0929639B1 (en) * | 1996-09-24 | 2002-11-13 | The Procter & Gamble Company | Liquid detergents containing proteolytic enzyme, peptide aldehyde and calcium ions |
| DE19829789A1 (de) * | 1998-07-03 | 2000-01-05 | Beiersdorf Ag | Gegen Akne und entzündete Comedonen wirksame Zubereitungen enthaltend Serin-Proteasen und ein oder mehrere Calciumsalze |
| JP2013192526A (ja) * | 2012-03-22 | 2013-09-30 | Sanyo Chem Ind Ltd | タンパク質溶液、このタンパク質溶液のプロテアーゼ活性の回復方法及びこのタンパク質溶液を含有する洗剤組成物 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5913187A (ja) * | 1982-07-13 | 1984-01-23 | 松下冷機株式会社 | 真空断熱複合体と製造方法 |
-
1986
- 1986-05-15 JP JP61109567A patent/JPH0657151B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS62269689A (ja) | 1987-11-24 |
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