JPH07198723A - Ｃ型肝炎ウイルス感染症診断薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 高感度のＣ型肝炎ウイルス感染症診断薬を提
供する。 【構成】 Ｃ型肝炎ウイルスの抗原タンパク質とキャリ
アタンパク質とを連結している融合タンパク質を親水性
粒子に結合させてＣ型肝炎ウイルス感染症診断薬とす
る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、Ｃ型肝炎ウイルス感染
症診断薬に関する。

【０００２】

【従来の技術】ウイルス性肝炎は肝炎ウイルスの感染に
より起こる肝疾患である。肝炎ウイルスとしてＡ型、Ｂ
型、Ｄ（デルタ）型のほか、血液を介して感染するＡ型
でもＢ型でもない血液伝播型肝炎ウイルスがあり、この
タイプのウイルスは近年Ｃ型に分類されるものであると
考えられている。現在使用されているＣ型肝炎ウイルス
（以下、ＨＣＶという）感染症の診断薬は、ラテックス
粒子やゼラチンにＨＣＶ抗原タンパク質を結合させた凝
集法による診断薬である。ＨＣＶ抗原タンパク質として
は、ＨＣＶのエンベロープタンパク質やコアタンパク質
のような構造タンパク質、ＮＳ１ないし５タンパク質の
ような非構造タンパク質などが知られている。一般に、
フラビウイルスなどのエンベロープを有するウイルスの
診断薬としては、抗原タンパク質として構造タンパク質
と非構造タンパク質とを組み合わせたものを用いるのが
よいとされており（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．ＵＳＡ、８９、１００１１−１００１５（１９９
２））、ＨＣＶ感染症の診断薬でもコアタンパク質、Ｎ
Ｓ３タンパク質、ＮＳ４タンパク質からなる抗原タンパ
ク質が用いられている。しかし、輸血による感染などを
確実に防ぐためにはまだ充分ではなく、より高い感度の
診断薬が求められている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、かかる
従来技術のもとでより感度の高いＨＣＶ診断用凝集試薬
を得るべく鋭意検討した結果、ＨＣＶの抗原タンパク質
とキャリアタンパク質とを連結した融合タンパク質を親
水性粒子に結合すると、高感度にＨＣＶ感染症患者血清
中の抗体を検出できることを見いだし、本発明を完成す
るに至った。

【０００４】

【課題を解決するための手段】かくして本発明によれ
ば、ＨＣＶの抗原タンパク質とキャリアタンパク質とを
連結した融合タンパク質を親水性粒子に結合させた高感
度のＨＣＶ診断用凝集試薬が提供される。

【０００５】本発明で用いる抗原タンパク質は、公知の
ＨＣＶの構造タンパク質や非構造タンパク質である。構
造タンパク質としては、エンベロープタンパク質、コア
タンパク質など、非構造タンパク質としては、ＮＳ１タ
ンパク質、ＮＳ２タンパク質、ＮＳ３タンパク質、ＮＳ
４タンパク質、ＮＳ５タンパク質やこれらのタンパク質
などのほか、またこれらのタンパク質の少なくともひと
つのエピトープを含む８以上、好ましくは４０以上のア
ミノ酸からなるポリペプチド（以下、単にエピトープと
いう）なども例示される。このようなタンパク質やエピ
トープの具体的な例は、ＷＯ９０／１１０６９号、ＷＯ
９０／１４４３６号、特開平４−００４８８０号、特公
平５−８１６００号、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅ
ｓｅａｒｃｈ，１７（２４）１０３６７−１０３７２
（１９８９）、同雑誌，１８（１５）４６２６（１９９
０）、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，６５（３）１１０５−１１１
３（１９９１）等の特許公報や論文により開示されてい
る。このような抗原タンパク質のなかでもコアタンパク
質、ＮＳ３タンパク質、ＮＳ４タンパク質やこれらのエ
ピトープ及びそれらを組み合わせたものが好ましい。具
体的には、配列番号１記載のアミノ酸配列を有するタン
パク質や特開平５−７８３９５号公報の配列番号１に記
載されたアミノ酸配列のうち第１番目〜第５８３番目の
配列を有するタンパク質などが例示される。配列番号１
記載のアミノ酸配列は、第１番目〜第４２９番目までの
アミノ酸がＮＳ３タンパク質であり、第４３０番目〜第
７６７番目までのアミノ酸がＮＳ４タンパク質である。
特に、ＮＳ３タンパク質のなかで第８番目〜第２７３番
目や第３８５番目〜第４２９番目、ＮＳ４タンパク質の
中で第４３０番目〜第７４７番目のアミノ酸配列を有す
るタンパク質領域が高い抗原性を得るためには重要であ
り、これらの領域を含む抗原タンパク質を用いることが
好ましい。また、抗原タンパク質のアミノ酸配列の一部
がアミノ酸の付加・欠損・置換・脱落・挿入などで修飾
を受けたものであっても、抗原性が前記公報及び論文記
載のアミノ酸配列を有するタンパク質と同等である限り
制限はないが、通常、上述の好ましいタンパク質領域の
アミノ酸配列との相同性が８０％以上、好ましくは９０
％以上、更に好ましくは９５％以上のものであれば使用
することができる。尚、ここでいう相同性は、ＤＮＡシ
ーケンス入力解析システム「ＤＮＡＳＩＳ」（発売元：
宝酒造（株））により測定されたものを指標とするもの
である。

【０００６】抗原タンパク質として複数のタンパク質を
組み合わせたもの（以下、複合タンパク質という）を用
いる場合、タンパク質の連結される順序は特に限定され
ず、例えば、ＮＳ３タンパク質のＣ末端にＮＳ４タンパ
ク質が結合したもの、ＮＳ４タンパク質のＣ末端にＮＳ
３タンパク質が結合したもの、コアタンパク質のＣ末端
にＮＳ３タンパク質が結合しさらにＮＳ３タンパク質の
Ｃ末端にＮＳ４タンパク質が結合したもの、ＮＳ３タン
パク質とＮＳ４タンパク質の間にコアタンパク質が挿入
されているものなどが例示される。

【０００７】本発明で使用する融合タンパク質は、上述
の抗原タンパク質のＮ末端側に、更にキャリアタンパク
質を連結させたものである。キャリアタンパク質は、親
水性ポリペプチドものであれば特に限定されるものでは
ないが、好ましくは分子量２，０００〜５００，００
０、より好ましくは１０，０００〜１２０，０００のも
のであり、このようなタンパク質の具体例としては、マ
ルトース結合タンパク質（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、
２５９、１０６０６−１０６１３（１９８４））、グル
タチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（）やβ−ガラクト
シダーゼ（Ｇｅｎｅ、６７、３１−４０（１９８８））
などやその一部が例示され、なかでもマルトース結合タ
ンパク質が好ましく、分子量約４２キロダルトンの大腸
菌由来のマルトース結合タンパク質（以下、ＭＢＰとい
う）がより好ましい。このようなキャリアタンパク質を
上述の抗原タンパク質に連結させることにより、タン
パク質の親水性が高まるため凝集を起こし難くすること
ができる、キャリアタンパク質のスペーサー効果によ
り抗原が粒子表面に呈示し易くなり抗体との反応性を高
めることができる、キャリアタンパク質と特異的に結
合するタンパク質をリガンドとした担体を用いたアフィ
ニティークロマトグラフィーでの精製が容易になる等の
効果があり、とりわけ細菌由来のキャリアタンパク質を
用いた場合、キャリアタンパク質の由来となる細菌を用
いた遺伝子工学的手法での融合タンパク質の製造効率が
高くなるので好ましい。

【０００８】本発明で使用される融合タンパク質は、如
何なる方法により得られたものであってもよいが、例え
ば以下に述べるような遺伝子工学的手法による常法によ
り得ることができる。ＨＣＶ由来の抗原タンパク質およ
びキャリアタンパク質が連結している融合タンパク質を
得るためには、融合タンパク質をコードするＤＮＡ（以
下、融合タンパク質ＤＮＡという）を有するプラスミド
で大腸菌などを形質転換し、常法に従って培養し、目的
とするタンパク質を発現させ、単離すればよい。

【０００９】融合タンパク質ＤＮＡは、ＨＣＶ由来の抗
原タンパク質をコードするＤＮＡとキャリアタンパク質
をコードするＤＮＡとから構成される。抗原タンパク質
をコードするＤＮＡ（以下、抗原タンパク質ＤＮＡとい
う）は、ＨＣＶ感染症患者血清からＰＣＲ法などの常法
にしたがって得ることができる。抗原タンパク質ＤＮＡ
の具体例としては、前記公報や論文に記載されたエンベ
ロープタンパク質をコードするＤＮＡ（以下、ｅｎｖ
ＤＮＡという）、コアタンパク質をコードするＤＮＡ
（以下、ｃｏｒｅ ＤＮＡという）、ＮＳ１タンパク質
をコードするＤＮＡ（以下、ＮＳ１ ＤＮＡという）、
ＮＳ２タンパク質をコードするＤＮＡ（以下、ＮＳ２
ＤＮＡという）、配列番号１記載の塩基配列を有するＮ
Ｓ３タンパク質をコードするＤＮＡ（以下、ＮＳ３ Ｄ
ＮＡという）、ＮＳ４タンパク質をコードするＤＮＡ
（以下、ＮＳ４ ＤＮＡという）、ＮＳ５タンパク質を
コードするＤＮＡ（以下、ＮＳ５ ＤＮＡという）やこ
れらのエピトープをコードするＤＮＡなどが例示され
る。これらＤＮＡは、前述の抗原タンパク質の条件を満
たす限りにおいて、自然にまたは人工的に変異させられ
たものであってもよい。これらのＤＮＡは、天然のＨＣ
Ｖゲノム上では、５’上流側からｃｏｒｅ ＤＮＡ・ｅ
ｎｖ ＤＮＡ・ＮＳ１ ＤＮＡ・ＮＳ２ ＤＮＡ・ＮＳ
３ ＤＮＡ・ＮＳ４ ＤＮＡ・ＮＳ５ ＤＮＡの順で一
連のものとして存在している。このため、天然のＨＣＶ
ゲノムと同じ構成のＤＮＡを抗原タンパク質ＤＮＡとし
て用いる場合には、とくに問題はないが、各ＤＮＡの一
部を使用する場合や各ＤＮＡの並ぶ順番を変えたものを
使用する場合には、制限酵素などでＤＮＡを切断した
後、必要なＤＮＡ領域を読み枠がずれないように適当な
リンカーを用いて、常法により連結する必要がある。さ
らに、このような抗原タンパク質のＤＮＡを常法にした
がってクローニングしたプラスミドに、市販されている
キャリアタンパク質をコードするＤＮＡを適当なリンカ
ーを用いて挿入し、本発明で使用する融合タンパク質を
コードするＤＮＡを有するプラスミドを得る。

【００１０】融合タンパク質ＤＮＡを有するプラスミド
で形質転換する菌は、一般に使用される大腸菌、枯草
菌、酵母などが例示され、融合タンパク質ＤＮＡを挿入
するプラスミドは形質転換する菌に移入することができ
るものを用いればよい。キャリアタンパク質として大腸
菌由来のＭＢＰを選択した場合には、発現効率の点から
大腸菌の系を用いるのが好ましい。大腸菌の具体例とし
ては、ＪＭ１０９やＴＢ１などが挙げれる。得られた形
質転換菌を適当な条件で培養して融合タンパク質を発現
させた後、超音波を用いる方法やフレンチ・プレスを用
いる方法などの常法により破砕されて無細胞抽出液を
得、この抽出液をアミロース・レジン（Ｎｅｗ Ｅｎｇ
ｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ社製）などを用いたアフィニ
ティ・クロマトグラフィーのほか、イオン交換樹脂や疎
水性樹脂を用いたクロマトグラフィー、硫安分画、電気
泳動等の方法によって単離・精製され、目的とする融合
タンパク質を得ることができる。形質転換菌の培養条件
は、菌が生育する条件であれば特に限定されないが、形
質転換大腸菌の場合、通常３７℃で２〜３６時間培養す
ればよい。

【００１１】本発明で使用する親水性粒子は、特開平１
−１６３６６３号公報や特開平１−３１５４０８号公報
に記載されたアクリルアミド系の親水性ラテックス粒
子、ゼラチンやアミノ酸カルボキシ無水物の重合体のよ
うなアミノ酸ポリマー系粒子のほか、雑誌「表面」第２
８巻７９１頁（１９９１年発行）に記載されているアミ
ノ酸系ポリマーが例示されるが、とりわけゼラチンが好
ましい。これらは、常法、例えばコアセルベーション法
により製造され、ゼラチンを原料とした場合には、アラ
ビアゴム等の多糖類を併用したコンプレックス・コアセ
ルベーション法で製造するのが好ましい。さらに粒子の
形状を保持するために、グルタルアルデヒド等の架橋剤
により固定化することが好ましい。粒子の粒径は、数平
均粒子径で１〜１５μｍ程度のものであり、好ましくは
平均２〜６μｍのものである。また、粒径分布はシャー
プなものがよい。

【００１２】上述の親水性粒子の表面に上述の融合タン
パク質を結合させる方法は従来のラテックス粒子を用い
た場合と同様の方法で行えばよく、例えば、カルボジイ
ミドで縮合させる方法（Ｈ．Ｍ．Ｊｏｈｎｓｏｎ、Ｋ．
Ｂｒｅｎｎｅｒ、Ｈ．Ｅ．Ｈａｌｌ著、Ｊ．Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ．、９７、７０１（１９６６））、グルタルアルデ
ヒドで架橋する方法（Ｓ．Ａｖｒａｍｅａｓ、Ｂ．Ｔａ
ｎｄｏｎら著、Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、６、
６７（１９６９））等が挙げられるが、好ましくは１−
エチル−３−（３−ジメチルアミノプロリル）カルボジ
イミドを用いた縮合反応で粒子に融合タンパク質を結合
させる方法である。この様な方法において得られる粒子
（以下、抗原感作粒子ということがある）は、必ずしも
すべての融合タンパク質のＮ末端側が粒子に結合したも
のであるとは限らないが、同様に全ての融合タンパク質
のＣ末端側が粒子に結合したものでもなく、ある程度の
確率でＮ末端側が粒子に結合してさえいれば診断薬とし
て利用可能である。

【００１３】粒子に結合させるタンパク質は、上述の融
合タンパク質のみである必要はなく、ＨＣＶの構造タン
パク質や非構造タンパク質と併用してもよい。ここで用
いられる構造タンパク質や非構造タンパク質（以下、Ｈ
ＣＶタンパク質という）としては、先に例示したものが
挙げられ、これらはキャリアタンパク質と連結している
必要はない。これらのタンパク質は単独のタンパク質と
して用いるほか、複数のＨＣＶタンパク質を連結したＨ
ＣＶ複合抗原タンパク質として用いてもよい。また、Ｈ
ＣＶタンパク質は、融合タンパク質を構成している抗原
タンパク質と同じ種類のタンパク質であっても、異なる
種類のタンパク質であってもよい。粒子に結合させる融
合タンパク質とＨＣＶタンパク質の混合比は、１／１０
０〜１００／１、好ましくは１／１０〜１０／１であ
る。あるタンパク質のみが多量にある状態では、非特異
的反応が起こり、診断薬としての検出感度が低下するの
で好ましくない。

【００１４】更に、この抗原感作粒子を免疫学的診断
薬、例えば受身凝集反応に使用する場合、粒子を着色す
るのが好ましい。親水性を有する本発明の粒子は通常は
白色であり、これを着色することで凝集像の判定を容易
にすることができる。着色剤としては、例えば、リアク
テブ・バイオレット、食用赤色３号、ローズベンガル、
ニュートラルレッドなどの赤色色素、あるいはクリスタ
ルバイオレット、メチレンブルーなどの青色色素等を用
いることが出来る。

【００１５】本発明のＣ型肝炎ウイルス感染症診断薬の
好ましい態様を以下に示す。 （１） キャリアタンパク質がマルトース結合タンパク
質、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、β−ガラ
クトシダーゼから選ばれるひとつのタンパク質である本
発明のＣ型肝炎ウイルス感染症診断薬。 （２） キャリアタンパク質が大腸菌由来のマルトース
結合タンパク質である本発明のＣ型肝炎ウイルス感染症
診断薬。 （３） 抗原タンパク質がＮＳ３タンパク質及び／また
はＮＳ４タンパク質である本発明のＣ型肝炎ウイルス感
染症診断薬。 （４） 親水性粒子がアミノ酸ポリマー系粒子である本
発明のＣ型肝炎ウイルス感染症診断薬。 （５） キャリアタンパク質の連結していないＣ型肝炎
ウイルスの抗原タンパク質がコアタンパク質である本発
明のＣ型肝炎ウイルス感染症診断薬。

【００１６】

【発明の効果】親水性粒子とＨＣＶの抗原タンパク質と
を、キャリアタンパク質を介して結合させることによ
り、高感度のＨＣＶ感染症診断薬が得られる。

【００１７】

【実施例】以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体的
に説明する。尚、実施例、参考例、試験例、および比較
試験例中の％は特に断りのないかぎり重量基準である。

【００１８】（参考例１）ＮＳ３およびＮＳ４タンパク
質からなる抗原タンパク質ＤＮＡを有するプラスミドの
取得とＤＮＡの配列解析 Ｂ型肝炎ウイルス陰性でＧＰＴ値１００単位以上のヒト
血清０．５ｍｌに５倍量のグアニジウムチオシアネート
溶液（４Ｍグアニジウムチオシアネート、５０ｍＭ Ｔ
ｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．６）、１０ｍＭ ＥＤＴＡ、
０．１Ｍ ２−メルカプトメタノール、２％ザルコシ
ル）を加え、フェノール／クロロホルム抽出し、グリコ
ーゲンをキャリアーとしてエタノール沈澱により血清中
の全ＲＮＡを精製した。

【００１９】岡本ら（Ｊａｐａｎ Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅ
ｄ．，６０巻、第３号、第１６７−１７７頁、１９９０
年）の方法に従ってランダムヘキサマーをプライマーと
して先に得られたＲＮＡのｃＤＮＡを、ｃＤＮＡ合成シ
ステム（ベーリンガーマンハイム社製）を用いて作製し
た。このｃＤＮＡをテンプレートとして、ＰＣＲ法を行
い、目的とするＤＮＡ断片を増幅した。増幅されたＤＮ
Ａ断片の５’末端をＴ４ポリヌクレオチドキナーゼによ
りリン酸化した後、制限酵素ＳｍａＩで消化したｐＵＣ
１８と連結してクローニングした。得られた各プラスミ
ドにクローニングされたＨＣＶのｃＤＮＡの塩基配列
は、Ｓｅｑｕｅｎａｓｅシーケンスキット（Ｕｎｉｔｅ
ｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ社製）によ
り決定した。この結果、得られた塩基配列から目的とす
るＮＳ３ ＤＮＡとＮＳ４ ＤＮＡをプラスミドｐＵＣ
１８のＳｍａＩサイトに、常法にしたがって挿入し、プ
ラスミドｐＩＢ（４９８９ｂｐ）を構築した。このプラ
スミドに挿入されているＨＣＶの抗原タンパク質ＤＮＡ
の塩基配列と対応するアミノ酸配列は、配列番号１に記
載されたものである。

【００２０】（参考例２）ＭＢＰ ＤＮＡとＮＳ３およ
びＮＳ４タンパク質ＤＮＡとが連結した融合タンパク質
の製造 上記参考例１で構築したプラスミドｐＩＢ中の抗原タン
パク質ＤＮＡの５’側にＤＮＡ断片（5' GTTGCGGAATTCG
TGGACTTC）を挿入して、ＥｃｏＲＩサイトを付加した。
また、同様に抗原タンパク質ＤＮＡの３’側にＤＮＡ断
片（5' ACGCGCCGAAGCTTAGTCGCTC）を挿入して、終止コ
ドンとＨｉｎｄＩＩＩサイトを付加した。このようにし
て得られた４９５５ｂｐのプラスミドをｐＩＢ’と命名
した。

【００２１】このｐＩＢ’を制限酵素ＥｃｏＲＩとＨｉ
ｎｄＩＩＩとで消化して、両端が改変された抗原タンパ
ク質ＤＮＡの断片（２２５０ｂｐ）を得た。一方、ＭＢ
Ｐを有するプラスミドｐＭＡＬ−ｃＲＩ（Ｎｅｗ Ｅｎ
ｇｌａｎｄＢｉｏｌａｂｓ社製）を制限酵素ＥｃｏＲＩ
とＨｉｎｄＩＩＩとで消化して、ＭＢＰ ＤＮＡを含む
６１０１ｂｐの断片を得た。改変された抗原タンパク質
ＤＮＡの断片とＭＢＰ ＤＮＡを含むＤＮＡ断片とをＤ
ＮＡライゲースにより連結し、得られたプラスミドをｐ
ＭＡＬ−ＩＢと命名した。このプラスミドは、配列番号
１に示されるＤＮＡの第１９番目〜第２２６５番目のＤ
ＮＡの５’側にＭＢＰ ＤＮＡのｍａｌＥ△２−２６
（大腸菌由来のマルトース結合タンパク質の第２〜２６
番目のアミノ酸（シグナルペプチド）が欠損したタンパ
ク質の遺伝子）が連結したＤＮＡ領域を有するものであ
る。

【００２２】このようにして得られたｐＭＡＬ−ＩＢで
大腸菌ＪＭ１０９株を形質転換し、アンピシリン耐性の
形質転換菌を得た。この形質転換菌を５０μｇ／ｍｌの
アンピシリンを添加したＬＢ培地（”Ｍｏｌｅｃｕｌａ
ｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ”６８頁）８ｌに６６０ｎｍでの濁
度が０．１５になるように植菌した。これを３７℃で２
時間振とう培養後、１ｍＭイソプロピル−β−Ｄ（−）
−チオガラクトピラノシドで誘導し、さらに３７℃で４
時間振とう培養した。１５，０００×ｇの遠心分離によ
って２０ｇの湿菌体を得た。これを６０ｍｌのトリス塩
酸緩衝液（２５ｍＭ、ｐＨ８．０）に懸濁後、フレンチ
プレスで破砕し、１５，０００×ｇ、２０分の遠心分離
で上清を集めた。これをＤＥＡＥ−トヨパール（東ソー
社製）のカラム（直径２．５ｃｍ×高さ３６ｃｍ）に吸
着させ、０Ｍ−０．８Ｍ ＮａＣｌの濃度勾配（８００
ｍｌ）で溶出を行い、目的とするタンパク質ＭＡＬ−Ｉ
Ｂを得た。更に、アミロースレジン（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ
ａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ社製）のカラム（直径２．５ｃ
ｍ×高さ１５ｃｍ）に吸着させ、１０ｍＭのマルトース
（ＰＢＳ溶液）で溶出を行い、純度が９９％以上の目的
とする融合タンパク質を約４０ｍｇ得た。この溶出され
たタンパク質溶液の濃度は、ローリー法により測定した
ところ１．０ｍｇ／ｍｌであった。この液を抗原原液と
して、これ以後の操作に用いた。

【００２３】（参考例３）コアタンパク質の製造 特開平５−７８３９５号公報実施例１に記載されたＮＡ
ＮＢＶ抗原タンパク質をコードする遺伝子を有するプラ
スミドｐＩＫ４ＣＥを制限酵素ＮｄｅＩとＣｌａＩとで
切断後、クレノウフラグメントで平滑末端とし、０．３
７ＫｂｐのＤＮＡ断片をアガロースゲルから回収した。
このＤＮＡ断片は、ＨＣＶのコアタンパク質のＮ末端側
１２３アミノ酸分をコードするものであり、特開平５−
７８３９５号公報の配列番号１に記載された配列の第１
番目から１２３番目のアミノ酸配列に相当する塩基配列
である。プラスミドｐＫＫ２２３−３（ファルマシア社
製）を制限酵素ＥｃｏＲＩで切断後、クレノウフラグメ
ントで平滑末端とし、先に回収した０．３７ｋｂｐのＤ
ＮＡ断片をＤＮＡライゲースを用いて連結し、得られた
プラスミドで大腸菌ＪＭ１０９株を形質転換し、出現し
たアンピシリン耐性の形質転換菌から、０．３７Ｋｂｐ
のＤＮＡ断片が正方向に挿入されているプラスミドｐＫ
ＫＣｌａを有するコロニーを選択した。プラスミドｐＫ
ＫＣｌａは、制限酵素ＫｐｎＩとＨｉｎｄＩＩＩとで切
断したとき、約０．３ＫｂｐのＤＮＡ断片が出現するプ
ラスミドである。

【００２４】ついで５０μｇ／ｍｌのアンピシリンを添
加したＬＢ培地８ｌに、プラスミドｐＫＫＣｌａで形質
転換した大腸菌ＪＭ１０９’を６６０ｎｍでの濁度が
０．１５となるように植菌した。これを３７℃で２時間
振とう培養した後、１ｍＭイソプロピル−β−Ｄ（−）
−チオガラクトピラノシドで誘導し、さらに３７℃で２
時間振とう培養した。１５，０００×ｇの遠心分離によ
って２０ｇの湿菌体を得た。これを６０ｍｌのＰＢＳ
（１０ｍＭリン酸カリウム緩衝液、０．８５％塩化ナト
リウム）に懸濁後、フレンチプレスで破砕し、１５００
０×ｇ、２０分間遠心分離し、沈殿を集めた。次にこの
沈殿を６０ｍｌの可溶化緩衝液（７Ｍ尿素、２０ｍＭジ
スレイトール、１％トリトンＸ−１００、５０ｍＭトリ
ス塩酸（ｐＨ８．０））に懸濁し、超音波破砕機で分散
後、室温で一晩振とうさせ、可溶画分として粗タンパク
質液を得た。この粗タンパク質液をＣＭ−トーヨーパル
（東ソー社製）のカラム（直径２ｃｍ×高さ１６ｃｍ）
に吸着させ、６Ｍ尿素存在下で、０．２Ｍ−０．８Ｍ塩
化ナトリウム水溶液の濃度勾配（４００ｍｌ）で溶出を
行い、純度が９９％以上のＨＣＶのコアタンパク質を約
１０ｍｇ得た。これをＰＢＳで透析した後、コアタンパ
ク質の濃度をローリー法で測定したところ、１．５ｍｇ
／ｍｌであった。この液を抗原原液とした。

【００２５】（参考例４）ＭＢＰとＮＳ３タンパク質と
が連結した融合タンパク質の製造 参考例１で得たプラスミドｐＩＢ（４９８９ｂｐ）をテ
ンプレートとしてプライマー（５）5' GTTGCGGAATTCGTG
GACTTCとプライマー（６）5' GCGAAGCTTTTAGGACTGTCTGA
とを用いて常法によりＰＣＲ法を行い、８３４ｂｐのＤ
ＮＡ断片を得た。参考例２と同様にｐＭＡＬ−ｃＲＩを
制限酵素ＥｃｏＲＩとＨｉｎｄＩＩＩとで消化して、Ｍ
ＢＰ ＤＮＡを含む６１０１ｂｐの断片を得た。先に得
られた８３４ｂｐのＤＮＡの断片を制限酵素ＥｃｏＲＩ
とＨｉｎｄＩＩＩで消化した後、ＭＢＰ ＤＮＡを含む
６１０１ｂｐのＤＮＡ断片とＤＮＡライゲースにより連
結し、得られたプラスミドをｐＩＢ３と命名し、このプ
ラスミドｐＩＢ３で大腸菌ＪＭ１０９株を形質転換し
た。ついで５０μｇ／ｍｌのアンピシリンを添加したＬ
Ｂ培地８ｌに、この形質転換菌を６６０ｎｍでの濁度が
０．１５となるように植菌した。これを３７℃で２時間
振とう培養した後、１ｍＭイソプロピル−β−Ｄ（−）
−チオガラクトピラノシドで誘導し、さらに３７℃で２
時間振とう培養した。１５，０００×ｇの遠心分離によ
って２５ｇの湿菌体を得た。これを７５ｍｌのＰＢＳ
（１０ｍＭリン酸カリウム緩衝液、０．８５％塩化ナト
リウム）に懸濁後、フレンチプレスで破砕し、２０００
０×ｇ、３０分間遠心分離し、上清を得た。この上清を
ＤＥＡＥ−トヨパール（東ソー社製）のカラム（２．５
ｃｍ×３６ｃｍ）に吸着させ、０−０．６Ｍ塩化ナトリ
ウム水溶液の濃度勾配（６００ｍｌ）で溶出を行い、目
的とするタンパク質ＭＡＬ−ＩＢ３（ＭＢＰのＣ末端側
にＮＳ３タンパク質が連結している融合タンパク質）を
得た。更に、アミロースレジン（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎ
ｄ Ｂｉｏｌａｂｓ社製）のカラム（直径２．５ｃｍ×
高さ１５ｃｍ）に吸着させ、１０ｍＭのマルトース（Ｐ
ＢＳ溶液）で溶出を行い、純度が９９％以上のタンパク
質ＭＡＬ−ＩＢ３（７５ｍｇ）を得た。タンパク質溶液
の濃度をローリー法で測定したところ、２．５ｍｇ／ｍ
ｌであった。この液を抗原原液とした。

【００２６】（参考例５）ＮＳ３タンパク質の製造 参考例４で得られた抗原原液３０ｍｌ（ＭＡＬ−ＩＢ３
融合タンパク質量は７５ｍｇ）をファクターＸａ溶液
（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ社製）を２
５０μｌと１Ｍの塩化カルシウム水溶液１２０μｌを加
え、室温で一晩静置した。その後、これに塩化ナトリウ
ムを溶解させて塩化ナトリウムの濃度が２Ｍとなるよう
に調製した。これをフェニル−トヨパール（東ソー社
製）のカラム（直径１．５ｃｍ×高さ１０ｃｍ）に吸着
させた。２Ｍ−０Ｍ塩化ナトリウムの濃度勾配（１００
ｍｌ）で溶出を行い、純度９９％以上のタンパク質ＩＢ
３を得た。このタンパク質溶液をローリー法で測定した
ところ、１．８ｍｌ／ｍｌであった。この液を抗原原液
とした。

【００２７】（参考例６）ＭＢＰとＮＳ４タンパク質と
が連結した融合タンパク質の製造 参考例１で得たプラスミドｐＩＢ（４９８９ｂｐ）をテ
ンプレートとしてプライマー（７）5' CTCACTGAATTCGAT
GCCCACとプライマー（８）5' ACGCGCCGAAGCTTAGTCGCTと
を用いて常法によりＰＣＲ法を行い、１１３７ｂｐのＤ
ＮＡ断片を得た。参考例２と同様にｐＭＡＬ−ｃＲＩを
制限酵素ＥｃｏＲＩとＨｉｎｄＩＩＩとで消化して、Ｍ
ＢＰ ＤＮＡを含む６１０１ｂｐの断片を得た。先に得
られた１１３７ｂｐのＤＮＡの断片を制限酵素ＥｃｏＲ
ＩとＨｉｎｄＩＩＩで消化した後、ＭＢＰ ＤＮＡを含
む６１０１ｂｐのＤＮＡ断片とＤＮＡライゲースにより
連結し、得られたプラスミドをｐＩＢ４と命名し、この
プラスミドｐＩＢ４で大腸菌ＪＭ１０９株を形質転換し
た。ついで５０μｇ／ｍｌのアンピシリンを添加したＬ
Ｂ培地７．５ｌに、この形質転換菌を６６０ｎｍでの濁
度が０．１５となるように植菌した。これを３７℃で２
時間振とう培養した後、１ｍＭイソプロピル−β−Ｄ
（−）−チオガラクトピラノシドで誘導し、さらに３７
℃で２時間振とう培養した。１５，０００×ｇの遠心分
離によって２０ｇの湿菌体を得た。これを６０ｍｌのＰ
ＢＳ（１０ｍＭリン酸カリウム緩衝液、０．８５％塩化
ナトリウム）に懸濁後、フレンチプレスで破砕し、２５
０００×ｇ、６０分間遠心分離し、沈殿を集めた。この
沈殿を４０ｍｌの可溶化緩衝液（７Ｍ尿素、２０ｍＭジ
スレイトール、１％トリトンＸ−１００、５０ｍＭトリ
ス塩酸（ｐＨ８．０））に懸濁し、超音波破砕機で分散
後、室温で一晩振とうさせ、可溶画分として粗タンパク
質液を得た。この粗タンパク質液から透析で尿素を除去
した後、アミロースレジン（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ
Ｂｉｏｌａｂｓ社製）のカラム（直径２．５ｃｍ×高さ
１５ｃｍ）に吸着させ、１０ｍＭのマルトース（ＰＢＳ
溶液）で溶出を行い、純度が９９％以上のタンパク質Ｍ
ＡＬ−ＩＢ４（７０ｍｇ）を得た。タンパク質溶液の濃
度をローリー法で測定したところ、１．５ｍｇ／ｍｌで
あった。この液を抗原原液とした。

【００２８】（参考例７）アミノ酸ポリマー粒子の製造 等電点（ｐＩ）が８．８のゼラチンを水に懸濁させ、加
温して溶解させた。この液を水酸化ナトリウム水溶液を
用いてｐＨ８．５に調整し、水を添加して５％のゼラチ
ン溶液を得た。また、アラビアゴムを水に溶解させ、濾
過することにより４％のアラビアゴム水溶液を得た。得
られた２つの水溶液を４０℃に加温して、それぞれ１０
ｍｌづつ混合し、４０℃に加温した４０％メタノール水
溶液６０ｍｌに注ぎ入れてよく攪拌した。続いて酢酸を
滴下して、ｐＨを約４にまで下げて粒子を形成させた。
得られた粒子分散液を氷冷し、０．５ｇのグルタルアル
デヒドを加えて、よく攪拌した。１昼夜、４℃で静置し
た後、９００×ｇで１０分間遠心して、粒子を回収し
た。回収した粒子は、遠心操作で充分水で洗浄した後、
４％ホルムアルデヒド水溶液に分散し、４℃で５日間静
置した。これを９００×ｇで遠心して、粒子を回収し、
遠心操作で水で洗浄した。このようにして得られた粒子
の数平均粒子径は約４μｍであった。

【００２９】（実施例１）抗原感作粒子Ａの調製 参考例７で得た粒子（以下、担体粒子という）に、水を
加えて１０％分散液を調整し、参考例２で得た抗原原液
に、リン酸緩衝液を加えて５０μｇ／ｍｌに希釈した希
釈液を調整した。１０％担体粒子分散液０．５ｍｌに抗
原の５０μｇ／ｍｌ希釈液１ｍｌと５０ｍｇ／ｍｌに調
整した１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロリ
ル）カルボジイミド水溶液０．０５ｍｌを加えた。これ
を３７℃で１．５時間振盪した後、先に調製した粒子懸
濁用液（０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．５）
・１％正常ウサギ血清・０．０５％ＮａＮ₃）２ｍｌで
３回洗浄し、最後に４ｍｌの粒子懸濁用液に懸濁して
１．２５％の抗原感作粒子Ａを得た。

【００３０】（実施例２）抗原感作粒子Ｂの調製 参考例２および３で得た抗原原液をそれぞれ２０、１０
μｇ／ｍｌつづ用いる以外は実施例１と同様の方法によ
り１．２５％の抗原感作粒子Ｂを得た。

【００３１】（実施例３）抗原感作粒子Ｃの調製 参考例３、４および６で得た抗原原液をそれぞれ２０、
１０、１０μｇ／ｍｌつづ用いる以外は実施例１と同様
の方法により１．２５％の抗原感作粒子Ｃを得た。

【００３２】（実施例４）抗原感作粒子Ｄの調製 参考例３、５および６で得た抗原原液をそれぞれ２０、
５、１０μｇ／ｍｌつづ用いる以外は実施例１と同様の
方法により１．２５％の抗原感作粒子Ｄを得た。

【００３３】（試験例）マイクロタイター法によるＨＣ
Ｖ感染患者血清との反応性の検討 診断薬粒子として実施例１で得た感作粒子Ａ、Ｂ、Ｃ、
およびＤとオーソ・ダイアグノスティック・システムズ
社製の商品名「オーソ ＨＣＶ Ａｂ ＰＡテストＩ
Ｉ」の粒子（コアタンパク質、ＮＳ３タンパク質、ＮＳ
４タンパク質の一部から成るＨＣＶ抗原タンパク質をゼ
ラチン粒子に結合させているもの；以下、表を含めて
「市販品」という）を用い、オーソ・ダイアグノスティ
ック・システムズ社製のオーソ ＨＣＶ Ａｂ ＰＡテ
ストＩＩの定量法マニュアルに従って、それぞれの粒子
を用いた場合のマイクロタイター法による試験を行っ
た。表中＋は凝集が観察されたもの、−は凝集が観察さ
れなかったものである。 結果は表１に示す。

【００３４】

【表１】

【００３５】表１の結果から、本発明の抗原感作粒子
は、市販品と比べて診断薬としての鋭敏性が優れている
ことが分かった。なお、各抗原感作粒子・比較例ともに
対照実験として検体希釈液の代わりに正常人血清を用い
たところ、凝集像はいづれの血清希釈倍率においても全
く観察されなかった。

【００３６】配列番号:1 配列の長さ:2303 配列の型:核酸 鎖の数:二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:Genomic DNA 起源 生物名:血液伝播型非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス 配列 TGC ACC CGG GGG GTT GCG AAG GCG GTG GAC TTC ATA CCC GTT GAG CCT 48 Cys Thr Arg Gly Val Ala Lys Ala Val Asp Phe Ile Pro Val Glu Pro 1 5 10 15 ATG GAA ACT ACT ATG CGG TCT CCG GTC TTC ACA GAC AAC TCT TCC CCC 96 Met Glu Thr Thr Met Arg Ser Pro Val Phe Thr Asp Asn Ser Ser Pro 20 25 30 CCG GCT GTA CCG CAG ACA TTC CAA GTG GCC CAT CTA CAC GCT CCC ACT 144 Pro Ala Val Pro Gln Thr Phe Gln Val Ala His Leu His Ala Pro Thr 35 40 45 GGC AGC GGT AAG AGC ACC AGA GTG CCA GCT GCA TAT GCC AGC CAA GGG 192 Gly Ser Gly Lys Ser Thr Arg Val Pro Ala Ala Tyr Ala Ser Gln Gly 50 55 60 TAC AAG GTG CTC GTC TTG AAC CCG TCC GTT GCC GCC ACA TTG GGC TTT 240 Tyr Lys Val Leu Val Leu Asn Pro Ser Val Ala Ala Thr Leu Gly Phe 65 70 75 80 CGG GCG TAT ATG TCT AAA GCA CAT GGT ATC GAC CCC AAC ATC AGA ACT 288 Arg Ala Tyr Met Ser Lys Ala His Gly Ile Asp Pro Asn Ile Arg Thr 85 90 95 GGG GTG AGG ACT ATC ACC ACG GGT GCC CCT ATC ACA TAC TCC ACC TAC 336 Gly Val Arg Thr Ile Thr Thr Gly Ala Pro Ile Thr Tyr Ser Thr Tyr 100 105 110 GGC AAG TTC CTT GCC GAC GGT GGA TGC TCC GGG GGC GCC TAT GAC ATC 384 Gly Lys Phe Leu Ala Asp Gly Gly Cys Ser Gly Gly Ala Tyr Asp Ile 115 120 125 ATC ATA TGT GAT GAG TGC CAC TCA ACT GAC TCA ACT ACC ATC TTG GGC 432 Ile Ile Cys Asp Glu Cys His Ser Thr Asp Ser Thr Thr Ile Leu Gly 130 135 140 ATT GGC ACA GTC CTG GAC CAA GCG GAG ACG GCT GGA GCT CGG CTC GTC 480 Ile Gly Thr Val Leu Asp Gln Ala Glu Thr Ala Gly Ala Arg Leu Val 145 150 155 160 GTG CTC GCC ACC GCT ACG CCT CCG GGA TCG GTC ACC GTA CCA CAC CCC 528 Val Leu Ala Thr Ala Thr Pro Pro Gly Ser Val Thr Val Pro His Pro 165 170 175 AAT ATC GAG GAG GTG GCC CTG TCC AAC ACA GGA GAG ATT CCC TTC TAC 576 Asn Ile Glu Glu Val Ala Leu Ser Asn Thr Gly Glu Ile Pro Phe Tyr 180 185 190 GGC AAA GCC ATC CCC ATC GAG GTC ATC AAG GGG GGA AGT CAT CTC ATT 624 Gly Lys Ala Ile Pro Ile Glu Val Ile Lys Gly Gly Ser His Leu Ile 195 200 205 TTC TGC CAT TCC AAG AAG AAG TGT GAC GAG CTC GCC GCA AAG CTG TCA 672 Phe Cys His Ser Lys Lys Lys Cys Asp Glu Leu Ala Ala Lys Leu Ser 210 215 220 GCC CTC GGA CTC AAT GCT GTA GCG TAT TAT CGG GGT CTT GAT GTG TCC 720 Ala Leu Gly Leu Asn Ala Val Ala Tyr Tyr Arg Gly Leu Asp Val Ser 225 230 235 240 GTC ATA CCG ACC AGC GGA GAC GTC GTC GTC GTG GCG ACA GAC GCT CTA 768 Val Ile Pro Thr Ser Gly Asp Val Val Val Val Ala Thr Asp Ala Leu 245 250 255 ATG ACG GGC TAC ACC GGC GAC TTT GAC TCA GTG ATC GAC TGT AAC ACA 816 Met Thr Gly Tyr Thr Gly Asp Phe Asp Ser Val Ile Asp Cys Asn Thr 260 265 270 TGT GTC ATC CAG ACA GTC GAT TTT AGT TTG GAT CCC ACT TTC ACC ATC 864 Cys Val Ile Gln Thr Val Asp Phe Ser Leu Asp Pro Thr Phe Thr Ile 275 280 285 GAG ACA ACG ACC GTG CCC CAA GAC GCG GTG TCG CAC CCG CAA CGG CGA 912 Glu Thr Thr Thr Val Pro Gln Asp Ala Val Ser His Pro Gln Arg Arg 290 295 300 GGT AGG ACT GGC AGA GGT AGG AGA GGC ATC TAC AGG TTT GTG ACT CCA 960 Gly Arg Thr Gly Arg Gly Arg Arg Gly Ile Tyr Arg Phe Val Thr Pro 305 310 315 320 GGA GAA CGG CCC TCG GGC ATG TTC GAT TCT TCG GTC CTG TGT GAG TGC 1008 Gly Glu Arg Pro Ser Gly Met Phe Asp Ser Ser Val Leu Cys Glu Cys 325 330 335 TAT GAC GCA GGC TGT GCT TGG TAC GAG CTC ACG CCC GCT GAG ACT TCA 1056 Tyr Asp Ala Gly Cys Ala Trp Tyr Glu Leu Thr Pro Ala Glu Thr Ser 340 345 350 GTT AGG TTA CGG GCT TAC CTG AAT ACA CCA GGT TTA CTC GTC TGT CAG 1104 Val Arg Leu Arg Ala Tyr Leu Asn Thr Pro Gly Leu Leu Val Cys Gln 355 360 365 GAC CAT CTG GAG TTC TGG GAG GGT GTC TTC ACA GGC CTC ACT CAT ATA 1152 Asp His Leu Glu Phe Trp Glu Gly Val Phe Thr Gly Leu Thr His Ile 370 375 380 GAT GCC CAC TTC TTG TCT CAG ACT AAG CAA GCA GGA GAC AGC TTC CCC 1200 Asp Ala His Phe Leu Ser Gln Thr Lys Gln Ala Gly Asp Ser Phe Pro 385 390 395 400 TAC CTG GTA GCA TAC CAG GCT ACA GTG TGC GCC AGG GCC CAA GCT CTA 1248 Tyr Leu Val Ala Tyr Gln Ala Thr Val Cys Ala Arg Ala Gln Ala Leu 405 410 415 CCT CCA TCG TGG GAT CAA ATG TGG AAG TGT CTC ACA CGG CTA AAG CCT 1296 Pro Pro Ser Trp Asp Gln Met Trp Lys Cys Leu Thr Arg Leu Lys Pro 420 425 430 ACG CTA ACG CGG CCA ACA CCC CTG TTG TAT AGG CTA GGA GCT GTG CAA 1344 Thr Leu Thr Arg Pro Thr Pro Leu Leu Tyr Arg Leu Gly Ala Val Gln 435 440 445 AAC GAG GTC ACC CTC ACA CAC CCC GTA ACC AAA TAC ATC ATG GCA TGC 1392 Asn Glu Val Thr Leu Thr His Pro Val Thr Lys Tyr Ile Met Ala Cys 450 455 460 ATG TCA GCT GAC CTA GAG ATC GTC ACT AGC ACC TGG GTG CTG GTA GGC 1440 Met Ser Ala Asp Leu Glu Ile Val Thr Ser Thr Trp Val Leu Val Gly 465 470 475 480 GGG GTC CTT GCC GCT CTG GCC GCG TAC TGC CTG ACA ACG GGC AGC GTG 1488 Gly Val Leu Ala Ala Leu Ala Ala Tyr Cys Leu Thr Thr Gly Ser Val 485 490 495 GTC ATT GTG GGC AGG GTC GTC TTG TCA GGG AGG CCG GCT ATC ATT CCC 1536 Val Ile Val Gly Arg Val Val Leu Ser Gly Arg Pro Ala Ile Ile Pro 500 505 510 GAC AGG GAA GTT CTC TAC CGG GAG TTC GAC GAG ATG GAG GAG TGC GCC 1584 Asp Arg Glu Val Leu Tyr Arg Glu Phe Asp Glu Met Glu Glu Cys Ala 515 520 525 ACA CAC CTC CCT TAC ATC GAA CAG GGA ATG CAG CTC GCC GAG CAA TTC 1632 Thr His Leu Pro Tyr Ile Glu Gln Gly Met Gln Leu Ala Glu Gln Phe 530 535 540 AAG CAG AAG GCG TTC GGG TTG CTG CAA ACA GCC ACC AAA CAA GCG GAG 1680 Lys Gln Lys Ala Phe Gly Leu Leu Gln Thr Ala Thr Lys Gln Ala Glu 545 550 555 560 GCT GCT GCT CCC GTG GTG GAG TCC AAG TGG CGG ACC CTT GAG GCT TTC 1728 Ala Ala Ala Pro Val Val Glu Ser Lys Trp Arg Thr Leu Glu Ala Phe 565 570 575 TGG GCG AAG CAC ATG TGG AAT TTC ATC AGC GGG ATA CAA TAC TTG GCG 1776 Trp Ala Lys His Met Trp Asn Phe Ile Ser Gly Ile Gln Tyr Leu Ala 580 585 590 GGC CTG TCG ACT CTG CCT GGG AAC CCC GCG ATA GCA TCG CTC ATG GCA 1824 Gly Leu Ser Thr Leu Pro Gly Asn Pro Ala Ile Ala Ser Leu Met Ala 595 600 605 TTC ACA GCC TCT ATC ACC AGC CCG CTC ACC ACC CAA CAC ACC CTC TTG 1872 Phe Thr Ala Ser Ile Thr Ser Pro Leu Thr Thr Gln His Thr Leu Leu 610 615 620 TTT AAC ATC TTG GGG GGA TGG GTG GCT GCC CAA CTC GCC CCC ACC AGC 1920 Phe Asn Ile Leu Gly Gly Trp Val Ala Ala Gln Leu Ala Pro Thr Ser 625 630 635 640 GCT GCT TCA GCT TTC GTG GGC GCC GGC ATT GCC GGT GCG GCT GTT GGC 1968 Ala Ala Ser Ala Phe Val Gly Ala Gly Ile Ala Gly Ala Ala Val Gly 645 650 655 AGC ATA GGC CTT GGG AAG GTG CTT GTG GAC ATT CTA GCG GGT TAT GGA 2016 Ser Ile Gly Leu Gly Lys Val Leu Val Asp Ile Leu Ala Gly Tyr Gly 660 665 670 GCG GGG GTG GCA GGC GCA CTC GTG GCC TTT AAG GTC ATG AGT GGT GAG 2064 Ala Gly Val Ala Gly Ala Leu Val Ala Phe Lys Val Met Ser Gly Glu 675 680 685 ATG CCC TCC ACT GAG GAC CTG GTC AAC TTG CTC CCT GCT ATC CTC TCT 2112 Met Pro Ser Thr Glu Asp Leu Val Asn Leu Leu Pro Ala Ile Leu Ser 690 695 700 CCT GGT GCC CTG GTC GTC GGG GTC GTG TGC GCA GCA ATA CTG CGT CGG 2160 Pro Gly Ala Leu Val Val Gly Val Val Cys Ala Ala Ile Leu Arg Arg 705 710 715 720 CAT GTG GGC CCA GGG GAG GGG GCT GTG CAG TGG ATG AAC CGG CTG ATA 2208 His Val Gly Pro Gly Glu Gly Ala Val Gln Trp Met Asn Arg Leu Ile 725 730 735 GCG TTC GCT TCG CGG GGC AAC CAC GTC TCC CCC ACG CAC TAT GTG CCT 2256 Ala Phe Ala Ser Arg Gly Asn His Val Ser Pro Thr His Tyr Val Pro 740 745 750 GAG AGC GAC GCC GCA GCG CGC GTC ACC CAG ATC CTC TCC AGC CTT AC 2303 Glu Ser Asp Ala Ala Ala Arg Val Thr Gln Ile Leu Ser Ser Leu 755 760 765 767

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 //(Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｒ 1:92） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19） Ｃ１２Ｒ 1:92）

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 Ｃ型肝炎ウイルスの抗原タンパク質とキ
   ャリアタンパク質とを連結した融合タンパク質を親水性
   粒子に結合して成ることを特徴とするＣ型肝炎ウイルス
   感染症診断薬。
2. 【請求項２】 さらにＣ型肝炎ウイルスの抗原タンパク
   質がキャリアタンパク質を介さずに結合している請求項
   １記載のＣ型肝炎ウイルス感染症診断薬。