JPH07277969A

JPH07277969A - フラボン誘導体を有効成分とする抗ｒｓウイルス剤

Info

Publication number: JPH07277969A
Application number: JP6070289A
Authority: JP
Inventors: Masashi Yamada; 昌司山田; Keizo Koyama; 恵三小山; Noriyoshi Horie; 徳愛堀江; Kenji Konno; 謙治紺野
Original assignee: SOUYAKU GIJUTSU KENKYUSHO KK
Current assignee: SOUYAKU GIJUTSU KENKYUSHO KK
Priority date: 1994-04-08
Filing date: 1994-04-08
Publication date: 1995-10-24

Abstract

(57)【要約】【目的】上気道炎症や肺炎等の呼吸器系感染症を治療す
る抗ＲＳウイルス剤【構成】フラボン誘導体である 4'-アセトキシ-5,6,7-
トリメトキシフラボンを有効成分とする抗ＲＳウイルス
剤

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、特定のフラボン誘導体
を有効成分とする、ＲＳウイルス(Raspiratory syncyti
al virus) に有効な抗ウイルス剤に関する。本発明の抗
ウイルス剤は、上気道炎症や肺炎等の呼吸器系感染症の
治療薬として有用である。

【０００２】

【従来の技術】フラボンおよびフラボン誘導体が広範な
生理活性を有することは広く知られている。例えば、特
開平２−１０１０１３号公報には、アビゲニン、クリシ
ン、モリン、フィセチン、バイカレインんなどの一群の
フラボノイドおよびそれらを含む植物抽出物が、ＤＮＡ
ウイルスのヘルペスウイルス群であるＥＢＶ（エプスタ
インバールウイルス）のゲノムの発現を阻害すると報告
されている。しかし、フラボンおよびフラボン誘導体に
よる抗ＲＮＡウイルス剤は従来報告がなかった。

【０００３】ＲＳウイルスはＲＮＡウイルスの一種であ
り、日和見感染的な呼吸器感染症を引き起こす病因ウイ
ルスである。ＲＳウイルスによる感染は小児間でみら
れ、毎年数か月間の流行性疾患となる。その症状は、上
気道炎症から肺炎に至るのが一般的である。

【０００４】一方、ＲＮＡウイルス属による疾患の治療
薬としては、ＨＩＶ（エイズウイルス）に対するものが
数種実用化されているが、ＲＳウイルスに有効な抗ウイ
ルス剤はなかった。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明は上記事情に鑑
みてなされたもので、ＲＳウイルスに有効な抗ウイルス
剤で、上気道炎症や肺炎等の呼吸器系感染症の治療に有
用な医薬を提供することを目的とするものである。

【０００６】

【課題を解決するための手段および作用】本発明者ら
は、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、
フラボン誘導体に属する一つの化合物が、ＲＳウイルス
に対して抗ウイルス作用を有することを見出だし、本発
明を完成するに至った。すなわち、本発明は、次式
（Ｉ）で示されるフラボン誘導体を有効成分とする抗Ｒ
Ｓウイルス剤である。

【０００７】

【化２】

【０００８】以下、本発明の詳細を作用と共に説明す
る。上記化合物（Ｉ）すなわち、 4'-アセトキシ-5,6,7
- トリメトキシフラボン（以下、「本化合物」という）
は公知であり、例えばBull. Chem. Soc. Jpn. 第37巻５
号,p662,1964記載の方法により得ることができる。

【０００９】本発明の抗ウイルス剤は、上気道炎症や肺
炎等の呼吸器系感染症の治療に使用することができる。
その場合、その投与経路は特に限定されず、経口投与ま
たは非経口投与（例えば、筋注、静注、皮下注、直腸投
与、経皮投与）を用いることができる。また、投与形態
（剤型）については、製薬上許容される補助剤を配合し
て、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、丸剤、細粒剤、
直腸投与剤、坐薬などとすることができる。製薬上許容
される補助剤としては、例えば賦形剤、結合剤、崩壊
剤、滑沢剤、緩衝剤、保存剤、溶解補助剤、防腐剤、矯
味矯臭剤、無痛化剤、安定剤、着色剤が挙げられ、これ
らを常法により適宜組み合わせて使用することができ
る。

【００１０】賦形剤の例としては、乳糖、白糖、ブドウ
糖、ソルビット、コーンスターチ、結晶セルロースが挙
げられる。結合剤の例としては、セルロース誘導体、ア
ラビアゴム、ゼラチン、ポリビニルアルコール、ポリビ
ニルエーテルが挙げられる。崩壊剤の例としては、カル
ボキシメチルセルロースカルシウムが挙げられる。滑沢
剤の例としては、タルク、ステアリン酸マグネシウム、
ポリエチレングリコールが挙げられる。保存剤の例とし
てはパラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エ
チル、ソルビン酸、フェノール、クレゾール、クロロク
レゾールなどが挙げられる。溶解補助剤の例としては、
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリソルベート８
０、ニコチン酸アミド、ポリオキシエチレンソルビタン
モノラウレート、マグロゴールが挙げられる。矯味矯臭
剤の例としては、ココア末、ハッカ油、桂皮末が挙げら
れる。安定化剤の例としては亜硫酸ナトリウム、メタ亜
硫酸ナトリウム、エーテルが挙げられる。

【００１１】本発明の抗ウイルス剤の投与量は、年齢、
体重、性別、症状、投与方法、投与期間等により異なる
が、本化合物の量に換算して、通常１日当たり 0.1mg〜
200mg／kgであり、これを１日１〜５回に分けて投与す
ればよい。

【００１２】本化合物による抗ウイルス作用は、Rudi P
ouwelsらのＭＴＴ（3-(4,5- ジメチルチアゾ -2-イル)-
2,5-ジフェニルテトラゾニウムブロマイド) 法(Journal
ofVirological Methods 第20巻p309,1988)に準じた方
法で観察できる。すなわち、HeLa細胞培養系にＲＳウイ
ルス液と数段階の濃度に希釈した本化合物を加え、35℃
で５日間培養して感作させた後、ＭＴＴ液を添加する。
本化合物を添加した場合、細胞はウイルス感染から防護
され、生存細胞数が濃度依存的に増加する。生存細胞で
は、細胞内のミトコンドリアのデヒドロゲナーゼによっ
て、黄色のテトラゾリウム（ＭＴＴ）が代謝され、青色
のホルマザンに変化する。この変色度合いを540nm と69
0nm の二波長の吸光度で読み取れば、それらの吸光度の
差（吸光度値）を細胞の生存数の指標として用いること
ができる。この指標を用いて、下記の式により、本化合
物の抗ウイルス活性（％）を算出する。下記式中、分子
は本化合物添加による生存細胞の増加数を反映し、分母
は（非特異的吸収を除いた）この測定系の全生存細胞数
を反映する。各濃度における本化合物の抗ウイルス活性
を求めてグラフを書き、その50％効果濃度値をＥＤ₅₀値
とする。

【００１３】

【数１】

【００１４】上記式中、 (ＯＤ_T ) _RS ：（ＲＳウイルス感作HeLa細胞＋本化合
物）の吸光度値 (ＯＤ_C ) _RS ：（ＲＳウイルス感作HeLa細胞）の吸光
度値 (ＯＤ_C ) _mock：（ウイルス無感作HeLa細胞）の吸光度
値 (ＯＤ_B ) ：（無細胞系での本化合物）の吸光度値一方、無感作のHeLa細胞に本化合物添加時の吸光度値
(ＯＤ_T ) _mockとすると、この値が上述の (ＯＤ_C )
_mockの50％であった時の本発明化合物の濃度が50％細胞
毒性濃度ＣＤ₅₀値として表される。ＣＤ₅₀／ＥＤ₅₀＝Ｓ
Ｉ＞１の場合、すなわち、50％濃度値を比較して、抗ウ
イルス効果が細胞毒性よりも低い濃度で得られる時に抗
ウイルス活性があったと判定する。本化合物のＳＩ値は
実施例に示す通り２であり、ＲＳウイルスに対する抗ウ
イルス活性が確認された。

【００１５】

【実施例】

［Ｉ］Bull. Chem. Soc. Jpn. 第37巻５号,p662,1964記
載の方法に準じ、以下のようにして本化合物の合成を行
った。＜１＞ 6-(p-ベンジルオキシ) ベンゾイルオキシ-2,3,4
- トリメトキシアセトフェノンの合成 6-ハイドロキシ-2,3,4- トリメトキシアセトフェノン
(4.5g)とp-ベンジルオキシベンゾイルクロライド(6.0g)
とピリジン(15ml)の混合物を、 110〜120 ℃にて２時間
加熱した。この混合物を氷−塩酸中に注入し、析出沈殿
物を濾過でとり出し、続いて水洗、よく乾燥した(9〜9.
5g) 。得られた粗製エステルを30mlのピリジンに溶解さ
せた後、使用直前に粉砕した水酸化カリウム粉末10g を
加えて、60℃にて３〜４時間強く攪拌した。この混合物
を氷−塩酸中に注入しエーテルを加えて振とうすると、
黄色い沈殿物が析出した。この沈殿物を濾過にて母液と
分離し、水洗した。母液はエーテル抽出し、エーテル層
を炭酸ナトリウム水溶液、水で洗った後、エ−テルを留
去し、析出する結晶を濾過して得た。この結晶を、先に
分離した黄色結晶と合わせ、酢酸エチル−メタノールか
ら再結晶して、黄色針状結晶5.6g（収率65％) を得た。

【００１６】融点 : 111〜112 ℃ Found:Ｃ,69.07%,Ｈ,5.43% Calcd.for Ｃ₂₅Ｈ₂₄Ｏ₇ : Ｃ,68.80%; Ｈ,5.54% ＜２＞ 4'-ベンジルオキシ-5,6,7- トリメトキシフラボ
ンの合成 6-(p-ベンジルオキシ) ベンゾイルオキシ-2,3,4- トリ
メトキシアセトフェノン(4.4g)の酢酸溶液(30ml)に酢酸
ナトリウム(6g)を加え、 140℃にて３時間還流した。こ
の溶液を冷却し、水を加えて白濁させた後、エーテルを
加え二層にして氷室中に放置すると、無色結晶が析出し
た。この結晶を分離後、メタノールから再結晶し、無色
針状結晶3.5g（収率83％) を得た。

【００１７】融点 : 155〜156 ℃ Found:Ｃ,71.65%,Ｈ,5.26% Calcd.for Ｃ₂₅Ｈ₂₂Ｏ₆ : Ｃ,71.76%; Ｈ,5.30% ＜３＞ 4'-ヒドロキシ-5,6,7- トリメトキシフラボンの
合成 4'-ベンジルオキシ-5,6,7- トリメトキシフラボン(3.4
g)を酢酸エチル−メタノール 200ml(1:1) に溶解し、10
% 炭素担持パラジウム触媒(500mg) を加えて、水素の吸
収が無くなるまで、水素気流中で振とうした。触媒を濾
去した後、溶媒を留去し、残留物をメタノールから再結
晶して無色針状結晶2.4g（収率96％) を得た。

【００１８】融点 : 230〜231 ℃ Found:Ｃ,64.56%,Ｈ,4.79% Calcd.for Ｃ₁₈Ｈ₁₆Ｏ₆ : Ｃ,65.85%; Ｈ,4.91% ＜４＞ 4'-アセトキシ-5,6,7- トリメトキシフラボン
（本化合物）の合成 4'-ヒドロキシ-5,6,7- トリメトキシフラボンを無水酢
酸(10:1)に溶解し、５〜10分間湯浴中で加熱した。次ぎ
に水で無水酢酸を分解すると目的化合物が無色針状結晶
となり析出した。収率は定量的(100%)であった。

【００１９】融点 : 139〜140 ℃ ＵＶλ^EtOH _Max nm(logε) : 266.5 (4.38)、309 (4.39) Found:Ｃ,64.64%,Ｈ,4.83% Calcd.for Ｃ₂₀Ｈ₁₈Ｏ₇ : Ｃ,64.86%; Ｈ,4.90% ［II］抗ウイルス活性の測定本発明化合物をあらかじめ５段階に希釈しておき、96穴
Ｕ底マイクロプレートに50μｌづつ分注した。各穴にHe
La細胞を３×10⁴ 細胞／25μｌづつ加えた。これらの各
穴にＲＳウイルス液（25TCID₅₀ ^* ／25μｌ) あるいは対
照実験として生理的食塩水（25μｌ）を加え、35℃、５
日間、ＣＯ₂ インキュベーター内で培養した。次に、各
穴に 7.5mg／mlとして調整したＭＴＴ液を20μｌづつ添
加し、37℃２時間培養した。培養液を除去し、10％トリ
トンＸ-100（シグマ社製、市販名）を含む塩酸−イソプ
ロパノール混液からなる溶出液を各穴 100μｌ添加後、
マイクロプレートごと直接540nm 、690nm の二波長の吸
光度を測定した。前述の計算方法を用いて、ＥＤ₅₀、Ｃ
Ｄ₅₀、ＳＩの値を算出した。

【００２０】＊ＴＣＩＤ₅₀：50％感染率(tissue cultur
e infection dose) 結果は以下の通りであった。ＥＤ₅₀＝ 50 μg/ml ＣＤ₅₀＝ 100 μg/ml ＳＩ＝２

【００２１】

【発明の効果】以上詳述したように、本発明の 4'-アセ
トキシ-5,6,7- トリメトキシフラボンは、ＲＳウイルス
に対し抗ウイルス作用を有する。従って、これを有効成
分とする本発明の抗ウイルス剤は、上気道炎症や肺炎等
の呼吸器系感染症の治療薬として有用である。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】次式（Ｉ）で示されるフラボン誘導体を有
効成分とする抗ＲＳウイルス剤【化１】