JPH0662855A - プロテアーゼおよび関連ｄｎａ化合物 - Google Patents
プロテアーゼおよび関連ｄｎａ化合物Info
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- JPH0662855A JPH0662855A JP5125760A JP12576093A JPH0662855A JP H0662855 A JPH0662855 A JP H0662855A JP 5125760 A JP5125760 A JP 5125760A JP 12576093 A JP12576093 A JP 12576093A JP H0662855 A JPH0662855 A JP H0662855A
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- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 アミロイド前駆体タンパク質を切断する新規
プロテアーゼ、およびそれに関連する核酸化合物を提供
する。 【構成】 アミロイド前駆体タンパク質を切断するプロ
テアーゼタンパク質および関連核酸化合物を提供する。
このプロテアーゼはアミロイド前駆タンパク質のＭｅｔ
596−Ａｓｐ597の位置でこのタンパク質を切断する。こ
れらの化合物の生産方法、物質、および検定方法を提供
する。本発明の化合物はアルツハイマー病およびダウン
症候群のような神経疾患の特徴を明らかにするのに有用
である。
プロテアーゼ、およびそれに関連する核酸化合物を提供
する。 【構成】 アミロイド前駆体タンパク質を切断するプロ
テアーゼタンパク質および関連核酸化合物を提供する。
このプロテアーゼはアミロイド前駆タンパク質のＭｅｔ
596−Ａｓｐ597の位置でこのタンパク質を切断する。こ
れらの化合物の生産方法、物質、および検定方法を提供
する。本発明の化合物はアルツハイマー病およびダウン
症候群のような神経疾患の特徴を明らかにするのに有用
である。
Description
【０００１】
【従来の技術】β−アミロイドペプチド（β／Ａ４）と
して知られている４２〜４３残基のペプチドがアルツハ
イマー病およびダウン症候群に関与している。研究者ら
は、この４キロダルトン（kd）のタンパク質の脳内異常
蓄積がアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）と呼ばれ
る一層大きい前駆体タンパク質の切断に起因していると
仮定した。正常なＡＰＰの切断はＡ４領域内で起こるの
で、これと異なった切断事件は正常な完全鎖長が生じた
ときに起こることが判る。β／Ａ４のアミノ末端残基は
アスパラギン酸（ＡＳＰ）であることが最も多く、従っ
てこれらの事実は、ＡＰＰの５９６位のメチオニン（Ｍ
ｅｔ）[Ｍｅｔ596、Ｊ.カン(Kang)らのアミノ酸番号表
示方法（ネーチャー(Nature)、３２５巻、７３３頁（１
９８７年））を用いる]とＡｓｐ597の間で切断するプロ
テアーゼがアミロイドを生成することを示している。従
ってＡＰＰを切断してβ／Ａ４を生成するプロテアーゼ
はアルツハイマー病およびダウン症候群の特徴を明らか
にする重要な手段である。
して知られている４２〜４３残基のペプチドがアルツハ
イマー病およびダウン症候群に関与している。研究者ら
は、この４キロダルトン（kd）のタンパク質の脳内異常
蓄積がアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）と呼ばれ
る一層大きい前駆体タンパク質の切断に起因していると
仮定した。正常なＡＰＰの切断はＡ４領域内で起こるの
で、これと異なった切断事件は正常な完全鎖長が生じた
ときに起こることが判る。β／Ａ４のアミノ末端残基は
アスパラギン酸（ＡＳＰ）であることが最も多く、従っ
てこれらの事実は、ＡＰＰの５９６位のメチオニン（Ｍ
ｅｔ）[Ｍｅｔ596、Ｊ.カン(Kang)らのアミノ酸番号表
示方法（ネーチャー(Nature)、３２５巻、７３３頁（１
９８７年））を用いる]とＡｓｐ597の間で切断するプロ
テアーゼがアミロイドを生成することを示している。従
ってＡＰＰを切断してβ／Ａ４を生成するプロテアーゼ
はアルツハイマー病およびダウン症候群の特徴を明らか
にする重要な手段である。
【０００２】従来、研究者らは古典的なタンパク質精製
技術を利用することによって、異常な切断事件の特徴を
明らかにしようと企ててきた。これらの研究の結果、合
成ペプチドのＭｅｔ−Ａｓｐ結合を切断する部分的に精
製された６８キロダルトンのプロテアーゼが報告された
[Ｃ.アブラハム(Abraham)ら、ニューロバイオロジー・
オブ・エージング(Neurobiology of Aging)、１１Ａ
巻、３０３頁（１９９０年）]。１９９１年にアブラハ
ムおよびその共同研究者らは６８kdプロテアーゼの切断
パターンを既知のセリンプロテアーゼ類と比較した[Ｃ.
アブラハムら、バイオケミカル・アンド・バイオフィジ
カル・リサーチ・コンミュニムケーションズ(Biochemic
al and Biophysical Research Communications)、１７
４巻、７９０頁（１９９１年）]。その後、以前の研究
で観察した活性が、実際は２つの独立したプロテアーゼ
の作用であることが同じ研究者らによって報告された。
その１つはカルシウム依存性セリンプロテアーゼであ
り、もう１つはシステイン・メタロプロテアーゼである
ことが確認された[Ｃ.アブラハムら、ジャーナル・オブ
・セルラー・バイオケミストリー(Journal of Cellular
Biochemistry)、１５巻、１１５頁（１９９１年）、
Ｃ.アブラハムら、ジャーナル・オブ・ニューロケミス
トリー(Journal of Neurochemistry)、５７巻、５１０
９頁（１９９１年）]。これらのプロテアーゼの構造ま
たは特性については報告されなかった。
技術を利用することによって、異常な切断事件の特徴を
明らかにしようと企ててきた。これらの研究の結果、合
成ペプチドのＭｅｔ−Ａｓｐ結合を切断する部分的に精
製された６８キロダルトンのプロテアーゼが報告された
[Ｃ.アブラハム(Abraham)ら、ニューロバイオロジー・
オブ・エージング(Neurobiology of Aging)、１１Ａ
巻、３０３頁（１９９０年）]。１９９１年にアブラハ
ムおよびその共同研究者らは６８kdプロテアーゼの切断
パターンを既知のセリンプロテアーゼ類と比較した[Ｃ.
アブラハムら、バイオケミカル・アンド・バイオフィジ
カル・リサーチ・コンミュニムケーションズ(Biochemic
al and Biophysical Research Communications)、１７
４巻、７９０頁（１９９１年）]。その後、以前の研究
で観察した活性が、実際は２つの独立したプロテアーゼ
の作用であることが同じ研究者らによって報告された。
その１つはカルシウム依存性セリンプロテアーゼであ
り、もう１つはシステイン・メタロプロテアーゼである
ことが確認された[Ｃ.アブラハムら、ジャーナル・オブ
・セルラー・バイオケミストリー(Journal of Cellular
Biochemistry)、１５巻、１１５頁（１９９１年）、
Ｃ.アブラハムら、ジャーナル・オブ・ニューロケミス
トリー(Journal of Neurochemistry)、５７巻、５１０
９頁（１９９１年）]。これらのプロテアーゼの構造ま
たは特性については報告されなかった。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、以前に報告
された酵素類とは構造的に異なり、ＡＰＰの切断によっ
て、Ｍｅｔ596−Ａｓｐ597切断が期待される大きさのア
ミロイド原性断片を生じる新規酵素を提供する。従って
新規酵素はアルツハイマー病およびダウン症候群の特徴
をさらに明らかにするのに極めて有用である。そのうえ
本発明を利用することによって、これらの疾患およびそ
の他の関連疾患の処置をもたらし得る。
された酵素類とは構造的に異なり、ＡＰＰの切断によっ
て、Ｍｅｔ596−Ａｓｐ597切断が期待される大きさのア
ミロイド原性断片を生じる新規酵素を提供する。従って
新規酵素はアルツハイマー病およびダウン症候群の特徴
をさらに明らかにするのに極めて有用である。そのうえ
本発明を利用することによって、これらの疾患およびそ
の他の関連疾患の処置をもたらし得る。
【０００４】現在までのところ痴呆そのものが完全に証
明されるまで、ヒトでアルツハイマー病を診断する満足
すべき手段はなかった。アルツハイマー病によって痴呆
が起こったと確認するには、患者の脳の死後剖検が必要
である。本発明では、患者がまだ生存している間に、ア
ルツハイマー病の患者またはアルツハイマー病の発病傾
向をもつ患者を決定する手段を提供する。
明されるまで、ヒトでアルツハイマー病を診断する満足
すべき手段はなかった。アルツハイマー病によって痴呆
が起こったと確認するには、患者の脳の死後剖検が必要
である。本発明では、患者がまだ生存している間に、ア
ルツハイマー病の患者またはアルツハイマー病の発病傾
向をもつ患者を決定する手段を提供する。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本明細書の記載内容を明
白にし、本発明の理解を助ける目的のため、下記の事項
について定義する。
白にし、本発明の理解を助ける目的のため、下記の事項
について定義する。
【０００６】「２９３細胞」とは、グラハムらが報告し
た広く入手可能な形質転換したヒト初代胎児性腎細胞系
[Ｆ.Ｌ.グラハム(Graham)ら、ジャーナル・オブ・ジェ
ネラル・バイロロジー(Journal of General Virolog
y)、３６巻、５９〜７２頁（１９７７年）]をいう。こ
の細胞系は、例えばジ・アメリカン・タイプ・カルチャ
ー・コレクション(the American Type Culture Collect
ion)、１２３０１、パークローン・ドライブ(Parklawn
Drive)、ロックビル(Rockville)、マリーランド(Maryla
nd)、１０８５２−１７７６（ＡＴＣＣ）から、受入番
号ＡＴＣＣ ＣＲＬ１５７３のもとに入手し得る。
た広く入手可能な形質転換したヒト初代胎児性腎細胞系
[Ｆ.Ｌ.グラハム(Graham)ら、ジャーナル・オブ・ジェ
ネラル・バイロロジー(Journal of General Virolog
y)、３６巻、５９〜７２頁（１９７７年）]をいう。こ
の細胞系は、例えばジ・アメリカン・タイプ・カルチャ
ー・コレクション(the American Type Culture Collect
ion)、１２３０１、パークローン・ドライブ(Parklawn
Drive)、ロックビル(Rockville)、マリーランド(Maryla
nd)、１０８５２−１７７６（ＡＴＣＣ）から、受入番
号ＡＴＣＣ ＣＲＬ１５７３のもとに入手し得る。
【０００７】「ＡＶ１２細胞」とは、受入番号ＡＴＣＣ
ＣＲＬ９５９５のもとにＡＴＣＣから入手し得る別の
広く入手可能な細胞系をいう。
ＣＲＬ９５９５のもとにＡＴＣＣから入手し得る別の
広く入手可能な細胞系をいう。
【０００８】「アミロイド原性断片」とは、β／Ａ４ペ
プチドを含有しているＡＰＰ断片をいう。
プチドを含有しているＡＰＰ断片をいう。
【０００９】「配列番号１の機能的な化合物」とは、Ａ
ＰＰを切断できる配列番号１を含んでいる化合物をい
う。
ＰＰを切断できる配列番号１を含んでいる化合物をい
う。
【００１０】「クニッツ様ドメイン」とは、大豆トリプ
シンインヒビターと類似のプロテアーゼインヒビター、
または大豆トリプシンインヒビターと類似のプロテアー
ゼインヒビターを暗号化している核酸配列をいう。例え
ばＰ.ポンテ(Ponte)ら[ネーチャー、３３１巻、５２５
頁（１９８８年）]、またはＲ.Ｅ.タンジ(Tanzi)ら[ネ
ーチャー、３３１巻、５２８頁（１９８８年）]、また
はＮ.キタグチら[ネーチャー、３３１巻、５３０頁（１
９８８年）]が報告したＡＰＰのクニッツ・プロテアー
ゼインヒビター（ＫＰＩ）領域はクニッツ様ドメインで
ある。
シンインヒビターと類似のプロテアーゼインヒビター、
または大豆トリプシンインヒビターと類似のプロテアー
ゼインヒビターを暗号化している核酸配列をいう。例え
ばＰ.ポンテ(Ponte)ら[ネーチャー、３３１巻、５２５
頁（１９８８年）]、またはＲ.Ｅ.タンジ(Tanzi)ら[ネ
ーチャー、３３１巻、５２８頁（１９８８年）]、また
はＮ.キタグチら[ネーチャー、３３１巻、５３０頁（１
９８８年）]が報告したＡＰＰのクニッツ・プロテアー
ゼインヒビター（ＫＰＩ）領域はクニッツ様ドメインで
ある。
【００１１】「ｐＲｃ／ザイム(Zyme)」とは、修飾した
ｐＲｃ／ＣＭＶ真核性発現ベクターをいい、ｐＲｃ／Ｃ
ＭＶベクターは商業的に入手可能である[インビトロジ
ェン・コーポレーション(Invitrogen Corporation)、３
９８５、ソレント(Sorrent)、バレイ(Valley)Ｂｌｖ
ｄ.、シュート(Suite)Ｂ、サンジエゴ(San Diego)、カ
リフォルニア(California)、９２１２１]。プラスミド
ｐＲｃ／ザイムはヒト・シトメガロウイルスプロモータ
ーおよびエンハンサー、ウシ成長ホルモン・ポリアデニ
ル化シグナル、ネオマイシン耐性遺伝子、エシェリキア
・コリ(E. coli)におけるアンピシリン耐性マーカーと
して有用なβ−ラクタマーゼ遺伝子、およびその他の多
数の特徴（１９９１年、インビトロジェン社カタログ、
２９頁）および全ザイムのコード領域を含んだ１４５１
塩基対のＮｏｔＩ／ＳａｌＩ挿入体を含んでいる。
ｐＲｃ／ＣＭＶ真核性発現ベクターをいい、ｐＲｃ／Ｃ
ＭＶベクターは商業的に入手可能である[インビトロジ
ェン・コーポレーション(Invitrogen Corporation)、３
９８５、ソレント(Sorrent)、バレイ(Valley)Ｂｌｖ
ｄ.、シュート(Suite)Ｂ、サンジエゴ(San Diego)、カ
リフォルニア(California)、９２１２１]。プラスミド
ｐＲｃ／ザイムはヒト・シトメガロウイルスプロモータ
ーおよびエンハンサー、ウシ成長ホルモン・ポリアデニ
ル化シグナル、ネオマイシン耐性遺伝子、エシェリキア
・コリ(E. coli)におけるアンピシリン耐性マーカーと
して有用なβ−ラクタマーゼ遺伝子、およびその他の多
数の特徴（１９９１年、インビトロジェン社カタログ、
２９頁）および全ザイムのコード領域を含んだ１４５１
塩基対のＮｏｔＩ／ＳａｌＩ挿入体を含んでいる。
【００１２】「ｐＳザイム(pSZyme)」とは、修飾したエ
シェリキア・コリ・クローニングベクターｐＳＰＯＲＴ
−１（商標）[Ｅ.Ｙ.チェン(Chen)ら、ＤＮＡ、４巻、
１６５頁（１９８５年）]をいい、プラスミドｐＳＰＯ
ＲＴ−１（商標）は商業的に入手可能である[ギブコ(Gi
bco)−ＢＲＬ社、８４００、ヘルガーマン・コート(Her
german Court)、ガイザースバーグ(Gaithersburg)、マ
リーランド、２０８７７]。このプラスミドはｐＵＣベ
クターからの複製開始点を含んでいる。このプラスミド
はＣ.ヤニッシュ・ペロン(Yanisch-Perron)ら[ジーン(G
ene)、３３巻、１０３〜１１９頁（１９８５年）]に報
告されており、アンピシリン耐性を付与するβ−ラクタ
マーゼ遺伝子、ザイムの全コード領域を含んだ１４５１
塩基対のＮｏｔＩ／ＳａｌＩ挿入体、およびその他の特
徴を含んでいる。
シェリキア・コリ・クローニングベクターｐＳＰＯＲＴ
−１（商標）[Ｅ.Ｙ.チェン(Chen)ら、ＤＮＡ、４巻、
１６５頁（１９８５年）]をいい、プラスミドｐＳＰＯ
ＲＴ−１（商標）は商業的に入手可能である[ギブコ(Gi
bco)−ＢＲＬ社、８４００、ヘルガーマン・コート(Her
german Court)、ガイザースバーグ(Gaithersburg)、マ
リーランド、２０８７７]。このプラスミドはｐＵＣベ
クターからの複製開始点を含んでいる。このプラスミド
はＣ.ヤニッシュ・ペロン(Yanisch-Perron)ら[ジーン(G
ene)、３３巻、１０３〜１１９頁（１９８５年）]に報
告されており、アンピシリン耐性を付与するβ−ラクタ
マーゼ遺伝子、ザイムの全コード領域を含んだ１４５１
塩基対のＮｏｔＩ／ＳａｌＩ挿入体、およびその他の特
徴を含んでいる。
【００１３】「配列番号１の一部」とは、配列番号１の
少なくとも６個の連続したアミノ酸残基をいう。
少なくとも６個の連続したアミノ酸残基をいう。
【００１４】「ｍＲＮＡ」とは、イン・ビトロまたはイ
ン・ビボの何れかで転写されたリボ核酸（ＲＮＡ）をい
い、例えばＲＮＡポリメラーゼによるＤＮＡ暗号配列の
転写によってイン・ビトロで調製されたＲＮＡ転写物を
含む。
ン・ビボの何れかで転写されたリボ核酸（ＲＮＡ）をい
い、例えばＲＮＡポリメラーゼによるＤＮＡ暗号配列の
転写によってイン・ビトロで調製されたＲＮＡ転写物を
含む。
【００１５】「配列番号１または機能的なその等価物」
とは、配列番号１、または配列番号１のアミノ酸配列の
保存的な変化物をいい、ここでその保存的変化とは、配
列番号１と実質的に同一な生物学的、生化学的、化学
的、物理学的、および構造的品質を示す化合物を生じ
る。
とは、配列番号１、または配列番号１のアミノ酸配列の
保存的な変化物をいい、ここでその保存的変化とは、配
列番号１と実質的に同一な生物学的、生化学的、化学
的、物理学的、および構造的品質を示す化合物を生じ
る。
【００１６】「配列番号３」とは、以下に示すＤＮＡ配
列をいう。
列をいう。
【化３】ATG GCT GGC GGC ATC ATA GTC AGG G
【００１７】「配列番号４」とは、以下に示すＤＮＡ配
列をいう。
列をいう。
【化４】AAC CGA ATC TTC AGG TCT TCC TGG GG
【００１８】「配列番号５」とは、以下に示すＤＮＡ配
列をいう。
列をいう。
【化５】TCG CTC TCT CCT GGG GAC ACA GA
【００１９】「配列番号６」とは、以下に示すＤＮＡ配
列をいう。
列をいう。
【化６】CCA GGT GCT ATT CCA TGT ATG TCA TAG
【００２０】「配列番号７」とは、以下に示すＤＮＡ配
列をいう。
列をいう。
【化７】TCT GTG TCC CCA GGA GAG AGC GA
【００２１】「配列番号８」とは、以下に示すＤＮＡ配
列をいう。
列をいう。
【化８】ATA GTG AAG CTG TCT TCT CAA T
【００２２】「トランスフェクション」とは、宿主細胞
ゲノムへの核酸の組込みを伴ない、または伴なわない宿
主細胞への核酸の任意の伝達をいう。
ゲノムへの核酸の組込みを伴ない、または伴なわない宿
主細胞への核酸の任意の伝達をいう。
【００２３】「ザイム」とは、配列番号１のアミノ酸配
列、またはその機能的な等価物をいう。
列、またはその機能的な等価物をいう。
【００２４】「ザイム関連バンドの立体配置」とは、本
明細書に記載した制限断片多型の２種のバンド立体配置
から選ばれた２種のバンド配置のうちの１つをいう。一
方のパターンは２４００塩基対バンドを示すが、２５０
０塩基対バンドを示さない。他方のパターンは２５００
塩基対バンドを示すが、２４００塩基対バンドを示さな
い。
明細書に記載した制限断片多型の２種のバンド立体配置
から選ばれた２種のバンド配置のうちの１つをいう。一
方のパターンは２４００塩基対バンドを示すが、２５０
０塩基対バンドを示さない。他方のパターンは２５００
塩基対バンドを示すが、２４００塩基対バンドを示さな
い。
【００２５】本発明は、下記の配列：
【化９】 [以下、配列番号１という]で示されるアミノ酸配列、ま
たは機能的なその等価物を含むアミノ酸化合物を提供す
る。特に配列番号１であるアミノ酸化合物は好ましい。
たは機能的なその等価物を含むアミノ酸化合物を提供す
る。特に配列番号１であるアミノ酸化合物は好ましい。
【００２６】当業者であれば、配列番号１の若干の変更
がアミノ酸化合物の働きを変え得ないことを認めるであ
ろう。例えばある疎水性アミノ酸は他の疎水性アミノ酸
と交換し得、類似の側鎖をもつアミノ酸は互いに交換し
得、塩基性アミノ酸は他の塩基性アミノ酸と交換し得、
酸性アミノ酸は他の酸性アミノ酸と交換し得、小型アミ
ノ酸は他の小型アミノ酸と交換し得、そのほか種々の保
存的な入れ替えを実施し得る。例示したアミノ酸化合物
と実質的に同一の態様で、実質的に同一の働きを付与す
るこれらの変化したアミノ酸化合物も、本発明の範囲に
包含される。
がアミノ酸化合物の働きを変え得ないことを認めるであ
ろう。例えばある疎水性アミノ酸は他の疎水性アミノ酸
と交換し得、類似の側鎖をもつアミノ酸は互いに交換し
得、塩基性アミノ酸は他の塩基性アミノ酸と交換し得、
酸性アミノ酸は他の酸性アミノ酸と交換し得、小型アミ
ノ酸は他の小型アミノ酸と交換し得、そのほか種々の保
存的な入れ替えを実施し得る。例示したアミノ酸化合物
と実質的に同一の態様で、実質的に同一の働きを付与す
るこれらの変化したアミノ酸化合物も、本発明の範囲に
包含される。
【００２７】当業者であれば、このタンパク質が多数の
異なった方法によって合成できることは理解し得よう。
本発明のすべてのアミノ酸化合物は、固相ペプチド合成
法または組換え法等を含む当業界で既知の化学的な方法
によって製造できる。上記の方法はともに米国特許第４
６１７１４９号に記載されている。高収量を望むのな
ら、組換え法が好ましい。任意の所望のＤＮＡ配列を組
み立てる一般的な方法はブラウンら[ブラウン(Brown)
ら、メソッズ・イン・エンジモロジー(Methods inEnzym
ology)、６８巻、１０９頁（１９７９年）]によって報
告されている。
異なった方法によって合成できることは理解し得よう。
本発明のすべてのアミノ酸化合物は、固相ペプチド合成
法または組換え法等を含む当業界で既知の化学的な方法
によって製造できる。上記の方法はともに米国特許第４
６１７１４９号に記載されている。高収量を望むのな
ら、組換え法が好ましい。任意の所望のＤＮＡ配列を組
み立てる一般的な方法はブラウンら[ブラウン(Brown)
ら、メソッズ・イン・エンジモロジー(Methods inEnzym
ology)、６８巻、１０９頁（１９７９年）]によって報
告されている。
【００２８】他の生産経路も周知である。真核細胞での
発現は配列番号２を経由して達成できる（後記）。例え
ば配列番号１を暗号化しているＤＮＡを含んでおり、シ
ミアンウイルス４０、シトメガロウイルス、またはマウ
ス乳がんウイルスで誘導された発現ベクターを使用し
て、真核細胞でアミノ酸化合物を生産することができ
る。また当業界で周知のように、ある種のウイルスも好
適なベクターである。例えばアデノウイルス、ワクシニ
アウイルス、ヘルペスウイルス、バキュロウイルスおよ
びラウス肉腫ウイルスは有用である。そのような方法は
米国特許第４７７５６２４号に報告されている。発現に
関する数種の別法が、サンブルックら[Ｊ.サンブルック
(Sambrook)ら、モレキュラー・クローニング(Molecular
Cloning)、ア・ラボラトリー・マニュアル(A Laborato
ry Manual)、第１６および１７章（１９８９年）]によ
って報告されている。
発現は配列番号２を経由して達成できる（後記）。例え
ば配列番号１を暗号化しているＤＮＡを含んでおり、シ
ミアンウイルス４０、シトメガロウイルス、またはマウ
ス乳がんウイルスで誘導された発現ベクターを使用し
て、真核細胞でアミノ酸化合物を生産することができ
る。また当業界で周知のように、ある種のウイルスも好
適なベクターである。例えばアデノウイルス、ワクシニ
アウイルス、ヘルペスウイルス、バキュロウイルスおよ
びラウス肉腫ウイルスは有用である。そのような方法は
米国特許第４７７５６２４号に報告されている。発現に
関する数種の別法が、サンブルックら[Ｊ.サンブルック
(Sambrook)ら、モレキュラー・クローニング(Molecular
Cloning)、ア・ラボラトリー・マニュアル(A Laborato
ry Manual)、第１６および１７章（１９８９年）]によ
って報告されている。
【００２９】本発明の別の実施態様では、配列番号１を
暗号化している核酸配列を含んだ核酸化合物を包含す
る。当業者であれば理解し得るように、本発明のアミノ
酸化合物は大部分のアミノ酸が１組以上の核酸トリプレ
ットによって暗号化されている遺伝コードの同義性のた
め、多数の異なった核酸配列によって暗号化できる。そ
れらの入れ替わった核酸配列は同一のアミノ酸配列を暗
号化しているから、本発明はさらにこれらの入れ替わっ
た核酸配列を包含する。好ましくは核酸化合物は、ＤＮ
Ａ、センスまたはアンチセンスｍＲＮＡである。ザイム
を暗号化しているＤＮＡ化合物の最も好ましい具体例
は、下記の配列：
暗号化している核酸配列を含んだ核酸化合物を包含す
る。当業者であれば理解し得るように、本発明のアミノ
酸化合物は大部分のアミノ酸が１組以上の核酸トリプレ
ットによって暗号化されている遺伝コードの同義性のた
め、多数の異なった核酸配列によって暗号化できる。そ
れらの入れ替わった核酸配列は同一のアミノ酸配列を暗
号化しているから、本発明はさらにこれらの入れ替わっ
た核酸配列を包含する。好ましくは核酸化合物は、ＤＮ
Ａ、センスまたはアンチセンスｍＲＮＡである。ザイム
を暗号化しているＤＮＡ化合物の最も好ましい具体例
は、下記の配列：
【化１０】 [以下、配列番号２という]を有するものである。ただし
センスおよびアンチセンスｍＲＮＡである核酸化合物も
好ましい。
センスおよびアンチセンスｍＲＮＡである核酸化合物も
好ましい。
【００３０】本発明はまた、配列番号１または機能的な
その等価物を暗号化した核酸を含んでいる核酸ベクター
を提供する。好ましい核酸ベクターはＤＮＡである核酸
ベクターである。最も好ましいものは、配列番号２であ
るＤＮＡ配列を含んでいるＤＮＡベクターである。特に
好ましいＤＮＡベクターはプラスミドｐＳザイムであ
る。
その等価物を暗号化した核酸を含んでいる核酸ベクター
を提供する。好ましい核酸ベクターはＤＮＡである核酸
ベクターである。最も好ましいものは、配列番号２であ
るＤＮＡ配列を含んでいるＤＮＡベクターである。特に
好ましいＤＮＡベクターはプラスミドｐＳザイムであ
る。
【００３１】エシェリキア・コリ／ｐＳザイムは配列番
号２を含んだクローニングベクターを含んでいるが、こ
の株をザ・ノーザン・レジオナル・リサーチ・ラボラト
リーズ(The Northern Regional Research Laboratorie
s)（ＮＲＲＬ）、アグリカルチュラル・リサーチ・サー
ビス(Agricultural Research Service)、Ｕ.Ｓ.デパー
トメント・オブ・アグリカルチャー(U.S. Department o
f Agriculture)、ペオリア(Peoria)、イリノイズ(Illin
ois)、６１６０４に寄託し（１９９２年４月２９日）、
ＮＲＲＬ Ｂ−１８９７１の受入番号のもとにその保存
培養株の一つとして貯蔵された。配列番号２は、例えば
１４５１塩基対のＮｏｔＩ／ＳａｌＩ制限断片としてプ
ラスミドから単離できる。その他の断片も配列番号２を
得るのに有用である。
号２を含んだクローニングベクターを含んでいるが、こ
の株をザ・ノーザン・レジオナル・リサーチ・ラボラト
リーズ(The Northern Regional Research Laboratorie
s)（ＮＲＲＬ）、アグリカルチュラル・リサーチ・サー
ビス(Agricultural Research Service)、Ｕ.Ｓ.デパー
トメント・オブ・アグリカルチャー(U.S. Department o
f Agriculture)、ペオリア(Peoria)、イリノイズ(Illin
ois)、６１６０４に寄託し（１９９２年４月２９日）、
ＮＲＲＬ Ｂ−１８９７１の受入番号のもとにその保存
培養株の一つとして貯蔵された。配列番号２は、例えば
１４５１塩基対のＮｏｔＩ／ＳａｌＩ制限断片としてプ
ラスミドから単離できる。その他の断片も配列番号２を
得るのに有用である。
【００３２】またＤＮＡ配列は、ＡＢＳ[アプライド・
バイオシステムズ(Applied Biosystems)、８５０、リン
カーン・センタードライブ(Lincoln Centre Drive)、フ
ォスターシティー(Foster City)、ＣＡ、９４４０４]３
８０Ｂ ＤＮＡシンセサイザーのような商業的に入手可
能な自動ＤＮＡシンセサイザーを使用して合成すること
ができる。またＤＮＡ配列は、米国特許第４８８９８１
８号に報告されたポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によ
って生産することができる。
バイオシステムズ(Applied Biosystems)、８５０、リン
カーン・センタードライブ(Lincoln Centre Drive)、フ
ォスターシティー(Foster City)、ＣＡ、９４４０４]３
８０Ｂ ＤＮＡシンセサイザーのような商業的に入手可
能な自動ＤＮＡシンセサイザーを使用して合成すること
ができる。またＤＮＡ配列は、米国特許第４８８９８１
８号に報告されたポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によ
って生産することができる。
【００３３】またこれらのベクターの制限断片も提供さ
れる。好ましい断片は、ｐＳザイムの１４５１塩基対の
ＮｏｔＩ／ＳａｌＩ制限断片、８０３塩基対のＢｓｒＢ
Ｉ／Ｅｓｐ３Ｉ制限断片、および８１５塩基対のＥｃｏ
ＮＩ／ＢｆａＩ制限断片である。
れる。好ましい断片は、ｐＳザイムの１４５１塩基対の
ＮｏｔＩ／ＳａｌＩ制限断片、８０３塩基対のＢｓｒＢ
Ｉ／Ｅｓｐ３Ｉ制限断片、および８１５塩基対のＥｃｏ
ＮＩ／ＢｆａＩ制限断片である。
【００３４】さらに本発明のＤＮＡベクターは好ましく
は配列番号２、または機能的なその対応物の発現を推進
させる位置にプロモーターを含む。プロモーターがヒト
胎児性腎細胞（２９３細胞）、ＡＶ１２細胞、酵母細
胞、またはエシェリキア・コリ(Escherichia coli)細胞
で機能するようなベクターが好ましい。最も好ましいＤ
ＮＡ発現ベクターはプラスミドｐＲｃ／ザイムである。
は配列番号２、または機能的なその対応物の発現を推進
させる位置にプロモーターを含む。プロモーターがヒト
胎児性腎細胞（２９３細胞）、ＡＶ１２細胞、酵母細
胞、またはエシェリキア・コリ(Escherichia coli)細胞
で機能するようなベクターが好ましい。最も好ましいＤ
ＮＡ発現ベクターはプラスミドｐＲｃ／ザイムである。
【００３５】標準的な手技を用いてエシェリキア・コリ
から単離できるプラスミドｐＳザイムを容易に修飾し
て、例えばエシェリキア・コリ、サッカロマイセテス(S
accharomycetes)科に属する酵母、スポドプテラ(Spodop
tera)属のフォール・アーミーウオーム(fall armyworm)
の卵巣に由来するＳｆ９細胞（バキュロウイルス発現系
の宿主として普通に使用される）等を含むさまざまな生
物で、ザイムを生産する発現ベクターを組み立てる[こ
れらの手技については、例えばサンブルックら（前掲）
参照]。
から単離できるプラスミドｐＳザイムを容易に修飾し
て、例えばエシェリキア・コリ、サッカロマイセテス(S
accharomycetes)科に属する酵母、スポドプテラ(Spodop
tera)属のフォール・アーミーウオーム(fall armyworm)
の卵巣に由来するＳｆ９細胞（バキュロウイルス発現系
の宿主として普通に使用される）等を含むさまざまな生
物で、ザイムを生産する発現ベクターを組み立てる[こ
れらの手技については、例えばサンブルックら（前掲）
参照]。
【００３６】現在の文献はＡＶ１２発現ベクターを組み
立て、ＡＶ１２宿主細胞をトランスフェクトする技術を
含んでいる（例えば米国特許第４９９２３７３号参
照）。また現在の文献は２９３発現ベクターを組み立
て、２９３宿主細胞をトランスフェクトする多数の技術
を含んでいる。
立て、ＡＶ１２宿主細胞をトランスフェクトする技術を
含んでいる（例えば米国特許第４９９２３７３号参
照）。また現在の文献は２９３発現ベクターを組み立
て、２９３宿主細胞をトランスフェクトする多数の技術
を含んでいる。
【００３７】必要であれば周知の技術を用い、単に好適
な調節要素を置き換えることによって、２９３細胞を利
用する組立てのプロトコールをその他の細胞系の類似の
ベクター組立てに応用することができる。使用し得るプ
ロモーターは、例えばチミジンキナーゼプロモーター、
メタロチオニンプロモーター、熱ショックプロモータ
ー、免疫グロブリンプロモーター、またはマウス乳がん
ウイルスプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ヘルペ
スウイルスプロモーター、ＢＫウイルスプロモーターの
ような種々のウイルスプロモーター等が挙げられる。さ
らに「共通」配列から誘導し、または他のプロモーター
のハイブリッドとして作り出して人工的に組み立てたプ
ロモーターも本発明を実施する過程で使用し得る。
な調節要素を置き換えることによって、２９３細胞を利
用する組立てのプロトコールをその他の細胞系の類似の
ベクター組立てに応用することができる。使用し得るプ
ロモーターは、例えばチミジンキナーゼプロモーター、
メタロチオニンプロモーター、熱ショックプロモータ
ー、免疫グロブリンプロモーター、またはマウス乳がん
ウイルスプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ヘルペ
スウイルスプロモーター、ＢＫウイルスプロモーターの
ような種々のウイルスプロモーター等が挙げられる。さ
らに「共通」配列から誘導し、または他のプロモーター
のハイブリッドとして作り出して人工的に組み立てたプ
ロモーターも本発明を実施する過程で使用し得る。
【００３８】また本発明のＤＮＡ化合物はプライマーお
よびプローブを含む。配列番号１、またはその一部を暗
号化している少なくとも１８個連続した塩基対からなる
核酸化合物は本発明に包含される。ＤＮＡであるプロー
ブまたはプライマーは好ましい。最も好ましいプローブ
またはプライマーは配列番号３および配列番号４であ
る。当業者にとって、プローブおよびプライマーに関連
する技術が周知であることは明白であろう。
よびプローブを含む。配列番号１、またはその一部を暗
号化している少なくとも１８個連続した塩基対からなる
核酸化合物は本発明に包含される。ＤＮＡであるプロー
ブまたはプライマーは好ましい。最も好ましいプローブ
またはプライマーは配列番号３および配列番号４であ
る。当業者にとって、プローブおよびプライマーに関連
する技術が周知であることは明白であろう。
【００３９】例えば配列番号３または配列番号４の全部
または一部を、暗号配列へハイブリッド形成するのに使
用し得る。ついで周知の技術を用いるポリメラーゼ連鎖
反応（ＰＣＲ）増幅を用いて、完全鎖長の配列を生産で
きる。ついで完全鎖長の配列を任意の最も適したベクタ
ーへサブクローンすることができる。
または一部を、暗号配列へハイブリッド形成するのに使
用し得る。ついで周知の技術を用いるポリメラーゼ連鎖
反応（ＰＣＲ）増幅を用いて、完全鎖長の配列を生産で
きる。ついで完全鎖長の配列を任意の最も適したベクタ
ーへサブクローンすることができる。
【００４０】別法として、通常の手段によってｃＤＮＡ
ライブラリーをスクリーニングするため、配列番号３ま
たは配列番号４を５'末端で放射能で標識し得る。また
結合したｍＲＮＡ転写物を逆転写するため、フィルター
へ結合したザイム暗号化ＤＮＡの任意の一片を全ｍＲＮ
Ａ転写物で飽和し得る。
ライブラリーをスクリーニングするため、配列番号３ま
たは配列番号４を５'末端で放射能で標識し得る。また
結合したｍＲＮＡ転写物を逆転写するため、フィルター
へ結合したザイム暗号化ＤＮＡの任意の一片を全ｍＲＮ
Ａ転写物で飽和し得る。
【００４１】プライマーおよびプローブは当業界周知の
手段によって入手し得る。例えばｐＳザイムを単離した
ら、制限酵素およびそれに続くゲル分離を用いて、最も
適した断片を単離し得る。
手段によって入手し得る。例えばｐＳザイムを単離した
ら、制限酵素およびそれに続くゲル分離を用いて、最も
適した断片を単離し得る。
【００４２】本発明のもう１つの態様は、ザイムのゲノ
ムクローンである。好ましいゲノムクローンは、配列番
号１を暗号化しているＤＮＡ断片とハイブリッド形成す
るヒト染色体１９ライブラリーからの４.０キロベース
のＨｉｎｄIII断片である。これは、配列番号２または
その一部とのハイブリダイゼーションによって得ること
ができる。例えば配列番号３および配列番号４を放射能
標識し、ついで対応するゲノムＤＮＡを同定し、単離す
るために、染色体１９ライブラリーをプローブするのに
使用し得る。
ムクローンである。好ましいゲノムクローンは、配列番
号１を暗号化しているＤＮＡ断片とハイブリッド形成す
るヒト染色体１９ライブラリーからの４.０キロベース
のＨｉｎｄIII断片である。これは、配列番号２または
その一部とのハイブリダイゼーションによって得ること
ができる。例えば配列番号３および配列番号４を放射能
標識し、ついで対応するゲノムＤＮＡを同定し、単離す
るために、染色体１９ライブラリーをプローブするのに
使用し得る。
【００４３】本発明はまた、ドナーのヒトＤＮＡを
（１）制限酵素ＴａｑＩで消化し、（２）標識したザイ
ムＤＮＡとハイブリッド形成して、ザイム関連バンドの
形態（立体配置）を明らかにし、（３）アルツハイマー
病の症状を示し、またはかって症状を示したことがある
ドナー家族の構成員の、同様に消化しハイブリッド形成
したバンドの形態と比較することからなるアルツハイマ
ー病の診断検定を提供する。好ましくはアルツハイマー
病の診断検定では、ドナーのヒトＤＮＡ供給源として血
液試料を利用する。
（１）制限酵素ＴａｑＩで消化し、（２）標識したザイ
ムＤＮＡとハイブリッド形成して、ザイム関連バンドの
形態（立体配置）を明らかにし、（３）アルツハイマー
病の症状を示し、またはかって症状を示したことがある
ドナー家族の構成員の、同様に消化しハイブリッド形成
したバンドの形態と比較することからなるアルツハイマ
ー病の診断検定を提供する。好ましくはアルツハイマー
病の診断検定では、ドナーのヒトＤＮＡ供給源として血
液試料を利用する。
【００４４】ゲノムＤＮＡが本発明で提供され、ザイム
関連制限断片鎖長の多型が本発明の開示によって確認さ
れるから、この操作の残りの部分は当業界既知の方法に
よって達成し得る。例えば米国特許第４６６６８２８号
には、これらの操作が記載されている[例えばＢ.リュー
イン(Lewin)、ジーンズ(Genes)、７８頁（１９８７
年）、レビュー・レストリクション・フラグメント・レ
ングス・ポリモルフィズム・テクニクス・アンド・セオ
リー(review restriction fragment length polymorphi
sm techniques and theory)のような多数の参考文献が
ある]。
関連制限断片鎖長の多型が本発明の開示によって確認さ
れるから、この操作の残りの部分は当業界既知の方法に
よって達成し得る。例えば米国特許第４６６６８２８号
には、これらの操作が記載されている[例えばＢ.リュー
イン(Lewin)、ジーンズ(Genes)、７８頁（１９８７
年）、レビュー・レストリクション・フラグメント・レ
ングス・ポリモルフィズム・テクニクス・アンド・セオ
リー(review restriction fragment length polymorphi
sm techniques and theory)のような多数の参考文献が
ある]。
【００４５】本発明によって提供された核酸を内蔵して
いる宿主細胞は、本発明の範囲に包含される。好ましい
宿主細胞は卵母細胞である。好ましい卵母細胞は、本発
明のセンスｍＲＮＡまたはＤＮＡ化合物を注入したもの
である。一層好ましい卵母細胞は、本発明のセンスｍＲ
ＮＡまたはＤＮＡ化合物を、ＡＰＰを暗号化しているＤ
ＮＡまたはｍＲＮＡとともに注入したものである。最も
好ましい本発明の卵母細胞はセンスｍＲＮＡを注入した
ものである。
いる宿主細胞は、本発明の範囲に包含される。好ましい
宿主細胞は卵母細胞である。好ましい卵母細胞は、本発
明のセンスｍＲＮＡまたはＤＮＡ化合物を注入したもの
である。一層好ましい卵母細胞は、本発明のセンスｍＲ
ＮＡまたはＤＮＡ化合物を、ＡＰＰを暗号化しているＤ
ＮＡまたはｍＲＮＡとともに注入したものである。最も
好ましい本発明の卵母細胞はセンスｍＲＮＡを注入した
ものである。
【００４６】それ以外の好ましい宿主細胞は、配列番号
２を含んだベクターでトランスフェクトしたものであ
る。配列番号２をトランスフェクトした好ましい宿主細
胞としては、２９３細胞、ＡＶ１２細胞、酵母細胞、お
よびエシェリキア・コリ細胞等が挙げられる。最も好ま
しい２９３およびエシェリキア・コリの宿主細胞は、２
９３／ｐＲｃ／ザイム、エシェリキア・コリ／ｐＳザイ
ムである。
２を含んだベクターでトランスフェクトしたものであ
る。配列番号２をトランスフェクトした好ましい宿主細
胞としては、２９３細胞、ＡＶ１２細胞、酵母細胞、お
よびエシェリキア・コリ細胞等が挙げられる。最も好ま
しい２９３およびエシェリキア・コリの宿主細胞は、２
９３／ｐＲｃ／ザイム、エシェリキア・コリ／ｐＳザイ
ムである。
【００４７】同様に好ましい宿主細胞は、配列番号２を
含んでいるＤＮＡベクターとＡＰＰの暗号配列を含んで
いるＤＮＡで同時トランスフェクトしたものである。２
９３細胞、ＡＶ１２細胞、酵母細胞、およびエシェリキ
ア・コリ細胞は特に有用な同時トランスフェクトの宿主
細胞である。
含んでいるＤＮＡベクターとＡＰＰの暗号配列を含んで
いるＤＮＡで同時トランスフェクトしたものである。２
９３細胞、ＡＶ１２細胞、酵母細胞、およびエシェリキ
ア・コリ細胞は特に有用な同時トランスフェクトの宿主
細胞である。
【００４８】卵母宿主細胞はリューベルトらが報告した
方法に従って組み立てることができる[リューベルト(Lu
ebbert)ら、プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナ
ル・アカデミー・オブ・サイエンシズ（ＵＳＡ）(Proce
edings of the National Academy of Sciences (US
A))、８４巻、４３３２頁（１９８７年）]。ＡＰＰを暗
号化しているＤＮＡまたはＲＮＡ（ともに６９５および
７５１アミノ酸の形）はセルコエらの報告に従って入手
し得る[セルコエ(Selkoe)ら、プロシーディングズ・オ
ブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ
（ＵＳＡ）、８５巻、７３４１頁（１９８８年）]。そ
の他の宿主細胞のトランスフェクションは当業界周知の
ものである。細胞の同時トランスフェクションは標準的
な手技を用いて達成し得る[例えばゴーマン(Gorman)
ら、モレキュラー・アンド・セルラー・バイオロジー(M
olecular and Cellular Biology)、２巻、１０４４頁
（１９８２年）参照]。
方法に従って組み立てることができる[リューベルト(Lu
ebbert)ら、プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナ
ル・アカデミー・オブ・サイエンシズ（ＵＳＡ）(Proce
edings of the National Academy of Sciences (US
A))、８４巻、４３３２頁（１９８７年）]。ＡＰＰを暗
号化しているＤＮＡまたはＲＮＡ（ともに６９５および
７５１アミノ酸の形）はセルコエらの報告に従って入手
し得る[セルコエ(Selkoe)ら、プロシーディングズ・オ
ブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ
（ＵＳＡ）、８５巻、７３４１頁（１９８８年）]。そ
の他の宿主細胞のトランスフェクションは当業界周知の
ものである。細胞の同時トランスフェクションは標準的
な手技を用いて達成し得る[例えばゴーマン(Gorman)
ら、モレキュラー・アンド・セルラー・バイオロジー(M
olecular and Cellular Biology)、２巻、１０４４頁
（１９８２年）参照]。
【００４９】従って本発明はまた、配列番号１を発現で
きる宿主細胞を組み立てる方法を提供する。その方法
は、配列番号１を暗号化したＤＮＡ配列を含んでいるＤ
ＮＡベクターで宿主細胞をトランスフェクトすることか
らなる。好ましい方法では２９３細胞を宿主細胞として
使用する。この２９３細胞は受入番号ＡＴＣＣ ＣＲＬ
１５７３のもとにＡＴＣＣから入手し得る。別の好まし
い方法としては、ＡＶ１２細胞を宿主細胞として使用す
る。ＡＶ１２細胞は受入番号ＡＴＣＣ ＣＲＬ９５９５
のもとにＡＴＣＣから入手し得る。別の好ましい方法で
は、サッカロマイセテス科に属する酵母細胞、または細
菌エシェリキア・コリを宿主細胞として使用する。
きる宿主細胞を組み立てる方法を提供する。その方法
は、配列番号１を暗号化したＤＮＡ配列を含んでいるＤ
ＮＡベクターで宿主細胞をトランスフェクトすることか
らなる。好ましい方法では２９３細胞を宿主細胞として
使用する。この２９３細胞は受入番号ＡＴＣＣ ＣＲＬ
１５７３のもとにＡＴＣＣから入手し得る。別の好まし
い方法としては、ＡＶ１２細胞を宿主細胞として使用す
る。ＡＶ１２細胞は受入番号ＡＴＣＣ ＣＲＬ９５９５
のもとにＡＴＣＣから入手し得る。別の好ましい方法で
は、サッカロマイセテス科に属する酵母細胞、または細
菌エシェリキア・コリを宿主細胞として使用する。
【００５０】好ましい方法では２９３細胞で配列番号２
を含んでいる発現ベクターを利用する。この目的のため
特に好ましいものはｐＲｃ／ザイムである。
を含んでいる発現ベクターを利用する。この目的のため
特に好ましいものはｐＲｃ／ザイムである。
【００５１】別の好ましい方法は、（ａ）配列番号２を
含んでいるＤＮＡベクター、および（ｂ）ＡＰＰ暗号配
列を暗号化しているＤＮＡ発現ベクターからなる。最も
好ましい方法では、ＤＮＡベクターｐＲｃ／ザイムを利
用する。トランスフェクトした宿主細胞を、配列番号１
が発現されるような当業者周知の条件下で培養し、この
ようにしてトランスフェクトした宿主細胞内でザイムを
生産し得る。
含んでいるＤＮＡベクター、および（ｂ）ＡＰＰ暗号配
列を暗号化しているＤＮＡ発現ベクターからなる。最も
好ましい方法では、ＤＮＡベクターｐＲｃ／ザイムを利
用する。トランスフェクトした宿主細胞を、配列番号１
が発現されるような当業者周知の条件下で培養し、この
ようにしてトランスフェクトした宿主細胞内でザイムを
生産し得る。
【００５２】また本発明は、本発明のプローブと相同な
ＤＮＡを同定する方法を提供する。この方法は、ハイブ
リッド形成条件下で試験核酸をプローブと組み合わせ、
ハイブリッド形成する試験核酸を同定することからな
る。この方法で使用する好ましいプローブは、配列番号
３および配列番号４である。ハイブリダイゼーション技
術は当業界周知のものである[例えばサンブルックら
（前掲）参照]。
ＤＮＡを同定する方法を提供する。この方法は、ハイブ
リッド形成条件下で試験核酸をプローブと組み合わせ、
ハイブリッド形成する試験核酸を同定することからな
る。この方法で使用する好ましいプローブは、配列番号
３および配列番号４である。ハイブリダイゼーション技
術は当業界周知のものである[例えばサンブルックら
（前掲）参照]。
【００５３】また本発明によって提供された化合物を利
用する検定も本発明の範囲に包含される。提供された検
定は、物質がザイムのリガンドであるかどうかを決定す
るものであって、その方法は、ザイムを物質と接触さ
せ、物理的に検出可能な手段によってザイム活性をモニ
ターし、ザイムと相互作用し、またはザイムに影響を与
える物質を同定する方法からなる。
用する検定も本発明の範囲に包含される。提供された検
定は、物質がザイムのリガンドであるかどうかを決定す
るものであって、その方法は、ザイムを物質と接触さ
せ、物理的に検出可能な手段によってザイム活性をモニ
ターし、ザイムと相互作用し、またはザイムに影響を与
える物質を同定する方法からなる。
【００５４】本発明の好ましい検定は、細胞培養検定、
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）検定、または
合成競合検定である。
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）検定、または
合成競合検定である。
【００５５】好ましい細胞培養検定は、ザイムおよびＡ
ＰＰを暗号化している核酸を同時発現する卵母細胞、Ａ
Ｖ１２細胞、エシェリキア・コリ細胞、酵母細胞、また
は２９３細胞を使用する。好ましい同時発現細胞培養検
定は２９３／ｐＲｃ／ザイムを利用するものである。好
ましい検定は酵母細胞とＡＰＰのアミノ酸５８７〜６０
６を暗号化しているＤＮＡ化合物を利用する。ザイム暗
号化ＤＮＡおよびＭｅｔ596／Ａｓｐ597切断部位コドン
を含んだＡＰＰ暗号化ＤＮＡを使用した酵母検定を実施
する１方法が報告されている[スミス(Smith)およびコホ
ーン(Kohorn)、プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショ
ナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ、ＵＳＡ、８８
巻、５１５９頁（１９９１年）]。
ＰＰを暗号化している核酸を同時発現する卵母細胞、Ａ
Ｖ１２細胞、エシェリキア・コリ細胞、酵母細胞、また
は２９３細胞を使用する。好ましい同時発現細胞培養検
定は２９３／ｐＲｃ／ザイムを利用するものである。好
ましい検定は酵母細胞とＡＰＰのアミノ酸５８７〜６０
６を暗号化しているＤＮＡ化合物を利用する。ザイム暗
号化ＤＮＡおよびＭｅｔ596／Ａｓｐ597切断部位コドン
を含んだＡＰＰ暗号化ＤＮＡを使用した酵母検定を実施
する１方法が報告されている[スミス(Smith)およびコホ
ーン(Kohorn)、プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショ
ナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ、ＵＳＡ、８８
巻、５１５９頁（１９９１年）]。
【００５６】最も好ましい卵母細胞検定はｍＲＮＡを同
時発現する。最も好ましい細胞培養検定はウエスタンブ
ロット分析、または物理学的に検定可能な手段として放
射能標識したＡＰＰを使用する。好ましいＨＰＬＣ検定
では、基質として完全鎖長の真核細胞で誘導したＡＰＰ
を利用する。
時発現する。最も好ましい細胞培養検定はウエスタンブ
ロット分析、または物理学的に検定可能な手段として放
射能標識したＡＰＰを使用する。好ましいＨＰＬＣ検定
では、基質として完全鎖長の真核細胞で誘導したＡＰＰ
を利用する。
【００５７】最も好ましい合成競合検定は、物質がクニ
ッツ様ドメイン遺伝子生産物とザイムへの結合を競合す
るものである。最も好ましいザイム／クニッツドメイン
競合検定は、ＡＰＰを放射性同位元素で標識したもので
ある。
ッツ様ドメイン遺伝子生産物とザイムへの結合を競合す
るものである。最も好ましいザイム／クニッツドメイン
競合検定は、ＡＰＰを放射性同位元素で標識したもので
ある。
【００５８】細胞培養検定はアウスベルらによって詳細
に報告された方法に従って達成され得る[Ｆ.アウスベル
(Ausubel)ら、カレント・プロトコールズ・イン・モレ
キュラー・バイオロジー(Current Protocols in Molecu
lar Biology)、１９８９年、９.１〜９.５頁]。ＨＰＬ
Ｃ検定は主としてヒルズおよびチマシェフが報告した方
法により実施し得る[ヒルズ(Hirs)およびチマシェフ(Ti
masheff)編、メソッズ・イン・エンジモロジー(Methods
in Enzymology)、９１巻、第ＶおよびVI節（１９８３
年）]。ザイム／クニッツ様ドメイン結合または競合検
定は、ベンネットおよびヤマムラの報告に従って実施し
得る[Ｊ.ベンネット(Bennet)およびＨ.ヤマムラ(Yamamu
ra)、ニューロトランスミッター・レセプター・バイン
ディング(Neurotransmitter Receptor Binding)、１９
８５年、第３章]。
に報告された方法に従って達成され得る[Ｆ.アウスベル
(Ausubel)ら、カレント・プロトコールズ・イン・モレ
キュラー・バイオロジー(Current Protocols in Molecu
lar Biology)、１９８９年、９.１〜９.５頁]。ＨＰＬ
Ｃ検定は主としてヒルズおよびチマシェフが報告した方
法により実施し得る[ヒルズ(Hirs)およびチマシェフ(Ti
masheff)編、メソッズ・イン・エンジモロジー(Methods
in Enzymology)、９１巻、第ＶおよびVI節（１９８３
年）]。ザイム／クニッツ様ドメイン結合または競合検
定は、ベンネットおよびヤマムラの報告に従って実施し
得る[Ｊ.ベンネット(Bennet)およびＨ.ヤマムラ(Yamamu
ra)、ニューロトランスミッター・レセプター・バイン
ディング(Neurotransmitter Receptor Binding)、１９
８５年、第３章]。
【００５９】本発明はまた、ザイムを同定し、または精
製する方法を提供する。この方法は試験タンパク質を抗
ザイム抗体で飽和し、結合できなかった抗ザイム抗体を
除去し、結合したまま残っている抗ザイム抗体を検出す
ることからなる。抗体イメージング技術は当業界既知の
方法である。
製する方法を提供する。この方法は試験タンパク質を抗
ザイム抗体で飽和し、結合できなかった抗ザイム抗体を
除去し、結合したまま残っている抗ザイム抗体を検出す
ることからなる。抗体イメージング技術は当業界既知の
方法である。
【００６０】
【実施例】以下に実施例を挙げて本発明を説明する。実
施例は単に発明を説明するためのものであって、これに
よって本発明の範囲を限定する目的をもつものではな
い。
施例は単に発明を説明するためのものであって、これに
よって本発明の範囲を限定する目的をもつものではな
い。
【００６１】実施例１：２９３細胞内におけるザイムの
生産 エシェリキア・コリ・ｐＳザイムの凍結乾燥品のアリコ
ートをザ・ノーザン・レジオナル・リサーチ・ラボラト
リーズ、ペオリア、イリノイズ、ＵＳＡ、６１６０４か
ら受入番号ＮＲＲＬ Ｂ−１８９７１のもとに入手し、
下記の方法で、培養として直接使用できた。この培養は
ＮＲＲＬに寄託された。
生産 エシェリキア・コリ・ｐＳザイムの凍結乾燥品のアリコ
ートをザ・ノーザン・レジオナル・リサーチ・ラボラト
リーズ、ペオリア、イリノイズ、ＵＳＡ、６１６０４か
ら受入番号ＮＲＲＬ Ｂ−１８９７１のもとに入手し、
下記の方法で、培養として直接使用できた。この培養は
ＮＲＲＬに寄託された。
【００６２】エシェリキア・コリ／ｐＳザイムの培養か
ら塩化セシウム精製によってプラスミドｐＳザイムを単
離した。ついでプラスミドｐＳザイムをＳａｌＩおよび
ＮｏｔＩで消化した。生じた断片は直線状であった。Ｄ
ＮＡリガーゼを使用して、あらかじめ直線化したｐＲｃ
プラスミド（商標）（インビトロジェン、カタログ＃Ｖ
７５０−２０）へこのＳａｌＩ−ＮｏｔＩ断片およびＳ
ａｌＩ−ＨｉｎｄIIIリンカーをライゲーションした。
ら塩化セシウム精製によってプラスミドｐＳザイムを単
離した。ついでプラスミドｐＳザイムをＳａｌＩおよび
ＮｏｔＩで消化した。生じた断片は直線状であった。Ｄ
ＮＡリガーゼを使用して、あらかじめ直線化したｐＲｃ
プラスミド（商標）（インビトロジェン、カタログ＃Ｖ
７５０−２０）へこのＳａｌＩ−ＮｏｔＩ断片およびＳ
ａｌＩ−ＨｉｎｄIIIリンカーをライゲーションした。
【００６３】ついで新たに作成した配列番号２を含んで
いるｐＲｃ／ザイム・ベクターでコンピテント・エシェ
リキア・コリ細胞をトランスフェクトし、これをアンピ
シリン含有培地で増殖することにより、アンピシリン耐
性遺伝子を含んでいる細胞を選び出した。
いるｐＲｃ／ザイム・ベクターでコンピテント・エシェ
リキア・コリ細胞をトランスフェクトし、これをアンピ
シリン含有培地で増殖することにより、アンピシリン耐
性遺伝子を含んでいる細胞を選び出した。
【００６４】エシェリキア・コリへｐＲｃ／ザイム・ベ
クターをトランスフェクトしたのち、ｐＲｃ／ザイムベ
クターを単離するため、引き続きプラスミド調製品を作
成した。２９３細胞をｐＲｃ／ザイム・ベクターでトラ
ンスフェクトするため、チェンおよびオカヤマが開発し
た方法を用いた[Ｃ.チェン(Chen)およびＨ.オカヤマ(Ok
ayama)、モレキュラー・アンド・セルラー・バイオロジ
ー、７巻、２７４５頁（１９８７年）]。これらの細胞
を実施例２で報告する細胞培養検定に使用した。
クターをトランスフェクトしたのち、ｐＲｃ／ザイムベ
クターを単離するため、引き続きプラスミド調製品を作
成した。２９３細胞をｐＲｃ／ザイム・ベクターでトラ
ンスフェクトするため、チェンおよびオカヤマが開発し
た方法を用いた[Ｃ.チェン(Chen)およびＨ.オカヤマ(Ok
ayama)、モレキュラー・アンド・セルラー・バイオロジ
ー、７巻、２７４５頁（１９８７年）]。これらの細胞
を実施例２で報告する細胞培養検定に使用した。
【００６５】２９３細胞内で安定な形質転換体を生産す
るため、抗生物質Ｇ４１８（ゲネチシン）による選択を
この段階に加えた。ついでＧ４１８の存在で生育したコ
ロニーをザイムの供給源として使用した。
るため、抗生物質Ｇ４１８（ゲネチシン）による選択を
この段階に加えた。ついでＧ４１８の存在で生育したコ
ロニーをザイムの供給源として使用した。
【００６６】実施例２：細胞培養検定 ヒト胎児性腎細胞（２９３細胞）をｐＲｃザイムとＡＰ
Ｐ暗号化ベクターで同時トランスフェクトした。一方の
場合は、６９５アミノ酸のＡＰＰを暗号化しているベク
ター（クニッツ様ドメインを欠いている）をｐＲｃザイ
ムとともに同時トランスフェクトした。また他方の場合
は、７５１アミノ酸のＡＰＰを暗号化しているベクター
（クニッツ様ドメインを含む）をｐＲｃザイムともに同
時トランスフェクトした。
Ｐ暗号化ベクターで同時トランスフェクトした。一方の
場合は、６９５アミノ酸のＡＰＰを暗号化しているベク
ター（クニッツ様ドメインを欠いている）をｐＲｃザイ
ムとともに同時トランスフェクトした。また他方の場合
は、７５１アミノ酸のＡＰＰを暗号化しているベクター
（クニッツ様ドメインを含む）をｐＲｃザイムともに同
時トランスフェクトした。
【００６７】トランスフェクションは標準的なリン酸カ
ルシウム・トランスフェクションを用いて達成した。サ
ンブルックら（前掲）が報告したようなそれ以外のトラ
ンスフェクション・プロトコールでも有効であった。６
９５アミノ酸（ＫＰＩを含まず）のＡＰＰ暗号配列を使
用すると、サンブルックら（前掲）が報告したようなＡ
ＰＰタンパク質のカルボキシ末端アミノ酸に対する抗血
清を使用するウエスタン・ブロット分析により、アミロ
イド原性断片が検出された。この方法では、オルタース
ドルフら[Ｔ.オルタースドルフ(Oltersdorf)ら、ジャー
ナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー(Journal o
f Biological Chemistry)、２６５巻、４４９２〜４４
９７頁（１９９１年）]が報告した抗ＢＸ６を使用し
た。７５１アミノ酸（ＫＰＩを含む）のＡＰＰを使用す
ると、アミロイド原性断片は検出されなかった。
ルシウム・トランスフェクションを用いて達成した。サ
ンブルックら（前掲）が報告したようなそれ以外のトラ
ンスフェクション・プロトコールでも有効であった。６
９５アミノ酸（ＫＰＩを含まず）のＡＰＰ暗号配列を使
用すると、サンブルックら（前掲）が報告したようなＡ
ＰＰタンパク質のカルボキシ末端アミノ酸に対する抗血
清を使用するウエスタン・ブロット分析により、アミロ
イド原性断片が検出された。この方法では、オルタース
ドルフら[Ｔ.オルタースドルフ(Oltersdorf)ら、ジャー
ナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー(Journal o
f Biological Chemistry)、２６５巻、４４９２〜４４
９７頁（１９９１年）]が報告した抗ＢＸ６を使用し
た。７５１アミノ酸（ＫＰＩを含む）のＡＰＰを使用す
ると、アミロイド原性断片は検出されなかった。
【００６８】実施例３：ＨＰＬＣ検定 ＡＰＰを暗号化しているバキュロウイルスで感染させた
細胞で、完全鎖長のＡＰＰを生産する。この方法は、ク
ノップスらの方法[Ｊ.クノップス(Knops)ら、ジャーナ
ル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー、２６６巻、
７２８５頁（１９９１年）]によって達成される。つい
で活性ザイムおよび試験化合物の存在でＡＰＰをインキ
ュベートする。そのあとＡＰＰ断片を高速液体クロマト
グラフィーによって分離する。それぞれプールした断片
をヒルズおよびチマシェフの方法[ヒルズおよびチマシ
ェフ編、メソッズ・イン・エンジモロジー、９１巻、第
ＶおよびVI節（１９８３年）]のような標準的な方法を
用いて微量配列決定する。生成したアミロイド原性断片
（Ｍｅｔ596またはＡｓｐ597の何れかで終わる）の量
を、試験化合物が存在しない場合に生じる量と比較し
て、試験化合物のザイムに与える影響の強さを決定す
る。
細胞で、完全鎖長のＡＰＰを生産する。この方法は、ク
ノップスらの方法[Ｊ.クノップス(Knops)ら、ジャーナ
ル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー、２６６巻、
７２８５頁（１９９１年）]によって達成される。つい
で活性ザイムおよび試験化合物の存在でＡＰＰをインキ
ュベートする。そのあとＡＰＰ断片を高速液体クロマト
グラフィーによって分離する。それぞれプールした断片
をヒルズおよびチマシェフの方法[ヒルズおよびチマシ
ェフ編、メソッズ・イン・エンジモロジー、９１巻、第
ＶおよびVI節（１９８３年）]のような標準的な方法を
用いて微量配列決定する。生成したアミロイド原性断片
（Ｍｅｔ596またはＡｓｐ597の何れかで終わる）の量
を、試験化合物が存在しない場合に生じる量と比較し
て、試験化合物のザイムに与える影響の強さを決定す
る。
【００６９】実施例４：ザイム／クニッツ様ドメインの
競合検定 ＡＰＰのＫＰＩドメインのペプチドを合成し、これを同
位元素ヨウ素−１２５（125Ｉ）で標識する。ついでＪ.
Ｐ.ベンネットおよびＨ.ヤマムラの方法[ニュウーロト
ランスミッター・レセプター・バインディング、６１
巻、（１９８５年）]に従って、競合結合検定を実施す
る。ついで従来のＥＬＩＳＡ検定の場合と同様に、ザイ
ムをプラスチック微量滴定板ウエルへ結合させる。この
段階の代表的なプロトコールの１つはＦ.アウスベルが
報告している[カレント・プロトコールズ・イン・モレ
キュラー・バイオロジー、２巻、１１.１〜１１.３（１
９８９年）]。引き続き、放射能標識したＫＰＩドメイ
ンおよび未標識競合化合物を９６穴の微量滴定板ウエル
へ添加する。ついでウエルを洗浄する。ザイムに対する
未標識競合化合物の比親和性を計算するため、残留する
同位元素を記録する。
競合検定 ＡＰＰのＫＰＩドメインのペプチドを合成し、これを同
位元素ヨウ素−１２５（125Ｉ）で標識する。ついでＪ.
Ｐ.ベンネットおよびＨ.ヤマムラの方法[ニュウーロト
ランスミッター・レセプター・バインディング、６１
巻、（１９８５年）]に従って、競合結合検定を実施す
る。ついで従来のＥＬＩＳＡ検定の場合と同様に、ザイ
ムをプラスチック微量滴定板ウエルへ結合させる。この
段階の代表的なプロトコールの１つはＦ.アウスベルが
報告している[カレント・プロトコールズ・イン・モレ
キュラー・バイオロジー、２巻、１１.１〜１１.３（１
９８９年）]。引き続き、放射能標識したＫＰＩドメイ
ンおよび未標識競合化合物を９６穴の微量滴定板ウエル
へ添加する。ついでウエルを洗浄する。ザイムに対する
未標識競合化合物の比親和性を計算するため、残留する
同位元素を記録する。
【００７０】実施例５：ゲノムクローンの単離 カロン２１Ａバクテリオファージ内のヒト染色体１９ゲ
ノムライブラリーに特異的なゲノムライブラリーをアメ
リカン・タイプ・カルチャー・コレクション、１２３０
１、パークローン・ドライブ、ロックビル、マリーラン
ド、ＵＳＡ２０８５２（ＡＴＣＣ）（カタログ番号５７
７１１）から購入した。これらのファージをエシェリキ
ア・コリＫ８０２ ｒｅｃＡ-宿主株（カタログ番号４７
０２６）へトランスフェクトした。ファージの力価は、
１マイクロリットル当たり６.５〜７.０×１０4プラー
ク形成単位であった。ザイムを暗号化している遺伝子の
ゲノムクローンを、ファージライブラリーの通常のスク
リーニング[例えばサンブルックら、モレキュラー・ク
ローニング、ア・ラボラトリー・マニュアル、２.６〜
２.１１４（１９８９年）参照]によって単離した。
ノムライブラリーに特異的なゲノムライブラリーをアメ
リカン・タイプ・カルチャー・コレクション、１２３０
１、パークローン・ドライブ、ロックビル、マリーラン
ド、ＵＳＡ２０８５２（ＡＴＣＣ）（カタログ番号５７
７１１）から購入した。これらのファージをエシェリキ
ア・コリＫ８０２ ｒｅｃＡ-宿主株（カタログ番号４７
０２６）へトランスフェクトした。ファージの力価は、
１マイクロリットル当たり６.５〜７.０×１０4プラー
ク形成単位であった。ザイムを暗号化している遺伝子の
ゲノムクローンを、ファージライブラリーの通常のスク
リーニング[例えばサンブルックら、モレキュラー・ク
ローニング、ア・ラボラトリー・マニュアル、２.６〜
２.１１４（１９８９年）参照]によって単離した。
【００７１】ポリメラーゼ連鎖反応[例えばショワルタ
ー(Schowalter)およびゾンマー(Sommer)、アナリティカ
ル・バイオケミストリー(Analytical Biochemistry)、
１７７巻、９０〜９４頁（１９８９年）が報告したよう
な]を利用して、ＥｃｏＲＩ／ＮｏｔＩ精製した[バイオ
・ラド・ラボラトリーズ(Bio-Rad Laboratories)、Ｐ.
Ｏ.ボックス７０８、ロックビル・センター(Rockville C
entre)、ニューヨーク(New York)、ＵＳＡ、１１５７
１、カタログ番号７３２−６０１０）ｐＲｃ−ザイムＤ
ＮＡ断片へ配列番号５および配列番号６のプライマーを
特異的にアニーリングすることにより、放射能標識した
ｃＤＮＡプローブを合成した。
ー(Schowalter)およびゾンマー(Sommer)、アナリティカ
ル・バイオケミストリー(Analytical Biochemistry)、
１７７巻、９０〜９４頁（１９８９年）が報告したよう
な]を利用して、ＥｃｏＲＩ／ＮｏｔＩ精製した[バイオ
・ラド・ラボラトリーズ(Bio-Rad Laboratories)、Ｐ.
Ｏ.ボックス７０８、ロックビル・センター(Rockville C
entre)、ニューヨーク(New York)、ＵＳＡ、１１５７
１、カタログ番号７３２−６０１０）ｐＲｃ−ザイムＤ
ＮＡ断片へ配列番号５および配列番号６のプライマーを
特異的にアニーリングすることにより、放射能標識した
ｃＤＮＡプローブを合成した。
【００７２】ゼータ・プローブ(Zeta-Probe)（商標）・
ブロッティング・メンブランの使用説明書(バイオ・ラ
ド、カタログ番号１６４−０１５３）の記載に従い、ハ
イブリダイゼーションおよび洗浄を６５℃で実施した。
推定初代ザイム・バクテリオファージをクロロホルム２
〜３滴を含有するＳＭ緩衝液中に貯蔵した。ついで単一
で均質なプラーク（７１１−４）を３次スクリーンから
単離した。ザイムへのイン・シトウ・ハイブリダイゼー
ションによって陽性であったλ−バクテリオファージＤ
ＮＡの単離を標準的な手技を用いて達成した。
ブロッティング・メンブランの使用説明書(バイオ・ラ
ド、カタログ番号１６４−０１５３）の記載に従い、ハ
イブリダイゼーションおよび洗浄を６５℃で実施した。
推定初代ザイム・バクテリオファージをクロロホルム２
〜３滴を含有するＳＭ緩衝液中に貯蔵した。ついで単一
で均質なプラーク（７１１−４）を３次スクリーンから
単離した。ザイムへのイン・シトウ・ハイブリダイゼー
ションによって陽性であったλ−バクテリオファージＤ
ＮＡの単離を標準的な手技を用いて達成した。
【００７３】精製したλ−ファージ・ザイムＤＮＡをＨ
ｉｎｄIIIで消化し、１％アガロース／ＴＢＥ[０.１Ｍ
トリス−ＨＣｌ（ｐＨ８.３）、０.１Ｍホウ酸、１mMエ
チレンジアミン四酢酸]ゲルで電気泳動した。ついで分
離したＤＮＡを、ゼータ・プローブ（商標）使用説明書
の２.５節に記載された非変性条件[０.５×ＴＢＥ泳動
緩衝液、８０ボルト（一定）、１時間]、ついでゼータ
・プローブ（商標）使用説明書の２.８節に記載された
変性条件[０.４Ｍ ＮａＯＨ、１０分間]を用いて、ゼー
タ・プローブ（商標）・ブロッティング・メンブラン上
へ移動させた。
ｉｎｄIIIで消化し、１％アガロース／ＴＢＥ[０.１Ｍ
トリス−ＨＣｌ（ｐＨ８.３）、０.１Ｍホウ酸、１mMエ
チレンジアミン四酢酸]ゲルで電気泳動した。ついで分
離したＤＮＡを、ゼータ・プローブ（商標）使用説明書
の２.５節に記載された非変性条件[０.５×ＴＢＥ泳動
緩衝液、８０ボルト（一定）、１時間]、ついでゼータ
・プローブ（商標）使用説明書の２.８節に記載された
変性条件[０.４Ｍ ＮａＯＨ、１０分間]を用いて、ゼー
タ・プローブ（商標）・ブロッティング・メンブラン上
へ移動させた。
【００７４】ｐＲｃ／ザイムのＢａｍＨＩ／ＸｂａＩ断
片を含んでいる放射能標識したプローブを、ランダム・
プライミングしたＤＮＡ標識キット（例えばベーリンガ
ー・マンハイム・コーポレーション(Boehringer Manhei
m Corporation)、９１１５、へーグ・ロード(Hague Roa
d)、Ｐ.Ｏ. ボックス ５０４１４、インジアナポリス(I
ndianapolis)、インジアナ(Indiana)、ＵＳＡ、４６２
５０−０４１４、カタログ番号１００４７６０により商
業的に入手可能である）とともに使用し、本発明のクロ
ーン中に３'暗号配列が見つかるかどうかを測定した。
上記のゼータ・プローブ（商標）・メンブランへ前述の
ようにハイブリダイゼーションおよび洗浄を実施し、オ
ートラジオグラフィーによりザイムの３'領域との相同
性を明らかにした。
片を含んでいる放射能標識したプローブを、ランダム・
プライミングしたＤＮＡ標識キット（例えばベーリンガ
ー・マンハイム・コーポレーション(Boehringer Manhei
m Corporation)、９１１５、へーグ・ロード(Hague Roa
d)、Ｐ.Ｏ. ボックス ５０４１４、インジアナポリス(I
ndianapolis)、インジアナ(Indiana)、ＵＳＡ、４６２
５０−０４１４、カタログ番号１００４７６０により商
業的に入手可能である）とともに使用し、本発明のクロ
ーン中に３'暗号配列が見つかるかどうかを測定した。
上記のゼータ・プローブ（商標）・メンブランへ前述の
ようにハイブリダイゼーションおよび洗浄を実施し、オ
ートラジオグラフィーによりザイムの３'領域との相同
性を明らかにした。
【００７５】５'ザイムのコード領域を含んでいるファ
ージ７１１−４を確かめるため、配列番号７および配列
番号８を使用するポリメラーゼ連鎖反応をもう一度利用
してカインツらの方法[カインツ(Kainz)ら、アナリティ
カル・バイオケミストリー、２０２巻、４６頁（１９９
２年）]に従い、３次プラーク精製した染色体１９ザイ
ム・ファージＤＮＡから４７０塩基対のバンドを増幅し
た。このＤＮＡ断片を精製し、ついでｐＵｃ１９発現プ
ラスミドへ前述のようにサブクローンした。５'ザイム
ｃＤＮＡコード領域の１〜３３配列、および５'ザイム
コード領域の上流の追加的な２７２ヌクレオチドに対応
するＤＮＡ配列の同一性を標準的な手技を用いるＤＮＡ
配列分析によって確認した。
ージ７１１−４を確かめるため、配列番号７および配列
番号８を使用するポリメラーゼ連鎖反応をもう一度利用
してカインツらの方法[カインツ(Kainz)ら、アナリティ
カル・バイオケミストリー、２０２巻、４６頁（１９９
２年）]に従い、３次プラーク精製した染色体１９ザイ
ム・ファージＤＮＡから４７０塩基対のバンドを増幅し
た。このＤＮＡ断片を精製し、ついでｐＵｃ１９発現プ
ラスミドへ前述のようにサブクローンした。５'ザイム
ｃＤＮＡコード領域の１〜３３配列、および５'ザイム
コード領域の上流の追加的な２７２ヌクレオチドに対応
するＤＮＡ配列の同一性を標準的な手技を用いるＤＮＡ
配列分析によって確認した。
【００７６】プラスミドの寄託：ブダペスト条約[ザ・
ブダペスト・トリーティー・オン・ジ・インターナショ
ナル・レコグニション・オブ・ザ・デポジット・オブ・
マイクロオーガニズムス・フォア・パーパシズ・オブ・
パテント・プロシデュアズ(the Budapest Treatyon the
International Recognition of the Deposit of Micro
organisms for Purposes of Patent Procedures)]の規
定に従い、下記の培養を、ザ・ノーザン・レジオナル・
リサーチ・センター（ＮＲＲＬ）、アグリカルチュラル
・リサーチ・サービス、Ｕ.Ｓ.デパートメント・オブ・
アグリカルチャー、１８１５Ｎ. ユニバーシティー・ス
トリート、ペオリア、イリノイズ、６１６０４へその永
久保存株として寄託した。
ブダペスト・トリーティー・オン・ジ・インターナショ
ナル・レコグニション・オブ・ザ・デポジット・オブ・
マイクロオーガニズムス・フォア・パーパシズ・オブ・
パテント・プロシデュアズ(the Budapest Treatyon the
International Recognition of the Deposit of Micro
organisms for Purposes of Patent Procedures)]の規
定に従い、下記の培養を、ザ・ノーザン・レジオナル・
リサーチ・センター（ＮＲＲＬ）、アグリカルチュラル
・リサーチ・サービス、Ｕ.Ｓ.デパートメント・オブ・
アグリカルチャー、１８１５Ｎ. ユニバーシティー・ス
トリート、ペオリア、イリノイズ、６１６０４へその永
久保存株として寄託した。
【００７７】 寄託物質 受入番号 エシェリキア・コリＫ１２／ｐＳザイム ＮＲＲＬ Ｂ−１８９７１
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者 エドワード・マリオン・ジョンストン アメリカ合衆国46220インディアナ州イン ディアナポリス、イースト・シックスティ ナインス・ストリート5129番 (72)発明者 シーラ・パークス・リトル アメリカ合衆国46208インディアナ州イン ディアナポリス、ノース・メリディアン・ ストリート4480番 (72)発明者 フランクリン・ハーポルド・ノリス アメリカ合衆国46237インディアナ州イン ディアナポリス、サウス・アーリントン・ アベニュー5518番
Claims (5)
- 【請求項１】 下記の配列： 【化１】 [以下、配列番号１という]で示されるアミノ酸配列を含
むアミノ酸化合物または機能的なその等価物。 - 【請求項２】 請求項１に記載のアミノ酸化合物を暗号
化している下記の配列： 【化２】 [以下、配列番号２という]を含んでいる核酸、または機
能的なその等価物、またはその一部。 - 【請求項３】 選択的ハイブリダイゼーションに好適な
条件下に請求項２の化合物のＤＮＡ断片とハイブリッド
形成する、ヒト染色体１９ライブラリー由来の４.０キ
ロベースのＨｉｎｄIII断片を含んでいる、配列番号１
のアミノ酸化合物を暗号化しているゲノムクローン。 - 【請求項４】 （ａ）患者からＤＮＡを取り出し、
（ｂ）そのＤＮＡを制限酵素で消化し、（ｃ）消化した
ＤＮＡを配列番号２の化合物に対応する標識したヌクレ
オチド配列、またはその一部とハイブリッド形成させ、
（ｄ）アルツハイマー病の症状を現わし、またはかって
症状を現わしたことがあるドナー家族構成員の、同様に
消化しハイブリッド形成させたバンドの形態とハイブリ
ダイゼーションパターンを比較することからなる患者の
アルツハイマー病の診断、またはアルツハイマー病の発
病傾向の診断方法。 - 【請求項５】 （ａ）タンパク質を試験物質と接触さ
せ、（ｂ）物理的に検出可能な手段によってタンパク質
活性をモニターし、（ｃ）試験物質を投与されていない
対照と比較して、タンパク質活性と相互作用する物質、
またはタンパク質活性に影響を与える物質を同定する方
法からなる、試験物質が配列番号１のタンパク質の機能
的なリガンドであるかどうかを測定する検定。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000001807A1 (en) * | 1998-07-02 | 2000-01-13 | Fuso Pharmaceutical Industries, Ltd. | Serine protease-specific monoclonal antibody and utilization thereof |
Families Citing this family (30)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5986054A (en) | 1995-04-28 | 1999-11-16 | The Hospital For Sick Children, Hsc Research And Development Limited Partnership | Genetic sequences and proteins related to alzheimer's disease |
| US6531586B1 (en) | 1995-04-28 | 2003-03-11 | The Hospital For Sick Children | Genetic sequences related to Alzheimer's Disease |
| US6210919B1 (en) | 1995-04-28 | 2001-04-03 | Hsc Research And Development Limited Partnership | Genetic sequences and proteins related to alzheimer's disease |
| US6329163B1 (en) | 1995-06-07 | 2001-12-11 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Assays for detecting β-secretase inhibition |
| US5744346A (en) * | 1995-06-07 | 1998-04-28 | Athena Neurosciences, Inc. | β-secretase |
| US5942400A (en) * | 1995-06-07 | 1999-08-24 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Assays for detecting β-secretase |
| AU732508B2 (en) * | 1996-01-26 | 2001-04-26 | Governing Council Of The University Of Toronto, The | Nucleic acids and proteins related to Alzheimer's disease, and uses therefor |
| AU4480797A (en) * | 1996-09-13 | 1998-04-02 | Dana-Farber Cancer Institute | Protease m, a novel serine protease |
| EP1084240A1 (fr) * | 1998-06-05 | 2001-03-21 | Aventis Pharma S.A. | Polypeptides possedant une activite de type beta-secretase |
| FR2779444A1 (fr) * | 1998-06-05 | 1999-12-10 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Polypeptides possedant une activite de type beta-secretase et capables de cliver le precurseur naturel du peptide beta-amyloide (app) |
| CN1300320C (zh) * | 1998-09-24 | 2007-02-14 | 法玛西雅厄普约翰美国公司 | 阿尔茨海默氏疾病分泌酶 |
| US20040234976A1 (en) * | 1998-09-24 | 2004-11-25 | Gurney Mark E. | Alzheimer's disease secretase, app substrates therefor, and uses therefor |
| US6699671B1 (en) | 1998-09-24 | 2004-03-02 | Pharmacia & Upjohn Company | Alzheimer's disease secretase, APP substrates therefor, and uses therefor |
| US6844148B1 (en) | 1998-09-24 | 2005-01-18 | Pharmacia & Upjohn Company | Alzheimer's disease secretase, APP substrates therefor, and uses therefor |
| US6245884B1 (en) | 1998-10-16 | 2001-06-12 | Vivian Y. H. Hook | Secretases related to alzheimer's dementia |
| US6313268B1 (en) | 1998-10-16 | 2001-11-06 | Vivian Y. H. Hook | Secretases related to Alzheimer's dementia |
| US7115410B1 (en) * | 1999-02-10 | 2006-10-03 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | β-secretase enzyme compositions and methods |
| US7456007B1 (en) | 1998-12-31 | 2008-11-25 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | β-secretase enzyme compositions and methods |
| CN1390232A (zh) | 1999-02-10 | 2003-01-08 | 艾兰制药公司 | 人β分泌酶、抑制剂、其组合物和用途 |
| US20020049303A1 (en) * | 1999-06-28 | 2002-04-25 | Tang Jordan J. N. | Catalytically active recombinant memapsin and methods of use thereof |
| EP1196609A2 (en) | 1999-06-28 | 2002-04-17 | Oklahoma Medical Research Foundation | Catalytically active recombinant memapsin and methods of use thereof |
| US20090162883A1 (en) * | 1999-09-23 | 2009-06-25 | Pharmacia & Upjohn Company | Alzheimer's Disease Secretase, APP Substrates Thereof, and Uses Thereof |
| US7514408B1 (en) | 1999-12-02 | 2009-04-07 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | β-secretase enzyme compositions and methods |
| ATE365922T1 (de) * | 2000-10-27 | 2007-07-15 | Mount Sinai Hospital Corp | Verfahren zur erkennung von eierstockkrebs mittels menschlichem kallikrein (hk6) |
| CA2360219A1 (en) | 2000-10-27 | 2002-04-27 | Mount Sinai Hospital | Method for detecting alzheimer's disease |
| US20040121947A1 (en) * | 2000-12-28 | 2004-06-24 | Oklahoma Medical Research Foundation | Compounds which inhibit beta-secretase activity and methods of use thereof |
| US20060234944A1 (en) * | 2001-10-23 | 2006-10-19 | Oklahoma Medical Reseach Foundation | Beta-secretase inhibitors and methods of use |
| CA2464736A1 (en) * | 2001-10-23 | 2003-05-15 | Oklahoma Medical Research Foundation | Beta-secretase inhibitors and methods of use |
| CA2468651A1 (en) * | 2003-06-13 | 2004-12-13 | Eleftherios P. Diamandis | Detection of neurodegenerative diseases |
| AU2006279896A1 (en) * | 2005-08-10 | 2007-02-22 | Oklahoma Medical Research Foundation | Truncated memapsin 2 for use for treating Alzheimer's disease |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU661270B2 (en) * | 1990-03-05 | 1995-07-20 | Cephalon, Inc. | Chymotrypsin-like proteases and their inhibitors |
| US5252463A (en) * | 1990-06-22 | 1993-10-12 | The Du Pont Merck Pharmaceutical Company | Clipsin, a chymotrypsin-like protease and method of using same |
| WO1992003542A1 (en) * | 1990-08-17 | 1992-03-05 | Boston University | PROTEASES CAUSING ABNORMAL DEGRADATION OF AMYLOID β-PROTEIN PRECURSOR |
| US5292652A (en) * | 1990-10-05 | 1994-03-08 | Athena Neurosciences, Inc. | Amyloidin protease and uses thereof |
-
1993
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-
1994
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000001807A1 (en) * | 1998-07-02 | 2000-01-13 | Fuso Pharmaceutical Industries, Ltd. | Serine protease-specific monoclonal antibody and utilization thereof |
| US6645734B2 (en) | 1998-07-02 | 2003-11-11 | Fuso Pharmaceutical Industries, Ltd. | Serine protease specific monoclonal antibodies and their use |
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