JPH07206690A

JPH07206690A - 癌治療薬およびその中間体

Info

Publication number: JPH07206690A
Application number: JP6015815A
Authority: JP
Inventors: Akiyo Shigematsu; 昭世重松; Yuka Suzuki; 由香鈴木; Joji Yui; 譲二由井
Original assignee: Seitai Kagaku Kenkyusho KK
Current assignee: Seitai Kagaku Kenkyusho KK
Priority date: 1994-01-14
Filing date: 1994-01-14
Publication date: 1995-08-08

Abstract

(57)【要約】【目的】癌病変部に局在して高い治療効果をあげる癌
治療薬およびその中間体の提供。【構成】癌治療薬は、癌細胞に対する特異的抗体を半
減期の短い放射性核種で放射性標識した放射性薬剤から
成る。中間体は、動物から摘出された癌病巣部を所定の
低い温度で凍結乾燥して、水に懸濁した注射用懸濁液。
この懸濁液から癌特異的抗体が得られる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は癌治療薬およびその中間
体に関するもので、特に核医学的癌治療薬およびその中
間体となる注射用懸濁液に関するものである。

【０００２】

【技術の背景】癌治療のため非常に多くの薬剤が研究さ
れている。その中で、 ¹³¹Ｉ等の放射性原子を含む物質
を癌病変部に結合させ、電離放射線の局部照射により癌
細胞を攻撃して不活化させる核医学的治療薬が注目され
ている。特に、放射性原子を癌細胞に結合させるために
抗原抗体反応を利用する放射性免疫療法剤が期待されて
いる（例えば S.E.Order et al., Iodine 131 Antiferr
itin, A New TreatmentModality in Hepatoma; Journal
of Clinical Oncology, Vol.3, No.12, pp.1573-1582
(1985)）。しかしこれまで十分な治療効果を発揮するも
のがなかった。

【０００３】その主な理由の一つは、抗体の癌特異性が
低いため、放射能の癌部位への集中（癌選択性）が十分
でないことにあった。その結果、癌細胞に対する十分な
治療効果が得られないだけでなく、血流中等にも存在し
て癌部位以外の組織、特に造血器官に障害を与えるため
に、治療に十分な量を投与することができなかった。第
二の理由は、抗体に放射性原子を結合して高い比放射能
を得るのが困難なことであった。

【０００４】それ故、癌細胞に対する特異性の高い抗体
に、高い比放射能で放射性原子を結合させた、癌選択性
の高い核医学的癌治療薬が望まれている。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、癌病
変部に局在して高い治療効果を挙げる癌治療薬の中間体
を提供することである。

【０００６】本発明の他の目的は、癌病変部に局在して
高い治療効果を挙げる癌治療薬を提供することである。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明の上記第一の目的
は、動物から摘出された癌病巣部を、乾燥中の温度が−
３０℃（好ましいのは−６０℃）を超えないように凍結
乾燥して、水に懸濁させた注射用懸濁液により達成され
る。

【０００８】本発明の上記第二の目的は、癌細胞に対す
る特異的抗体を含む動物血清の抗体担持蛋白質の少なく
とも一部を、半減期が７０日を超えない放射性核種で所
定の比放射能を有する程度に放射性標識した放射性薬剤
によって達成された。

【０００９】癌細胞に対する特異的抗体はヒト、ウシ、
ウマ等の動物から摘出された癌病巣部を、乾燥中の温度
が−３０℃（好ましいのは−６０℃）を超えないように
凍結乾燥後、水に懸濁させた懸濁液を、健康動物（癌病
巣部を摘出した動物と同種、同系であることが好まし
い）の筋肉に１回以上注射し、適宜の期間経過後、動物
体内、特にその血清中に産生される。健康動物への注射
は１回でもよいが、２ないし数回行なうのがより効果的
である。注射の間隔は７日ないし２０日が適当である。
注射後十分な抗体の産生に要する期間は１０ないし６０
日である。

【００１０】本発明の懸濁液は、良性または悪性腫瘍組
織の無毒化したもの、結核性乾酪巣等の病巣部または結
核菌等の菌体を無毒化または死細胞化したものを含んで
いてもよい。

【００１１】本発明の懸濁液は、筋肉等への注射に用い
ることができ、そのために塩類、糖質、酸、塩基、緩衝
剤等を加えて、塩類濃度、ｐＨ、溶質濃度、浸透圧等を
適当な値に調節することができる。界面活性剤を含んで
もよい。

【００１２】本発明の放射性癌治療薬は、他の抗癌剤
（例えば、５−フルオロウラシル、アドリアマイシン）
を含んでいてもよい。また、抗体分子上に他の化学療法
剤分子が結合されていてもよい。

【００１３】放射性標識に用いる核種は、蛋白質分子、
特にグロブリン分子に直接または間接に結合し易い元素
であることが好ましい。また半減期が７０日を超えない
ことが望ましく、１０日以内であることが好ましい。
¹²⁵I, ¹³¹I, ^99mTc (⁹⁹Mo),⁹⁰Y, ¹⁴⁹Pmはその代表的な
例である。放射能標識分子の比放射能は５００ＭＢｑ／
ｍｇ以上であることが好ましい。

【００１４】

【作用】本発明の癌治療薬中間体は、凍結乾燥した癌病
巣部組織の水懸濁物から成り、癌化した細胞を含む。癌
化細胞はその表層部に癌として認識されるための特異性
を強く有し、それ以外の部分（細胞質、核、および細胞
内成分）は正常細胞と共通の成分を多く含み、癌特異性
が低い。

【００１５】本発明の癌治療薬中間体は、癌化細胞を非
破壊的かつ無変性的に乾燥させて得たものであるため、
これを健全生体細胞に接触させたとき、健全細胞は、侵
入した癌特異性成分のみを認識するように感作される。
この感作によって動物体内には、侵入させた特定の系統
の癌に対する特異的な抗体が産生される。

【００１６】この特異的抗体は、感作動物の血清を採取
することにより体外に取り出すことができる。抗体は、
本発明の中間体に含まれる癌細胞表層部に由来して血清
中に産生されたものである。

【００１７】本発明の癌治療薬は、癌細胞に対する特異
的抗体を含む動物血清を、高い比放射能に放射性標識し
たものであるから、放射性原子が高い濃度で特異的抗体
に担持され、特異性を示す癌細胞に結合し、癌細胞が局
所的放射線照射を受ける。その結果、癌細胞が不活性化
され、癌に対しすぐれた治療効果を及ぼす。

【００１８】

【実施例】以下に実施例を示し、本発明のさらに具体的
な説明とする。［実施例１］１．移植用癌の作製遠心分離により濃縮したマウスメラノーマ細胞に、約５
倍量のＨａｎｋ緩衝液を加え、マウスの腋下に１匹当た
り２００μｌの割合で注入した。２週間後に腋下から癌
を摘出し、温度４℃のＨａｎｋ緩衝液で洗浄した。これ
を移植癌として用いた。

【００１９】２．移植癌の肝臓への移植麻酔下にマウスを開腹し、肝門脈流を止めた後第一肝葉
にメスを入れ、移植癌（５〜１０ｍｇ）を移植した。移
植後ティシール（日本臓器製薬社商品）で止血し、肝門
脈を開いた。移植から１０日目に再び開腹し、第一肝葉
と癌を切除し、癌部位を単離した。

【００２０】３．凍結乾燥マウスから取り出した癌部位を、水分（氷）がある間は
温度−６０℃を超えないように、凍結乾燥した。

【００２１】４．抗癌抗体の作製凍結乾燥した肝臓癌約１ｍｇに生理食塩水１００μｌを
加え、めのう乳鉢で懸濁後、Difco complete adjuvant
１００μｌを加え、振動式攪拌器でよく攪拌し、これを
別の正常なマウスの大腿筋に注入した。１２日後、同一
個体に対し同じ操作を繰り返した。さらに１２日後に抗
体作製動物を放血し、血清を単離し、血清を２０ｍＭり
ん酸緩衝液（ｐＨ７．０）を用いて透析した。

【００２２】５．ＩｇＧの精製ファルマシア社製 HiTrap Protein G Column １ｍｌを
８ｍｌの開始バッファ（２０ｍＭりん酸緩衝液、ｐＨ
７．０）で平衡化した。透析した血清をカラムに載せ、
３ｍｌの開始バッファでカラムを洗浄した後、ｐＨ２．
７の０．１Ｍグリシン−塩酸緩衝液各１ｍｌで３回溶出
した。溶出の際採取容器にはｐＨ９．０の１Ｍトリス緩
衝液を５０μｌずつ入れておいた。溶出液の蛋白濃度は
２８０ｎｍ紫外線吸収により検定した。

【００２３】６．抗体の ¹²⁵Ｉ標識精製ＩｇＧにＩｏｄｏｇｅｎ法で、８１４ＭＢｑ／ｍｇ
の比放射能になるように ¹²⁵Ｉ標識した。標識は下記の
ようにして行なった。

【００２４】ヨードゲン（Ｉｏｄｏｇｅｎ）の０．０４
％ジクロロメタン溶液４０μｌをガラス試験管中で減圧
乾燥し、試験管内壁をヨードゲンでコーティングする。
これを５本用意する。２００μｇ／ｍｌのＩｇＧを含む
溶出液１００μｌに０．５Ｍりん酸塩緩衝液（ｐＨ７．
５）５０μｌを加え、さらに２０．５ＭＢｑの ¹²⁵Ｉを
含む ¹²⁵Ｉ標識ＮａＩ溶液５０μｌを加えて、合計２０
０μｌの反応液を用意する。この反応液を４０μｌず
つ、ヨードゲンで処理した試験管に加え、氷上で約１０
分間反応させる。反応後、０．０５Ｍりん酸塩緩衝液
（ｐＨ７．５）０．５ｍｌで希釈して、反応液を取り出
す。同量の緩衝液で試験管を洗浄する。反応液、洗浄液
を併せて、Sephadex G-25 カラム（column）で精製す
る。

【００２５】７．担癌個体への投与２０μｇの ¹²⁵Ｉ標識ＩｇＧを含む標識抗体液１００μ
ｌ（１６．３ＭＢｑの¹²⁵Ｉを含む）を、前述の肝癌切
除後のマウスの静脈に毎日１回３日間反復投与した。切
除後投与までの間に肝臓の一部に肝癌が生じていたが、
投与により癌の増殖は停止した。比較のため投与しなか
ったマウスでは肝癌が増殖を続け、マウスは癌切除後約
５週間で死亡した。

【００２６】

【発明の効果】本発明の注射用懸濁液すなわち癌治療薬
中間体により、それを注射した健康動物の体内には、癌
に対する特異性の高い抗体が産生される。

【００２７】本発明の癌治療薬は、癌細胞近傍での放射
性原子の局在濃度が高いので、同じ全放射能量でも高い
治療効果が得られるだけでなく、癌部位以外の組織に対
する放射能障害が軽減されるため、投与量を増すことに
よりさらに高い治療効果を得ることができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ａ６１Ｋ 39/395 Ｅ 51/00 ＡＤＵ

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】動物から摘出された癌病巣部を、乾燥中
温度が−３０℃を超えないように凍結乾燥して、水に懸
濁させた注射用懸濁液。
【請求項２】前記乾燥中温度が−６０℃を超えないよ
うに凍結乾燥する請求項１の注射用懸濁液。
【請求項３】健康動物に注射して、その動物に癌特異
性抗体を産生させるための、請求項１または２の注射用
懸濁液。
【請求項４】癌細胞に対する特異的抗体を含む動物血
清の抗体担持蛋白質の少なくとも一部を、半減期が７０
日を超えない放射性核種で所定の比放射能を有する程度
に放射性標識した放射性薬剤から成る癌治療薬。
【請求項５】前記放射性核種の半減期が１０日を超え
ない請求項４の癌治療薬。
【請求項６】前記比放射能を５００ＭＢｑ／ｍｇ以上
とした請求項４または５の癌治療薬。
【請求項７】前記特異的抗体が、動物から摘出された
癌病巣部を、乾燥中の温度が−３０℃を超えないように
凍結乾燥した後、水に懸濁させた懸濁液に由来するもの
である、請求項４、５または６の癌治療薬。
【請求項８】前記乾燥中温度が−６０℃を超えないよ
うに凍結乾燥する請求項７の癌治療薬。
【請求項９】癌細胞に対する特異的抗体を含む動物血
清の抗体担持蛋白質の少なくとも一部を、半減期が７０
日を超えない放射性核種で所定の比放射能を有する程度
に放射性標識した放射性薬剤から成り、前記特異的抗体
を健康動物の血清中に産生させるための癌病巣部を摘出
された癌担持動物に投与するための、癌治療薬。
【請求項１０】前記健康動物が前記癌担持動物と同
種、同系である請求項９の癌治療薬。
【請求項１１】動物から癌病巣部を摘出し、乾燥中温
度が−３０℃を超えないように凍結乾燥し、水に懸濁さ
せる、注射用懸濁液の製造方法。
【請求項１２】前記乾燥中温度が−６０℃を超えない
ように凍結乾燥する、請求項１１の注射用懸濁液の製造
方法。
【請求項１３】癌病巣部を動物から摘出し、乾燥中の
温度が−３０℃を超えないように凍結乾燥し、水に懸濁
させて懸濁液とし、健康動物に注射することにより血清
中に癌特異的抗体を産生させ、この特異的抗体を含む前
記健康動物の血清中の抗体担持蛋白質の少なくとも一部
を、半減期が７０日を超えない放射性核種で所定の比放
射能を有する程度に放射性標識し、前記癌病巣部を摘出
された癌担持動物に投与する癌治療方法。
【請求項１４】前記摘出された癌病巣部を、乾燥中の
温度が−６０℃を超えないように凍結乾燥する、請求項
１３の癌治療方法。
【請求項１５】前記健康動物が前記癌担持動物と同
種、同系である請求項１３または１４の癌治療方法。