JPH0676425B2 - Ｗｓ―９３２６ａ、ｗｓ―９３２６ｂおよびそれらの誘導体 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 この発明は、薬理活性を有する新規なWS−9326A、WS−9
326Bおよびそれらの誘導体に関する。より詳しくは、Ｐ
物質拮抗作用、ニューロキニンＡ（Ｋ物質）拮抗作用な
どのごとき薬理活性を有する新規なWS−9326A、WS−932
6Bおよびそれらの誘導体、それらの製造法ならびにそれ
らを含有する医薬組成物に関する。

従って、この発明の一つの目的は、喘息などの治療およ
び予防に有用なWS−9326A、WS−9326Bおよびそれらの誘
導体を提供することである。

この発明の他の目的は、WS−9326A、WS−9326Bおよびそ
れらの誘導体を製造する方法を提供することである。

この発明のさらに一つの目的は、活性成分としてWS−93
26A、WS−9326Bまたはそれらの誘導体を含有する医薬組
成物を提供することである。

この発明のもう一つの目的は、喘息などの治療および予
防のためのWS−9326A、WS−9326Bおよびそれらの誘導体
の用途を提供することである。

この発明のWS−9326AおよびWS−9326Bは、ストレプトミ
セス・ビオラセオニガー（Streptomyces violaceonige
r）NO.9326のごときストレプトミセス属に属するWS−93
26Aおよび／または、WS−9326B生産菌株を培地中で培養
させることによって製造できる。

WS−9326AおよびWS−9326Bの生産に使用する微生物の詳
細を以下に説明する。

微生物 WS−9326AおよびWS−9326Bの生産に使用できる微生物
は、ストレプトミセス属に属するWS−9326Aおよび／ま
たはWS−9326B生産菌株であり、なかでもストレプトミ
セス・ビオラセオニガーNO.9326は、日本国長野県諏訪
市で採集された土壌試料から新規に分離されたものであ
る。

その新たに分離されたストレプトミセス・ビオラセオニ
ガーNO.9326の凍結乾燥標本が工業技術院微生物工業技
術研究所（日本国茨城県つくば市東１丁目１−３）に微
工研条寄第1667号として、1988年１月20日付で寄託され
ている。

新規なWS−9326AおよびWS−9326Bの生産は、単に説明の
ためにのみ挙げた本明細書記載の特定の微生物に限定さ
れるものではないことを、理解されたい。この発明は、
自然突然変異株ならびにＸ線照射、紫外線照射、Ｎ−メ
チル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン、２−ア
ミノプリンなどによる処理のごとき慣用手段によって記
載微生物から産生せしめうる人工突然変異株を含めて、
WS−9326AおよびWS−9326Bを生産できるあらゆる変異株
の使用をも包含するものである。

ストレプトミセス・ビオラセオニガーNO.9326は次の形
態上、培養上、生物学上および生理学上の特性を有す
る。

［１］形態学的特徴： この分類学的研究には、シャーリングとゴットリープが
記載している方法 「イー・ビー・シャーリングおよびディー・ゴットリー
プ：メソッズ・フォー・キヤラクテリゼーション・オブ
・ストレプトミセス・スペーシーズ，インターナショナ
ル・ジャーナル・オブ・システマチック・バクテリオロ
ジー （Shirling,E.B.and D.Gottlieb:Methods for characte
rization of Streptomyces species.International Jou
rnal of Systematic Bacteriology），16,313−340,196
6」 を採用した。

形態観察を、オートミール寒天、酵母−麦芽エキス寒天
および無機塩類−でんぷん寒天を用いて30℃で14日間生
育させた培養物について光学顕微鏡および電子顕微鏡を
用いて行った。

栄養菌糸は、断片化することなく、よく発育した。気菌
糸は単軸型に分岐し、らせん状の胞子鎖を形成した。１
鎖当りの胞子数は10〜30であった。胞子の表面は滑らか
で、形は卵形で、大きさは0.6〜0.8×0.8〜1.3μｍであ
った。菌核顆粒、胞子嚢および鞭毛胞子は観察されなか
った。

［２］培養特性： 上述のシャーリングとゴットリープが記載している、お
よびワクスマン 「エス・エー・ワクスマン：ジ・アクチノミセーティ
ス、第２巻：クラシフィケーション・アイデンティフィ
ケーション・アンド・デスクリプション・オブ・ジェネ
ラ・アンド・スペシーズ，ザ・ウィリアムス・アンド・
ウィルキンス・カンパニー，バルチモア,1961年（Waksm
an,S.A.:The actinomycetes,Vol.2:Classification,ide
ntification and description of genera and species.
The williams and Wilkins Co.,Baltimore,1961）」が
記載している培地計10種について培養特性を観察した。

30℃で21日間培養を行った。この研究で用いた色名は、
メスーエン・ハンドブック・オブ・カラー「エー・コー
ネラップおよびジェー・エイチ・ワンシャー：メス−エ
ン・ハンドブック・オブ・カラー，メス−エン，ロンド
ン,1978年（Kornerup,A.and J.H.Wanscher:Methuen Han
dbook of Colour,Methuen,London,1978）」からとっ
た。

結果を第１表に示す。

気菌糸は灰色ないしは茶色がかった灰色であった。コロ
ニーの一部は黒く、湿潤した状態となり、たいていの寒
天培地上で吸湿性を示した。発育の裏側は黄色がかった
茶色、茶色および暗い茶色であった。裏側の菌糸体色素
はpH感受性ではなかった。メラノイド色素、その他の可
溶性色素は生産されなかった。

ベッカーらの方法「ビー・ベッカー，エム・ピー・レシ
ヴァリエル，アール・イー・ゴードンおよびエイチ・エ
ー・レシヴァリエル：ラピッド・ディファレンシエーシ
ョン・ビトウィーン・ノカルジア・アンド・ストレプト
ミセス・バイ・ペーパー・クロマトグラフィー・オブ・
ホール・セル・ヒドロリゼーツ：アプライド・マイクロ
バイオロジー（Becker,B.,M.P.Lechevalier,R.E.Gordon
and H.A.Lechevalier:Repid differentiation between
Nocardia and Streptomyces by paper chromatography
of whole cell hydrolysates:Appl.Microbiol.），12,
421−423,1964）」および山口の方法「山口：コンパリ
ソン・オブ・ザ・セル・ウォール・コンポジション・オ
ブ・モルホロジカリー・ディスティンクト・アクチノミ
セーテス：ジャーナル・オブ・バクテリオロジー（Yama
guchi,T.:Comparison of the cell wall composition o
f morphologically distinct actinomycetes:J.Bacteri
ol.），89,444−453,1965）」によって細胞壁分析を行
った。菌株NO.9326の全細胞加水分解物の分析により、L
L−ジアミノピメリン酸の存在が示された。従って、こ
の株の細胞壁はタイプＩであると考えられる。

［３］生物学的および生理学的性質： 生理学的性質および炭素源の利用をそれぞれ第２表およ
び第３表に示す。

炭素源の利用は、プリドハムおよびゴットリープの方法
「ティー・ジー・プリドハムおよびディー・ゴットリー
プ：ザ・ユーティリゼーション・オブ・カーボン・コン
パウンズ・バイ・サム・アクチノマイセッテールズ・ア
ズ・アン・エイド・フォー・スペーシーズ・デターミネ
ーション：ジャーナル・オブ・バクテリオロジー（Prid
ham,T.G.and D.Gottlied:The utilization of carbon c
ompounds by some Actinomycetales as an aid for spe
cies determination:J.Bacteriol.），56,107−114,194
8」に従って調べた。

菌株NO.9326の形態および化学的特徴から、該微生物を
ストレプトミセス属に明瞭に帰属させることができた。

菌株NO.9326を、バージーのマニュアル第８版「アール
・イー・ブチャナンおよびエヌ・イー・ギボンズ：バー
ジーズ・マニュアル・オブ・ディターミネイティブ・バ
クテリオロジー，第８版，ザ・ウィリアムス・アンド・
ウィルキンス・カンパニー，バルチモア,1974年（Bucha
nan,R.E.and N.E.Gibbons:Bergey′s manual of detemi
native bacteriology,eight edition.The Williams and
Wilkins Co.,Baltimore,1974）」 中に記載されているストレプトミセス種、シャーリング
のISPレポート［「イー・ビー・ジャーリングおよびデ
ィー・ゴットリープ：コーオペレーティブ・ディスクリ
プション・オブ・タイプ・カルチャー・オブ・ストレプ
トミセス,2,スピーシーズ・ディスクリプション・フロ
ム・ファースト・スタディー，インターナショナル・ジ
ャーナル・オブ・システマティク・バクテリオロジー
（Shirling,E.B.and D.Gottlieb:Cooperative descript
ion of type culture of Streptomyces.2.Species desc
riptions from first study.Intern.J.Syst.Bacterio
l.）18:69−189,1698」、「イー・ビー・シャーリング
およびディー・ゴットリープ：コーオペラティブ・ディ
スクリプション・オブ・タイプ・カルチャー・オブ・ス
トレプトミセス,3,アディショナル・スピーシーズ・デ
ィスクリプションズ・フロム・ファースト・アンド・セ
カンド・スタディーズ，インターナショナル・ジャーナ
ル・オブ・システマティク・バクテリオロジー（Shirli
ng,E.B.and D.Gottlieb:Cooperative descriptions of
type culture of Streptomyces.3.Additional species
descriptions from first and second studies.Intern.
J.Syts.Bacteriol.）18:279−392,1968」および 「イー・ビー・シャーリングおよびディー・ゴットリー
プ：コーオペラティブ・ディスクリプション・オブ・タ
イプ・カルチャー・オブ・ストレプトミセス,4,スピー
シーズ・ディスクリプションズ・フロム・ザ・セカンド
・サード・アンド・フォース・スタディーズ，インター
ナショナル・ジャーナル・オブ・システマティク・バク
テリオロジー（Shirling,E.B.and D.Gottlieb:Cooperat
ive description of type culture of Streptomyces.4.
Species descriptions from the second,third and fou
rth studies.Intern.J.Syst.Bacteriol.）19:391−512,
1969」］に記載されているストレプトミセス種、“アプ
ルーブド・リスト・オブ・バクテリアル・ネームズ” 「ブイ・ビー・ディー・スケルマン；ブイ・マックゴー
ワンおよびピー・エイチ・エー・スネース：アプルーブ
ド・リスト・オブ・バクテリアル・ネームズ，インター
ナショナル・ジャーナル・オブ・システマティク・バク
テリオロジー（Skerman,V.B.D.;V.McGowan ＆ P.H.A.Sn
eath:Approved list of bacterial names.Intern.J.Sys
t.Bacteriol.）30:225−420,1980」にリストされている
種ならびに他の参考文献［「エス・ティー・ウィリアム
ス：エム・グッドフェロー，ジー・アルダーソン，イー
・エム・エイチ・ウェリントン，ピー・エイチ・エー・
スネースおよびエム・ジェイ・サッキィン：ニューメリ
カル・クラシフィケーション・オブ・ストレプトミセス
・アンド・リレーティド・ジェネラ，ジャーナル・オブ
・ジェネラル・マイクロバイオロジー（Williams,S.T.:
M.Goodfellow,G.Alderson,E.M.H.Wellington,P.H.A.Sne
ath and M.J.Sackin:Numerical claasification of Str
eptomyces and related genera.J.Gen.Microbicl.）12
9:1743−1813,1983」および「エー・ディーツ：クリテ
リア・フォア・キャラクタリゼーション・オブ・ヒグロ
スコピカス・ストレインズ（Dietz,A.:Criteria for ch
aracterization of Hygroscopicus strains），新井編
“アクチノミセーティス；ザ・バウンダリー・マイクロ
オーガニズム（Actinomycetes;The Boundary Microorga
nisms）"PP183−191,1976」］に記載されている種と比
較した。

その結果、菌株NO.9326は、ストレプトミセス・ビオラ
セオニガーに極めて似ていることが判明した。従って、
菌株NO.9326をストレプトミセス・ビオラセオニガーと
同定し、ストレプトミセス・ビオラセオニガーNO.9326
と命名した。

WS−9326AおよびWS−9326Bの生産 この発明の新規WS−9326AおよびWS−9326Bは、ストレプ
トミセス属に属するWS−9326Aおよび／またはWS−9326B
生産菌株（たとえばストレプトミセス・ビオラセオニガ
ーNO.9326、微工研条寄第1667号）を培地中で培養する
ことによって生産できる。

一般に、WS−9326AおよびWS−9326Bは、同化性の炭素源
および窒素源を含有する水性栄養培地中で、WS−9326A
および／またはWS−9326B生産菌株を、好ましくは好気
性条件下で（たとえば振盪培養、深部培養など）、培養
することによって生産できる。

該栄養培地中の好ましい炭素源は、グルコース、キシロ
ース、ガラクトース、グリセリン、でんぷん、デキスト
リンなどの炭水化物である。包含されうる他の炭素源
は、マルトース、ラムノース、ラフィノース、アラビノ
ース、マンノース、サリシン、コハク酸ナトリウムなど
である。

好ましい窒素源は、酵母エキス、ペプトン、グルテン
粉、綿実粉、大豆粉、コーンスチープリカー、乾燥酵
母、小麦胚芽、フェザーミール、落花生粉、ならびに、
アンモニウム塩類（たとえば硝酸アンモニウム、硫酸ア
ンモニウム、リン酸アンモニウムなど）、尿素、アミノ
酸などの無機および有機窒素化合物である。

炭素源および窒素源は好ましくはそれらの組合わせで使
用されるが、微量の生育因子および相当量の無機栄養素
を含有していれば純度の低い物質も使用でき、必ずしも
純粋な形で使用する必要はない。所望により培地に炭酸
ナトリウムまたは炭酸カルシウム、燐酸ナトリウムまた
は燐酸カリウム、塩化ナトリウムまたは塩化カリウム、
沃化ナトリウムまたは沃化カリウム、マグネシウム塩、
銅塩、コバルト塩等の無機塩を添加してもよい。特に培
養培地が著しく発泡する場合には、必要により液状パラ
フィン、脂肪油、植物油、鉱油またはシリコンのような
消泡剤を添加してもよい。

WS−9326AおよびWS−9326Bを大量生産する条件として
は、深部好気培養が好ましい。少量生産にはフラスコま
たはびん中で振とう培養または表面培養が行われる。さ
らにまた、大型タンク内で生育を実施する場合には、WS
−9326AおよびWS−9326Bの生産工程における生育遅延を
回避するために、微生物の前培養を用いて生産タンク中
に菌を接種するのが好ましい。すなわち、比較的少量の
培養培地に微生物の胞子または菌糸を接種し、その接種
培地に培養して微生物の前培養接種物をまず生産し、次
いで培養した前培養接種物を無菌的に大型タンクに移す
のが望ましい。この前培養接種物を生産する培地は、WS
−9326AおよびWS−9326Bの生産に使用される培地と実質
的に同じであってもよく、また異なってもよい。

培養混合物の撹拌および通気は種々の方法で行うことが
できる。撹拌はプロペラまたはこれに準ずる撹拌装置を
用いるか、醗酵器を回転させるかまたは振とうするか、
種々のポンプ装置を用いるか、または培地中に滅菌空気
を通すことによっても行うことができる。通気は滅菌空
気を醗酵混合物中を通過させることにより行ってもよ
い。

醗酵は通常、約20℃〜40℃の温度範囲、好ましくは25〜
35℃で、約50〜150時間行われるが、醗酵条件および醗
酵規模によって適宜変化させればよい。

このようにして生産されたWS−9326AおよびWS−9326B
は、他の既知の生物学的活性物質の回収に通常使用され
る慣用の方法で培養培地から回収することができる。生
産されたWS−9326AおよびWS−9326は、培養菌糸中およ
び濾液中に見出され、従ってWS−9326AおよびWS−9326B
は、培養ブロスの濾過または遠心分離によって得られる
菌糸および濾液から、減圧濃縮、凍結乾燥、常用の溶媒
による抽出、pH調整、例えば陰イオン交換樹脂または陽
イオン交換樹脂、非イオン性吸着樹脂等の常用の樹脂に
よる処理、例えば活性炭、ケイ酸、シリカゲル、セルロ
ース、アルミナ等の常用の吸着剤による処理、結晶化、
再結晶化等の慣用の方法によって分離、精製することが
できる。

上記のプロセスに従って生産されたWS−9326Aは、次の
物理化学的性質を有する。

（１）形状および色調： 無色の粉末 （２）呈色反応 陽性：硫酸セリウム反応、沃素蒸気反応、塩化第二鉄−
フェリシアン化カリウム反応 陰性：ニンヒドリン反応、モーリッシュ反応、塩化第二
鉄反応、エールリッヒ反応、パウリ反応 （３）溶解性： 可溶：メタノール、エタノール 難溶：アセトン、酢酸エチル 不溶：水、クロロホルム （４）融点:187〜190℃ ５）比旋光度： ▲［α］²³ _D▼：−84゜（Ｃ＝1.0,MeOH） ６）紫外線吸収スペクトル： ７）赤外線吸収スペクトル： 上記スペクトルのチャートを図１に示す。

（８）元素分析： 実験値:C60.18,H6.61,N10.32 C₅₄H₆₈N₈O₁₃・2H₂Oとしての計算値： C60.43,H6.76,N10.44 ９）薄層クロマトグラフィー： （10）分子式:C₅₄H₆₈N₈O₁₃ （11）分子量： FAB−MS:m/z1037（Ｍ＋Ｈ）^＋ （12）物質の性質： 酸性物質 （13）¹³C核磁気共鳴スペクトル： （100MHz,CD₃OD）δ 175.69（ｓ）,174.70（ｓ）， 173.73（ｓ）,173.38（ｓ）， 172.89（ｓ）,171.04（ｓ）， 170.45（ｓ）,167.79（ｓ）， 167.15（ｓ）,159.20（ｓ）， 140.05（ｄ）,139.12（ｓ）， 138.71（ｓ）,135.27（ｄ）， 134.85（ｓ）,132.11（ｄ）， 132.03（ｓ）,131.69（ｄ）x2, 130.70（ｄ）,129.90（ｄ）， 129.61（ｄ）x2,129.22（ｄ）x2, 128.55（ｄ）,128.04（ｄ）， 127.99（ｄ）,127.38（ｄ）， 126.09（ｓ）,123.70（ｄ）， 115.63（ｄ）x2,73.46（ｄ）， 71.34（ｄ）,62.80（ｔ）， 59.53（ｄ）,56.91（ｄ）， 56.76（ｄ）,55.55（ｄ）， 53.64（ｄ）,52.10（ｄ）， 39.85（ｔ）,37.18（ｔ）， 37.09（ｔ）,34.58（ｑ）， 31.37（ｔ）,24.56（ｄ）， 23.63（ｔ）,22.71（ｑ）， 22.52（ｑ）,21.17（ｑ）， 17.19（ｑ）,14.13（ｑ）， 上記スペクトルのチャートを図２に示す。

（14）¹H核磁気共鳴スペクトル： （400MHz,CD₃OD）δ 7.80（1H,d,J＝８Hz）， 7.67（1H,d,J＝16Hz）， 7.45−7.14（9H,m）， 7.06（2H,d,J＝８Hz）， 6.83（1H,s）， 6.65（2H,d,J＝８Hz）， 6.59（1H,d,J＝12Hz）， 5.88（1H,dt,J＝12および７Hz）， 5.55（1H,m）， 5.35（1H,ブロードシグナル（broad signal））， 5.10（1H,dd,J＝３および9.5Hz）， 4.68（1H,d,J＝10Hz）， 4.55（1H,t,J＝６Hz）， 4.48（1H,dd,J＝３および12Hz）， 3.92（2H,d,J＝６Hz）， 3.70（1H,t,J＝7.5Hz）， 3.62（1H,m）， 3.46（1H,dd,J＝３および14Hz）， 2.94（1H,dd,J＝３および16Hz）， 2.89（3H,s）， 2.74（1H,dd,J＝9.5および16Hz）， 2.69（1H,dd,J＝12および14Hz）， 2.14（2H,m）， 1.5−1.4（2H,m）， 1.20（3H,d,J＝６Hz）， 1.08（3H,d,J＝６Hz）， 1.0−0.8（2H,m）， 0.91（3H,t,J＝７Hz）， 0.6（1H,m）， 0.53（3H,d,J＝６Hz）， 0.51（3H,d,J＝６Hz）， 上記スペクトルのチャートを図３に示す。

（15）アミノ酸分析： WS−9326A（５mg）を、封管中、塩酸（２ml）により110
℃で20時間加水分解した。混合物を蒸発乾固して加水分
解産物を得て、これを日立835自動アミノ酸分析装置に
より分析した。

アミノ酸分析結果： Thr（２）、Leu（１）、Phe（１）、Asp（１）、Ser
（１）、メチルアミン（１）およびアンモニウム（１） 図２および３に示された¹³C−および¹H核磁気共鳴スペ
クトルは、WS−9326AがCD₃OD溶液中で少なくとも２つの
安定なコンフォメーション（conformation）をとってい
ることを示している。そして、上記（13）および（14）
に記載された化学シフトはWS−9326Aの主要なコンフォ
ーマー（conformer）の化学シフトである。

上記のプロセスに従って生産されたWS−9326Bは、次の
物理化学的性質を有する。

（１）形状および色調： 無色の粉末 （２）呈色反応： 陽性：硫酸セリウム反応、沃素蒸気反応 陰性：ニンヒドリン反応 （３）溶解性： 可溶：メタノール 難溶：エタノール 不溶：水、アセトン、酢酸エチル、クロロホルム （４）融点:165〜170℃（分解） （５）比旋光度： ▲［α］²³ _D▼：−64゜（Ｃ＝1.0,MeOH） ６）紫外線吸収スペクトル： （７）分子式： C₅₄H₇₀N₈O₁₃ （８）元素分析： 実験値:C59.97,H6.87,N10.29 C₅₄H₇₀N₈O₁₃・2H₂Oとしての計算値： C60.32,H6.94,N10.42 （９）分子量： FAB−MS:m/z1061.6（Ｍ＋Na）^＋ （10）薄層クロマトグラフィー： （11）赤外線吸収スペクトル： （12）¹³C核磁気共鳴スペクトル： （100MHz,CD₃OD）δ 174.99（ｓ）,174.54（ｓ）， 173.60（ｓ）,173.41（ｓ）， 173.30（ｓ）,171.27（ｓ）， 170.74（ｓ）,170.19（ｓ）， 168.69（ｓ）,157.59（ｓ）， 140.53（ｄ）,139.35（ｓ）， 139.18（ｓ）,135.76（ｄ）， 134.17（ｓ）,131.15（ｄ）x2, 130.93（ｄ）,130.35（ｄ）， 129.88（ｄ）x2,129.39（ｄ）x2, 128.70（ｄ）,128.58（ｓ）， 128.13（ｄ）,127.64（ｄ）， 127.53（ｄ）,121.99（ｄ）， 116.45（ｄ）x2,72.76（ｄ）， 70.82（ｄ）,62.73（ｔ）， 62.67（ｄ）,59.35（ｄ）， 56.33（ｄ）x2,56.19（ｄ）， 53.36（ｄ）,52.24（ｄ）， 40.24（ｔ）,37.55（ｔ）， 37.08（ｔ）,33.69（ｔ）， 31.57（ｔ）,29.93（ｑ）， 24.61（ｄ）,23.70（ｑ）， 23.59（ｔ）,22.16（ｑ）， 21.36（ｑ）,17.12（ｑ）， 14.23（ｑ）， 上記スペクトルのチャートを図６に示す。

（13）¹H核磁気共鳴スペクトル： （400MHz,CD₃OD）δ 7.86（1H,d,J＝16Hz）， 7.80（1H,br,d,J＝８Hz）， 7.12−7.42（11H,m）， 6.77（2H,d,J＝8.5Hz）， 6.61（1H,d,J＝11.5Hz）， 5.88（1H,dt,J＝7.5および11.5Hz）， 5.08（1H,dd,J＝3.5および10Hz）， 5.04（1H,q,J＝6.5Hz）， 4.66（1H,dd,J＝3.5および13Hz）， 4.65（1H,d,J＝11.5Hz）， 4.56（1H,dd,J＝2.5および７Hz）， 4.48（1H,dd,J＝4.5および11Hz）， 4.46（1H,s）， 3.88（2H,m）， 3.64（2H,m）， 3.51（1H,dd,J＝3.5および14Hz）， 3.17（1H,dd,J＝4.5および14Hz）， 3.01（1H,dd,J＝11および14Hz）， 2.94（1H,dd,J＝3.5および16Hz）， 2.71（3H,s）， 2.71（1H,dd,J＝10および16Hz）， 2.64（1H,dd,J＝13および14Hz）， 2.04（2H,m）， 1.43（2H,m）， 1.28（2H,m）， 1.20（3H,d,J＝６Hz）， 0.95（3H,d,J＝6.5Hz）， 0.87（3H,t,J＝7.5Hz）， 0.53（1H,m）， 0.52（6H,d,J＝10.5Hz）， 上記スペクトルのチャートを図７に示す。

図６および７に示された¹³Cおよび¹H核磁気共鳴スペク
トルは、WS−9326BがCD₃OD溶液中で少なくとも２つの安
定なコンフォメーションをとっていることを示してい
る。そして、上記（12）および（13）に記載された化学
シフトはWS−9326Bの主要なコンフォーマーの化学シフ
トである。

適当な“WS−9326Aの誘導体”としては、１〜３個のア
シル基で置換されたWS−9326Aなどが挙げられる。

適当な“WS−9326Bの誘導体”としては１〜３個のアシ
ル基で置換されたWS−9326Bなどが挙げられる。

適当な“アシル”としては、低級アルカノイル（例え
ば、ホルミル、アセチル、プロピオニルなど）などのよ
うな慣用のアシルが挙げられる。

１〜３個のアシル基で置換されたWS−9326A、１〜３個
のアシル基で置換されたWS−9326Bまたはそれらの塩
は、WS−9326A、WS−9326Bまたはそれらの塩をアシル化
剤と反応させることにより製造できる。

この反応は、後記実施例２、４または５に示された方法
などのような慣用の方法で行うことができる。

好ましいWS−9326AまたはWS−9326Bの誘導体としては、
１個のアセチル基で置換されたWS−9326A（以下、モノ
アセチル−WS−9326Aと略称）、２個のアセチル基で置
換されたWS−9326A（以下、ジアセチル−WS−9326Aと略
称）または３個のアセチル基で置換されたWS−9326A
（以下、トリアセチル−WS−9326Aと略称）である。

WS−9326A、WS−9326Bまたはそれらの誘導体の医薬とし
て許容される塩としては慣用の無毒性塩が挙げられる。

WS−9326A、WS−9326Bおよびそれらの誘導体の生物学的
性質 WS−9326A、WS−9326Bおよびそれらの誘導体は、Ｐ物質
拮抗作用、ニューロキニンＡ（Ｋ物質）拮抗作用などの
薬理活性を有し、それゆえ喘息などの治療および予防に
有用である。

かかる薬理活性を示す例として、若干の薬理試験データ
を以下に示す。

（１）ラジオリガンド結合アッセイ （ａ）粗製膜画分受容体の調製 脳 雌性ウィスター（Wister）ラット（200g）を用いた。試
薬は全てシグマ・ケミカル社から購入した。全脳（4g）
を細かく切って小片とし、容積量で８倍の氷冷緩衝液Ｉ
（50mMトリス−HCl pH7.5,5mM MnCl₂,0.02％BSA,2μg/m
lキモスタチン、４μg/mlロイペプチンおよび40μg/ml
バシトラシン）中でウルトラ−ジスパーザー（ヤマトLK
−21型）を用いてホモジナイズした。このホモジネート
を−20℃で保存するかまたは直ちに結合実験に用いた。

肺 ハートレー系雄性アルビノモルモット（600g）を断頭屠
殺した。気管および肺を摘出し、使用時まで−80℃で保
存した。これらの組織（150g）を解凍し、500mlの緩衝
液（0.25Mスクロース,50mMトリス−HClpH7.5,0.1mM EDT
A）中でコンパクトミキサー（松電MJ−761）を用いてホ
モジナイズした。該組織を、ウルトラ−ジスパーザー
（ヤマトLK−21型）を用い、最大レンジにセットして、
ホモジナイゼーション操作の間に10秒間の冷却時間をは
さんで10秒間づつホモジナイズした（合計ホモジナイゼ
ーション時間:60秒間）。ホモジネートを遠心分離（900
×ｇ、10分間）して、組織のかたまりを除去し、上澄み
を14000×ｇで20分間遠心分離して、ペレットを得た。
これを粗製膜画分と呼ぶ。ペレットを緩衝液Ｉに懸濁
し、テフロンホモジナイザーを用いてホモジナイズし、
14000×ｇで20分間遠心分離した。ペレットを−20℃で
保存した。

（ｂ）膜画分受容体への³H−Ｐ物質の結合³ H−Ｐ物質（1nM、ニューイングランド・ニュークリア
ー）を緩衝液Ｉ中で50μｌの膜画分と共に、最終体積25
0μｌで、４℃にて30分間インキュベートした。インキ
ュベーション期間が終ると、内容物を、ワットマンGF/B
ガラス繊維フィルター（使用前に0.1％ポリエチレンイ
ミンにより３時間前処理したもの）によりセルハーベス
ター（ブランデルＭ−24S）を用いてすばやく濾過し
た。つぎにフィルターを、０℃で、洗浄用緩衝液（50mM
トリス−HCl.pH7.5）で10回（合計３ml）洗った。パッ
カードシンチレーションカウンター（パーカード・トラ
イ−カーブ4530）を用い、３mlのアクアゾール−２中で
放射能をカウントした。

（２）モルモットの気管に対するWS−9326Aの作用標準
的手法に従って、ハートレー系雄性成熟アルビノモルモ
ット（600g）から気管のらせん状条片（ストリップ）を
調製し、ジャケットつきの30mlガラス製器官バス（浴容
器）内に懸垂した。気管条片の張力を、ポリグラフ（バ
イオピシオグラフ180システム、三栄）に接続したトラ
ンスデューサーによって、定量的に測定した。気管条片
（幅２mm、長さ50mm）は、次の組成の酸素付加（95％
O₂:5％CO₂）温（37℃）タイロード液を入れた30mlの器
官バス内に500mgの静止張力下に懸垂した:NaCl137mM（8
g/）、KCl2.7mM（0.2g/）、CaCl₂・2H₂O1.8mM（0.2
64g/）、MgCl₂・6H₂O1.02mM（0.208g/）、NaHCO₃1
1.9mM（1g/）、NaH₂PO₄・2H₂O0.42mM（0.066g/）お
よびグルコース5.5mM（1g/）。組織を90分間平衡化さ
せ、つぎに各種の気官支収縮剤（Ｐ物質10^-8Mおよびニ
ューロキニンA10^-9M）に対してWS−9326Aを試験した。
三栄レクチグラフ−8Sレコーダー（三栄）により張力を
記録した。

（３）ニューロキニンＡおよびカプサイシンにより誘発
された気官支収縮に対するWS−9326Aの影響 体重300〜500gのハートレー系雄性モルモットをペント
バルビタールナトリウム（10mg／動物を腹腔内投与）に
より麻酔下に固定した。ニューロキニンＡ（またはカプ
サイシン）および薬物投与のため、頚動脈にカニューレ
を挿入した。人工換気のため、カテーテルを気管に挿入
した。小型呼吸ポンプ（ハーバードＢ−34、５ml／行
程、60行程／分）により動物に呼吸させた。肺の膨張に
対する抵抗をコンゼット−レスラー（Konzett−Ｒssl
er）のオーバーフロー法の変法によって測定した。

作用物質を静脈内投与し、拮抗物質（0.1％メチルセル
ロース−食塩水中に調製）を下記のように静脈内投与し
た。

（４）モルモットでのニューロキニンＡ誘発気管支収縮
に対するWS−9326Aの気管内投与の影響 気管支収縮に対するWS−9326A吸入の効果を試験するた
め、WS−9326AをDMSOに溶解し、気管内に投与した。方
法は上記とほとんど同じである。

第８表に示されているように、WS−9326Aは広範囲に有
効であった。

（５）急性毒性 試験化合物を用量を変えて５匹のマウスに単回腹腔内注
射することにより、ddYマウス（５週令、雄）におけるW
S−9326Aの急性毒性を求めた。WS−9326AのLD₅₀値は250
mg／kgより大きく、500mg／kgより小さかった（500mg／
kg＞LD₅₀＞250mg／kg）。

この発明の医薬組成物は、外用、腸管内または非経口適
用に適した有機または無機の担体または賦形剤と混合し
た形でWS−9326A、WS−9326Bまたはそれらの誘導体を活
性成分として含有する医薬製剤の形で、たとえば固体、
半固体または液体の形で、使用できる。該活性成分は、
たとえば、錠剤、ペレット、カプセル、溶液、乳濁液、
懸濁液、その他使用に適した任意の形態とするための通
常の、製薬上許容しうる無毒性の担体と混合しうる。使
用しうる担体は、水、グルコース、ラクトース、アカシ
アゴム、ゼラチン、マンニトール、でんぷんのり、三ケ
イ酸マグネシウム、タルク、とうもろこしでんぷん、ケ
ラチン、コロイド性シリカ、ばれいしょでんぷん、尿
素、その他、固体、半固体または液体の形の製剤の製造
に当って使用するに適した担体であり、さらに、助剤、
安定剤、増粘剤、着色剤および香料も使用できる。活性
目的化合物は、疾患の過程または状態に所望の効果を及
ぼすのに十分な量だけ、該医薬組成物に含有させる。

WS−9326A、WS−9326Bまたはそれらの誘導体の治療に有
効な用量は、処置すべき各個の患者の年令および状態に
より異なり、またそれらに依存するが、１日量として約
0.01〜1000mg、好ましくは0.1〜500mg、より好ましくは
0.5〜100mgの有効成分を疾患治療のために与えるのが一
般的であり、平均一回用量としては通常約0.5mg、１m
g、５mg、10mg、50mg、100mg、250mgまたは500mgを投与
する。

以下の実施例は、本発明を説明するために挙げるもので
ある。

実施例１ 醗酵 可溶性でんぷん（１％）、スクロース（１％）、グルコ
ース（１％）、綿実粉（１％）、ペプトン（0.5％）、
脱脂大豆粉（0.5％）および炭酸カルシウム（0.2％）を
含有する種培地（160ml）（pHは6N水酸化ナトリウムで
7.0に調整）を500ml容の三角フラスコ20本の各々に注入
し、120℃で30分間滅菌した。

ストレプトミセス・ビオラセオニガーNO.9326の斜面培
養１白金耳を培地の各々に接種し、ロータリーシェーカ
ー（220rpm、行程5.1cm）上、30℃で３日間培養した。
得られた種培養を、グリセリン（３％）、脱脂大豆粉
（0.5％）、きな粉（1.5％）、炭酸カルシウム（0.2
％）および沃化ナトリウム（NaI）（0.001％）を含有す
る200ステンレス製ジャーファーメンター中のあらか
じめ滅菌した生産培地160に接種した。通気量160／
分および回転数200rpm、30℃で３日間、培養した。

醗酵液中のWS−9326Aの量を、日立655型ポンプを用いて
の高速液体クロマトグラフィー（HPLC）によって定量し
た。Ｒ−ODS−５充填スチールカラム（内径4.6mm、長さ
250mm）（YMC−充填カラム）を流速1.0m/分で使用し
た。

使用した移動相は、メタノールと水との混合物（8:2）
であった。HPLCアッセイ用の試料は次のようにして調製
した：等体積のアセトンを醗酵液にはげしく撹拌しなが
ら加え、１時間放置し、つぎに遠心分離した。上澄みの
５μｌを日立655型サンプルインジェクターに注入し
た。

分離および精製 培養液（150）に撹拌下に等体積のアセトンを加え
た。混合物を室温で１時間放置したのち、濾過した。濾
液を減圧下に80まで濃縮し、1N塩酸でpHを7.0に調整
し、ついで酢酸エチル80で抽出した。抽出液を減圧下
に濃縮乾固し、シリカゲルカラム（キーゼルゲル60、70
〜230メッシュ、メルク、３）にかけた。カラムをｎ
−ヘキサン（10）、ｎ−ヘキサン−酢酸エチル［1:
1］（10）、酢酸エチル（20）で洗い、アセトン
（６）により活性物質をカラムから溶出させた。活性
画分を減圧下に乾燥し、シリカゲル（キーゼルゲル60、
70〜230メッシュ、メルク、1.2）カラムクロマトグラ
フィーに付した。カラムをクロロホルム−メタノール
［20:1］（５）で洗い、クロロホルム−メタノール
［10:1］溶液（６）で目的物質を溶出した。この画分
を減圧下に乾燥して粉末を得た。この粉末を少量のメタ
ノールに溶解し、NSゲル（日本精密、500ml）のカラム
にかけた。目的物質をメタノール−水［8:2］（２）
で溶出し、減圧下に300mlに濃縮し、つぎに酢酸エチル5
00mlで抽出した。抽出液を減圧下に濃縮乾固して、粉末
（5g）を得た。この粉末（5g）をメタノール10mlに溶解
し、Ｄ−ODS−５充填スチールカラム（内径20mm、長さ2
50mm）（YMC充填カラム）を用いてのHPLCにかけ、メタ
ノールと水との混合物［8:2］により、流速9.9ml／分で
溶出した。こうして得た活性画分を減圧下に濃縮し、つ
ぎに酢酸エチルで抽出した。抽出液を減圧下に濃縮乾固
して、WS−9326Aの純粋な白色粉末（150mg）を得た。

実施例２ WS−9326A（300mg）のピリジン（4.5ml）溶液に、無水
酢酸（1.5ml）および４−ジメチルアミノピリジン（１m
g）を加え、反応混合物を一夜室温で放置した。反応混
合物を蒸発乾固して油状物を得て、これを調製TLC（ク
ロロホルム−メタノール（10:1））により精製した。

得られた生成物をジエチルエーテルで粉末化して、トリ
アセチル−WS−9326A（332mg）を無色の粉末として得
た。トリアセチル−WS−9326Aの物理化学的性質は次の
通りである。

（１）形状および色調：無色の粉末 （２）呈色反応： 陽性：硫酸セリウム反応、硫酸反応、沃素蒸気反応 陰性：ニンヒドリン反応 （３）溶解性： 可溶：メタノール、ジメチルスルホキシド 難溶：クロロホルム、ジエチルエーテル 不溶:n−ヘキサン （４）融点:141〜143℃ （５）比旋光度：▲［α］²³ _D▼：−122゜（Ｃ＝1.0,Me
OH） （６）紫外線吸収スペクトル： （７）分子式:C₆₀H₇₄N₈O₁₆ （８）元素分析： 実験値:C60.19,H6.42,N9.27 C₆₀H₇₄N₈O₁₆・2H₂Oとしての計算値： C60.09,H6.56,N9.34 （９）分子量： FAB−MS:m/z1163.6（Ｍ＋Ｈ）^＋ （10）薄層クロマトグラフィー： （11）赤外線吸収スペクトル： （12）物質の性質： 中性物質 （13）¹³C核磁気共鳴スペクトル： （100MHz,CDCl₃−CD³OH（10:1））δ 174.20（ｓ）,173.23（ｓ）， 173.06（ｓ）,171.32（ｓ）， 171.02（ｓ）,170.84（ｓ）， 169.79（ｓ）,169.59（ｓ）， 169.55（ｓ）,168.52（ｓ）， 167.03（ｓ）,166.36（ｓ）， 151.02（ｓ）,140.74（ｄ）， 138.82（ｓ）,138.74（ｓ）， 137.12（ｓ）,135.23（ｄ）， 133.75（ｓ）,131.31（ｓ）， 130.20（ｄ）,129.96（ｄ）x2, 129.34（ｄ）,129.21（ｄ）x2, 128.56（ｄ）x2,127.24（ｄ）， 126.95（ｄ）,126.74（ｄ）， 126.63（ｄ）,126.50（ｄ）， 122.10（ｄ）x2,121.29（ｄ）， 70.99（ｄ）,69.22（ｄ）， 63.73（ｔ）,58.13（ｄ）， 56.10（ｄ）,53.22（ｄ）， 52.66（ｄ）,52.18（ｄ）， 49.93（ｄ）,39.75（ｔ）， 39.39（ｑ）,39.06（ｔ）， 35.57（ｔ）,30.65（ｔ）， 24.26（ｄ）,23.15（ｑ）， 22.79（ｔ）,21.42（ｑ）， 21.21（ｑ）,20.99（ｑ）， 20.83（ｑ）,17.05（ｑ）， 16.18（ｑ）,13.82（ｑ）， 上記スペクトルのチャートを図４に示す。

（14）¹H核磁気共鳴スペクトル： （400MHz,CDCl₃−CD₃OH（10:1））δ 8.25（1H,d,J＝８Hz）， 8.02（1H,d,J＝８Hz）， 7.88（1H,d,J＝16Hz）， 7.86（1H,d,J＝８Hz）， 7.70（1H,d,J＝６Hz）， 7.61（1H,d,J＝８Hz）， 7.45（1H,d,J＝７Hz）， 7.32−7.15（6H,m）， 7.03（2H,d,J＝８Hz）， 7.00−6.94（3H,m）， 6.88−6.79（4H,m）， 6.70（1H,s）， 6.49（1H,d,J＝12Hz）， 5.76（1H,dt,J＝12および7.5Hz）， 5.54（1H,ブロード（broad）ｓ）， 5.50−5.45（2H,m）， 4.93（1H,m）， 4.75（1H,m）， 4.65−4.56（2H,m）， 4.46（1H,dd,J＝６および11Hz）， 4.31（1H,t,J＝６Hz）， 4.22（1H,m）， 4.18（1H,dd,J＝８および11Hz）， 3.56（3H,s）， 2.90（1H,dd,J＝６および16Hz）， 2.85−2.80（2H,m）， 2.56（1H,dd,J＝４および16Hz）， 2.26（3H,s）， 2.00（3H,s）， 1.96−1.89（2H,m）， 1.85（3H,s）， 1.58（1H,m）， 1.35（3H,d,J＝６Hz）， 1.32−1.20（3H,m）， 1.07（3H,d,J＝６Hz）， 0.84（1H,m）， 0.72（3H,d,J＝６Hz）， 0.71（3H,t,J＝7.5Hz）， 0.65（3H,d,J＝６Hz）． 上記スペクトルのチャートを図５に示す。

実施例３ 醗酵 可溶性でんぷん（１％）、スクロース（１％）、グルコ
ース（１％）、綿実粉（１％）、ペプトン（0.5％）、
脱脂大豆粉（0.5％）および炭酸カルシウム（0.2％）を
含有する種培地（160ml）を、500ml三角フラスコ10本の
各々に注入し、120℃で30分間滅菌した。

ストレプトミセス・ビオラセオニガーNO.9326の斜面培
養の１白金耳をそれら培地の各々に接種し、ロータリー
シェーカー上で（220rpm、行程5.1cm）30℃にて３日間
培養した。

得られた種培養を、500ステンレス製ジャーファーメ
ンター中の、可溶性でんぷん（１％）、スクロース（１
％）、グルコース（１％）、綿実粉（１％）、ペプトン
（0.5％）、脱脂大豆粉（0.5％）、炭酸カルシウム（0.
2％）、アデカノールLG−109（消泡剤、商標：旭電化）
（0.07％）およびシリコーンKM−70（消泡剤、商標：信
越化学）（0.05％）を含有する。前もって120℃で30分
間滅菌した種培地（160）に接種した。培養は、通気
量160／分および回転数200rpm、30℃で１日間実施し
た。

得られた種培養ブロス（60）を、グリセリン（3.0
％）、脱脂大豆粉（1.0％）、鶏肉骨粉（1.0％）、炭酸
カルシウム（0.2％）、沃化ナトリウム（0.001％）、ア
デカノールLG−109（0.07％）およびシリコーンKM−70
（0.05％）を含有する、前もって120℃で30分間滅菌し
た。4,000ステンレス製ジャーファーメンター中の生
産培地に接種し、通気量3,000／分および回転数100rp
mのもとに30℃で４日間培養した。

醗酵の経過を、日立655型ポンプを用いての高速液体ク
ロマトグラフィー（HPLC）によりモニターした。逆相シ
リカゲル「YMC−充填カラムＲ−ODS−５」（商標、山村
化学研究所）を、流速1.0ml／分で用いた。使用した移
動相は、45％アセトニトリル水溶液であった。HPLC検定
用サンプルは次のようにして調製した：ブロスを激しく
撹拌しながら、これに等体積のアセトンを加え、混合物
を１時間放置したのち、遠心分離した。上澄みの５μｌ
を日立655型HPLCのインジェクターに注入した。

分離および精製 こうして得た培養ブロスを、濾過助剤として珪藻土（パ
ーライト・トプコ＃34、商標、昭和化学産業）（15kg）
を使用して濾過した。菌体ケーキを酢酸エチル（1600
）で抽出し、抽出液を濾過した。濾液（1400）を活
性炭（白鷺KL、商標、武田薬品工業）（200）のカラ
ムにかけた。カラムを酢酸エチル（120）で洗ったの
ち、酢酸エチル−メタノール［5:1］により溶出を行っ
た。活性画分（50から1030までの画分）を合せ、減
圧下に45まで濃縮した。得られた溶液に、撹拌下に、
ｎ−ヘキサン（120）を加えた。混合物を室温で１時
間放置したのち、シリカ＃600（中央シリカ）（３kg）
を濾過助剤として濾過した、こうして得たケーキをｎ−
ヘキサン（15）で洗い、目的物質をメタノール（20
）で溶離させた。

溶出液を減圧下に濃縮乾固した。残渣（500g）をメタノ
ール−酢酸−ジクロロメタン［1:1:2］（４）で溶解
し、シリカゲル（キーゼルゲル60、70〜230メッシュ、7
0）のカラムにかけた。カラムをメタノール−酢酸−
ジクロロメタン［1:1:2］（0.5）およびジクロロメタ
ン（25）で展開した。目的物質をジクロロメタン−メ
タノール［10:1］およびジクロロメタン−メタノール
［8:1］で溶出した。活性画分を合せ、減圧下で濃縮し
た。残渣をメタノール（１）で溶解した。得られた溶
液に撹拌下にアセトニトリル（９）を加えた。混合物
を室温で１時間放置し、生じた沈殿を濾取した。この沈
殿工程を３回反復した。こうして得た沈殿をアセトニト
リル（１）で洗い、乾燥して、WS−9326Aの白色粉末
（190g）を得た。これらの沈殿工程から得た濾液を合せ
て、減圧下に濃縮乾固した。残渣（11.7g）を80％メタ
ノール水溶液で溶解し、得られた溶液を活性炭（300m
l）のカラムに通した。カラムを80％メタノール水溶液
（１）で洗い、メタノール（６）で溶出を行った。
活性画分を合せ、減圧下に濃縮乾固した。残渣（3.4g）
をメタノール（12ml）で溶解した。得られた溶液を、50
％含水アセトニトリルで平衡化した逆相シリカゲルカラ
ム（YMC充填カラムＲ−345S−15/30（ODS）、φ50×l30
0mm×2;メーカー、山村化学研究所）にかけた。カラム
を、ウォーターズHPLC（システム500）を用いて、50％
含水アセトニトリルで展開した。WS−9326Bを含有する
溶出液（３から3.5までの画分）を合せ、濃縮乾固
して、WS−9326Bの白色粉末（790mg）を得た。

実施例４ WS−9326A（100mg）のピリジン（１ml）溶液に無水酢酸
（0.01ml）を加え、混合物を一夜室温で放置した。反応
混合物を蒸発乾固して油状物を得、これを調製TLC（ク
ロロホルム−メタノール（9:1））により精製した。

得られた生成物をジエチルエーテルで粉末化して、モノ
アセチル−WS−9326A（55mg）を無色の粉末として得
た。

モノアセチル−WS−9326Aの物理化学的性質は次の通り
である。

（１）形状および色調： 無色の粉末 （２）分子式： C₅₆H₇₀N₈O₁₄ （３）分子量： FAB−MS:m/z1079.4（Ｍ＋Ｈ）^＋ （４）薄層クロマトグラフィー： （５）赤外線吸収スペクトル： （６）物質の性質： 中性物質 （７）¹H核磁気共鳴スペクトル： （400MHz,CDCl₃−CD₃OD（5:1）） 上記スペクトルのチャートを図８に示す。

実施例５ WS−9326A（100mg）のピリジン（１ml）溶液に無水酢酸
（0.03ml）を加え、混合物を一夜室温で放置した。混合
物を蒸発乾固して油状物を得、これを調製TLC（クロロ
ホルム−メタノール（9:1））で精製してジアセチル−W
S−9326A（72mg）を無色粉末として得た。

ジアセチル−WS−9326の物理化学的性質は次の通りであ
る。

（１）形状および色調： 無色の粉末 （２）分子式： C₅₈H₇₂N₈O₁₅ （３）分子量： FAB−MS:m/z1121.4（Ｍ＋Ｈ）^＋ （４）薄層クロマトグラフィー： （５）赤外線吸収スペクトル： （６）物質の性質： 中性物質 （７）¹H核磁気共鳴スペクトル： （400MHz,CDCl₃−CD₃OD（5:1）） 上記スペクトルのチャートを図９に示す。

【図面の簡単な説明】

図１はWS−9326Aの赤外線吸収スペクトルを表わす。 図２はWS−9326Aの¹³C核磁気共鳴スペクトルを表わす。 図３はWS−9326Aの¹H核磁気共鳴スペクトルを表わす。 図４はトリアセチル−WS−9326Aの¹³C核磁気共鳴スペク
トルを表わす。 図５はトリアセチル−WS−9326Aの¹H核磁気共鳴スペク
トルを表わす。 図６はWS−9326Bの¹³C核磁気共鳴スペクトルを表わす。 図７はWS−9326Bの¹H核磁気共鳴スペクトルを表わす。 図８はモノアセチル−WS−9326Aの¹H核磁気共鳴スペク
トルを表わす。 図９はジアセチル−WS−9326Aの¹H核磁気共鳴スペクト
ルを表わす。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:465） (Ｃ１２Ｐ 1/06 Ｃ１２Ｒ 1:465） (72)発明者 重松 伸治 茨城県つくば市梅園２―５―４―601 審査官 斉藤 真由美

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】WS−9326A、WS−9326B、１〜３個のアシル
   基で置換されたWS−9326Aおよび１〜３個のアシル基で
   置換されたWS−9326Bから選ばれた化合物およびその医
   薬として許容される塩、その中で、 （ｉ）WS−9326Aは次の物理化学的性質を有する： １）形状および色調： 無色の粉末 ２）呈色反応 陽性：硫酸セリウム反応、沃素蒸気反応、塩化第二鉄−
   フェリシアン化カリウム反応 陰性：ニンヒドリン反応、モーリッシュ反応、塩化第二
   鉄反応、エールリッヒ反応、パウリ反応 ３）溶解性： 可溶：メタノール、エタノール 難溶：アセトン、酢酸エチル 不溶：水、クロロホルム ４）融点:187〜190℃ ５）比旋光度： ▲［α］²³ _D▼：−84゜（Ｃ＝1.0,MeOH） ６）紫外線吸収スペクトル： ７）赤外線吸収スペクトル： ８）元素分析： 実験値:C60.18,H6.61,N10.32 C₅₄H₆₈N₈O₁₃・2H₂Oとしての計算値： C60.43,H6.76,N10.44 ９）薄層クロマトグラフィー： 10）分子式:C₅₄H₆₈N₈O₁₃ 11）分子量： FAB−MS:m/z1037（Ｍ＋Ｈ）^＋ 12）物質の性質： 酸性物質 13）¹³C核磁気共鳴スペクトル： （100MHz,CD₃OD）δ 175.69（ｓ）,174.70（ｓ）， 173.73（ｓ）,173.38（ｓ）， 172.89（ｓ）,171.04（ｓ）， 170.45（ｓ）,167.79（ｓ）， 167.15（ｓ）,159.20（ｓ）， 140.05（ｄ）,139.12（ｓ）， 138.71（ｓ）,135.27（ｄ）， 134.85（ｓ）,132.11（ｄ）， 132.03（ｓ）,131.69（ｄ）x2, 130.70（ｄ）,129.90（ｄ）， 129.61（ｄ）x2,129.22（ｄ）x2, 128.55（ｄ）,128.04（ｄ）， 127.99（ｄ）,127.38（ｄ）， 126.09（ｓ）,123.70（ｄ）， 115.63（ｄ）x2,73.46（ｄ）， 71.34（ｄ）,62.80（ｔ）， 59.53（ｄ）,56.91（ｄ）， 56.76（ｄ）,55.55（ｄ）， 53.64（ｄ）,52.10（ｄ）， 39.85（ｔ）,37.18（ｔ）， 37.09（ｔ）,34.58（ｑ）， 31.37（ｔ）,24.56（ｄ）， 23.63（ｔ）,22.71（ｑ）， 22.52（ｑ）,21.17（ｑ）， 17.19（ｑ）,14.13（ｑ）． 14）¹H核磁気共鳴スペクトル： （400MHz,CD₃OD）δ 7.80（1H,d,J＝８Hz）， 7.67（1H,d,J＝16Hz）， 7.45−7.14（9H,m）， 7.06（2H,d,J＝８Hz）， 6.83（1H,s）， 6.65（2H,d,J＝８Hz）， 6.59（1H,d,J＝12Hz）， 5.88（1H,dt,J＝12および７Hz）， 5.55（1H,m）， 5.35（1H,ブロードシグナル（broad signal））， 5.10（1H,dd,J＝３および9.5Hz）， 4.68（1H,d,J＝10Hz）， 4.55（1H,t,J＝６Hz）， 4.48（1H,dd,J＝３および12Hz）， 3.92（2H,d,J＝６Hz）， 3.70（1H,t,J＝7,5Hz）， 3.62（1H,m）， 3.46（1H,dd,J＝３および14Hz）， 2.94（1H,dd,J＝３および16Hz）， 2.89（3H,s）， 2.74（1H,dd,J＝9.5および16Hz）， 2.69（1H,dd,J＝12および14Hz）， 2.14（2H,m）， 1.5−1.4（2H,m）， 1.20（3H,d,J＝６Hz）， 1.08（3H,d,J＝６Hz）， 1.0−0.8（2H,m）， 0.91（3H,t,J＝７Hz）， 0.6（1H,m）， 0.53（3H,d,J＝６Hz）， 0.51（3H,d,J＝６Hz）， そして （ii）WS−9326Bは次の物理化学的性質を有する： １）形状および色調： 無色の粉末 ２）呈色反応： 陽性：硫酸セリウム反応、沃素蒸気反応 陰性：ニンヒドリン反応 ３）溶解性： 可溶：メタノール 難溶：エタノール 不溶：水、アセトン、酢酸エチル、クロロホルム ４）融点:165〜170℃（分解） ５）比旋光度： ▲［α］²³ _D▼：−64゜（Ｃ＝1.0,MeOH） ６）紫外線吸収スペクトル： ７）分子式： C₅₄H₇₀N₈O₁₃ ８）元素分析： 実験値:C59.97,H6.87,N10.29 C₅₄H₇₀N₈O₁₃・2H₂Oとしての計算値： C60.32,H6.94,N10.42 ９）分子量： FAB−MS:m/z1061.6（Ｍ＋Na）^＋ 10）薄層クロマトグラフィー： 11）赤外線吸収スペクトル： 12）¹³C核磁気共鳴スペクトル： （100MHz,CD₃OD）δ 174.99（ｓ）,174.54（ｓ）， 173.60（ｓ）,173.41（ｓ）， 173.30（ｓ）,171.27（ｓ）， 170.74（ｓ）,170.19（ｓ）， 168.69（ｓ）,157.59（ｓ）， 140.53（ｄ）,139.35（ｓ）， 139.18（ｓ）,135.76（ｄ）， 134.17（ｓ）,131.15（ｄ）x2, 130.93（ｄ）,130.35（ｄ）， 129.88（ｄ）x2,129.39（ｄ）x2, 128.70（ｄ）,128.58（ｓ）， 128.13（ｄ）,127.64（ｄ）， 127.53（ｄ）,121.99（ｄ）， 116.45（ｄ）x2,72.76（ｄ）， 70.82（ｄ）,62.73（ｔ）， 62.67（ｄ）,59.35（ｄ）， 56.33（ｄ）x2,56.19（ｄ）， 53.36（ｄ）,52.24（ｄ）， 40.24（ｔ）,37.55（ｔ）， 37.08（ｔ）,33.69（ｔ）， 31.57（ｔ）,29.93（ｑ）， 24.61（ｄ）,23.70（ｑ）， 23.59（ｔ）,22.16（ｑ）， 21.36（ｑ）,17.12（ｑ）， 14.23（ｑ）． 13）¹H核磁気共鳴スペクトル： （400MHz,CD₃OD）δ 7.86（1H,d,J＝16Hz）， 7.80（1H,br,d,J＝８Hz）， 7.12−7.42（11H,m）， 6.77（2H,d,J＝8.5Hz）， 6.61（1H,d,J＝11.5Hz）， 5.88（1H,dt,J＝7.5および11.5Hz）， 5.08（1H,dd,J＝3.5および10Hz）， 5.04（1H,q,J＝6.5Hz）， 4.66（1H,dd,J＝3.5および13Hz）， 4.65（1H,d,J＝11.5Hz）， 4.56（1H,dd,J＝2.5および７Hz）， 4.48（1H,dd,J＝4.5および11Hz）， 4.46（1H,s）， 3.88（2H,m）， 3.64（2H,m）， 3.51（1H,dd,J＝3.5および14Hz）， 3.17（1H,dd,J＝4.5および14Hz）， 3.01（1H,dd,J＝11および14Hz）， 2.94（1H,dd,J＝3.5および16Hz）， 2.71（3H,s）， 2.71（1H,dd,J＝10および16Hz）， 2.64（1H,dd,J＝13および14Hz）， 2.04（2H,m）， 1.43（2H,m）， 1.28（2H,m）， 1.20（3H,d,J＝６Hz）， 0.95（3H,d,J＝6.5Hz）， 0.87（3H,t,J＝7.5Hz）， 0.53（1H,m）， 0.52（6H,d,J＝10.5Hz）．
2. 【請求項２】WS−9326Aまたはその医薬として許容され
   る塩である特許請求の範囲第（１）項記載の化合物。
3. 【請求項３】ストレプトミセス属に属するWS−9326Aお
   よび／またはWS−9326B生産菌株を培地に培養し、得ら
   れる培養物から、WS−9326AおよびWS−9326Bから選ばれ
   た化合物またはその塩を分離採取することを特徴とす
   る、WS−9326AおよびWS−9326Bから選ばれた化合物また
   はその塩の製造法。
4. 【請求項４】WS−9326A、WS−9326B、１〜３個のアシル
   基で置換されたWS−9326Aおよび１〜３個のアシル基で
   置換されたWS−9326Bから選ばれた化合物またはその医
   薬として許容される塩を有効成分とする喘息の予防・治
   療剤。
5. 【請求項５】WS−9326Aおよび／またはWS−9326Bを生産
   することを特徴とする微生物ストレプトミセス・ビオラ
   セオニガーNO.9326の生物学的純粋培養物。