JPH07109285A - リムラステスト陽性植物ｌｐｓ、それらを含む免疫機能活性化剤、抗糖尿病剤、鎮痛剤、動物用免疫機能活性化剤、動物用抗糖尿病剤及び動物用鎮痛剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 高い免疫機能活性化能、抗糖尿病効果、鎮痛
効果を有し、副作用が少なく、従って化学治療係数が高
く、長期使用が可能であり、生産コストが安く、しか
も、経口、経皮、注射での投与が可能な、大量に供給可
能な新規なリムラステスト陽性植物ＬＰＳ、及びそれを
含む免疫機能活性化剤、抗糖尿病剤、鎮痛剤、動物用免
疫機能活性化剤、動物用抗糖尿病剤、動物用鎮痛剤を提
供する。 【構成】 次の物性を有するリムラステスト陽性植物Ｌ
ＰＳを特徴とする。 分子量：５，０００±２，０００（ＳＤＳ電気泳動法） ヘキソサミン数：４±１／分子 リン数：１〜２／分子 ＫＤＯ数：１〜２／分子 脂肪酸数：４±１／分子

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、リムラステスト陽性植
物ＬＰＳ（脂質多糖体）に関する。より詳細には、本発
明は、リムラステスト陽性植物ＬＰＳ及びその少なくと
も１種を含む免疫機能活性化剤、抗糖尿病剤、鎮痛剤、
動物用免疫機能活性化剤、動物用抗糖尿病剤、動物用鎮
痛剤等に関する。

【０００２】

【従来の技術】リムラステスト陽性のＬＰＳとしては大
腸菌ＬＰＳ、百日咳菌ＬＰＳ、サルモネラ菌ＬＰＳ等の
菌界源ＬＰＳの存在は知られており、各種実験で利用さ
れているが、毒性が高いために、格別の用途は知られて
いない。そして、リムラステスト陽性植物ＬＰＳについ
てはその存在すら報告されていない。ここで「リムラス
テスト」とは、１９６８年にレヴィン（Ｌｅｖｉｎ）に
より創案された、カブトガニ血球抽出液と発色合成基質
を用いたエンドトキシン定量法である。

【０００３】 生物には、生体の内部環境が外来性及
び内因性の異物によって攪乱されるのを防ぎ、生体の恒
常性を維持するための免疫機能が備わっている。従っ
て、免疫機能の低下は健康の悪化、各種疾病の発病、老
化促進の原因となり、その活性化は健康向上、各種疾病
の発病阻止、治癒、老化防止につながる。このため、免
疫機能を活性化させる物質の提供が要請されており、現
在、ＰＳＫ［別名クレスチン（呉羽化学株式会社の登録
商標）］、レンチナン（味の素株式会社の登録商標）、
ベスタチン（日本化薬株式会社の登録商標）、ソニフィ
ラン（科研製薬株式会社の登録商標）、ＯＫ−４３２
［キャンサー ケモセラピーレポートゥ パートゥ １
（Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ Ｒｅｐ−
ｏｒｔｓ Ｐａｒｔ１）、ｖｏｌ．５８、Ｎｏ．１、１
０頁（１９７２）、別名ピシバニール（中外製薬株式会
社の登録商標）］等が知られている。

【０００４】 糖尿病の治療方法としては、人間の場
合も家畜の場合も食事療法、運動療法、経口血糖降下
剤、インスリン注射療法が病状に応じて適宜組み合わさ
れて用いられている。いずれも体内のインスリン作用が
発揮され、全身の代謝異常が改善され、良好な状態が継
続されることを期待して適用されている。しかし、経口
血糖降下剤はインスリン依存性糖尿病には無効であり、
インスリン非依存性糖尿病で、食事療法と運動療法のみ
では血糖値が十分低下しない場合にのみ適用されてい
る。現在使用されている経口血糖降下剤にはスルホニル
尿素剤（ＳＵ）とビグアナイド剤（ＢＧ）の２種があ
り、ＳＵ剤が主流で、ＢＧ剤は補助的に使用されてい
る。

【０００５】 鎮痛剤は麻薬系鎮痛剤と非麻薬系鎮痛
剤とに大別される。麻薬系鎮痛剤は、麻薬であることか
らして、投与に際しては最大限の注意が必要とされてい
る。（昭和５６年に株式会社メヂカルフレンド社が発行
した「痛みの臨床」の７０〜７４頁） 一方、非麻薬系鎮痛剤の鎮痛作用は一般に麻薬系に比べ
て弱く、非習慣性であることが特徴であるが、長期使用
においては耐性、依存性がみられるなど、薬理学的には
麻薬系鎮痛剤と全く同様に取り扱われるべき薬剤である
と考えるべきとされている。（前掲「痛みの臨床」の７
４頁）

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】 先ず、従来の免疫機能活性化剤のうちで、ＰＳＫ、
レンチナン、ベスタチン、ソニフィランはＴＮＦ産生能
がないので、それらの免疫機能活性化能は低い。一方、
ＯＫ−４３２にはＴＮＦ産生能があるが、大量投与が必
要であることから、発熱、悪寒、血圧低下、血小板減少
等の副作用の発生が避けられず、従って化学療法係数が
小さい。更に、生産工程に、微生物培養と極めて煩雑な
分離、精製とが含まれるために生産コストが高いという
問題点もある。加えて、簡便な経口投与や経皮投与では
効果がないので、投与上の便宜に欠ける。なお、ここ
で、「ＴＮＦ」とは、マクロファージにより産生される
腫瘍障害因子（ＴｕｍｏｒＮｅｃｒｏｓｉｓ Ｆａｃｔ
ｏｒ）の総称［ザ ジャーナル オブ バイオロジカル
ケミストリー（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉ
ｏｌ． Ｃｈｅｍ．、２６０、２３４５〜２３５４頁
（１９８５年）］であり、マクロファージの活性が高ま
るにつれてその産生量は増していく。「マクロファー
ジ」は、免疫担当細胞の一種であり、動物体内のほとん
ど全ての組織に分布し、粒子状の異物や体内の老廃細胞
などを捕食して消化する大型のアメーバ状細胞の総称で
ある。「化学療法係数」は、薬剤に対する宿主の最大耐
量と、病原菌に対する薬剤の最小有効濃度の比をいい、
この値が大きい程すぐれた化学療法剤とされる。

【０００７】 次に、抗糖尿病剤としてのＳＵ剤に
は、重篤かつ遷延性の低血糖症を惹起するという重大な
問題点があり、しかも、この低血糖症は過剰投与のみな
らず、不規則な食事、運動、肝臓障害、腎臓障害、他剤
との併用によっても引き起こされるので、使用が極めて
困難である。加えて、胃腸障害、肝機能障害、肝性ポル
フィリン症、過敏症状、血液疾患等の副作用がある［１
９８６年に廣川書店から発行された、日本公定書協会監
修の「第１１改正日本薬局方解説書」のＣ−６９〜Ｃ−
７０頁］。又、犬の糖尿病にはほとんど無効であり、し
かも犬に対しては肝毒性が強い［１９８９年に養賢堂か
ら出版された吐山豊秋著「家畜薬理学」の２４８頁］。
ＢＧ剤はＳＵ剤の効果が不十分な場合や、副作用のため
にＳＵ剤が使用できない場合や、インスリン療法が不可
能な場合に限って使用されている薬剤である。これは、
ＢＧが乳酸アシドーシスという重篤な合併症を引き起こ
すことがあるので、その使用に厳しい制限がつけられて
いることによる。［１９８６年に講談社から発行され
た、日本糖尿病学会編集の「糖尿病の臨床」の７１〜１
３１頁］。又、ＢＧ剤は人間のみに投与されている［前
掲の「家畜薬理学」の２４８頁］。

【０００８】 更に、現在使用されている鎮痛剤には
前記の通り欠点があり、未だ満足すべきものは提供され
ていない。特に、慢性痛に対する鎮痛剤として、安全性
が高く、副作用がなく、安価で投与方法が簡便な薬剤の
開発が強く待たれている。

【０００９】本発明は、前記各従来技術の諸欠点が解消
された、高い免疫機能活性化能、抗糖尿病効果、鎮痛効
果を有し、副作用が少なく、従って化学治療係数が高
く、長期使用が可能であり、経口、経皮、注射での投与
も可能であり、しかも、生産コストが安く、大量に供給
可能な新規なリムラステスト陽性植物ＬＰＳ及びそれが
配合された免疫機能活性化剤、抗糖尿病剤、鎮痛剤、動
物用免疫機能活性化剤、動物用抗糖尿病剤、動物用鎮痛
剤を提供することを技述的課題とするものである。

【００１０】

【課題を解決するための手段】前記技述的課題は、高い
免疫機能活性化能、抗糖尿病効果、鎮痛効果を有し、副
作用が少なく、従って化学治療係数が高く、長期使用が
可能であり、経口、経皮、注射での投与も可能であり、
しかも、生産コストが安く、大量に供給可能な本発明の
リムラステスト陽性植物ＬＰＳ、及び、本発明のリムラ
ステスト陽性植物ＬＰＳの少なくとも１種を含む免疫機
能活性化剤、抗糖尿病剤、鎮痛剤、動物用免疫機能活性
化剤、動物用抗糖尿病剤、動物用鎮痛剤によって達成で
きる。なお、ここで、「少なくとも１種を含む」とは、
本発明のリムラステスト陽性植物ＬＰＳは各別に使用で
きることはもちろん、その意図される用途が阻害されな
い限り、それらの２種以上を任意に組み合わせて、又、
更には他のいずれの物質とも組み合わせて使用できるこ
とを意味する。

【００１１】また、本発明のリムラステスト陽性植物Ｌ
ＰＳは、免疫機能検査薬、動物用免疫機能検査薬、医薬
部外品、化粧品、食品、機能性食品、飲料、飼料等にも
用いることができる。

【００１２】本発明のリムラステスト陽性植物ＬＰＳと
は、次の物性により特定されるリムラステスト陽性植物
ＬＰＳである。 分子量：５，０００±２，０００（ＳＤＳ電気泳動法） ヘキソサミン数：４±１／分子 リン数：１〜２／分子 ＫＤＯ数：１〜２／分子 脂肪酸数：４±１／分子

【００１３】本発明で使用できる原料植物は、リムラス
テストで陽性を示す成分を含むものならばいずれでもよ
い。採取源は、本明細書において名称をあげて特定され
たものに限定されることはない。又、その採取源の成
長、保存、流通の過程で付着、共存する細菌その他の全
てのものが含まれる。例えば、「小麦」と特定された場
合には、小麦そのもののみならず、小麦の成長、保存、
流通の過程で付着、共存する細菌その他の全てのものが
含まれるものと理解されたい。なぜならば、特に寄生植
物、寄生動物という関係が解明されているもの以外に
も、特定の植物、動物、菌界生物、地衣界生物に、それ
らにより付着、共存を許されたものが棲息している例が
多く存在し得ることは当業界で良く知られていることで
あるからである。

【００１４】原料植物として使用できるものを下記に例
示する。なお、本明細書に記載した植物が帰属する科
名、属名は、次の文献の記載を照合して決定された。裸
子植物、単子葉類、双子葉類、シダ植物、ソウ類：昭和
５７年（正編）、昭和５８年（続編）に北隆館から発行
された「原色牧野植物大図鑑」の記載を照合して所属を
決定した。但し、「燕麦」は、昭和４５年に女子栄養大
学出版部から発行された「食用植物図説」と、昭和５８
年に至文堂から発行された「新日本植物誌顕花篇」の記
載を照合し、「裸麦」は、昭和４６年に東京同文書院か
ら発行された「総合食品事典」の記載を照合し、「鳩
麦」、「カラスビシャク」、「ジャノヒゲ」、「ウコ
ン」、「マタタビ」、「アマチャヅル」、「ドクダ
ミ」、「胡椒」、「トウガラシ」、「ダイウイキョ
ウ」、「ダイダイ」、「クズ」、「ナンキンカンゾ
ウ」、「オタネニンジン」、「ボウフウ」、「オオツヅ
ラフジ」、「ウンカリア・ヒルスタ」は、昭和６３年に
北隆館から発行された「原色牧野和漢薬草大図鑑」の記
載を照合し、「アボガド」は、昭和５３年に財団法人農
林統計協会から発行された熱帯農業技術叢書第１５号
「ブラジルの果実」の記載を照合し、「カイワレダイコ
ン」は、昭和５９年に北隆館から発行された「原色園芸
植物大図鑑」の記載を照合し、「ニクズク」は、昭和４
４年に廣川書店から発行された「図説熱帯植物集成」の
記載を照合し、「クロレラ」は、財団法人日本健康食品
協会が昭和６１年に公示した、「クロレラ規格基準」の
記載を照合して所属を決定した。 菌類：昭和６２年に保育社から発行された「原色日本新
菌類図鑑」の記載を照合して所属を決定した。但し、酵
母は、昭和３７年に技報堂から発行された「微生物学ハ
ンドブック」の記載を照合し、「冬虫夏草」は、前掲の
「原色牧野和漢薬草大図鑑」の記載を照合して所属を決
定した。本発明で使用できる原料植物は、例えば、裸子
植物、単子葉類、双子葉類、シダ植物、ソウ類、菌類の
植物であり、これらは個別に或は混合して使用できる。
裸子植物としては、例えば、マツ科マツ属植物であるマ
ツを使用できる。単子葉類植物としては、例えば、イネ
科イネ属植物であるイネ、イネ科コムギ属植物である小
麦、イネ科オオムギ属植物である大麦、裸麦、イネ科カ
ラス麦属植物である烏麦、燕麦、イネ科ササ属植物であ
るクサ笹、イネ科ジュズダマ属植物である鳩麦、アヤメ
科アヤメ属植物であるアヤメ、ユリ科ネギ属植物である
ニンニク、ユリ科キジカクシ属植物であるアスパラガ
ス、ユリ科ジャノヒゲ属植物であるジャノヒゲ、ショウ
ガ科ショウガ属植物であるミョウガ、ショウガ科ウコン
属植物であるウコン、サトイモ科ハンゲ属植物であるカ
ラスビシャクを使用できる。双子葉類植物としては、マ
メ科ダイズ属植物である大豆、マメ科インゲンマメ属植
物である小豆、マメ科ソラマメ属植物であるそら豆、マ
メ科クズ属植物であるクズ、マメ科カンゾウ属植物であ
るナンキンカンゾウ、ナス科ナス属植物であるジャガイ
モ、トウガラシ、ナス科トマト属植物であるトマト、ナ
ス科トウガラシ属植物であるトウガラシ、バラ科ビワ属
植物であるビワ、バラ科サクラ属植物であるモモ、クス
ノキ科アボガド属植物であるアボガド、クルミ科クルミ
属植物であるクルミ、ウリ科トウナス属植物であるカボ
チャ、ウリ科アマチャヅル属植物であるアマチャヅル、
アブラナ科ダイコン属植物であるカイワレダイコン、マ
タタビ科マタタビ属植物であるマタタビ、ドクダミ科ド
クダミ属植物であるドクダミ、コショウ科コショウ属植
物である胡淑、シキミ科シキミ属植物であるダイウイキ
ョウ、ニクズク科ニクズク属植物であるニクズク、ミカ
ン科ミカン属植物であるダイダイ、ウコギ科オタネニン
ジン属植物であるオタネニンジン、セリ科サポシュニコ
ビア属植物であるボウフウ、ツヅラフジ科オオツヅラフ
ジ属植物であるオオツヅラフジ、アカネ科カギカズラ属
植物であるウンカリア・ヒルスタを使用できる。シダ植
物としては、例えば、トクサ科トクサ属植物であるスギ
ナ、ゼンマイ科ゼンマイ属植物であるゼンマイを使用で
きる。ソウ類植物としては、例えば、カッソウ類、紅ソ
ウ類、緑ソウ類、ランソウ類を使用できる。カッソウ類
植物としては、例えば、コンブ科ワカメ属植物であるワ
カメ、コンブ科コンブ属植物であるコンブ、ホンダワラ
科ヒジキ属植物であるヒジキを使用できる。紅ソウ類植
物としては、例えば、ウシケノリ科アマノリ属植物であ
るアサクサノリを使用できる。緑ソウ類植物としては、
例えば、オオシスティス科クロレラ属植物であるクロレ
ラを使用できる。菌類植物としては、例えば、担子菌類
植物、子ノウ菌類植物を使用できる。担子菌類植物とし
ては、例えば、ヒラタケ科マツオウジ属植物である椎
茸、キシメジ科エノキタケ属植物であるエノキ茸、キシ
メジ科シメジ属植物であるシメジ、タコウキン科マイタ
ケ属植物であるマイ茸、サルノコシカケ科ポリポラス属
植物であるアワビ茸、ハラタケ科ハラタケ属植物である
マッシュルーム、キクラゲ科キクラゲ属植物であるキク
ラゲ、モエギタケ科スギタケ属植物であるナメコを使用
できる。子ノウ菌類植物としては、例えば、エンドミセ
タセア科サッカロミセス属植物であるパン酵母、醸造用
酵母を使用できる。醸造用酵母にはビール酵母、清酒酵
母、葡萄酒酵母、醤油酵母、味噌酵母等の他、サッカロ
ミセス セレヴィシドに属する多くの酵母（例えば、ウ
イスキーや老酒の製造に使用される酵母）が含まれる。
又、バッカクキン科ノムシタケ属植物である冬虫夏草も
使用できる。

【００１５】以上に述べた原料植物中の本発明のリムラ
ステスト陽性植物ＬＰＳの検出、含量測定は、例えば、
生化学工業株式会社からエンドスペシーという名称で市
販されている試薬セットを使用して実施できる。即ち、
原料植物を同エンドスペシーと合わせて発色させ、その
発色の強さを、同じく同社の市販品であるトキシカラー
システムのＥｔ−２セットを使用して作成した検量線と
対比させればよい。

【００１６】又、本発明のリムラステスト陽性植物ＬＰ
Ｓは、以下に述べる方法で分離、精製できる。 （１）原料植物を必要に応じて適宜細切、乾燥、粉砕し
た後に蒸留水によく懸濁し、上清を回収する。例えば、
原料植物が穀類の種子である場合は、種皮をつけたま
ま、或は、種皮を除いた後に簡単に砕くか、又は、食用
に供せられている程度の粉末になるまで粉砕し、得られ
た粉末に水を加えて分散液とし、攪拌した後に沈降物を
静置又は遠心分離により除去するか、粉末に水を加えて
練って得られるドウをミキサー中でゆるやかに水洗し、
沈降物を除去すればよい。この抽出操作の際の種子の粒
度、水の温度、液性、添加量、攪拌の速度、時間遠心分
離の際の条件等は特に制限する必要はない。しかし、便
宜上、抽出水の温度は、穀類種子に含まれる澱粉の糊化
を招来しない５０℃以下とすることが好ましい。又、水
の添加量は、穀類の種類、粒度により異なるが、穀類種
子の割合が７０ｗ／ｖ％以下、望ましくは２０〜５０ｗ
／ｖ％程度とすると操作上便宜である。更に、攪拌の速
度は、起泡を引き起こさない程度のものとすることが好
ましい。 （２）所望ならば、夾雑物を除去して純度を上げるため
に、上記（１）で得られた上清を、約８，０００〜２
０，０００Ｇ、２時間での高速連続遠心分離にかけるこ
ともできる。 （３）高速連続遠心分離を経た、或は経ない上記（１）
からの上清を常法に従って限外ろ過で濃縮する。 （４）なお、限外ろ過で得られた濃縮液を、所望なら
ば、常法に従ってゲル濾過に付して処理することもでき
る。ゲル濾過用の担体としては、例えば、セファデック
ス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）Ｇ−７５、Ｇ−１００、セファ
クリル（Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ）Ｓ−２００、セファロー
ス（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）６Ｂ［以上は米国ファルマシ
ア社（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｉｎｃ．）製］、バイオゲ
ル（Ｂｉｏｇｅｌ）Ｐ−１００［バイオラッド（Ｂｉｏ
ｒａｄ Ｉｎｃ．）社製］、トーヨーパールＨＷ−５
０、ＨＷ−５５（東洋曹達工業社製）等を使用できる。
緩衝液はｐＨ３〜１０のものならいずれでもよい。例え
ば、トリス−ＨＣｌ又はリン酸緩衝液を使用できる。 （５）又、所望ならば、上記（１）、（３）或は（４）
の上清或は濃縮液に、或はそれらの希釈液に蛋白分解酵
素を加え、３７℃で２時間以上インキュベーションして
残存蛋白質を分解し、得られた酵素処理液を常法に従っ
て限外ろ過により濃縮することもできる。なお、この際
に使用する蛋白分解酵素は特定なものである必要はな
く、例えば、Ｖ８プロテアーゼ、キモトリプシン、トリ
プシン、サーモライシンを単独で、或は任意に組み合わ
せて使用できる。市販品としては、例えば、プロナーゼ
Ｅ（科研化学社）、プロティネースＫ（メルク社）を使
用できる。 （６）更に、所望ならば、上記（５）で得られるリムラ
ステスト陽性画分を常法に従って、例えば、ファルマシ
ア社製のＦＰＬＣシステムでファルマシア社製のモノＱ
−セファロース（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）、Ｑ−セファロ
ース（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）を使用しての陰イオン交換
クロマトグラフィーに付して処理することもできる。 （７）又、所望ならば、常法に従って脱塩のためにゲル
濾過に付してもよい。以上の操作の組合せにより、例え
ば小麦種子の場合には、当初活性の約２０％が回収さ
れ、純度約９５％の精製標品が得られ、又、段階（１）
終了時の純度に比べ約３０万倍の純度（小麦種子の場
合）に達することもできる。又、小麦の場合には、上記
（１）〜（３）の工程のみにより当初活性の約５０％以
上が回収される。

【００１７】後述の実施例中で詳述する通り、本発明の
リムラス陽性植物ＬＰＳの９７％純度標品の分子量はお
よそ５，０００±２，０００（ＳＤＳ電気泳動法）、ヘ
キソサミン数は４±１／分子、リン数は１〜２／分子、
ＫＤＯ（２−ケト−３−デオキシオクトネート）数は１
〜２／分子、脂肪酸数は４±１／分子であった。

【００１８】本発明のリムラステスト陽性植物ＬＰＳは
そのまま、或いは任意の程度に濃縮した形で提供でき
る。又、保存性を高めるために、凍結乾燥や噴霧乾燥な
どの任意の手段により乾燥粉末として提供することもで
きる。これらはいずれも常法によることができる。

【００１９】本発明のリムラステスト陽性植物ＬＰＳは
免疫機能活性化能、抗糖尿病効果、鎮痛効果を有する。 本発明のリムラステスト陽性植物ＬＰＳの免疫機能
活性化能は、マクロファージ活性を通じての内因性ＴＮ
Ｆ産生促進能により確認できる。動物体内にＴＮＦを産
生させるためには、産生前駆（プライミング）段階と産
生開始（トリガリング）段階とが必要であることは、カ
ーズウェル（Ｃａｒｓ−ｗｅｌｌ）らにより、プロシー
ディング オブ ナショナル アカデミー サイエンス
オブ ユーエスエー（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．）７２、３６６６〜３６７０頁
（１９７５年）に報告されている。プライミング段階開
始のために投与される薬剤が「プライマー」（内因性Ｔ
ＮＦ産生促進剤）であり、トリガリング段階開始のため
に投与される薬剤が「トリガー」（内因性ＴＮＦ産生
剤）である。本発明のリムラステスト陽性植物ＬＰＳ
は、既にその有用性が確立されているピシバニールと同
程度にプライマーとして機能する。ＴＮＦ活性は、Ｌ−
９２９細胞［プロシーディング オブ ナショナル ア
カデミー サイエンス オブ ユーエスエー７２、３６
６６〜３６７０頁］に対する細胞毒性を基にして、次の
ようにして測定する。Ｌ９２９細胞を、５％仔牛胎児血
清を加えたイーグルミニマムエッセンシャル培地（以
下、ＭＥＭ培地と表す）で育成し、８×１０^４個の細胞
が１００μｌの同上培地に含まれる様にし、９６穴の平
底プレートで育種する。育種条件は３７℃、２時間、５
％ＣＯ_２、１００％Ｈ_２Ｏであり、通常の細胞培養に用
いられる方法でよい。その後、アクチノマイシンＤを培
地中に終濃度１μｇ／ｍｌとなるように加え、培養液の
液量を１５０μｌとする。即座に、検体を適当にＭＥＭ
培地で稀釈したものを５０μｌ加える（この際稀釈率を
適宜調製し、ＥＤ５０を求める事ができる）。更に、最
終液量２００μｌとなったＬ９２９細胞を上記条件で１
８時間培養する。細胞障害活性を測定するには、まず全
培地を除去し、ついで０．１％クリスタルバイオレット
を含む１％メチルアルコール溶液を加えて固定染色す
る。クリスタルバイオレットは全有核細胞を染色する
が、死細胞は染色後にプレート底面より水洗で除去され
るので、生存細胞の結果から細胞障害活性を直接測定で
きる。この染色度をＯＤ（５９０ｎｍ）での吸光度を指
標として測定し、対照群に対する染色度と比較する事で
細胞障害活性を測定する。活性の定義は次の様に行う。
Ｌ９２９細胞が５０％生存できる検体の稀釈率（Ｎ）を
求める。対照としてウサギＴＮＳ［腫瘍障害血清（Ｔｕ
ｍｏｒ Ｎｅｃｒｏｓｉｓ Ｓｅｒｕｍ）］を使用し、
このウサギＴＮＳの活性ｎ（単位／ｍｌ）を２．４×１
０^６単位／ｍｇ／ｍｌのＴＮＦ−αを用いて決定する。
このウサギＴＮＳのＥＤ５０を与える稀釈率（Ｃ）を求
める。検体活性（単位／ｍｌ）はＮ／Ｃ×ｎで計算す
る。

【００２０】 本発明のリムラステスト陽性植物ＬＰ
Ｓの抗糖尿病効果は、Ｉ型糖尿病のモデル動物であるＮ
ＯＤマウス（ソフトサイエンス社発行、京極方久編「難
病疾患のモデルと動物実験」１４０〜１４８頁、１９８
４年）に投与したときの抗糖尿効果により確認できる。

【００２１】 本発明のリムラステスト陽性植物ＬＰ
Ｓの鎮痛効果は、非麻薬系鎮痛剤検定法の１つとして確
立されている「酢酸−ライズィング（Ｗｒｉｔｈｉｎ
ｇ）法」（１９８２年に医歯薬出版株式会社から発行さ
れた「炎症と抗炎症療法」の４１５頁）による動物実験
により確認できる。

【００２２】本発明のリムラステスト陽性植物ＬＰＳを
含む免疫機能活性化剤等のいずれもが常法の製剤技術或
は動物薬製造の常法により、経口薬として、或いは静注
薬、筋注薬、経皮薬として単独で、或いは他薬との配合
物として、散剤、顆粒剤、丸剤、錠剤、トローチ剤、カ
プセル剤、液剤、貼付剤、軟膏剤、リニメント剤、ロー
ション剤、坐剤、注射剤等の形態で提供できる。又、動
物用としては、更に、飼料添加剤、プレミックス製剤、
飲水添加剤として調製することもできる。飼料添加剤と
する場合には、粉剤か顆粒剤とすることが好ましい。
又、プレミックス製剤とは、飼料との混合を容易にする
ために澱粉などの飼料成分で希釈されたものを指す。本
発明のリムラステスト陽性植物ＬＰＳを含む飼料添加
剤、プレミックス製剤を添加できる飼料は市販されてい
る飼料のいずれでもよい。又、ミネラル、ビタミン、ア
ミノ酸等の飼料添加物を含む飼料であってもよい。これ
ら製剤には、所望ならば、保存性、均質性を保持するた
めに、常法に従って、賦形剤、保存剤、緩衝剤等の添加
剤を加えることもできる。更に、矯味剤、矯臭剤、着色
剤を含めることもできる。賦形剤としては、例えば、乳
糖、デンプンを使用できる。保存剤としては、例えば、
パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチ
ル、パラオキシ安息香酸プロピル等のパラオキシ安息香
酸エステル類、デヒドロ酢酸ナトリウム、フェノール、
メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン等
を使用できる。緩衝剤としては、例えば、クエン酸塩、
酢酸塩、リン酸塩等が使用できる。以下、実験例、実施
例により、本発明を更に詳細に説明する。

【００２３】実験例１（リムラステスト陽性植物ＬＰＳ
の定量） リムラステスト陽性植物ＬＰＳの定量を、生化学工業株
式会社より市販されているエンドスペシーとＥｔ−２セ
ットを使って行なった。得られた結果の一部を表１に示
す。表中、ＬＰＳ量は大腸菌ＬＰＳ（ディフコ社製の大
腸菌０１２７：Ｂ８ＬＰＳを使用）換算量である（明細
書の他の記載においても同様とする）。又、表中の試料
の欄の会社名、地名等は、当該試料の入手先、産地をさ
す。かかる記載がない品はスーパーストアー忠実屋の神
奈川県津久井郡中野町店で購入した品で、製造者が不明
なものを指す。

【００２４】表１

【表１】

【００２５】

【実施例】 実施例１ （１）１６０リットル容ミキサーに硬質小麦粉（アメリ
カ又はカナダ産のハードレットスプリング）３０ｋｇと
８０リットルの冷水（２〜４℃）を入れて３０分間混合
した。 （２）次いで、４℃で遠心分離操作（５，０００Ｇ×１
２０分）に付して上清５６リットルを回収した。 （３）この上清を更に９，０００Ｇで２時間遠心分離操
作に付して、上清４６リットルを回収した。この上清
を、実験例１に記載した方法に準拠してリムラステスト
に付したら１．０μｇ／ｍｌのＬＰＳが検出された。 （４）ＬＰＳは会合して見掛け分子量は５０，０００以
上になっていると推定されたので、上記上清を限外瀘過
に付して分子量５０，０００以下の成分を除去した。リ
ムラステストにより排液のＬＰＳ含量を調べたらわずか
５ｎｇ／ｍｌであり、上記推定が正しいことが裏付けら
れた。 （５）得られた濃縮液１７リットルを恒量になるまで凍
結乾燥して、乾燥粉末標品（以下、標品Ａと称す）０．
６２ｋｇを得た。 リムラステストで調べたら、原料小麦粉３０ｋｇのＬＰ
Ｓ含量は２．８μｇ／ｇであり、標品Ａ（０．６２ｋ
ｇ）のＬＰＳ含量は７０μｇ／ｇであった。従って、こ
の段階でのＬＰＳの回収率は５１．７％と計算される。

【００２６】（６）物性を測定するため、上記方法を繰
り返して標品Ａを１，０００ｇ集め、以下の工程で更に
処理した。 標品Ａ（１，０００ｇ）を２０リットル容プラスチ
ック容器に入れ、１０リットルの蒸留水を注いで１００
ｍｇ／ｍｌ濃度とし、６０分間スターラーで攪拌した
後、日立冷却高速遠心機ＳＣＲ−２０Ｂ（ローターＲＰ
Ｒ９を事前に４℃に冷却しておいた）で４℃で遠心分離
操作（６，０００Ｇ×１０分）に付して上清を回収し
た。この上清を５リットル三角フラスコに入れ、氷冷下
（液温約２℃）、スターラーで攪拌しながら、事前に２
℃に冷却してあった１００％ＴＣＡ水溶液２４０ｍｌを
滴下し、滴下終了後氷水中に１０分間放置した。 次いで、前記と同様にして４℃で遠心分離操作
（６，０００Ｇ×１５分）に付して沈殿を回収し、氷水
中で冷却下、３００ｍｌの蒸留水と共に５００ｍｌ容ビ
ーカーに入れて懸濁し、氷水中で冷却し、前記と同様に
して４℃で遠心分離操作（６，０００ｇ×１５分）に付
して沈殿を回収した。 この沈殿を１リットル容ビーカーに入れ、蒸留水５
００ｍｌで懸濁し、１Ｎ水酸化ナトリウム溶液約３．５
ｍｌを使用して中和（ｐＨ７）し、ついで、氷水中で冷
却しながら、１Ｎ水酸化ナトリウム溶液約２ｍｌを添加
して０．０２Ｎ水酸化ナトリウム溶液になるようにして
沈殿を溶解した。 １Ｎ塩酸約１．５ｍｌを加えてｐＨ８とし、次いで
１００ｍｌの蒸留水を加えた後に１リットル容三角フラ
スコに移し、３７℃のインキュベーター内で３０分間ゆ
っくり振盪した。次いで、１００％ＴＣＡ水溶液３０ｍ
ｌを加えて混合した後、３７℃のインキュベーター内で
１０分間ゆっくり振盪してから、約３７℃に保温した遠
心分離器トミーＣＤ１００Ｒ（トミー精器社製）を使用
して遠心分離操作（３，０００Ｇ×１０分）に付した。
上清を回収して氷冷し、４℃で遠心分離操作（１０，０
００Ｇ×１０分）に付した。上清を回収して１０Ｎ水酸
化ナトリウム溶液約３．６ｍｌで中和してｐＨ７とし、
限外濾過器（東洋濾紙ＵＨＰ−１５０、フィルター：Ｕ
Ｋ−１０、Ｎ_２圧：４．０ｋｇ／ｃｍ^２）で濃縮した。 得られた濃縮液７０ｍｌを、セファロース（Ｓｅｐ
ｈａｒｏｓｅ）６Ｂカラム［米国ファルマシア社（Ｐｈ
ａｒｍａｃｉａ Ｉｎｃ．）製、カラムサイズ：５ｃｍ
（内径）×９０ｃｍ（２リットル）］を使い、ゲル濾過
［緩衝液：１０ｍＭトリス−ＨＣｌ／１０ｍＭＮａＣｌ
（ｐＨ７．５）、流速：６０ｍｌ／時］に付して、各２
０ｍｌの画分を得た。 初めから３０番目から５５番目迄の画分２８０ｍｌ
を併せ、プロナーゼＥ（科研化学社）４５０μｇを加
え、振盪下、３７℃に２時間保温した後に、限外濾過器
（東洋濾紙ＵＨＰ−６２、フィルター：ＵＫ−１０、Ｎ
_２圧：４．０ｋｇ／ｃｍ^２）で濃縮した。次いで、ファ
ルマシア社製ＦＰＬＣシステム（カラム：モノＱＨＲ１
０／１０）を使って陰イオン交換クロマトグラフィーに
付した。即ち、１０ｍＭトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）
と１０ｍＭのＮａＣｌを含む緩衝液で試料をカラムに付
した後、上記緩衝液でＮａＣｌ量が１６５ｍＭに増加さ
れた組成を持つ緩衝液（２００ｍｌ）でカラムを洗っ
た。次いで、ＮａＣｌ濃度を、１６５ｍＭから１ＭのＮ
ａＣｌ濃度勾配になるように増加させながら全量４００
ｍｌで目的ＬＰＳを溶出させ、各２ｍｌの画分を回収し
た。リムラステスト陽性が確認された、濃度勾配をかけ
てから５〜８番目の画分を併せて、ＬＰＳ純度約９２％
の８ｍｌ（ＬＰＳ：５ｍｇ）を回収した。 次いで、その８ｍｌを、セファデックス（Ｓｅｐｈ
ａｄｅｘ）Ｇ−２５［カラム：２．０ｃｍ（内径）×２
０．２ｃｍ（６６ｍｌ）］を使ってゲル濾過（緩衝液：
水）に付して各３ｍｌの画分を回収した。リムラステス
ト陽性の確認された第９〜１２番目の画分を併せ、１２
ｍｌ（ＬＰＳ：３．５ｍｇ）を回収した。次いで、−８
０℃で凍結後に恒量になるまで凍結乾燥し、重量を測定
したら３．０５ｍｇあった。以下、この凍結乾燥標品を
標品Ｂと称する。 標品Ｂのリムラス活性を実験例１記載の方法で測定
したら３．７ｍｇに相当するので、その比活性は、３．
７÷３．０５＝１．２ になる。又、夾雑物として存在
し得る単独の糖は、以上の精製により実質上全て除去さ
れたと考えられるので、検出される糖は全て、小麦ＬＰ
Ｓを構成する糖と考えられる。従って、この段階での小
麦ＬＰＳの純度を重量に基づいて計算すると、蛋白＝
０．１ｍｇ、ＬＰＳ＝３．０５−０．１＝２．９５ｍｇ
だから、２．９５÷３．０５×１００＝９７（％）で
ある。なお、糖はフェノール−硫酸法で、蛋白はローリ
ー法で測定した。

【００２７】（７）９７％精製標品である標品Ｂの物性
は次の通りにして測定した。分子量 標品Ｂを蒸留水に溶解して２ｍｇ／ｍｌ溶液を調製し、
その１０μｌを１．５ｍｌ容プラスチックチューブに入
れた。これに、別途、１８０μｌの１０％（ｗ／ｖ）Ｓ
ＤＳ、４５μｌの５％β−メルカプトエタノール、９０
μｌのＣＢＢ色素溶液、１１２．５μｌの０．５Ｍトリ
ス塩酸（ｐＨ６．８）及び２２．５μｌの蒸留水を加え
て調製したＳＤＳ処理液１０μｌを加えてよく混合し、
次いで５分間沸騰水浴中に浸した。この加熱後直ちに氷
水中に浸して急冷した。１０ｍｌの１０％（ｗ／ｖ）Ｓ
ＤＳ、１７．９ｇのトリシン及び３．０３ｇのトリスを
１リットルの蒸留水に溶解して調製した泳動緩衝液をマ
リソル社製のスラブゲル電気泳動槽に入れた。２０％ポ
リアクリルアミドゲルを泳動槽に固定し、サンプル溝に
検体を入れ、電圧を５０ｖに１時間、次いで、１５０ｖ
に固定して、色素がゲルより溶出するまで泳動を続け
た。泳動終了後に、バイオラッド社の銀染色キット１６
１−０４４３を使い銀染色を室温で行って、挙動を確認
した。同時に泳動させた蛋白分子量マーカー［ファルマ
シア社製のＬＭＷキットＥ：ホスホリラーゼｂ（９４
ｋ）、アルブミン（６７ｋ）、オブアルブミン（４３
ｋ）、カーボニックアンヒドラーゼ（３０ｋ）、トリプ
シンインヒビター（２０ｋ）、α−ラクトアルブミン
（１４ｋ）］、ペプチド分子量マーカー［ファルマシア
社製の１８６０−１０１分子量マーカー：ミオグロビン
（１６．９ｋ）、ミオグロビンＩ＆ＩＩ（１４．４
ｋ）、ミオグロビンＩ（８．２ｋ）、ミオグロビンＩＩ
（６．０ｋ）、ミオグロビンＩＶ（２．５ｋ）］の泳動
位置から本発明のＬＰＳの分子量を計算したら、５，０
００±２，０００であった。同様にして測定された大腸
菌ＬＰＳ（ディフコ社製の大腸菌０１２７：Ｂ８ＬＰ
Ｓ）の分子量は３０，０００±２０，０００であった。
上記銀染色における本発明の植物ＬＰＳ及び大腸菌ＬＰ
Ｓの染色帯を、図１に示す。図１において、番号１が大
腸菌ＬＰＳの、番号２が本発明の植物ＬＰＳの染色帯で
ある。

【００２８】ヘキソサミン数 エルソン−モルガン（Ｅｌｓｏｎ−Ｍｏｒｇａｎ）法
（東京化学同人出版「生化学実験講座」Ｎｏ．４の３７
７〜３７９頁）に準拠して次の通りに行った。上記精製
品を蒸留水に溶解して１ｍｇ／ｍｌの溶液を調製し、そ
の１００μｌをスクリューキャップ付きスピッツ（イワ
キガラス社製）に入れ、これに１００μｌの８ＮＨＣｌ
を添加して１１０℃で１６時間加熱した。４ＮＮａＯＨ
を約２００μｌ添加してｐＨ７とした。その１００μｌ
を分取し、別のスクリューキャップ付きスピッツに入
れ、２００μｌの下記試薬Ａを加えた後に、１０５℃で
１．５時間加熱し、次いで流水で冷却した。次いで、１
００μｌを分取し、６７０μｌの９６％エタノールを加
え、更に、６７μｌの下記試薬Ｂを加えた後に室温で１
時間放置し、５３５ｎｍで吸光度を測定した。検量線作
製用試料としては０．２０〜２００μｇ／ｍｌのＮ−ア
セチル グルコサミン（和光純薬社製）を使用した。 （試薬Ａ）７５μｌのアセチルアセトンと２．５ｍｌの
１．２５Ｎ炭酸ナトリウムを混合して調製 （試薬Ｂ）１．６ｇのｐ−ジメチルベンズアルデヒドと
３０ｍｌの濃塩酸と３０ｍｌの９６％エタノールを混合
して調製 結果、本発明のＬＰＳのヘキソサミン数は６±２／分子
（仮定分子量５，０００）だった。同様にして測定され
た大腸菌ＬＰＳ（ディフコ社製の大腸菌０１２７：Ｂ８
ＬＰＳ）（仮定分子量３０，０００）の分子量５，００
０のヘキソサミン数は８だった。

【００２９】リン数 チェン−トリバラ（Ｃｈｅｎ−Ｔｏｒｉｂａｒａ）法
［チェン等著、「アナリティカル ケミストリ（Ａｎａ
ｌｙｔｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、ｖｏｌ．２
８、１７５６〜１７５８頁（１９５６年）に準拠して次
の通りに行った。上記精製品を蒸留水に溶解して、２８
μｇの上記精製品を含む２０μｌの溶液を調製し、小試
験管に入れた。２０μｌの５０ｖ／ｖ％硫酸を添加し、
１６０℃で２時間加熱した。次いで、２０μｌの１０ｖ
／ｖ％過塩素酸を添加した後にガスバーナーで１分間加
熱して灰化させた。その後に０．５ｍｌの蒸留水、次い
で０．５ｍｌの反応試薬（１ｍｌの６Ｎ硫酸、２ｍｌの
蒸留水、２ｍｌの２．５ｖ／ｗ％モリブデン酸アンモニ
ウム及び１ｍｌの１０ｖ／ｗ％のアスコルビン酸を混合
して調製し、その０．５ｍｌを使用）を添加して室温で
３０分間放置した後に、８２０ｎｍでの吸光度ＯＤ（８
２０ｎｍ）を測定した。なお、検量線作製用の試料とし
ては、リン酸二水素カリウム（和光純薬社製）を蒸留水
で希釈し、リン重量としてそれぞれ２．５μｇ、１μ
ｇ、０．２５μｇ、０μｇを含む０．５ｍｌの溶液を調
製して使用した。なお、リン１ｇはリン酸二水素カリウ
ム４．３９ｇに相当する。得られた結果を表２に示す。
なお、表中の標品Ｂのデータは、無機リンの混入（例え
ば、リン酸緩衝液に由来する）による誤差を避けるた
め、加熱処理をしていない対照のデータを減じた値であ
る。

【表２】

【００３０】本発明のＬＰＳの分子量を５，０００と仮
定し、表２の結果に基づいてその１分子当たりのリン数
を次式により計算すると１〜２になった。リン数が１〜
２と変動している原因の１つとしては、精製段階でのモ
ノフォスフォエステラーゼの混入により、リン酸が脱離
したことも考えられる。

【数１】

【００３１】同様にして求められた大腸菌ＬＰＳ（分子
量は３０，０００と仮定）の分子量５，０００換算のリ
ン数は２であった。

【００３２】ＫＤＯ数 ＫＤＯ（２−ケト−３−デオキシオクトネート）数をジ
フェニルアミン法［シャビ アール（Ｓｈａｂｙ
Ｒ．）等著、アナリティカル バイオケム（Ａｎａｌｙ
ｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ．）、５８（１）、１２３
〜１２９頁（１９７４年）］に準拠して次の通りに行っ
た。５００ｍｇのジフェニルアミン、５ｍｌのエタノー
ル、４５ｍｌの氷酢酸、５０ｍｌの濃塩酸（全て和光純
薬社製）を合わせてＫＤＯ検出試薬を調製した。その５
００μｌに、１．０５ｍｇ／ｍｌの上記精製品を含む蒸
留水２５０μｌを合わせ、１００℃の沸騰水浴中で３０
分間加熱後に冷水（２３℃）中で３０分間冷却し、次い
で、日立分光光度計３２０を使って４２０、４７０、６
３０、６５０ｎｍでの紫外部吸収を測定した。測定値を
それぞれ、Ａ（４２０）、Ａ（４７０）、Ａ（６３
０）、Ａ（６５０）とする。標準試料としては、１２７
μｇ／ｍｌのＫＤＯアンモニウム塩［米国シグマ（Ｓｉ
ｇｍａ）社製］を含む蒸留水２５０μｌを使用した。検
体試料、標準試料それぞれについて、次式の値を求め
た。 Ｓ＝Ａ（４２０）−Ａ（４７０）＋Ａ（６３０）−Ａ
（６５０） 検体試料のＳ値は０．３７９、標準試料のＳ値は０．２
９４であった。この値の比較により、上記精製品には１
〜２／分子のＫＤＯが含まれると推定された。同様にし
て求められた大腸菌ＬＰＳ（分子量は３０，０００と仮
定）の分子量５，０００換算のＫＤＯ数は１であった。

【００３３】脂肪酸数 ９０μｌの上記精製品蒸留水溶液（１ｍｇ／ｍｌ）に１
０μｌの内部標準（０．５５ｍＭのマルガリン酸）を加
えた。１．０ｍｌの０．５Ｍナトリウムメチラートを加
えて脂肪酸エステルの加水分解とエステル化を行った。
室温で１時間放置後に９６０μｌの０．５ＮＨＣｌを加
えて中和した。これに２ｍｌのヘキサンを加えて１５分
間激しく攪拌した。次いで、１，０００ｇで５分間遠心
分離を行いヘキサン層を分取した。窒素ガスでヘキサン
を蒸発させて、約２０μｌになるまで濃縮した。このサ
ンプルをガスクロマトグラフィー［本体：島津社製のＧ
Ｃ８ＡＰＦ、キャピラリーカラム：カナダのスペルコ
（Ｓｐｅｌｃｏ）社製ＦＳＣＡＰ Ｓｐ２３３０、キャ
リヤーガス：窒素］に付して脂肪酸数を測定した。脂肪
酸数測定の基準としては、第一化学薬品社製の合成リピ
ドＡである大腸菌型ＬＡ−１５−ＰＰ（分子量２，００
０で、脂肪酸数／分子は６であることが知られている）
を用いた。結果、本発明のＬＰＳの脂肪酸数は４±１／
分子（仮定分子量５，０００）であると推定された。同
様にして推定された大腸菌ＬＰＳ（ディフコ社製の大腸
菌０１２７：Ｂ８ＬＰＳ）（仮定分子量３０，０００）
の分子量５，０００換算の脂肪酸数は３だった。

【００３４】実施例２〜５は、本発明の植物ＬＰＳを含
む製剤の処方例である。実施例２（錠剤） 植物ＬＰＳ ０．０４ｇ ６％ＨＰＣ乳糖 １７８ｇ ステアリン酸タルク ８ｇ バレイショデンプン １４ｇ 以上を混和し、打錠して、０．１ｍｇの植物ＬＰＳを含
む０．５ｇの錠剤４００個を調製した。実施例３（内用液剤） 植物ＬＰＳ １ｍｇ 精製水 １００ｍｌ実施例４（軟膏剤） 植物ＬＰＳ ０．１ｇ 精製ラノリン ８０ｇ黄色ワセリン 適量 １０００ｇ実施例５（注射剤） 植物ＬＰＳ ０．５ｍｇ注射用蒸留水 適量 合計 １０００ｍｌ

【００３５】

【発明の効果】本発明により、高い免疫機能活性化能、
抗糖尿病効果、鎮痛効果を有し、副作用が少なく、従っ
て化学治療係数が高く、長期使用が可能であり、経口、
経皮、注射での投与も可能であり、しかも、生産コスト
が安く、大量に供給可能な新規なリムラステスト陽性植
物ＬＰＳ、及び、当該ＬＰＳの少なくとも１種を含む免
疫機能活性化剤、抗糖尿病剤、鎮痛剤、動物用免疫機能
活性化剤、動物用抗糖尿病剤、動物用鎮痛剤が提供され
る。本発明のリムラステスト陽性植物ＬＰＳは、原料が
人間その他の動物により常食されているものなので、人
間その他の動物への投与に当り憂慮すべき問題点が皆無
であり、そのまま、或いは任意の程度に濃縮した形で、
又、乾燥粉末として提供することができる。更に、本発
明のリムラステスト陽性植物ＬＰＳは、その免疫機能活
性能を指標にして人間その他の動物の免疫機能をチェッ
クするための免疫機能検査薬、動物用免疫機能検査薬と
して有効である。又、医薬部外品、化粧品、食品、機能
性食品、飲料、飼科等に配合すれば、その免疫機能活性
化能が発現される。例えば、本発明のリムラステスト陽
性植物ＬＰＳを配合した化粧品は皮膚の老化防止、新陳
代謝促進に役立つので、常に、又、末長く皮膚を新鮮に
保つのに役立つ。皮膚にはマクロファージが多いので、
皮膚塗布剤として投与するとより高い効果が得られる。

【００３６】実験例２（内因性ＴＮＦ産生促進能の測
定） ７週齢のオスＣ３Ｈ／Ｈｅ（平均体重２３ｇ）を実験動
物とした。Ａ群（８匹）には蒸留水を自由に摂取させ
た。各マウスにゾンデで２００μｌの蒸留水を経口投与
し、その３時間後にＯＫ−４３２（中外製薬社製）を１
ＫＥ［クリニッシュ アインハイト（Ｋｌｉｎｉｓｃｈ
ｅ Ｅｉｎｈｅｉｔ）系単位であり、１ＫＥは０．１ｍ
ｇの乾燥細菌を含む製剤量にあたる］を溶解した生理的
食塩水０．２ｍｌを尾静脈より注射した。その２時間後
に大腿部動脈より採血し、常法により血清を採取した。
Ｂ群（４匹）にも蒸留水を自由に摂取させた。１００μ
ｇの大腸菌ＬＰＳを含む蒸留水溶液２００μｌをゾンデ
で経口投与し、その３時間後に、Ａ群と同様にＯＫ−４
３２を投与し、血清を採取した。Ｃ群（４匹）では、大
腸菌ＬＰＳの代わりに、実施例１で製造された標品Ａ
（ＬＰＳ量で１００μｇ）を投与した以外は、Ｂ群と同
様に処理した。Ｄ群（４匹）では、１０μｇ／ｍｌの大
腸菌ＬＰＳを含む蒸留水を飲料水として３日間自由摂取
させ、次いで、Ｂ群と同様に、１００μｇの大腸菌ＬＰ
Ｓをゾンデで経口投与し、次いでＯＫ−４３２を投与
し、血清を採取した。Ｅ群（４匹）では、実施例１で製
造された標品Ａの水溶液（１０μｇ／ｍｌのＬＰＳを含
む）を飲料水として３日間自由に摂取させ、次いで、Ｃ
群と同様に処理して血清を採取した。採取した各血清の
ＴＮＦ産生促進能を、Ｌ９２９細胞に対する毒性に基づ
いて測定した。結果を各群の平均として表３に示す。図
２は表３に示した結果をグラフ化したものである。図２
において、Ａ〜Ｄは、それぞれＡ群〜Ｄ群のデータを示
す。

【００３７】

【表３】 表３及び図２から、本発明のリムラステスト陽性植物Ｌ
ＰＳが大腸菌ＬＰＳと同程度の内因性ＴＮＦ産生促進能
を示すことが明瞭である。

【００３８】実験例３（抗糖尿病活性） ７週齢目に達したばかりの各群１０匹のＮＯＤマウス
（ソフトサイエンス社発行、京極方久編「難病疾患のモ
デルと動物実験」、１４０〜１４８頁、１９８４年）を
実験動物として使用した。Ａ群には、蒸留水を飲料水と
して自由に摂取させ、週に１回は注射用生理食塩水を静
脈投与した。これを１３週齢に達するまで続けた。Ｂ群
には、蒸留水を飲料水として自由に摂取させ、週に１回
の割合で１μｇ（ＬＰＳ量）／匹の本発明の植物ＬＰＳ
（実施例１で製造された標品Ａ）を注射用生理食塩水に
溶かして静脈投与した。１３週齢に達するまで計７回投
与した。Ｃ群には、蒸留水を飲料水として自由に摂取さ
せ、週に３回の割合で１μｇ／ｍｌのＬＰＳを含む本発
明の植物ＬＰＳ（実施例１で製造された標品Ａ）の溶液
（５０ｗ／ｖ％のグリセロール水溶液を溶媒として使
用）を腹部に指で１００μｌ／回塗布した。この塗布は
１７週齢に達するまで続けた。Ｄ群には、２０ｎｇ／ｍ
ｌのＬＰＳを含む本発明の植物ＬＰＳ（実施例１で製造
された標品Ａ）を含む蒸留水を飲料水として１３週齢に
達するまで自由に摂取させた。１３週齢目から１４週齢
末迄はその量を５００ｎｇ／ｍｌとし、１５週齢目から
１６週齢末迄はその量を３，０００ｎｇ／ｍｌとした。
各群とも、毎週１回、尿中の糖量をテステープ
（（（株）塩野義製薬販売）を使用して検査した。結果
は、尿糖値が１ｎｇ／ｍｌ未満は陰性、１〜４ｎｇ／ｍ
ｌは擬陽性、４ｎｇ／ｍｌを越えたら陽性として評価し
た。尿糖陽性と評価されたマウスを糖尿病発症と認定し
た。結果を表４にそれぞれ糖尿病発症率（尿糖陽性匹数
／１０×１００）、生存率（生存匹数／１０×１００）
として示す。

【００３９】

【表４】 図３、図４は表４に示した結果をグラフ化したものであ
る。図３、図４において、○はＡ群の、□はＢ群の、△
はＣ群の、◇はＤ群のデータを示す。

【００４０】実験例４（鎮痛効果） ７週齢の各群６匹のＣ３Ｈ／Ｈｅ雄マウス（体重約２３
ｇ）に、ＬＰＳ換算でそれぞれ０、１、１０、１００、
１０００、１００００μｇ／匹ずつの本発明の植物ＬＰ
Ｓ（実施例１で製造された標品Ａ）或は大腸菌ＬＰＳを
含むように調製した２００μｌの蒸留水をゾンデで経口
投与した。その３時間後に０．５ｍｌの１％酢酸を腹腔
内投与し、その後３０分間にわたり、各マウスの身もだ
え回数（各群６匹の平均）を計数し、表５に示す結果が
得られた。表中、「−」は該当量では測定しなかったこ
とを示す。又、「身もだえ阻止率（％）」は、次式によ
り計算した。

【数２】

【００４１】表５

【表５】 図５は表５に示した結果をグラフ化したものである。図
５より、本発明の植物ＬＰＳの身もだえ阻止率ＥＤ５０
は２５μｇ／匹、大腸菌ＬＰＳのそれは３６００μｇ／
匹と推定される。従って、本発明の植物ＬＰＳは大腸菌
ＬＰＳの約１５０倍の鎮痛効果があると推定される。

【００４２】投与量、投与間隔、毒性値 本発明のリムラステスト陽性植物ＬＰＳを免疫機能活性
化剤、抗糖尿病剤、鎮痛剤材として、或いは、動物用免
疫機能活性化剤、動物用抗糖尿病剤、動物用鎮痛剤とし
て投与するさいの量、投与間隔は、当然、担当医師或い
は獣医師により、患者の年齢、症状、投与効果等を勘案
して個別に決定されるが、人間の成人（６０ｋｇ）で、
経口投与で１μｇ〜１００ｍｇ、静脈投与で１０ｎｇ〜
１ｍｇ、経皮投与で１００ｎｇ〜１ｍｇが１日１回の投
与量の一応の目安となる。なお、動物では、牛、馬等の
大型動物は上記の量の６０分の１を体重１ｋｇ当たりの
量の目安とし、豚、犬、猫等の中型、小型の動物ではそ
の２倍量を体重１ｋｇ当たりの量の目安とし、鶏等の鳥
類では更にその２倍量を体重１ｋｇ当たりの量の目安と
し投与できる。本発明のリムラステスト陽性植物ＬＰＳ
（純度９７％である実施例１で製造された標品Ｂ）は、
６週齢のマウス（ＢＡＬＢ／Ｃ、オス、体重１９〜２３
ｇ）３匹に２ｍｇ／ｋｇを投与しても、経口、経皮、静
注いずれの経路でも、４８時間観察したが死亡例はなか
った。本発明のリムラステスト陽性植物ＬＰＳは安全性
が極めて高いと言える。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明のリムラステスト陽性植物ＬＰＳ及び大
腸菌ＬＰＳの銀染色における染色帯を示す。

【図２】本発明のリムラステスト陽性植物ＬＰＳを含
め、各種検体の内因性ＴＮＦ産生促進能を示すＴＮＦ活
性データのグラフである。

【図３】本発明のリムラステスト陽性植物ＬＰＳの抗糖
尿病効果を示す、糖尿病発症率を示すグラフである。

【図４】本発明のリムラステスト陽性植物ＬＰＳの抗糖
尿病効果を示す、生存率を示すグラフである。

【図５】従来の大腸菌ＬＰＳ及び本発明のリムラステス
ト陽性植物ＬＰＳの鎮痛効果を示す、身もだえ阻止率を
示すグラフである。

【符号の説明】

図１において、１は大腸菌ＬＰＳ、２は本発明のリムラ
ステスト陽性植物ＬＰＳの染色帯を示す。図２におい
て、Ａは、蒸留水投与群のデータを示す。Ｂは、蒸留水
−大腸菌ＬＰＳ投与群のデータを示す。Ｃは、蒸留水−
本発明のリムラステスト陽性植物ＬＰＳ投与群のデータ
を示す。Ｄは、大腸菌ＬＰＳ含有蒸留水−大腸菌ＬＰＳ
投与群のデータを示す。Ｅは、本発明の植物ＬＰＳ含有
蒸留水−本発明のリムラステスト陽性植物ＬＰＳ投与群
のデータを示す。図３、図４において、○は、生理的食
塩水投与群のデータを示す。□は、本発明のリムラステ
スト陽性植物ＬＰＳ静注投与群のデータを示す。△は、
本発明のリムラステスト陽性植物ＬＰＳ塗布群のデータ
を示す。◇は、本発明のリムラステスト陽性植物ＬＰＳ
経口自由摂取群のデータを示す。図５において、●は大
腸菌ＬＰＳ、○は本発明のリムラステスト陽性植物ＬＰ
Ｓのデータを示す。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 31/715 ＡＢＤ Ｃ０８Ｂ 37/00 Ｑ 7433−4Ｃ (72)発明者 月岡 大輔 千葉県千葉市春日１−21−17 (72)発明者 水野 伝一 神奈川県鎌倉市岡本18 (72)発明者 大島 治之 東京都八王子市館町1097館ケ丘団地２−１ −513

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 次の物性を有するリムラステスト陽性植
   物ＬＰＳ。 分子量：５，０００±２，０００（ＳＤＳ電気泳動法） ヘキソサミン数：４±１／分子 リン数：１〜２／分子 ＫＤＯ数：１〜２／分子 脂肪酸数：４±１／分子
2. 【請求項２】 植物が小麦、大麦、豆、ぬか及びそれら
   の混合物からなる群から選択されることを特徴とする、
   請求項１のリムラステスト陽性植物ＬＰＳ。
3. 【請求項３】 請求項１のリムラステスト陽性植物ＬＰ
   Ｓの少なくとも１種を含むことを特徴とする免疫機能活
   性化剤。
4. 【請求項４】 免疫機能促進剤が内因性ＴＮＦ産生促進
   能であることを特徴とする、請求項３の免疫機能活性化
   剤。
5. 【請求項５】 請求項１のリムラステスト陽性植物ＬＰ
   Ｓの少なくとも１種を含むことを特徴とする抗糖尿病
   剤。
6. 【請求項６】 請求項１のリムラステスト陽性植物ＬＰ
   Ｓの少なくとも１種を含むことを特徴とする鎮痛剤。
7. 【請求項７】 請求項１のリムラステスト陽性植物ＬＰ
   Ｓの少なくとも１種を含むことを特徴とする動物用免疫
   機能活性化剤。
8. 【請求項８】 免疫機能促進剤が内因性ＴＮＦ産生促進
   能であることを特徴とする、請求項７の動物用免疫機能
   活性化剤。
9. 【請求項９】 請求項１のリムラステスト陽性植物ＬＰ
   Ｓの少なくとも１種を含むことを特徴とする動物用抗糖
   尿病剤。
10. 【請求項１０】 請求項１のリムラステスト陽性植物Ｌ
    ＰＳの少なくとも１種を含むことを特徴とする動物用鎮
    痛剤。