JPH0717979A

JPH0717979A - 生理活性物質ＡＤ−２４−１ｂ

Info

Publication number: JPH0717979A
Application number: JP5161187A
Authority: JP
Inventors: Mikio Izawa; 幹夫伊澤; Muneharu Doi; 宗晴土居; Toshimi Matsuno; 年美松野; Tsuneo Kanamaru; 恒雄金丸
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Current assignee: Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1993-06-30
Filing date: 1993-06-30
Publication date: 1995-01-20

Abstract

(57)【要約】【目的】駆虫、殺ダニおよび殺虫作用を有する新規生理
活性物質を提供する。【構成】式【化１】で表わされる新規生理活性物質ＡＤ−２４−１ｂに関す
る。【効果】生理活性物質ＡＤ−２４−１ｂは強力な駆虫、
殺ダニ、殺虫作用を有し、とりわけ動物用医薬品として
有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、駆虫・殺ダニ・殺虫作
用を示す新規生理活性物質ＡＤ−２４−１ｂ、その製造
法および用途ならびにそれを生産する微生物に関する。

【０００２】

【従来の技術】人間および動物の健康および農業におい
て、寄生虫感染は貧血・栄養不良・衰弱・体重減少・消
化管壁ならびに他の組織および器官に対する重大な損傷
に導き、もし治療しないで置くと、感染宿主を死に至ら
しめることもあり得る。本発明者らは、新規な駆虫・殺
虫薬を開発すべく微生物代謝産物に着目して探索研究を
行った。これまでに微生物を起源とする駆虫・殺虫性物
質には、糸状菌の生産する環状ペプチドであるデストル
キシン〔アグリカルチュラル・バイオロジカル・ケミス
トリイ（Agricultural and Biological Chemistry）第
２６巻、第３６頁（１９６２年）〕、バチルス属細菌の
生産する結晶性蛋白質であるデルタ−エンドトキシン
〔農薬と園芸第４７巻、第１１号、第１５０７頁（１９
７２年）〕、放線菌の生産するピエリシジン〔アグリカ
ルチュラル・バイオロジカル・ケミストリイ第３０巻、
第１頁（１９６６年）〕、ピロリドンを母核とする電子
伝達阻害物質マクロテトロライド類にはいるテトラナク
チン〔ジャーナル・アンチバイオティクス（Journal An
tibiotics）第２４Ａ巻、第４１８頁（１９７１
年）〕、マクロライド系のミルベマイシン〔テトラヘド
ロン・レターズ（Tetrahedron Letters）第７１１頁
（１９７５年）〕、アバメクチン類〔アンチミクロバイ
アル・エイジェンツ・アンド・ケモセラピイ（Antimicr
obial Agents and Chemotherapy）第１５巻、第３６１
頁（１９７９年）〕、ＬＬ−Ｆ２８２４９α〔ジャーナ
ル・オブ・ケミカル・ソサイエテイ・ケミカル・コミュ
ニケーションズ（Journalof Chemical Society Chemica
l Communications）第４０２頁（１９８７年）〕などが
知られている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】新規な天然生理活性物
質を見いだすと共に、人間及び動物の健康及び農業にお
いて、より優れた駆虫剤、殺虫剤および殺ダニ剤が求め
られている。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、多数の微
生物培養液中から新しい殺虫・殺ダニ・駆虫剤を得るた
めの探索研究を行ったところ、ストレプトミセス属の菌
株が駆虫・殺ダニ・殺虫作用を有する物質を産生するこ
とを見出した。該微生物を適宜の培地に培養することに
より、駆虫・殺ダニ・殺虫作用を有する物質を培養物中
または菌体中に蓄積しうることを認め、活性物質を単離
し、その物理化学的性質から、当該活性物質が新規物質
であることを確かめ、その構造を解明し、これらの知見
に基づいてさらに研究を続けた結果、本発明を完成する
に至った。すなわち、本発明は、式

【化２】で表される新規生理活性物質ＡＤ−２４−１ｂ、ストレ
プトミセス属に属し、生理活性物質ＡＤ−２４−１ｂを
生産する能力を有する微生物を培地に培養し、培養液中
に該ＡＤ−２４−１ｂを生成蓄積せしめ、これを採取す
ることを特徴とする生理活性物質ＡＤ−２４−１ｂの製
造法、生理活性物質ＡＤ−２４−１ｂを含有する駆虫、
殺ダニもしくは殺虫剤および生理活性物質ＡＤ−２４−
１ｂの生産能を有するストレプトミセスファエオファ
シエンスに関するものである。

【０００５】本発明に用いることができる微生物として
は、ストレプトミセス属に属し、ＡＤ−２４−１ｂを産
生する能力を有する微生物であればいずれのものでもよ
い。たとえばインド国土壌より分離されたストレプトミ
セスエスピー No. ＡＬ−６１７２９（Streptomyces
sp. No. ＡＬ−６１７２９）などは具体的に使用しう
る例として挙げられる。ＡＬ−６１７２９株について、
インターナショナル・ジャーナル・オブ・システマティ
ック・バクテリオロジー（International Journal of S
ystematic Bacteriology），第１６巻，３１３−３４０
頁（１９６６年）記載の方法に準じて検討した菌学的性
状は下記のとおりである。なお、培地上の所見は特に記
載のないかぎり、２８℃において１４日間培養し、観察
したものである。

【０００６】（I）形態的特徴気菌糸は、よく伸長分岐した基生菌糸から単純分岐状に
伸長しており、その先端に形成された胞子連鎖（通常１
０〜５０個以上）はループ状又は開放したらせん状、時
にはかぎ状を呈する。輪生糸は認められない。胞子は楕
円形（φ０.６〜０.８×１.１〜１.３μm ）を示し、そ
の表面は平滑である。（II）各種培地上での生育状態各種培地における生育の程度（Ｇ）、気菌糸の生育及び
色調（ＡＭ）、裏面の色調（Ｒ）、可溶性色素の有無及
び色素（ＳＰ）などについて以下に列記する。色の記載
について（）で示す標準色調記号は、コンティナー・
コーポレーション・オブ・アメリカ（Container Corpor
ation of America）のザ・カラー・ハーモニー・マニュ
アル（The Color Harmony Manual）第４版、１９５８年
によった。

【０００７】

【表１】

【０００８】（III）生理的性質 (a) 生育温度範囲：１４〜３
８.５℃ 最適生育温度範囲：２４〜３２℃ (b) 硝酸塩の還元：陰性 (c) ゼラチンの液化：陽性（グルコース・ペプトン・ゼラチン培地） (d) 澱粉の加水分解：陽性 (e) 脱脂乳の凝固：陰性脱脂乳のペプトン化：陽性 (f) メラニン様色素の生成チロシン寒天培地：陰性ペプトン・イースト・鉄寒天培地：陽性

【０００９】（IV）炭素源の資化性（プリードハム・ゴットリープ寒天培地）Ｌ−アラビノース：＋＋（注）＋＋：比較的良好な生育Ｄ−キシロース：＋＋：生育を認めるＤ−グルコース：＋＋ ± ：＋又は−の判定が困難Ｄ−フラクトース：＋＋ − ：生育せずシュクロース： − イノシトール：＋Ｌ−ラムノース：＋ラフィノース： − Ｄ−マンニット：＋＋対照： −

【００１０】（V）菌体分析長谷川らの方法（Journal of General Applied Microbi
ology 第２９巻，３１９−３２２頁(１９８３)）に準じ
て分析したところ、菌体の塩酸加水分解液中のジアミノ
ピメリン酸は、ＬＬ−体であった。以上の菌学的性状か
ら、本菌株がストレプトミセス（Streptomyces）属に、
属することが明らかであり、ストレプトミセス・エスピ
ー・ＡＬ−６１７２９（Streptomyces sp. ＡＬ−６１
７２９）と称することができる。本菌株は、グレイ・カ
ラーシリーズに属し、胞子連鎖はかぎ状から緩やかな螺
旋状、胞子表面は平滑、弱いメラニン色素を産生するな
どの諸性質を有する。ＩＳＰ記載菌株の諸性質と比較す
ると、本菌株に類似な菌株として S. mirabilis,S. bot
tropensis, S. galbus, S. collinus, S. phaeofaci
ens, S. plicatus の６株が挙げられる。Streptomyces bottropensis ＩＦＯ１３０２３Streptomyces galbus ＩＦＯ１２８６４Streptomyces mirabilis ＩＦＯ１３４５０Streptomyces collinus ＩＦＯ１２７５９Streptomyces phaeofaciens ＩＦＯ１３３７２Streptomyces plicatus ＩＦＯ１３０７１以上６株を本菌株ＡＬ−６１７２９と前記方法に従って
比較検討したところStreptomyces phaeofaciens ＩＦ
Ｏ１３３７２が最も近縁な菌株と判断された。以下両
菌株の詳細な比較データを以下に記載する。

【００１１】

【表２】

【００１２】

【表３】

【００１３】

【表４】 Streptomyces phaeofaciens ＩＦＯ１３３７２はＡ
Ｌ−６１７２９と比べるとオートミール寒天培地、グル
コースアスパラギン寒天培地、栄養寒天培地において
生育及び気菌糸の形成がやや不良であった。しかし両菌
株は共に気菌糸の色は白色〜灰色を呈し、胞子連鎖はか
ぎ状から緩やかな螺旋状、胞子表面は平滑、弱いメラニ
ン色素を産生する等極めて類似した諸性質を呈した。従
ってＡＬ−６１７２９は Streptomyces phaeofaciens
No. ＡＬ−６１７２９と同定された。上記ストレプト
ミセスファエオファシエンスNo. ＡＬ−６１７２９株
（Streptomyces phaeofaciens No. ＡＬ−６１７２
９）は財団法人醗酵研究所に平成５年５月２６日から寄
託番号ＩＦＯ１５４８９として寄託されており、日本
国通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所（ＮＩ
ＢＨ；茨城県つくば市東１−１−３）に平成５年６月２
８日から寄託番号ＦＥＲＭＰ−１３７１２として寄託
されている。ストレプトミセス属菌は、微生物の一般的
性質として自然的または変異剤によって変異を起こし得
る。たとえばＸ線、ガンマー線、紫外線等の放射線の照
射、更には単胞子分離、種々の薬剤による処理または薬
剤を含有する培地上での培養、その他の手段で変異させ
て得られる多くの変異株、あるいは自然的に得られる突
然変異株であっても、ＡＤ−２４−１ｂを生産する性質
を有するものはすべて本発明の方法に利用し得る。

【００１４】本発明方法の培養に用いられる培地は用い
られる菌株が利用し得る栄養源を含むものなら、液状で
も固状でもよいが、大量を処理するときには液体培地を
用いるのがより適当である。培地には同化し得る炭素
源、消化し得る窒素源、無機物質、微量栄養素を適宜配
合される。炭素源としては、たとえばブドウ糖、乳糖、
ショ糖、麦芽糖、デキストリン、でん粉、グリセリン、
マンニトール、ソルビトール、油脂類（例、大豆油、オ
リーブ油、ヌカ油、ゴマ油、ラード油、チキン油な
ど）、窒素源としては、たとえば肉エキス、酵母エキ
ス、乾燥酵母、大豆粉、コーン・スチープ・リカー、ペ
プトン、綿実粉、廃糖蜜、尿素、アンモニウム塩類
（例、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸アン
モニウム、酢酸アンモニウムなど）その他が用いられ
る。さらにナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネ
シウムなどを含む塩類、鉄、マンガン、亜鉛、コバル
ト、ニッケルなどの金属塩、りん酸、ホウ酸などの塩類
や酢酸、プロピオン酸などの有機酸の塩類が適宜用いら
れる。その他、アミノ酸（例、グルタミン酸、アスパラ
ギン酸、アラニン、リジン、バリン、メチオニン、プロ
リン等）、ビタミン類（例、Ｂ₁、Ｂ₂、ニコチン酸、Ｂ
₁₂、Ｃ等）、核酸類（例、プリン、ピリミジンおよびそ
の誘導体）等を含有させてもよい。もちろん培地のｐＨ
を調節する目的で無機または有機の酸、アルカリ類、緩
衝剤等を加え、あるいは消泡の目的で油脂類、表面活性
剤等の適量を添加される。

【００１５】培養の手段は静置培養でも、振盪培養ある
いは通気撹拌培養法等の手段を用いてもよい。大量の処
理には、いわゆる深部通気撹拌培養によるのが望ましい
ことはいうまでもない。培養の条件は培地の状態、組
成、菌株の種類、培養の手段によって一定しないのは当
然であるが、それらは通常１５℃〜３２℃の温度で、初
発ｐＨ約５〜９付近に選択するのがよい。とりわけ、培
養中期の温度は２０℃〜３０℃、また初発ｐＨは約６〜
８の条件が望ましい。培養時期も前記の諸条件により一
定しないが、該生理活性物質濃度が最大となるまで培養
するのがよい。これに要する時間は液体培地を用いる振
盪培養または通気撹拌培養の場合は通常約１〜１０日間
程度である。生成した生理活性物質ＡＤ−２４−１ｂ
は、その化学的性質に従って培養物から抽出、精製する
ことが可能である。

【００１６】ＡＤ−２４−１ｂの大部分は培養菌体中に
生産されるので、培養物はろ過または遠心分離によって
菌体を分離し、菌体をアセトンまたは酢酸エチルあるい
はアルコールで抽出し、抽出液を減圧濃縮後、酢酸エチ
ル、クロロホルムのような転溶性溶剤に転溶させ精製す
ることができる。あるいは培養物に直接、メタノール、
アセトン、ブタノール、酢酸エチルなどの有機溶媒を添
加して得られる抽出液から精製する方がより有利である
場合もある。ＡＤ−２４−１ｂを培養液から採取するに
は、当該物質が中性脂溶性物質であるので、そのような
微生物代謝産物を採取する為に通常用いられる分離・精
製の手段が適宜利用される。たとえば、夾雑物との溶解
度の差を利用する方法、活性炭、非イオン性ハイポーラ
ス樹脂、シリカゲル、アルミナ、デキストランゲル等の
各種担体を用いるクロマトグラフィーなどがそれぞれ単
独または組み合わせて利用される。

【００１７】培養物中に生産されるＡＤ−２４−１ｂを
採取する方法を具体的に説明すると、まず培養液をトプ
コ・パーライトNo. ３１などのろ過助剤を用いてろ過す
る。得られた固形分にアセトンのような有機溶媒を加え
て、撹拌、抽出した後、助剤を用いてろ過する。ろ液を
濃縮し、ｐＨを調整後、酢酸エチルのような溶媒で抽
出、有機層を酸、水、アルカリ、水のように順次洗浄し
た後濃縮する。得られた残渣をメタノールのような溶媒
に溶解し、エチレングリコール−ヘキサン、ジエチルエ
ーテル−食塩水等の組合せを用いる分配操作後、得られ
る有機層を濃縮乾固し、残渣をシリカゲルのカラムクロ
マトグラフィーに付す。展開溶媒としては、例えばクロ
ロホルム−メタノールまたはトルエン−酢酸エチルの混
合溶媒が用いられる。得られた有効画分は濃縮後、Seph
adexＬＨ−２０のクロマトグラフィーに付し、展開溶媒
としてはヘキサン−トルエン−メタノールの混合溶媒を
用い、得られた有効画分は濃縮後、残渣を更に分取高速
液体クロマトグラフィーを用いて精製する。ここで用い
られるカラム充填剤としては、ＯＤＳ−ＡＭ１２０−
Ｓ１０（山村化学研究所製）が、溶媒系としては、含水
アセトニトリルが用いられる。

【００１８】このようにして、後述の実施例の方法で得
られたＡＤ−２４−１ｂの物理化学的性質は次に示す通
りである。１）形状：白色固体２）比旋光度：〔α〕_D ²²＋１１０.６（ｃ＝１.０，ア
セトン）３）分子量：６２６（ＥＩＭＳ）４）分子式：Ｃ₃₇Ｈ₅₄Ｏ₈ ５）紫外線吸収スペクトル：メタノール中 λ_max（ε）：２３９（ｓｈ，２９４００），２４４
（３１９００），２５２（ｓｈ，２１２００）（ｎ
ｍ）６）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ錠剤法による主な
吸収を示す）：3460, 2970, 2930, 2875, 1710, 1450,
1380, 1340, 1310, 1290, 1180,1120, 1090, 1060, 104
0, 1010, 1000, 960, 940, 870, 820 (cm^-1) ７）¹Ｈ核磁気共鳴スペクトル（３００ＭＨz，重クロロ
ホルム中でのケミカルシフト，δppm）：0.72(3H,d,J=
6.6Hz),0.84(3H,d,J=7.4Hz),0.89-0.95(2H,m),1.00(3H,
d,J=6.4Hz),1.02(3H,d,J=6.4Hz),1.17-1.49(3H,m),1.55
(3H,s),1.57(3H,d,J=1.0Hz),1.64-1.95(9H,m),2.20-2.4
1(6H,m),3.25-3.40(3H,m),3.56-3.65(1H,m),3.94-3.96
(2H,m),4.29(1H,br-s),4.65,4.69(each 1H,AB-q,J=13.7
Hz),4.98(1H,br-t),5.07(1H,dd,J=9.4Hz,0.9Hz),5.29-
5.41(3H,m),5.69-5.77(2H,m) ただし、s：シングレット（singlet），d：ダブレット
（doublet），t：トリプレット（triplet）q：クァルテ
ット（quartet)，br：ブロード（broad）を示す。８）¹³Ｃ核磁気共鳴スペクトル（７５ＭＨz，重クロロ
ホルム中でのケミカルシフト，δppm）：173.6(s),142.
7(d),139.5(s),137.7(s),137.2(s),136.0(d),131.8(s),
123.4(d),120.6(d),120.2(d),118.1(d),98.8(s),82.2
(d),80.2(s),79.2(d),71.6(d),68.6(d),68.4(t),67.9
(d),67.7(d),48.5(t),45.7(d),36.8(t),36.4(t),36.4
(t),35.9(d),34.6(t),33.7(d),32.0(d),30.4(t),22.3
(q),20.6(q),19.9(q),17.6(q),15.6(q),12.0(q),11.4
(q) ただし、s，d，t，q は上記と同意義である。

【００１９】９）溶解性：可溶：メタノール、酢酸エチル、アセトン、ジエチルエ
ーテル、クロロホルム難溶：水 10）薄層クロマトグラフィー（担体、シリカゲルガラス
プレート６０Ｆ₂₅₄，０.２５mm，独メルク社製）： 11）高速液体クロマトグラフィー：担体：ノバパックＣ₁₈ ４μm，８×１００mm（日本ミ
リポアリミテッド社製) 溶媒系：８５％アセトニトリル／０.１％トリフルオロ
酢酸流速：１.０ml／分検出法：ＵＶ吸収、２４４nm 保持時間：１０.３分 12）酸性、中性、塩基性の別：中性これらの物理化学的性状から生理活性物質ＡＤ−２４−
１ｂの構造は前記した化合物（I）と決定された。

【００２０】

【作用】以下に実験例を挙げて生理活性物質ＡＤ−２４
−１ｂの抗線虫活性ならびに節足動物に対する活性を試
験法と共に示す。実験例１抗線虫活性セノラブヂチス属線虫（Caenorhabditis）に対する活性
を、イン・ビトロスクリーニング試験法によって評価し
た。すなわち、被試験化合物を５０％アセトンに溶解
し、マイクロプレート（８×１２well）の各well内に、
ダイリューターを用いて段階的濃度に薬液を希釈充填し
た。次に寒天培地表面に発育させた上記線虫をリン酸緩
衝液で洗い出し、線虫浮遊液を調製した。上記薬液を充
填したマイクロプレート１well宛０.２mlの線虫浮遊液
（線虫約１００雙を含む）を上乗せして各濃度の薬液に
線虫を暴露させた。薬剤の最終濃度は、１.１１ppm〜
０.００００５ppmに調製した。感作後２４時間以内の運
動停止状態を実体顕微鏡で観察し、５０％運動阻止最小
濃度（ＩＣ₅₀）および１００％運動阻止最小濃度（ＩＣ
₁₀₀）により薬物の活性を評価した。その結果を〔表
５〕に示す。

【表５】

【００２１】実験例２節足動物に対する活性アルテミア・サリナ（Artemia salina）に対する活性
を、ザ・ジャーナル・オブ・アンチバイオティクス（Th
e Journal of Antibiotics）第４２巻８号第１３０４頁
〜１３０７頁（１９８９年）に記された Blizzard らの
方法に準じたイン・ビトロスクリーニング方法によって
評価した。その結果 A. salina を死滅させる本化合物
（ＡＤ−２４−１ｂ）の最小阻止濃度は０.０２２μg／
mlであった。本発明化合物は低毒性で抗線虫活性および節足動物に
対する活性を有し、人間および動物の健康および農業に
おいて、医学的または獣医学的あるいは農薬学的に許容
される処方により、駆虫剤、殺虫剤および殺ダニ剤とし
て、安全に適用することができる。

【００２２】すなわち、本発明の生理活性物質ＡＤ−２
４−１ｂ（化合物（I））は前記の実験例においても示
されるとおり、強力な駆虫、殺ダニ、殺虫作用を有し、
とりわけ哺乳動物、例えばイヌ，ネコなどの愛玩動物、
牛，ブタ，ヒツジ，馬などの経済動物の予防、治療剤と
して有用である。例えば、シラミ，ハエ，チック，マイ
トなどの外部寄生虫の殺虫剤、殺ダニ剤として、ならび
に、例えば糸状虫，回虫，円虫，鉤虫，肺虫などの内部
寄生虫の駆虫剤として用いることができる。化合物
（I）は、通常医薬品として生理的に許容される賦形
剤、希釈剤などとともに散剤、錠剤，ペースト，カプセ
ル剤，水剤，注射剤として経口的または非経口的に投与
される。例えば経口的に投与する場合目的により異なる
がおおよそ体重１kg当たり１日平均量０.００５〜０.５
mgの割合で投与する。経口で投与する場合直接製剤を投
与しても良いし、動物飼料や飲料水に加えて投与するこ
ともできる。

【００２３】

【実施例】次に実施例を挙げて本発明を更に具体的に説
明するが、これによって本発明が限定されるものではな
い。実施例１イースト・麦芽エキス寒天からなる斜面培地に予め十分
に成育したStreptomyces phaeofaciens No. ＡＬ−６１
７２９の１白金耳量の菌体を、予め、１２０℃で３０分
間加熱処理を施した可溶性澱粉３％、グルコース２％、
コーン・スチープ・リカー（ＣＳＬ）１％、大豆粉１
％、ポリペプトン０.５％、食塩０.３％、アクトコール
０.０５％、炭酸カルシウム０.５％、ｐＨ７.０からな
る種培地５００mlを含む２リットル容坂口フラスコに接
種して、往復振盪機上で、２８℃で２日間振盪培養し
た。次に、この種培養液の全量を、予め、１２２℃で３
０分間加熱処理を施したデキストリン３％、グルコース
２％、ＣＳＬ０.５％、大豆粉０.５％、硫酸アンモニ
ウム０.５％、食塩０.１％、アクトコール０.０５％、
塩化コバルト０.００１％、炭酸カルシウム０.５％、ｐ
Ｈ７.０からなる生産培地１２００リットルを含む２０
００リットル容醗酵槽に接種して、２８℃、通気量６０
０リットル／分、撹拌１２０rpmの条件下で４日間培養
した。

【００２４】実施例２実施例１のように培養し得られた培養液（２４００リッ
トル）に、ろ過助剤としてトプコ・パーライト No. ３
１（東興パーライト社製）を添加し、プレコート剤とし
てラジオライト＃６００および同＃５００（昭和化学工
業社製）を用い、オリバーろ過機を使用し、ろ過した。
得られた固形分をアセトン（５２０リットル）に懸濁
し、１時間撹拌した後、ラジオライト＃６００を助剤と
してろ過した。ろ液を１５０リットルまで濃縮し、ｐＨ
を４.９に調整した後酢酸エチル（５０リットル）で２
回抽出した。得られた有機層を０.５Ｍ硫酸（５０リッ
トル）、水（４０リットル）で順に洗浄し、続いて、３
％重曹水（５０リットル）、水（４０リットル）で２回
ずつ順次洗浄し、得られた有機層を濃縮し濃縮液４６０
ｇを得た。濃縮液をメタノール（２リットル）に溶解
し、エチレングリコール〔ＥＧ〕（４リットル）および
ヘキサン（９リットル）を添加して、撹拌後分配し、メ
タノール−ＥＧ層を得た。ヘキサン層はメタノール−Ｅ
Ｇ（１：３）液（４.５リットル）と再度分配を行い、
メタノール−ＥＧ層を得、先に分配した同層に合一し
た。続いてメタノール−ＥＧ層にジエチルエーテル〔Ｅ
t₂Ｏ〕（５リットル）および８％食塩水（３リットル）
を添加して、撹拌後分配し、Ｅt₂Ｏ層を得た。水層は再
度Ｅt₂Ｏ（３リットル）と分配し、Ｅt₂Ｏ層を得、先の
同層に合一した。そのＥt₂Ｏ層を２％食塩水（３リット
ル）で３回洗浄し、得られたＥt₂Ｏ層を濃縮した。得ら
れた濃縮液にトルエンを添加し、不溶物をろ過によって
除いたろ液を濃縮して、残渣９７.５ｇを得た。その残
渣をトルエン（５００ml）に溶解し、シリカゲル（８リ
ットル，Kiesel gel ６０，７０〜２３０メッシュ，独
メルク社製）の高速液体クロマトグラフィーに付し、ト
ルエン−酢酸エチル（１：１）で溶出すると、ＡＤ−２
４−１ｂを含む粗画分（合計１２.５ｇ）が得られた。
粗画分は SephadexＬＨ−２０（５.６リットル，ファル
マシア社製）に付し、ヘキサン−トルエン−メタノール
（３：１：１）で溶出し、ＡＤ−２４−１ｂを含む画分
を濃縮して油状物（１０.８ｇ）が得られた。この油状
物を更に分取高速液体クロマトグラフィー（充填剤：Ｏ
ＤＳ−ＡＭ１２０−Ｓ１０（山村化学研究所製），カ
ラム：ＬＣ５０ＨＪ５０mm×２１０mm（栗田工業社
製），展開溶媒：６５％アセトニトリル，流速：４０ml
／分，検出：ＵＶ２４４nm）に付し、保持時間１４０
〜１６０分のピークを集め濃縮乾固した。残渣をアセト
ニトリル−水で処理して、ＡＤ−２４−１ｂの白色固体
（５５０mg）を得た。

【００２５】

【発明の効果】本発明の新規化合物ＡＤ−２４−１ｂ
は、駆虫剤、殺虫剤及び殺ダニ剤として有用である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｄ 7432−4Ｂ //(Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:465） (Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｃ１２Ｒ 1:465）

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式【化１】で表される生理活性物質ＡＤ−２４−１ｂ。
【請求項２】ストレプトミセス属に属する生理活性物質
ＡＤ−２４−１ｂ生産能を有する微生物を培地に培養
し、培養液中に生理活性物質ＡＤ−２４−１ｂを生成蓄
積せしめ、これを採取することを特徴とする請求項１記
載の生理活性物質の製造法。
【請求項３】請求項１記載の生理活性物質ＡＤ−２４−
１ｂを含有してなる駆虫、殺ダニもしくは殺虫剤。
【請求項４】生理活性物質ＡＤ−２４−１ｂの生産能を
有するストレプトミセスファエオファシエンス。