JPH07143893A - イソマルトシルフラクトシドの新規な製造方法 - Google Patents

イソマルトシルフラクトシドの新規な製造方法

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JPH07143893A
JPH07143893A JP31576193A JP31576193A JPH07143893A JP H07143893 A JPH07143893 A JP H07143893A JP 31576193 A JP31576193 A JP 31576193A JP 31576193 A JP31576193 A JP 31576193A JP H07143893 A JPH07143893 A JP H07143893A
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JP
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sucrose
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Application number
JP31576193A
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English (en)
Inventor
Hisatoshi Shimokawa
久俊 下川
Kenichiro Fujino
憲一郎 藤野
Hirohiko Takeda
裕彦 竹田
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Asahi Chemical Industry Co Ltd
Original Assignee
Asahi Chemical Industry Co Ltd
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Publication date
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Abstract

(57)【要約】 【目的】 シュクロースの齲蝕誘発性を抑制する代表的
甘味料イソマルトシルフラクトシドを製造する新規な方
法を提供する。 【構成】 シュクロースとグルコシル基供与体を含む基
質溶液に、キャンディダ属、リポマイセス属、サッカロ
マイセス属、サッカロマイコプシス属、トリコスポロン
属、イルペクス属、スクレロチニア属、シゾサッカロマ
イセス属、マクロフォミナ属、ニューロスポラ属、ラシ
オディプロディア属、トリコデルマ属、ペニシリウム
属、アミロマイセス属、スタキボトリス属のいずれかに
属する菌株の生産する糖転移酵素を作用させるイソマル
トシルフラクトシドの新規な製造方法。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、齲蝕誘発性を抑制する
甘味料として知られるイソマルトシルフラクトシドの新
規な製造方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】シュクロースは味質の良い甘味を呈し、
また、極めて水に溶け易いことから、代表的な甘味料と
して広く使用されてきた。しかしながら、近年、シュク
ロースは齲蝕誘発性が高く、虫歯の原因となることが明
らかにされてきた。すなわち、シュクロースは口腔内の
微生物によって不溶性のグルカンに変換され、このグル
カンに覆われた歯の表面で嫌気発酵が行われて乳酸等の
有機酸が生成し、この有機酸が歯のエナメル質を溶解す
ることによって虫歯が発生するということが解明され
た。こうしたことから、シュクロースに代わり得る甘味
料やシュクロースの齲蝕性を抑制する甘味料が望まれて
いる。シュクロースの齲蝕誘発性を抑える甘味料の代表
として、イソマルトシルフラクトシドが知られている
が、このイソマルトシルフラクトシドは、不溶性グルカ
ンの生成を抑える作用を有することから、シュクロース
の代替としてだけではなく、シュクロースと併用できる
利点を有している。
【０００３】現在までに、イソマルトシルフラクトシド
の製造方法としては、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐ
ｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）のα−グルコシダーゼ
を用いる方法〔Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２０６４（１
９５７）〕、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属のしょ糖
転移酵素を用いる方法（特開平４−３０７９６号公
報）、ムコール・ジャバニカス（Ｍｕｃｏｒ ｊａｖａ
ｎｉｃｕｓ）のα−グルコシダーゼを用いる方法〔澱粉
科学，第３５巻，第２号，Ｐ９３−１０２（１９８
８）、特開平２−１２８６５２号公報、特開平４−２８
７６９２号公報〕、およびムコール・スピノサス（Ｍｕ
ｃｏｒ ｓｐｉｎｏｓｕｓ）、ムコール・ジモルフォス
ポラス（Ｍｕｃｏｒ ｄｉｍｏｒｐｈｏｓｐｏｒｕｓ）
またはムコール・ゲネベンシス（Ｍｕｃｏｒ ｇｅｎｅ
ｖｅｎｓｉｓ）のいずれかの生産するα−グルコシダー
ゼを用いる方法（特願平５−２０２１９６号）が知られ
ている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、ムコー
ル属に属する菌株の他には、アスペルギルス・ニガー
（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）のα−グルコ
シダーゼとバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属のしょ糖転
移酵素を用いるイソマルトシルフラクトシドの製造方法
しか、これまでに知られていなかった。本発明は、こう
した状況のもとになされたものであって、その目的は、
上記した菌株以外の微生物を用いたイソマルトシルフラ
クトシドの新規な製造方法を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】前記課題を解決するた
め、本発明者らは、ムコール属、バチルス属、アスペル
ギルス・ニガー以外の菌株について、それらのイソマル
トシルフラクトシド生成能を調査した。その結果、キャ
ンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属、リポマイセス（Ｌｉｐ
ｏｍｙｃｅｓ）属、サッカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒ
ｏｍｙｃｅｓ）属、サッカロマイコプシス（Ｓａｃｃｈ
ａｒｏｍｙｃｏｐｓｉｓ）属、トリコスポロン（Ｔｒｉ
ｃｈｏｓｐｏｒｏｎ）属、イルペクス（Ｉｒｐｅｘ）
属、スクレロチニア（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ）属、シ
ゾサッカロマイセス（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍ
ｙｃｅｓ）属、マクロフォミナ（Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｉ
ｎａ）属、ニューロスポラ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ）
属、ラシオディプロディア（Ｌａｓｉｏｄｉｐｌｏｄｉ
ａ）属、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属、
ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属、アミロマ
イセス（Ａｍｙｌｏｍｙｃｅｓ）属、スタキボトリス
（Ｓｔａｃｈｙｂｏｔｒｙｓ）属のいずれかの属に属す
る菌株が生産する糖転移酵素を、シュクロースとグルコ
シル基供与体を含む基質溶液に作用させると、イソマル
トシルフラクトシドを生成することを見いだし、本発明
を完成するに至った。
【０００６】すなわち、本発明は、シュクロースとグル
コシル基供与体を含む基質溶液に、キャンディダ（Ｃａ
ｎｄｉｄａ）属、リポマイセス（Ｌｉｐｏｍｙｃｅｓ）
属、サッカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）
属、サッカロマイコプシス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｏ
ｐｓｉｓ）属、トリコスポロン（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒ
ｏｎ）属、イルペクス（Ｉｒｐｅｘ）属、スクレロチニ
ア（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ）属、シゾサッカロマイセ
ス（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属、マ
クロフォミナ（Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｉｎａ）属、ニュー
ロスポラ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ）属、ラシオディプロ
ディア（Ｌａｓｉｏｄｉｐｌｏｄｉａ）属、トリコデル
マ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属、ペニシリウム（Ｐｅ
ｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属、アミロマイセス（Ａｍｙｌｏ
ｍｙｃｅｓ）属、スタキボトリス（Ｓｔａｃｈｙｂｏｔ
ｒｙｓ）属のいずれかの属に属する菌株が生産する糖転
移酵素を作用させることを特徴とするイソマルトシルフ
ラクトシドの新規な製造方法に関する。
【０００７】本発明における基質溶液とは、糖転移酵素
によるグルコシル基の転移反応において、グルコシル基
の受容体となるシュクロースとグルコシル基供与体とを
含有する溶液である。グルコシル基供与体とは、グルコ
シル基がグルコシド結合した二糖以上のオリゴ糖および
多糖類であり、例えば、可溶性澱粉、澱粉部分加水分解
物、アミロース、マルトース、マルトトリオース、マル
トテトラオース、マルトペンタオース、マルトヘキサオ
ース、またはそれらの混合物等が挙げられる。基質溶液
中におけるシュクロースとグルコシル基供与体の比率
は、１０：１から１：１０程度が望ましい。また、基質
濃度は５から７０重量％程度が可能で、２０から６０重
量％程度が望ましい。なお、基質溶液のｐＨは、２から
８の範囲が可能で、３から７が望ましい。基質溶液の温
度は、５から７０℃が可能で、１５から５５℃が望まし
い。
【０００８】また、本発明において、上記基質溶液に作
用させる糖転移酵素とは、グルコシル基供与体のグルコ
シド結合が切断されて生じるグルコース残基を、シュク
ロースのグルコース残基の６位の炭素に転移させ、α−
グルコシド結合で結合した三糖類、すなわち、イソマル
トシルフラクトシドを生成する作用を有する菌体または
菌体抽出物を意味し、菌体とは、微生物を培養した培地
中に存在する菌体、および培地から常法に従って一旦分
離された菌体の両方を意味する。また、菌体抽出物と
は、菌体破砕物、常法に従って部分精製された上述のグ
ルコシル基転移活性を有する酵素含有物を意味する。さ
らに、必要に応じて公知の方法で精製された上述のグル
コシル基転移活性を有する酵素をも意味するものであ
る。
【０００９】本発明に用いる糖転移酵素は、キャンディ
ダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属、リポマイセス（Ｌｉｐｏｍｙ
ｃｅｓ）属、サッカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙ
ｃｅｓ）属、サッカロマイコプシス（Ｓａｃｃｈａｒｏ
ｍｙｃｏｐｓｉｓ）属、トリコスポロン（Ｔｒｉｃｈｏ
ｓｐｏｒｏｎ）属、イルペクス（Ｉｒｐｅｘ）属、スク
レロチニア（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ）属、シゾサッカ
ロマイセス（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅ
ｓ）属、マクロフォミナ（Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｉｎａ）
属、ニューロスポラ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ）属、ラシ
オディプロディア（Ｌａｓｉｏｄｉｐｌｏｄｉａ）属、
トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属、ペニシリ
ウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属、アミロマイセス
（Ａｍｙｌｏｍｙｃｅｓ）属、スタキボトリス（Ｓｔａ
ｃｈｙｂｏｔｒｙｓ）属のいずれかに属する菌株を培養
することにより得ることが可能であるが、好ましくは、
キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属、イルペクス（Ｉｒ
ｐｅｘ）属、リポマイセス（Ｌｉｐｏｍｙｃｅｓ）属、
サッカロマイコプシス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｏｐｓ
ｉｓ）属、マクロフォミナ（Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｉｎ
ａ）属、ニューロスポラ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ）属の
いずれかに属する菌株を培養することにより得ることが
望ましい。さらに、より好ましくは、リポマイセス（Ｌ
ｉｐｏｍｙｃｅｓ）属または、サッカロマイコプシス
（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｏｐｓｉｓ）属に属する菌株
を培養することにより得ることがより望ましい。
【００１０】前記した菌株の代表例としては、例えば、
キャンディダ・ツクバエンシス（Ｃａｎｄｉｄａ ｔｓ
ｕｋｕｂａｅｎｓｉｓ）ＡＴＣＣ２４５５５、リポマイ
セス・コノネンコエ（Ｌｉｐｏｍｙｃｅｓ ｋｏｎｏｎ
ｅｎｋｏａｅ）ＡＴＣＣ４４８３３、サッカロマイセス
・ディアスタティカス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｄ
ｉａｓｔａｔｉｃｕｓ）ＡＴＣＣ６０２７０、サッカロ
マイセス・セレビシア（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ
ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）ＡＴＣＣ５６７９５、サッカロ
マイコプシス・フィブリゲラ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃ
ｏｐｓｉｓｆｉｂｕｌｉｇｅｒａ）ＡＴＣＣ９９４７、
トリコスポロン・プルラウス（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏ
ｎ ｐｕｌｌｕｌａｕｓ）ＡＴＣＣ１０６７７、イルペ
クス・モリス（Ｉｒｐｅｘ ｍｏｌｌｉｓ）ＡＴＣＣ２
０６３４、アミロマイセス・ルキシ（Ａｍｙｌｏｍｙｃ
ｅｓ ｒｏｕｘｉｉ）ＡＴＣＣ４２５４３、スクレロチ
ニア・スクレロチオラム（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓ
ｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）ＩＦＯ４８７６、シゾサッカ
ロマイセス・ポンブ（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍ
ｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ）ＩＦＯ０６３８、マクロフォミ
ナ・ファセオリ（Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｉｎａ ｐｈａｓ
ｅｏｌｉ）ＩＦＯ３０９２７、ニューロスポラ・クラッ
サ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ）ＩＦＯ６９
７９、ラシオディプロディア・テオブロマ（Ｌａｓｉｏ
ｄｉｐｌｏｄｉａ ｔｈｅｏｂｒｏｍａｅ）ＩＦＯ３１
０５９、トリコデルマ・ビリデ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍ
ａ ｖｉｒｉｄｅ）ＩＦＯ３０４９８、ペニシリウム・
カプスラタム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃａｐｓｕｌ
ａｔｕｍ）ＩＦＯ７００５、スタキボトリス・カルタル
ム（Ｓｔａｃｈｙｂｏｔｒｙｓ ｃｈａｒｔａｒｕｍ）
ＩＦＯ９３５５を挙げることができる。これらの菌株
は、米国アメリカンタイプカルチャーコレクション（Ａ
ｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌ
ｅｃｔｉｏｎ）および財団法人発酵研究所（Ｉｎｓｔｉ
ｔｕｔｅ ｏｆ Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ，Ｏｓａｋ
ａ）から誰でも自由に入手することができる。
【００１１】本発明において、使用することのできる培
地としては、前述した微生物が培養により増殖できるも
のであれば、任意の天然培地または合成培地でよい。例
えば、炭素源としては、グルコース、糖蜜、シュクロー
ス、澱粉、澱粉糖化液、セルロース分解物などが用いら
れる。窒素源としては、アンモニア、硫安、硝安、燐安
等のアンモニウム塩や尿素、硝酸塩類等が適宜用いられ
る。無機塩としては、燐酸、カリウム、マグネシウム等
の塩類、例えば、燐酸アンモニウム、燐酸カリウム、燐
酸ソーダ、燐酸マグネシウム等の通常の工業用薬品でよ
く、他に微量元素を加えてもよい。また、微量有機栄養
素として、ビタミン類、アミノ酸、核酸関連物質等は、
菌の生育上は特別に必要なものではないが、これらを添
加したり、コーンスチープリカー、肉エキス、酵母エキ
ス、ペプトン等の有機物を加えてもよい。これらの培地
は、液体培地、固体培地のいずれの形でも使用すること
ができる。代表的な培地組成としては、例えば、可溶性
澱粉４０ｇ、コーンスチープリカー３０ｇ、硝酸ナトリ
ウム０．５ｇ、燐酸二水素カリウム０．１ｇ、硫酸マグ
ネシウム７水和物０．０５ｇ、塩化カリウム０．０５ｇ
からなる天然培地（各成分を蒸留水に溶解して１Ｌとす
る。）が挙げられる。
【００１２】培養は、振盪、通気撹拌等による好気条件
で行うのが好ましいが、静置状態で行うこともできる。
培養温度は、１５℃から３５℃の範囲が可能で、２５℃
から３０℃付近が望ましい。培養液中のｐＨは、３から
８とすることが可能で、ｐＨ４から６付近が望ましい。
本発明によれば、キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属、
リポマイセス（Ｌｉｐｏｍｙｃｅｓ）属、サッカロマイ
セス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属、サッカロマイ
コプシス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｏｐｓｉｓ）属、ト
リコスポロン（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ）属、イルペ
クス（Ｉｒｐｅｘ）属、スクレロチニア（Ｓｃｌｅｒｏ
ｔｉｎｉａ）属、シゾサッカロマイセス（Ｓｃｈｉｚｏ
ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属、マクロフォミナ（Ｍ
ａｃｒｏｐｈｏｍｉｎａ）属、ニューロスポラ（Ｎｅｕ
ｒｏｓｐｏｒａ）属、ラシオディプロディア（Ｌａｓｉ
ｏｄｉｐｌｏｄｉａ）属、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏ
ｄｅｒｍａ）属、ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕ
ｍ）属、アミロマイセス（Ａｍｙｌｏｍｙｃｅｓ）属、
スタキボトリス（Ｓｔａｃｈｙｂｏｔｒｙｓ）属のいず
れかに属する菌株の生産する糖転移酵素を、シュクロー
スとグルコシル基供与体を含む基質溶液に作用させるこ
とにより、イソマルトシルフラクトシドを生産すること
ができる。
【００１３】
【実施例】以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明
するが、本発明は、これらの実施例により限定されるも
のではない。 （実施例１）米国アメリカンタイプカルチャーコレクシ
ョンより分譲を受けたキャンディダ・ツクバエンシス
（Ｃａｎｄｉｄａ ｔｓｕｋｕｂａｅｎｓｉｓ）ＡＴＣ
Ｃ２４５５５を、１００ｍｌの天然培地（可溶性澱粉４
０ｇ、コーンスチープリカー３０ｇ、硝酸ナトリウム
０．５ｇ、燐酸二水素カリウム０．１ｇ、硫酸マグネシ
ウム７水和物０．０５ｇ、塩化カリウム０．０５ｇを蒸
留水に溶解して１Ｌとする）を含む５００ｍｌフラスコ
の中で、２５℃で２日間振盪培養した。同培養液１００
ｍｌを、２Ｌの前記天然培地を入れた５Ｌフラスコに移
植して、２５℃で２日間培養した。培養終了後、ろ過に
より集菌し、脱イオン水で洗浄後再び集菌し、湿菌体重
量および乾燥菌体重量を測定した。
【００１４】シュクロース２０％、テトラップ−Ｈシロ
ップ（林原商事株式会社より購入）６．７％（固形分５
％）を含む０．０５Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７）５０ｍｌに
乾燥菌体重量１ｇ分の湿菌体を加えて、２０℃で５時間
反応させた。得られた反応液を９５℃以上で１０分間加
熱処理した後、遠心分離によって反応液上清を得た。得
られた反応液上清を、下記の分析条件で高速液体クロマ
トグラフィー装置を使って分析した結果、０．５１ｇイ
ソマルトシルフラクトシドの生成が認められた。 （分析条件） カラム：東ソー株式会社製 アミド８０（４．６×２５
０ｍｍ） 溶離液：アセトニトリル：水＝７５：２５ 流速 ：１．０ｍｌ／ｍｉｎ 温度 ：７０℃ 検出器：示差屈折計
【００１５】（実施例２）米国アメリカンタイプカルチ
ャーコレクションより分譲を受けたリポマイセス・コノ
ネンコエ（Ｌｉｐｏｍｙｃｅｓ ｋｏｎｏｎｅｎｋｏａ
ｅ）ＡＴＣＣ４４８３３を、前記実施例１と同様の方法
で菌体培養を実施して、湿菌体重量および乾燥菌体重量
を測定した。シュクロース２０％、テトラップ−Ｈシロ
ップ（林原商事株式会社より購入）６．７％（固形分５
％）を含む０．０５Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７）５０ｍｌに
乾燥菌体重量１ｇ分の湿菌体を加えて、２０℃で５時間
反応させた。得られた反応液を９５℃以上で１０分間加
熱処理した後、遠心分離によって反応液上清を得た。得
られた反応液上清を、実施例１と同様の方法で分析した
結果、１．３４ｇイソマルトシルフラクトシドの生成が
認められた。
【００１６】（実施例３）米国アメリカンタイプカルチ
ャーコレクションより分譲を受けたサッカロマイセス・
ディアスタティカス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｄ
ｉａｓｔａｔｉｃｕｓ）ＡＴＣＣ６０２７０を、前記実
施例１と同様の方法で菌体培養を実施して、湿菌体重量
および乾燥菌体重量を測定した。シュクロース２０％、
テトラップ−Ｈシロップ（林原商事株式会社より購入）
６．７％（固形分５％）を含む０．０５Ｍ燐酸緩衝液
（ｐＨ７）５０ｍｌに乾燥菌体重量１ｇ分の湿菌体を加
えて、２０℃で５時間反応させた。得られた反応液を９
５℃以上で１０分間加熱処理した後、遠心分離によって
反応液上清を得た。得られた反応液上清を、実施例１と
同様の方法で分析した結果、０．３８ｇイソマルトシル
フラクトシドの生成が認められた。
【００１７】（実施例４）米国アメリカンタイプカルチ
ャーコレクションより分譲を受けたサッカロマイセス・
セレビシア（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖ
ｉｓｉａｅ）ＡＴＣＣ５６７９５を、前記実施例１と同
様の方法で菌体培養を実施して、湿菌体重量および乾燥
菌体重量を測定した。シュクロース２０％、テトラップ
−Ｈシロップ（林原商事株式会社より購入）６．７％
（固形分５％）を含む０．０５Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７）
５０ｍｌに乾燥菌体重量１ｇ分の湿菌体を加えて、２０
℃で５時間反応させた。得られた反応液を９５℃以上で
１０分間加熱処理した後、遠心分離によって反応液上清
を得た。得られた反応液上清を、実施例１と同様の方法
で分析した結果、０．２５ｇイソマルトシルフラクトシ
ドの生成が認められた。
【００１８】（実施例５）米国アメリカンタイプカルチ
ャーコレクションより分譲を受けたサッカロマイコプシ
ス・フィブリゲラ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｏｐｓｉｓ
ｆｉｂｕｌｉｇｅｒａ）ＡＴＣＣ９９４７を、前記実
施例１と同様の方法で菌体培養を実施して、湿菌体重量
および乾燥菌体重量を測定した。シュクロース２０％、
テトラップ−Ｈシロップ（林原商事株式会社より購入）
６．７％（固形分５％）を含む０．０５Ｍ燐酸緩衝液
（ｐＨ７）５０ｍｌに乾燥菌体重量１ｇ分の湿菌体を加
えて、２０℃で５時間反応させた。得られた反応液を９
５℃以上で１０分間加熱処理した後、遠心分離によって
反応液上清を得た。得られた反応液上清を、実施例１と
同様の方法で分析した結果、１．８７ｇイソマルトシル
フラクトシドの生成が認められた。
【００１９】（実施例６）米国アメリカンタイプカルチ
ャーコレクションより分譲を受けたトリコスポロン・プ
ルラウス（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ ｐｕｌｌｕｌａ
ｕｓ）ＡＴＣＣ１０６７７を、前記実施例１と同様の方
法で菌体培養を実施して、湿菌体重量および乾燥菌体重
量を測定した。シュクロース２０％、テトラップ−Ｈシ
ロップ（林原商事株式会社より購入）６．７％（固形分
５％）を含む０．０５Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７）５０ｍｌ
に乾燥菌体重量１ｇ分の湿菌体を加えて、２０℃で５時
間反応させた。得られた反応液を９５℃以上で１０分間
加熱処理した後、遠心分離によって反応液上清を得た。
得られた反応液上清を、実施例１と同様の方法で分析し
た結果、０．２１ｇイソマルトシルフラクトシドの生成
が認められた。
【００２０】（実施例７）米国アメリカンタイプカルチ
ャーコレクションより分譲を受けたイルペクス・モリス
（Ｉｒｐｅｘ ｍｏｌｌｉｓ）ＡＴＣＣ２０６３４を、
前記実施例１と同様の方法で菌体培養を実施して、湿菌
体重量および乾燥菌体重量を測定した。シュクロース２
０％、テトラップ−Ｈシロップ（林原商事株式会社より
購入）６．７％（固形分５％）を含む０．０５Ｍ燐酸緩
衝液（ｐＨ７）５０ｍｌに乾燥菌体重量１ｇ分の湿菌体
を加えて、２０℃で５時間反応させた。得られた反応液
を９５℃以上で１０分間加熱処理した後、遠心分離によ
って反応液上清を得た。得られた反応液上清を、実施例
１と同様の方法で分析した結果、０．５７ｇイソマルト
シルフラクトシドの生成が認められた。
【００２１】（実施例８）米国アメリカンタイプカルチ
ャーコレクションより分譲を受けたアミロマイセス・ル
キシ（Ａｍｙｌｏｍｙｃｅｓ ｒｏｕｘｉｉ）ＡＴＣＣ
４２５４３を、前記実施例１と同様の方法で菌体培養を
実施して、湿菌体重量および乾燥菌体重量を測定した。
シュクロース２０％、テトラップ−Ｈシロップ（林原商
事株式会社より購入）６．７％（固形分５％）を含む
０．０５Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７）５０ｍｌに乾燥菌体重
量１ｇ分の湿菌体を加えて、２０℃で５時間反応させ
た。得られた反応液を９５℃以上で１０分間加熱処理し
た後、遠心分離によって反応液上清を得た。得られた反
応液上清を、実施例１と同様の方法で分析した結果、
０．３２ｇイソマルトシルフラクトシドの生成が認めら
れた。
【００２２】（実施例９）財団法人発酵研究所より分譲
を受けたスクレロチニア・スクレロチオラム（Ｓｃｌｅ
ｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）ＩＦＯ４
８７６を、前記実施例１と同様の方法で菌体培養を実施
して、湿菌体重量および乾燥菌体重量を測定した。シュ
クロース２０％、テトラップ−Ｈシロップ（林原商事株
式会社より購入）６．７％（固形分５％）を含む０．０
５Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７）５０ｍｌに乾燥菌体重量１ｇ
分の湿菌体を加えて、２０℃で５時間反応させた。得ら
れた反応液を９５℃以上で１０分間加熱処理した後、遠
心分離によって反応液上清を得た。得られた反応液上清
を、実施例１と同様の方法で分析した結果、０．２９ｇ
イソマルトシルフラクトシドの生成が認められた。
【００２３】（実施例１０）財団法人発酵研究所より分
譲を受けたシゾサッカロマイセス・ポンブ（Ｓｃｈｉｚ
ｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ）ＩＦＯ０
６３８を、前記実施例１と同様の方法で菌体培養を実施
して、湿菌体重量および乾燥菌体重量を測定した。シュ
クロース２０％、テトラップ−Ｈシロップ（林原商事株
式会社より購入）６．７％（固形分５％）を含む０．０
５Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７）５０ｍｌに乾燥菌体重量１ｇ
分の湿菌体を加えて、２０℃で５時間反応させた。得ら
れた反応液を、９５℃以上で１０分間加熱処理した後、
遠心分離によって反応液上清を得た。 得られた反応液
上清を、実施例１と同様の方法で分析した結果、０．３
３ｇイソマルトシルフラクトシドの生成が認められた。
【００２４】（実施例１１）財団法人発酵研究所より分
譲を受けたマクロフォミナ・ファセオリ（Ｍａｃｒｏｐ
ｈｏｍｉｎａ ｐｈａｓｅｏｌｉ）ＩＦＯ３０９２７
を、前記実施例１と同様の方法で菌体培養を実施して、
湿菌体重量および乾燥菌体重量を測定した。シュクロー
ス２０％、テトラップ−Ｈシロップ（林原商事株式会社
より購入）６．７％（固形分５％）を含む０．０５Ｍ燐
酸緩衝液（ｐＨ７）５０ｍｌに乾燥菌体重量１ｇ分の湿
菌体を加えて、２０℃で５時間反応させた。得られた反
応液を９５℃以上で１０分間加熱処理した後、遠心分離
によって反応液上清を得た。得られた反応液上清を、実
施例１と同様の方法で分析した結果、０．４２ｇイソマ
ルトシルフラクトシドの生成が認められた。
【００２５】（実施例１２）財団法人発酵研究所より分
譲を受けたニューロスポラ・クラッサ（Ｎｅｕｒｏｓｐ
ｏｒａ ｃｒａｓｓａ）ＩＦＯ６９７９を、前記実施例
１と同様の方法で菌体培養を実施して、湿菌体重量およ
び乾燥菌体重量を測定した。シュクロース２０％、テト
ラップ−Ｈシロップ（林原商事株式会社より購入）６．
７％（固形分５％）を含む０．０５Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ
７）５０ｍｌに乾燥菌体重量１ｇ分の湿菌体を加えて、
２０℃で５時間反応させた。得られた反応液を９５℃以
上で１０分間加熱処理した後、遠心分離によって反応液
上清を得た。得られた反応液上清を、実施例１と同様の
方法で分析した結果、０．４３ｇイソマルトシルフラク
トシドの生成が認められた。
【００２６】（実施例１３）財団法人発酵研究所より分
譲を受けたラシオディプロディア・テオブロマ（Ｌａｓ
ｉｏｄｉｐｌｏｄｉａ ｔｈｅｏｂｒｏｍａｅ）ＩＦＯ
３１０５９を、前記実施例１と同様の方法で菌体培養を
実施して、湿菌体重量および乾燥菌体重量を測定した。
シュクロース２０％、テトラップ−Ｈシロップ（林原商
事株式会社より購入）６．７％（固形分５％）を含む
０．０５Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７）５０ｍｌに乾燥菌体重
量１ｇ分の湿菌体を加えて、２０℃で５時間反応させ
た。得られた反応液を９５℃以上で１０分間加熱処理し
た後、遠心分離によって反応液上清を得た。得られた反
応液上清を、実施例１と同様の方法で分析した結果、
０．２７ｇイソマルトシルフラクトシドの生成が認めら
れた。
【００２７】（実施例１４）財団法人発酵研究所より分
譲を受けたトリコデルマ・ビリデ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒ
ｍａ ｖｉｒｉｄｅ）ＩＦＯ３０４９８を、前記実施例
１と同様の方法で菌体培養を実施して、湿菌体重量およ
び乾燥菌体重量を測定した。シュクロース２０％、テト
ラップ−Ｈシロップ（林原商事株式会社より購入）６．
７％（固形分５％）を含む０．０５Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ
７）５０ｍｌに乾燥菌体重量１ｇ分の湿菌体を加えて、
２０℃で５時間反応させた。得られた反応液を９５℃以
上で１０分間加熱処理した後、遠心分離によって反応液
上清を得た。得られた反応液上清を、実施例１と同様の
方法で分析した結果、０．２２ｇイソマルトシルフラク
トシドの生成が認められた。
【００２８】（実施例１５）財団法人発酵研究所より分
譲を受けたペニシリウム・カプスラタム（Ｐｅｎｉｃｉ
ｌｌｉｕｍ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）ＩＦＯ７００５
を、前記実施例１と同様の方法で菌体培養を実施して、
湿菌体重量および乾燥菌体重量を測定した。シュクロー
ス２０％、テトラップ−Ｈシロップ（林原商事株式会社
より購入）６．７％（固形分５％）を含む０．０５Ｍ燐
酸緩衝液（ｐＨ７）５０ｍｌに乾燥菌体重量１ｇ分の湿
菌体を加えて、２０℃で５時間反応させた。得られた反
応液を９５℃以上で１０分間加熱処理した後、遠心分離
によって反応液上清を得た。得られた反応液上清を、実
施例１と同様の方法で分析した結果、０．２５ｇイソマ
ルトシルフラクトシドの生成が認められた。
【００２９】（実施例１６）財団法人発酵研究所より分
譲を受けたサッカロマイコプシス・フィブリゲラ（Ｓａ
ｃｃｈａｒｏｍｙｃｏｐｓｉｓ ｆｉｂｕｌｉｇｅｒ
ａ）ＩＦＯ０１０９を、前記実施例１と同様の方法で菌
体培養を実施して、湿菌体重量および乾燥菌体重量を測
定した。シュクロース２０％、テトラップ−Ｈシロップ
（林原商事株式会社より購入）６．７％（固形分５％）
を含む０．０５Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７）５０ｍｌに乾燥
菌体重量１ｇ分の湿菌体を加えて、２０℃で５時間反応
させた。得られた反応液を９５℃以上で１０分間加熱処
理した後、遠心分離によって反応液上清を得た。得られ
た反応液上清を、実施例１と同様の方法で分析した結
果、１．９５ｇイソマルトシルフラクトシドの生成が認
められた。
【００３０】（実施例１７）財団法人発酵研究所より分
譲を受けたサッカロマイコプシス・フィブリゲラ（Ｓａ
ｃｃｈａｒｏｍｙｃｏｐｓｉｓ ｆｉｂｕｌｉｇｅｒ
ａ）ＩＦＯ１７４４を、前記実施例１と同様の方法で菌
体培養を実施して、湿菌体重量および乾燥菌体重量を測
定した。シュクロース２０％、テトラップ−Ｈシロップ
（林原商事株式会社より購入）６．７％（固形分５％）
を含む０．０５Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７）５０ｍｌに乾燥
菌体重量１ｇ分の湿菌体を加えて、２０℃で５時間反応
させた。得られた反応液を９５℃以上で１０分間加熱処
理した後、遠心分離によって反応液上清を得た。得られ
た反応液上清を、実施例１と同様の方法で分析した結
果、１．７７ｇイソマルトシルフラクトシドの生成が認
められた。
【００３１】（実施例１８）財団法人発酵研究所より分
譲を受けたサッカロマイコプシス・フィブリゲラ（Ｓａ
ｃｃｈａｒｏｍｙｃｏｐｓｉｓ ｆｉｂｕｌｉｇｅｒ
ａ）ＩＦＯ０１０４を、前記実施例１と同様の方法で菌
体培養を実施して、湿菌体重量および乾燥菌体重量を測
定した。シュクロース２０％、テトラップ−Ｈシロップ
（林原商事株式会社より購入）６．７％（固形分５％）
を含む０．０５Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７）５０ｍｌに乾燥
菌体重量１ｇ分の湿菌体を加えて、２０℃で５時間反応
させた。得られた反応液を９５℃以上で１０分間加熱処
理した後、遠心分離によって反応液上清を得た。得られ
た反応液上清を、実施例１と同様の方法で分析した結
果、１．３９ｇイソマルトシルフラクトシドの生成が認
められた。
【００３２】（実施例１９）財団法人発酵研究所より分
譲を受けたサッカロマイコプシス・フィブリゲラ（Ｓａ
ｃｃｈａｒｏｍｙｃｏｐｓｉｓ ｆｉｂｕｌｉｇｅｒ
ａ）ＩＦＯ０１０６を、前記実施例１と同様の方法で菌
体培養を実施して、湿菌体重量および乾燥菌体重量を測
定した。シュクロース２０％、テトラップ−Ｈシロップ
（林原商事株式会社より購入）６．７％（固形分５％）
を含む０．０５Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７）５０ｍｌに乾燥
菌体重量１ｇ分の湿菌体を加えて、２０℃で５時間反応
させた。得られた反応液を９５℃以上で１０分間加熱処
理した後、遠心分離によって反応液上清を得た。得られ
た反応液上清を、実施例１と同様の方法で分析した結
果、１．２１ｇイソマルトシルフラクトシドの生成が認
められた。
【００３３】（実施例２０）財団法人発酵研究所より分
譲を受けたサッカロマイコプシス・フィブリゲラ（Ｓａ
ｃｃｈａｒｏｍｙｃｏｐｓｉｓ ｆｉｂｕｌｉｇｅｒ
ａ）ＩＦＯ０１０３を、前記実施例１と同様の方法で菌
体培養を実施して、湿菌体重量および乾燥菌体重量を測
定した。シュクロース２０％、テトラップ−Ｈシロップ
（林原商事株式会社より購入）６．７％（固形分５％）
を含む０．０５Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７）５０ｍｌに乾燥
菌体重量１ｇ分の湿菌体を加えて、２０℃で５時間反応
させた。得られた反応液を９５℃以上で１０分間加熱処
理した後、遠心分離によって反応液上清を得た。得られ
た反応液上清を、実施例１と同様の方法で分析した結
果、１．１６ｇイソマルトシルフラクトシドの生成が認
められた。
【００３４】（実施例２１）財団法人発酵研究所より分
譲を受けたサッカロマイコプシス・フィブリゲラ（Ｓａ
ｃｃｈａｒｏｍｙｃｏｐｓｉｓ ｆｉｂｕｌｉｇｅｒ
ａ）ＩＦＯ１７４５を、前記実施例１と同様の方法で菌
体培養を実施して、湿菌体重量および乾燥菌体重量を測
定した。シュクロース２０％、テトラップ−Ｈシロップ
（林原商事株式会社より購入）６．７％（固形分５％）
を含む０．０５Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７）５０ｍｌに乾燥
菌体重量１ｇ分の湿菌体を加えて、２０℃で５時間反応
させた。得られた反応液を９５℃以上で１０分間加熱処
理した後、遠心分離によって反応液上清を得た。得られ
た反応液上清を、実施例１と同様の方法で分析した結
果、１．０９ｇイソマルトシルフラクトシドの生成が認
められた。
【００３５】（実施例２２）財団法人発酵研究所より分
譲を受けたサッカロマイコプシス・フィブリゲラ（Ｓａ
ｃｃｈａｒｏｍｙｃｏｐｓｉｓ ｆｉｂｕｌｉｇｅｒ
ａ）ＩＦＯ１６６５を、前記実施例１と同様の方法で菌
体培養を実施して、湿菌体重量および乾燥菌体重量を測
定した。シュクロース２０％、テトラップ−Ｈシロップ
（林原商事株式会社より購入）６．７％（固形分５％）
を含む０．０５Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７）５０ｍｌに乾燥
菌体重量１ｇ分の湿菌体を加えて、２０℃で５時間反応
させた。得られた反応液を、９５℃以上で１０分間加熱
処理した後、遠心分離によって反応液上清を得た。 得
られた反応液上清を、実施例１と同様の方法で分析した
結果、０．９０ｇイソマルトシルフラクトシドの生成が
認められた。
【００３６】（実施例２３）財団法人発酵研究所より分
譲を受けたサッカロマイコプシス・フィブリゲラ（Ｓａ
ｃｃｈａｒｏｍｙｃｏｐｓｉｓ ｆｉｂｕｌｉｇｅｒ
ａ）ＩＦＯ１７１１を、前記実施例１と同様の方法で菌
体培養を実施して、湿菌体重量および乾燥菌体重量を測
定した。シュクロース２０％、テトラップ−Ｈシロップ
（林原商事株式会社より購入）６．７％（固形分５％）
を含む０．０５Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７）５０ｍｌに乾燥
菌体重量１ｇ分の湿菌体を加えて、２０℃で５時間反応
させた。得られた反応液を９５℃以上で１０分間加熱処
理した後、遠心分離によって反応液上清を得た。得られ
た反応液上清を、実施例１と同様の方法で分析した結
果、０．８７ｇイソマルトシルフラクトシドの生成が認
められた。
【００３７】（実施例２４）財団法人発酵研究所より分
譲を受けたスタキボトリス・カルタルム（Ｓｔａｃｈｙ
ｂｏｔｒｙｓ ｃｈａｒｔａｒｕｍ）ＩＦＯ９３５５
を、前記実施例１と同様の方法で菌体培養を実施して、
湿菌体重量および乾燥菌体重量を測定した。シュクロー
ス２０％、テトラップ−Ｈシロップ（林原商事株式会社
より購入）６．７％（固形分５％）を含む０．０５Ｍ燐
酸緩衝液（ｐＨ７）５０ｍｌに乾燥菌体重量１ｇ分の湿
菌体を加えて、２０℃で５時間反応させた。得られた反
応液を９５℃以上で１０分間加熱処理した後、遠心分離
によって反応液上清を得た。得られた反応液上清を、実
施例１と同様の方法で分析した結果、０．３３ｇイソマ
ルトシルフラクトシドの生成が認められた。
【００３８】
【発明の効果】本発明によれば、キャンディダ（Ｃａｎ
ｄｉｄａ）属、リポマイセス（Ｌｉｐｏｍｙｃｅｓ）
属、サッカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）
属、サッカロマイコプシス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｏ
ｐｓｉｓ）属、トリコスポロン（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒ
ｏｎ）属、イルペクス（Ｉｒｐｅｘ）属、スクレロチニ
ア（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ）属、シゾサッカロマイセ
ス（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属、マ
クロフォミナ（Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｉｎａ）属、ニュー
ロスポラ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ）属、ラシオディプロ
ディア（Ｌａｓｉｏｄｉｐｌｏｄｉａ）属、トリコデル
マ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属、ペニシリウム（Ｐｅ
ｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属、アミロマイセス（Ａｍｙｌｏ
ｍｙｃｅｓ）属、スタキボトリス（Ｓｔａｃｈｙｂｏｔ
ｒｙｓ）属のいずれかに属する菌株の生産する糖転移酵
素をシュクロースとグルコシル基供与体を含む基質溶液
に作用させることにより、シュクロースの齲蝕誘発性を
抑制する代表的甘味料イソマルトシルフラクトシドを、
新規な方法で製造することができる。

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 シュクロースとグルコシル基供与体を含
    む基質溶液に、キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属、リ
    ポマイセス（Ｌｉｐｏｍｙｃｅｓ）属、サッカロマイセ
    ス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属、サッカロマイコ
    プシス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｏｐｓｉｓ）属、トリ
    コスポロン（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ）属、イルペク
    ス（Ｉｒｐｅｘ）属、スクレロチニア（Ｓｃｌｅｒｏｔ
    ｉｎｉａ）属、シゾサッカロマイセス（Ｓｃｈｉｚｏｓ
    ａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属、マクロフォミナ（Ｍａ
    ｃｒｏｐｈｏｍｉｎａ）属、ニューロスポラ（Ｎｅｕｒ
    ｏｓｐｏｒａ）属、ラシオディプロディア（Ｌａｓｉｏ
    ｄｉｐｌｏｄｉａ）属、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄ
    ｅｒｍａ）属、ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕ
    ｍ）属、アミロマイセス（Ａｍｙｌｏｍｙｃｅｓ）属、
    スタキボトリス（Ｓｔａｃｈｙｂｏｔｒｙｓ）属のいず
    れかの属に属する菌株が生産する糖転移酵素を作用させ
    ることを特徴とするイソマルトシルフラクトシドの新規
    な製造方法。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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JPH08163994A (ja) * 1994-12-15 1996-06-25 Asahi Chem Ind Co Ltd イソマルトシルフラクトシドの改良製造方法

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH08163994A (ja) * 1994-12-15 1996-06-25 Asahi Chem Ind Co Ltd イソマルトシルフラクトシドの改良製造方法

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