JPH0684972B2 - ラテツクス凝集反応用試薬 - Google Patents
ラテツクス凝集反応用試薬Info
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- JPH0684972B2 JPH0684972B2 JP9099186A JP9099186A JPH0684972B2 JP H0684972 B2 JPH0684972 B2 JP H0684972B2 JP 9099186 A JP9099186 A JP 9099186A JP 9099186 A JP9099186 A JP 9099186A JP H0684972 B2 JPH0684972 B2 JP H0684972B2
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- latex
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Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、ラテックス凝集反応用試薬、更に詳しくは、
非凝集像の判定が容易なラテックス凝集反応用試薬に関
するものである。
非凝集像の判定が容易なラテックス凝集反応用試薬に関
するものである。
免疫学的反応原理に基づく測定試薬は、特異性並びに感
度が高く、種々の物質の測定に利用されている。中でも
抗原や抗体を感作したラテックス粒子から成る凝集反応
用試薬は、測定操作が簡便なこと、短時間で結果を得ら
れること及び免疫学的に不活性なラテックス粒子を使用
してあるので赤血球や細菌々体等とは違って非特異反応
を起しにくいこと等の利点を有するため繁用されてい
る。
度が高く、種々の物質の測定に利用されている。中でも
抗原や抗体を感作したラテックス粒子から成る凝集反応
用試薬は、測定操作が簡便なこと、短時間で結果を得ら
れること及び免疫学的に不活性なラテックス粒子を使用
してあるので赤血球や細菌々体等とは違って非特異反応
を起しにくいこと等の利点を有するため繁用されてい
る。
ところで、ラテックス凝集反応用試薬はマイクロタイタ
ープレートや小試験管等を利用して凝集反応を行わせる
際、反応後の非凝集像はリング状を呈する場合があり、
しかも一口にリング状といっても、実際には小さくて鮮
明なものから、大きくてぼんやりとしたものまで、いろ
いろなタイプのリング状の像が観察されるため、肉眼で
凝集像か非凝集像かを判定することが困難なものになる
ことがしばしば起き、誤判定の原因の一つになってい
た。
ープレートや小試験管等を利用して凝集反応を行わせる
際、反応後の非凝集像はリング状を呈する場合があり、
しかも一口にリング状といっても、実際には小さくて鮮
明なものから、大きくてぼんやりとしたものまで、いろ
いろなタイプのリング状の像が観察されるため、肉眼で
凝集像か非凝集像かを判定することが困難なものになる
ことがしばしば起き、誤判定の原因の一つになってい
た。
このようなリング状の像は長時間静置することによりあ
る程度ボタン状の像にすることはできるが、ラテックス
凝集法の利点である迅速性を奪うことになり好ましいも
のではない。
る程度ボタン状の像にすることはできるが、ラテックス
凝集法の利点である迅速性を奪うことになり好ましいも
のではない。
又、判定しかねるものについては、通常±という判定を
して再測定を行う必要が生じるという欠点も有った。
して再測定を行う必要が生じるという欠点も有った。
このような問題を解消するために、マイクロタイタープ
レート様容器におけるウェル底部に段差を設けること等
（実公昭60-33399〜33404号公報参照）が提案されてい
るが、特別な器具を要することになるので好ましいもの
とは言い難い。
レート様容器におけるウェル底部に段差を設けること等
（実公昭60-33399〜33404号公報参照）が提案されてい
るが、特別な器具を要することになるので好ましいもの
とは言い難い。
本発明は上記従来技術における問題点を解決するための
ものでありその目的とするところは従来のラテックス凝
集反応用試薬に比べて、短い反応時間で凝集像とは容易
に識別し得る非凝集像を呈するラテックス凝集反応用試
薬を提供することにある。
ものでありその目的とするところは従来のラテックス凝
集反応用試薬に比べて、短い反応時間で凝集像とは容易
に識別し得る非凝集像を呈するラテックス凝集反応用試
薬を提供することにある。
すなわち本発明のラテックス凝集反応用試薬は、Ｎ−２
−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ′−２−エタンスル
ホン酸及びエチレンジアミン４酢酸塩を含有することを
特徴とする。
−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ′−２−エタンスル
ホン酸及びエチレンジアミン４酢酸塩を含有することを
特徴とする。
Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ′−２−エタ
ンスルホン酸（以下ヘペスと略称する）は、一般にHEPE
Sと呼ばれるグッド（Good）緩衝剤群に属する緩衝剤で
ある。本発明の試薬におけるヘペスの使用量は、被検液
及び抗原又は抗体感作ラテックス懸濁液、場合によって
は更に検体希釈液等からなる反応液（以下単に反応液と
する）中0.001〜1.0M特に0.005〜0.5Mの濃度とするのが
好ましい。ヘペスは検体の希釈液中に入れておくと実用
上都合がよい。
ンスルホン酸（以下ヘペスと略称する）は、一般にHEPE
Sと呼ばれるグッド（Good）緩衝剤群に属する緩衝剤で
ある。本発明の試薬におけるヘペスの使用量は、被検液
及び抗原又は抗体感作ラテックス懸濁液、場合によって
は更に検体希釈液等からなる反応液（以下単に反応液と
する）中0.001〜1.0M特に0.005〜0.5Mの濃度とするのが
好ましい。ヘペスは検体の希釈液中に入れておくと実用
上都合がよい。
エチレンジアミン４酢酸塩（以下EDTAと略称する）とし
てはエチレンジアミン４酢酸のナトリウム塩、カリウム
塩等が挙げられる。本発明の試薬におけるEDTAの使用濃
度は反応液中0.001〜0.5M特に0.005〜0.3Mが好ましい。
てはエチレンジアミン４酢酸のナトリウム塩、カリウム
塩等が挙げられる。本発明の試薬におけるEDTAの使用濃
度は反応液中0.001〜0.5M特に0.005〜0.3Mが好ましい。
本発明の試薬におけるEDTAは、反応時にヘペスと共存す
ればその効果を果たし得るので、抗原又は抗体感作ラテ
ックス懸濁液の分散媒はもちろん、被検液を希釈する場
合には希釈用溶液に、添加しておくこともできる。
ればその効果を果たし得るので、抗原又は抗体感作ラテ
ックス懸濁液の分散媒はもちろん、被検液を希釈する場
合には希釈用溶液に、添加しておくこともできる。
したがって、抗原又は抗体感作ラテックス懸濁液と検体
希釈液とから成る一般的なラテックス凝集反応用試薬を
例にとると、ヘペス及びEDTA添加の組み合せは、下記第
１表のようなものが考えられる。
希釈液とから成る一般的なラテックス凝集反応用試薬を
例にとると、ヘペス及びEDTA添加の組み合せは、下記第
１表のようなものが考えられる。
抗原又は抗体感作ラテックス懸濁液にはヘペス及びEDTA
の他、牛血清アルブミン（以下BSAと略称する）等の安
定剤や、アジ化ナトリウム等の防腐剤を添加することも
できる。又、非特異凝集を抑えるためにγ−グロブリン
やコリン等を添加することもできる。ヘペス及びEDTAを
ラテックス懸濁液中に添加するときには、検体希釈液と
して生理食塩水を用いることもできる。
の他、牛血清アルブミン（以下BSAと略称する）等の安
定剤や、アジ化ナトリウム等の防腐剤を添加することも
できる。又、非特異凝集を抑えるためにγ−グロブリン
やコリン等を添加することもできる。ヘペス及びEDTAを
ラテックス懸濁液中に添加するときには、検体希釈液と
して生理食塩水を用いることもできる。
又、これらの試薬成分は、液体に限定されるものではな
く、必要に応じて適当な反応用容器に乾燥固着させた状
態で供給することも可能である。
く、必要に応じて適当な反応用容器に乾燥固着させた状
態で供給することも可能である。
本発明の試薬におけるラテックス粒子としては、ポリス
チレン、スチレン−ブタジェン共重合体、アクリル酸ポ
リマー、メタクリル酸ポリマー、アクリロニトリル−ブ
タジエン−スチレン共重合体、ポリビニルピリジン、ポ
リ酢酸ビニルアクリレート等からなるものが使用でき着
色したものや比重を特に大きくしたもの等目的に応じて
種々の性状のものを使用しうる。
チレン、スチレン−ブタジェン共重合体、アクリル酸ポ
リマー、メタクリル酸ポリマー、アクリロニトリル−ブ
タジエン−スチレン共重合体、ポリビニルピリジン、ポ
リ酢酸ビニルアクリレート等からなるものが使用でき着
色したものや比重を特に大きくしたもの等目的に応じて
種々の性状のものを使用しうる。
本発明の試薬は、抗原又は抗体（モノクローナル抗体を
含む）感作ラテックス粒子を利用した反応用試薬のいず
れにおいても適用でき、又反応系も凝集反応、凝集阻止
反応のいずれの系にも応用可能である。
含む）感作ラテックス粒子を利用した反応用試薬のいず
れにおいても適用でき、又反応系も凝集反応、凝集阻止
反応のいずれの系にも応用可能である。
本発明におけるヘペス及びEDTAは、抗原又は抗体感作ラ
テックス粒子の非凝集像を、従来のしばしば短時間の反
応では判定しにくいものであったリング状から、極めて
判定が容易な完全なボタン状に改善する作用を有する。
テックス粒子の非凝集像を、従来のしばしば短時間の反
応では判定しにくいものであったリング状から、極めて
判定が容易な完全なボタン状に改善する作用を有する。
以下の実施例において本発明を更に詳細に説明する。な
お、本発明は下記実施例に限定されるものではない。
お、本発明は下記実施例に限定されるものではない。
（１）ヒト絨毛性ゴナドトロビン（以下hCGと略称す
る）の測定用試薬 （ａ）抗hCGモノクローナル抗体感作ラテックス懸濁液 マウス腹水由来の２種類のモノクローナル抗体の0.02w/
v％ヘペス緩衝液（0.2M,pH7.2）溶液9.5mlを10w/v％、
ポリスチレンラテックス（平均粒径1.4μm,比重1.50）
懸濁液0.2mlに加え、37℃で２時間物理的吸着させた。
る）の測定用試薬 （ａ）抗hCGモノクローナル抗体感作ラテックス懸濁液 マウス腹水由来の２種類のモノクローナル抗体の0.02w/
v％ヘペス緩衝液（0.2M,pH7.2）溶液9.5mlを10w/v％、
ポリスチレンラテックス（平均粒径1.4μm,比重1.50）
懸濁液0.2mlに加え、37℃で２時間物理的吸着させた。
次いで1w/v％BSA生理食塩水溶液を0.3ml加え、超音波で
ラテックスを分散させて抗hCGモノクローナル抗体感作
ラテックス懸濁液を得た。
ラテックスを分散させて抗hCGモノクローナル抗体感作
ラテックス懸濁液を得た。
（ｂ）被検液希釈液 第２表に示すとおりの組成を有する検体希釈液10種を調
製した。
製した。
（ｃ）hCGのマイクロタイター法による測定hCGの標準溶
液希釈系列（１〜500IU/l）を（ｂ）の検体希釈液を用
いて調製し、各100μｌを96穴マイクロタイタープレー
トのウェルに滴下し、更に（ａ）の抗hCGモノクローナ
ル抗体感作ラテックス懸濁液50μｌを滴下して、２時間
後の反応像を観察した。
液希釈系列（１〜500IU/l）を（ｂ）の検体希釈液を用
いて調製し、各100μｌを96穴マイクロタイタープレー
トのウェルに滴下し、更に（ａ）の抗hCGモノクローナ
ル抗体感作ラテックス懸濁液50μｌを滴下して、２時間
後の反応像を観察した。
結果を第３表に示す。
第３表中の各符号は第１図ないし第６図の非凝集像（第
１図ないし第３図）及び凝集像（第４図ないし第６図）
と以下の様に対応する。
１図ないし第３図）及び凝集像（第４図ないし第６図）
と以下の様に対応する。
第３表からわかるように検体希釈液にヘペス及びEDTAの
両方を含むもの８番及び10番以外では、非凝集像が小さ
いリング状もしくは中心に点を持つ小さいリング状（ヘ
ペスのみを含むもの）を呈したのに対し、ヘペスとEDTA
の両方を含有するものでは、hCG濃度3IU/l以下で5IU/l
以上では全く観察されない完全なボタン状を呈しており
凝集又は非凝集の判定を極めて容易に行うことができ
た。
両方を含むもの８番及び10番以外では、非凝集像が小さ
いリング状もしくは中心に点を持つ小さいリング状（ヘ
ペスのみを含むもの）を呈したのに対し、ヘペスとEDTA
の両方を含有するものでは、hCG濃度3IU/l以下で5IU/l
以上では全く観察されない完全なボタン状を呈しており
凝集又は非凝集の判定を極めて容易に行うことができ
た。
更に男性尿10例及び非妊娠女性尿200例を検体とし２倍
希釈液について測定を行つたところ、検体希釈液番号８
及び10を使用したものでは全ての検体で完全なボタン状
の非凝集像が観察されたのに対し、その他の検体希釈液
を使用したものでは小さいリング状あるいは中心に点を
持つ小さいリング状の非凝集像が観察された。
希釈液について測定を行つたところ、検体希釈液番号８
及び10を使用したものでは全ての検体で完全なボタン状
の非凝集像が観察されたのに対し、その他の検体希釈液
を使用したものでは小さいリング状あるいは中心に点を
持つ小さいリング状の非凝集像が観察された。
（２）黄体ホルモン（以下LHと略称する）測定用試薬 （ａ）抗LHモノクローナル抗体感作ラテックス懸濁液 マウス腹水由来の２種類のモノクローナル抗体の0.02w/
v％ヘペス緩衝液（0.2M、pH7.2）溶液9.5mlを10w/v％ポ
リスチレンラテックス（平均粒径1.38μｍ 比重1.50）
懸濁液0.2mlに加え、37℃で２時間物理的吸着を行わせ
た。
v％ヘペス緩衝液（0.2M、pH7.2）溶液9.5mlを10w/v％ポ
リスチレンラテックス（平均粒径1.38μｍ 比重1.50）
懸濁液0.2mlに加え、37℃で２時間物理的吸着を行わせ
た。
次いで1w/v％BSA生理食塩水溶液を0.3ml加え、超音波で
分散させて抗LHモノクローナル抗体感作ラテックス懸濁
液を得た。
分散させて抗LHモノクローナル抗体感作ラテックス懸濁
液を得た。
（ｂ）LHのマイクロタイター法による測定LHの標準溶液
希釈系列（１〜200IU/l）を（１）−（ｂ）の検体希釈
液を用いて調製し、各100μｌを96穴マイクロタイター
プレートのウェルに滴下し、更に（ａ）の抗LHモノクロ
ーナル抗体感作ラテックス懸濁液50μｌを滴下して、２
時間後の反応像を観察した。
希釈系列（１〜200IU/l）を（１）−（ｂ）の検体希釈
液を用いて調製し、各100μｌを96穴マイクロタイター
プレートのウェルに滴下し、更に（ａ）の抗LHモノクロ
ーナル抗体感作ラテックス懸濁液50μｌを滴下して、２
時間後の反応像を観察した。
結果を第４表に示す。
第４表でも第３表と同様のことが言え、ヘペスとEDTAの
両方を含有する検体希釈液８番及び10番を使用したもの
では、非凝集像が5IU/l以下で10IU/l以上では全く観察
されない完全なボタン状を呈しており、凝集又は非凝集
の判定を極めて容易に行うことができた。
両方を含有する検体希釈液８番及び10番を使用したもの
では、非凝集像が5IU/l以下で10IU/l以上では全く観察
されない完全なボタン状を呈しており、凝集又は非凝集
の判定を極めて容易に行うことができた。
上述のように本発明のラテックス凝集反応用試薬はＮ−
２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ′−２−エタンス
ルホン酸及びエチレンジアミン４酢酸塩を含有するもの
であるため、その非凝集像が、凝集したときには全く観
察されることのない完全なボタン状のみを呈するので、
肉眼的にも極めて容易に凝集か非凝集かを判定すること
ができる。
２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ′−２−エタンス
ルホン酸及びエチレンジアミン４酢酸塩を含有するもの
であるため、その非凝集像が、凝集したときには全く観
察されることのない完全なボタン状のみを呈するので、
肉眼的にも極めて容易に凝集か非凝集かを判定すること
ができる。
しかも本発明の試薬を使用する場合には、測定操作や必
要な器具は全て従来のものと同一でよく、簡便迅速且つ
高精度で各種非検液の分析を行うことができる。
要な器具は全て従来のものと同一でよく、簡便迅速且つ
高精度で各種非検液の分析を行うことができる。
第１図はラテックス凝集反応におけるボタン状の非凝集
像の模式図、 第２図は同反応における中心に点を有する小さなリング
状の非凝集像の模式図、 第３図は同反応における小さなリング状の非凝集像の模
式図、 第４図ないし第６図は同反応における各種凝集像の模式
図である。
像の模式図、 第２図は同反応における中心に点を有する小さなリング
状の非凝集像の模式図、 第３図は同反応における小さなリング状の非凝集像の模
式図、 第４図ないし第６図は同反応における各種凝集像の模式
図である。
Claims (4)
- 【請求項１】Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−
Ｎ′−２−エタンスルホン酸及びエチレンジアミン４酢
酸塩を含有することを特徴とするラテックス凝集反応用
試薬。 - 【請求項２】ラテックス懸濁液と検体希釈液とから成
り、少なくとも検体希釈液がＮ−２−ヒドロキシエチル
ピペラジン−Ｎ′−２−エタンスルホン酸を含有し、か
つラテックス懸濁液及び／又は検体希釈液がエチレンジ
アミン４酢酸塩を含有することを特徴とする特許請求の
範囲第１項記載のラテックス凝集反応用試薬。 - 【請求項３】検体希釈液中のＮ−２−ヒドロキシエチル
ピペラジン−Ｎ′−２−エタンスルホン酸の濃度が、0.
002〜2.0Mであることを特徴とする特許請求の範囲第２
項記載のラテックス凝集反応用試薬。 - 【請求項４】ラテックス懸濁液及び／又は検体希釈液中
のエチレンジアミン４酢酸塩の濃度が、0.003〜1.5Mで
あることを特徴とする特許請求の範囲第２項記載のラテ
ックス凝集反応用試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9099186A JPH0684972B2 (ja) | 1986-04-19 | 1986-04-19 | ラテツクス凝集反応用試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9099186A JPH0684972B2 (ja) | 1986-04-19 | 1986-04-19 | ラテツクス凝集反応用試薬 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62247259A JPS62247259A (ja) | 1987-10-28 |
| JPH0684972B2 true JPH0684972B2 (ja) | 1994-10-26 |
Family
ID=14013980
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9099186A Expired - Fee Related JPH0684972B2 (ja) | 1986-04-19 | 1986-04-19 | ラテツクス凝集反応用試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0684972B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006227027A (ja) * | 2000-12-28 | 2006-08-31 | Shino Test Corp | 測定対象物質の測定試薬 |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2127172C (en) * | 1993-08-05 | 1998-07-14 | Amy H. Chu | Analyte detection device and process |
| JP5143046B2 (ja) * | 2009-02-12 | 2013-02-13 | 富士フイルム株式会社 | 被験物質の測定方法及び該測定方法を実施するためのキット |
-
1986
- 1986-04-19 JP JP9099186A patent/JPH0684972B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006227027A (ja) * | 2000-12-28 | 2006-08-31 | Shino Test Corp | 測定対象物質の測定試薬 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS62247259A (ja) | 1987-10-28 |
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Legal Events
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|---|---|---|---|
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