JPH072651B2 - トリコテセン結合体を含む抗腫瘍剤 - Google Patents
トリコテセン結合体を含む抗腫瘍剤Info
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- JPH072651B2 JPH072651B2 JP61245617A JP24561786A JPH072651B2 JP H072651 B2 JPH072651 B2 JP H072651B2 JP 61245617 A JP61245617 A JP 61245617A JP 24561786 A JP24561786 A JP 24561786A JP H072651 B2 JPH072651 B2 JP H072651B2
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- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
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- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
- A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
- A61K47/6817—Toxins
- A61K47/6831—Fungal toxins, e.g. alpha sarcine, mitogillin, zinniol or restrictocin
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
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- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
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Description
【発明の詳細な説明】 〔技術分野〕 本発明はトリコテセン結合体を含有する抗腫瘍剤に関す
る。
る。
選択的に腫瘍細胞を殺す毒性物質（毒性剤）の担体とし
ての抗体の使用は、３つの異る領域、すなわち（ａ）細
胞の限定された集団、例えば腫瘍細胞に対する特異性を
有するポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体（及
びそれらの断片）の開発、（ｂ）毒性分子の化学及びそ
れらを抗体に連結するために適当な条件の解明、及び
（ｃ）天然毒性分子の製造及び単離、における研究の共
同関連に依存する。モノクローナル抗体と薬物、植物毒
素、及びリボゾーム不活性化蛋白質との接合体（conjug
ate）が、Morgan及びFoon（Monoclonal Antihody Thera
py of Cancer:Preclinical Models and Investigation
s;Besic and Clinical Tumor Immunology,Vol 2,Kluwer
Academic Publishers,ヒンガム,MA）、及びUhr（Journ
al of Immunology,133:i−vii,1984）に要約されてい
る。強力な高植物毒素分子に対する関心は、モノクロー
ナル抗体の発達と共にピークに達した。なぜなら、後者
はこれらの毒素のための非常に特異的な標的剤として使
用し得ると考えられるからである。
ての抗体の使用は、３つの異る領域、すなわち（ａ）細
胞の限定された集団、例えば腫瘍細胞に対する特異性を
有するポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体（及
びそれらの断片）の開発、（ｂ）毒性分子の化学及びそ
れらを抗体に連結するために適当な条件の解明、及び
（ｃ）天然毒性分子の製造及び単離、における研究の共
同関連に依存する。モノクローナル抗体と薬物、植物毒
素、及びリボゾーム不活性化蛋白質との接合体（conjug
ate）が、Morgan及びFoon（Monoclonal Antihody Thera
py of Cancer:Preclinical Models and Investigation
s;Besic and Clinical Tumor Immunology,Vol 2,Kluwer
Academic Publishers,ヒンガム,MA）、及びUhr（Journ
al of Immunology,133:i−vii,1984）に要約されてい
る。強力な高植物毒素分子に対する関心は、モノクロー
ナル抗体の発達と共にピークに達した。なぜなら、後者
はこれらの毒素のための非常に特異的な標的剤として使
用し得ると考えられるからである。
一般に、高分子量毒素（toxin）は特徴的なＡ鎖及びＢ
鎖を有し、Ｂ鎖は結合（通常、レクチンを介してオリゴ
サッカライドに）を担当し、そしてＡ鎖は延長因子２
（EF2）を触媒的に非可逆的に阻害するように機能し、
従って蛋白質合成を防止する。抗体の特異性がＢ鎖の非
特異的結合に取って代り、そしてＡ鎖を選択的に腫瘍細
胞に導くことが予想された。さらに最近になって、リボ
ゾーム不活性化蛋白質（RIP）と称される化合物のクラ
スが、会合したＢ鎖を全く伴わないＡ鎖の同等物を代表
することが見出された。
鎖を有し、Ｂ鎖は結合（通常、レクチンを介してオリゴ
サッカライドに）を担当し、そしてＡ鎖は延長因子２
（EF2）を触媒的に非可逆的に阻害するように機能し、
従って蛋白質合成を防止する。抗体の特異性がＢ鎖の非
特異的結合に取って代り、そしてＡ鎖を選択的に腫瘍細
胞に導くことが予想された。さらに最近になって、リボ
ゾーム不活性化蛋白質（RIP）と称される化合物のクラ
スが、会合したＢ鎖を全く伴わないＡ鎖の同等物を代表
することが見出された。
しかしながら、この単純な情景の実現を傷つける多くの
障害が出現した。第１に、単純なアフィニティークロマ
トグラフィーにより達成される純度を超えてＡ鎖からＢ
鎖を除去するシステムを開発することが必要であった。
RIP及びクローン化毒素がこの問題に対する１つの実際
的な解決策を代表する。第２に、細網内皮組織系が循環
から巨大分子、特に変化している巨大分子、例えば毒素
に結合している抗体を排除する。第３に、蛋白質植物毒
素上に天然に存在する炭水化物に対するリセプターが存
在することが明らかになった。これらはさらに、非特異
的取込み、そしてそれ故に毒性に寄与する。最後に、Ｂ
鎖は細胞に単に結合するため以外にも必要であり、そし
て細胞への、そして最終的にはＡ鎖がその毒性を発揮す
る細胞質へのＡ鎖の移行を促進することが明らかになっ
た。
障害が出現した。第１に、単純なアフィニティークロマ
トグラフィーにより達成される純度を超えてＡ鎖からＢ
鎖を除去するシステムを開発することが必要であった。
RIP及びクローン化毒素がこの問題に対する１つの実際
的な解決策を代表する。第２に、細網内皮組織系が循環
から巨大分子、特に変化している巨大分子、例えば毒素
に結合している抗体を排除する。第３に、蛋白質植物毒
素上に天然に存在する炭水化物に対するリセプターが存
在することが明らかになった。これらはさらに、非特異
的取込み、そしてそれ故に毒性に寄与する。最後に、Ｂ
鎖は細胞に単に結合するため以外にも必要であり、そし
て細胞への、そして最終的にはＡ鎖がその毒性を発揮す
る細胞質へのＡ鎖の移行を促進することが明らかになっ
た。
これらの障害のため、細胞の限定された集団、例えば腫
瘍細胞を選択的に殺す能力を有しながら上記の問題点を
克服する接合体の必要性が当業界において存在する。こ
の発明はこの必要性を満たし、そしてさらに他の関連す
る利点を提供するものである。
瘍細胞を選択的に殺す能力を有しながら上記の問題点を
克服する接合体の必要性が当業界において存在する。こ
の発明はこの必要性を満たし、そしてさらに他の関連す
る利点を提供するものである。
要約すれば、この発明はトリコテセン（trichothecen）
類と、細胞の限定された集団に結合する物質（agent）
との接合体（conjugate）に関する。トリコテセン分子
と、腫瘍細胞上のみに存在するか又は正常組織に比べて
腫瘍細胞上でのその発現が増加する抗原を認識する、ポ
リクローナル抗体もしくはモノクローナル抗体又はこれ
らの断片との接合体が好ましい。
類と、細胞の限定された集団に結合する物質（agent）
との接合体（conjugate）に関する。トリコテセン分子
と、腫瘍細胞上のみに存在するか又は正常組織に比べて
腫瘍細胞上でのその発現が増加する抗原を認識する、ポ
リクローナル抗体もしくはモノクローナル抗体又はこれ
らの断片との接合体が好ましい。
この発明に従えば、“トリコテセン類”は、ファンジー
・インペルフェクティー（fungi imperfecti），バッカ
ルス・メガポタミカ（baccharus megapotamca）由来の
又は共通の特徴としてセスキテルペノイド（sesquiterp
enoid）中心環構造を有する菌類産物から合成されるか
もしくは合成的に調製される分子、並びに単純な及び巨
環式トリコテセン誘導体を包含するものとして定義され
る。
・インペルフェクティー（fungi imperfecti），バッカ
ルス・メガポタミカ（baccharus megapotamca）由来の
又は共通の特徴としてセスキテルペノイド（sesquiterp
enoid）中心環構造を有する菌類産物から合成されるか
もしくは合成的に調製される分子、並びに単純な及び巨
環式トリコテセン誘導体を包含するものとして定義され
る。
トリコテセン分子は前記物質に、非共有結合又は共有結
合により、好ましくは共有結合、例えばペプチド結合、
ジフルフィド結合、チオエステル結合又はチオエーテル
結合を介して連結される。この共有結合は、（ａ）トリ
コテセンそれ自体、（ｂ）トリコテセンヘミサクシネー
トカルボン酸、（ｃ）トリコセエンヘミサクシネートN-
ヒドロキシサクシンイミドエステル、又は（ｄ）トリコ
テセンとポリ‐L-リジンもしくは任意のポリマーキャリ
ャーとの複合体、のいずれかと、前記物質の１又は複数
のアミノ基、スルヒドリル基又はカルボキシル基との間
において形成されるであろう。
合により、好ましくは共有結合、例えばペプチド結合、
ジフルフィド結合、チオエステル結合又はチオエーテル
結合を介して連結される。この共有結合は、（ａ）トリ
コテセンそれ自体、（ｂ）トリコテセンヘミサクシネー
トカルボン酸、（ｃ）トリコセエンヘミサクシネートN-
ヒドロキシサクシンイミドエステル、又は（ｄ）トリコ
テセンとポリ‐L-リジンもしくは任意のポリマーキャリ
ャーとの複合体、のいずれかと、前記物質の１又は複数
のアミノ基、スルヒドリル基又はカルボキシル基との間
において形成されるであろう。
この発明の関連する観点は、抗原陽性細胞の増殖及び代
謝を阻害する方法に向けられ、こと方法は抗原陽性細胞
を、該抗原陽性細胞に結合する物質とトリコテセンとの
接合体に暴露することを含んで成る。
謝を阻害する方法に向けられ、こと方法は抗原陽性細胞
を、該抗原陽性細胞に結合する物質とトリコテセンとの
接合体に暴露することを含んで成る。
この発明の他の観点は、比較的不溶性であるトリコテセ
ン接合体をグリコシル化により可溶性にする方法を開示
する。
ン接合体をグリコシル化により可溶性にする方法を開示
する。
この発明の他の観点は以下に詳細に記載するところによ
り明らかになるであろう。
り明らかになるであろう。
“トリコテセン類”は、ファンジー・インペルフェクテ
ィー（fungi imperfecti）クラスの土壌菌類により生産
される、又はバッカルス・メガポタミカ（baccharus me
gapotamica）から単離されるマイコトキシンの１種であ
る（Bamburg,J.R.,Proc.Molec.Subcell Bio.８:41-110,
1983;Jarvis＆Mazzola,Acc.Chem.Res,15:338-395,198
2）。これらは、炭素、水素及び酸素のみを含有する最
も毒性の強い分子であるようである（Tamm,C.Fortschr.
Chem.Org.Naturst.31:61-117,1974）。これらはいずれ
も、リボゾームのレベルにおいて、蛋白質合成阻害剤と
して、開始期、延長期又は停止期のいずれかにおいて機
能する。小分子（小分子量的400〜600）であるため、こ
れらは次のような潜在的利点を有する。
ィー（fungi imperfecti）クラスの土壌菌類により生産
される、又はバッカルス・メガポタミカ（baccharus me
gapotamica）から単離されるマイコトキシンの１種であ
る（Bamburg,J.R.,Proc.Molec.Subcell Bio.８:41-110,
1983;Jarvis＆Mazzola,Acc.Chem.Res,15:338-395,198
2）。これらは、炭素、水素及び酸素のみを含有する最
も毒性の強い分子であるようである（Tamm,C.Fortschr.
Chem.Org.Naturst.31:61-117,1974）。これらはいずれ
も、リボゾームのレベルにおいて、蛋白質合成阻害剤と
して、開始期、延長期又は停止期のいずれかにおいて機
能する。小分子（小分子量的400〜600）であるため、こ
れらは次のような潜在的利点を有する。
１）抗体の分子量がわずかに変化するに過ぎないことに
基く改良された分配；及び ２）リセプターにより介在される非特異的な取り込み、
例えば炭水化物リセプターを介する取り込み〔これは、
リシンＡ鎖のごとき高分子量（分子量約30,000）植物毒
素、又はゲロニン（gelonin）のごときリボゾーム不活
性化蛋白質の持つ欠点である〕の欠如； である。
基く改良された分配；及び ２）リセプターにより介在される非特異的な取り込み、
例えば炭水化物リセプターを介する取り込み〔これは、
リシンＡ鎖のごとき高分子量（分子量約30,000）植物毒
素、又はゲロニン（gelonin）のごときリボゾーム不活
性化蛋白質の持つ欠点である〕の欠如； である。
しかしながら、上記の毒性類と同様に、マイコトキシン
類は非常に強力である。これらは、真核細胞中での蛋白
質合成に対する最も強力な小分子阻害剤である。抗体に
接合していない場合、ベルカリン（verrucarin）Ａ（第
４表）はアクチノマイシン（actinomycin）Ｄに比べて1
0倍以上強力であり、臨床用として最近認められている
化学療法剤の重量当り最も強力である。最も最近使用さ
れている薬剤はDNAのレベルで作用するので、これらの
リボゾール不活性化薬剤は毒素と同様に“標準”薬剤に
対する耐性により不都合な影響を受けないはずであり、
そして既存の療法剤に追加の細胞毒性をもたらすはずで
ある。
類は非常に強力である。これらは、真核細胞中での蛋白
質合成に対する最も強力な小分子阻害剤である。抗体に
接合していない場合、ベルカリン（verrucarin）Ａ（第
４表）はアクチノマイシン（actinomycin）Ｄに比べて1
0倍以上強力であり、臨床用として最近認められている
化学療法剤の重量当り最も強力である。最も最近使用さ
れている薬剤はDNAのレベルで作用するので、これらの
リボゾール不活性化薬剤は毒素と同様に“標準”薬剤に
対する耐性により不都合な影響を受けないはずであり、
そして既存の療法剤に追加の細胞毒性をもたらすはずで
ある。
トリコテセンの２つの広いクラスが存在する。
すなわち、中心セスキテルペノイド構造のみを有するも
の、及び追加の巨環（macrocyclic ring）を有するもの
（それぞれ、単純トリコテセン及び巨環トリコテセン）
である。単純トリコテセンは３つのグループに亜分類す
ることができる。グループＡ単純トリコテセンは次の
式： （式中、 R4はＨ又はOHであり；そして により特徴付けられる。
の、及び追加の巨環（macrocyclic ring）を有するもの
（それぞれ、単純トリコテセン及び巨環トリコテセン）
である。単純トリコテセンは３つのグループに亜分類す
ることができる。グループＡ単純トリコテセンは次の
式： （式中、 R4はＨ又はOHであり；そして により特徴付けられる。
代表的なグループＡ単純トリコテセン類及び対応する官
能基を次の第１表に挙げる。
能基を次の第１表に挙げる。
グループＢ単純トリコテセン類は次の式： （式中、 により特徴付けられる。
代表的なグループＢ単純トリコテセン及び対応する官能
基を次の第２表に挙げる。
基を次の第２表に挙げる。
グループＣ単純トリコテセン類は次の式： により特徴付けられる。
代表的なグループＣ単純トリコテセン類及び対応する
Ｒ′官能基を第３表に挙げる。
Ｒ′官能基を第３表に挙げる。
第 ３ 表 グループＣ単純トリコテセン類 トリコテセン類 Ｒ′ クロトコール（Crotocol） OH クロトシン（Crotocin） OCOCH＝CHCH3 巨環トリコテセン類は次の式： 式中、 R1はOH又は であり;R2はH,OH, 又はOCOCH2CH（CH3）２であり；そしてＲ′は次の第４
表に示す通りである。
表に示す通りである。
巨環トリコテセン類はまた次の式： で特徴付けられる。式中、 OCOCH2CH（CH3）２であり；そして Ｒ′は である。
上記の一般構造に加えて、多くの“バッカリン類”が高
等植物バッカリス・メガポタミカ（Baccharis megapota
mica）から単離されており、そして文献中に、例えばJa
rvin等（Chemistry of Alleopathy,ACS Symposium Seri
es No.268;A.C.Thompsom編,1984,pp.149-159）により記
載されている。
等植物バッカリス・メガポタミカ（Baccharis megapota
mica）から単離されており、そして文献中に、例えばJa
rvin等（Chemistry of Alleopathy,ACS Symposium Seri
es No.268;A.C.Thompsom編,1984,pp.149-159）により記
載されている。
セスキテルペノイド環は、リボゾームへの結合及び蛋白
質合成の阻害において、植物毒素のＡ鎖に類似する態様
で機能する。巨環は未知の態様で細胞結合及びインター
ナリゼーション（internalization）を増強する。無細
胞系においては翻訳の強力な阻害剤であるが真核細肪に
対してはわずかにのみ細胞毒性である（ID5010μg/ml）
分子が各クラスに存在する。
質合成の阻害において、植物毒素のＡ鎖に類似する態様
で機能する。巨環は未知の態様で細胞結合及びインター
ナリゼーション（internalization）を増強する。無細
胞系においては翻訳の強力な阻害剤であるが真核細肪に
対してはわずかにのみ細胞毒性である（ID5010μg/ml）
分子が各クラスに存在する。
リボゾーム結合能力の差異は細胞毒素とはあまり関連せ
ず、細胞中でのリボゾームへの異なる供給又は細胞内不
活性化が真核細胞に対するこれらの薬剤耐性に重要な役
割を演ずることが示唆される。（Bambury,J.R.,Biologi
cal and Biochemical Actions of Trichothecene Mycot
oxins,Prog.Mol.Subcell.Biol.,８:41-110,1983;McLaug
hlin,C.S.、Vaughan,M.H.、Cambell,I.M.、Wei,C.M.、S
tafford,M.E.、及びHansen,B.S.,Inhibition of Protei
n Synthesis by Trichothecenes, Mycotoxins in Human
and Animal Health,パソトックス・パブリッシャー
ズ，パーク・ホレスト・サウス,IL,263-273頁；並びにD
oyle,T.W.,及びBradner,W.T.,Trichothecenes,Anticanc
er Agents Based on Natural Product Models,Cassidy
及びBouros編，アカデミックプレス，ニユーヨーク,43-
72頁,1980）。例えば、ベルカロールは細胞膜にあまり
結合せず、又は細胞内で不活性化される可能性があり、
この欠点はモノクローナル抗体への接合によって克服さ
れるであろう。ある種のトリコテセンが、リゾチームに
おいて起るように、細胞内酸触媒により生物学的に不活
性な分子（アポトリコテセン）に転換される速度につい
ての幾つかの研究が存在する。巨環トリコテセン及び幾
つかの単純トリコテセン、例えばアングイジン（anguid
ine）及びT-2トキシンは非常に徐々に不活性化され、他
方細胞毒性の低い分子、例えばベルカロールは一層迅速
に不活性化される。細胞毒性とアポトリコテセンへのこ
の転換との間には逆の直線関連が存在する。
ず、細胞中でのリボゾームへの異なる供給又は細胞内不
活性化が真核細胞に対するこれらの薬剤耐性に重要な役
割を演ずることが示唆される。（Bambury,J.R.,Biologi
cal and Biochemical Actions of Trichothecene Mycot
oxins,Prog.Mol.Subcell.Biol.,８:41-110,1983;McLaug
hlin,C.S.、Vaughan,M.H.、Cambell,I.M.、Wei,C.M.、S
tafford,M.E.、及びHansen,B.S.,Inhibition of Protei
n Synthesis by Trichothecenes, Mycotoxins in Human
and Animal Health,パソトックス・パブリッシャー
ズ，パーク・ホレスト・サウス,IL,263-273頁；並びにD
oyle,T.W.,及びBradner,W.T.,Trichothecenes,Anticanc
er Agents Based on Natural Product Models,Cassidy
及びBouros編，アカデミックプレス，ニユーヨーク,43-
72頁,1980）。例えば、ベルカロールは細胞膜にあまり
結合せず、又は細胞内で不活性化される可能性があり、
この欠点はモノクローナル抗体への接合によって克服さ
れるであろう。ある種のトリコテセンが、リゾチームに
おいて起るように、細胞内酸触媒により生物学的に不活
性な分子（アポトリコテセン）に転換される速度につい
ての幾つかの研究が存在する。巨環トリコテセン及び幾
つかの単純トリコテセン、例えばアングイジン（anguid
ine）及びT-2トキシンは非常に徐々に不活性化され、他
方細胞毒性の低い分子、例えばベルカロールは一層迅速
に不活性化される。細胞毒性とアポトリコテセンへのこ
の転換との間には逆の直線関連が存在する。
単純トリコテセンであるアングイジンが患者での臨床試
験において、フェーズＩ（Murphy,W.K.、Burgess,M.
A.、Valdivioso,M.、Livingston,R.B.、Bodey,G.P.、及
びFreireich,E.J.,Phase I Evaluation of Anguidine,C
ancer Treat.Repts.62:1497,1978）、並びにフェーズII
（Adler,S.S.、Lowen braun,S.、Birch,B.、Jarrell,
R.、及びGarrerd,J.,Anguidine:A Broad Phase II Stud
y of the Southeastern Cancer Study Group,Cancer Tr
eat. Repts.68:423,1984）において試験された。フェー
ズIIの試験において、全体的腫瘍応答速度は低くそして
かなりの血液毒性が存在した。フェーズＩ試験におい
て、毒性には悪心、嘔吐、低血圧、中枢神経系症状、下
痢、悪寒及び熱、全身的熱紅斑（generalized burning
erythema）、口内炎、呼吸の短縮、致命的な毒性の間に
関連する中程度の脊髄抑制及び高投与量において認識さ
れる肝臓機の損傷又は肝転移が含まれる。
験において、フェーズＩ（Murphy,W.K.、Burgess,M.
A.、Valdivioso,M.、Livingston,R.B.、Bodey,G.P.、及
びFreireich,E.J.,Phase I Evaluation of Anguidine,C
ancer Treat.Repts.62:1497,1978）、並びにフェーズII
（Adler,S.S.、Lowen braun,S.、Birch,B.、Jarrell,
R.、及びGarrerd,J.,Anguidine:A Broad Phase II Stud
y of the Southeastern Cancer Study Group,Cancer Tr
eat. Repts.68:423,1984）において試験された。フェー
ズIIの試験において、全体的腫瘍応答速度は低くそして
かなりの血液毒性が存在した。フェーズＩ試験におい
て、毒性には悪心、嘔吐、低血圧、中枢神経系症状、下
痢、悪寒及び熱、全身的熱紅斑（generalized burning
erythema）、口内炎、呼吸の短縮、致命的な毒性の間に
関連する中程度の脊髄抑制及び高投与量において認識さ
れる肝臓機の損傷又は肝転移が含まれる。
トリコテセンと、正常組織に比べて腫瘍細胞上での発現
が増加している抗原を認識するポリクローナル抗体もし
くはモノクローナル抗体又はそれらの断片との連結は、
異なる２つの方策に分けられる。すなわち（１）細胞毒
性の低いトリコテセンを抗体又はその断片に連結してそ
れを細胞毒性にすること、及び（２）細胞毒性トリコテ
センを抗体又はその断片に接合せしめることによりそれ
らを選択的に腫瘍細胞に向けるようにし、正常組織に対
するそれらの毒性を抑制すること、である。
が増加している抗原を認識するポリクローナル抗体もし
くはモノクローナル抗体又はそれらの断片との連結は、
異なる２つの方策に分けられる。すなわち（１）細胞毒
性の低いトリコテセンを抗体又はその断片に連結してそ
れを細胞毒性にすること、及び（２）細胞毒性トリコテ
センを抗体又はその断片に接合せしめることによりそれ
らを選択的に腫瘍細胞に向けるようにし、正常組織に対
するそれらの毒性を抑制すること、である。
この発明において、モノクローナル抗体は、ネズミ又は
他の動物を免疫感作し、そして／又は癌を有する患者か
らヒト‐リンパ球を採取し、そして標準的ハイブリドー
マ技法（Geffer等、Somatic Cell Genet,３:231,1977）
により細胞の抗体分泌を永久化することにより調製され
た。他の方法として、ポリクローナル抗体が、腫瘍細胞
又は他の限定された腫瘍関連抗原により免疫感作した後
の動物から血清を採取し、あるいは腫瘍又は腫瘍関連抗
原に暴露された、又は暴露されたことのあるヒトから採
取し、そしてこの血清を標準的精製技法にかけることに
より調製される。標準的ラジオイム／アッセイ又はエン
ザイム・リンクド・イムノソルベント・アッセイ（ELIS
A）を用いて、抗体を適切な標的に対する特異性につい
てスクリーニングした。スクリーニングを正常なヒト組
織を用いて適切な腫瘍特異性を有する抗体を選択した。
他の動物を免疫感作し、そして／又は癌を有する患者か
らヒト‐リンパ球を採取し、そして標準的ハイブリドー
マ技法（Geffer等、Somatic Cell Genet,３:231,1977）
により細胞の抗体分泌を永久化することにより調製され
た。他の方法として、ポリクローナル抗体が、腫瘍細胞
又は他の限定された腫瘍関連抗原により免疫感作した後
の動物から血清を採取し、あるいは腫瘍又は腫瘍関連抗
原に暴露された、又は暴露されたことのあるヒトから採
取し、そしてこの血清を標準的精製技法にかけることに
より調製される。標準的ラジオイム／アッセイ又はエン
ザイム・リンクド・イムノソルベント・アッセイ（ELIS
A）を用いて、抗体を適切な標的に対する特異性につい
てスクリーニングした。スクリーニングを正常なヒト組
織を用いて適切な腫瘍特異性を有する抗体を選択した。
目的とする抗体を精製した後、この抗体をトリコテセン
分子に接合せしめた。トリコテセンヘミサクシネートの
カルボン酸はカルボジイミドを用いて抗体のアミノ基に
連結した。他方、トリコテセンヘミサクシネートのN-ヒ
ドロキシサクシミデートエステルを調製し、そしてこれ
を用いて抗体のアミノ基に連結せしめる。これらの方法
はいずれもトリコテセンと抗体との関にアミド結合をも
たらす。遊離ヒドロキシル基を有するトリコテセンはカ
ルボジイミドとの反応を用いて抗体に直接連結すること
ができる。抗体とトリコテセンとの間の安定な結合とし
てチオエーテル結合を用いることもできる。さらに、ト
リコテセン分子はポリ‐L-リジン（分子量300〜150,00
0）に連結される。次に、ポリ‐L-リジン／トリコテセ
ン複合体をアミド結合を介して抗体に連結する。さら
に、一層不安定な結合が望ましい場合、トリコテセンは
ジスルフィド結合又はチオエステル結合によりモノクロ
ーナル抗体（MA）に連結される。
分子に接合せしめた。トリコテセンヘミサクシネートの
カルボン酸はカルボジイミドを用いて抗体のアミノ基に
連結した。他方、トリコテセンヘミサクシネートのN-ヒ
ドロキシサクシミデートエステルを調製し、そしてこれ
を用いて抗体のアミノ基に連結せしめる。これらの方法
はいずれもトリコテセンと抗体との関にアミド結合をも
たらす。遊離ヒドロキシル基を有するトリコテセンはカ
ルボジイミドとの反応を用いて抗体に直接連結すること
ができる。抗体とトリコテセンとの間の安定な結合とし
てチオエーテル結合を用いることもできる。さらに、ト
リコテセン分子はポリ‐L-リジン（分子量300〜150,00
0）に連結される。次に、ポリ‐L-リジン／トリコテセ
ン複合体をアミド結合を介して抗体に連結する。さら
に、一層不安定な結合が望ましい場合、トリコテセンは
ジスルフィド結合又はチオエステル結合によりモノクロ
ーナル抗体（MA）に連結される。
免疫接合体は、TSK3000カラムを用いるFPLCゲル過に
より未反応のトリコテセンから容易に分離された。別の
方法として、未反応のトリコテセンは透析により除去さ
れる。
より未反応のトリコテセンから容易に分離された。別の
方法として、未反応のトリコテセンは透析により除去さ
れる。
接合体の分子量は遊離抗体のそれに比べて有意には高く
ないであろう。従って、遊離抗体からの免疫接合体の分
離はヒドロキシアバタイト又は疎水性カラムクロマトグ
ラフィーの使用を必要とする。
ないであろう。従って、遊離抗体からの免疫接合体の分
離はヒドロキシアバタイト又は疎水性カラムクロマトグ
ラフィーの使用を必要とする。
接合体を等電点沈澱（IEF）及びSDS-PAGEにより分析し
た。IEFは置換の程度及び得られた抗体の電荷を示すも
のである。SDS-PAGEは分子量に基いて蛋白質を分離し、
そして接合過程で形成された共有結合集合体を評価する
ために使用される。フローサイトメトリーにより定量さ
れる免疫反応性について、接合体を未接合抗体と比較し
た。免疫接合体を抗原陽性細胞と共にインキュベート
し、洗浄し、そして次に細胞をフルオレッセインイソチ
オシアネート‐結合ヤギ抗マウス抗体と共にインキュベ
ートする。細胞に結合したフルオレッセインをフローサ
イトメトリー上で読み取り、そして平均螢光指数を計算
する。阻害についての接合体との比較において標準的抗
体調製物を用いて競争が行われる。抗原陰性細胞を用い
る同様の分析により抗原陽性細胞に対する接合体の特異
性の保持を証明した。
た。IEFは置換の程度及び得られた抗体の電荷を示すも
のである。SDS-PAGEは分子量に基いて蛋白質を分離し、
そして接合過程で形成された共有結合集合体を評価する
ために使用される。フローサイトメトリーにより定量さ
れる免疫反応性について、接合体を未接合抗体と比較し
た。免疫接合体を抗原陽性細胞と共にインキュベート
し、洗浄し、そして次に細胞をフルオレッセインイソチ
オシアネート‐結合ヤギ抗マウス抗体と共にインキュベ
ートする。細胞に結合したフルオレッセインをフローサ
イトメトリー上で読み取り、そして平均螢光指数を計算
する。阻害についての接合体との比較において標準的抗
体調製物を用いて競争が行われる。抗原陰性細胞を用い
る同様の分析により抗原陽性細胞に対する接合体の特異
性の保持を証明した。
免疫接合体の細胞毒性を２つの方法で評価した。免疫測
定分析法は、基質として3-（4,5-ジメチルチアゾール‐
2-イル）‐2,5-2フェニルテトラゾリウムブロミドを使
用する。この物質は生細胞により開裂されて暗青色のホ
ルマザン生成物をもたらす。この方法は活性ミトコンド
リアを必要とする。基質（MTT）を可溶化しそしてELISA
リーダー上で読み取った。この測定方法は、標準的3H-
チミジン取込みアッセイとの卓越した相関を有し、そし
て放射能の使用を必要としない。3H-チミジンは多くの
結果の確認のために用いた。
定分析法は、基質として3-（4,5-ジメチルチアゾール‐
2-イル）‐2,5-2フェニルテトラゾリウムブロミドを使
用する。この物質は生細胞により開裂されて暗青色のホ
ルマザン生成物をもたらす。この方法は活性ミトコンド
リアを必要とする。基質（MTT）を可溶化しそしてELISA
リーダー上で読み取った。この測定方法は、標準的3H-
チミジン取込みアッセイとの卓越した相関を有し、そし
て放射能の使用を必要としない。3H-チミジンは多くの
結果の確認のために用いた。
接合体を抗原陽性セルライン及び抗原陰性セルラインと
共にインキュベートすることにより力価及び選択性のア
ッセイを行った。接合体を種々の濃度で細胞に加え、そ
して細胞の生存を連続的及び短い暴露時間の後に評価し
た。接合体を細胞と共に、連続的暴露のためには３日
間、そして短時間暴露のためには２時間インキュベート
した。３日間の終点において細胞の生存を評価した。
共にインキュベートすることにより力価及び選択性のア
ッセイを行った。接合体を種々の濃度で細胞に加え、そ
して細胞の生存を連続的及び短い暴露時間の後に評価し
た。接合体を細胞と共に、連続的暴露のためには３日
間、そして短時間暴露のためには２時間インキュベート
した。３日間の終点において細胞の生存を評価した。
接合体をさらにペプチジルトランスフェラーゼを阻害す
るそれらの能力について試験した。このアッセイは、66
Sリボゾーム上の結合部位に対する放射性ラベル化トリ
コデルミンとの競争に基く。接合体を、蛋白質合成を阻
害するそれらの能力についてさらに試験した。この試験
においては、蛋白質合成に対する全体的効果を決定する
ために天然mRNAを使用し、そして延長に対する効果を測
定するためにポリＵを使用した。
るそれらの能力について試験した。このアッセイは、66
Sリボゾーム上の結合部位に対する放射性ラベル化トリ
コデルミンとの競争に基く。接合体を、蛋白質合成を阻
害するそれらの能力についてさらに試験した。この試験
においては、蛋白質合成に対する全体的効果を決定する
ために天然mRNAを使用し、そして延長に対する効果を測
定するためにポリＵを使用した。
次に例によりこの発明をさらに具体的に説明するが、こ
れによりこの発明の範囲を限定するものではない。
れによりこの発明の範囲を限定するものではない。
例1. ベルカロール ベルカロールは細胞毒性の低い単純トリコテセンであ
る。これをカルボジイミドを用いて抗‐黒色腫抗体に接
合せしめる。第１又は第２ヒドロキシル基はカルボジイ
ミドと反応して活性形分子を形成する。次に、この分子
を抗体上のリジンと反応せしめることにより接合体を形
成せしめる。抗原陽性及び抗原陰性黒色腫細胞に対する
接合体の力価は10-8MのID50を示した。これに対して、
ベルカロール単独剤は10-5M以上のID50を有する。
る。これをカルボジイミドを用いて抗‐黒色腫抗体に接
合せしめる。第１又は第２ヒドロキシル基はカルボジイ
ミドと反応して活性形分子を形成する。次に、この分子
を抗体上のリジンと反応せしめることにより接合体を形
成せしめる。抗原陽性及び抗原陰性黒色腫細胞に対する
接合体の力価は10-8MのID50を示した。これに対して、
ベルカロール単独剤は10-5M以上のID50を有する。
例2. ベルカリンＡ ベルカリンＡ又はそのヘミサクシネートを例１に記載し
たのと同様の方法でモノクローナル抗体9.2.27に接合せ
しめる。増加する力価の接合体を抗原陽性及び抗原陰性
黒色腫細胞とインキュベートし、そしてこの明細書に記
載するようにして力価及び選択性について試験した。抗
原陽性細胞に対するID50は10-7M又はこれより良好であ
り、他方抗原陰性細胞に対する毒性はなかった。ベルカ
リンＡ自体は2.5×10-11MのID50を示す。
たのと同様の方法でモノクローナル抗体9.2.27に接合せ
しめる。増加する力価の接合体を抗原陽性及び抗原陰性
黒色腫細胞とインキュベートし、そしてこの明細書に記
載するようにして力価及び選択性について試験した。抗
原陽性細胞に対するID50は10-7M又はこれより良好であ
り、他方抗原陰性細胞に対する毒性はなかった。ベルカ
リンＡ自体は2.5×10-11MのID50を示す。
例3. cis-アコニチル連結を介しての接合 ヘミサクシネートの調製について前記したような標準的
方法を用いてベルカロールを無水cis-アコニット酸に連
結せしめる。他の方法として、ベルカロールのN-ヒドロ
キシサクシンイミデートエステルをジアミンと反応せし
めることができる。次に、誘導体化されたエステルを遊
離アミノ基を介して無水cis-アコニット酸に共有結合せ
しめることができる。次に、例１に記載したようにし
て、いずれかの誘導体のcis-アコニチル成分をカルボジ
イミドを用いて抗体に共有結合せしめることができる。
方法を用いてベルカロールを無水cis-アコニット酸に連
結せしめる。他の方法として、ベルカロールのN-ヒドロ
キシサクシンイミデートエステルをジアミンと反応せし
めることができる。次に、誘導体化されたエステルを遊
離アミノ基を介して無水cis-アコニット酸に共有結合せ
しめることができる。次に、例１に記載したようにし
て、いずれかの誘導体のcis-アコニチル成分をカルボジ
イミドを用いて抗体に共有結合せしめることができる。
例4. アングイジンのグリコシル化 単純トリコテセンであるアングイジンは難溶性である
が、アングイジンのグリコシル化が溶解性を改良する。
W.R.Roush等、J.Am.Chem.Soc.107:3354-3355（1985）の
方法に従ってアングイニンをグリコシル化する。次に、
グリコシル化されたアングイニンを、例１に記載したよ
うにしてカルボジイミドを用いて、又は例２に従ってア
ングイジンのヘミサクシネート誘導体を介して、抗体に
接合せしめることができる。
が、アングイジンのグリコシル化が溶解性を改良する。
W.R.Roush等、J.Am.Chem.Soc.107:3354-3355（1985）の
方法に従ってアングイニンをグリコシル化する。次に、
グリコシル化されたアングイニンを、例１に記載したよ
うにしてカルボジイミドを用いて、又は例２に従ってア
ングイジンのヘミサクシネート誘導体を介して、抗体に
接合せしめることができる。
例5. 中毒の緩和 抗原陽性細胞を阻害するためにベルカリンA-抗体接合体
を温血動物に静脈内投与する。受容体動物の代謝活性が
接合体のトリコテセン部分の早過ぎる放出を惹起し、抗
原陽性でない細胞に対する毒性をもたらす場合がある。
を温血動物に静脈内投与する。受容体動物の代謝活性が
接合体のトリコテセン部分の早過ぎる放出を惹起し、抗
原陽性でない細胞に対する毒性をもたらす場合がある。
非接合トリコテセンの放出から生ずる中毒を抗‐トリコ
テセン抗体の投与によって緩和することができる。要約
すれば、ベルカリンA-抗体接合体の注射の後所定の時間
において、又は患者における毒性症状の検出の際に、ベ
ルカリンＡに結合することができそしてその毒性をブロ
ックすることができる抗体を受容体に注射する。
テセン抗体の投与によって緩和することができる。要約
すれば、ベルカリンA-抗体接合体の注射の後所定の時間
において、又は患者における毒性症状の検出の際に、ベ
ルカリンＡに結合することができそしてその毒性をブロ
ックすることができる抗体を受容体に注射する。
他の方法として、接合体を注射した後所定の時間におい
て、又は毒性症状の際に、中毒にかかった受容体の血漿
を固定化された抗ベルカリンＡ抗体を含有するアフィニ
ティーカラムに通す。アフィニティーカラムはベルカリ
ンＡを結合し、これによって血漿中の遊離ベルカリンＡ
のレベルを低下せしめる。次にこの血漿を受容体に再注
入する。
て、又は毒性症状の際に、中毒にかかった受容体の血漿
を固定化された抗ベルカリンＡ抗体を含有するアフィニ
ティーカラムに通す。アフィニティーカラムはベルカリ
ンＡを結合し、これによって血漿中の遊離ベルカリンＡ
のレベルを低下せしめる。次にこの血漿を受容体に再注
入する。
例6. ベルカリンＡの胃腸レベルの低下 ベルカリンA-抗体接合体の受容体への注射は、受容体の
消化管への遊離ベルカリンＡの放出をもたらす。放出さ
れたベルカリンＡの毒性は遊離トリコテセンの胃腸レベ
ルの低下を介して減少することができる（例えば、Buck
及びBrafich,Vet.Med.81:73-77,1986）。これは活性炭
を中毒化受容体に経口投与することにより達成される。
活性炭は遊離ベルカリンＡを結合し、そして胃腸管から
の吸収を防止する。次に、受容体に経口下剤を与える。
この下剤は、活性炭‐トリコテセン複合体が胃腸管全体
に移行することを促進する。
消化管への遊離ベルカリンＡの放出をもたらす。放出さ
れたベルカリンＡの毒性は遊離トリコテセンの胃腸レベ
ルの低下を介して減少することができる（例えば、Buck
及びBrafich,Vet.Med.81:73-77,1986）。これは活性炭
を中毒化受容体に経口投与することにより達成される。
活性炭は遊離ベルカリンＡを結合し、そして胃腸管から
の吸収を防止する。次に、受容体に経口下剤を与える。
この下剤は、活性炭‐トリコテセン複合体が胃腸管全体
に移行することを促進する。
以上、この発明を具体的に例示したが、この発明の範囲
内で多くの変更を行うことができよう。
内で多くの変更を行うことができよう。
Claims (21)
- 【請求項１】細胞の限定された集団に特異的に結合する
ことができる抗体又はその断片に、直接に又はリンカー
を介して結合しているトリコテセン類化合物を含んで成
る結合体を有効成分とする抗腫瘍剤。 - 【請求項２】前記トリコテセン類化合物が追加の巨環を
有する特許請求の範囲第１項に記載の抗腫瘍剤。 - 【請求項３】前記トリコテセン類化合物がトリコデルモ
ール、ベルカロール、トリコデルミン、カングイジン、
及びＴ−２トキシンから成る群から選択される、特許請
求の範囲第１項に記載の抗腫瘍剤。 - 【請求項４】前記結合体がグリコシル化により可溶化さ
れ得る、特許請求の範囲第１項に記載の抗腫瘍剤。 - 【請求項５】前記トリコテセン類化合物がベルカリン
Ａ、ベルカリンＢ、ベルカリンJ,2′−デヒドロベルカ
リンＡ、ロリジンＡ、ロリジンＤ、ロリジンＥ、ロリジ
ンＨ、サトラトキシンＦ、サトラトキシンＧ、サトラト
キシンＨ、ベルチスポリン、バッカリン類、マイロトキ
シンＡ、マイロトキシンＢ、マイロトキシンＣ、マイロ
トキシンＤ、マイトキシンＡ、マイトキシンＢ、マイト
キシンＣ、ロリトキシンＡ、ロリトキシンＢ、ロリトキ
シンＣ及びロリトキシンＤから成る群から選択される、
特許請求の範囲第２項に記載の抗腫瘍剤。 - 【請求項６】前記トリコテセン類化合物がベルカロール
である特許請求の範囲第１項に記載の抗腫瘍剤。 - 【請求項７】前記トリコテセン類化合物がベルカリンＡ
である特許請求の範囲第１項に記載の抗腫瘍剤。 - 【請求項８】前記トリコテセン類化合物が次の式： （式中、 を有する特許請求の範囲第１項に記載の抗腫瘍剤。
- 【請求項９】R4がエポキシド基である特許請求の範囲第
８項に記載の抗腫瘍剤。 - 【請求項１０】前記トリコテセン類化合物が次の式： （式中、 Ｒ′は である） を有する、特許請求の範囲第１項に記載の抗腫瘍剤。
- 【請求項１１】前記抗体又はその断片がモノクローナル
抗体又はその断片である、特許請求の範囲第１項に記載
の抗腫瘍剤。 - 【請求項１２】前記モノクローナル抗体又はその断片が
ヒト、又は他の温血動物に由来する、特許請求の範囲第
11項記載の抗腫瘍剤。 - 【請求項１３】前記抗体又はその断片がポリクローナル
抗体又はその断片である、特許請求の範囲第１項に記載
の抗腫瘍剤。 - 【請求項１４】前記細胞の限定された集団が腫瘍細胞で
ある、特許請求の範囲第１項に記載の抗腫瘍剤。 - 【請求項１５】前記細胞の限定された集団が腫瘍関連抗
原を担持する細胞である、特許請求の範囲第１項に記載
の抗腫瘍剤。 - 【請求項１６】前記トリコテセン類化合物と前記抗体又
はその断片とが直接に又はリンカーを介して共有結合に
より連結されている、特許請求の範囲第１項に記載の抗
腫瘍剤。 - 【請求項１７】前記共有結合がトリコテセンへミサクシ
ネートカルボン酸と前記抗体又はその断片の１又は複数
のアミノ基との間に形成されている、特許請求の範囲第
16項に記載の抗腫瘍剤。 - 【請求項１８】前記共有結合がトリコテセンへミサクシ
ネートＮ−ヒドロキシサクシンイミデートエステルと前
記抗体又はその断片の１又は複数のアミノ基との間に形
成されている、特許請求の範囲第17項に記載の抗腫瘍
剤。 - 【請求項１９】前記トリコテセン類化合物がリンカーと
してのポリ−Ｌ−リジンに結合しており、そして該ポリ
−Ｌ−リジンと前記抗体又はその断片の１又は複数のア
ミノ基との間に共有結合が形成されている、特許請求の
範囲第16項に記載の抗腫瘍剤。 - 【請求項２０】前記共有結合がジスルフィド結合、チオ
エステル結合、又はチオエーテル結合である、特許請求
の範囲第16項に記載の抗腫瘍剤。 - 【請求項２１】前記トリコテセン類化合物が次の式： （式中、 であり；そして Ｒ′は、 である） を有する、特許請求の範囲第１項に記載の抗腫瘍剤。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US788325 | 1985-10-17 | ||
| US06/788,325 US4744981A (en) | 1985-10-17 | 1985-10-17 | Trichothecene antibody conjugates |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62181280A JPS62181280A (ja) | 1987-08-08 |
| JPH072651B2 true JPH072651B2 (ja) | 1995-01-18 |
Family
ID=25144143
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61245617A Expired - Lifetime JPH072651B2 (ja) | 1985-10-17 | 1986-10-17 | トリコテセン結合体を含む抗腫瘍剤 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US4744981A (ja) |
| EP (1) | EP0220065B1 (ja) |
| JP (1) | JPH072651B2 (ja) |
| CN (1) | CN87104045A (ja) |
| AT (1) | ATE85758T1 (ja) |
| DE (1) | DE3687779T2 (ja) |
| DK (1) | DK499086A (ja) |
| NO (1) | NO864136L (ja) |
Families Citing this family (54)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5405966A (en) * | 1985-10-17 | 1995-04-11 | Theodore; Louis J. | Trichothecene conjugates |
| US4744981A (en) * | 1985-10-17 | 1988-05-17 | Neorx Corporation | Trichothecene antibody conjugates |
| FR2601679B1 (fr) * | 1986-07-15 | 1990-05-25 | Sanofi Sa | Immunotoxines, procede de preparation et compositions pharmaceutiques en contenant |
| FR2601680B1 (fr) * | 1986-07-15 | 1990-06-29 | Sanofi Sa | Inhibiteur de la synthese proteique, procede d'isolement, utilisation et compositions pharmaceutiques en contenant |
| US5118612A (en) * | 1987-04-28 | 1992-06-02 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Assay for trichothecenes |
| US5030450A (en) * | 1989-11-28 | 1991-07-09 | Abbott Laboratories | Method for inhibiting nematode infection of plants with Nematostatic trichothecene compositions |
| EP0510132B1 (en) * | 1990-09-28 | 1997-05-14 | Neorx Corporation | Polymeric carriers for release of covalently linked agents |
| FI101678B (fi) * | 1990-12-31 | 1998-08-14 | Akzo Nv | Happolabiileja kytkentämolekyylejä |
| US5811447A (en) | 1993-01-28 | 1998-09-22 | Neorx Corporation | Therapeutic inhibitor of vascular smooth muscle cells |
| US6515009B1 (en) | 1991-09-27 | 2003-02-04 | Neorx Corporation | Therapeutic inhibitor of vascular smooth muscle cells |
| US6306421B1 (en) | 1992-09-25 | 2001-10-23 | Neorx Corporation | Therapeutic inhibitor of vascular smooth muscle cells |
| US6491938B2 (en) | 1993-05-13 | 2002-12-10 | Neorx Corporation | Therapeutic inhibitor of vascular smooth muscle cells |
| US6663881B2 (en) | 1993-01-28 | 2003-12-16 | Neorx Corporation | Therapeutic inhibitor of vascular smooth muscle cells |
| US5981568A (en) | 1993-01-28 | 1999-11-09 | Neorx Corporation | Therapeutic inhibitor of vascular smooth muscle cells |
| EP2324829A1 (en) | 1993-01-28 | 2011-05-25 | Boston Scientific Limited | Therapeutic inhibitors of vascular smooth muscle cells |
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