JPH07101218B2 - 絶対カウントのための一段試験 - Google Patents

絶対カウントのための一段試験

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JPH07101218B2
JPH07101218B2 JP3197907A JP19790791A JPH07101218B2 JP H07101218 B2 JPH07101218 B2 JP H07101218B2 JP 3197907 A JP3197907 A JP 3197907A JP 19790791 A JP19790791 A JP 19790791A JP H07101218 B2 JPH07101218 B2 JP H07101218B2
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Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の分野】本発明は、サンプル中にある細胞の絶対
数を測定するための一段法に関するものであり、更に詳
しくは、フローサイトメトリー法（ｆｌｏｗ ｃｙｔｏ
ｍｅｔｒｙ）によって、全血サンプル中にある網状赤血
球及び／又はＣＤ４+リンパ球のような白血球の１つ又
はそれ以上の母集団の絶対数をカウントするための一段
法に関するものである。
【０００２】
【発明の背景】細胞の数と型をカウントすることは、重
要な診断手段であったし、これからもそのことに変わり
はない。例えば、白血球（またはロイコサイト）の数を
測定すれば、感染の有無に関する指標を得ることができ
る。また、血小板、赤血球、及び他の造血系成分（網状
赤血球を含む）を測定しても、臨床家は、患者の器官系
の状態に関する情報を得ることができる。最近では、エ
イズ発生率の増加によって、白血球の特異な母集団をカ
ウントすることが非常に重要となって来た。
【０００３】エイズとは、個体がＨＩＶによって侵され
て生じる状態である。一般的に、感染が進行すると、個
体は免疫不全となり、その結果、しばしば、ニューモシ
スティスカリーネイ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａ
ｒｉｎｉｉ）肺炎のような致命的な日和見感染が原因と
なって死亡する。エイズを生じさせるＨＩＶ感染の機構
は、ＣＤ４表面抗原によって識別されるＴ細胞のサブセ
ット（ｓｕｂｓｅｔ）に、ＨＩＶが結合して介在される
と考えられている。感染して、Ｔリンパ球のこのサブセ
ットが破壊されると、ＨＩＶに感染した個体は、日和見
感染と日和見病原体に対して応答する能力を失う。
【０００４】ＨＩＶ感染は、様々な方法で識別できる異
なる臨床期を経て進行する。この病気の進行を、初期症
状から末期までを記録するために、現在認められている
分類法は、ウオルターリード（Ｗａｌｔｅｒ Ｒｅｅ
ｄ）分類法である。多数の診断基準が、幾つかの病期の
それぞれを評価するのに用いられている。例えば、抗原
の有無またはウィルス自体の有無は、ＨＩＶに対する初
期症状（ｉｎｉｔｉａｌｅｘｐｏｓｕｒｅ）の指標とし
て用いられる（ＷＲ１）。次に血液中のＣＤ４+の数を
測定する。ＣＤ４+リンパ球の数が減少していれば、病
気が進行して来ているということである（ＷＲ３）。従
って、エイズ患者においては、ＣＤ４+リンパ球数を正
確に測定することは、臨床的に重要である。（ウオルタ
ーリード分類法とエイズの臨床面に関する更なる説明
は、Ｓｃｉ．Ａｍｅｒ．，２５９：７０（１９８８）の
レッドフィールド（Ｒｅｄｆｉｅｌｄ）らの論文に記載
されている）。
【０００５】もう一つの例として、米国特許第４，６７
７，０６１号は、自己免疫患者、特に多発性硬化症の患
者を監視した場合、特異な細胞型の割合を測定すること
が重要であることを記載している。この患者において
は、細胞識別抗原を有する細胞のサブセットに対するＣ
Ｄ４+細胞又はＣＤ８+細胞の割合を測定する。ＬＰ２２
０+細胞に対するＣＤ４+の割合は、特に有用である。
【０００６】それぞれの場合において、血液の一定体積
中に存在する細胞数をカウントすることは重要である。
造血系の多くの成分に関する標準値が知られており、標
準値からの偏差を測定することは、臨床上重要である。
従って、前記のような細胞をカウントする幾つかの方法
が開発されて来た。
【０００７】おそらく最も古い方法は、全血サンプル
（または血液の幾つかの分画または成分）を顕微鏡検査
するものである。サンプルを、特有な領域に分けたスラ
イド上に配置して、臨床家が、各領域中の細胞をカウン
トする方法である。この方法は、細胞をカウントするこ
とだけでなく、細胞の型を識別することにおいても、臨
床家の技術に依存している。後者に関する問題は、様々
な色素及び／又は免疫蛍光標識（ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏ
ｒｅｓｃｅｎｃｅ ｍａｒｋｅｒ）を用いて、特異的な
細胞を選択的に染色または標識することによって処理す
ることができる。しかしながら、手動によるカウントに
おいては、主観による誤差を避けることはできない。
【０００８】自動カウント法は、選択的染色によって提
供される利点を取入れようとするだけでなく、技術者に
起因する誤りを抑える目的もあって開発された。前記方
法の目標は、速く且つ精度が高いことである。前記方法
の１つの例としては、液体サンプル中の細胞を電気的に
カウントすることが挙げられる。この例においては、既
知体積の液体を、一対の電極を有する装置へ通し、電極
の間を各細胞が通るときに発生する電気的インピーダン
スに基づいて、大きさの異なる細胞を識別することがで
きる。米国特許第２，６５６，５０８号には、このタイ
プの１つの方法が記載されている。
【０００９】上記方法の１つの欠点は、異なる大きさに
分類された粒子の相対的なカウントを測定することはで
きるが、比体積における絶対的なカウントを測定するこ
とはできない、という点にある。米国特許第４，１１
０，６０４号には、血小板の絶対数を電気的インピーダ
ンスに基づいて測定できることが記載されている。赤血
球の数は、血小板の数としてカウントする。一定単位体
積中の赤血球数が分れば又は赤血球数を測定すれば、方
程式を用いて同じ単位体積中にある血小板の数を算出す
ることができる。別法としては、既知濃度のサンプル中
に基準粒子を含ませて、基準粒子を血小板と共にカウン
トする方法もある。基準粒子の濃度が分れば、血小板の
濃度を決定することができる。
【００１０】しかしながら、この方法の欠点は、大きさ
のような物理的特性に基づいて、細胞を識別する場合に
最も有効である、という点にある。大きさだけを基準に
して、全ての細胞を識別できる訳ではないからである。
例えば、ＣＤ４+リンパ球とＣＤ８+リンパ球を、大きさ
を基準にして、識別することはできない。従って、測定
と相関物理特性の双方を蛍光と組合わせる別の装置（例
えばフローサイトメトリー装置）を開発した。
【００１１】フローサイトメトリー装置は、不均質サン
プル中に存在する異なる細胞型を同定し識別するための
公知の方法論を含む。サンプルは、血液、リンパ、尿の
ような様々な源から採取したり、あるいは脳、腎臓、ま
たは肝臓のような固体組織の細胞懸濁液から得ることが
できる。フローサイトメトリー装置では、実質的に１つ
の細胞を、エネルギー源によって各細胞を照らす１つ又
はそれ以上の検出域を同時に通過させる。一般的にエネ
ルギー源は、例えばレーザー（例えばＨｅ／Ｎｅまたは
アルゴン）または適当な帯域フィルタを有する水銀燈に
よって提供されるような、検出域で単一波長の光を放射
する手段を含む。異なる検出域は、異なる波長で光を放
射するエネルギー源を含むことができる。
【００１２】各検出域の系においては、光電子増倍管の
ような様々な集光手段を用いて、各細胞によって屈折さ
れる光（一般的に、前方光散乱（ｆｏｒｗａｒｄｌｉｇ
ｈｔ ｓｃａｔｔｅｒ）と呼ばれている）と、検出域を
通る細胞の流動方向に対して垂直に屈折される光（一般
的に、直交光散乱（ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｌｉｇｈｔ
ｓｃａｔｔｅｒ）と呼ばれている）を集め、また、１つ
又はそれ以上の集光手段を用いて、検出域を通ってエネ
ルギー源によって照明された細胞から放射される蛍光を
集める。光散乱は、一般的に、各細胞の物理的特性と相
関がある。フローサイトメトリー装置は、更に、検出域
を通っている各細胞が放射する散乱光と蛍光を、分離チ
ャンネルによって記録し記憶するコンピューターのよう
なデータ（即ち、各細胞に関して集められたデータは
「記録事象（ｒｅｃｏｒｄｅｄ ｅｖｅｎｔ）を含む」
を記録する手段とデータを記憶する手段を含む。直交光
散乱を前方光散乱に対して、実時間で、または出来事を
記録した後でデータを再分析してからプロットすると、
例えば白血球母集団の顆粒球、単球、及びリンパ球を識
別してカウントすることができる。例えば光散乱を用い
て、また、異なる放射波長を有するフルオロクロムで標
識した単一クローン抗体のような適当な免疫蛍光標識を
用いて、リンパ球だけをゲートで制御すると、リンパ球
母集団中の細胞型（例えばＣＤ４+リンパ球とＣＤ８+リ
ンパ球）を更に識別してカウントすることができる。米
国特許第４，７２７，０２０号、第４，７０４，８９１
号、及び第４，５９９，３０７号は、フローサイトメト
リー装置を含む様々な構成装置の配置と、更にそれを用
いる時の一般的原則を記載している。
【００１３】上記方法を用いて、サンプル中に存在する
細胞の数をカウントしたり、様々な細胞母集団を識別し
たりできるが、カウントされる細胞数は相対的な数であ
る（即ち、血液の比体積に対する絶対カウントを与えな
い）。一般的に、これらの方法においては、赤血球をサ
ンプルから実質的に取除くことが必要である。その１つ
の理由は、赤血球と白血球の光散乱が、実質的に重なり
合うことから、光散乱だけを基準として、それらを識別
することは難しいからである。もう１つの理由は、赤血
球数の白血球数に対する割合が、約１，０００対１であ
るので、もっと迅速に白血球をカウントするためには、
赤血球の数を低下させなければならないからである。従
って、この分野の開業医は、通常、全血を溶解させる
か、または密度勾配遠心法によって血液細胞成分を分離
させている。
【００１４】全血分離に必要な工程に加えて、通常は他
の工程を含む。例えば、いったん溶解させた血液を分離
させてから、免疫蛍光標識を加えることができる。次
に、通常、未結合の抗体を細胞から洗い落とす。その工
程の後、固定剤を加え、最後に細胞をフローサイトメト
リー装置に流す。各工程は、誤差の可能性を招くだけで
なく、サンプルから細胞を損失させることもある。更
に、各工程によって、技術者が汚染血にさらされる危険
性が増加する。従って、これらの従来のフローサイトメ
トリー法を用いると、血液の一定体積中に存在している
細胞数を、容易にまたは正確に測定することはできな
い。
【００１５】今述べた各方法には、血液の不均質サンプ
ル中に存在する特異的細胞に関する絶対カウントを正確
に測定させない１つ又はそれ以上の障害がある。これら
の障害は、フローサイトメトリー法を用いている米国特
許第４，１１０，６０４号に記載されているような基準
粒子を単に添加するだけでは克服できず、幾つかの欠点
が残る。フローサイトメトリー装置を用いる場合の主な
欠点は、各フローサイトメトリー装置の蛍光チャンネル
と光学調整（ｏｐｔｉｃａｌ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ）を
較正して、同じ読みを示すようにしないと、サンプル中
の変動源に関する確かさ（ａｓｓｕｒａｎｃｅ）が保証
されなくなってしまう、ことにある。毎日、１つの装置
に関して、異なる調整及び／又は異なる較正をした場
合、おそらく同じサンプルに関して毎日異なる示度が与
えられることになるだろう。同様に、たとえ適当に設定
されたとしても、任意の２つの装置が、同じ結果を与え
る保証はない。従って、フローサイトメトリー法は、サ
ンプル中に存在する細胞間の同定と識別のためのより良
い測定を提供するが、設定と操作に制限があるために、
あまり臨床装置として用いられなくなっている。必要な
ものは、サンプル中の細胞を正確にカウントでき、１つ
の装置から得られた結果が、サンプルが違っても同じで
あり、また他の装置から得られた結果と矛盾しないこと
が保証されるような単一システムまたは単一法である。
【００１６】もう１つの障害は、感染サンプルに対して
技術者がさらされるのを少なくするか、または制限しな
くてはならないことである。従来は、パラホルムアルデ
ヒドのような細胞固定剤をフローサイトメトリー法サン
プルに加えて、細胞／抗体相互作用を固定するだけでな
くて、サンプル中に存在している感染物質をも不活性化
させていた。固定は、従来、染色後に行って来た。結果
として、技術者には、サンプルを免疫蛍光標識と混ぜて
から固定することが求められた。これによって、各試薬
を入れて置くための分離容器が必要となって、サンプル
を測定する前に求められる工程の数が増加し、その結果
として、誤差の可能性と、更に、重要なことには暴露さ
れる可能性が増大した。
【００１７】最後に、従来のものでは、免疫蛍光標識を
小体積のサンプルと混ぜることが必要であった。一般的
には、試薬２０μｌを、サンプル５０μｌに加えた。細
胞と試薬を含む総体積は、染色が完全に行われるために
は小さな体積であるべきである、と考えられていた。
【００１８】本発明は、上記障害の全てを克服して、未
溶解全血サンプル中に存在する細胞の１つ又はそれ以上
の特異的な母集団を絶対カウントするための一段試験を
提供する。
【００１９】
【発明の概要】本発明は、サンプル中の細胞の１つ又は
それ以上の母集団を絶対カウントするための方法とキッ
トを含む。上記細胞をカウントするための好ましい手段
は、フローサイトメトリー装置を含む。その方法におい
ては、サンプルを、希釈剤を含むチューブに加える。希
釈剤は、固定剤、１つ又はそれ以上の細胞標識、及び単
位体積当たりの数が分かっている微小粒子の混合物を含
んでいる。微小粒子は蛍光性であり、その蛍光は、細胞
標識から放射される蛍光と識別できる。希釈剤中のサン
プルを渦巻かせてから温置し、再び渦巻かせてから、１
つ又はそれ以上の蛍光チャンネルを有するフローサイト
メトリー装置に流す。
【００２０】各事象ごとに、蛍光データを記録して記憶
させる。カウントしなければならない微小粒子と細胞の
実質的に全てを算入するために、１つの蛍光チャンネル
に対して、蛍光トリガー（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ
ｔｒｉｇｅｒ）をセットする。次に、記録事象を分析し
て、粒子数をカウントする。更に、少なくとも１つの追
加の蛍光弁別器（または「ゲート」）を、該ゲートの内
の１つ又はそれ以上が、各母集団からの蛍光と微小粒子
からの蛍光とを識別するのに十分であるように、サンプ
ル中に存在する細胞の各母集団に対してセットしてか
ら、各母集団の細胞数を、記録事象を再分析することに
よってカウントする。
【００２１】各母集団における細胞数、ビーズ（ｂｅａ
ｄｓ）の数、及び単位体積当たりのビーズ濃度が分かれ
ば、各母集団における細胞数を絶対的にカウントするこ
とができる。
【００２２】本発明の実施に際して有用なキットはサン
プルチューブと希釈剤を含み，このとき希釈剤は，固定
剤；１種以上の細胞マーカー（ｃｅｌｌ ｍａｒｋｅ
ｒ）；及び既知濃度の微粒子；の混合物を含む。希釈剤
はチューブ中に包装されていてもよい。これとは別に，
希釈剤は別々に収容されていても，またいくつかの成分
に分割されていてもよい（各成分は別々に収容され
る）。この場合，サンプルをサンプルチューブに加える
前または後に，希釈剤をサンプルチューブに加えること
ができる。
【００２３】本発明は，好ましくはフロー・サイトメト
リー（ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ）によってサンプ
ルの１つ以上の細胞集団に対する絶対カウント数（ａｂ
ｓｏｌｕｔｅ ｃｏｕｎｔ）を求めるための方法とキッ
トを含む。サンプルは，いかなる組織源からも得ること
ができるが，一般には，分離していない全血，リンパ，
脊髄液，尿，及び骨髄からなる群から選ばれる。
【００２４】サンプル中のカウントすることのできる細
胞集団は，血小板，赤血球，白血球，及びそれぞれのサ
ブセット（ｓｕｂｓｅｔ）と前駆体を含む。好ましい赤
血球集団は網状赤血球を含む。好ましい白血球のサブセ
ットは，リンパ球，単球，及び顆粒球を含む。１つの好
ましい実施態様においては，リンパ球サブセットが特に
重要であり，さらに好ましいのは，全血サンプルにおけ
るＣＤ４+ Ｔリンパ球のカウントである。以上のことか
らわかるように，本発明は，１つの細胞集団（例えば，
ＣＤ８+ Ｔリンパ球）だけでなく２つ以上の細胞集団の
カウントにも適用しうる。例えば，サンプル中における
ＣＤ４+ Ｔリンパ球とＣＤ８+ Ｔリンパ球の両方をカウ
ントするために，アンチ−ＣＤ４抗体及びアンチ−ＣＤ
８抗体を使用することができる。他の例においては，３
つの部分の白血球差を算出するのに，アンチ−ＣＤ４５
抗体，アンチ−ＣＤ１４抗体，及びアンチ−ＣＤ１５抗
体を使用することができる。さらに他の例においては，
Ｔリンパ球及び／又はＢリンパ球の絶対数を算出するの
に，アンチ−ＣＤ３抗体及び／又はアンチＣＤ１９抗体
（もしくはアンチＣＤ−２０抗体）を使用することがで
きる。単一の細胞マーカーによって識別することのでき
る集団は，それ自体単独でカウントできるか，あるいは
同じサンプル中の他の集団と一緒にカウントすることが
できる。
【００２５】本発明の実施に際して有用な細胞マーカー
は，蛍光抗体マーカー（ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃ
ｅｎｃｅ ｍａｋｅｒｓ）及び１つ以上の細胞集団を特
異的に標識付けする蛍光標識剤を含む。前述したよう
に，蛍光抗体マーカーは蛍光色素に結合した抗体を含
む。抗体としてはモノクローナル抗体が好ましい。蛍光
標識剤の例としては，米国特許第４，５４４，５４６；
４，８８３，８６７；及び４，９３７，１９８号各明細
書に記載の核酸染料，ヨウ化プロピジウム（ｐｒｏｐｉ
ｄｉｕｍ ｉｏｄｉｄｅ）染料，アクリジンオレンジ染
料，チアゾールオレンジ染料，チオフラビンＴ染料，及
び７−アミノ−アクチノマイシンＤ染料などがある。米
国特許第４，５４４，５４６号の式Ｉで一般的に表され
ているキノリン核を有する好ましい核酸染料は，現在で
はＬＤＳ−７５１〔エクサイトン（Ｅｘｃｉｔｏｎ）〕
の商品名でレーザー染料（ｌａｓｅｒ ｄｙｅ）として
市販されている。
【００２６】本発明の実施に際して有用な蛍光色素は，
同じ波長の光で励起可能であっても，あるいはそうでな
くてもよい。こうした特性を有する染料としては，フィ
コビリプロテイン（特にフィコエリトリン），フルオレ
セイン誘導体（例えばフルオレセインイソチオシアネー
ト），ペリジニンクロロフィル錯体（例えば米国特許第
４，８７６，１９０号に記載のもの），クマリン誘導体
（例えばアミノメチルクマリン），フタロシアニン染料
〔例えばウルトラライト染料（ウルトラダイアグノステ
ィクス社（Ｕｌｔｒａｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ））〕，
及びローダミン誘導体〔例えばテトラメチルローダミン
又はテキサスレッド（モレキュラー・プローブズ社（Ｍ
ｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ））〕などがある。
【００２７】２つ以上の細胞集団をカウントしなければ
ならない場合，２種以上の細胞マーカーを使用すること
ができる（各細胞マーカーは異なった細胞集団に対して
特異的である）。しかしながら，各マーカーの蛍光は，
互いに区別できるだけでなく，希釈剤中に使用されてい
る微粒子からも区別しうる発光波長（ｅｍｉｓｓｉｏｎ
ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ）を有していなけばならない。
蛍光抗体マーカーだけが使用される場合，蛍光色素とし
てはフィコエリトリンが好ましい。２つ以上の蛍光抗体
マーカーが使用される場合は，フィコエリトリンとペリ
ジニンクロロフィル錯体が好ましい。
【００２８】サンプル中の１つ又は２つの細胞集団をカ
ウントするために，サンプルをチューブに加える。サン
プルと希釈剤を合わせた全容積は，２００μｌ以上でな
ければならない。０．５〜１ｍｌの全容積が好ましい。
サンプルの容積は，サンプル対希釈剤の比（ｖ／ｖ）に
よって求められる。１：５〜１：１００の比が好まし
い。さらに好ましい比は１：９である。これらのファク
ターを使用すると，１ｍｌ容積の場合，１００μｌのサ
ンプルに対して９００μｌの希釈剤を使用するのが，ま
た０．５ｍｌ容積の場合，５０μｌのサンプルに対して
４５０μｌの希釈剤を使用するのが好ましい。
【００２９】チューブはプラスチック（例えば，ポリス
チレンやポリプロピレン）で造られていても，あるいは
ガラスで造られていてもよい。希釈剤成分のチューブへ
の非特異的結合を防止するために，チューブ壁体の表面
上のイオンに結合するブロッキング剤〔例えば，ウシの
血清アルブミン（“ＢＳＡ”），カゼイン，又はゼラチ
ン〕を使用することができる。ブロッキング剤の濃度
は，細胞マーカーの濃度の１０〜１００倍である。ブロ
ッキング剤としてはＢＳＡが好ましい。これらの薬剤
は，トレハロースのような保存剤を使用してチューブに
塗被して乾燥することができる。チューブはいかなる形
状・設計物でもよいが，好ましいフォーマットは，ユー
ノペット（Ｕｎｏｐｅｔｔｅ）設計物（ベクトン・ディ
ッキンソン社）を含み，該設計物については米国特許第
３，０４５，４９４；３，４３３，７１２；３，４６
３，３２２；３，４６４，８００；及び３，５１８，８
０４号各明細書に説明されている。
【００３０】チューブは希釈剤を含有するのが好まし
い。さらに，サンプルは希釈剤を含有したチューブに加
えるのが好ましい。希釈剤は，等張緩衝液（例えばリン
酸塩緩衝液），１種以上の細胞マーカー，固定剤（例え
ばパラホルムアルデヒド），及び既知数の蛍光微粒子の
溶液を含む。固定剤の濃度は，サンプル中の細胞を固定
する（従って，サンプルを貯蔵・移送することが可能と
なり，また捕集後のいつでも検査することができる）だ
けでなく，存在する恐れのあるウィルス（例えばＨＩ
Ｖ）を不活性にするだけの充分な濃度でなければならな
い。０．５％のパラホルムアルデヒドが好ましい。しか
しながら，サンプルが直ちに検査される場合，及び／又
はサンプルが不活性化される必要のない場合は，固定剤
を加える必要はない。
【００３１】本発明の実施に際して使用される微粒子
は，いくつかの特性を有していなければならない。先ず
第一に，微粒子のサイズは，混合物中で懸濁状態を保持
できるだけの，そしてサンプル中の細胞より速く沈降し
ないだけの小さなサイズ（すなわち０．２〜２０μｍで
あり，２μｍが好ましい）でなければならない。第二
に，微粒子は，凝集塊を形成しない物質で造られていな
ければならない。第三に，微粒子は蛍光性を有するもの
でなければならない。蛍光は，自己蛍光を示す微粒子を
含んだ物質を選択することによって達成できるか，ある
いは自己蛍光を現す蛍光染料で標識することによって蛍
光を付与することができる。自己蛍光性微粒子が好まし
い。
【００３２】微粒子の蛍光は，ある１つの蛍光チャンネ
ルにおいて，区別できるようバックグラウンドからのノ
イズより充分に大きい蛍光でなければならない。微粒子
の蛍光はさらに，他の蛍光チャンネルにおいて，蛍光抗
体マーカーの一部として使用される蛍光染料とは区別で
きるものでなければならない。染料の蛍光と微粒子の蛍
光との間には，１ｌｏｇの差（ｏｎｅ ｌｏｇ ｄｉｆ
ｆｅｒｅｎｃｅ）があれば充分である。これらの特性を
有する微粒子は，ニワトリの固定された赤血球，クマリ
ンビーズ，蛍光染料を含有したリポソーム，フルオレセ
インビーズ，ローダミンビーズ，固定された蛍光細胞，
蛍光細胞核，微生物，及び蛍光染料で標識付けした他の
ビーズからなる群から選ぶことができる。好ましいのは
クマリンビーズである。
【００３３】微粒子の濃度は，カウントすべき細胞の数
に等しいか又はそれ以上でなければならない。一般に
は，ビーズ対細胞の比は３：１で充分であるが，好まし
いのは１：１である。
【００３４】次いでチューブに含まれたサンプルと希釈
剤を渦巻き状に混合し，サンプル中の全ての細胞が細胞
マーカーによって標識付けされるだけの充分な時間反応
させる。好ましいのは３０分であるが，サンプルと希釈
剤は，フロー・サイトメーターで測定する前にさらに長
い時間混合しても安定且つ使用可能である。チューブ
は，この時間中，室温で保持することができる。次いで
再びチューブ内容物を渦巻き状に混合し，フロー・サイ
トメーターにかける。
【００３５】フロー・サイトメーターには，１つ以上の
蛍光検出器（便宜的に，蛍光チャンネル１及び２，又は
“ＦＬ１”及び“ＦＬ２”などと呼ばれる）及びデータ
記録・分析手段（このような手段は，一般にはコンピュ
ーターを含む）が装備されていなければならない。細胞
は，実質的に１回に１つフロー・サイトメーターにかけ
る。各測定に対して蛍光と散乱のデータを記録する。蛍
光トリガー（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｔｒｉｇｇｅ
ｒ）は，本質的に全ての微粒子とカウントすべき細胞が
トリガーレベル以上となるよう設定される。好ましい実
施態様においては，全微粒子の少なくとも９９％及びカ
ウントすべき細胞を含むようトリガーが設定される（こ
れは，例えばフロー・サイトメーターに接続されたオシ
ロスコープを観察することによって手操作で行うことが
でき，このとき蛍光をプロットし，微粒子の９９％を含
むようラインをひく）。次いで測定値を再度分析し，検
出された微粒子の数をカウントする。
【００３６】１つの細胞集団だけがカウントされる例で
は，細胞と微粒子の蛍光発光が区別できるよう蛍光ゲー
ト（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｇａｔｅ）が設定され
る。これは蛍光のヒストグラムであってもよく，このと
き染色された細胞の強度は微粒子の強度と明確に区別し
うる。これとは別に，そしてさらに好ましくは，このこ
とはｌｏｇＦＬ２対ｌｏｇＦＬ１のプロットにより行う
ことができ，このとき微粒子と染色された細胞の両方が
ＦＬ２の最初の蛍光トリガーを越えるが，ＦＬ１対ＦＬ
２におけるゲーティング（ｇａｔｉｎｇ）によって区別
することができる。コンピューターに記憶されている測
定事項がこの第２ゲートで再分析され，細胞の数がカウ
ントされる。２つの細胞集団がカウントされる場合，１
つ以上の組合わせが，いくつかの細胞集団の蛍光発光と
微粒子の蛍光発光との間で充分に区別できるよう，ＦＬ
１対ＦＬ２において蛍光ゲートが設定される。
【００３７】細胞集団に対する細胞の数と微粒子の数が
わかれば比が得られる。単位容積当たりの微粒子の数を
求め，これに前記の比を掛ければ，単位容積当たりの細
胞集団中の細胞数が得られ，これは細胞の絶対カウント
数である。
【００３８】ある１つのサンプルにおいて３つ以上の細
胞集団をカウントしなければならない場合，好ましい方
法は少なくとも２つのチューブを使用する方法である。
３つの部分の白血球差を算出する例によれば，アンチ−
ＣＤ４５抗体，アンチ−ＣＤ１４抗体，及びアンチ−Ｃ
Ｄ１５抗体を使用することができる（それぞれ，全ての
白血球，全ての単球，及び全ての骨髄細胞を標識付けす
る）。ＣＤ４５細胞の数（すなわち全白血球の数）から
ＣＤ１４細胞の数（すなわち単球の数）及びＣＤ１５細
胞の数（すなわち骨髄細胞の数）を引いて，抗体で特異
的に標識付けはされなかったが白血球の全数を含んだリ
ンパ球の数を求めることにより，差が得られる。
【００３９】一方のチューブにおける希釈剤は１種又は
２種の細胞マーカーを含み，そして他方のチューブにお
ける希釈剤はさらにもう１種のマーカーを含む（第１の
チューブに使用されているマーカーのうちの１種をさら
に含んでもよい）。両方のチューブにおいて，希釈剤は
微粒子を含む。しかしながら，以上のことからわかるよ
うに，ある１つの細胞集団の濃度が既知である場合（例
えば第１のチューブによるＣＤ４５），そして標識付け
されたアンチ−ＣＤ４５抗体が微粒子を含まずに第２の
チューブに使用される場合，第２のチューブに対する蛍
光トリガーは第１のチューブに基づいて設定することが
でき，また第１のチューブからのＣＤ４５細胞の濃度を
使用して，第２のチューブにおける他の細胞の数がカウ
ントされる。
【００４０】以下に実施例を挙げて本発明の１つ以上の
実施態様を詳細に説明する。
【００４１】最初の実験は，ある限定されたサンプル容
積の血液が，多量の希釈剤中にて一定量の蛍光抗体マー
カーによって効果的に染色されるかどうか調べるために
行った。本実験においては，５０μｌの未洗浄の全血を
捕集し，一定量のアンチ−ＣＤ４モノクローナル，Ａｎ
ｔｉ−Ｌｅｕ ３ａ（ベクトン・ディッキンソン・イム
ノサイトメトリー・システムズ“ＢＤＩＳ”から入手可
能）を含有したチューブに加え，リン酸塩緩衝液（“Ｐ
ＢＳ”）の量を増やしてｒ−フィコエリトリン（“Ｐ
Ｅ”）で標識付けした。次いで，コンソート３０又はＦ
ＡＣＳｃａｎリサーチソフトウェア（ＢＤＩＳ）を組み
込んだヒューレット−パッカード３１０コンピューター
を装備したＦＡＣＳｃａｎブランドのフロー・サイトメ
ーター（ＢＤＩＳ）を使用して染色された細胞を調べ，
ＣＤ４+ Ｔリンパ球に関して平均ピーク蛍光チャンネル
数を記録した。得られた結果を表１に示す。
【００４２】 表Ｉ 全染色容積（μｌ） 平均ピークチャンネル ５５ ７９９ ７５ ７９８ １７５ ７９３ ６７５ ７６３ ３１７５ ６９０ 表Ｉからわかるように，驚くべきことに，蛍光抗体マー
カーの濃度が減少してもＣＤ４+ Ｔリンパ球の染色強度
は減少しない，ということが見出された。従って，１：
１３．５の希釈度（すなわち希釈剤の容量が６２５μｌ
であるとき）では，その強度は，ほぼ従来より最適の染
色条件であると考えられている下で認められた。
【００４３】第２の実験においては，固定された抗体が
固定剤の存在下で細胞を染色するかどうかを調べること
が必要であった。本実施例では，５０μｌ，２５０μ
ｌ，又は１０００μｌの全染色容積に対して，ＰＢＳを
０．５％のＢＳＡ，０．５％のパラホルムアルデヒド，
０．５％のホルムアルデヒド，又は２％のホルムアルデ
ヒド中に存在させて，５０μｌの未洗浄全血を一定量の
アンチ−Ｌｅｕ ３ａ（ＰＥ）と混合した。抗体をあら
かじめ固定した場合と，同一濃度の固定剤にて固定した
場合について行った。細胞は前述の如く処理した。ＣＤ
４+ Ｔリンパ球に関して平均ｌｏｇＰＥ蛍光を記録し，
各タイプの固定剤につき希釈剤の容積に対してプロット
した。
【００４４】図１を参照すると，固定剤のタイプに関係
なく，いずれの細胞も低希釈度では類似の蛍光強度を示
すことがわかる。より高い希釈度では，０．５％のパラ
ホルムアルデヒドで固定された細胞（及び抗体）だけ
が，固定されていない細胞及び抗体と同等の結果を与え
た。
【００４５】本実験では，希釈剤は，一定量のアンチ−
Ｌｅｕ ３ａ（ＰＥ）を，０．５％のパラホルムアルデ
ヒド，パンデックスＤ ２．１２μ微粒子（すなわち自
己蛍光性のクマリンビーズ），及びＰＢＳ中１％のプル
ロニックスＦ６８中に混合して得られる混合物から調製
した。抗体の最終的な濃度は０．２６ｕｇ／μｌであっ
た。本希釈剤の９００μｌアリコートを，ポリスチレン
チューブ中で１００μｌの分離していない全血と混合
し，３０分間反応させた。次いで本混合物を渦巻き状に
撹拌混合し，前述のようにフロー・サイトメーターによ
り実験を行った。ＦＬ２を全微粒子の９９％以上を含む
よう設定されたトリガーとして使用して，データを収集
した。
【００４６】図２Ａを参照すると，蛍光トリガー（ＦＬ
２において）を越える測定事象が示されている。４つの
測定状況集団が認められる：すなわち，（１）微粒子；
（２）ＣＤ４+ Ｔリンパ球；（３）ＣＤ４+ 単球；及び
（４）ノイズ（すなわち殆どが赤血球）である。図２Ａ
においてゲートを描くことによって，ゲート内に含まれ
る測定事象をＦＬ１のヒストグラムにおいてプロットす
ることができる。図２Ｂからわかるように，２本のはっ
きりしたピークが現れ，蛍光ゲートを細胞と微粒子との
間で明確に区別できるよう設定することができる。
【００４７】前述の希釈剤と方法を使用して，３種の異
なるドナーから分離していない全血の２つの複製サンプ
ルを，そして各複製サンプルから５つの個別の測定値を
得た。次いで，ＣＤ４+ Ｔリンパ球／微粒子の数を求め
た。図３を参照すると，ＣＤ４+ Ｔリンパ球の絶対数は
個人間で異なるけれども，複製サンプル間，及び複製サ
ンプル内での各測定値間での変動係数は低い（いずれも
３％以下）。
【００４８】最後に，ＣＤ４+ Ｔリンパ球と微粒子との
測定比が，実際にＣＤ４+ Ｔリンパ球の絶対カウントの
目安となることを示すために，正常なドナーから遠心分
離と吸引により，バフィー・コート−デプレーテッド・
サンプル（ｂｕｆｆｙ ｃｏａｔ−ｄｅｐｌｅｔｅｄ
ｓａｍｐｌｅ）を調製した。デプレーテッド・ブラッド
（ｄｅｐｌｅｔｅｄ ｂｌｏｏｄ）を，既知希釈度の同
じドナーからの全血と混合した。次いでこの混合物を，
前述の方法に従って希釈剤と混合した。そして本混合物
に対し前述の如く実験を行い，ＣＤ４+ Ｔリンパ球の数
を測定した。図４を参照すると，ＣＤ４+ Ｔリンパ球の
絶対カウントと血液希釈度との間の相関性が高い（すな
わち，ｒ2 ＝０．９９６）ことがわかる。
【００４９】以上の実験結果から，多量の希釈剤と少量
の血液サンプルを使用して，単位容積当たりのサンプル
中の細胞数を正確に測定できることがわかる。
【００５０】本明細書にて挙げた文献と特許出願は，本
発明が関係する当技術者のレベルであればいずれも理解
しうるものである。これらの文献と特許出願を，各文献
又は特許出願が特異的且つ個別的に引用すべく示されて
いるのと同じ程度にまで，すべて参照の形でここに引用
する。
【００５１】当技術者にとっては，特許請求の範囲の精
神と範囲を逸脱することなく，本発明に対する多くの変
形と改良形が可能であることは言うまでもない。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は，異なる濃度の固定剤の存在下におい
て，同量のアンチ−Ｌｅｕ３ａ（ＰＥ）で染色した分離
されていない全血に関して，平均ｌｏｇ蛍光と染色容積
との関係をプロットしたものである。
【図２】図２は，Ａ）アンチ−Ｌｅｕ ３ａ（ＰＥ）と
パンデックスＤ ２．１２μの自己蛍光微粒子とを含有
した希釈剤で染色した分離されていない全血細胞からの
第１蛍光トリガーを越えた測定事象に関して，ｌｏｇ蛍
光２とｌｏｇ蛍光１との関係をプロットしたもの；及び
Ｂ）Ａ）において設定されたゲート内に含まれる細胞と
ビーズに対するｌｏｇ蛍光１のヒストグラムである。
【図３】図３は，アンチ−Ｌｅｕ ３ａ（ＰＥ）で染色
された３つの個体からの２つの複製サンプルのそれぞれ
に関して，分離されていない全血中の微粒子１個当たり
のＣＤ４+ リンパ球の絶対数を５本の棒グラフで示した
ものである。
【図４】図４は，ＣＤ４+ リンパ球対微粒子の比と，全
血が加えられていてアンチ−Ｌｅｕ ３ａ（ＰＥ）で染
色されたバフィー・コート−デプレーテッド全血サンプ
ルに対する希釈率パーセントとの関係をプロットしたも
のである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 トーマス・ジェイ・マーコリノ アメリカ合衆国カリフォルニア州94566, プリーザントン，シルヴァニア・コート 3256 (72)発明者 ディーサー・ジェイ・レックテンワルド アメリカ合衆国カリフォルニア州95014, クパーティーノ，アルカザール・アベニュ ー 21910

Claims (15)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】以下の工程：即ち、 （ａ）サンプル中に存在する各母集団中の細胞を細胞標
    識と既知数の蛍光微小粒子で標識するために、１つ又は
    それ以上の細胞標識を含んでいるような希釈剤を含むチ
    ューブに、サンプルを加える； （ｂ）蛍光トリガーをセットして、母集団中に存在する
    カウントしなければならない実質的に全ての微小粒子と
    細胞を算入する； （ｃ）各細胞標識と微小粒子を識別するために、１つ又
    はそれ以上の蛍光ゲートをセットする； （ｄ）蛍光トリガーに衝突したり又は該トリガーを乗越
    えたりしている工程（ｃ）からの細胞の数をカウントす
    る；及び （ｅ）工程（ｄ）からの各蛍光ゲートに対する微小粒子
    １個当たりの細胞数を計算し、そのそれぞれに微小粒子
    の濃度を掛けて、単位体積当たりの細胞数の絶対カウン
    トを得る 工程を含むフローサイトメトリー法によって、全血また
    は骨髄のサンプル中に存在する細胞の１つ又はそれ以上
    の母集団に関する絶対カウントを測定する方法。
  2. 【請求項２】 サンプルが、未溶解全血である請求項１
    記載の方法。
  3. 【請求項３】 細胞標識の１つ又はそれ以上が、免疫蛍
    光標識を含み、更に該免疫蛍光標識が、フルオロクロム
    に結合している単一クローン抗体を含む請求項１記載の
    方法。
  4. 【請求項４】 単一クローン抗体が、抗ＣＤ４、抗ＣＤ
    ８、抗ＣＤ３、抗ＣＤ１４、抗ＣＤ１５、及び抗ＣＤ４
    ５単一クローン抗体から成る群より選択される請求項３
    記載の方法。
  5. 【請求項５】 フルオロクロムが、フィコビリプロテイ
    ン、フルオレセイン誘導体、ローダミン、プサロシアニ
    ン誘導体、ペリジニンクロロフィル錯体、及びクマリン
    誘導体から成る群より選択される請求項４記載の方法。
  6. 【請求項６】 微小粒子が、鶏の固定赤血球、蛍光色素
    を含むリポソーム、クマリンビーズ、フルオレセインビ
    ーズ、ローダミンビーズ、固定蛍光細胞、蛍光細胞核、
    微生物、蛍光色素で標識した表面標識ビーズから成る群
    より選択される請求項１記載の方法。
  7. 【請求項７】 細胞標識の１つ又はそれ以上が、蛍光標
    識剤を含む請求項１記載の方法。
  8. 【請求項８】 蛍光標識剤が、核酸色素、７−アミノ−
    アクチノマイシンＤ、チアゾールオレンジ、チオフラビ
    ンＴ、ＬＤＳ−７５１、及びアクリジンオレンジから成
    る群より選択される請求項７記載の方法。
  9. 【請求項９】 以下の工程：即ち、 （ａ）サンプル中の細胞を標識するための１つの免疫蛍
    光標識、固定剤、及び２つの蛍光チャンネルにおいて自
    己蛍光を有し、更に第一チャンネルの第二チャンネルに
    対する微小粒子の自己蛍光の割合を、該第一チャンネル
    と該第二チャンネルにおいて免疫蛍光標識によって放出
    される蛍光の割合と識別することができる既知濃度の微
    小粒子を含んでいるような希釈剤を含むチューブに、サ
    ンプルを加える； （ｂ）第二蛍光チャンネルにトリガーをセットして、母
    集団中に存在するカウントしなければならない実質的に
    全ての微小粒子と細胞を算入する； （ｃ）フローサイトメトリー法によって、第二蛍光チャ
    ンネルの蛍光トリガーに衝突したり又は該トリガーを乗
    越えたりしている全ての免疫蛍光標識細胞と微小粒子を
    カウントする； （ｄ）第一と第二蛍光チャンネルの蛍光ゲートをセット
    して、免疫蛍光標識と微小粒子を識別する； （ｅ）工程（ｆ）からの微小粒子１個当たりの細胞数を
    計算し、それに微小粒子の濃度を掛けて、単位体積当た
    りの細胞数の絶対カウントを得る工程を含むフローサイ
    トメトリー法によって、全血サンプル中に存在する細胞
    の１つの母集団に関する絶対カウントを測定する方法。
  10. 【請求項１０】 以下の工程：即ち、 （ａ）藻紅素に結合している抗ＣＤ４単一クローン抗
    体、パラホルムアルデヒド、及び既知濃度の２μｍ自己
    蛍光微小粒子を含む希釈剤を含むチューブに、サンプル
    を加える； （ｂ）第二蛍光チャンネルの蛍光トリガーをセットし
    て、全ての微小粒子とＣＤ４+リンパ球の少なくとも９
    ９％を算入する； （ｃ）第一と第二蛍光チャンネルの蛍光ゲートをセット
    して、標識ＣＤ４+リンパ球と結合している藻紅素蛍光
    と微小粒子の自己蛍光を識別する； （ｄ）工程（ｃ）からのＣＤ４+リンパ球と微小粒子の
    数をカウントする； （ｅ）工程（ｄ）からの微小粒子１個当たりのＣＤ４+
    リンパ球数を計算し、それに微小粒子の濃度を掛けて、
    単位体積当たりのＣＤ４+リンパ球に関する絶対カウン
    トを得る 工程を含むフローサイトメトリー法によって、全血サン
    プル中に存在するＣＤ４+リンパ球に関する絶対カウン
    トを測定する方法。
  11. 【請求項１１】 １つ又はそれ以上の蛍光標識単一クロ
    ーン抗体、固定剤、及び蛍光微小粒子を含んでいるよう
    な希釈剤を含む未溶解全血を染色するための溶液。
  12. 【請求項１２】 １つの抗体が、抗ＣＤ４単一クローン
    抗体である請求項１１記載の溶液。
  13. 【請求項１３】 蛍光標識が、藻紅素である請求項３５
    記載の溶液。
  14. 【請求項１４】 固定剤が、パラホルムアルデヒドであ
    る請求項３５記載の溶液。
  15. 【請求項１５】 フルオロクロムに結合している抗ＣＤ
    ４単一クローン抗体、第二フルオロクロムに結合してい
    る抗ＣＤ８単一クローン抗体、第三フルオロクロムに結
    合している抗ＣＤ３単一クローン抗体、パラホルムアル
    デヒド、及び自己蛍光ビーズを含む未溶解全血サンプル
    中のＣＤ４+リンパ球とＣＤ８+リンパ球を染色するため
    の溶液。
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Families Citing this family (121)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2913219B2 (ja) * 1991-03-06 1999-06-28 株式会社シマ研究所 尿沈渣検査成績管理方法
US5488469A (en) * 1991-08-30 1996-01-30 Omron Corporation Cell analyzing apparatus
DE69230902D1 (de) * 1991-08-30 2000-05-18 Omron Tateisi Electronics Co Vorrichtung zur Zellenanalyse
US5451525A (en) * 1992-02-14 1995-09-19 Coulter Corporation Method and materials for determining particle count in a flow cytometer
FR2688309B1 (fr) * 1992-03-06 1995-08-11 Donzeau Jean Claude Procede de controle preventif de l'immunite chez le sujet humain par l'etude de la population lymphocytaire.
DE69326731T2 (de) * 1992-09-04 2000-05-18 Becton Dickinson And Co., Franklin Lakes Kontroll-Teilchen für die Zellzählung und Instrumentenlinearität
ES2051651B1 (es) * 1992-12-10 1995-01-01 Univ Salamanca Procedimiento para la cuantificacion simultanea, en una sola medicion, de los principales tipos de linfocitos humanos y sus subpoblaciones.
EP0608987B1 (en) * 1993-01-26 2001-10-10 Becton, Dickinson and Company Method for detecting rare events
US5585246A (en) * 1993-02-17 1996-12-17 Biometric Imaging, Inc. Method for preparing a sample in a scan capillary for immunofluorescent interrogation
US5879900A (en) * 1994-12-15 1999-03-09 Abbott Laboratories Method for simultaneous analysis of cell viability, nucleated red blood cells and white blood cell differentials
AUPN214095A0 (en) * 1995-04-03 1995-04-27 Australian Water Technologies Pty Ltd Method for detecting microorganisms using flow cytometry
EP2264427B1 (en) 1997-01-31 2017-05-03 Xy, Llc Optical apparatus with focussing reflector for converging radiation onto a flow of particles, and related method of analysis
US6071689A (en) 1997-12-31 2000-06-06 Xy, Inc. System for improving yield of sexed embryos in mammals
US6149867A (en) 1997-12-31 2000-11-21 Xy, Inc. Sheath fluids and collection systems for sex-specific cytometer sorting of sperm
US6211477B1 (en) 1998-02-26 2001-04-03 Becton Dickinson And Company Electrostatic deceleration system for flow cytometer
JP2002529729A (ja) * 1998-11-05 2002-09-10 シェモメテック・アクティーゼルスカブ 粒子の検査方法ならびに該方法に使用する系およびデバイス
WO2000058727A1 (en) 1999-03-31 2000-10-05 Bayer Corporation Single channel, single dilution detection method
US6221668B1 (en) * 1999-08-20 2001-04-24 Streck Laboratories, Inc. Hematology control and system for multi-parameter hematology measurements
US7208265B1 (en) 1999-11-24 2007-04-24 Xy, Inc. Method of cryopreserving selected sperm cells
US6784981B1 (en) 2000-06-02 2004-08-31 Idexx Laboratories, Inc. Flow cytometry-based hematology system
JPWO2002018947A1 (ja) * 2000-08-30 2004-01-15 有限会社ゴールドラッシュ 血液腫瘍の診断方法および診断薬
US7713687B2 (en) 2000-11-29 2010-05-11 Xy, Inc. System to separate frozen-thawed spermatozoa into x-chromosome bearing and y-chromosome bearing populations
WO2002043486A1 (en) 2000-11-29 2002-06-06 Xy, Inc. System for in-vitro fertilization with spermatozoa separated into x-chromosome and y-chromosome bearing populations
JP4612037B2 (ja) * 2001-01-25 2011-01-12 プレシジョン・システム・サイエンス株式会社 微小物識別装置およびその識別方法
JP4181034B2 (ja) 2001-07-11 2008-11-12 ナショナル ヘルス ラボラトリー サービス 細胞計数
US7316772B2 (en) * 2002-03-05 2008-01-08 Enthone Inc. Defect reduction in electrodeposited copper for semiconductor applications
PT1363126E (pt) * 2002-05-14 2006-05-31 Univ Salamanca Analise multidimensional diferencial de leucocitos
USRE47770E1 (en) 2002-07-18 2019-12-17 Merus N.V. Recombinant production of mixtures of antibodies
DK2314629T4 (da) 2002-07-18 2023-02-06 Merus Nv Rekombinant produktion af blandinger af antistoffer
JP4595067B2 (ja) * 2002-08-01 2010-12-08 エックスワイ，エルエルシー 低圧精子細胞分離システム
US8486618B2 (en) 2002-08-01 2013-07-16 Xy, Llc Heterogeneous inseminate system
CA2534394C (en) 2002-08-15 2013-01-08 Xy, Inc. High resolution flow cytometer
US7169548B2 (en) 2002-09-13 2007-01-30 Xy, Inc. Sperm cell processing and preservation systems
US7507548B2 (en) * 2003-03-04 2009-03-24 University Of Salamanca Multidimensional detection of aberrant phenotypes in neoplastic cells to be used to monitor minimal disease levels using flow cytometry measurements
BRPI0408857B1 (pt) 2003-03-28 2018-09-11 Inguran Llc aparelho, métodos e processos para separar partículas e para prover esperma de animal separado por sexo
ES2541121T3 (es) * 2003-05-15 2015-07-16 Xy, Llc Clasificación eficiente de células haploides por sistemas de citometría de flujo
WO2004106375A1 (en) 2003-05-30 2004-12-09 Merus Biopharmaceuticals B.V. I.O. Fab library for the preparation of anti vegf and anti rabies virus fabs
US20100069614A1 (en) 2008-06-27 2010-03-18 Merus B.V. Antibody producing non-human mammals
EP1737971B1 (en) 2004-01-20 2017-08-16 Merus N.V. Mixtures of binding proteins
EP1724581B1 (en) * 2004-03-03 2014-07-02 Universidad De Salamanca Method for the multidimensional detection of aberrant phenotypes in neoplastic cells to be used to monitor minimal disease levels using flow cytometry
DK2801363T3 (en) 2004-03-29 2018-05-28 Inguran Llc PROCEDURE FOR STORING SORTED SPERMATOZOES
US7625712B2 (en) * 2004-05-21 2009-12-01 Beckman Coulter, Inc. Method for a fully automated monoclonal antibody-based extended differential
CA2574499C (en) 2004-07-22 2016-11-29 Monsanto Technology Llc Process for enriching a population of sperm cells
WO2006067572A2 (en) * 2004-12-14 2006-06-29 University Of The Witwatersrand, Johannesburg A method for diagnosing and monitoring cellular reservoirs of disease
US8541227B2 (en) 2005-02-25 2013-09-24 Dako Denmark A/S Cell counting
US7299135B2 (en) * 2005-11-10 2007-11-20 Idexx Laboratories, Inc. Methods for identifying discrete populations (e.g., clusters) of data within a flow cytometer multi-dimensional data set
US20090061478A1 (en) * 2006-01-30 2009-03-05 Lene Have Poulsen High-Speed Quantification of Antigen Specific T-Cells in Whole Blood by Flow Cytometry
US8241908B2 (en) 2006-05-16 2012-08-14 Becton, Dickinson And Company Extracellular matrix coated surface for culturing cells
DE102007002614B4 (de) * 2007-01-12 2009-04-02 Jerichow, Ulrich, Dr. Vorrichtung zur Überwachung, Steuerung und/oder Regelung einer Gaszusammensetzung
WO2008116468A2 (en) 2007-03-26 2008-10-02 Dako Denmark A/S Mhc peptide complexes and uses thereof in infectious diseases
EP3620465B1 (en) * 2007-07-03 2025-02-19 Dako Denmark A/S Improved methods for generation, labeling and use of mhc multimers
US7816135B2 (en) 2007-07-05 2010-10-19 Becton, Dickinson And Company Method of analyzing lymphocytes
US20090035802A1 (en) * 2007-07-31 2009-02-05 Digital Bio Technology, Co., Ltd. Method for detection and enumeration of cell surface markers
US10611818B2 (en) 2007-09-27 2020-04-07 Agilent Technologies, Inc. MHC multimers in tuberculosis diagnostics, vaccine and therapeutics
DK2254592T3 (da) 2008-02-28 2019-09-09 Dako Denmark As MHC-multimerer til Borrelia-diagnostik og sygdom
WO2009131702A2 (en) 2008-04-25 2009-10-29 Dyax Corp. Antibodies against fcrn and use thereof
WO2010009735A2 (en) 2008-07-23 2010-01-28 Dako Denmark A/S Combinatorial analysis and repair
GB0817244D0 (en) * 2008-09-20 2008-10-29 Univ Cardiff Use of a protein kinase inhibitor to detect immune cells, such as T cells
WO2010037402A1 (en) 2008-10-02 2010-04-08 Dako Denmark A/S Molecular vaccines for infectious disease
US11992518B2 (en) 2008-10-02 2024-05-28 Agilent Technologies, Inc. Molecular vaccines for infectious disease
CA2740440A1 (en) 2008-10-14 2010-04-22 Dyax Corp. Use of igf-ii/igf-iie binding proteins for the treatment and prevention of systemic sclerosis-associated pulmonary fibrosis
EP2364368B1 (en) 2008-11-07 2014-01-15 Sequenta, Inc. Methods of monitoring conditions by sequence analysis
US9528160B2 (en) 2008-11-07 2016-12-27 Adaptive Biotechnolgies Corp. Rare clonotypes and uses thereof
US9506119B2 (en) 2008-11-07 2016-11-29 Adaptive Biotechnologies Corp. Method of sequence determination using sequence tags
US9365901B2 (en) 2008-11-07 2016-06-14 Adaptive Biotechnologies Corp. Monitoring immunoglobulin heavy chain evolution in B-cell acute lymphoblastic leukemia
US8691510B2 (en) 2008-11-07 2014-04-08 Sequenta, Inc. Sequence analysis of complex amplicons
US8748103B2 (en) 2008-11-07 2014-06-10 Sequenta, Inc. Monitoring health and disease status using clonotype profiles
US8628927B2 (en) 2008-11-07 2014-01-14 Sequenta, Inc. Monitoring health and disease status using clonotype profiles
ES2726702T3 (es) 2009-01-15 2019-10-08 Adaptive Biotechnologies Corp Perfilado de la inmunidad adaptativa y métodos para la generación de anticuerpos monoclonales
WO2010151416A1 (en) 2009-06-25 2010-12-29 Fred Hutchinson Cancer Research Center Method of measuring adaptive immunity
SMT201800552T1 (it) 2010-01-06 2018-11-09 Dyax Corp Proteine che legano la callicreina plasmatica
CN103328500B (zh) 2010-08-04 2018-01-26 西兹尔生物技术有限公司 用于癌症的诊断和治疗的方法和化合物
US20120065092A1 (en) 2010-09-14 2012-03-15 Wai Hobert Fusion analyte cytometric bead assay, and systems and kits for performing the same
WO2012065004A2 (en) 2010-11-12 2012-05-18 Incelldx, Inc. Methods and systems for predicting whether a subject has a cervical intraepithelial neoplasia (cin) lesion from a suspension sample of cervical cells
WO2012071559A2 (en) 2010-11-23 2012-05-31 Presage Biosciences, Inc. Therapeutic methods and compositions for solid delivery
US8753890B2 (en) 2010-12-09 2014-06-17 Abbott Point Of Care, Inc. Apparatus and method using anti-adsorption agent to facilitate sample mixing and analysis
WO2012079076A2 (en) * 2010-12-10 2012-06-14 The University Of North Carolina At Chapel Hill Methods and systems for distributing a plurality of particles within a viscoelastic specimen
ES2927316T3 (es) * 2011-05-04 2022-11-04 Abbott Lab Sistema y método de análisis de glóbulos blancos
AU2012262007B2 (en) 2011-06-02 2017-06-22 Takeda Pharmaceutical Company Limited Fc receptor binding proteins
EP2768982A4 (en) 2011-10-21 2015-06-03 Adaptive Biotechnologies Corp QUANTIFICATION OF ADAPTIVE IMMUNOCELL GENOMES IN A COMPLEX MIX OF CELLS
US9523682B2 (en) 2011-11-16 2016-12-20 Becton, Dickinson And Company Methods and systems for detecting an analyte in a sample
US9824179B2 (en) 2011-12-09 2017-11-21 Adaptive Biotechnologies Corp. Diagnosis of lymphoid malignancies and minimal residual disease detection
US9499865B2 (en) 2011-12-13 2016-11-22 Adaptive Biotechnologies Corp. Detection and measurement of tissue-infiltrating lymphocytes
US20150056649A1 (en) 2012-01-13 2015-02-26 Konica Minolta, Inc. Method for quantifying cell of interest in blood, and method for evaluating system for quantifying said cell
EP3372694A1 (en) 2012-03-05 2018-09-12 Adaptive Biotechnologies Corporation Determining paired immune receptor chains from frequency matched subunits
US10724099B2 (en) 2012-03-16 2020-07-28 The Broad Institute, Inc. Multiplex methods to assay mixed cell populations simultaneously
US9248181B2 (en) 2012-04-20 2016-02-02 Merus B.V. Methods and means for the production of Ig-like molecules
HUE029357T2 (en) 2012-05-08 2017-02-28 Adaptive Biotechnologies Corp Preparations and devices for measuring and calibrating amplification distortion in multiplex PCR reactions
EP3330384B1 (en) 2012-10-01 2019-09-25 Adaptive Biotechnologies Corporation Immunocompetence assessment by adaptive immune receptor diversity and clonality characterization
WO2015160439A2 (en) 2014-04-17 2015-10-22 Adaptive Biotechnologies Corporation Quantification of adaptive immune cell genomes in a complex mixture of cells
EP2926115B1 (en) 2012-11-30 2021-05-26 The University of North Carolina At Chapel Hill Methods and systems for determining physical properties of a specimen in a portable point of care diagnostic device
ES2692407T3 (es) 2013-01-11 2018-12-03 Becton, Dickinson And Company Dispositivo de ensayo de punto de cuidado de bajo coste
US9708657B2 (en) 2013-07-01 2017-07-18 Adaptive Biotechnologies Corp. Method for generating clonotype profiles using sequence tags
EP3066190B1 (en) 2013-11-06 2020-12-30 Becton, Dickinson and Company Microfluidic devices, and methods of using the same
JP6518245B2 (ja) 2013-11-13 2019-05-22 ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニーＢｅｃｔｏｎ， Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ 光学撮像システム及びそれを用いた方法
WO2015134787A2 (en) 2014-03-05 2015-09-11 Adaptive Biotechnologies Corporation Methods using randomer-containing synthetic molecules
US10066265B2 (en) 2014-04-01 2018-09-04 Adaptive Biotechnologies Corp. Determining antigen-specific t-cells
CA2935312C (en) 2014-10-14 2022-11-22 Becton, Dickinson And Company Blood sample management using open cell foam
BR122020024283B1 (pt) 2014-10-14 2023-02-23 Becton, Dickinson And Company Dispositivo de transferência de sangue adaptado para receber uma amostra de sangue
JP2016080563A (ja) * 2014-10-20 2016-05-16 日本光電工業株式会社 分析システム、分析装置
CA2966201A1 (en) 2014-10-29 2016-05-06 Adaptive Biotechnologies Corp. Highly-multiplexed simultaneous detection of nucleic acids encoding paired adaptive immune receptor heterodimers from many samples
US10246701B2 (en) 2014-11-14 2019-04-02 Adaptive Biotechnologies Corp. Multiplexed digital quantitation of rearranged lymphoid receptors in a complex mixture
AU2015353581A1 (en) 2014-11-25 2017-06-15 Adaptive Biotechnologies Corporation Characterization of adaptive immune response to vaccination or infection using immune repertoire sequencing
CN104458539A (zh) * 2014-12-17 2015-03-25 重庆医科大学附属儿童医院 一种非诊断目的检测淋巴细胞增殖情况的方法及其试剂盒
CA2976580A1 (en) 2015-02-24 2016-09-01 Adaptive Biotechnologies Corp. Methods for diagnosing infectious disease and determining hla status using immune repertoire sequencing
CN106604780B (zh) 2015-03-10 2019-06-25 贝克顿·迪金森公司 生物流体微样本管理装置
WO2016144652A1 (en) 2015-03-12 2016-09-15 Becton, Dickinson And Company Polymeric bodipy dyes and methods for using the same
CN107428918B (zh) 2015-03-12 2021-07-30 贝克顿·迪金森公司 紫外线吸收聚合物染料及其使用方法
EP3277294B1 (en) 2015-04-01 2024-05-15 Adaptive Biotechnologies Corp. Method of identifying human compatible t cell receptors specific for an antigenic target
ES2857873T3 (es) 2015-09-01 2021-09-29 Becton Dickinson Co Dispositivo de filtración en profundidad para separar fases de muestras
WO2017105928A1 (en) 2015-12-16 2017-06-22 Becton, Dickinson And Company Photostable fluorescent polymeric tandem dyes including luminescent metal complexes
CN109661439A (zh) 2016-07-07 2019-04-19 贝克顿·迪金森公司 发荧光的水溶剂化共轭聚合物
US10428325B1 (en) 2016-09-21 2019-10-01 Adaptive Biotechnologies Corporation Identification of antigen-specific B cell receptors
JP7097885B2 (ja) 2016-12-12 2022-07-08 ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニー 水溶性ポリマー色素
US11254980B1 (en) 2017-11-29 2022-02-22 Adaptive Biotechnologies Corporation Methods of profiling targeted polynucleotides while mitigating sequencing depth requirements
CN111936905B (zh) 2018-03-30 2023-01-06 Idexx实验室公司 流式细胞仪的激光光学组件
US20210356379A1 (en) 2018-10-31 2021-11-18 Takeda Pharmaceutical Company Limited Quantitative flow cytometry
WO2020127222A2 (en) 2018-12-17 2020-06-25 Immudex Aps Panel comprising borrelia mhc multimers
US12306177B2 (en) 2020-05-13 2025-05-20 Becton, Dickinson And Company Blood based controls for complex panel
KR102547788B1 (ko) 2020-06-17 2023-06-26 아이덱스 래보러토리즈, 인코포레이티드 플로우 사이토미터 및 그 레이저 광학 어셈블리
EP4155349A1 (en) 2021-09-24 2023-03-29 Becton, Dickinson and Company Water-soluble yellow green absorbing dyes

Family Cites Families (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL135023C (ja) * 1958-03-13
US3433712A (en) * 1965-01-28 1969-03-18 Horace W Gerarde Cholinesterase test
US3464800A (en) * 1966-10-27 1969-09-02 Horace W Gerarde Pipette assembly having precise quantity of dry stabilized reagent and method of preparing same
US3463322A (en) * 1967-07-28 1969-08-26 Horace W Gerarde Pressure filtration device
US4110604A (en) * 1976-11-04 1978-08-29 Becton, Dickinson And Company Particle density measuring system
US4544546A (en) * 1980-04-21 1985-10-01 Abbott Laboratories Fluorescent nucleic acid stains
DE3269567D1 (en) * 1981-04-29 1986-04-10 Ciba Geigy Ag New devices and kits for immunological analysis
DE3238353A1 (de) * 1982-10-15 1984-04-19 Max Planck Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V., 3400 Göttingen Verfahren zur simultanen quantitativen bestimmung der blutzellen und reagenz hierfuer
US4599307A (en) * 1983-07-18 1986-07-08 Becton, Dickinson And Company Method for elimination of selected cell populations in analytic cytology
US4677061A (en) * 1984-10-19 1987-06-30 Genetic Systems Corporation T-cell lymphocyte subset monitoring of immunologic disease
US4727020A (en) * 1985-02-25 1988-02-23 Becton, Dickinson And Company Method for analysis of subpopulations of blood cells
US4883867A (en) * 1985-11-01 1989-11-28 Becton, Dickinson And Company Detection of reticulocytes, RNA or DNA
DE3541033A1 (de) * 1985-11-19 1987-05-21 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur quantifizierung von zellpopulationen bzw. subpopulationen sowie hierfuer geeignetes reagenz
US4704891A (en) * 1986-08-29 1987-11-10 Becton, Dickinson And Company Method and materials for calibrating flow cytometers and other analysis instruments
JPS63214668A (ja) * 1987-03-03 1988-09-07 Hitachi Ltd 細胞測定方法
US4876190A (en) * 1987-10-21 1989-10-24 Becton Dickinson & Company Peridinin-chlorophyll complex as fluorescent label
US4987086A (en) * 1987-11-30 1991-01-22 Becton, Dickinson And Company Method for analysis of subpopulations of cells
US5064616A (en) * 1987-11-30 1991-11-12 Becton Dickinson And Company Kit for analysis of subsets of subpopulations of leukocytes
US5057413A (en) * 1988-06-13 1991-10-15 Becton, Dickinson And Company Method for discriminating between intact and damaged cells in a sample
US5047321A (en) * 1988-06-15 1991-09-10 Becton Dickinson & Co. Method for analysis of cellular components of a fluid
FR2679660B1 (fr) * 1991-07-22 1993-11-12 Pasteur Diagnostics Procede et dispositif magnetique d'analyse immunologique sur phase solide.

Also Published As

Publication number Publication date
CA2048004A1 (en) 1992-02-08
ZA915958B (en) 1992-04-29
MY107807A (en) 1996-06-29
AU642282B2 (en) 1993-10-14
ATE136653T1 (de) 1996-04-15
FI913733A7 (fi) 1992-02-08
JPH04252957A (ja) 1992-09-08
AU8152891A (en) 1992-02-13
SG48820A1 (en) 1998-05-18
FI913733A0 (fi) 1991-08-06
DE69118617D1 (de) 1996-05-15
NO913063D0 (no) 1991-08-06
AP9100315A0 (en) 1991-10-31
EP0470810B1 (en) 1996-04-10
OA10036A (en) 1996-10-14
US5627037A (en) 1997-05-06
DE69118617T2 (de) 1996-10-31
NO913063L (no) 1992-02-10
EP0470810A1 (en) 1992-02-12
IE76732B1 (en) 1997-11-05
FI913733L (fi) 1992-02-08
AP266A (en) 1993-06-16
BR9103400A (pt) 1992-05-19
KR920004838A (ko) 1992-03-28
ES2088470T3 (es) 1996-08-16
IE912620A1 (en) 1992-02-12
MX9100553A (es) 1992-04-01

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