JPH07135981A

JPH07135981A - 非ａ非ｂ型肝炎ウイルス遺伝子に由来するｄｎａ及び構成ポリペプチド

Info

Publication number: JPH07135981A
Application number: JP6032201A
Authority: JP
Inventors: Muneo Aoyama; 宗夫青山; Takashi Obara; 隆小原; Junichi Fujimatsu; 順一藤松; Takashi Sawada; 高志沢田; Tetsuya Hosoda; 哲也細田; Yoshihiro Iwasaki; 吉宏岩崎; Terumasa Arima; 暉勝有馬
Original assignee: Eisai Co Ltd
Current assignee: Eisai Co Ltd
Priority date: 1993-05-28
Filing date: 1994-03-02
Publication date: 1995-05-30
Also published as: EP0628572A3; EP0628572A2; CA2124027A1; KR0126107B1

Abstract

(57)【要約】【目的】非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルスゲノム遺伝子に由来
する DNAおよび同ウイルス構成ポリペプチドを提供す
る。【構成】非Ａ非Ｂ型肝炎患者の血漿より RNAを抽出・
精製する。この RNAを鋳型にして１本鎖 DNAを調製後、
選択されたプライマ−を使用しＰＣＲ法によりＤＮＡを
増幅させる。構造解析により該ウイルスのＤＮＡ部分配
列を決定、該ウイルスの構成ポリペプチドを演繹し、抗
原部位を確認した。【効果】同ウイルス遺伝子に由来する DNAおよび構成
ポリペプチドを用い同ウイルス肝炎の診断・治療を可能
にする。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス
に関連する構成ポリペプチドおよびそれをコードする D
NAに関する。さらには、抗非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス抗体
および非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス遺伝子の検出試薬に関す
る。

【０００２】

【従来の技術】非Ａ非Ｂ型肝炎は、現在、輸血後肝炎の
約95％を占めると考えられており、該ウイルス感染者を
検出して輸血用血液から除外することや、予防用ワクチ
ンの開発が強く望まれている。近年、Houghtonらは、該
ウイルス遺伝子を分離したと発表（特開平2-500880号）
し、該ウイルス抗原を用いた EIAによる抗体検出試薬を
販売するに至っている。この抗体検出試薬の適用によ
り、輸血後非Ａ非Ｂ型肝炎予防に対する期待が寄せられ
ているが、陽性の供血者血液を除外しても、その肝炎発
症率は５〜７％であり、未だ消滅を見るに至っていな
い。

【０００３】その原因として考えられることは、該ウイ
ルス感染と抗体産生の関係がまだ明らかになっていない
ということもさることながら、該ウイルスゲノムの核酸
配列にかなりの異質性があるらしいということがある。
この点については、Houghtonらの発表した核酸配列をも
とに、PCR 法やプライマーエクステンション法などによ
り該ウイルスゲノム c-DNAをクローニングした多数の実
験の結果 (Kubo et al., Nucleic Acid Research 17, 1
0367-10372, 1989, Kato et al., Proc. JapanAcad., 6
5B, 219-223, 1989, Maeno et al., Nucleic Acid Rese
arch, 18, 2685-2689, 1990, Kato et al., Proc. Nat
l. Acad. Sci. USA, 87, 9524-9528, 1990) から明らか
である。このように、非Ａ非Ｂ型肝炎の診断、並びに輸
血による非Ａ非Ｂ型肝炎発症の予防は未だ完全と言え
ず、遺伝子診断を含め新しい診断法の開発が望まれてい
る。

【０００４】また、本発明者のひとりである有馬暉勝
は、Houghtonらとは独立して同時期に、ヒト患者血清を
RNAソースおよび抗体ソースとして、イムノスクリーニ
ング法で HCV（肝炎Ｃ型ウイルス）のcore領域のエピト
ープのひとつをクローニング化している(Arima et al.,
Gastroenterologia Japanica, 25, 218-222, 1990) 。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明は新規な非Ａ非
Ｂ型肝炎ウイルスの抗原ポリペプチドおよびそれをコー
ドする DNAの提供と、さらにこれらを用いる非Ａ非Ｂ型
肝炎の診断試薬の提供を目的とする。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の現
状を鑑み、非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルスの研究を開始した。
s-GPT 高値を示す日本国内の供血者血漿を原料として鋭
意研究の結果、これまで報告されたウイルスとは異なる
新しいタイプの非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス由来のDNAの単
離、構造確認に成功した。さらに、これら DNAおよびそ
れがコードするポリペプチドを用いて非Ａ非Ｂ型肝炎の
診断、予防、治療を行い得ることを見い出し、本発明を
完成させるに至った。

【０００７】すなわち本発明は配列番号１、２および３
記載の非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルスの構成ポリペプチドおよ
びそれらをコードする DNAの、全部または一部を含有し
てなるポリペプチドおよび DNAである。さらに本発明
は、上記の DNAの一部をプライマーとして用い、非Ａ非
Ｂ型肝炎ウイルス由来の DNAを増幅させ検出する手法に
よる非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス遺伝子の検出試薬、上記 D
NAの一部をプローブとして用い、非Ａ非Ｂ型肝炎ウイル
ス由来の DNAとハイブリダイゼーションさせる手法によ
る非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス遺伝子の検出試薬、上記の構
成ポリペプチドの一部を用い、免疫学的手法により、試
料中の抗非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス抗体の存在を確認する
非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス抗体検出試薬、上記構成ポリペ
プチドを抗原とするポリクローナル抗体またはモノクロ
ーナル抗体、上記の抗体を用い、免疫学的手法により、
試料中の非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス抗原の存在を確認する
非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス抗原検出試薬及び上記の抗原ポ
リペプチドを用いて製造された非Ａ非Ｂ型肝炎ワクチン
をも提供する。

【０００８】本発明を以下に詳しく説明する。（１）非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルスの RNAの調製非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス RNAの抽出原料としては、s-GT
P 値が高値を示す供血者の血漿を用いることができる。
ウイルス画分は、公知の方法に従い、ポリエチレングリ
コール添加後遠心分離操作により採取する。このウイル
ス画分からの RNAの抽出、精製は、例えばグアニジンチ
オシアネート、界面活性剤、キレート剤および還元剤の
混合溶液にてウイルス画分からの抽出を行った後、フェ
ノール抽出、有機溶媒分画(Chamezynski et al., Anal,
Biochem., 162, 156, 1987)、次いで密度勾配超遠心操
作により精製 RNAを得る方法で行うことができる。

【０００９】（２）２本鎖 DNAの調製とクローニング得られた RNAを鋳型として用い、ランダムプライマー、
逆転写酵素、DNA ポリメラーゼ等を用いるcDNA合成法(G
ubler, U. et al., Gene, 25, 263, 1983)などの常法に
より、２本鎖 DNAを調製することができる。このように
して得られた２本鎖 DNAを、常法に従い、バクテリオフ
ァージ、例えばλzap 、λgtllなどに組み込んだ後、大
腸菌を支持菌として培養、スクリーニングすることによ
り、目的とするクローンを得ることができる。２本鎖 D
NAをファージベクターに組み込む方法としては、例えば
Hyunh, T.V.らの DNA Cloning, a practical approac
h, 1, 49 (1985)に記載の方法などが挙げられる。

【００１０】目的とするクローンのスクリーニング法
は、公知の方法に準ずればよく、例えばλgtllファージ
ベクターに２本鎖を組み込んだ場合、そのベクターを
E.coliY1090に感染させ、形成されたプラーク中に含ま
れるポリペプチドをニトロセルロース膜に転写し、次い
で、該転写膜を、非Ａ非Ｂ型ウイルス肝炎患者血清を該
ウイルスの抗体源として用いる免疫学的手法によるスク
リーニングに供する方法が挙げられる。ただし、この方
法では、非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス由来の全 DNAを解析す
ることは難しい。それゆえに、以下の方法を適用するこ
ともできる。

【００１１】すなわち、まず、前記の方法で非Ａ非Ｂ型
肝炎ウイルスに感染していることが確認された患者の新
しい血漿から RNAを調製する。次に、これを鋳型として
作成した１本鎖 DNAと既知の構造を有する適切なプライ
マーを用い、常法の PCR法により DNAを増幅させ、サブ
クローニングすることにより、非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス
由来の DNAを得ることができる。プライマーは、既知の
非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス DNA配列をもとにして、よく保
存されている部分を適宜選択してオリゴヌクレオチドを
合成し、プライマーとして用いることができ、通常は10
〜30個の塩基配列からなる断片がプライマーとして用い
られる。本発明において使用したプライマーはすでに報
告されている HC-J8 (H. Okamoto et al., Virology, 1
88, 331-341, 1992)、HCV-J( Kato N. et al.,Proc. Na
tl. Acad. Sci.USA., 87,9524-9528,1990)および HC-J6
( Okamoto H et al.,J. Gen. Virol. 72, 2697-2704, 1
991)の塩基配列をもとに合成したオリゴヌクレオチドを
使用した。さらに、これらプライマ−を用いた実験によ
り決定した非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルスの部分塩基配列をも
とに、適宜選択した部位のオリゴヌクレオチドを合成
し、プライマ−として使用した。塩基配列の構造は、マ
キサム・ギルバート法(Maxam, A. M. and Gilbert, W.,
Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 74, 560, 1977) あるい
はジデオキシ法(Sanger,F., Proc. Natl. Acad. Sci. U
SA, 74, 5463, 1977)によって決められる。

【００１２】（３）抗非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス抗体の検
出および試薬本発明の非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス構成ポリペプチドまた
はその一部をエピトープとして用いて、生体試料、例え
ば患者血清中の抗非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス抗体の有無を
免疫学的手法により検定することができ、該ウイルス感
染診断が可能である。エピトープとはポリペプチドの抗
原決定基を意味し、一般に少なくとも５個のアミノ酸で
構成され、６個のアミノ酸で構成されるポリぺプチドが
抗体と結合することは公知である（公表特許公報60-500
684 号）。用いるエピトープとしては、配列番号１、２
および３記載のアミノ酸配列に基づいて、連続してなる
少なくとも３〜５個のアミノ酸、好ましくは少なくとも
８〜10個のアミノ酸、さらに好ましくは少なくとも11〜
20個のアミノ酸からなるポリぺプチドを適宜選択するこ
とができる。また約20個以上のアミノ酸からなるポリぺ
プチドであっても使用できることは言うまでもない。

【００１３】免疫化学的測定方法としては公知の方法を
用いることができ、例えば ELISA法、ウエスタンブロッ
ト法、凝集法などが挙げられる。簡便性、実用性の観点
からELISA法が挙げられ、例えば一つまたは複数個のエ
ピトープを固相化したウエルに検体試料を加えて反応さ
せ、洗浄後酵素標識抗ヒト IgG抗体を反応させる。洗浄
後結合した酵素量を測定すればよい。また固相へのエピ
ト−プの吸着を容易にするためにエピト−プのＮ端にシ
ステインを付加することも自由である。

【００１４】抗ヒトＩｇＧ抗体の標識物質としては蛍光
物質、放射性物質、生物または化学発光物質、電気化学
発光物質、色素、酵素、金属など定量可能な物質であれ
ばいずれも使用でき、好ましくは酵素、電気化学発光物
質などが挙げられる。エピトープの固相化担体としては
マイクロタイタープレート、プラスチックビーズ、赤血
球、ゼラチン粒子、ラテックス粒子、磁気粒子などいず
れの担体も使用することができる。エピトープの選択は
上記の方法に基づき、複数の非Ａ非Ｂ型肝炎患者血清を
用いることによりどの部位がエピトープとして適切であ
るかどうかを確認することができる。

【００１５】本発明の測定試薬の具体的態様の一例を示
せば、次の如くになる。すなわち、本発明測定試薬は、
非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルスの構成ポリぺプチド全体、また
はその一部からなるエピトープの１個または複数個を必
須の構成成分とし、標準非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス患者血
清（抗体）、抗ヒト IgG抗体、酵素および酵素基質より
なる群より任意に選択したものを組み合わせたもののセ
ットである。ここにおいて、セット中に固相が含まれる
場合は該固相がエピトープによってコートされた状態で
提供されること、あるいは抗ヒト IgG抗体と酵素とが含
まれる場合には両者がコンジュゲートした状態で提供さ
れることは自由であり、これらも同様に本発明測定試薬
の態様に含まれる。また測定の実施の便益のために適当
な抗原希釈液、反応希釈液、基質溶解液、反応停止液な
どがセット中に添付されることも自由であり、これらも
本発明を限定するものではない。測定する検体は、いわ
ゆる生体試料であって、例えば血清、血漿、脊髄液、リ
ンパ液、唾液および細胞などが挙げられるが、これに限
定されるものではない。（４）抗非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルスポリペプチド抗体の作
成本発明の非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルスポリペプチド、または
その一部を抗原として抗体を作製することができる。抗
原とキャリア蛋白質との複合体は必要に応じて、種々の
縮合剤を用いて調製することができる。例えばグルタル
アルデヒド、カルボジイミド、マレイミド活性エステル
などが使用できる。キャリア蛋白質としては牛血清アル
ブミン、サイログロブリン、ヘモシアニンなどが挙げら
れ、通常１〜５倍量の割合でカップリングさせる方法が
用いられる。

【００１６】免疫される動物としてはマウス、ラット、
ウサギ、モルモットなどがあげられ、接種方法は皮下、
筋肉、静脈あるいは腹腔内に投与される。投与に際して
は完全フロイントアジュバントや不完全フロイントアジ
ュバンドと混和して投与してもよい。通常１〜５週毎に
複数回接種し、十分に免疫した後、該動物から採血、血
清を分離することによりポリクローナル抗体を得ること
ができ、必要に応じて、免疫グロブリン画分を精製す
る。モノクローナル抗体の場合は、免疫された動物の脾
臓あるいはリンパ節から得られた抗体産生細胞は骨髄腫
細胞と細胞融合させられハイブリドーマとして単離され
る。骨髄腫細胞としてはマウス、ラット、ヒト等由来の
ものが使用され、抗体産生細胞と同種由来のものである
ことが好ましいが、異種間においても可能な場合もあ
る。

【００１７】細胞融合の操作は既知の方法、たとえばケ
ーラーとミルスタインの方法（Nature, 256, 495, 197
5）に従い実施できる。融合促進剤としてはポリエチレ
ングリコールやセンダイウイルスなどが挙げられるが、
通常20〜50％程度の濃度のポリエチレングリコール（平
均分子量1000〜4000）を用いて20〜40℃、好ましくは30
〜37℃の温度下、抗体産生細胞数と骨髄腫細胞数の比は
通常１：１〜10：１程度、約１〜10分間程度反応させる
ことにより細胞融合を実施することができる。

【００１８】抗体産生ハイブリドーマのスクリーニング
には種々の免疫化学的方法が使用できる。たとえば、免
疫抗原をコートしたマイクロプレートを用いる ELISA
(Enzyme-linked immunosorbent assay)法、抗免疫グロ
ブリン抗体をコートしたマイクロプレートを用いる EIA
(Enzyme immunoassay) 法、抗原を固相化したニトロセ
ルロース膜を用いるウエスタンブロット法などがあげら
れる。このようなウエルから更に例えば限界希釈法によ
ってクローニングを行いクローンを得る。ハイブリドー
マの選別、育種は通常 HAT（ヒポキサンチン、アミノプ
テリン、チミジン）を添加して、10〜20％牛胎児血清を
含む動物細胞用培地（例、RPMI1640）で行われる。

【００１９】このようにして得られたクローンはあらか
じめブリスタンを投与したBALB／Cマウスの腹腔内へ移
植し、10〜14日後にモノクローナル抗体を高濃度に含む
腹水を採取し、抗体精製の原料とすることができる。ま
た、該クローンを培養し、その培養物を抗体精製の原料
とすることもできる。モノクローナル抗体の回収は免疫
グロブリンの精製法として既知の方法を用いればよく、
たとえば、硫安分画法、 PEG分画法、エタノール分画
法、陰イオン交換体の利用、さらにアフィニティクロマ
トグラフィなどの手段により容易に達成することができ
る。これら抗体は、公知の免疫学的手法による生体試料
中の非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス抗原の同定、定量を可能と
する。すなわち、これら抗体は、非Ａ非Ｂ型肝炎ウイル
ス抗原の診断試薬として利用できる。

【００２０】（５）非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルスの遺伝子解
析これまでに、非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルスに関する報告とし
て、前記のHoughtonらの報告(HCV-1) 、加藤の報告(HCV
-J) 、岡本らの報告(HC-J6) 、さらに本発明のウイルス
を含めて４種類の報告があることからも明らかなよう
に、非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルスには、幾つかのサブタイプ
が存在することが知られている。前記した如く、生体試
料中の本発明のウイルスに対する抗体または該ウイルス
抗原ポリペプチドの免疫学的検定法は、該ウイルス感染
診断方法として有用ではあるが、各ウイルスサブタイプ
を同定、判定することは難しい。

【００２１】配列番号４の DNAは、ウイルスの構造蛋白
質をコードする領域の一部に相当し、配列番号５および
６の DNAは、非構造蛋白質をコードする領域の一部に相
当する。非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルスの各サブタイプの DNA
塩基配列を本発明の DNAの塩基配列と比較すると、ホモ
ロジーは70〜80％である。この事は、非Ａ非Ｂ型肝炎ウ
イルスのこの部分の DNA塩基配列をもとにして、適切な
オリゴヌクレオチドをプライマーとして用いる遺伝子解
析法を行うことにより、非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルスサブタ
イプの型別判定が可能であることを示す。

【００２２】プライマーとして使用するオリゴヌクレオ
チドは本発明の DNA配列をもとに少なくとも約６個の対
応する塩基配列からなり、好ましくは少なくとも約８個
の塩基配列、さらに好ましくは少なくとも約10〜12個
の、さらに好ましくは約15〜25個の塩基配列からなる対
応するポリヌクレオチドを使用することができる。具体
的には、常法に従い、生体試料例えば検体血漿より調製
した RNAを鋳型として用い、適切なアンチセンスプライ
マー、センスプライマー、逆転写酵素および耐熱威勢 D
NAポリメラ−ゼなどを用いるRT-PCR法により DNAを増幅
させ、その DNAを解析することにより、非Ａ非Ｂ型肝炎
ウイルスサブタイプの型別判定ができる。プライマー
は、各サブタイプウイルスの DNA塩基配列に基づいて適
宜選択すればよく、所定のサイズの DNAが増幅されたか
どうかをポリアクリルアミドゲルまたはアガロースゲル
電気泳動で調べることにより、該ウイルスの型別判定が
できる。また、プライマーの中間に位置する各サブタイ
プウイルスの標識合成オリゴヌクレオチドをプローブと
して使用することにより、その確認をすることもでき
る。

【００２３】また、増幅させた DNAの構造を解析する際
には、PCR 産物から直接塩基配列を解析することも可能
であるし、必要に応じて適切なベクターに該 DNAを組み
込み、それを適切な宿主に導入、複製させるとよい。こ
れにより、塩基配列の解析が可能である。さらに、本発
明の非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルスポリペプチドを用いること
で、ワクチンの作製が可能であり、該ワクチンは、非Ａ
非Ｂ型肝炎予防剤または治療剤として使用できる。

【００２４】

【発明の効果】本発明の DNA、それに相補的な RNAまた
は抗原ポリペプチドを用いることにより、非Ａ非Ｂ型肝
炎の診断が可能となり、輸血等による該肝炎ウイルスの
感染の予防、ワクチン、抗ウイルス剤の開発が可能とな
る。

【００２５】

【実施例】以下、実施例により本発明を詳細に且つ具体
的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定される
ものではない。

【００２６】実施例１血漿からの非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス RNAの調製 C100-3抗体強陽性 (2.00≧) いわゆるHoughtonらのウイ
ルス抗原を用いた抗体検出試薬で強陽性と判定された供
血者血漿および各種肝疾患患者血漿を、ＷＯ92／18532
号（特願平4-508079号）公報に開示された方法に従っ
て、サブタイプの識別を行った。そして、該公報でいう
2-22ウイルスのみを有する血漿を材料として用いた。供
血者血漿１mlに終濃度４％となるようにポリエチレング
リコール4000を加え、４℃で90分間攪拌溶解し、14,000
rpm で10分間遠心し、沈澱を得た。沈澱物に6Mグアニジ
ンイソチオシアネート 200μl 、β−メルカプトエタノ
ール 2.1μl、イーストt-RNA (10mg/ml) ５μl 、2Mク
エン酸ナトリウム(pH 4.0) 22 μl 、フェノール：クロ
ロホルム(5：2) 350μl を加え、室温で１分間攪拌後、
０℃に15分間放置し、14,000rpm 10分間遠心した。該反
応液の水層を取り出し、フェノール：クロロホルム(5：
2) 350μl を加え、室温で１分間攪拌した。攪拌後、０
℃に15分間放置し、14,000rpm 10分間遠心した。該反応
液の水層を取り出し、再度フェノールクロロホルム抽出
を行った。取り出した水層に水層と等量の２−プロパノ
ールを加え、−20℃に12時間以上放置した。放置後、1
4,000rpm で20分間遠心し、沈澱物を得た。該沈澱物に4
Mクアニジンイソチオシアネート 85 μl 、β−メルカ
プトエタノール 0.7μl 、2Mクエン酸ナトリウム(pH 4.
0) 15 μl 、２−プロパノール 100μl を加え、イソプ
ロパノール沈澱を行い、RNA を調製した。

【００２７】実施例２RT-PCR法による遺伝子増幅と構造解析得られたイソプロパノール沈澱 RNA溶液20μl を14,000
rpm で10分間遠心し、沈澱物を得た。該沈澱物を70％エ
タノールで洗浄し、乾燥後、反応液 [10mM Tris・HCl (p
H 8.3), 50mM KCl, 4mM MgCl₂, 1mM DTT 0.001% gelati
n] 25 μl 、後述の3'下流側のアンチセンス鎖プライマ
ー溶液 (10μM) 2μl 、４種類のデオキシヌクレオチド
混合溶液 [dATP, dGTP, dCTP, dTTP各 1.25mM]を10μl
加え、37μl の溶液を作った。この溶液を70℃１分間、
ついで55℃１分間加熱し、０℃に冷却し、 RNase inhib
itor（プロメガ社製） 2μl(80units)、逆転写酵素 (BR
L 社製）1 μl (200units)を加え、37℃で30分間反応さ
せた。つづいて95℃で５分間加熱し、酵素を失活させ
た。この反応液４μl に、PCR 反応液 [10mM Tris・HCl
(pH 8.3), 50mM KCl, 1.5mM MgCl₂, 0.001% gelatin, d
NTP mix 各々 125μM] 44.2 μl を加えた。次いで遺伝
子を増幅させる目的の領域をはさんで5'上流側のセンス
鎖の塩基配列を持つプライマー溶液 (10μM) 0.5μl と
さらに3'下流側のアンチセンス鎖の塩基配列を持つプラ
イマー(10 μM) 0.3μl を加え、全量49μl の溶液とし
た。使用したプライマーは HC-J8、HC-J6, HCV-J, およ
び実験途上決定した DNA配列をもとに合成し、それらの
センスプライマーおよびアンチセンスプライマーの起源
ウイルス名とその塩基位置番号、およびこれらプライマ
−を用いて構造決定した配列を配列表記載の番号に基づ
いて表１および２に示した。なお表中 J、 J6、 J8は前記
のHCV-J、 HC-J6、 HC-J8 を意味し、Seq.4, Seq.5 Seq.6
は本発明記載の配列番号４、５、６を意味する。またク
ロ−ニングのために一部のセンスプライマ−の５’側に
制限酵素 Sma Iおよび Bam HI により認識される配列
を、アンチセンスプライマ−の３’側に制限酵素 Sal I
および Pst Iにより認識される配列を付加した。

【００２８】

【表１】

【００２９】

【表２】

【００３０】この溶液に Taqポリメラーゼ１μl (0.5un
its, Takara)を加え、変性（94℃１分）、アニール（45
℃１分）、ポリメリゼーション（72℃３分）を30回繰り
返した。さらに、この反応液４μl に上述の PCR反応液
90μl 、センスプライマー１μl 、アンチセンスプライ
マー１μl 、Taq ポリメラーゼ２μl を加え、変性（94
℃１分）、アニール（45℃１分）、ポリメリゼーション
（72℃３分）を30回繰り返し、DNA の増幅を行った。

【００３１】以後、RT-PCR法により増幅した遺伝子産物
のクローニングについて述べる。増幅した遺伝子断片を
ポリアクリルアミドゲル（４〜５％）で電気泳動し、エ
チジウムブロマイド染色し、目的の長さの DNAを回収し
た。ついでこれを制限酵素 Bam HI および Sal Iで切断
し、これを M13mp18および M13mp19ファージベクターの
Bam HI 〜Sal I 部位に挿入し、遺伝子をクローン化
し、塩基配列を解析した。塩基配列の決定は常法通り M
13ファージを用いた Dideoxy Termination法で行った。
得られた各クローンの塩基配列をもとに、それらの重複
部分を照合することにより配列番号４、５および６に示
される塩基配列を決定し、この配列からコードされるア
ミノ酸配列は配列番号１、２および３に記載した如く演
繹された。配列番号１は構造領域を、配列番号２および
３は非構造領域に相当する。

【００３２】実施例３エピトープ部位の確認配列番号１、２および３に記載した本発明の非Ａ非Ｂ型
肝炎ウイルスの構造ポリぺプチドのアミノ酸配列のう
ち、どの部位がエピトープとして適切であるか否かを確
認した。まず本発明の配列をもとに表３に示すぺプチド
を合成しスクリーニングした。

【００３３】

【表３】

【００３４】まず、各合成ぺプチド 5.0μg ／mlの溶液
をマイクロプレートのウエルに 100μl ずつ分注しコー
ティング後、ブロッキングバッファー（ 10mM PBS, 1%
BSA,0.1% Tween 20, pH7.4） 100μl でブロッキングを
行う。このウエルに反応溶液( 50mM Tris, 1mM EDTA,
0.1% NaN_3,10% NRS, pH 8.0 ) を 100μl ずつ入れ、
供血者血漿 20 μl を加え、37℃、60分間インキュベー
トした。反応後、ウォッシングバッファー（ 10mM PBS,
0.1% BSA, 0.1% Tween 20, pH 7.4）で洗浄し、次にア
ルカリフォスファターゼ標識抗ヒト IgG抗体を 100μl
加え37℃、60分間反応させ、ウォッシングバッファーで
洗浄後、酵素基質液（ｐ−ニトロフェニルフォスフェー
ト 1.0 mg/ml, 炭酸バッファ− pH 9.8 ) 100 μl 加え
て37℃、30分間反応させた後、波長 405nmにおける吸光
度を測定した。

【００３５】その結果、第２世代試薬にて陽性と判定さ
れた供血者血漿（130 検体）に対する陽性率を表３の右
欄に示した。このようにペプチド名、CL、M1および57に
おいて陽性率がそれぞれ 100％、94.6％および84.6％で
あることが確認され、これら三つのペプチドがエピトー
プとして有効であることが確認された。そのアミノ酸配
列はそれぞれ順に配列番号７、８および９に示される。
すなわち本発明のアミノ酸配列の一部をエピトープとし
て非Ａ非Ｂ型肝炎診断試薬として有効であることを意味
し、新しいエピトープを用いていることから今後の臨床
検査データの蓄積によりこれまでの診断試薬にみられな
かった有用性が期待される。

【００３６】

【配列表】

配列番号：１配列の長さ： 328 配列の型： amino acid 鎖の数： single トポロジ−： linear 配列の種類： peptide 起源生物名：非Ａ非Ｂ肝炎ウイルス配列 Met Ser Thr Asn Pro Lys Pro Gln Arg Lys Thr Lys Arg Asn Thr Asn 1 5 10 15 Arg Arg Pro Gln Asp Val Lys Phe Pro Gly Gly Gly Gln Val Val Gly 20 25 30 Gly Val Tyr Leu Leu Pro Arg Arg Gly Pro Arg Leu Gly Val Arg Ala 35 40 45 Thr Arg Lys Thr Ser Glu Arg Ser Gln Pro Arg Glu Arg Arg Gln Pro 50 55 60 Ile Pro Lys Asp Arg Arg Ser Thr Gly Lys Ser Trp Gly Lys Pro Gly 65 70 75 80 Tyr Pro Trp Pro Leu Tyr Gly Asn Glu Gly Cys Gly Trp Ala Gly Trp 85 90 95 Leu Leu Ser Pro Arg Gly Ser Arg Pro Thr Trp Gly Pro Thr Asp Pro 100 105 110 Arg His Arg Ser Arg Asn Leu Gly Lys Val Ile Asp Thr Leu Thr Cys 115 120 125 Gly Phe Ala Asp Leu Met Gly Tyr Ile Pro Val Val Gly Ala Pro Val 130 135 140 Gly Gly Val Ala Arg Ala Leu Ala His Gly Val Arg Val Leu Glu Asp 145 150 155 160 Gly Val Asn Tyr Ala Thr Gly Asn Leu Pro Gly Cys Ser Phe Ser Ile 165 170 175 Phe Leu Leu Ala Leu Leu Ser Cys Val Thr Val Pro Val Ser Ala Val 180 185 190 Glu Val Arg Asn Ile Ser Ser Ser Tyr Tyr Ala Thr Asn Asp Cys Ser 195 200 205 Asn Asn Ser Ile Thr Trp Gln Leu Thr Asn Ala Val Leu His Leu Pro 210 215 220 Gly Cys Val Pro Cys Glu Asn Asp Asn Gly Thr Leu Arg Cys Trp Ile 225 230 235 240 Gln Val Thr Pro Asn Val Ala Val Lys Tyr Arg Gly Ala Leu Thr His 245 250 255 Ser Leu Arg Thr His Val Asp Met Ile Val Met Ala Ala Thr Val Cys 260 265 270 Ser Ala Leu Tyr Val Gly Asp Ala Cys Gly Ala Ile Met Ile Ala Ser 275 280 285 Gln Ala Phe Ile Ile Ser Pro Glu Arg His Asn Phe Thr Gln Glu Cys 290 295 300 Asn Cys Ser Ile Tyr Gln Gly Arg Ile Thr Gly His Arg Met Ala Trp 305 310 315 320 Asp Met Met Leu Asn Trp Ser Pro 325 。

【００３７】配列番号：２配列の長さ： 1211 配列の型： amino acid 鎖の数： single トポロジ−： linear 配列の種類： peptide 起源生物名：非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス配列 Tyr Ala Ser Gln Gly Tyr Lys Val Leu Val Leu Asn Pro Ser Val Ala 1 5 10 15 Ala Thr Leu Gly Phe Gly Ala Tyr Met Ser Lys Ala His Gly Ile Asn 20 25 30 Pro Asn Ile Arg Thr Gly Val Arg Thr Val Thr Thr Gly Asp Pro Ile 35 40 45 Thr Tyr Ser Thr Tyr Gly Lys Phe Leu Ala Asp Gly Gly Cys Ser Ala 50 55 60 Gly Ala Tyr Asp Ile Ile Ile Cys Asp Glu Cys His Ala Val Asp Ser 65 70 75 80 Thr Thr Ile Leu Gly Ile Gly Thr Val Leu Asp Gln Ala Glu Thr Ala 85 90 95 Gly Ile Arg Leu Val Val Leu Ala Thr Ala Thr Pro Pro Gly Thr Val 100 105 110 Thr Thr Pro His Ser Asn Ile Glu Glu Val Ala Leu Ser His Glu Gly 115 120 125 Glu Ile Pro Phe Tyr Gly Lys Ala Ile Pro Leu Ala Ser Ile Lys Gly 130 135 140 Gly Arg His Leu Ile Phe Cys His Ser Lys Lys Lys Cys Asp Glu Leu 145 150 155 160 Ala Ala Ala Leu Arg Gly Met Gly Val Asn Ala Val Ala Phe Tyr Arg 165 170 175 Gly Leu Asp Val Ser Val Ile Pro Thr Gln Gly Asp Val Val Val Val 180 185 190 Ala Thr Asp Ala Leu Met Thr Gly Tyr Thr Gly Asp Phe Asp Ser Val 195 200 205 Ile Asp Cys Asn Val Arg Val Thr Gln Ile Val Asp Phe Ser Leu Asp 210 215 220 Pro Thr Phe Thr Ile Thr Ile Gln Thr Val Pro Gln Asp Ala Val Ser 225 230 235 240 Arg Ser Gln Arg Arg Gly Arg Thr Gly Arg Gly Arg Leu Gly Ile Tyr 245 250 255 Arg Tyr Val Ser Ser Gly Glu Arg Pro Ser Gly Met Phe Asp Ser Ala 260 265 270 Val Leu Cys Glu Cys Tyr Asp Ala Gly Ala Ala Trp Tyr Glu Leu Thr 275 280 285 Pro Ala Glu Thr Thr Val Arg Leu Arg Ala Tyr Phe Asn Thr Pro Gly 290 295 300 Leu Pro Val Cys Gln Asp His Leu Glu Phe Trp Glu Ala Val Phe Thr 305 310 315 320 Gly Leu Thr His Ile Asp Ala His Phe Leu Ser Gln Thr Lys Gln Gly 325 330 335 Gly Asp Asn Phe Ala Tyr Leu Thr Ala Tyr Gln Ala Thr Val Cys Ala 340 345 350 Arg Ala Lys Ala Pro Pro Pro Ser Trp Asp Val Met Trp Lys Cys Leu 355 360 365 Thr Arg Leu Lys Pro Thr Leu Thr Gly Pro Thr Pro Leu Leu Tyr Arg 370 375 380 Leu Gly Ala Val Thr Asn Glu Val Thr Leu Thr His Pro Val Thr Lys 385 390 395 400 Tyr Ile Ala Thr Cys Met Gln Ala Asp Leu Glu Ile Met Thr Ser Thr 405 410 415 Trp Val Leu Ala Gly Gly Val Leu Ala Ala Val Ala Ala Tyr Cys Leu 420 425 430 Ala Thr Gly Cys Ile Ser Ile Ile Gly Arg Leu His Leu Asn Asp Arg 435 440 445 Val Val Val Ala Pro Asp Lys Glu Ile Leu Tyr Glu Ala Phe Asp Glu 450 455 460 Met Glu Glu Cys Ala Ser Lys Ala Ala Leu Ile Glu Glu Gly Gln Arg 465 470 475 480 Met Ala Glu Met Leu Lys Ser Lys Ile Gln Gly Leu Leu Gln Gln Ala 485 490 495 Thr Lys Gln Ala Gln Asp Ile Gln Pro Ala Ile Gln Ser Ser Trp Pro 500 505 510 Lys Leu Glu Gln Phe Trp Ala Lys His Met Trp Asn Phe Ile Ser Gly 515 520 525 Ile Gln Tyr Leu Ala Gly Leu Ser Thr Leu Pro Gly Asn Pro Ala Val 530 535 540 Ala Ser Met Met Ala Phe Ser Ala Ala Leu Thr Ser Pro Leu Pro Thr 545 550 555 560 Ser Thr Thr Ile Leu Leu Asn Ile Met Gly Gly Trp Leu Ala Ser Gln 565 570 575 Ile Ala Pro Pro Ala Gly Ala Thr Gly Phe Val Val Ser Gly Leu Val 580 585 590 Gly Ala Ala Val Gly Ser Ile Gly Leu Pro Asn Ile Leu Val Asp Val 595 600 605 Leu Ala Gly Tyr Gly Ala Gly Ile Ser Gly Ala Leu Val Ala Phe Lys 610 615 620 Ile Met Ser Gly Glu Lys Pro Ser Val Glu Asp Val Val Asn Leu Leu 625 630 635 640 Pro Ala Ile Leu Ser Pro Gly Ala Leu Val Val Gly Val Ile Cys Ala 645 650 655 Ala Ile Leu Arg Arg His Ile Gly Gln Gly Glu Gly Ala Val Gln Trp 660 665 670 Met Asn Arg Leu Ile Ala Phe Ala Ser Arg Gly Asn His Val Ala Pro 675 680 685 Thr His Tyr Val Ala Glu Ser Asp Ala Ser Gln Arg Val Thr Gln Val 690 695 700 Leu Ser Ser Leu Thr Ile Thr Ser Leu Leu Arg Arg Leu His Ala Trp 705 710 715 720 Ile Thr Glu Asp Cys Pro Val Pro Cys Ser Gly Ser Trp Leu Arg Asp 725 730 735 Ile Trp Asp Trp Val Cys Ser Ile Leu Thr Asp Phe Lys Asn Trp Leu 740 745 750 Ser Ser Lys Leu Leu Pro Lys Met Pro Gly Leu Pro Phe Ile Ser Cys 755 760 765 Gln Lys Gly Tyr Lys Gly Val Trp Ala Gly Thr Gly Val Met Thr Thr 770 775 780 Arg Cys Pro Cys Gly Ala Asn Ile Ser Gly His Val Arg Met Gly Thr 785 790 795 800 Met Arg Ile Thr Gly Pro Lys Thr Cys Leu Asn Leu Trp Gln Gly Thr 805 810 815 Phe Pro Ile Asn Cys Tyr Thr Glu Gly Pro Cys Val Pro Lys Pro Pro 820 825 830 Pro Asn Tyr Lys Thr Ala Ile Trp Arg Val Ala Ala Ser Glu Tyr Val 835 840 845 Glu Ile Thr Arg His Gly Ser Phe Ser Tyr Val Thr Gly Leu Thr Thr 850 855 860 Asp Asn Leu Lys Val Pro Cys Gln Val Pro Ala Pro Glu Phe Phe Ser 865 870 875 880 Trp Val Asp Gly Val Gln Ile His Arg Phe Ala Pro Thr Pro Gly Pro 885 890 895 Phe Phe Arg Asp Glu Val Ser Phe Thr Val Gly Leu Asn Ser Phe Val 900 905 910 Val Gly Ser Gln Leu Pro Cys Asp Pro Glu Pro Asp Thr Glu Val Leu 915 920 925 Ala Ser Met Leu Thr Asp Pro Ser His Ile Thr Ala Glu Ala Ala Ala 930 935 940 Arg Arg Leu Ala Arg Gly Ser Pro Pro Ser Gln Ala Ser Ser Ser Ala 945 950 955 960 Ser Gln Leu Ser Ala Pro Ser Leu Lys Ala Ile Cys Ala Ser His Lys 965 970 975 Met Ala Tyr Asp Cys Asp Met Val Asp Ala Asn Leu Phe Met Gly Gly 980 985 990 Asp Val Thr Arg Ile Glu Ser Asp Ser Lys Val Ile Val Leu Asp Tyr 995 1000 1005 Leu Asp Ser Met Thr Glu Thr Glu Asp Asp Arg Glu Pro Ser Ile Pro 1010 1015 1020 Ser Glu Tyr Leu Ile Lys Arg Lys Arg Phe Pro Val Ala Val Pro Ser 1025 1030 1035 1040 Trp Ala His Pro Asp Tyr Asn Pro Pro Leu Val Glu Thr Trp Lys Arg 1045 1050 1055 Pro Gly Tyr Glu Pro Pro Thr Val Leu Gly Cys Ala Leu Pro Pro Thr 1060 1065 1070 Pro Gln Ala Pro Val Pro Pro Pro Arg Arg Arg Arg Ala Lys Val Leu 1075 1080 1085 Thr Gln Asp Asn Val Glu Gly Val Leu Arg Glu Met Ala Asp Lys Val 1090 1095 1100 Leu Ser Ser Leu Arg Gly Cys Asn Asp Thr Gly His Ser Thr Glu Met 1105 1110 1115 1120 Asp Thr Gly Gly Asp Ser Val Gln Gln Pro Ser Asp Glu Thr Thr Ala 1125 1130 1135 Ser Glu Glu Gly Ser Leu Ser Ser Met Pro Pro Leu Glu Gly Glu Pro 1140 1145 1150 Gly Asp Pro Asp Leu Glu Phe Gly Gln Ala Gly Ser Ala Pro Pro Ser 1155 1160 1165 Glu Glu Glu Gly Glu Val Ile Asp Ser Asp Ser Lys Ser Trp Ser Thr 1170 1175 1180 Val Ser Asp Gln Glu Asp Ala Val Ile Cys Cys Ser Met Ser Tyr Ser 1185 1190 1195 1200 Trp Thr Gly Ala Leu Ile Thr Pro Cys Gly Pro 1205 1210 。

【００３８】配列番号：３配列の長さ：５４７配列の型： amino acid トポロジ−： linear 配列の種類：ｐｒｏｔｅｉｎ起源生物名：非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス配列ＡｌａＳｅｒＬｅｕＡｒｇＡｌａＬｙｓＬｙｓＶａｌＴｈｒ
ＰｈｅＡｓｐＡｒｇＶａｌＧｌｎＶａｌＬｅｕ１５
１０１５ＡｓｐＡｌａＨｉｓＴｙｒＡｓｐＳｅｒＶａｌＬｅｕＧｌｎ
ＡｓｐＶａｌＬｙｓＡｒｇＡｌａＡｌａＳｅｒ２０２５
３０ＬｙｓＶａｌＳｅｒＡｌａＡｒｇＬｅｕＬｅｕＳｅｒＶａｌ
ＧｌｕＧｌｕＡｌａＣｙｓＡｌａＬｅｕＴｈｒ３５４０
４５ＰｒｏＰｒｏＨｉｓＳｅｒＡｌａＬｙｓＳｅｒＬｅｕＴｙｒ
ＧｌｙＰｈｅＧｌｙＡｌａＬｙｓＧｌｕＶａｌ５０５５
６０ＡｒｇＳｅｒＬｅｕＳｅｒＡｒｇＡｒｇＡｌａＶａｌＡｓｎ
ＨｉｓＩｌｅＡｒｇＳｅｒＶａｌＴｒｐＧｌｕ６５７０
７５８０ＡｓｐＬｅｕＬｅｕＧｌｕＡｓｐＧｌｎＨｉｓＴｈｒＰｒｏ
ＩｌｅＡｓｎＴｈｒＴｈｒＩｌｅＭｅｔＡｌａ８５
９０９５ＬｙｓＡｓｎＧｌｕＶａｌＰｈｅＣｙｓＩｌｅＡｓｐＰｒｏ
ＡｌａＬｙｓＧｌｙＧｌｙＡｒｇＬｙｓＰｒｏ１００１０５
１１０ＡｌａＡｒｇＬｅｕＩｌｅＶａｌＴｙｒＰｒｏＡｓｐＬｅｕ
ＧｌｙＶａｌＡｒｇＶａｌＣｙｓＧｌｕＬｙｓ１１５１２０
１２５ＭｅｔＡｌａＬｅｕＴｙｒＡｓｐＩｌｅＡｌａＧｌｎＬｙｓ
ＬｅｕＰｒｏＬｙｓＡｌａＩｌｅＭｅｔＧｌｙ１３０１３５
１４０ＰｒｏＳｅｒＴｙｒＧｌｙＰｈｅＧｌｎＴｙｒＳｅｒＰｒｏ
ＡｌａＧｌｕＡｒｇＶａｌＡｓｐＰｈｅＬｅｕ１４５１５０
１５５１６０ＬｅｕＬｙｓＡｌａＴｒｐＧｌｙＳｅｒＬｙｓＬｙｓＡｓｐ
ＰｒｏＭｅｔＧｌｙＰｈｅＳｅｒＴｙｒＡｓｐ１６５
１７０１７５ＴｈｒＡｒｇＣｙｓＰｈｅＡｓｐＳｅｒＴｈｒＶａｌＴｈｒ
ＧｌｕＡｒｇＡｓｐＩｌｅＡｒｇＴｈｒＧｌｕ１８０１８５
１９０ＧｌｕＳｅｒＩｌｅＴｙｒＧｌｎＡｌａＣｙｓＳｅｒＬｅｕ
ＰｒｏＧｌｎＧｌｕＡｌａＡｒｇＴｈｒＶａｌ１９５２００
２０５ＩｌｅＨｉｓＳｅｒＬｅｕＴｈｒＧｌｕＡｒｇＬｅｕＴｙｒ
ＶａｌＧｌｙＧｌｙＰｒｏＭｅｔＴｈｒＡｓｎ２１０２１５
２２０ＳｅｒＬｙｓＧｌｙＧｌｎＳｅｒＣｙｓＧｌｙＴｙｒＡｒｇ
ＡｒｇＣｙｓＡｒｇＡｌａＳｅｒＧｌｙＶａｌ２２５２３０
２３５２４０ＰｈｅＴｈｒＴｈｒＳｅｒＭｅｔＧｌｙＡｓｎＴｈｒＭｅｔ
ＴｈｒＣｙｓＴｙｒＩｌｅＬｙｓＡｌａＬｅｕ２４５
２５０２５５ＡｌａＡｌａＣｙｓＬｙｓＡｌａＡｌａＧｌｙＩｌｅＬｙｓ
ＡｓｐＰｒｏＩｌｅＭｅｔＬｅｕＶａｌＣｙｓ２６０２６５
２７０ＧｌｙＡｓｐＡｓｐＬｅｕＶａｌＶａｌＩｌｅＳｅｒＧｌｕ
ＳｅｒＧｌｎＧｌｙＡｓｎＧｌｕＧｌｕＡｓｐ２７５２８０
２８５ＧｌｕＡｒｇＡｓｎＬｅｕＡｒｇＡｌａＰｈｅＴｈｒＧｌｕ
ＡｌａＭｅｔＴｈｒＡｒｇＴｙｒＳｅｒＡｌａ２９０２９５
３００ＰｒｏＰｒｏＧｌｙＡｓｐＰｒｏＰｒｏＡｒｇＰｒｏＧｌｕ
ＴｙｒＡｓｐＬｅｕＧｌｕＬｅｕＩｌｅＴｈｒ３０５３１０
３１５３２０ＳｅｒＣｙｓＳｅｒＳｅｒＡｓｎＶａｌＳｅｒＶａｌＡｌａ
ＬｅｕＡｓｐＰｒｏＡｒｇＧｌｙＡｒｇＡｒｇ３２５
３３０３３５ＡｒｇＴｙｒＴｙｒＬｅｕＴｈｒＡｒｇＡｓｐＰｒｏＴｈｒ
ＴｈｒＰｒｏＩｌｅＳｅｒＡｒｇＡｌａＡｌａ３４０３４５
３５０ＴｒｐＧｌｕＴｈｒＶａｌＡｒｇＨｉｓＳｅｒＰｒｏＶａｌ
ＡｓｎＳｅｒＴｒｐＬｅｕＧｌｙＡｓｎＩｌｅ３５５３６０
３６５ＩｌｅＧｌｎＴｙｒＡｌａＰｒｏＴｈｒＩｌｅＴｒｐＶａｌ
ＡｒｇＭｅｔＶａｌＩｌｅＭｅｔＴｈｒＨｉｓ３７０３７５
３８０ＰｈｅＰｈｅＡｌａＩｌｅＬｅｕＬｅｕＡｌａＧｌｎＡｓｐ
ＴｈｒＬｅｕＡｓｎＧｌｎＡｓｎＬｅｕＡｓｎ３８５３９０
３９５４００ＰｈｅＧｌｕＭｅｔＴｙｒＧｌｙＡｌａＶａｌＴｙｒＳｅｒ
ＶａｌＡｓｎＰｒｏＬｅｕＡｓｐＬｅｕＰｒｏ４０５
４１０４１５ＡｌａＩｌｅＩｌｅＧｌｕＡｒｇＬｅｕＨｉｓＧｌｙＬｅｕ
ＡｓｐＡｌａＰｈｅＳｅｒＬｅｕＨｉｓＴｈｒ４２０４２５
４３０ＴｙｒＳｅｒＰｒｏＨｉｓＧｌｕＬｅｕＳｅｒＡｒｇＶａｌ
ＡｌａＡｌａＴｈｒＬｅｕＡｒｇＬｙｓＬｅｕ４３５４４０
４４５ＧｌｙＡｌａＰｒｏＰｒｏＬｅｕＡｒｇＡｌａＴｒｐＬｙｓ
ＳｅｒＡｒｇＡｌａＡｒｇＡｌａＶａｌＡｒｇ４５０４５５
４６０ＡｌａＳｅｒＬｅｕＩｌｅＡｌａＧｌｎＧｌｙＧｌｙＡｒｇ
ＡｌａＡｌａＩｌｅＣｙｓＧｌｙＡｒｇＴｙｒ４６５４７０
４７５４８０ＬｅｕＰｈｅＡｓｎＴｒｐＡｌａＶａｌＬｙｓＴｈｒＬｙｓ
ＬｅｕＬｙｓＬｅｕＴｈｒＰｒｏＬｅｕＰｒｏ４８５
４９０４９５ＧｌｕＡｌａＡｌａＡｒｇＬｅｕＡｓｐＬｅｕＳｅｒＧｌｙ
ＴｒｐＰｈｅＴｈｒＶａｌＧｌｙＡｌａＧｌｙ５００５０５
５１０ＧｌｙＧｌｙＡｓｐＩｌｅＰｈｅＨｉｓＳｅｒＶａｌＳｅｒ
ＡｒｇＡｌａＡｒｇＰｒｏＡｒｇＬｅｕＬｅｕ５１５５２０
５２５ＬｅｕＬｅｕＣｙｓＬｅｕＬｅｕＬｅｕＬｅｕＳｅｒＶａｌ
ＧｌｙＶａｌＧｌｙＩｌｅＰｈｅＬｅｕＬｅｕ５３０５３５
５４０ＰｒｏＡｌａＡｒｇ
545 。

【００３９】配列番号：４配列の長さ： 1246 配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジ−：直鎖状配列の種類： cDNA to genomic RNA 起源：非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス配列 TAGCCATGGC GTTAGTATGA GTGTCGTACA GCCTCCAGGC CCCCCCCTCC CGGGAGAGCC 60 ATAGTGGTCT GCGGAACCGG TGAGTACACC GGAATTGCCG GAAAGACTGG GTCCTTTCTT 120 GGATCAACCC ACTCTATGTC CGGTCATTTG GGCGTGCCCC CGCAAGACTG CTAGCCTAGT 180 AGCGTTGGGT TGCGAACGGC CTTGTGGTAC TGCCTGATAG GGTGCTTGCG AGTGCCCCGG 240 GAGGTCTCGT AGACCGTGCA TC ATG AGC ACA AAT CCT AAA CCT CAA AGA AAA 292 Met Ser Thr Asn Pro Lys Pro Gln Arg Lys 1 5 10 ACC AAA AGA AAC ACA AAC CGC CGC CCA CAG GAC GTC AAG TTC CCG GGT 340 Thr Lys Arg Asn Thr Asn Arg Arg Pro Gln Asp Val Lys Phe Pro Gly 15 20 25 GGC GGC CAG GTC GTT GGC GGA GTT TAC TTG CTG CCG CGC AGG GGC CCC 388 Gly Gly Gln Val Val Gly Gly Val Tyr Leu Leu Pro Arg Arg Gly Pro 30 35 40 AGG TTG GGT GTG CGC GCG ACA AGG AAG ACT TCC GAG CGA TCC CAG CCG 436 Arg Leu Gly Val Arg Ala Thr Arg Lys Thr Ser Glu Arg Ser Gln Pro 45 50 55 CGT GAG AGG CGC CAG CCC ATC CCG AAA GAT CGG CGC TCC ACC GGC AAG 484 Arg Glu Arg Arg Gln Pro Ile Pro Lys Asp Arg Arg Ser Thr Gly Lys 60 65 70 TCC TGG GGA AAG CCA GGA TAC CCT TGG CCT CTG TAT GGA AAT GAG GGC 532 Ser Trp Gly Lys Pro Gly Tyr Pro Trp Pro Leu Tyr Gly Asn Glu Gly 75 80 85 90 TGC GGC TGG GCA GGT TGG CTC CTG TCC CCC CGC GGG TCT CGT CCT ACA 580 Cys Gly Trp Ala Gly Trp Leu Leu Ser Pro Arg Gly Ser Arg Pro Thr 95 100 105 TGG GGC CCC ACC GAC CCC CGG CAC AGA TCA CGC AAT TTG GGT AAG GTC 628 Trp Gly Pro Thr Asp Pro Arg His Arg Ser Arg Asn Leu Gly Lys Val 110 115 120 ATC GAT ACC CTT ACG TGT GGT TTT GCC GAC CTC ATG GGG TAC ATC CCT 676 Ile Asp Thr Leu Thr Cys Gly Phe Ala Asp Leu Met Gly Tyr Ile Pro 125 130 135 GTC GTT GGC GCC CCG GTC GGG GGC GTC GCT AGA GCT CTA GCA CAC GGT 724 Val Val Gly Ala Pro Val Gly Gly Val Ala Arg Ala Leu Ala His Gly 140 145 150 GTT AGG GTC CTG GAA GAC GGG GTA AAT TAT GCA ACA GGG AAC CTG CCT 772 Val Arg Val Leu Glu Asp Gly Val Asn Tyr Ala Thr Gly Asn Leu Pro 155 160 165 170 GGT TGC TCC TTT TCT ATC TTC TTA CTT GCT CTT CTG TCG TGC GTT ACA 820 Gly Cys Ser Phe Ser Ile Phe Leu Leu Ala Leu Leu Ser Cys Val Thr 175 180 185 GTG CCA GTG TCT GCA GTG GAA GTC AGG AAC ATC AGT TCT AGC TAC TAC 868 Val Pro Val Ser Ala Val Glu Val Arg Asn Ile Ser Ser Ser Tyr Tyr 190 195 200 GCC ACT AAT GAT TGC TCG AAC AAC AGC ATC ACC TGG CAG CTC ACT AAC 916 Ala Thr Asn Asp Cys Ser Asn Asn Ser Ile Thr Trp Gln Leu Thr Asn 205 210 215 GCA GTT CTC CAC CTT CCT GGA TGC GTC CCA TGT GAG AAT GAT AAC GGC 964 Ala Val Leu His Leu Pro Gly Cys Val Pro Cys Glu Asn Asp Asn Gly 220 225 230 ACC TTG CGA TGC TGG ATA CAA GTA ACA CCT AAT GTG GCT GTG AAA TAC 1012 Thr Leu Arg Cys Trp Ile Gln Val Thr Pro Asn Val Ala Val Lys Tyr 235 240 245 250 CGC GGC GCA CTC ACC CAT AGC CTG CGA ACA CAT GTC GAC ATG ATC GTA 1060 Arg Gly Ala Leu Thr His Ser Leu Arg Thr His Val Asp Met Ile Val 255 260 265 ATG GCA GCT ACG GTC TGC TCG GCC TTG TAT GTG GGG GAC GCG TGC GGG 1108 Met Ala Ala Thr Val Cys Ser Ala Leu Tyr Val Gly Asp Ala Cys Gly 270 275 280 GCC ATA ATG ATC GCG TCA CAG GCT TTC ATA ATA TCG CCG GAA CGC CAC 1156 Ala Ile Met Ile Ala Ser Gln Ala Phe Ile Ile Ser Pro Glu Arg His 285 290 295 AAC TTC ACC CAA GAG TGC AAC TGT TCC ATC TAT CAA GGC CGC ATC ACC 1204 Asn Phe Thr Gln Glu Cys Asn Cys Ser Ile Tyr Gln Gly Arg Ile Thr 300 305 310 GGC CAC CGC ATG GCA TGG GAC ATG ATG CTA AAC TGG TCA CCA 1246 Gly His Arg Met Ala Trp Asp Met Met Leu Asn Trp Ser Pro 315 320 325 。

【００４０】配列番号：５配列の長さ： 3633 配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジ−：直鎖状配列の種類： cDNA to genomic RNA 起源：非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス配列 TAT GCC AGT CAG GGG TAT AAA GTA CTT GTA CTG AAT CCC TCT GTC GCG 48 Tyr Ala Ser Gln Gly Tyr Lys Val Leu Val Leu Asn Pro Ser Val Ala 1 5 10 15 GCT ACA CTC GGT TTT GGG GCC TAT ATG TCC AAA GCC CAC GGG ATT AAC 96 Ala Thr Leu Gly Phe Gly Ala Tyr Met Ser Lys Ala His Gly Ile Asn 20 25 30 CCC AAC ATC AGA ACT GGA GTA CGG ACT GTG ACC ACC GGG GAC CCT ATC 144 Pro Asn Ile Arg Thr Gly Val Arg Thr Val Thr Thr Gly Asp Pro Ile 35 40 45 ACC TAC TCC ACT TAT GGC AAG TTT CTC GCA GAT GGA GGC TGC TCG GCT 192 Thr Tyr Ser Thr Tyr Gly Lys Phe Leu Ala Asp Gly Gly Cys Ser Ala 50 55 60 GGC GCC TAT GAC ATC ATC ATA TGC GAC GAA TGT CAT GCA GTG GAC TCT 240 Gly Ala Tyr Asp Ile Ile Ile Cys Asp Glu Cys His Ala Val Asp Ser 65 70 75 80 ACT ACT ATC CTT GGC ATT GGA ACA GTC CTC GAC CAG GCT GAG ACC GCG 288 Thr Thr Ile Leu Gly Ile Gly Thr Val Leu Asp Gln Ala Glu Thr Ala 85 90 95 GGT ATT AGG CTA GTG GTT TTG GCC ACA GCC ACA CCC CCT GGT ACA GTG 336 Gly Ile Arg Leu Val Val Leu Ala Thr Ala Thr Pro Pro Gly Thr Val 100 105 110 ACA ACT CCC CAT AGT AAC ATA GAG GAG GTG GCT CTT AGT CAT GAA GGC 384 Thr Thr Pro His Ser Asn Ile Glu Glu Val Ala Leu Ser His Glu Gly 115 120 125 GAG ATC CCC TTT TAC GGC AAG GCT ATT CCT CTA GCT TCC ATC AAA GGG 432 Glu Ile Pro Phe Tyr Gly Lys Ala Ile Pro Leu Ala Ser Ile Lys Gly 130 135 140 GGC AGA CAC CTG ATC TTC TGC CAT TCA AAG AAG AAA TGC GAT GAA CTC 480 Gly Arg His Leu Ile Phe Cys His Ser Lys Lys Lys Cys Asp Glu Leu 145 150 155 160 GCA GCA GCC CTT CGG GGC ATG GGT GTT AAT GCC GTT GCT TTC TAC AGG 528 Ala Ala Ala Leu Arg Gly Met Gly Val Asn Ala Val Ala Phe Tyr Arg 165 170 175 GGT CTC GAC GTC TCC GTT ATA CCA ACC CAA GGG GAC GTG GTG GTA GTC 576 Gly Leu Asp Val Ser Val Ile Pro Thr Gln Gly Asp Val Val Val Val 180 185 190 GCC ACC GAT GCC CTA ATG ACT GGA TAC ACC GGT GAC TTT GAC TCT GTC 624 Ala Thr Asp Ala Leu Met Thr Gly Tyr Thr Gly Asp Phe Asp Ser Val 195 200 205 ATT GAC TGC AAC GTT CGA GTC ACT CAG ATT GTT GAC TTT AGC CTA GAT 672 Ile Asp Cys Asn Val Arg Val Thr Gln Ile Val Asp Phe Ser Leu Asp 210 215 220 CCA ACT TTT ACC ATC ACC ATC CAA ACT GTC CCT CAA GAC GCT GTC TCC 720 Pro Thr Phe Thr Ile Thr Ile Gln Thr Val Pro Gln Asp Ala Val Ser 225 230 235 240 CGT AGT CAA CGT AGA GGG AGA ACT GGG AGG GGG CGG CTG GGC ATT TAC 768 Arg Ser Gln Arg Arg Gly Arg Thr Gly Arg Gly Arg Leu Gly Ile Tyr 245 250 255 AGG TAT GTC TCG TCA GGC GAA AGG CCG TCT GGG ATG TTC GAC AGC GCA 816 Arg Tyr Val Ser Ser Gly Glu Arg Pro Ser Gly Met Phe Asp Ser Ala 260 265 270 GTG CTC TGC GAG TGC TAT GAT GCC GGG GCA GCC TGG TAC GAA CTC ACG 864 Val Leu Cys Glu Cys Tyr Asp Ala Gly Ala Ala Trp Tyr Glu Leu Thr 275 280 285 CCT GCT GAG ACC ACA GTG AGA CTC CGG GCT TAT TTC AAC ACG CCC GGT 912 Pro Ala Glu Thr Thr Val Arg Leu Arg Ala Tyr Phe Asn Thr Pro Gly 290 295 300 CTG CCC GTG TGT CAA GAC CAC TTG GAA TTC TGG GAG GCG GTC TTC ACA 960 Leu Pro Val Cys Gln Asp His Leu Glu Phe Trp Glu Ala Val Phe Thr 305 310 315 320 GGT CTT ACA CAC ATT GAT GCC CAC TTC CTC TCC CAG ACG AAG CAA GGA 1008 Gly Leu Thr His Ile Asp Ala His Phe Leu Ser Gln Thr Lys Gln Gly 325 330 335 GGA GAC AAC TTT GCG TAT CTA ACG GCC TAC CAG GCC ACA GTA TGC GCC 1056 Gly Asp Asn Phe Ala Tyr Leu Thr Ala Tyr Gln Ala Thr Val Cys Ala 340 345 350 AGG GCA AAG GCC CCT CCA CCT TCG TGG GAC GTG ATG TGG AAG TGT CTA 1104 Arg Ala Lys Ala Pro Pro Pro Ser Trp Asp Val Met Trp Lys Cys Leu 355 360 365 ACT AGG CTC AAA CCT ACA CTG ACT GGT CCT ACC CCC CTC CTG TAC CGC 1152 Thr Arg Leu Lys Pro Thr Leu Thr Gly Pro Thr Pro Leu Leu Tyr Arg 370 375 380 TTG GGT GCC GT
G ACC AAC GAG GTC ACC CTG ACG CAC CCT GTG ACG AAA 1200 Leu Gly Ala Val Thr Asn Glu Val Thr Leu Thr His Pro Val Thr Lys 385 390 395 400 TAC ATC GCC ACG TGC ATG CAG GCT GAC CTT GAG ATC ATG ACA AGC ACA 1248 Tyr Ile Ala Thr Cys Met Gln Ala Asp Leu Glu Ile Met Thr Ser Thr 405 410 415 TGG GTT CTG GCA GGG GGG GTG CTA GCT GCC GTG GCA GCT TAC TGC CTG 1296 Trp Val Leu Ala Gly Gly Val Leu Ala Ala Val Ala Ala Tyr Cys Leu 420 425 430 GCG ACT GGC TGC ATT TCC ATC ATT GGC CGC CTA CAC CTG AAC GAT CGG 1344 Ala Thr Gly Cys Ile Ser Ile Ile Gly Arg Leu His Leu Asn Asp Arg 435 440 445 GTG GTT GTG GCC CCT GAC AAG GAG ATC TTA TAC GAG GCC TTT GAT GAG 1392 Val Val Val Ala Pro Asp Lys Glu Ile Leu Tyr Glu Ala Phe Asp Glu 450 455 460 ATG GAA GAG TGC GCC TCC AAA GCC GCC CTC ATT GAG GAA GGG CAG AGG 1440 Met Glu Glu Cys Ala Ser Lys Ala Ala Leu Ile Glu Glu Gly Gln Arg 465 470 475 480 ATG GCG GAG ATG CTC AAG TCC AAA ATA CAA GGC CTC CTA CAA CAG GCT 1488 Met Ala Glu Met Leu Lys Ser Lys Ile Gln Gly Leu Leu Gln Gln Ala 485 490 495 ACA AAA CAG GCC CAA GAC ATA CAG CCA GCC ATA CAG TCA TCA TGG CCC 1536 Thr Lys Gln Ala Gln Asp Ile Gln Pro Ala Ile Gln Ser Ser Trp Pro 500 505 510 AAG CTC GAA CAA TTC TGG GCT AAG CAT ATG TGG AAC TTC ATC AGT GGC 1584 Lys Leu Glu Gln Phe Trp Ala Lys His Met Trp Asn Phe Ile Ser Gly 515 520 525 ATA CAG TAC CTG GCC GGG CTC TCT ACC CTA CCG GGA AAT CCC GCG GTG 1632 Ile Gln Tyr Leu Ala Gly Leu Ser Thr Leu Pro Gly Asn Pro Ala Val 530 535 540 GCA TCA ATG ATG GCC TTC AGC GCC GCG TTG ACC AGC CCA TTG CCC ACC 1680 Ala Ser Met Met Ala Phe Ser Ala Ala Leu Thr Ser Pro Leu Pro Thr 545 550 555 560 AGC ACC ACG ATC CTC TTG AAC ATC ATG GGA GGA TGG TTG GCC TCT CAG 1728 Ser Thr Thr Ile Leu Leu Asn Ile Met Gly Gly Trp Leu Ala Ser Gln 565 570 575 ATT GCC CCC CCT GCC GGA GCC ACT GGC TTC GTT GTC AGT GGT CTA GTA 1776 Ile Ala Pro Pro Ala Gly Ala Thr Gly Phe Val Val Ser Gly Leu Val 580 585 590 GGG GCG GCC GTC GGG AGT ATA GGT CTA CCT AAC ATA CTG GTG GAC GTC 1824 Gly Ala Ala Val Gly Ser Ile Gly Leu Pro Asn Ile Leu Val Asp Val 595 600 605 CTG GCC GGG TAC GGT GCA GGC ATC TCA GGG GCC CTC GTA GCT TTT AAG 1872 Leu Ala Gly Tyr Gly Ala Gly Ile Ser Gly Ala Leu Val Ala Phe Lys 610 615 620 ATC ATG AGC GGC GAG AAG CCC TCG GTA GAA GAT GTT GTG AAT CTC CTG 1920 Ile Met Ser Gly Glu Lys Pro Ser Val Glu Asp Val Val Asn Leu Leu 625 630 635 640 CCT GCT ATT TTG TCT CCT GGC GCT CTG GTG GTG GGA GTC ATC TGT GCA 1968 Pro Ala Ile Leu Ser Pro Gly Ala Leu Val Val Gly Val Ile Cys Ala 645 650 655 GCG ATC TTG CGC CGC CAC ATC GGT CAG GGA GAG GGG GCG GTT CAG TGG 2016 Ala Ile Leu Arg Arg His Ile Gly Gln Gly Glu Gly Ala Val Gln Trp 660 665 670 ATG AAT AGA CTG ATC GCT TTT GCC TCT AGG GGA AAC CAT GTT GCC CCT 2064 Met Asn Arg Leu Ile Ala Phe Ala Ser Arg Gly Asn His Val Ala Pro 675 680 685 ACC CAC TAC GTG GCA GAG TCT GAC GCC TCT CAG CGC GTG ACG CAA GTG 2112 Thr His Tyr Val Ala Glu Ser Asp Ala Ser Gln Arg Val Thr Gln Val 690 695 700 TTG AGT TCA CTC ACA ATT ACC AGC TTA CTT AGG AGA CTA CAT GCC TGG 2160 Leu Ser Ser Leu Thr Ile Thr Ser Leu Leu Arg Arg Leu His Ala Trp 705 710 715 720 ATC ACT GAA GAT TGC CCA GTC CCT TGC TCG GGG TCT TGG CTC CGG GAC 2208 Ile Thr Glu Asp Cys Pro Val Pro Cys Ser Gly Ser Trp Leu Arg Asp 725 730 735 ATT TGG GAT TGG GTT TGT TCC ATT CTC ACA GAC TTC AAG AAC TGG CTG 2256 Ile Trp Asp Trp Val Cys Ser Ile Leu Thr Asp Phe Lys Asn Trp Leu 740 745 750 TCT TCA AAA CTG CTC CCC AAA ATG CCT GGC CTC CCC TTT ATC TCT TGT 2304 Ser Ser Lys Leu Leu Pro Lys Met Pro Gly Leu Pro Phe Ile Ser Cys 755 760 765 CAA AAG GGG TAT AAG GGT GTG TGG GCC GGC ACG GGA GTC ATG ACC ACT 2352 Gln Lys Gly Tyr Lys Gly Val Trp Ala Gly Thr Gly Val Met Thr Thr 770 775 780 CGA TGT CCA TGT GGA GCA AAC ATC TCG GGC CAT GTC CGC ATG GGC ACT 2400 Arg Cys Pro Cys Gly Ala Asn Ile Ser Gly His Val Arg Met Gly Thr 785 790 795 800 ATG AGA ATA ACA GGC CCA AAG ACC TGC TTG AAC TTG TGG CAG GGG ACC 2448 Met Arg Ile Thr Gly Pro Lys Thr Cys Leu Asn Leu Trp Gln Gly Thr 805 810 815 TTC CCC ATC AAT TGT TAC ACA GAA GGG CCT TGT GTG CCA AAA CCT CCT 2496 Phe Pro Ile Asn Cys Tyr Thr Glu Gly Pro Cys Val Pro Lys Pro Pro 820 825 830 CCT AAT TAT AAG ACC GCA ATT TGG AGG GTG GCA GCG TCG GAG TAC GTT 2544 Pro Asn Tyr Lys Thr Ala Ile Trp Arg Val Ala Ala Ser Glu Tyr Val 835 840 845 GAG ATC ACA CGG CAT GGC TCC TTC TCG TAC GTA ACG GGG TTG ACC ACT 2592 Glu Ile Thr Arg His Gly Ser Phe Ser Tyr Val Thr Gly Leu Thr Thr 850 855 860 GAC AAC CTT AAG GTC CCT TGC CAG GTA CCA GCT CCA GAA TTC TTC TCT 2640 Asp Asn Leu Lys Val Pro Cys Gln Val Pro Ala Pro Glu Phe Phe Ser 865 870 875 880 TGG GTG GAT GGG GTG CAG ATA CAC CGA TTC GCC CCC ACT CCA GGT CCC 2688 Trp Val Asp Gly Val Gln Ile His Arg Phe Ala Pro Thr Pro Gly Pro 885 890 895 TTC TTT CGG GAT GAG GTA TCG TTC ACT GTG GGC CTC AAT TCC TTT GTG 2736 Phe Phe Arg Asp Glu Val Ser Phe Thr Val Gly Leu Asn Ser Phe Val 900 905 910 GTC GGT TCT CAG CTC CCC TGC GAC CCT GAG CCG GAC ACT GAG GTG TTG 2784 Val Gly Ser Gln Leu Pro Cys Asp Pro Glu Pro Asp Thr Glu Val Leu 915 920 925 GCC TCC ATG CTG ACA GAT CCG TCC CAC ATT ACA GCG GAG GCG GCA GCT 2832 Ala Ser Met Leu Thr Asp Pro Ser His Ile Thr Ala Glu Ala Ala Ala 930 935 940 AGG CGA TTG GCC AGG GGA TCT CCC CCT TCA CAG GCC AGC TCT TCA GCA 2880 Arg Arg Leu Ala Arg Gly Ser Pro Pro Ser Gln Ala Ser Ser Ser Ala 945 950 955 960 AGC CAG CTC TCC GCC CCG TCT TTG AAG GCT ATC TGT GCC AGC CAC AAG 2928 Ser Gln Leu Ser Ala Pro Ser Leu Lys Ala Ile Cys Ala Ser His Lys 965 970 975 ATG GCA TAT GAT TGT GAC ATG GTG GAT GCA AAC CTT TTC ATG GGA GGT 2976 Met Ala Tyr Asp Cys Asp Met Val Asp Ala Asn Leu Phe Met Gly Gly 980 985 990 GAT GTG ACC CGG ATC GAG TCT GAC TCT AAG GTG ATT GTT CTC GAC TAT 3024 Asp Val Thr Arg Ile Glu Ser Asp Ser Lys Val Ile Val Leu Asp Tyr 995 1000 1005 CTC GAT TCT ATG ACC GAG ACA GAG GAC GAT CGT GAG CCT TCA ATA CCA 3072 Leu Asp Ser Met Thr Glu Thr Glu Asp Asp Arg Glu Pro Ser Ile Pro 1010 1015 1020 TCA GAG TAT TTG ATT AAG AGG AAA AGG TTC CCA GTG GCA GTA CCT TCC 3120 Ser Glu Tyr Leu Ile Lys Arg Lys Arg Phe Pro Val Ala Val Pro Ser 1025 1030 1035 1040 TGG GCC CAC CCA GAC TAT AAC CCC CCT TTG GTT GAG ACA TGG AAG AGG 3168 Trp Ala His Pro Asp Tyr Asn Pro Pro Leu Val Glu Thr Trp Lys Arg 1045 1050 1055 CCG GGC TAT GAA CCA CCC ACT GTC CTA GGC TGT GCC CTT CCC CCC ACG 3216 Pro Gly Tyr Glu Pro Pro Thr Val Leu Gly Cys Ala Leu Pro Pro Thr 1060 1065 1070 CCT CAA GCG CCA GTG CCC CCA CCT CGG AGG CGC CGT GCC AAA GTC CTG 3264 Pro Gln Ala Pro Val Pro Pro Pro Arg Arg Arg Arg Ala Lys Val Leu 1075 1080 1085 ACT CAG GAC AAT GTG GAG GGG GTT CTC AGG GAG ATG GCG GAC AAA GTG 3312 Thr Gln Asp Asn Val Glu Gly Val Leu Arg Glu Met Ala Asp Lys Val 1090 1095 1100 CTC AGC TCT CTC CGG GGT TGC AAT GAC ACC GGT CAC TCC ACT GAG ATG 3360 Leu Ser Ser Leu Arg Gly Cys Asn Asp Thr Gly His Ser Thr Glu Met 1105 1110 1115 1120 GAT ACC GGG GGA GAC AGC GTC CAG CAG CCC TCT GAC GAG ACT ACT GCT 3408 Asp Thr Gly Gly Asp Ser Val Gln Gln Pro Ser Asp Glu Thr Thr Ala 1125 1130 1135 TCA GAA GAA GGA TCA CTG TCC TCC ATG CCC CCC CTT GAG GGA GAG CCG 3456 Ser Glu Glu Gly Ser Leu Ser Ser Met Pro Pro Leu Glu Gly Glu Pro 1140 1145 1150 GGG GAC CCT GAC CTG GAG TTC GGA CAA GCC GGC TCC GCT CCC CCT TCC 3504 Gly Asp Pro Asp Leu Glu Phe Gly Gln Ala Gly Ser Ala Pro Pro Ser 1155 1160 1165 GAG GAG GAG GGC GAG GTC ATT GAT TCG GAC TCT AAG TCG TGG TCT ACA 3552 Glu Glu Glu Gly Glu Val Ile Asp Ser Asp Ser Lys Ser Trp Ser Thr 1170 1175 1180 GTC TCT GAT CAA GAG GAT GCT GTT ATT TGT TGC TCC ATG TCA TAC TCC 3600 Val Ser Asp Gln Glu Asp Ala Val Ile Cys Cys Ser Met Ser Tyr Ser 1185 1190 1195 1200 TGG ACA GGG GCC CTC ATA ACA CCG TGT GGG CCC 3633 Trp Thr Gly Ala Leu Ile Thr Pro Cys Gly Pro 1205 1210 。

【００４１】配列番号：６配列の長さ： 1696 配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジ−：直鎖状配列の種類： cDNA to genomic RNA 起源：非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス配列 GCT TCT CTG AGG GCA AAG AAG GTG ACC TTT GAC AGG GTG CAG GTG CTG 48 Ala Ser Leu Arg Ala Lys Lys Val Thr Phe Asp Arg Val Gln Val Leu 1 5 10 15 GAC GCA CAC TAC GAC TCA GTC TTG CAG GAC GTT AAG CGA GCC GCC TCT 96 Asp Ala His Tyr Asp Ser Val Leu Gln Asp Val Lys Arg Ala Ala Ser 20 25 30 AAG GTT AGT GCA AGG CTC CTC TCA GTA GAG GAA GCC TGC GCG CTG ACC 144 Lys Val Ser Ala Arg Leu Leu Ser Val Glu Glu Ala Cys Ala Leu Thr 35 40 45 CCA CCC CAC TCC GCT AAA TCA CTA TAC GGA TTT GGG GCA AAA GAG GTG 192 Pro Pro His Ser Ala Lys Ser Leu Tyr Gly Phe Gly Ala Lys Glu Val 50 55 60 CGC AGC TTA TCC AGG AGG GCC GTT AAC CAC ATC CGG TCC GTG TGG GAG 240 Arg Ser Leu Ser Arg Arg Ala Val Asn His Ile Arg Ser Val Trp Glu 65 70 75 80 GAC CTC CTG GAA GAC CAA CAT ACT CCA ATT AAC ACA ACC ATC ATG GCC 288 Asp Leu Leu Glu Asp Gln His Thr Pro Ile Asn Thr Thr Ile Met Ala 85 90 95 AAA AAT GAG GTG TTC TGT ATT GAC CCC GCT AAG GGC GGG AGG AAG CCA 336 Lys Asn Glu Val Phe Cys Ile Asp Pro Ala Lys Gly Gly Arg Lys Pro 100 105 110 GCT CGC CTC ATC GTA TAC CCC GAT CTT GGG GTC AGG GTG TGC GAA AAG 384 Ala Arg Leu Ile Val Tyr Pro Asp Leu Gly Val Arg Val Cys Glu Lys 115 120 125 ATG GCC CTC TAT GAC ATT GCA CAA AAG CTC CCC AAG GCA ATA ATG GGA 432 Met Ala Leu Tyr Asp Ile Ala Gln Lys Leu Pro Lys Ala Ile Met Gly 130 135 140 CCG TCC TAT GGA TTC CAA TAC TCT CCC GCA GAA CGG GTC GAT TTC CTC 480 Pro Ser Tyr Gly Phe Gln Tyr Ser Pro Ala Glu Arg Val Asp Phe Leu 145 150 155 160 CTC AAG GCT TGG GGA AGT AAA AAG GAC CCA ATG GGG TTC TCG TAT GAC 528 Leu Lys Ala Trp Gly Ser Lys Lys Asp Pro Met Gly Phe Ser Tyr Asp 165 170 175 ACC CGC TGC TTT GAC TCC ACA GTC ACG GAG AGG GAC ATA AGA ACA GAA 576 Thr Arg Cys Phe Asp Ser Thr Val Thr Glu Arg Asp Ile Arg Thr Glu 180 185 190 GAA TCC ATA TAT CAG GCT TGT TCC CTG CCT CAA GAG GCT AGA ACT GTC 624 Glu Ser Ile Tyr Gln Ala Cys Ser Leu Pro Gln Glu Ala Arg Thr Val 195 200 205 ATA CAC TCG CTC ACT GAG AGA CTT TAC GTA GGA GGG CCC ATG ACA AAC 672 Ile His Ser Leu Thr Glu Arg Leu Tyr Val Gly Gly Pro Met Thr Asn 210 215 220 AGC AAA GGG CAA TCC TGC GGT TAC AGG CGC TGC CGC GCA AGC GGT GTT 720 Ser Lys Gly Gln Ser Cys Gly Tyr Arg Arg Cys Arg Ala Ser Gly Val 225 230 235 240 TTC ACC ACC AGC ATG GGG AAT ACC ATG ACA TGT TAC ATC AAA GCC CTT 768 Phe Thr Thr Ser Met Gly Asn Thr Met Thr Cys Tyr Ile Lys Ala Leu 245 250 255 GCA GCG TGC AAA GCC GCA GGG ATT AAA GAC CCT ATC ATG CTG GTG TGT 816 Ala Ala Cys Lys Ala Ala Gly Ile Lys Asp Pro Ile Met Leu Val Cys 260 265 270 GGA GAC GAC CTG GTC GTC ATC TCA GAG AGC CAG GGT AAC GAG GAG GAC 864 Gly Asp Asp Leu Val Val Ile Ser Glu Ser Gln Gly Asn Glu Glu Asp 275 280 285 GAG CGA AAC CTG AGA GCT TTC ACG GAG GCT ATG ACC AGG TAT TCG GCC 912 Glu Arg Asn Leu Arg Ala Phe Thr Glu Ala Met Thr Arg Tyr Ser Ala 290 295 300 CCT CCC GGT GAC CCT CCC AGA CCG GAA TAT GAC TTG GAG CTT ATA ACA 960 Pro Pro Gly Asp Pro Pro Arg Pro Glu Tyr Asp Leu Glu Leu Ile Thr 305 310 315 320 TCC TGC TCC TCA AAT GTA TCG GTA GCG CTG GAC CCT CGG GGT CGC CGC 1008 Ser Cys Ser Ser Asn Val Ser Val Ala Leu Asp Pro Arg Gly Arg Arg 325 330 335 CGG TAC TAC CTA ACC AGA GAC CCT ACC ACT CCA ATC TCC CGA GCT GCT 1056 Arg Tyr Tyr Leu Thr Arg Asp Pro Thr Thr Pro Ile Ser Arg Ala Ala 340 345 350 TGG GAG ACA GTA AGA CAC TCC CCT GTC AAT TCT TGG CTG GGC AAC ATC 1104 Trp Glu Thr Val Arg His Ser Pro Val Asn Ser Trp Leu Gly Asn Ile 355 360 365 ATC CAA TAC GCC CCT ACA ATC TGG GTC CGG ATG GTC ATA ATG ACC CAC 1152 Ile Gln Tyr Ala Pro Thr Ile Trp Val Arg Met Val Ile Met Thr His 370 375 380 TTC TTT GCC ATA CTG TTG GCC CAG GAT ACT CTG AAC CAA AAT CTC AAT 1200 Phe Phe Ala Ile Leu Leu Ala Gln Asp Thr Leu Asn Gln Asn Leu Asn 385 390 395 400 TTT GAG ATG TAC GGG GCA GTA TAT TCG GTC AAT CCA TTA GAC CTA CCG 1248 Phe Glu Met Tyr Gly Ala Val Tyr Ser Val Asn Pro Leu Asp Leu Pro 405 410 415 GCC ATA ATT GAA AGG TTA CAT GGG CTT GAT GCC TTT TCA CTG CAC ACT 1296 Ala Ile Ile Glu Arg Leu His Gly Leu Asp Ala Phe Ser Leu His Thr 420 425 430 TAC TCT CCC CAC GAA CTC TCG CGG GTG GCA GCG ACT CTC AGA AAA CTT 1344 Tyr Ser Pro His Glu Leu Ser Arg Val Ala Ala Thr Leu Arg Lys Leu 435 440 445 GGA GCG CCT CCC CTT AGA GCG TGG AAG AGC CGG GCG CGT GCT GTG AGG 1392 Gly Ala Pro Pro Leu Arg Ala Trp Lys Ser Arg Ala Arg Ala Val Arg 450 455 460 GCC TCA CTC ATC GCC CAA GGA GGG AGG GCA GCC ATT TGC GGC CGT TAC 1440 Ala Ser Leu Ile Ala Gln Gly Gly Arg Ala Ala Ile Cys Gly Arg Tyr 465 470 475 480 CTC TTC AAC TGG GCG GTG AAG ACA AAG CTC AAA CTC ACT CCA TTG CCC 1488 Leu Phe Asn Trp Ala Val Lys Thr Lys Leu Lys Leu Thr Pro Leu Pro 485 490 495 GAG GCG GCC CGC CTG GAT TTA TCC GGG TGG TTC ACC GTG GGC GCC GGC 1536 Glu Ala Ala Arg Leu Asp Leu Ser Gly Trp Phe Thr Val Gly Ala Gly 500 505 510 GGG GGC GAC ATC TTT CAC AGC GTG TCG CGT GCC CGA CCC CGC TTA TTA 1584 Gly Gly Asp Ile Phe His Ser Val Ser Arg Ala Arg Pro Arg Leu Leu 515 520 525 CTC CTT TGC CTA CTC CTA CTT AGT GTA GGG GTA GGC ATC TTT TTA CTC 1632 Leu Leu Cys Leu Leu Leu Leu Ser Val Gly Val Gly Ile Phe Leu Leu 530 535 540 CCC GCT CGG TAGAGCGGCA ACCCCTAGCT ACACTCCATA GCTAGTGTCT 1681 Pro Ala Arg 545 TTGTTTTTTT TTTTT 1696 。

【００４２】配列番号：７配列の長さ：３３配列の型： amino acid トポロジ−： linear 配列の種類： peptide 配列 Gln Arg Lys Thr Lys Arg Asn Thr Asn Arg Arg Pro Gln Asp Val Lys 1 5 10 15 Phe Pro Gly Gly Gly Gln Val Val Gly Gly Val Tyr Leu Leu Pro Arg 20 25 30 Arg 。

【００４３】配列番号：８配列の長さ：２１配列の型： amino acidトポロジ -: linear 配列の種類： peptide 配列 Asn Pro Lys Pro Gln Arg Lys Thr Lys Arg Asn Thr Asn Arg Arg Pro 1 5 10 15 Gln Asp Val Lys Phe 20 。

【００４４】配列番号：９配列の長さ：４０配列の型： amino acid トポロジ−： linear 配列の種類： peptide 配列 Leu His Leu Asn Asp Arg Val Val Val Ala Pro Asp Lys Glu Ile Leu 1 5 10 15 Tyr Glu Ala Phe Asp Glu Met Glu Glu Cys Ala Ser Lys Ala Ala Leu 20 25 30 Ile Glu Glu Gly Gln Arg Met Ala 35 ４０

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ａ６１Ｋ 39/395 ＮＣ０７Ｋ 14/005 8318−4Ｈ 16/08 8318−4ＨＣ１２Ｐ 21/02 Ｃ 9282−4Ｂ 21/08 9161−4ＢＣ１２Ｑ 1/70 9453−4ＢＧ０１Ｎ 33/53 Ｄ 33/569 Ｌ 33/576 Ｚ (72)発明者沢田高志茨城県つくば市千現２−９−17 (72)発明者細田哲也茨城県つくば市春日３−５−１ (72)発明者岩崎吉宏東京都江東区南砂１−25−14 (72)発明者有馬暉勝鹿児島県鹿児島市平之町５−１サーパス平田公園403号

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】配列番号１、２および３に示される非Ａ
非Ｂ型肝炎ウイルス構成ポリペプチド。
【請求項２】配列番号１、２および３に示されるアミ
ノ酸配列から得られるポリペプチドであって、該配列の
少なくとも６個のアミノ酸の連続する配列を含む請求項
１記載のポリペプチド。
【請求項３】請求項１記載のポリペプチドをコードす
る、配列番号４、５および６記載の DNA。
【請求項４】配列番号４、５および６に示される塩基
配列から得られる DNAであって、該 DNAの少なくとも10
個の連続する配列を含む請求項３記載の DNA。
【請求項５】請求項１または２記載のポリペプチドを
含む、生体試料中の抗非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス抗体の免
疫化学的検出試薬。
【請求項６】配列番号７、８および９に示されるペプ
チドを１個または複数個含む、請求項５記載の抗非Ａ非
Ｂ型肝炎ウイルス抗体の免疫化学的検出試薬。
【請求項７】請求項３または４記載の DNAを含む、非
Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス遺伝子の検出試薬。
【請求項８】請求項１または２記載のポリペプチドを
抗原とするポリクローナル抗体またはモノクローナル抗
体。
【請求項９】請求項１または２記載のポリペプチドを
用いて製造された非Ａ非Ｂ型肝炎ワクチン。