JPH0686384B2 - 白血球の安定化 - Google Patents

白血球の安定化

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JPH0686384B2
JPH0686384B2 JP61506071A JP50607186A JPH0686384B2 JP H0686384 B2 JPH0686384 B2 JP H0686384B2 JP 61506071 A JP61506071 A JP 61506071A JP 50607186 A JP50607186 A JP 50607186A JP H0686384 B2 JPH0686384 B2 JP H0686384B2
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エム． バビオル，バーナード
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ニュー イングランド メディカル センター ホスピタルズ，インコーポレイテッド
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    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
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Description

【発明の詳細な説明】 本発明はヒト白血球、特に顆粒球の安定化若しくは保存
に関し、より詳細には血漿とゼラチンとを必須成分とし
て含有する無毒性の生理学上許容しうる培地にて凍結点
より高い温度でこの種の細胞を貯蔵することに関するも
のである。この種の培地に貯蔵した後、これら細胞は実
質的にその初期の生理学的性質を殆んど示しかつこれら
細胞の定性的若しくは定量的欠乏を特徴とする病気の処
置に使用することができる。
ヒト血液を採集しかつこれをたとえば赤血球、好中球を
含む白血球、血小板及び血清などの数種の異なる成分に
分離するため血液銀行の広範な開発も見られるが、これ
ら成分の最大の生理学的若しくは治療的使用は必要とさ
れるまで貯蔵可能でありかつ／又は必要とする場所まで
輸送しうる場合のみ可能となる。たとえば、赤血球及び
血清のような或る種の成分は或る種の条件下で凍結した
後に長期間にわたり貯蔵し、次いで使用するために再構
成することができる。血小板の制限された貯蔵も可能で
あるが、これらは凍結点よりも高い温度にて精々５日間
の貯蔵後にはその作用能力を喪失し、さらに貯蔵するた
めの血小板の凍結は可能であるが［コテルバーウィトコ
ウスカ等、トランスフュージョン、第22巻、第121頁以
降（1982）］高価であり、したがって殆んど使用されな
い技術である。他方、好中球は凍結点より高い温度にて
48時間程度の短い貯蔵期間後に凝結若しくは凝固を受
け、したがって作成してから２日間以内に使用せねばな
らない。凍結による好中球の貯蔵はまだ成功を収めてい
ない。
ツリス、ブラッド、第６巻、第772〜773頁（1951）には
EDTA、アスコルビン酸、酢酸ナトリウム及びフェノール
レッド指示薬と一緒にゼラチンを含有する等張緩衝液を
白血球用の貯蔵培地として用いることが提案されてい
る。クローレー等、トランスフュージョン、第14巻、第
574〜580頁（1974）は、全血−緩衝剤組成物に対し0.4
％のゼラチンを含有する緩衝液にて抜取られかつ各種の
補填物を添加して又は添加せずに４℃で貯蔵した全血か
ら白血球リッチな血漿をデカンテーションすることを記
載しているが、顆粒球の機能は１週間の貯蔵後に顕著に
低下した。コントレラス等、クリオバイオロジー、第17
巻、第243〜251頁（1980）］は、種々の血漿含有貯蔵培
地にて４℃で顆粒球を貯蔵することを記載しているが、
４日後に機能上の不満足な低下が生じた。コントレラス
等、トランスフュージョン、第18巻、第46〜53頁（197
8）］は、血漿若しくは酸改変ゼラチンを含有する培地
における４℃若しくは22℃での顆粒球の貯蔵を記載して
いるが、３日後には細胞の相当なロスを伴った。プライ
ス等、トランスフュージョン、第25巻、第238〜241頁
（1985）］は、顆粒球を回収する際に赤血球沈降剤とし
て酸改変された液体ゼラチンの使用することを記載して
いるが、顆粒球を貯蔵した後に試験を行なっていない。
シェール等、イミュノロジー、第31巻、第337〜341頁
（1976）］は、顆粒球を回収する際に赤血球沈降助剤と
してゼラチンを使用することを記載しているが、ゼラチ
ンは殆んど貯蔵せずにインキュベーション培地中に懸濁
される前に顆粒球から洗浄除去された。
今回、顆粒球はこれらを適当な緩衝液、すなわち無毒性
かつ生理学上許容できかつゼラチンを学友すると共にそ
こに溶解したヒト血漿を含有する緩衝液に懸濁させれ
ば、少なくとも５日間若しくは７日間又はそれ以上の長
時間にわたり25℃未満、好ましくは８℃未満の温度で貯
蔵するのに効果的に安定化されうることが判明した。貯
蔵後、顆粒球は、40℃以下の温度まで加温して存在する
ゲルを液化する以外には、他の処理を必要とせずに輸血
することができる。或いは、これら顆粒球は、単にゼラ
チンと血漿とを貯蔵用に使用した緩衝液と同一若しくは
異なるものとしうる緩衝剤で洗浄除去しただけで、また
はゼラチン含有の緩衝剤を遠心分離により除去し次いで
顆粒球を所望の緩衝液若しくは培地に再懸濁させるだけ
で、使用するために再構成することができる。
用いる緩衝剤は、所望の範囲のpHを与える任意慣用の無
毒緩衝剤とすることができる。緩衝剤のpHは広範囲でた
とえば約pH6.1〜8.5の範囲で変化することができ、好ま
しくはpHは中性点近傍たとえば約6.5〜約7.5に維持され
て、最適にその機能を保持する。最良の結果を得るに
は、血漿及びゼラチン含有の緩衝剤における顆粒球及び
血小板はたとえば８℃未満の低温度で貯蔵すべきである
が、これらは満足しうる結果をもって少なくとも12時間
にわたり約25℃までの高温度で貯蔵することができる。
本発明を実施するには、任意通常の市販原料からのゼラ
チンを使用することができる。ゼラチンの量は、部分的
に所望の貯蔵長さに応じて、広範囲に変化することがで
きる。全緩衝剤−血漿組成物の全重量に対し1.0重量％
程度の少量が短い貯蔵には有効である。使用量の臨界的
上限は存在しないが、ただし貯蔵後のゼラチンの除去を
容易化するには40℃以下の温度にて組成物がゲルでなく
液体となるのに充分な少量とせねばならない。
緩衝液における顆粒球の濃度若しくは個数は所定範囲に
わたり、すなわち1ml当り107〜109、好ましくは1ml当り
１×108〜５×108の範囲で変化することができる。
用いる血漿は正常なヒト血漿又は自己血漿とすることが
できる。血漿の量は全組成物に対し25重量％〜90重量％
程度で変化することができる。
たとえばリドカインのような局部麻酔が、高レベルにお
ける細胞数を維持するのに役立つ任意の添加剤である。
使用しうる他の局部麻酔はプロカイン、メピバカイン、
ブピバカイン等を包含する。
試験が示したところでは、本発明にしたがって５日間若
しくは７日間又はそれ以上にわたり貯蔵されかつ次いで
ゼラチン及び血相の25倍希釈により再構成された顆粒粒
は、主として所望の生理学的性質を全て保持しかつ実質
的に凝集若しくは凝固を引起こさない。特に、これらは
オプソニン処理された微生物を取込みかつ死滅させるこ
とができる。
以下、本発明の範囲を限定するものでないが、特定実施
例により本発明を一層詳細に説明する。
以下の各実施例において、顆粒粒は15〜18容量％の酸性
かつ高張性緩衝液、すなわちクエン酸ナトリウムとクエ
ン酸とを含有する水溶液（クエン酸塩及びクエン酸0.38
M並びに20mg/mlのグルコース、pH4.8）（ACD）の添加に
よって凝固防止された新たに抜取った人血から作成し
た。これら顆粒球を、カーヌッテ等、ジャーナル・クリ
ニカル・インベスチゲーション、第53巻、第1662〜1672
頁（1974）に記載されたように、デキストラン沈降及び
遠心分離によって分離した。次いでこれらを、カルシウ
ム若しくはマグネシウムを含まないダルベッコの燐酸塩
緩衝塩水（PBS）で洗浄し、かつ低張性溶解によって赤
血球を除去しなかった。
次いで、顆粒球を貯蔵倍地として使用された中性のヒス
チジン緩衝液、すなわち0.1Mクエン酸ナトリウム、0.05
Mヒスチジン、0.1Mグルコース、0.05Mピルビン酸ナトリ
ウム及び１μＭリドカイン［pH7.4に調節］（HCP）に懸
濁させた。
自己ヒト血漿を同じHCP緩衝液で抜取り、10mlの血液を
1.4mlの緩衝液と混合しかつ順次にそれぞれ1500rpm及び
2000rpmにて10分間遠心分離し、各遠心分離後に血漿フ
ラクションを分離した。
次いで、下記の組成物を作成し、ここでゼラチン及び血
漿の割合は全体に対する重量％として表わす： それぞれの場合、顆粒球の濃度は1ml当り２×108とし、
かつpHは室温にて7.4とした。
各組成物の５種の試料を４℃にて冷凍機中で貯蔵した。
４℃にて７日間貯蔵した後、各試料を室温まで加温し
た。４℃にてゲルであったこれらの試料は加温に際し液
化した。これらの試料をダルベッコのカルシウム及びマ
グネシウムを含まない燐酸塩緩衝塩水で10倍希釈した。
次いで、顆粒球の機能を測定した。顆粒球の生存は細胞
カウントによって測定し、これを貯蔵前の初期細胞カン
ウトの％として表わした。生存率は、カルシウム及びマ
グネシウムを含まないPBS緩衝液に0.4重量％で懸濁させ
た際トリパンブルーを排除した細胞の％として決定し
た。バビオール等、ロイコサイト・ファクション（クラ
イン編）、第１〜38頁（NY1981）に記載されたと実質的
に同じ方法を用いてS.アウレウスに関し、細菌死滅の能
力を測定した。
これらの結果は次の通りであった（５個の試料の平
均）： 上記結果から明らかなように、細胞カウント数と生存率
と細菌死滅能力とは全て、ゼラチンと血漿とを組合せて
含有する組成物においてずっと大きい程度に保持された
のに対し、これら成分の一方若しくは両方が省略される
と２つの機能又は全て３種の機能が著しく低下する。

Claims (7)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】ヒト白血球を凍結することなく貯蔵用とし
    て安定化するに際し、 ａ）無毒性の緩衝混合液中に懸濁した白血球を供給し、 ｂ）該混合液は、下記の量で存在するゼラチンを含有す
    る： １）全混合液に対し少なくとも１重量％でありかつ ２）40℃若しくはそれ以上にて混合液をゲルまで固化さ
    せるのに要する量より少ない ことを特徴とする安定化方法。
  2. 【請求項２】25℃未満の温度にて少なくとも５日間にわ
    たり、凍結することなく前記懸濁液を貯蔵する工程をさ
    らに含む請求の範囲第１項記載の方法。
  3. 【請求項３】貯蔵を８℃未満の温度で行なう請求の範囲
    第２項記載の方法。
  4. 【請求項４】緩衝剤のpHが6.1〜8.0であり、貯蔵を８℃
    未満の温度で行ない、かつ前記懸濁液における顆粒球の
    個数が1ml当り１×107〜２×108である請求の範囲第２
    項記載の方法。
  5. 【請求項５】前記の混合液が、更に、全混合液の25〜90
    重量％で存在する血漿を含む、請求の範囲第１項に記載
    の方法。
  6. 【請求項６】前記の白血球が顆粒球である、請求の範囲
    第１項に記載の方法。
  7. 【請求項７】ゼラチンと血漿とを含有するpH6.1〜8.0の
    無毒性の緩衝液に懸濁された顆粒球からなり、前記ゼラ
    チンの量が全組成物に対し少なくとも１重量％でありか
    つ40℃若しくはそれ以上にて前記組成物をゲルまで固化
    させるのに要する量よりも少なく、さらに前記血漿の量
    が全組成物の25〜90重量％であることを特徴とする組成
    物。
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