JPH07154A - ペクチナーゼを希ガスとともに使用する工程を改良するための方法 - Google Patents

ペクチナーゼを希ガスとともに使用する工程を改良するための方法

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JPH07154A
JPH07154A JP29568893A JP29568893A JPH07154A JP H07154 A JPH07154 A JP H07154A JP 29568893 A JP29568893 A JP 29568893A JP 29568893 A JP29568893 A JP 29568893A JP H07154 A JPH07154 A JP H07154A
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cuvette
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gases
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Kevin Spencer
ケビン・スペンサー
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LAir Liquide SA pour lEtude et lExploitation des Procedes Georges Claude
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Air Liquide SA
LAir Liquide SA pour lEtude et lExploitation des Procedes Georges Claude
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Abstract

(57)【要約】 【目的】本発明の目的は、希ガスと共に、ペクチナーゼ
酵素を用いて、加工工程を改善する方法を提供すること
にある。 【構成】ペクチナーゼ活性を有する少なくとも１種の酵
素を用いて酵素工程を改善するための方法であって、該
工程の間に少なくとも１種の酵素を希ガス、希ガスの混
合物又は少なくとも１種の希ガスを含有するガス混合物
と接触させることが必要である方法。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ペクチナーゼを希ガス
とともに使用する工程を改良するための方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】希ガス、ヘリウム（Ｈｅ）、ネオン（Ｎ
ｅ）、アルゴン（Ａｒ）、クリプトン（Ｋｒ）、キセノ
ン（Ｘｅ）及びラドン（Ｒａ）の他の原子と化学結合す
る能力は極めて制限されている。一般に、クリプトン、
キセノン及びラドンのみは、フッ素及び酸素のような非
常に反応性の他の原子と反応を起こす。このようにして
形成された化合物は、爆発するほどに不安定である。F.
A.Cotton及びG.Wilkinson によるAdvanced inorganic C
hemistry （Wiley, 第３版）を参照。しかし、一般に
希ガスは化学的に不活性であるが、キセノンは麻酔のよ
うな生理学的な効果を示すことが知られている。
【０００３】他の生理学的効果も窒素のような他の不活
性ガスで観測されている。例えば、窒素が深海でのダイ
ビングにおいて高圧下で使用された場合、昏睡状態を起
こすことが知られている。Schreiner の米国特許３，１
８３，１７１では、アルゴン及び他の不活性ガスが菌類
の成長速度に影響すること、並びにアルゴンが、魚若し
くは海産物の保存を改善することが知られていると報告
している。Schvesterの米国特許４，９４６，３２６、
ＪＰ５２１０５２３２、ＪＰ８０００２２７１及びＪＰ
７７０２７６９９。しかし、これらの観測を明確に理解
することが基本的に欠如していることが、このような結
果を解明することを、もし不可能でなければ、困難にし
ている。更に、酸素を含んだ多くのガスの混合物を研究
に使用するという事実によって、これらの観測の意味が
更に曖昧になっている。更に、これらの研究の幾つか
は、高圧酸素圧力下及び冷凍温度で行われている。この
ような高圧下では、観測結果が、細胞組織及び酵素自信
に圧力ダメージを起こさせるように思われる。
【０００４】例えば、１９６４〜１９６６年にSchreine
r は、特に麻酔作用に関して、しかも深海でのダイビン
グ、海底及び宇宙船のための適切に封じ込められた大気
の開発に関連した研究において不活性ガスの生理学的効
果を報告している。この研究の結果は、３つのレポート
にまとめられている。これらは各々、海軍省、海軍探査
局（the Office of Naval Reseach ）で作成され、「テ
クニカルレポート。アルゴン、ヘリウム及び希ガスの生
理学的効果。」と題されてる。Ｎｏｎｒ協定４１１５
（００）、ＮＲ：１０２−５９７。この研究の後者の３
つの概要及び要約が刊行されている。
【０００５】１の要約、即ち「酵素的に活性なタンパク
における不活性ガス相互作用及び効果」Fed. Proc. 26:
650 (1967)には、希ガス及び他の不活性ガスが上昇する
分圧で、損傷を受けていない動物（昏睡状態）及び細菌
及び哺乳類の細胞系（成長阻害）において生理学的な効
果を起こすという観測が再度述べられている。
【０００６】第二の要約、即ちIntern. Congr. Physil
o. Sci., 23rd, Tokyo 中の「化学的に不活性なガスの
生物学的活性に対する可能な分子メカニズム」には、不
活性ガスが、高圧で、種々のレベルの細胞組織において
生物学的な活性を示すという観測が再度述べられてい
る。
【０００７】また、希ガスの一般的な生物学的作用が、
Schreiner によって示されている。この中で、彼の以前
の研究の特徴的な結果が再度述べられている。「ヘリウ
ム−キセノン系の元素の一般的生物学的効果」Fed. Pro
c. 27: 872-878 (1968) 。
【０００８】しかし、１９６９年にBehnke等はSchreine
r の主な結果の誤りを明らかにした。Behnke等は、Schr
einer によって先に報告された効果が再現できず、単に
静水圧で起こること、即ち希ガスの酵素への影響は証明
されなかった。「高圧下において不活性ガスによって影
響される酵素−触媒反応」、J. Food Sci. 34: 370-37
5。
【０００９】本質的に、Schreiner の研究は、化学的に
不活性なガスが細胞部位に対して酸素分子と競合すると
いう仮説、及び酸素置換が不活性ガスに対する酸素の濃
度比に依存するという仮説を基にしている。観測される
最も大きな効果（阻害効果のみが観測される）が、亜酸
化窒素で観測され、酸素分圧に依存しないことが見出さ
れたので、この仮説は全く証明されなかった。更に、観
測される阻害は、添加される亜酸化窒素の気圧当たりわ
ずか１．９％であった。
【００１０】Schreiner の以前の研究の誤りを明かにす
るために、Behnke等は、酵素ヘの高い静水圧の影響を独
立に試験し、Schreiner によって得られた結果の再現を
試みた。Behnke等は、窒素若しくはアルゴンの増加した
圧力が、キモトリプシン、転化酵素及びチロシナーゼの
わずかな阻害を観測するために必要である以外、Schrei
ner の発見とは全く対照的に更に阻害の増加は起こらな
かった。
【００１１】Behnke等の見い出したことは、圧力の安定
化でもたらされる簡単な初期の静水圧での阻害によって
説明しうる。明かにこの発見は、Schreiner によって提
案された化学的−Ｏ2 ／不活性ガス相互依存性によって
説明することができない。Behnke等は、高圧不活性ガス
が、酵素を物理的に変化する以外、酸素の利用度を減少
することによって、非流動性の系（即ち、ゼラチン）で
チロシナーゼを阻害すると結論した。この結果は、Schr
einer の発見と正反対である。
【００１２】Behnke等による反論に加えて、Schreiner
によって報告された結果は、同様に他の結果の解明を困
難にしている。
【００１３】第１に、非常に高圧で全ての分析が行われ
ており、静水圧の効果を制御していない。
【００１４】第２に、多くの例で、種々の希ガス間、及
び希ガスと窒素間で十分な差が観測されなかった。
【００１５】第３に、例えば、使用される酵素の純度の
ような、作用及び阻害の酵素モードの情報がこれらの研
究の時点で非常に乏しかった。酵素活性が消耗されるこ
と、又は有効性に関して異なったガスを分類するために
測定が十分な分解能で行われていることを確かめること
は不可能である。更に、作用の任意の特異的なモードが
試験し得ない仮説としてのみ説明されていた。
【００１６】第４に、種々のガスの溶解度の差が、制御
されておらず、また結果にも考慮されていなかった。
【００１７】第５に、全ての試験が、空気の１気圧に加
えて不活性ガスの高圧力を使用して行われており、これ
によって、酸素圧の制御が不十分となる。
【００１８】第６に、報告された全てのガスの効果は、
阻害のみである。
【００１９】第７に、研究の全ての手順が完全に開示さ
れておらず、実験的にコントロールされていない。更
に、反応の全コースに従い酵素反応の開始の後の長期の
遅れが除外されており、この結果として、読みうる最も
高い速度変化の損失が生じている。
【００２０】第８に、報告されたデータの範囲は、少量
の観測を基にした高い可変性を有しており、従って、意
義が失われている。
【００２１】第９に、観測される阻害のレベルが、高圧
下でも非常に低くい。
【００２２】第１０に、酵素の濃度への依存性を報告し
た研究は、十分に利用できる形態で報告されていない。
【００２３】第１１に、低圧、即ち＜２気圧での不活性
ガスの阻害可能性の全ての報告は、高圧測定から補外さ
れた系を基にして求められて折り、実際のデータではな
い。
【００２４】最後に、幾つかの重要な点、主に高圧の効
果が小さいという点、及びSchreiner によっては制御さ
れていなかった静水圧の効果が、これらの研究で得られ
た不正確な結果の一次要因であるという点で、Behnke等
の結果が、Schreiner の報告した結果と明らかに矛盾す
ることを再度言っておくことは価値がある。
【００２５】加えて、キセノン、亜酸化窒素及びハロタ
ンは、粒子状のシアリダーゼの活性を増強することが、
Sandhoff等のFEBS Letters, vol. 62, No. 3 (1976年3
月）で報告されているが、これらの結果は、この研究で
非常に不純な酵素を使用しているために疑わしく、これ
らの結果は、恐らくこの粒子中のオキシダーゼを阻害す
るためである。
【００２６】上記の特許及び報告をまとめるため、並び
にこれらに関連した他の事項を述べるために、以下のこ
とを記載する。
【００２７】Behnke等（1969）には、酵素触媒反応が高
圧下で不活性ガスによって影響されることが開示されて
いる。J. Food Sci. 34: 370-375。
【００２８】Schreiner 等（1967）には、不活性ガスは
酵素的に活性な蛋白に相互作用し、影響を与えることが
開示されている。要約Ｎｏ．２２０９。Fed. Proc. 26:
650。
【００２９】Schreiner, H.R. 1964, テクニカルレポー
トには、アルゴン、ヘリウム及び希ガスの薬理学的効果
が開示されている。Ｎｏｎｒ協定4115(00),NR: 102-59
7。海軍探査局ワシントンＤ．Ｃ．。
【００３０】Doebbler, G.F.等、Fed. Proc. Vol.26,
p. 650(1967) には、Ｋｒ、Ｘｅ、ＳＦ6 、Ｎ2 Ｏ、Ｈ
ｅ、Ｎｅ、Ａｒ及びＮ2 ガスを使用する幾つかの異なっ
た酵素に関する圧力、又は減少された酸素圧の影響が開
示されている。全てのガスは、これらの影響に関して等
しいとみなされた。
【００３１】Colten等、Undersea Biomed Res. 17(4),
297-304 (1990)には、グルタミン酸デカルボキシラーゼ
酵素（the enzyme glutamete decarboxylase）に関して
高圧でのヘリウムと酸素の併用効果が開示されている。
特に、高圧酸素下でのヘリウム及び酸素の両方の阻害効
果、及び酸素の化学的阻害効果のみが記載されている。
【００３２】以上のようではあるが、現在酵素を活性は
幾つかの方法で阻害され得ることが知られている。例え
ば、多くの酵素は、それらの正常の基質に構造的に関連
し得る特異的な毒素によって阻害され得る。
【００３３】この他には、多くの異なった試薬が、標的
酵素の特異的な不活性化因子となることが知られてい
る。これらの試薬は、一般に酵素の活性部位で化学的な
修飾を引き起こし、触媒活性の損失、活性部位指向性不
可逆的不活性化、又はアフィニティーラベルを誘導して
いる。C.Walsh の「酵素反応メカニズム(Enzymatic Rea
ction Mechamisms) 」（W.H.Freeman & Co., 1979 ）参
照。この他には、幾つかの多酵素シーケンスは、調節酵
素若しくはアロステリック酵素として知られる特別の酵
素によって調節されることが知られている。A.L.Lening
erのBioenergetics （Benjamin/Commings Publishing C
o., 1973）参照。
【００３４】ペクチンエステラーゼ（ＥＣ３．１．１．
１１）、エンド−ポリガラクツロナーゼ（ＥＣ３．２．
１．１５）、エンド−ペクチンリアーゼ（ＥＣ４．２．
２．１０）は、フルーツ加工の重要なペクチックエンザ
イムである。ペクチンエステラーゼは、ペクチンを脱エ
ステル化し、メタノールとペクチン酸を生成する。ＰＧ
Ａ及びペクチンリアーゼは、グリコシル結合をそれらの
好ましい基質に分解するデポリメラーゼである。ＰＧＡ
は低エステル化ペクチンを加水分解する。ＰＧＡとペク
チンエステラーゼの複合活性も高メトキシペクチンを解
重合し得る。
【００３５】これらの酵素は、専らフルーツの加工に使
用され、フルーツの貯蔵及び輸送における熟しはじめと
熟す速度の重要な決定因子である。従って、工業的な応
用は、外から加えられる酵素又は製品中に天然に存在す
る酵素に依存し得る。更に、これらの酵素は、非常に広
い有用性を有している。以下に示されたこれらの機能及
び用途は例示の目的のみであり、制限を意図するもので
はない。
【００３６】例えば、リンゴジュースの製造のような種
々の加工法において、濾過を容易にし、濃縮ジュースの
ゲル化を防止するために、ペクチナーゼを抽出されたジ
ュースに加える。また、ペクチナーゼは果肉に加えら
れ、圧搾での収率を改善する。更にペクチナーゼは果肉
を液化するために加えれる。
【００３７】加工されたフルーツは、更に、ジャム、ゼ
リー、乾燥及びロールされた食品、ペースト、及び他の
多くの製品に加工され得る。
【００３８】フルーツネクターは、フルーツ成分、糖及
び時には酸の含量が高いものである。濁ったネクター
（アプリコット、マンゴー）の重要な因子は、それらの
懸濁の安定性である。ペクチックエンザイムは濁ったネ
クターの安定化に使用される。添加された菌性のペクチ
ンエステラーゼを含有するポリガラクツロナーゼ、及び
添加されたエキソ−アラバナーゼを含有するポリガラク
ツロナーゼ、又は純粋なペクチンリアーゼは懸濁を安定
化し、ゲル化を防止し、細胞壁を破壊する。
【００３９】一般に、フルーツの熟成において、幾つか
の酵素が細胞壁の分解に関係している。例えば、これら
にはＰＥ（ペクチンエステラーゼ）、ＰＧＡ（ポリガラ
クツロナーゼ）、ＰＡＬ（ペクチンリアーゼ）があり、
及び細胞壁での変化に関連する。これらの変化は以下の
表１にまとめられている。
【００４０】
【表１】 上記の細胞壁の変化は、基本的には任意のフルーツの加
工工程及び熟成工程で重要になる。
【００４１】ポリガラクツロナーゼ： トマトの熟成：緑色トマトでは非常に低レベルで見出だ
された。熟成したトマトではより高濃度（６００×）で
あった。
【００４２】モモの熟成：ＰＧＡ活性は、熟成のはじめ
に見出され、熟成の間に鋭く増加した。
【００４３】他のフルーツの熟成：ＰＧＡ活性は、細胞
分裂の段階で、西洋なしに存在する。この活性は、大き
くなる間は減少し、熟成の間は顕著に増加する。ＰＧＡ
は、パパイヤ、熟成したアボガド、なつめヤシの実、熟
成したリンゴ及びマンゴーに見出される。また、キュウ
リにも見出される。
【００４４】他の植物組織中：ニンジンの根、柑橘類の
葉の外植片、トウモロコシ、豆、カラス麦及びえんどう
豆のシーリング（sealing ）（それらの蒸気及び葉の組
織にも見出される）。（これらはほんの僅かな例であ
る。）現在、ペクチンエステラーゼ、ペクチナーゼ、及
びポリガラクツロナーゼのコントロールは、外部から加
えられる物理的な条件及び酵素レベルを操作する以外不
可能である。しかし、追加の及びより確実な制御手段
が、フルーツの加工業者、栽培者、及び荷主に極めて有
効である。
【００４５】
【本発明の概要】従って、本発明の目的は、希ガスと共
に、ペクチナーゼ酵素を用いて、加工工程を改善する方
法を提供することにある。
【００４６】上記の目的及び他の目的は、ペクチナーゼ
活性を有する少なくとも１種の酵素を使用する加工工程
を改善するための方法であって、加工工程の間にペクチ
ナーゼ活性を有する少なくとも１種の酵素を希ガス、希
ガスの混合物、又は少なくとも１種の希ガスを含有する
ガス混合物と接触させることを具備した方法によって解
決される。
【００４７】
【好ましい態様の詳細な説明】本発明に従って、驚くべ
きことに、希ガスが、ペクチナーゼ活性を有する酵素の
速度と収率の両方をコントロールするするために有利に
使用されうることが見出された。従って、本発明は、ペ
クチナーゼ、ペクチンエステラーゼ、及び／又はポリガ
ラクツロナーゼ活性で最も有利に使用される。本発明
は、貯蔵若しくは輸送の間、又はフルーツや野菜を食品
に加工する間にフルーツや野菜の熟成をコントロールす
る驚くほど有効な方法を提供する。
【００４８】一般に、本発明は、ペクチナーゼ、ペクチ
ンエステラーゼ、及び／又はポリガラクツロナーゼ活性
が要求されるどのような適用にも使用し得る。
【００４９】従って、アルゴン、ネオン、クリプトン、
又はキセノンの、単独、又はこれらの混合物若しくは他
のガスとの混合物での適用は、ペクチナーゼ、ペクチン
エステラーゼ、及びポリガラクツロナーゼ酵素の活性に
直接影響を及ぼすことが見出された。各々のガスの最大
の効果は、種々の温度、圧力、及び他の物理条件で測定
された。従って、これらの酵素の活性を予想し得る方法
でコントロールすることが可能になる。
【００５０】従って、フルーツの栽培者及び荷主は、大
気を含有する希ガスを普通に適用することによってフル
ーツの熟成の段階を直接にコントロールすることができ
る。
【００５１】更に、ペクチナーゼ、ペクチンエステラー
ゼ、又はポリガラクツロナーゼを基にした何れの工程
も、適切なガス混合物及び適用条件を選択することによ
って増強され又は阻害され得る。例えば、このような工
程は、最終のペクチンのレベルをコントロールし、それ
故、加工の間及び加工の後にフルーツジュースに懸濁を
生じさせる。
【００５２】また、ここで用いられる、「希ガス」の語
には、アルゴン、キセノン、クリプトン、及びネオンが
含まれることを意味する。ヘリウムは役に立たない。ラ
ドンは放射性であり、従って有用ではない。
【００５３】本発明に従えば、アルゴン、キセノン、ク
リプトン、及びネオンは単独でも又は何れの組み合わせ
でも使用し得る。例えば、アルゴン−キセノン、クリプ
トン−キセノン若しくはキセノン−ネオンの二種混合物
を使用し得、又は、例えばアルゴン−キセノン−クリプ
トンの三種混合物を使用し得る。
【００５４】上記のように、単純な希ガス又は希ガスの
混合物を使用し得る。しかし、１以上のキャリアーガス
と共に少なくとも１つの希ガスを含有する混合物も使用
し得る。キャリアーガスには、例えば窒素、酸素、二酸
化炭素、亜酸化窒素及びヘリウムも含まれる。
【００５５】一般に、本発明の効果は、ほぼ真空近傍、
即ち約１０-8torrから約１００気圧の圧力範囲で得られ
る。しかし、一般には、約０．００１から約３気圧の間
の圧力が使用されることが好ましい。更に、飲料及び食
用油の貯蔵、並びに加工の異なった段階の貯蔵のための
操作可能で好ましい温度と同様な温度範囲が一般に使用
される。例えば、このような温度は、冷凍温度から調理
温度の範囲にある。しかし、低温及び周囲の温度が一般
に貯蔵に使用される。
【００５６】先に記載したように、アルゴンのような単
一の希ガス、又は希ガスの混合物は、本発明に従って使
用される。しかし、少なくとも１種の希ガス及び１種以
上のキャリアーガスを含有する混合物も使用し得る。
【００５７】１以上の希ガス成分の保存効果は、酸素の
ようなキャリアーガスのいずれの酸化的効果よりも優っ
ている。
【００５８】例えば、本発明に従えば、全容積を基準に
した容積％で約９０％Ｋｒ及び１０％Ｘｅの組成を有す
るか、若しくはＮｅ：Ｈｅ＝１：１混合物の組成を有す
る安価な生産プラントオフストリームガスを使用するこ
とが有利である。
【００５９】脱酸素化された空気に１以上の効果的な量
の希ガスを含有する混合物を使用することも有利であ
る。一般にここで使用される「脱酸素化された空気」の
語は、１５容積％又は１０容積％以下、好ましくは５容
積％以下の酸素を含量する空気を意味する。
【００６０】一般に本発明に従えば、温度は生じる効果
において重要な変数となる。更に、本発明の効果は、一
般に圧力が増加するにつれて増加する。更に、驚くこと
に、希ガスの混合物は、添加物よりもよい結果で使用さ
れ得ることが見出された。
【００６１】本発明の他の側面に従えば、ペクチナーゼ
活性を有する少なくとも１種の酵素を使用して、酵素工
程を改善するための方法が提供される。この方法は、ガ
ス、又はガス混合物を、含有手段中の酵素工程のための
反応若しくは加工の１以上の媒体に注入するか、酵素工
程のための含有手段に注入することを必要とする。ガス
又はガス混合物は、アルゴン、クリプトン、キセノン、
及びネオン、並びにそれらの混合物より成る群から選択
される元素を含有する。実質的には、反応媒体又は加工
媒体をガス又はガス混合物で飽和し、含有手段の容積全
体で実質的に飽和を維持し、酵素工程の継続の間は、実
質的に全てペクチナーゼ活性を有する酵素を使用する。
【００６２】タンク若しくは他の含有手段において反応
媒体若しくは加工媒体上の空間を単に覆う代わりに、ア
ルゴン、クリプトン、キセノン、ネオン、及びこれらの
混合物より成る群から選択される元素を含有したガス若
しくはガス混合物を、反応媒体若しくは加工媒体に散布
し、及び／又は反応媒体若しくは加工媒体上に注入し、
該ガス若しくはガス混合物で反応媒体を飽和又は実質的
に飽和する場合、酵素工程に関する制御の限界を実質的
に改善することが可能になる。特に、飽和又は実質的な
飽和が、貯蔵容器の容積全体、及び酵素工程を継続する
実質的にすべての期間で維持される場合に改善が可能と
なる。
【００６３】「実質的に飽和」という語は、反応媒体を
前記ガス若しくはガス混合物（即ち、前記反応媒体若し
くは加工媒体に溶解された最大量のガスを有するもの）
で完全に及び／又は一定に飽和することが可能であるこ
とを意味する。通常、８０％以上が、反応媒体の飽和の
最適レベルであると考えられるが、反応媒体を、その
（完全な）飽和レベルの５０％以上、好ましくは７０％
以上まで飽和することが必要であると考えられる。もち
ろん過飽和することも可能である。このことは、容器中
の反応媒体の貯蔵期間中に、反応媒体が希ガスで少なく
とも時折飽和されないか、又は反応媒体が大体におい
て、実質的にかなり長く飽和されたままである場合で
も、本発明に従った結果が通常得られることを意味す
る。容器の全容積が、前記のガス若しくはそれらのガス
混合物の１つで飽和若しくは実質的に飽和されることが
重要であると思われるが、その容積の一部が、好ましく
は制限された期間飽和されていない場合、又はその容積
の一部が、容器中の反応媒体の容積の他の一部分よりも
飽和若しくは実質的に飽和されていない場合には、本発
明に従った結果を得ることは事実上可能である。
【００６４】本発明の利益を得るためには、少なくとも
１種の上記ガスが存在しなければならないが、例えば本
発明の経済的価値を保持するために、前記ガスを幾つか
の他のガスで希釈してもよい。希釈するガスは、好まし
くは、窒素、酸素、亜酸化窒素、空気、ヘリウム又は二
酸化炭素を包含する群から選択される。酸素を含有する
ガス、若しくは二酸化炭素のような他の反応性のガスの
場合には、これらの分解する性質は、これらのガスが５
０％以上、あるいは３０％以上を含有する混合物中で
も、確実に希ガスの効果を妨害するようになる。当業者
によって容易に決定し得るガスのタイプ及び条件に依存
しするが、これらの混合物が、０％から１０％vol のこ
れらの他のガスを含有する場合、先に述べられた希ガス
は、まだ極めて効果的であるり、１０％と２０％vol の
間でも通常まだ効果的である。
【００６５】窒素及び／又はヘリウムガスの場合、混合
物中のＡｒ、Ｎｅ、Ｋｒ、Ｘｅより成る希ガスの効果
は、混合物中のその濃度に直線的に比例する。このこと
は、窒素及び／又はヘリウムが、ペクチナーゼ活性を有
する酵素を実質的に左右する効果を有しないという証拠
になる。従って、希ガス並びに窒素及び／又はヘリウム
の混合物は、何れの量（容積％）の窒素及び／又はヘリ
ウムをも含有しうるが、特にＡｒ、Ｎｅ、Ｋｒ、及びＸ
ｅより成る群から選択される希ガスの比率が低くなるに
つれて反応媒体の飽和又は実質的な飽和に達するのに必
要な時間が長くなる。
【００６６】活性ガス（Ａｒ、Ｋｒ、Ｘｅ、及びＮｅ）
のうち、アルゴンは他の活性ガスよりも安価であるの
で、アルゴンを使用することが好ましい。しかし、アル
ゴン及び／又はクリプトン及び／又はキセノンは、少な
くともアルゴン単独と同程度に効果的である。９０から
９９％vol.のアルゴン及び１から１０％のＸｅ及び／又
はＫｒを含有する混合物が、更なる例で例示されるよう
に（この混合物が窒素、ヘリウム、若しくは亜酸化窒素
で希釈されていてもいなくても）通常最も効果的であ
る。先に示した活性ガスと窒素との効果の差は、アルゴ
ンと酸素若しくは二酸化炭素との混合物が、アルゴン単
独と同様の効果（減少されるが）を有するという事実に
よっても立証される。一方、酸素若しくは二酸化炭素単
独と比べて、酸素若しくは二酸化炭素と混合された窒素
が保護効果又は保存効果を有しないことが立証されてい
る。
【００６７】概して言えば、Ｘｅが本発明の最も効果的
なガスであり、次にＫｒ、Ａｒ、及びＮｅが続く。純
粋、又はＮ2 、Ｈｅ、Ｎ2 Ｏ（空気、酸素若しくは少量
の水素さえも）で希釈された適切な混合物のうちには、
少量のアルゴン及び／又は酸素（２％vol.以下）又は窒
素（１％vol.以下）と共に、Ｎｅ及びＨｅが約５０％vo
l.含有されるＮｅ／Ｈｅ混合物、並びに約５〜１０％vo
l.のＸｅ及び約９０〜９５％vol.のＫｒを含有するＫｒ
／Ｘｅ混合物がある。
【００６８】本発明が行われる温度は、通常約０℃から
６０℃、好ましくは約１０℃から３０℃である。
【００６９】例えば、スプレーすることによるガス又は
ガス混合物の反応媒体及び／又は容器への注入は、通常
約１気圧で行われるが、２又は３気圧でも行ない得る。
一方、飽和は、より高圧に増加される。容器中のワイン
では、上記ガスの圧力は、どのような場合でも好ましく
は１０気圧よりも低くすべきである。３気圧よりも低く
該圧力を維持することが、通常受け入れられている。
【００７０】反応媒体の飽和若しくは実質的な飽和は、
当業者によって周知の種々の方法によって測定され得
る。これには、熱重量分析又は質量変化率計量（mass c
hangeweighting ）が含まれるが、これらに限定されな
い。
【００７１】ガスの検出、定性、及び定量測定に利用可
能な標準法が種々あり、液体サンプルへの希ガスの飽和
の程度の決定に非常によく適しているものが幾つかあ
る。
【００７２】サンプルは、一般に、コントロールとして
ゼロ％飽和にするために完全に排気される。次にこのよ
うなサンプルは、追加の希ガスがサンプルと接触して貯
蔵器から消失しないように希ガスと接触することにより
完全に飽和され得る。このような飽和されたサンプル
は、次に、減圧排気でトラップするか、又は温度を上昇
することによって、これらのガス含有物を追い払い、前
記ガスサンプルをは定性的及び定量的に同定する。分析
はトラップされたガス、貯蔵器のガス又は幾つかのガス
の他のヘッドスペースで行われ、サンプルを直接分析し
ない。
【００７３】サンプルを直接分析する方法も利用でき、
これには包括的なＧＣ／ＭＳ分析、即ち質量若しくは熱
量に因るもの、又はＧＣ分析と測定基準との比較が含ま
れる。
【００７４】最も簡単な方法はＧＣ／ＭＳ（ガスクロマ
トグラフィー／マススペクトロメトリー）であり、これ
は直接にガス組成を測定する。一連のガス及びガス混合
物に対して、与えられたサンプルの基準吸収曲線を作成
することによって、どの時点での飽和度でも正確に決定
することができる。
【００７５】ＧＣ／ＭＳはサンプルの上部のヘッドスペ
ースのようなガス自身に適用される。この方法は、サン
プルから遊離されるガス又は混合物の組成及び量を決定
するため、又は逆に、ガスの消失を起こすことによって
サンプルに吸収されるガス又は混合物の組成及び量を決
定するために使用され得る。
【００７６】適切なＧＣ／ＭＳには、例えば、直径０．
３２mm及び長さ２５メーターの５オングストロームの浸
透層開放平板モレキュラーシーブ(porous layer open t
ubular molecular sieve) のキャピラリーガラスカラム
を用いることが含まれており、等温的に、例えば７５℃
で分離を達成するか、又は与えられたガス若しくは混合
物に対して最適化された任意の幾つかの温度傾斜プログ
ラム、例えば３５〜２５０℃で分離を達成する。この場
合、超高純度のヘリウム又は水素キャリアーガスを、例
えば１．０cc/ 分の流速で使用し、ガスをそれらのイオ
ン性及びサンプル中の定量的な存在を基にして決定し、
それらの独特な質量スペクトルによって特徴付ける。
【００７７】適切な実験条件には、例えば以下のことが
含まれる。与えられたサンプルを真空下に完全に排気
し、吸収及び溶解されたガスを全て除去する。次いで、
ガス若しくは混合物をサンプルに加え、 ａ）加えられたガスからの消失として各々の成分の吸入
速度を測定すること、及び／又は ｂ）平衡後のガスのヘッドスペースの最終組成を測定す
る。両測定は、ＧＣ／ＭＳによって行われ、個々の方法
は、バッチ及び連続モードの操作が使用され得る。
【００７８】この分析を簡略化するには、熱伝導検出器
を備えたＧＣのみを使用する必要がある。ここで、ガス
及び混合物の定量及び特徴化がマススペクトル分析を用
いずに達成されるように、ガスの飽和過程の十分な理
解、及び校正曲線の作成がなされる。このような装置
は、相対的に安価であり、適当である。
【００７９】更なる簡略化は、種々のガス若しくは混合
物の取込みに関する、サンプル中の質量変化の測定に専
ら依存し、これは文献から利用できる基準曲線又は吸収
データの使用に依存する。
【００８０】このような他の質量測定の方法は、熱重量
分析であり、これは非常に正確である。この方法では、
サンプルは、ガスで飽和され、質量変化が熱変化と相互
関係にある。
【００８１】本発明を一般的に説明するために、幾つか
の例を参照するが、これは例示の目的のためにのみ与え
られるものであり、制限することを意図するものではな
い。
【００８２】
【実施例】
例１ ペクチンエステラーゼ（Ｐ−５４００）／ｐ−ニトロフ
ェニル酢酸（Ｎ−８１３０）ガス実行プロトコル 目的：１０℃、２５℃及び３５℃（１種類の基質濃度）
でのペクチンエステラーゼ／ｐ−ニトロフェニル酢酸の
反応に関する空気、Ｎｅ、Ａｒ、Ｋｒ、Ｘｅ、Ｎ2 及び
Ｏ2 の効果。
【００８３】酵素：ペクチンエステラーゼＰ−５４００
（ＥＣ ３．１．１．１１） ロット５１Ｈ８０７０ オレンジの皮より 約３５％の蛋白を含有する凍結乾燥した粉末；初めに
（ＮＨ4 ）2 ＳＯ4及び塩化ナトリウムのようなバッフ
ァー塩で釣り合いを取った。
【００８４】７４mg固体 ２０５単位／mg固体 単位の定義：１単位は、３０℃、ｐＨ７．５で１分あた
りペクチンから１μ等量の酸を遊離する。
【００８５】基質：ｐ−ニトロフェニル酢酸 Ｎ−８１
３０ ロット７０Ｈ５０１２ ＦＷ１８１．１ 溶液の調製： 溶液Ａ：０．１Ｍのクエン酸−Ｎａ2 ＨＰＯ4 バッファ
ー、ｐＨ７．５、２５℃。１．４９ｇのクエン酸及び１
３．１０ｇのＮａ2 ＨＰＯ4 を１リットルのＤＩＨ2 Ｏ
に溶解。ｐＨを７．５に調整。
【００８６】溶液Ｂ：５０ｍＭのメタノール性ｐ−ニト
ロフェニル酢酸（Ｎ−８１３０）９１mgのＮ−８１３０
を１０mlのメタノールに溶解。
【００８７】これを１０ccの琥珀色のバイアル中で作成
した。
【００８８】凍結。光に敏感。
【００８９】溶液Ｃ：溶液Ａのｐ−ニトロフェニル酢酸 溶液Ｂを溶液Ａで５０mlに希釈した。
【００９０】これは、黄色に着色するので各々の温度で
調製しなければならない。
【００９１】溶液Ｄ：溶液Ａのペクチンエステラーゼ
（１００単位／ml） ２４mgのＰ−５４００を５０mlの溶液Ａに溶解した。
【００９２】パラメータ： ・ガス雰囲気： ８種の異なったガス雰囲気 −−＞ Ｇ１ 空気 Ｇ２ Ｎｅ Ｇ３ Ａｒ Ｇ４ Ｋｒ Ｇ５ Ｘｅ −−＞ Ｇ６ 空気 Ｇ７ Ｏ2 Ｇ８ Ｎ2 ・温度： ３つの異なった温度： Ｔ１ １０℃ Ｔ２ ２５℃ Ｔ３ ３５℃ ・ブランク： Ｒ＝２．０mlの溶液Ｃ＋０．５mlの溶液Ａ サンプル調製及び実行スケジュール： ・青色シリコーンを使用 ・シリコーンで密封したキュベットにラベルをした（Ｐ
ＥＳＴ（１−３）Ｇ（１−８）。
【００９３】・１ccのシリンジで２．０mlの溶液Ｃをキ
ュベットに満たした。
【００９４】・８つの血清バイアルを５．０mlの溶液Ｄ
で満たした。気密系になるように栓をし、クリンピング
（crimp ）した。
【００９５】・キュベット及び血清バイアルをガスで処
理しないときは、これらに栓をしたままにした。
【００９６】 必要な材料： ・青色シリコーンを用いたキュベット：８×３（Ｇ×Ｔ） １（ブランク） −−−−−−−− 全２５キュベット ・１０ccのシリンジ ・３０ccのシリンジ ・血清バイアル（１０cc）：８（ｗ／５ml 溶液Ｄ） ・針：Ｂ−Ｄ２０Ｇ１ １／２ 分光測定法による検討 パラメータ：ＡＢＳ スリット１nm スピード１５００nm／分 Ａセーブ Ｙ Ａプリント Ｎ バックグラウンド補正：９００−１９０nm ・Ｔ１実行（１０℃） ＣＰＲＧ：５セル（最初の５種のガスに対して、次いで
３セル） ４００nm １２０pts （３０分） Ｉｎｔ １６秒 Ｙmin ＝０ Ｙmax ＝２．０ 注：１０℃で実施している間連続的に窒素を流しながら
スペクトル室をフラッシュし、大気中の水分がセルの壁
に凝縮するのを防止した（従って、ＡＢＳの読みに影響
する）。
【００９７】・デジタルコントローラーを１０℃に、フ
ィッシャーの循環器を５℃に、ポンプを高スピードにセ
ットした。
【００９８】・Ｔ１Ｇ１．．．５キュベットに、４×３
０ccの適切なガスをバブリングした。２×１０ccの適切
なガス下で凍結した。実施する前に少なくとも１５分凍
結しておいた。
【００９９】・Ｇ１．．．５の血清バイアルに、４×３
０ccの適切なガスをバブリングした。２×１０ccの適切
なガス下で凍結した。
【０１００】・冷凍器からキュベットを除き、キュベッ
トからシリンジ／針を除去した。泡を除去するためにキ
ュベットを軽くたたいた。壁を拭った。キュベットをセ
ルホルダーに置いた。キュベットを気温にさせた。
【０１０１】・Ｇ１．．．５の血清バイアルを冷蔵庫か
ら除去した。予め適切なガスを満たした１ccのシリンジ
で溶液Ｄをサンプリングした。シリコーンを通してシリ
ンジ／針を滑り込ませたが、液層中には滑り込ませなか
った。同時にプランジャーを液体中に押し込み、同時に
プランジャーを押し込んだ。時間計測を開始（run time
drives） ［ＰＥＳＴ１Ｇ（１−５）］ ３０分 ・Ｔ１Ｇ６．．．８キュベットに、４×３０ccの適切な
ガスをバブリングした。
【０１０２】２×１０ccの適切なガス下で凍結した。実
施する前に少なくとも１５分凍結しておいた。
【０１０３】・Ｇ６．．．８の血清バイアルに、４×３
０ccの適切なガスをバブリングした。２×１０ccの適切
なガス下で凍結した。
【０１０４】・冷凍器からキュベットを除き、キュベッ
トからシリンジ／針を除去した。泡を除去するためにキ
ュベットを軽くたたいた。壁を拭った。キュベットをセ
ルホルダーに置いた。キュベットを気温にさせた。
【０１０５】・Ｇ６．．．８の血清バイアルを冷蔵庫か
ら除去した。予め適切なガスを満たした１ccのシリンジ
で溶液Ｄをサンプリングした。シリコーンを通してシリ
ンジ／針を滑り込ませたが、液層中には滑り込ませなか
った。同時にプランジャーを液体中に押し込み、同時に
プランジャーを押し込んだ。時間計測を開始（run time
drives） ［ＰＥＳＴ１Ｇ（６−８）］ ３０分 ・Ｔ２実行（２５℃） ＣＰＲＧ：５セル（最初の５種のガスに対して、次いで
３セル） ４００nm １２０pts （３０分） Ｉｎｔ １６秒 Ｙmin ＝０ Ｙmax ＝２．０ ・デジタルコントローラーを２５℃に、フィッシャーの
循環器を２０℃に、ポンプを高スピードにセットした。
【０１０６】・Ｔ２Ｇ１．．．５キュベットに、４×３
０ccの適切なガスをバブリングした。２×１０ccの適切
なガス下で凍結した。実施する前に少なくとも１５分凍
結しておいた。
【０１０７】・Ｇ１．．．５の血清バイアルに、４×３
０ccの適切なガスをバブリングした。２×１０ccの適切
なガス下で凍結した。
【０１０８】・冷凍器からキュベットを除き、キュベッ
トからシリンジ／針を除去した。泡を除去するためにキ
ュベットを軽くたたいた。壁を拭った。キュベットをセ
ルホルダーに置いた。キュベットを気温にさせた。
【０１０９】・Ｇ１．．．５の血清バイアルを冷蔵庫か
ら除去した。先に適切なガスを満たした１ccのシリンジ
で溶液Ｄをサンプリングした。シリコーンを通してシリ
ンジ／針を滑り込ませたが、液層中には滑り込ませなか
った。同時にプランジャーを液体中に押し込み、同時に
プランジャーを押し込んだ。時間計測を開始（run time
drives） ［ＰＥＳＴ２Ｇ（１−５）］ ３０分 ・Ｔ２Ｇ６．．．８キュベットに、４×３０ccの適切な
ガスをバブリングした。２×１０ccの適切なガス下で凍
結した。実施する前に少なくとも１５分凍結しておい
た。
【０１１０】・Ｇ６．．．８の血清バイアルに、４×３
０ccの適切なガスをバブリングした。２×１０ccの適切
なガス下で凍結した。
【０１１１】・冷凍器からキュベットを除き、キュベッ
トからシリンジ／針を除去した。泡を除去するためにキ
ュベットを軽くたたいた。壁を拭った。キュベットをセ
ルホルダーに置いた。キュベットを気温にさせた。
【０１１２】・Ｇ６．．．８の血清バイアルを冷凍器か
ら除去した。予め適切なガスを満たした１ccのシリンジ
で溶液Ｄをサンプリングした。シリコーンを通してシリ
ンジ／針を滑り込ませたが、液層中には滑り込ませなか
った。同時にプランジャーを液体中に押し込み、同時に
プランジャーを押し込んだ。時間計測を開始（run time
drives） ［ＰＥＳＴ２Ｇ（６−８）］ ３０分 ・Ｔ３実行（３５℃） ＣＰＲＧ：５セル（最初の５種のガスに対して、次いで
３セル） ４００nm １２０pts （３０分） Ｉｎｔ １６秒 Ｙmin ＝０ Ｙmax ＝２．０ ・デジタルコントローラーを３５℃に、フィッシャーの
循環器を３０℃に、ポンプを高スピードにセットした。
【０１１３】・Ｔ３Ｇ１．．．５キュベットに、４×３
０ccの適切なガスをバブリングした。２×１０ccの適切
なガス下で凍結した。実施する前に少なくとも１５分凍
結しておいた。
【０１１４】・Ｇ１．．．５の血清バイアルに、４×３
０ccの適切なガスをバブリングした。２×１０ccの適切
なガス下で凍結した。
【０１１５】・冷凍器からキュベットを除き、キュベッ
トからシリンジ／針を除去した。泡を除去するためにキ
ュベットを軽くたたいた。壁を拭った。キュベットをセ
ルホルダーに置いた。キュベットを気温にさせた。
【０１１６】・Ｇ１．．．５の血清バイアルを冷蔵庫か
ら除去した。予め適切なガスを満たした１ccのシリンジ
で溶液Ｄをサンプリングした。シリコーンを通してシリ
ンジ／針を滑り込ませたが、液層中には滑り込ませなか
った。同時にプランジャーを液体中に押し込み、同時に
プランジャーを押し込んだ。時間計測を開始（run time
drives） ［ＰＥＳＴ３Ｇ（１−５）］ ３０分 ・Ｔ３Ｇ６．．．８キュベットに、４×３０ccの適切な
ガスをバブリングした。２×１０ccの適切なガス下で凍
結した。実施する前に少なくとも１５分凍結を維持し
た。
【０１１７】・Ｇ６．．．８の血清バイアルに、４×３
０ccの適切なガスをバブリングした。２×１０ccの適切
なガス下で凍結した。
【０１１８】・冷凍器からキュベットを除き、キュベッ
トからシリンジ／針を除去した。泡を除去するためにキ
ュベットを軽くたたいた。壁を拭った。キュベットをセ
ルホルダーに置いた。キュベットを気温にさせた。
【０１１９】・Ｇ６．．．８の血清バイアルを冷蔵庫か
ら除去した。予め適切なガスを満たした１ccのシリンジ
で溶液Ｄをサンプリングした。シリコーンを通してシリ
ンジ／針を滑り込ませたが、液層中には滑り込ませなか
った。同時にプランジャーを液体中に押し込み、同時に
プランジャーを押し込んだ。時間計測を開始（run time
drives） ［ＰＥＳＴ３Ｇ（６−８）］ ３０分 スペクトルのファイル： ＰＥＳＴ１Ｇ１．．．５．ＳＰ ＰＥＳＴ１Ｇ６．．．８．ＳＰ ＰＥＳＴ２Ｇ１．．．５．ＳＰ ＰＥＳＴ２Ｇ６．．．８．ＳＰ ＰＥＳＴ３Ｇ１．．．５．ＳＰ ＰＥＳＴ３Ｇ６．．．８．ＳＰ −−−−−−−−−−−−−− ２４ファイル 例２ ペクチナーゼ（ＥＣ．３．２．１．１５）（Ｐ−９９３
２）／ペクチン（Ｐ−９１３５）ガス実行プロトコル 目的：１０℃、２５℃及び３５℃（１種類の基質濃度）
でのペクチナーゼ／ペクチンの反応に関する空気、Ｎ
ｅ、Ａｒ、Ｋｒ、Ｘｅ、Ｎ2 、及びＯ2 の効果。
【０１２０】酵素：ペクチナーゼ（シグマＮｏ．Ｐ−９
９３２） アスペルギルスニゲル（Aspergillus niger ）より２５
−４５％グリセロール溶液（ラベル上の実際のグリセロ
ール含量）。
【０１２１】単位の定義：１単位は、２５℃、ｐＨ４．
０で１分あたりポリガラクツロン酸から１．０μモルの
ガラクツロン酸を遊離する。
【０１２２】ロット７０Ｈ０２９２１ ３６８ml ８．４mg/prot. ８．１単位／mg port. 基質：ペクチン（シグマＮｏ．Ｐ−９１３５） 柑橘系フルーツから １００g 溶液の調製： 溶液Ａ：０．１Ｍのクエン酸−クエン酸ナトリウム、ｐ
Ｈ４．０、２５℃。７．６ｇのクエン酸及び１２．０５
ｇのクエン酸ナトリウムを１リットルのＤＩＨ2 Ｏに溶
解。ｐＨを４．０に調整。
【０１２３】ｐＨ25℃＝４．０１３ 溶液Ｂ：ＤＩＨ2 Ｏ中の１％ペクチン。
【０１２４】１００mlのＤＩＨ2 Ｏを煮沸。１g のペク
チンを添加し、手で攪拌した。カバーをし、２分間煮沸
し、手で攪拌し、更に１分煮沸した。
【０１２５】加熱を止め、１０分間冷却させた。
【０１２６】６〜１０層のバターモスリン（butter mus
lin ）を２５０mlのビーカー上に緩く置き、輪ゴムで固
定した。バターモスリンを通して、溶液を濾過した。溶
液を室温まで冷却し、次いでビーカーの目盛りを使用し
て希釈し、１００mlに戻した。琥珀色の容器に移し、室
温で保存した。
【０１２７】溶液Ｃ：溶液Ａのペクチナーゼ（５０U/m
l） ４３．５mlのペクチナーゼを溶液Ａで５０mlに希釈し
た。琥珀色の容器に保存し、冷凍した。
【０１２８】パラメータ： ・ガス雰囲気： ８種の異なったガス雰囲気 −−＞ Ｇ１ 空気 Ｇ２ Ｎｅ Ｇ３ Ａｒ Ｇ４ Ｋｒ Ｇ５ Ｘｅ −−＞ Ｇ６ 空気 Ｇ７ Ｏ2 Ｇ８ Ｎ2 ・温度： ３つの異なった温度： Ｔ１ １０℃ Ｔ２ ２５℃ Ｔ３ ３５℃ ・ブランク： Ｒ＝２．０mlの溶液Ｂ＋０．５mlの溶液Ａ サンプル調製及び実行スケジュール： ・青色シリコーンを使用 ・シリコーンで密封したキュベットにラベルをした（Ｐ
ＥＣＴ（１−３）Ｇ（１−８）。
【０１２９】・１ccのシリンジで２．０mlの溶液Ｂをキ
ュベットに満たした。
【０１３０】・８つの血清バイアルを５．０mlの溶液Ｃ
で満たした。気密系になるように栓をし、クリンピング
（crimp ）した。
【０１３１】・キュベット及び血清バイアルをガスで処
理しないときは、これらに栓をしたままにした。
【０１３２】 必要な材料： ・青色シリコーンを用いたキュベット：８×３（Ｇ×Ｔ） １（ブランク） −−−−−−−− 全２５キュベット ・１０ccのシリンジ ・３０ccのシリンジ ・血清バイアル（１０cc）：８（ｗ／５ml 溶液Ｃ） ・針：Ｂ−Ｄ２０Ｇ１ １／２ 分光測定法による検討 パラメータ：ＡＢＳ スリット１nm スピード１５００nm／分 Ａセーブ Ｙ Ａプリント Ｎ バックグラウンド補正：９００−１９０nm ・Ｔ１実行（１０℃） ＣＰＲＧ：５セル（最初の５種のガスに対して、次いで
３セル） ４００nm １２０pts （３０分） Ｉｎｔ １６秒 Ｙmin ＝０ Ｙmax ＝２．０ 注：１０℃で実施している間連続的に窒素を流しながら
スペクトル室をフラッシュし、大気中の水分がセルの壁
に凝縮するのを防止した（従って、ＡＢＳの読みに影響
する）。
【０１３３】・デジタルコントローラーを１０℃に、フ
ィッシャーの循環器を５℃に、ポンプを高スピードにセ
ットした。
【０１３４】・Ｔ１Ｇ１．．．５キュベットに、４×３
０ccの適切なガスをバブリングした。２×１０ccの適切
なガス下で凍結した。実施する前に少なくとも１５分凍
結しておいた。
【０１３５】・Ｇ１．．．５の血清バイアルに、４×３
０ccの適切なガスをバブリングした。２×１０ccの適切
なガス下で凍結した。
【０１３６】・冷凍器からキュベットを除き、キュベッ
トからシリンジ／針を除去した。泡を除去するためにキ
ュベットを軽くたたいた。壁を拭った。キュベットをセ
ルホルダーに置いた。キュベットを気温にさせた。
【０１３７】・Ｇ１．．．５の血清バイアルを冷蔵庫か
ら除去した。予め適切なガスを満たした１ccのシリンジ
で溶液Ｃをサンプリングした。シリコーンを通してシリ
ンジ／針を滑り込ませたが、液層中には滑り込ませなか
った。同時にプランジャーを液体中に押し込み、同時に
プランジャーを押し込んだ。次いでキュベット中で基質
と酵素を混合させるためにプランジャーを４回引き及び
押す必要がある。時間計測を開始（run timedrives）。
【０１３８】［ＰＥＣＴ１Ｇ（１−５）］ ３０分 ・Ｔ１Ｇ６．．．８キュベットに、４×３０ccの適切な
ガスをバブリングした。２×１０ccの適切なガス下で凍
結した。実施する前に少なくとも１５分凍結しておい
た。
【０１３９】・Ｇ６．．．８の血清バイアルに、４×３
０ccの適切なガスをバブリングした。２×１０ccの適切
なガス下で凍結した。
【０１４０】・冷凍器からキュベットを除き、キュベッ
トからシリンジ／針を除去した。泡を除去するためにキ
ュベットを軽くたたいた。壁を拭った。キュベットをセ
ルホルダーに置いた。キュベットを気温にさせた。
【０１４１】・Ｇ６．．．８の血清バイアルを冷蔵庫か
ら除去した。予め適切なガスを満たした１ccのシリンジ
で溶液Ｃをサンプリングした。シリコーンを通してシリ
ンジ／針を滑り込ませたが、液層中には滑り込ませなか
った。同時にプランジャーを液体中に押し込み、同時に
プランジャーを押し込んだ。次いでキュベット中で基質
と酵素を混合させるためにプランジャーを４回引き及び
押す必要がある。時間計測を開始（run timedrives）。
【０１４２】［ＰＥＣＴ１Ｇ（６−８）］ ３０分 ・Ｔ２実行（２５℃） ＣＰＧＲ：５セル（最初の５種のガスに対して、次いで
３セル） ４００nm ８０pts （２０分） Ｉｎｔ １６秒 Ｙmin ＝０ Ｙmax ＝２．０ ・デジタルコントローラーを２５℃に、フィッシャーの
循環器を２０℃に、ポンプを高スピードにセットした。
【０１４３】・Ｔ２Ｇ１．．．５キュベットに、４×３
０ccの適切なガスをバブリングした。２×１０ccの適切
なガス下で凍結した。実施する前に少なくとも１５分凍
結しておいた。
【０１４４】・Ｇ１．．．５の血清バイアルに、４×３
０ccの適切なガスをバブリングした。２×１０ccの適切
なガス下で凍結した。
【０１４５】・冷凍器からキュベットを除き、キュベッ
トからシリンジ／針を除去した。泡を除去するためにキ
ュベットを軽くたたいた。壁を拭った。キュベットをセ
ルホルダーに置いた。キュベットを気温にさせた。
【０１４６】・Ｇ１．．．５の血清バイアルを冷蔵庫か
ら除去した。予め適切なガスを満たした１ccのシリンジ
で溶液Ｃをサンプリングした。シリコーンを通してシリ
ンジ／針を滑り込ませたが、液層中には滑り込ませなか
った。同時にプランジャーを液体中に押し込み、同時に
プランジャーを押し込んだ。次いでキュベット中で基質
と酵素を混合させるためにプランジャーを４回引き及び
押す必要がある。時間計測を開始（run timedrives）。
【０１４７】［ＰＥＣＴ２Ｇ（１−５）］ ２０分 ・Ｔ２Ｇ６．．．８キュベットに、４×３０ccの適切な
ガスをバブリングした。２×１０ccの適切なガス下で凍
結した。実施する前に少なくとも１５分凍結しておい
た。
【０１４８】・Ｇ６．．．８の血清バイアルに、４×３
０ccの適切なガスをバブリングした。２×１０ccの適切
なガス下で凍結した。
【０１４９】・冷凍器からキュベットを除き、キュベッ
トからシリンジ／針を除去した。泡を除去するためにキ
ュベットを軽くたたいた。壁を拭った。キュベットをセ
ルホルダーに置いた。キュベットを気温にさせた。
【０１５０】・Ｇ６．．．８の血清バイアルを冷蔵庫か
ら除去した。予め適切なガスを満たした１ccのシリンジ
で溶液Ｃをサンプリングした。シリコーンを通してシリ
ンジ／針を滑り込ませたが、液層中には滑り込ませなか
った。同時にプランジャーを液体中に押し込み、同時に
プランジャーを押し込んだ。次いでキュベット中で基質
と酵素を混合させるためにプランジャーを４回引き及び
押す必要がある。時間計測を開始（run timedrives）。
【０１５１】［ＰＥＣＴ２Ｇ（６−８）］ ２０分 ・Ｔ３実行（３５℃） ＣＰＧＲ：５セル（最初の５種のガスに対して、次いで
３セル） ４００nm ８０pts （２０分） Ｉｎｔ １６秒 Ｙmin ＝０ Ｙmax ＝２．０ ・デジタルコントローラーを３５℃に、フィッシャーの
循環器を３０℃に、ポンプを高スピードにセットした。
【０１５２】・Ｔ３Ｇ１．．．５キュベットに、４×３
０ccの適切なガスをバブリングした。２×１０ccの適切
なガス下で凍結した。実施する前に少なくとも１５分凍
結しておいた。
【０１５３】・Ｇ１．．．５の血清バイアルに、４×３
０ccの適切なガスをバブリングした。２×１０ccの適切
なガス下で凍結した。
【０１５４】・冷凍器からキュベットを除き、キュベッ
トからシリンジ／針を除去した。泡を除去するためにキ
ュベットを軽くたたいた。壁を拭った。キュベットをセ
ルホルダーに置いた。キュベットを気温にさせた。
【０１５５】・Ｇ１．．．５の血清バイアルを冷蔵庫か
ら除去した。予め適切なガスを満たした１ccのシリンジ
で溶液Ｃをサンプリングした。シリコーンを通してシリ
ンジ／針を滑り込ませたが、液層中には滑り込ませなか
った。同時にプランジャーを液体中に押し込み、同時に
プランジャーを押し込んだ。次いでキュベット中で基質
と酵素を混合させるためにプランジャーを４回引き及び
押す必要がある。時間計測を開始（run timedrives）。
【０１５６】［ＰＥＣＴ３Ｇ（１−５）］ ２０分 ・Ｔ３Ｇ６．．．８キュベットに、４×３０ccの適切な
ガスをバブリングした。２×１０ccの適切なガス下で凍
結した。実施する前に少なくとも１５分凍結しておい
た。
【０１５７】・Ｇ６．．．８の血清バイアルに、４×３
０ccの適切なガスをバブリングした。２×１０ccの適切
なガス下で凍結した。
【０１５８】・冷凍器からキュベットを除き、キュベッ
トからシリンジ／針を除去した。泡を除去するためにキ
ュベットを軽くたたいた。壁を拭った。キュベットをセ
ルホルダーに置いた。キュベットを気温にさせた。
【０１５９】・Ｇ６．．．８の血清バイアルを冷蔵庫か
ら除去した。予め適切なガスを満たした１ccのシリンジ
で溶液Ｃをサンプリングした。シリコーンを通してシリ
ンジ／針を滑り込ませたが、液層中には滑り込ませなか
った。同時にプランジャーを液体中に押し込み、同時に
プランジャーを押し込んだ。次いでキュベット中で基質
と酵素を混合させるためにプランジャーを４回引き及び
押す必要がある。時間計測を開始（run timedrives）。
【０１６０】［ＰＥＣＴ３Ｇ（６−８）］ ２０分 スペクトルのファイル： ＰＥＣＴ１Ｇ１．．．５．ＳＰ ＰＥＣＴ１Ｇ６．．．８．ＳＰ ＰＥＣＴ２Ｇ１．．．５．ＳＰ ＰＥＣＴ２Ｇ６．．．８．ＳＰ ＰＥＣＴ３Ｇ１．．．５．ＳＰ ＰＥＣＴ３Ｇ６．．．８．ＳＰ −−−−−−−−−−−−−− ２４ファイル 例の結果：図１は、３５℃における空気、Ｎｅ、Ａｒ、
Ｋｒ、及びＸｅの種々のガス下で、試験したペクチナー
ゼの反応の典型的な結果を示す。
【０１６１】図２は、２５℃における空気、Ｎｅ、Ａ
ｒ、Ｋｒ、及びＸｅの種々のガス下で、試験したペクチ
ンエステラーゼの実行の典型的な結果を示す。
【０１６２】以下の表にこれらの結果をまとめた。
【０１６３】
【表２】 これらの試験で観測された最大の差と比較した平均が以
下のように示される。
【０１６４】ペクチンエステラーゼ：ペクチンエステラ
ーゼ活性は、全ての温度において希ガスの作用で増進さ
れた。速度と収率の両方の増強が、最適及び非最適温度
の両方で見出された。冷却温度では希ガスによる最も大
きな増強が示された。増強は、温度が最適温度に近づく
と減少しはじめる。より高温でもまだ、希ガスによる活
性の増強が観測された。
【０１６５】ペクチナーゼ：ペクチナーゼ活性は、最適
温度及び高温（hot temperature ）において、希ガスの
作用を増進した。速度及び収率の両方の増強が高温で見
出された。速度の増強は最適温度で見出された。希ガス
による増強の量は、温度が最適温度から増加するときに
増加することが見出された。
【０１６６】本発明を説明において、本発明の意図及び
範囲から逸脱することなく、上述の態様に多くの変更及
び修正をなしうることは、当業者には明らかだろう。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、３５℃でのペクチナーゼ活性に関する
空気、Ｎｅ、Ａｒ、Ｋｒ、及びＸｅの効果を示す。
【図２】図２は、２５℃でのペクチンエステラーゼ活性
に関する空気、Ｎｅ、Ａｒ、Ｋｒ、及びＸｅの効果を示
す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｎ 9/16 Ｚ 9359−4Ｂ 9/24 9152−4Ｂ 9/88 9152−4Ｂ

Claims (21)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 ペクチナーゼ活性を有する少なくとも１
    種の酵素を用いる酵素工程を改善するための方法であっ
    て、該工程中に少なくとも１種の酵素を希ガス、希ガス
    の混合物又は少なくとも１種の希ガスを含有するガス混
    合物と接触することを具備した方法。
  2. 【請求項２】 請求項１に記載の方法であって、前記酵
    素が、ペクチナーゼ、ペクチンエステラーゼ、ポリガラ
    クツロナーゼ酵素、ペクチン酸及びリアーゼより成る群
    から選択される方法。
  3. 【請求項３】 請求項１又は２に記載の方法であって、
    前記ガスが、ガス形態又は液体形態又は両方で注入され
    る方法。
  4. 【請求項４】 請求項１から３の１つに記載の方法であ
    って、前記反応媒体が、その完全な飽和レベルの５０容
    積％以上に飽和されている方法。
  5. 【請求項５】 請求項１から４の１つに記載の方法であ
    って、前記反応媒体が、その完全な飽和レベルの７０容
    積％以上に飽和されている方法。
  6. 【請求項６】 請求項１から５の１つに記載の方法であ
    って、前記反応媒体が、その完全な飽和レベルの８０容
    積％以上に飽和されている方法。
  7. 【請求項７】 請求項１から６の１つに記載の方法であ
    って、前記ガス混合物が更に、窒素、酸素、亜酸化窒
    素、空気、ヘリウム、二酸化炭素又はこれらの混合物を
    含む群から選択されるガスを含有する方法。
  8. 【請求項８】 請求項１から７の１つに記載の方法であ
    って、５０容積％以下の酸素、二酸化炭素、又はこれら
    の混合物を含有する方法。
  9. 【請求項９】 請求項１から８の１つに記載の方法であ
    って、３０容積％以下の酸素、二酸化炭素、又はこれら
    の混合物を含有する方法。
  10. 【請求項１０】 請求項１から９の１つに記載の方法で
    あって、２０容積％以下の酸素、二酸化炭素、又はこれ
    らの混合物を含有する方法。
  11. 【請求項１１】 請求項１から１０の１つに記載の方法
    であって、１０容積％以下の酸素、二酸化炭素、又はこ
    れらの混合物を含有する方法。
  12. 【請求項１２】 請求項１から１１の１つに記載の方法
    であって、ガス混合物又はガス混合物の要素が９０容量
    ％から９９容量％のアルゴン及び１容積％から１０容積
    ％のＸｅ及び／又はＫｒを含有する方法。
  13. 【請求項１３】 請求項１から１２の１つに記載の方法
    であって、ガス混合物又はガス混合物の要素が、約５０
    容積％のＮｅ及び５０容積％のＨｅを含有する方法。
  14. 【請求項１４】 請求項１から１３の１つに記載の方法
    であって、ガス混合物又はガス混合物の要素が、約５容
    積％から１０容積％のＸｅ及び９０容積％から９５容積
    ％のＫｒを含有する方法。
  15. 【請求項１５】 請求項１から１４の１つに記載の方法
    であって、ガス混合物が、２容積％以下のアルゴン、酸
    素、窒素、又はこれらの混合物を含有する方法。
  16. 【請求項１６】 請求項１から１５の１つに記載の方法
    であって、温度が０℃と４０℃の間に包含される方法。
  17. 【請求項１７】 請求項１から１６の１つに記載の方法
    であって、温度が１０℃と３０℃の間に包含される方
    法。
  18. 【請求項１８】 請求項１から１７の１つに記載の方法
    であって、ワインの圧力が１０気圧以下である方法。
  19. 【請求項１９】 請求項１から１８の１つに記載の方法
    であって、ワインの圧力が３気圧以下である方法。
  20. 【請求項２０】 請求項１から１９の１つに記載の方法
    であって、ワインの圧力が１及び２気圧の間にある方
    法。
  21. 【請求項２１】 請求項１から２０の１つに記載の方法
    であって、ワインの圧力が約１気圧である方法。
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