JPH0659224B2 - Ｄνａ塩基配列及びそのｄνａ塩基配列を含む組換え体プラスミドの創製法 - Google Patents

Ｄνａ塩基配列及びそのｄνａ塩基配列を含む組換え体プラスミドの創製法

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JPH0659224B2
JPH0659224B2 JP58166665A JP16666583A JPH0659224B2 JP H0659224 B2 JPH0659224 B2 JP H0659224B2 JP 58166665 A JP58166665 A JP 58166665A JP 16666583 A JP16666583 A JP 16666583A JP H0659224 B2 JPH0659224 B2 JP H0659224B2
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登 富岡
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員明 真鍋
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Description

【発明の詳細な説明】 本発明はたんぱく質分泌能を高めるＤＮＡ塩基配列とそ
のＤＮＡ塩基配列を含む組換え体プラスミドに関する。
ある種の微生物（細菌，酵母等）はペリプラズマ中にあ
るいは菌体外にたんぱく質を分泌する。特にバチルス属
細菌は菌体外に多量のたんぱく質を分泌する。このよう
な微生物のたんぱく質分泌促進に関与する遺伝情報を遺
伝子工学の手法を用い宿主ベクター系に組み込み、高い
分泌能を有する宿主ベクター系を創作することは微生物
によるたんぱく質生産の観点からみて大きな意義があ
る。すなわちそのような宿主ベクター系が得られると、
それによって遺伝子を発現させ、たんぱく質を菌体外す
なわち培養液中に多量に分泌させて、培養ろ液から簡単
な工程で回収できるからである。
本発明者等はかかる観点から、本発明の方法によりバチ
ルス属細菌のたんぱく質分泌能を高めるＤＮＡ塩基配列
のクローニングを行ない、菌体外にたんぱく質、特にプ
ロテアーゼを顕著に分泌させるＤＮＡ塩基配列を得、そ
の塩基配列を決定し、一群の本発明を完成するに至っ
た。
本発明の方法とは、クローニングの過程で目的とするＤ
ＮＡ塩基配列を含む組換え体ＤＮＡを導入している微生
物を選択する場合に、分泌された酵素たんぱく質に着目
し、その量を、特には菌体外でのそのたんぱく質の酵素
活性を測定してたんぱく質分泌能の著しく向上した株を
選ぶ方法で極めて能率良く目的を達成している微生物を
得ることが出来る方法である。
本発明に云うたんぱく質分泌能を高めるＤＮＡ塩基配列
とは特許請求の範囲第１項において、当業者の常識に従
がい、５′末端から３′末端への方向に従ってその塩基
の配列の順序を特定しているものである。これらの配列
を有するＤＮＡ断片を、適当なベクターＤＮＡあるいは
宿主菌染色体ＤＮＡに組み込むことによって種々の高い
分泌能を有するバチルス属細菌分泌ベクター系の創作が
可能となる。
以下本発明を詳細に説明する。
特許請求の範囲第１項に示したたんぱく質分泌能を高め
るＤＮＡ塩基配列（以下本発明のＤＮＡ塩基配列とい
う）は、たんぱく質分泌能を有する微生物の染色体ＤＮ
Ａからクローニングによって又は合成によって得られる
が、本発明の実施例によって示したように種々のたんぱ
く質を著量に分泌する能力を有するバチルス属細菌、例
えばバチルス・アミロリキファシエンス（B.amylolique
faciens）ATCC 23842等、バチルス・サブチリス（B. su
btilis）ＡＴＣＣ e6051等、又はバチルス・リケニホ
ルミス（B. licheniformis）ＡＴＣＣ 21415等が染色
体ＤＮＡ源として特に適している。
以下に１列としてバチルス属細菌からの本発明のＤＮＡ
塩基配列を得る場合について説明する。まず、バチルス
属細菌の菌体から常法によりＤＮＡを調製し、そのＤＮ
Ａを制限酵素により又は物理的剪断力により断片化す
る。この場合当然のことながら制限酵素を用いる場合
は、分泌促進に関与する塩基配列を切断しないようその
酵素を選び又はその塩基配列を切断してしまう場合でも
部分分解の条件でなければならない。
次に断片化し染色体ＤＮＡをベクターとして用いるプラ
スミドＤＮＡ又はファージＤＮＡに連結する。連結に用
いる酵素には例えばＴ４ＤＮＡリガーゼがあり、連結す
るＤＮＡ断片の形態によっては必要に応じてリンカーを
使用すると良い。この連結ができたハイブリッドＤＮＡ
をバチルス属細菌に導入する方法は通常行われているい
かなる方法でもよい。例えば、プロトプラストを用いる
方法あるいはコンピテント細胞を用いる方法によると効
率よくハイブリッドＤＮＡをバチルス属細菌細胞内に導
入することができる。抗生物質耐性等の遺伝的マーカー
を有するプラスミドをベクターとして用いれば形質転換
したバチルス属細菌の選択がその遺伝的マーカーを利用
して容易に行なえるので手法として極めて有利である。
ベクターとしてはプラスミドрTP4，pTP5，pUB110，フ
ァージP11，φ105，φ１等が適している。рUB110を用
いるとカナマイシン耐性で形質転換体の選別が行なえる
ので、カナマイシンを含む寒天培地上でプラスミドが導
入できたバチルス属細菌を能率良く選別することができ
る。
こうして得られた数多くの形質転換したバチルス属細菌
には、種々の分子量を有するバチルス属細菌染色体ＤＮ
Ａを含む組換え体プラスミドＤＮＡが存在する。プラス
ミドをベクターとして用いて形質転換を行った場合、得
られた形質転換体のうちたんぱく質分泌能が高まってい
るものを選び出し、その形質転換体を培養して菌体を集
め、その菌体より通常の方法でプラスミドＤＮＡを抽出
すれば、抽出された組換え体プラスミドＤＮＡには本発
明のＤＮＡ塩基配列が含まれている。たんぱく質分泌能
が高まった形質転換体を選別するにはそれぞれの形質転
換体を培養し、培養液中に分泌されたたんぱく質が宿主
菌に比べ増大しているか否かを調べる方法でも良いが、
酵素活性を有する分泌たんぱく質に着目し菌体外に分泌
されるその酵素たんぱくの酵素活性の増大を調べる方法
を用いると選別が容易となる。このような酵素には例え
ばアミラーゼ、プロテアーゼ、ペニシリナーゼ、セルラ
ーゼ、アルカリ性フォスファターゼ等がある。これらの
酵素の中でも特にプロテアーゼは、カゼインを含む寒天
プレートに示されるハローの大きさを測定することによ
り、あるいはカゼインを基質とした酵素反応により酵素
活性を極めて容易に測定することが出来る。
たんぱく質分泌能の増大がみられる形質転換体が得られ
れば、その細胞よりプラスミドＤＮＡを抽出し、抽出で
きたプラスミドを再び宿主として用いたバチルス属細菌
に導入し、その組換え体プラスミドにたんぱく質分泌能
を高める性質が存在することを確かめることが出来る。
分泌たんぱく質としてプロテアーゼを選んだ場合、菌体
外プロテアーゼ活性の増大を指標として目的の形質転換
体を得、その細胞より組換え体プラスミドＤＮＡを抽出
し、抽出できた組換え体プラスミドＤＮＡを用いて形質
転換を行う。その結果得られた形質転換体の全てに菌体
外プロテアーゼ活性増大の性質が見られた場合、抽出さ
れた組換え体プラスミドＤＮＡにはたんぱく質分泌能を
高めるＤＮＡ塩基配列が存在するのである。この組換え
体プラスミドＤＮＡの制限酵素切断地図を作成して、目
的の組換え体プラスミドを特徴づけ、またその切断地図
を基に挿入されているバチルス属細菌染色体ＤＮＡ塩基
配列を例えばマクサム−ギルバート（Maxam-Gilbert）
法（Proc.Natl.Acad-Sci.U.S.A.vol.74,p560,(1977)）
により決定する。本発明のＤＮＡ塩基配列は、クローニ
ングされたＤＮＡの全部としてあるいは一部として得ら
れる。バチルス属の変異株あるいは種または属の異なる
微生物からたんぱく質分泌能を高めるＤＮＡのクローニ
ングを試みた場合、本発明のＤＮＡ塩基配列について塩
基置換、削除、挿入、転位等の変異の入った誘導配列で
あるＤＮＡ断片が得られることも勿論のことありうる。
さらに本発明のＤＮＡ塩基配列は、微生物、特にバチル
ス属細菌の染色体ＤＮＡに又はベクターに組み込んで微
生物に導入することにより、たんぱく質分泌能の極めて
高い微生物を育種することが出来るので、本発明のＤＮ
Ａ塩基配列は微生物工業において極めて広い応用範囲を
有する。
次に実施例を示して本発明を更に具体的に説明するが、
これにより本発明は制限されるものではない。
実施例 アミラーゼ、プロテアーゼ等のたんぱく質分泌能が高い
バチルス属細菌バチルス・アミロリキファシエンス（B.
amyloliquefaciens）Ｆ株（ATCC 23822）を２のＮＢ
培地（肉エキス0.8％、ポリペプトン0.8％、NaCl0.4
％、pH7.2）を用い３７℃で振盪培養し、対数増殖期後
に菌体を集め、マーマー（Marmur）の方法（J.Mol.Bio
l.3,p208,1961）で染色体ＤＮＡを調製した。この染色
体ＤＮＡ５０μｇに制限酵素EcoRIを400μの反応液
（100mM Tris-HCl,pH7.5,7mM MaCl2,50mMNaCl,7mM ２
−メルカプトエタノール、0.01％ウシ血清アルブミン、
20ユニット。宝酒造株式会社製）中で３時間３７℃で作
用させた。フェノールで除たんぱくして後分解物をエタ
ノールで沈殿させて回収した。
一方バチルス属細菌で増殖可能なプラスミドであるpUB1
10 ＤＮＡ 50μｇについても同様の方法を用いてEcoR
I完全分解物を得、得られた直鎖状ＤＮＡにつきバクテ
リアアルカリホスファターゼ（以下ＢＡＰ）を300μ
の反応液（50mM Tris-HCl,pH8.4,８ユニットのウォージ
ントン（Worthington）社製ＢＡＰ）中で４時間６５℃
で作用させ、フェノールで除タンパクした後分解したＤ
ＮＡをエタノールで沈殿させて回収した。
この様にして得られたpUB110ＤＮＡ（EcoRI切断、ＢＡ
Ｐ処理）0.5μｇと上記染色体ＤＮＡEcoRI分解物１μｇ
を0.03ユニットのＴ４ＤＮＡリガーゼ（宝酒造社製）を
用い20μの反応液（66mM Tris-HCl,pH7.6,6.6mM MaCl
2,10mM ジチオスレイトール、1mM MATP）中で１５℃、
４時間インキュベートして結合させ、チヤン（Chang）
等の方法（Mol.Gen.Genet.168,111,1978）に従いプロテ
アーゼ分泌能の低いバチルス属細菌バチルス・サブチリ
ス（B. subtilis）1A289（aro 1906 met B5 sac A321 a
my E）株（オハイオ大学バチルス ジェネティック ス
トックセンター保存株）に導入した。
バチルス属細菌バチルス・サブチリス（B. subtilis）1
A289に組換え体プラスミドが導入されたカナマイシン耐
性（Ｋｍ ｒ）となった約7,500個の形質転換体を、カゼ
インを0.6％含む寒天培地上に植え継ぎし、３７℃で１
８時間培養した後それらの形質転換体のうちプロテアー
ゼ分泌能の高い株をコロニーの周囲に大型ハローを形成
する性質により選別した。得られたプロテアーゼ分泌能
の高まった株のうち１株を選びカナマイシンを含む培地
で培養し、その菌体からバーノボイム（Birnoboim）等
の方法（Nucleic.Acid.Res.7,1513,1979）で組換え体プ
ラスミドＤＮＡを抽出し、制限酵素切断地図を作成して
プラスミドpNP718と命名した。（第１図参照） プラスミドpNP718を前述のチヤン（Chang）等の方法で
プロテアーゼ分泌能の低いバチルス属細菌バチルス・サ
ブチリス（B. subtilis）1A20（dna C ilVA1 metB5）株
（オハイオ大学バチルス ストックセンター保存株）に
導入したところ、得られたカナマイシン耐性の形質転換
体の全てが高いプロテアーゼ分泌能を示した。宿主とし
て用いたバチルス・サブチリス（B. subtilis）1A20株
及びpNP718を保持するバチルス・サブチリス（B. subti
lis）1A20株をそれぞれＢＹ培地（肉エキス0.5％、ポリ
ペプトン１％、イーストエキス0.2％、NaCl 0.2％、pH
7.2）をそれぞれ３７℃で１０時間振盪培養し、得られ
た培養ろ液のプロテアーゼ活性の測定を行いこれらの菌
株で菌体外プロテアーゼ活性を比較した結果が表１であ
る。プロテアーゼ活性は中性プロテアーゼ活性及びアル
カリ性プロテアーゼ活性の両方を萩原らの方法（J.Bioc
hem,vol.45,185,(1958)）により測定し相対値で表し
た。
プラスミドpNP718にはClaI切断部位が４ケ所ある。そこ
で我々はpNP718 ClaI部分分解物を得た後、Ｔ４ＤＮＡ
リガーゼを用いる方法でこれを再結合し、たんぱく質の
分泌能を高める遺伝子を含むさらに小型の組換えプラス
ミドを創作したのでそれにつき述べる。pNP718のClaI部
分分解物を再結合して作成したプラスミドＤＮＡ（混合
物）は前述のチヤン（Chang）等の方法でバチルス属細
菌バチルス・サブチリス（B. subtilis）1A289に導入
し、得られた形質転換体のいくつかよりプラスミドＤＮ
Ａを前述のバーノボイム（Birnoboim）等の方法で抽出
したところpNP718由来のClaI 1.75kbフラグメントが挿
入されているプラスミドpNP181を得た。（第２図参照） このプラスミドpNP181を再びチヤン（Chang）等の方法
でバチルス属細菌バチルス・サブチリス（B. subtili
s）1A289に導入し得られた形質転換体MT-0181（FERM BP
-343）のプロテアーゼ分泌能を前述のカゼインを含む寒
天培地上のハローの大きさで調べた結果プラスミドpNP1
81にプロテアーゼ分泌能を高める能力があることを確認
した。
プラスミドpNP181をプロテアーゼ分泌能の低い前述のバ
チルス属細菌バチルス・サブチリス（B. subtilis）1A2
0株に導入し、得られた形質転換体のプロテアーゼ分泌
能の増大を調べた結果が表２である。プロテアーゼ活性
の測定は表１の場合と同じ方法を用いた。
この組換えプラスミドpNP181に中性プロテアーゼ、アル
カリ性プロテアーゼ及び他のたんぱく質の分泌を高める
能力があることは、形質転換体を培養した培養液中の分
泌たんぱく質をポリアクリルアミドゲル電気泳動で調べ
ることによっても確認することができた。
ClaI 1.75kbのＤＮＡ塩基配列を決定する目的で、まずC
laI 1.75kbを含むEcoRI 4.0kbフラグメントをプラスミ
ドpNP718から切り出し得られたフラグメントを大腸菌ベ
クターpBR322のEcoRI部位にＴ４ＤＮＡリガーゼを用い
て結合し組換え体プラスミドpNP626（第３図参照）を作
成した。
プラスミドpNP626ＤＮＡを大腸菌で増殖させ、クロラム
フェニコールでプラスミドのコピー数を増幅させ後菌体
からプラスミドＤＮＡとして抽出した。抽出したプラス
ミドＤＮＡのClaI 1.75kbフラグメントを材料とし、制
限酵素HinfI,Sau 3A,HpaII,TaqIで切断してさらに小さ
なＤＮＡ断片を得、それらの小さなＤＮＡフラグメント
につきマクサム−ギルバート（Maxam-Gilbert）法（Pro
c.Natl.Acad.Sci.U.S.A.74,560 1977）によってＤＮＡ
塩基配列を決定した。
得られたClaI 1.75kbフラグメントのＤＮＡ塩基配列の
片方の鎖は特許詳求の範囲第１項に記載の通りである。
そしてこのＤＮＡ塩基配列には第４図に示す通りのＲＮ
Ａ合成開始部位に特徴的な配列（-35領域、TATAボック
ス）及びＲＮＡ合成終了部位に特徴的な配列（２つのス
テム構造とそれに続くＴに富む配列）が存在している。
これら開始部位、終了部位及びこれらの部位にはさまれ
る各々の塩基配列が存在することがたんぱく質分泌能を
高める形質を発現させているのである。この故に特許請
求の範囲第２項に云うＤＮＡ塩基配列の一部とは、第４
図に示したＲＮＡ合成開始部位の、ＲＮＡ合成終了部位
の、およびこれらの部位にはさまれた各部位のそれぞれ
の塩基配列、あるいはそれらの部位の塩基配列を含んで
組み合わされている塩基配列をいうのである。そして組
換え体プラスミドpNP718，pNP181およびpNP626のそれぞ
れには特許請求の範囲第１項記載のＤＮＡ塩基配列が存
在するので前記の形質を発現させており、この故に我々
はこれらの組換え体プラスミドを特許請求の範囲第４項
に記載の組換え体プラスミドとして特許を請求するので
ある。
【図面の簡単な説明】
第１図は本発明のプラスミドpNP718の制限酵素切断地図
を、第２図は同じくpNP181がpNP718から得る状況をその
制限酵素切断地図により示したものであり第３図は本発
明の組換えプラスミドpNP626の制限酵素切断地図をそれ
ぞれ示す。また第４図は本発明のＤＮＡ塩基配列に含ま
れるＲＮＡ合成開始部位同終了部位の存在を示す塩基配
列図である。
フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:07） (56)参考文献 日本農芸化学会昭和58年度大会講演要旨 集（昭58、３、10発行）Ｐ．33 Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，154（２) （Ｍａｙ．，1983）Ｐ．831−837

Claims (6)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】片方の鎖が次の順序であるたんぱく質分泌
    能を高めるＤＮＡ塩基配列。 ＡＴＣＧＡ ＴＡＣＧＣ ＴＴＣＴＣ ＣＡＧＡＧ ＡＧＡＧＣ ＴＴＧＡＧ ＧＡＣＡＴ ＡＧＴＣＡ ＡＡＧＡＡ ＣＴＧＣＣ ＴＴＴＡＡ ＴＴＧＡＴ ＧＡＡＧＴ ＣＧＧＡＣ ＡＧＧＣＧ ＣＴＧＣＴ ＣＧＧＴＴ ＡＴＧＡＡ ＡＡＣＧＡ ＴＴＡＴＴ ＡＣＡＴＧ ＡＴＧＣＴ ＣＧＧＧＣ ＴＣＧＴＣ ＡＡＡＧＣ ＣＡＴＴＧ ＡＡＴＧＣ ＡＡＣＡＡ ＣＴＧＧＧ ＡＣＴＧＴ ＧＡＣＧＡ ＧＴＧＧＧ ＧＡＡＡＡ ＧＡＡＣＴ ＧＧＡＣＡ ＡＡＧＡＡ ＧＡＡＧＣ ＡＴＡＴＧ ＡＡＴＧＴ ＴＡＣＴＴ ＡＣＡＧＧ ＣＧＡＴＣ ＧＡＡＴＧ ＧＴＧＣＣ ＧＧＣＡＧ ＣＴＴＡＴ ＣＧＴＧＡ ＡＴＴＧＡ ＧＧＣＧＣ ＴＴＴＡＡ ＧＣＣＧＡ ＣＣＡＣＣ ＴＧＡＧＧ ＧＣＧＡＴ ＧＡＴＧＡ ＡＣＣＧＧ ＣＴＴＴＧ ＣＴＣＴＣ ＴＧＡＡＣ ＡＧＡＣＴ ＧＡＣＡＣ ＧＧＡＴＧ ＣＣＧＴＣ ＧＧＧＡＴ ＴＡＡＡＴ ＧＴＣＡＣ ＡＴＣＡＡ ＡＡＴＣＡ ＴＴＴＴＴ ＧＡＴＧＣ ＣＧＧＴＣ ＴＧＣＴＴ ＡＡＴＧＡ ＧＣＣＧＣ ＴＴＧＡＣ ＣＧＣＣＧ ＣＧＧＣＧ ＴＣＡＧＡ ＴＧＡＴＴ ＧＣＧＣＴ ＧＣＧＧＴ ＧＡＧＧＡ ＴＧＣＧＧ ＣＧＣＧＣ ＡＡＧＣＴ ＣＴＴＴＴ ＧＡＣＧＣ ＣＧＡＣＡ ＧＣＣＧＣ ＧＣＡＡＧ ＧＡＧＣＡ ＧＡＣＧＧ ＧＣＧＴＣ ＣＴＣＣＡ ＧＣＡＴＧ ＣＣＣＧＣ ＡＧＣＣＴ ＣＴＴＴＴ ＧＣＧＧＡ ＣＧＣＴＧ ＴＣＡＡＡ ＡＴＡＴＣ ＴＧＣＧＴ ＧＡＡＴＣ ＧＴＧＧＧ ＡＧＣＡＧ ＧＣＧＣＡ ＧＧＡＴＴ ＧＣＧＴＡ ＴＧＧＣＧ ＣＧＧＣＧ ＡＡＡＡＣ ＡＧＧＡＣ ＡＧＣＡＴ ＧＧＡＴＡ ＣＡＣＡＴ ＡＡＡＧＣ ＡＴＧＣＧ ＧＣＧＧＣ ＣＴＣＣＴ ＴＣＴＧＡ ＧＡＴＡＡ ＣＡＴＴＣ ＧＴＴＡＴ ＡＣＡＴＧ ＡＧＴＡＴ ＡＧＧＣＧ ＧＣＧＴＧ ＡＴＡＡＣ ＧＡＧＴＴ ＡＴＧＡＣ ＡＴＧＣＡ ＡＡＡＡＧ ＡＣＣＡＣ ＡＡＴＧＣ ＧＧＧＴＧ ＴＴＧＣＧ ＧＴＣＴＴ ＴＴＣＧＧ ＴＧＴＴＴ ＧＴＣＧＧ ＴＧＧＴＴ ＡＴＧＣＧ ＡＣＧＣＴ ＧＴＴＣＧ ＣＣＣＡＴ ＴＣＴＣＴ ＴＴＴＧＡ ＡＡＴＴＧ ＣＧＡＣＧ ＴＣＡＧＧ ＧＡＣＴＡ ＴＡＧＴＣ ＣＴＴＡＧ ＣＧＧＴＴ ＴＧＴＣＧ ＧＡＡＡＡ ＣＣＧＴＴ ＡＡＡＡＡ ＡＣＣＡＧ ＣＡＧＡＡ ＣＣＡＣＣ ＡＧＡＴＴ ＧＡＴＣＴ ＧＣＴＴＣ ＡＴＣＣＣ ＡＡＡＣＧ ＴＣＴＧＣ ＣＴＴＴＡ ＴＧＧＴＡ ＧＴＴＡＴ ＡＴＡＧＴ ＣＣＴＧＴ ＴＣＧＣＣ ＡＡＡＴＧ ＣＴＣＴＧ ＴＴＣＧＧ ＧＡＣＴＡ ＴＧＧＧＡ ＴＴＡＣＣ ＧＴＧＧＴ ＴＴＧＣＧ ＧＴＧＴＣ ＡＣＧＣＡ ＧＡＴＡＣ ＴＴＴＴＡ ＣＡＣＡＴ ＡＣＴＴＴ ＴＣＧＧＴ ＧＡＡＡＡ ＡＴＣＣＣ ＧＣＡＡＡ ＡＡＣＧＴ ＴＴＡＣＡ ＣＴＡＴＴ ＡＧＴＡＡ ＣＡＧＡＴ ＣＡＡＡＴ ＡＣＣＴＡ ＧＧＡＣＴ ＣＧＴＴＣ ＡＣＣＡＴ ＡＣＡＣＡ ＡＴＴＣＡ ＴＴＧＡＴ ＣＴＴＴＣ ＡＡＡＡＡ ＡＡＧＧＡ ＧＴＧＴＧ ＧＡＡＡＣ ＧＧＴＧＧ ＡＡＡＡＧ ＡＡＡＴＴ ＡＧＡＡＧ ＡＡＧＴＡ ＡＡＧＣＡ ＡＴＴＡＴ ＴＡＴＴＣ ＣＧＡＣＴ ＴＧＡＡＡ ＡＴＧＡＴ ＡＴＣＡＧ ＡＧＡＡＡ ＣＡＡＣＣ ＧＡＣＴＣ ＡＴＴＡＣ ＧＡＡＡＣ ＡＴＴＡＡ ＣＡＡＡＡ ＧＣＡＴＴ ＧＡＴＣＡ ＧＣＴＣＧ ＡＴＡＡＡ ＴＴＣＴＣ ＡＴＡＴＧ ＣＡＡＴＧ ＡＡＡＡＴ ＴＴＣＴＴ ＡＡＡＡＡ ＧＡＣＴＴ ＧＧＡＡＡ ＣＡＡＧＴ ＣＴＴＴＴ ＴＴＴＴＧ ＴＧＣＡＴ ＴＴＴＴＣ ＡＣＣＣＡ ＴＴＴＣＡ ＴＧＧＡＴ ＡＡＡＧＴ ＡＴＴＡＴ ＡＣＧＡＴ ＴＧＴＴＡ ＡＡＡＡＡ ＣＧＡＡＡ ＡＡＣＣＴ ＧＣＴＧＴ ＣＴＴＴＣ ＡＴＣＡＣ ＣＴＧＣＡ ＴＴＴＡＧ ＴＡＡＡＡ ＴＡＧＡＡ ＴＧＧＧＡ ＧＧＧＴＧ ＡＡＧＡＣ ＡＡＴＴＡ ＴＴＧＡＧ ＣＡＡＡＴ ＧＴＧＴＴ ＴＡＧＡＴ ＧＣＣＧＡ ＡＡＣＧＡ ＴＴＡＡＡ ＧＧＧＡＡ ＧＡＴＧＡ ＡＧＧＡＡ ＡＴＴＧＴ ＴＧＧＧＧ ＡＴＡＡＡ ＧＴＣＧＡ ＴＡＡＴＣ ＴＡＣＡＴ ＴＴＡＧＡ ＡＧＡＧＡ ＣＴＣＴＴ ＴＴＧＡＣ ＣＴＴＣＡ ＴＴＡＡＴ ＧＡＡＡＡ ＧＡＡＧＣ ＡＣＴＴＴ ＴＣＡＴＴ ＣＧＧＴＧ ＴＣＣＴＴ ＧＣＴＴＴ ＣＣＡＧＣ ＡＴＴＡＴ ＧＴＴＧＣ ＴＴＴＴＡ ＡＧＧＧＴ ＡＣＡＣＡ ＴＴＣＣＴ ＣＧＧＡＡ ＡＴＣＡＣ ＡＣＴＡＣ ＴＧＧＣＣ ＧＣＴＧＧ ＡＡＴＴＧ ＡＡＣＴＴ ＴＴＡＡＴ ＴＴＴＡＧ ＣＴＴＴＴ ＧＡＴＡＴ ＴＴＴＴＧ ＡＣＧＡＴ ＡＴＴＧＡ ＡＧＡＴＧ ＡＡＧＡＴ ＡＡＣＴＴ ＴＡＡＴＡ ＡＧＧＣＡ ＴＧＧＡＴ ＧＣＡＡＡ ＣＴＧＡＣ ＣＡＴＧＣ ＴＡＴＡＴ ＣＣＣＴＧ ＡＡＴＧＣ ＧＧＣＴＡ ＣＴＴＣＴ ＣＴＧＴＡ ＴＴＣＡＡ ＴＡＡＧＣ ＣＴＧＣＡ ＡＧＣＣＡ ＴＴＴＧＴ ＧＡＧＣＴ ＴＧＡＡＴ ＣＡＡＡＣ ＡＡＴＣＧ ＡＴ （Ａはアデニン、Ｔはチミン、Ｃはシトシン及びＧはグ
    アニンをそれぞれ示す。）
  2. 【請求項２】ＤＮＡ塩基配列がバチルス属細菌の染色体
    ＤＮＡ由来であることを特徴とする特許請求の範囲第１
    項に記載のたんぱく質分泌能を高めるＤＮＡ塩基配列。
  3. 【請求項３】バチルス属細菌がバチルス・アミロリキフ
    ァシエンス(Bacillus amyloliquefaciens)Ｆ株であるこ
    とを特徴とする特許請求の範囲第２項に記載のたんぱく
    質分泌能を高めるＤＮＡ塩基配列。
  4. 【請求項４】片方の鎖が次の順序であるＤＮＡ塩基配列
    を含むことを特徴とする組換え体プラスミド。 ＡＴＣＧＡ ＴＡＣＧＣ ＴＴＣＴＣ ＣＡＧＡＧ ＡＧＡＧＣ ＴＴＧＡＧ ＧＡＣＡＴ ＡＧＴＣＡ ＡＡＧＡＡ ＣＴＧＣＣ ＴＴＴＡＡ ＴＴＧＡＴ ＧＡＡＧＴ ＣＧＧＡＣ ＡＧＧＣＧ ＣＴＧＣＴ ＣＧＧＴＴ ＡＴＧＡＡ ＡＡＣＧＡ ＴＴＡＴＴ ＡＣＡＴＧ ＡＴＧＣＴ ＣＧＧＧＣ ＴＣＧＴＣ ＡＡＡＧＣ ＣＡＴＴＧ ＡＡＴＧＣ ＡＡＣＡＡ ＣＴＧＧＧ ＡＣＴＧＴ ＧＡＣＧＡ ＧＴＧＧＧ ＧＡＡＡＡ ＧＡＡＣＴ ＧＧＡＣＡ ＡＡＧＡＡ ＧＡＡＧＣ ＡＴＡＴＧ ＡＡＴＧＴ ＴＡＣＴＴ ＡＣＡＧＧ ＣＧＡＴＣ ＧＡＡＴＧ ＧＴＧＣＣ ＧＧＣＡＧ ＣＴＴＡＴ ＣＧＴＧＡ ＡＴＴＧＡ ＧＧＣＧＣ ＴＴＴＡＡ ＧＣＣＧＡ ＣＣＡＣＣ ＴＧＡＧＧ ＧＣＧＡＴ ＧＡＴＧＡ ＡＣＣＧＧ ＣＴＴＴＧ ＣＴＣＴＣ ＴＧＡＡＣ ＡＧＡＣＴ ＧＡＣＡＣ ＧＧＡＴＧ ＣＣＧＴＣ ＧＧＧＡＴ ＴＡＡＡＴ ＧＴＣＡＣ ＡＴＣＡＡ ＡＡＴＣＡ ＴＴＴＴＴ ＧＡＴＧＣ ＣＧＧＴＣ ＴＧＣＴＴ ＡＡＴＧＡ ＧＣＣＧＣ ＴＴＧＡＣ ＣＧＣＣＧ ＣＧＧＣＧ ＴＣＡＧＡ ＴＧＡＴＴ ＧＣＧＣＴ ＧＣＧＧＴ ＧＡＧＧＡ ＴＧＣＧＧ ＣＧＣＧＣ ＡＡＧＣＴ ＣＴＴＴＴ ＧＡＣＧＣ ＣＧＡＣＡ ＧＣＣＧＣ ＧＣＡＡＧ ＧＡＧＣＡ ＧＡＣＧＧ ＧＣＧＴＣ ＣＴＣＣＡ ＧＣＡＴＧ ＣＣＣＧＣ ＡＧＣＣＴ ＣＴＴＴＴ ＧＣＧＧＡ ＣＧＣＴＧ ＴＣＡＡＡ ＡＴＡＴＣ ＴＧＣＧＴ ＧＡＡＴＣ ＧＴＧＧＧ ＡＧＣＡＧ ＧＣＧＣＡ ＧＧＡＴＴ ＧＣＧＴＡ ＴＧＧＣＧ ＣＧＧＣＧ ＡＡＡＡＣ ＡＧＧＡＣ ＡＧＣＡＴ ＧＧＡＴＡ ＣＡＣＡＴ ＡＡＡＧＣ ＡＴＧＣＧ ＧＣＧＧＣ ＣＴＣＣＴ ＴＣＴＧＡ ＧＡＴＡＡ ＣＡＴＴＣ ＧＴＴＡＴ ＡＣＡＴＧ ＡＧＴＡＴ ＡＧＧＣＧ ＧＣＧＴＧ ＡＴＡＡＣ ＧＡＧＴＴ ＡＴＧＡＣ ＡＴＧＣＡ ＡＡＡＡＧ ＡＣＣＡＣ ＡＡＴＧＣ ＧＧＧＴＧ ＴＴＧＣＧ ＧＴＣＴＴ ＴＴＣＧＧ ＴＧＴＴＴ ＧＴＣＧＧ ＴＧＧＴＴ ＡＴＧＣＧ ＡＣＧＣＴ ＧＴＴＣＧ ＣＣＣＡＴ ＴＣＴＣＴ ＴＴＴＧＡ ＡＡＴＴＧ ＣＧＡＣＧ ＴＣＡＧＧ ＧＡＣＴＡ ＴＡＧＴＣ ＣＴＴＡＧ ＣＧＧＴＴ ＴＧＴＣＧ ＧＡＡＡＡ ＣＣＧＴＴ ＡＡＡＡＡ ＡＣＣＡＧ ＣＡＧＡＡ ＣＣＡＣＣ ＡＧＡＴＴ ＧＡＴＣＴ ＧＣＴＴＣ ＡＴＣＣＣ ＡＡＡＣＧ ＴＣＴＧＣ ＣＴＴＴＡ ＴＧＧＴＡ ＧＴＴＡＴ ＡＴＡＧＴ ＣＣＴＧＴ ＴＣＧＣＣ ＡＡＡＴＧ ＣＴＣＴＧ ＴＴＣＧＧ ＧＡＣＴＡ ＴＧＧＧＡ ＴＴＡＣＣ ＧＴＧＧＴ ＴＴＧＣＧ ＧＴＧＴＣ ＡＣＧＣＡ ＧＡＴＡＣ ＴＴＴＴＡ ＣＡＣＡＴ ＡＣＴＴＴ ＴＣＧＧＴ ＧＡＡＡＡ ＡＴＣＣＣ ＧＣＡＡＡ ＡＡＣＧＴ ＴＴＡＣＡ ＣＴＡＴＴ ＡＧＴＡＡ ＣＡＧＡＴ ＣＡＡＡＴ ＡＣＣＴＡ ＧＧＡＣＴ ＣＧＴＴＣ ＡＣＣＡＴ ＡＣＡＣＡ ＡＴＴＣＡ ＴＴＧＡＴ ＣＴＴＴＣ ＡＡＡＡＡ ＡＡＧＧＡ ＧＴＧＴＧ ＧＡＡＡＣ ＧＧＴＧＧ ＡＡＡＡＧ ＡＡＡＴＴ ＡＧＡＡＧ ＡＡＧＴＡ ＡＡＧＣＡ ＡＴＴＡＴ ＴＡＴＴＣ ＣＧＡＣＴ ＴＧＡＡＡ ＡＴＧＡＴ ＡＴＣＡＧ ＡＧＡＡＡ ＣＡＡＣＣ ＧＡＣＴＣ ＡＴＴＡＣ ＧＡＡＡＣ ＡＴＴＡＡ ＣＡＡＡＡ ＧＣＡＴＴ ＧＡＴＣＡ ＧＣＴＣＧ ＡＴＡＡＡ ＴＴＣＴＣ ＡＴＡＴＧ ＣＡＡＴＧ ＡＡＡＡＴ ＴＴＣＴＴ ＡＡＡＡＡ ＧＡＣＴＴ ＧＧＡＡＡ ＣＡＡＧＴ ＣＴＴＴＴ ＴＴＴＴＧ ＴＧＣＡＴ ＴＴＴＴＣ ＡＣＣＣＡ ＴＴＴＣＡ ＴＧＧＡＴ ＡＡＡＧＴ ＡＴＴＡＴ ＡＣＧＡＴ ＴＧＴＴＡ ＡＡＡＡＡ ＣＧＡＡＡ ＡＡＣＣＴ ＧＣＴＧＴ ＣＴＴＴＣ ＡＴＣＡＣ ＣＴＧＣＡ ＴＴＴＡＧ ＴＡＡＡＡ ＴＡＧＡＡ ＴＧＧＧＡ ＧＧＧＴＧ ＡＡＧＡＣ ＡＡＴＴＡ ＴＴＧＡＧ ＣＡＡＡＴ ＧＴＧＴＴ ＴＡＧＡＴ ＧＣＣＧＡ ＡＡＣＧＡ ＴＴＡＡＡ ＧＧＧＡＡ ＧＡＴＧＡ ＡＧＧＡＡ ＡＴＴＧＴ ＴＧＧＧＧ ＡＴＡＡＡ ＧＴＣＧＡ ＴＡＡＴＣ ＴＡＣＡＴ ＴＴＡＧＡ ＡＧＡＧＡ ＣＴＣＴＴ ＴＴＧＡＣ ＣＴＴＣＡ ＴＴＡＡＴ ＧＡＡＡＡ ＧＡＡＧＣ ＡＣＴＴＴ ＴＣＡＴＴ ＣＧＧＴＧ ＴＣＣＴＴ ＧＣＴＴＴ ＣＣＡＧＣ ＡＴＴＡＴ ＧＴＴＧＣ ＴＴＴＴＡ ＡＧＧＧＴ ＡＣＡＣＡ ＴＴＣＣＴ ＣＧＧＡＡ ＡＴＣＡＣ ＡＣＴＡＣ ＴＧＧＣＣ ＧＣＴＧＧ ＡＡＴＴＧ ＡＡＣＴＴ ＴＴＡＡＴ ＴＴＴＡＧ ＣＴＴＴＴ ＧＡＴＡＴ ＴＴＴＴＧ ＡＣＧＡＴ ＡＴＴＧＡ ＡＧＡＴＧ ＡＡＧＡＴ ＡＡＣＴＴ ＴＡＡＴＡ ＡＧＧＣＡ ＴＧＧＡＴ ＧＣＡＡＡ ＣＴＧＡＣ ＣＡＴＧＣ ＴＡＴＡＴ ＣＣＣＴＧ ＡＡＴＧＣ ＧＧＣＴＡ ＣＴＴＣＴ ＣＴＧＴＡ ＴＴＣＡＡ ＴＡＡＧＣ ＣＴＧＣＡ ＡＧＣＣＡ ＴＴＴＧＴ ＧＡＧＣＴ ＴＧＡＡＴ ＣＡＡＡＣ ＡＡＴＣＧ ＡＴ （Ａはアデニン、Ｔはチミン、Ｃはシトシン及びＧはグ
    アニンをそれぞれ示す。）
  5. 【請求項５】組換え体プラスミドを構成するベクター部
    分がバチルス属細菌で複製可能なプラスミド又はファー
    ジであることを特徴とする特許請求の範囲第４項記載の
    組換え体プラスミド。
  6. 【請求項６】ベクター部分がpUB110またはその誘導体で
    あることを特徴とする特許請求の範囲第５項に記載の組
    換え体プラスミド。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6112287A (ja) * 1984-06-26 1986-01-20 Lion Corp 組換え体ｄｎａ、その製造方法、それを含む細菌、それを用いた菌体外分泌酵素の製造方法、及び菌体外酵素分泌促進用ｄｎａ
JPS6387975A (ja) * 1986-10-02 1988-04-19 Agency Of Ind Science & Technol 枯草菌菌株
US20030219865A1 (en) * 2002-01-25 2003-11-27 Council Of Scientific And Industrial Research Novel regulatory elements of cold-inducible hutU gene from the Antarctic psychrotrophic bacterium Pseudomonas Syringae

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IE81141B1 (en) * 1983-06-24 2000-04-05 Genencor Int Procaryotic carbonyl hydrolases
JPS6091980A (ja) * 1983-07-06 1985-05-23 ジェネックス・コーポレイション プロテア−ゼ酵素の発現のための徴生物を製造する方法

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，１５４（２）（Ｍａｙ．，１９８３）Ｐ．８３１−８３７
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