JPH07294530A - 病原体に対する体液中の抗体検出法 - Google Patents
病原体に対する体液中の抗体検出法Info
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- JPH07294530A JPH07294530A JP12085394A JP12085394A JPH07294530A JP H07294530 A JPH07294530 A JP H07294530A JP 12085394 A JP12085394 A JP 12085394A JP 12085394 A JP12085394 A JP 12085394A JP H07294530 A JPH07294530 A JP H07294530A
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【目的】体液中の病原体抗体を検出するための検査試薬
を提供する。 【構成】複数の病原体抗体測定チャンネルを持ち、各々
のチャンネルには異なる濃度の可溶性病原体抗原もしく
は、目的病原体に類似する病原体を含むチャンネルを持
つ病原体抗体を検出するための検査試薬。 【効果】本発明の方法によれば、高感度かつ特異的に体
液中の病原体抗体を検出する事が可能である。
を提供する。 【構成】複数の病原体抗体測定チャンネルを持ち、各々
のチャンネルには異なる濃度の可溶性病原体抗原もしく
は、目的病原体に類似する病原体を含むチャンネルを持
つ病原体抗体を検出するための検査試薬。 【効果】本発明の方法によれば、高感度かつ特異的に体
液中の病原体抗体を検出する事が可能である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、体液中の病原体抗体検
出用試薬に関する。
出用試薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】病原体に関して、過去（場合によっては
現在も継続している）に既往症が有るかどうかを判定す
る手法として、体液中の抗体検出が行われることは公知
のことである。その方法としては病原体そのもの、もし
くは部分成分を固相に感作し、体液と接触させ、その後
固相に吸着した免疫グロブリンを検出する、いわゆる免
疫学的操作法により行われることが一般的である。とこ
ろが、種族の近い病原体には種が異なるにもかかわらず
類似した成分から構成されることがよくある。この場
合、一般の抗体測定法では、目的とする病原体に対する
抗体が存在しなくても、類似の病原体に対する抗体が存
在すれば、この類似抗体を検出して陽性と判定される
（一般的に偽陽性と言われている）。これは、医師が医
療行為を行う上で、診断や治療方針を誤る結果となり、
大きな問題となっている。これを解決する方法として、
種々の方法が試みられているが、以下に病原体Ｈｅｌｉ
ｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉを例として説明する。
ＷａｒｒｅｎとＭａｒｓｈａｌｌ（Ｍａｒｓｈａｌｌ
ＢＪ ＆ Ｗａｒｒｅｎ ＪＲ：Ｕｎｉｔｅｎｔｉｆｉ
ｅｄ ｃｕｒｖｅｄ ｂａｃｉｌｌｉ ｉｎｔｈｅ ｓ
ｔｏｍａｃｈ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｇ
ａｓｔｒｉｔｉｓ ｐｅｐｔｉｃ ｕｌｃｅｒａｔｉｏ
ｎ．Ｌａｎｃｅｔ ｉ：１３１１−１３１５，１９８
４）らによって初めてヒト胃前庭部より分離、培養され
たＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉは、現在で
は胃粘膜病変の主原因の一つと考えられている。このた
め、ヒト胃内部にＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏ
ｒｉが存在するかどうかを知ることは、胃・十二指腸疾
患の診断に大いに役立つものである。さて、Ｈｅｌｉｃ
ｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ感染を調べる方法とし
て、内視鏡施行時にＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌ
ｏｒｉ菌を分離同定すること、もしくは１３Ｃ−Ｕｒｅ
ａ等を用いたＢｒｅａｔｈテスト（Ｇｒａｈａｍ Ｄ
Ｙ，ｅｔ ａｌ：Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌ
ｏｒｉｄｉｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｎｏｎｉｎｖａｓｉ
ｖｅｌｙ ｂｙ ｔｈｅ １３Ｃ−ｕｒｅａ ｂｒｅａ
ｔｈ ｔｅｓｔ．Ｌａｎｃｅｔ ｉ：１１７４−１１７
７，１９８７）が最も確実な方法である。しかし、患者
に与える負担も大きく、培養施設等の問題も有り簡便と
はいえない。これに対し、ＥＩＡ法による血清中のＨｅ
ｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ抗体検出が報告
（Ｒａｔｈｂｏｎｅ ＢＪ，ｅｔ ａｌ：Ｉｍｍｕｎｅ
ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅ
ｒ ｐｙｌｏｒｉｄｉｓ．ｌａｎｃｅｔ １：１２１
７，１９８５）されている。しかしＨｅｌｉｃｏｂａｃ
ｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ抗原とＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅ
ｒ属との共通抗原性が指摘されており、Ｃａｍｐｙｌｏ
ｂａｃｔｅｒ属の菌体を用いた吸収による免疫反応も報
告されている（Ｐｅｒｅｚ−ｐｅｒｅｚ ＧＩ，ｅｔ
ａｌ：Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ ａ
ｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ ｈｕｍａｎｓ．Ａｎｎ Ｉ
ｎｔｅｎ Ｍｅｄ １０９：１１−１７，１９８８）。
しかし、この吸収操作には、菌体すべてを用いるため、
吸収後の遠心操作が必要であり、大量検体を扱うには煩
雑なものであった。また、ゲル濾過により得たＵｒｅａ
ｓｅ活性を含む高分子分画を抗原としたＥＬＩＳＡ法も
報告されている（Ｅｖａｎｓ ＪＤ，ｅｔ ａｌ：Ａ
ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ａｎｄ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｓｅ
ｒｏｌｏｇｉｃ ｔｅｓｔ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏ
ｎ ｏｆ Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ
ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏ
ｇｙ ９６：１００４−１００８，１９８９）。同法
は、特異性、感度共優れた方法である。とこらが同法
は、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ菌の一部
の蛋白を抗原としているため、その用いた一部の抗原に
たいする抗体の少ない患者は偽陰性となることが指摘さ
れていた。
現在も継続している）に既往症が有るかどうかを判定す
る手法として、体液中の抗体検出が行われることは公知
のことである。その方法としては病原体そのもの、もし
くは部分成分を固相に感作し、体液と接触させ、その後
固相に吸着した免疫グロブリンを検出する、いわゆる免
疫学的操作法により行われることが一般的である。とこ
ろが、種族の近い病原体には種が異なるにもかかわらず
類似した成分から構成されることがよくある。この場
合、一般の抗体測定法では、目的とする病原体に対する
抗体が存在しなくても、類似の病原体に対する抗体が存
在すれば、この類似抗体を検出して陽性と判定される
（一般的に偽陽性と言われている）。これは、医師が医
療行為を行う上で、診断や治療方針を誤る結果となり、
大きな問題となっている。これを解決する方法として、
種々の方法が試みられているが、以下に病原体Ｈｅｌｉ
ｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉを例として説明する。
ＷａｒｒｅｎとＭａｒｓｈａｌｌ（Ｍａｒｓｈａｌｌ
ＢＪ ＆ Ｗａｒｒｅｎ ＪＲ：Ｕｎｉｔｅｎｔｉｆｉ
ｅｄ ｃｕｒｖｅｄ ｂａｃｉｌｌｉ ｉｎｔｈｅ ｓ
ｔｏｍａｃｈ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｇ
ａｓｔｒｉｔｉｓ ｐｅｐｔｉｃ ｕｌｃｅｒａｔｉｏ
ｎ．Ｌａｎｃｅｔ ｉ：１３１１−１３１５，１９８
４）らによって初めてヒト胃前庭部より分離、培養され
たＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉは、現在で
は胃粘膜病変の主原因の一つと考えられている。このた
め、ヒト胃内部にＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏ
ｒｉが存在するかどうかを知ることは、胃・十二指腸疾
患の診断に大いに役立つものである。さて、Ｈｅｌｉｃ
ｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ感染を調べる方法とし
て、内視鏡施行時にＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌ
ｏｒｉ菌を分離同定すること、もしくは１３Ｃ−Ｕｒｅ
ａ等を用いたＢｒｅａｔｈテスト（Ｇｒａｈａｍ Ｄ
Ｙ，ｅｔ ａｌ：Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌ
ｏｒｉｄｉｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｎｏｎｉｎｖａｓｉ
ｖｅｌｙ ｂｙ ｔｈｅ １３Ｃ−ｕｒｅａ ｂｒｅａ
ｔｈ ｔｅｓｔ．Ｌａｎｃｅｔ ｉ：１１７４−１１７
７，１９８７）が最も確実な方法である。しかし、患者
に与える負担も大きく、培養施設等の問題も有り簡便と
はいえない。これに対し、ＥＩＡ法による血清中のＨｅ
ｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ抗体検出が報告
（Ｒａｔｈｂｏｎｅ ＢＪ，ｅｔ ａｌ：Ｉｍｍｕｎｅ
ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅ
ｒ ｐｙｌｏｒｉｄｉｓ．ｌａｎｃｅｔ １：１２１
７，１９８５）されている。しかしＨｅｌｉｃｏｂａｃ
ｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ抗原とＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅ
ｒ属との共通抗原性が指摘されており、Ｃａｍｐｙｌｏ
ｂａｃｔｅｒ属の菌体を用いた吸収による免疫反応も報
告されている（Ｐｅｒｅｚ−ｐｅｒｅｚ ＧＩ，ｅｔ
ａｌ：Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ ａ
ｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ ｈｕｍａｎｓ．Ａｎｎ Ｉ
ｎｔｅｎ Ｍｅｄ １０９：１１−１７，１９８８）。
しかし、この吸収操作には、菌体すべてを用いるため、
吸収後の遠心操作が必要であり、大量検体を扱うには煩
雑なものであった。また、ゲル濾過により得たＵｒｅａ
ｓｅ活性を含む高分子分画を抗原としたＥＬＩＳＡ法も
報告されている（Ｅｖａｎｓ ＪＤ，ｅｔ ａｌ：Ａ
ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ａｎｄ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｓｅ
ｒｏｌｏｇｉｃ ｔｅｓｔ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏ
ｎ ｏｆ Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ
ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏ
ｇｙ ９６：１００４−１００８，１９８９）。同法
は、特異性、感度共優れた方法である。とこらが同法
は、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ菌の一部
の蛋白を抗原としているため、その用いた一部の抗原に
たいする抗体の少ない患者は偽陰性となることが指摘さ
れていた。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】そこで本発明は、有用
な医薬の開発に応用できる、体液中の病原体抗体を高感
度かつ特異的に検出する検査用試薬を提供することを目
的とする。
な医薬の開発に応用できる、体液中の病原体抗体を高感
度かつ特異的に検出する検査用試薬を提供することを目
的とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明の目的は、体液中
の病原体抗体を検出する試薬を提供することであり、検
出に用いる抗原は、可能な限り多くの病原体由来の可溶
性抗原を使用する。続いて、複数濃度の病原体可溶性抗
原を用意して、それぞれを単体（ボール、マイクロプレ
ート等）に感作させる、そしてそれぞれの単体を体液と
接触させ単体感作可溶性抗原−免疫グロブリンの複合物
作成させ、その後固相に吸着した免疫グロブリンを標識
抗免疫グロブリン等を用いて測定する。測定検体中の抗
体が陰性もしくは陽性であるかの判定は、単体感作濃度
差間の測定値の差で判定する。測定値間データが複数で
存在する場合（つまり３チャンネル以上ある場合）は１
判定データが陽性（比較される陰性コントロールにて求
めた基準値を越える場合）である場合には陽性と判定す
る。一般に、病原体は蛋白質、糖類、脂質等を含む多く
の成分から構成されている。このため、生体体液中には
これら全てについて対応する抗体が存在する可能性があ
り、個体差により種々雑多である。ところが、これらの
抗原を単体に感作する場合、同じ条件でも感作されやす
い抗原と、されにくい抗原がある。また感作する単体に
は感作許容量があるため、高濃度で感作しても、感作さ
れるトータルの抗原量は小量しか増加しない。これに対
し感作される抗原の成分は、感作されやすい抗原量が増
加し、逆に感作されにくい抗原は減少する。低濃度で感
作する場合は、逆に感作溶液中の抗原量が小量のため、
単体に感作されにくい物質も単体に感作され、感作され
にくい物質が単体に感作される比率は増加することにな
る。つまり、病原体の可溶性抗原を、単体に高濃度で感
作する場合と低濃度で感作する場合で、感作される抗原
成分が変化する。このため本発明では、測定検体を複数
濃度で感作した単体を用い測定し、そのデータを複合す
ることにより測定感度をあげるものである。以下に、病
原体をＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉとして
説明する。本発明の目的は、体液中のＨｅｌｉｃｏｂａ
ｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ抗体を検出する試薬を提供する
ことであり、検出に用いる抗原は、可能な限り多くのＨ
ｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ由来の可溶性抗
原を使用することである。すなわち、全Ｈｅｌｉｃｏｂ
ａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ菌体可溶性抗原を用いた抗体
検出用試薬を提供することであるが、この場合非特異反
応を示す、交差性物質をも測定することは公知のことで
ある。この非特異反応を除外するために、本発明では測
定チャンネルとは別にブランクチャンネルを設け、かつ
ブランクチャンネルには測定チャンネルに用いたＨｅｌ
ｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ可溶性抗原と同一の
成分を低濃度で感作することである。一般に、抗体検出
試薬の場合測定チャンネルとは別にブランクチャンネル
を設け検体ブランクを測定することは、よく行われるこ
とである。しかし、一般に行われているブランクチャン
ネルには、目的とする抗体を検出するための抗原成分は
なんら感作されておらず本発明とは異なるものである。
抗原に反応する抗体量は、抗原量に比例することは、公
知のことである。すなわち、抗体検出に用いる抗原量が
多くなればなるほど、検出される抗体量も増大する。と
ころが、我々はＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ
抗原量の増加に対し、非特異反応と言われる交差性物質
（抗体）の増加は、目的とする特異抗体（Ｈｅｌｉｃｏ
ｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉに対する抗体）の増加に比
較し比較的緩やかな増加傾向を示すことを見いだした。
この為、高濃度Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒ
ｉ可溶性抗原で測定したデータから低濃度Ｈｅｌｉｃｏ
ｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ可溶性抗原で測定したデー
タを差し引くことにより、非特異物質のデータが消去で
き、特異物質（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒ
ｉに対する抗体）のみを検出することが可能であること
がわかった。本発明試薬を用いた場合、Ｈｅｌｉｃｏｂ
ａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ抗原はすべての可溶性抗原を用
いているため、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒ
ｉの一部分に対する抗体しか持たない患者についても偽
陰性を示すことはない。また、ブランクチャンネルに感
作する抗原は、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒ
ｉ以外の菌体可溶性抗原でも可能である。この場合可溶
性抗原感作量は測定チャンネルのＨｅｌｉｃｏｂａｃｔ
ｅｒ ｐｙｌｏｒｉ可溶性抗原感作量と同程度が望まし
い。また、この場合菌種はＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ
ｐｙｌｏｒｉに類似する菌種が好く、特にＣａｍｐｙｌ
ｏｂａｃｔｅｒ属が好ましい。さらに、ブランクチャン
ネルに用いる菌種は一種類でも良く、また二種類以上で
も良い。
の病原体抗体を検出する試薬を提供することであり、検
出に用いる抗原は、可能な限り多くの病原体由来の可溶
性抗原を使用する。続いて、複数濃度の病原体可溶性抗
原を用意して、それぞれを単体（ボール、マイクロプレ
ート等）に感作させる、そしてそれぞれの単体を体液と
接触させ単体感作可溶性抗原−免疫グロブリンの複合物
作成させ、その後固相に吸着した免疫グロブリンを標識
抗免疫グロブリン等を用いて測定する。測定検体中の抗
体が陰性もしくは陽性であるかの判定は、単体感作濃度
差間の測定値の差で判定する。測定値間データが複数で
存在する場合（つまり３チャンネル以上ある場合）は１
判定データが陽性（比較される陰性コントロールにて求
めた基準値を越える場合）である場合には陽性と判定す
る。一般に、病原体は蛋白質、糖類、脂質等を含む多く
の成分から構成されている。このため、生体体液中には
これら全てについて対応する抗体が存在する可能性があ
り、個体差により種々雑多である。ところが、これらの
抗原を単体に感作する場合、同じ条件でも感作されやす
い抗原と、されにくい抗原がある。また感作する単体に
は感作許容量があるため、高濃度で感作しても、感作さ
れるトータルの抗原量は小量しか増加しない。これに対
し感作される抗原の成分は、感作されやすい抗原量が増
加し、逆に感作されにくい抗原は減少する。低濃度で感
作する場合は、逆に感作溶液中の抗原量が小量のため、
単体に感作されにくい物質も単体に感作され、感作され
にくい物質が単体に感作される比率は増加することにな
る。つまり、病原体の可溶性抗原を、単体に高濃度で感
作する場合と低濃度で感作する場合で、感作される抗原
成分が変化する。このため本発明では、測定検体を複数
濃度で感作した単体を用い測定し、そのデータを複合す
ることにより測定感度をあげるものである。以下に、病
原体をＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉとして
説明する。本発明の目的は、体液中のＨｅｌｉｃｏｂａ
ｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ抗体を検出する試薬を提供する
ことであり、検出に用いる抗原は、可能な限り多くのＨ
ｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ由来の可溶性抗
原を使用することである。すなわち、全Ｈｅｌｉｃｏｂ
ａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ菌体可溶性抗原を用いた抗体
検出用試薬を提供することであるが、この場合非特異反
応を示す、交差性物質をも測定することは公知のことで
ある。この非特異反応を除外するために、本発明では測
定チャンネルとは別にブランクチャンネルを設け、かつ
ブランクチャンネルには測定チャンネルに用いたＨｅｌ
ｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ可溶性抗原と同一の
成分を低濃度で感作することである。一般に、抗体検出
試薬の場合測定チャンネルとは別にブランクチャンネル
を設け検体ブランクを測定することは、よく行われるこ
とである。しかし、一般に行われているブランクチャン
ネルには、目的とする抗体を検出するための抗原成分は
なんら感作されておらず本発明とは異なるものである。
抗原に反応する抗体量は、抗原量に比例することは、公
知のことである。すなわち、抗体検出に用いる抗原量が
多くなればなるほど、検出される抗体量も増大する。と
ころが、我々はＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ
抗原量の増加に対し、非特異反応と言われる交差性物質
（抗体）の増加は、目的とする特異抗体（Ｈｅｌｉｃｏ
ｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉに対する抗体）の増加に比
較し比較的緩やかな増加傾向を示すことを見いだした。
この為、高濃度Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒ
ｉ可溶性抗原で測定したデータから低濃度Ｈｅｌｉｃｏ
ｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ可溶性抗原で測定したデー
タを差し引くことにより、非特異物質のデータが消去で
き、特異物質（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒ
ｉに対する抗体）のみを検出することが可能であること
がわかった。本発明試薬を用いた場合、Ｈｅｌｉｃｏｂ
ａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ抗原はすべての可溶性抗原を用
いているため、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒ
ｉの一部分に対する抗体しか持たない患者についても偽
陰性を示すことはない。また、ブランクチャンネルに感
作する抗原は、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒ
ｉ以外の菌体可溶性抗原でも可能である。この場合可溶
性抗原感作量は測定チャンネルのＨｅｌｉｃｏｂａｃｔ
ｅｒ ｐｙｌｏｒｉ可溶性抗原感作量と同程度が望まし
い。また、この場合菌種はＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ
ｐｙｌｏｒｉに類似する菌種が好く、特にＣａｍｐｙｌ
ｏｂａｃｔｅｒ属が好ましい。さらに、ブランクチャン
ネルに用いる菌種は一種類でも良く、また二種類以上で
も良い。
【０００５】
（実施例１）Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ
を長田（ｐｏｔｅｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ａｃｔ
ｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｇａｓｔｒｉｃ ｐｒｏｔｏｎ
ｐｕｍｐ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｌａｎｓｏｐｒａｚ
ｏｌｅ ａｇａｉｎｓｔ ｕｒｅａｓｅ ａｃｔｉｖｉ
ｔｙ ｏｆ ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒ
ｉ：ｕｎｉｑｕｅ ａｃｔｉｏｎ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ
ｆｏｒ Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ ｃｅｌｌｓ．ａｎｔｉｍ
ｉｃｒｏｂ ａｇｅｎｔｓ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ３７：
７６９−７７４，１９９３）らの方法により培養した
後、Ｓｔａｃｅｙ（Ａｎｔｉｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ
ｆｒａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ
ｐｙｌｏｒｉ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｂｙ ｆａｓｔ
ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ
ａｐｈｙ ａｎｄ ｕｒｅａｓｅ ｃａｐｔｕｒｅ ｂ
ｙ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｅ
ｕｒｊ ｃｌｉｎ ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ ｉｎｆｅｃｔ
ｄｉｓ ９：７３２−７３７，１９９０）らの方法に
準じ可溶性抗原を作成した。この抗原を、ＥＬＩＳＡ用
９６穴マイクロプレートに、測定チャンネルには１μｇ
／ｍｌで、またブランクチャンネルには０．１μｇ／ｍ
ｌで分注し、４℃一夜静置した。プレートをＰＢＳ
（０．１％Ｔｗｅｅｎ２０含む）で洗浄後、ブロックエ
ースでブロッキングした。患者血清を１％の牛アルブミ
ンを含むＰＢＳで５００倍希釈して添加後１時間反応さ
せた。洗浄の後、ペルオキシダーゼ標識抗ヒトＩｇＧ抗
体を加え１時間反応させた。再度洗浄後、基質液（０．
０３％オルトフェニレンジアミン，０．００３％Ｈ２Ｏ
２）を加え３７℃、１０分反応させた。反応は２Ｎ硫酸
を加え停止し、各ウエルをマイクロプレートリーダー
（λ１＝４９２ｎｍ，λ２＝６６０ｎｍ）で比色した。
そして、測定チャンネル（固相Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅ
ｒｐｙｌｏｒｉ抗原１μｇ／ｍｌの測定値）からブラン
クチャンネル（固相Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌ
ｏｒｉ抗原０．１μｇ／ｍｌの測定値）を差し引いた値
を判定値とした。内視鏡診断で正常、かつ細菌培養検査
が陰性であったヒト血清（ｎ＝８）を測定し、そのＯ．
Ｄ．値のｘ＋２ＳＤ＝０．２００をカットオフ値と定め
それ以上を陽性と判定した。結果を表に示した。なお、
Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉの感染は内視
鏡時に採取した生検組織の培養検査によって陽性か陰性
を診断した。本発明による検出感度は８６．９％であり
特異性は７０．８％、そして正確度は８１．２％であっ
た。これらの結果は以下に記した比較例と比べ高感度で
あるのがわかる。 （比較例１） （実施例１）でブランクチャンネルには、何等抗原を吸
着させない場合の結果を表に示した。検出感度は６９．
２％であり特異性は７３．６％、そして正確度は７０．
６％であった。 （比較例２）Ｅｖａｎｓ（Ａ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ａ
ｎｄ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｓｅｒｐｌｏｇｉｃ ｔｅｓ
ｔ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｍｐｙｌ
ｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．
Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ９６：１００４−
１００８，１９８９）の方法に従い測定した。すなわ
ち、界面活性剤（ｎ−オクチル−グルコシド）で可溶可
したＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ抗原をゲ
ルろ過かし、その第一ピークの抗原を、ＥＬＩＳＡ用９
６穴マイクロプレートに、１μｇ／ｍｌで、４℃一夜静
置した。プレートを、ＰＢＳ（０．１％Ｔｗｅｅｎ２０
含む）で洗浄後、ブロックエースでブロッキングした。
患者血清を１％の牛アルブミンを含むＰＢＳで５００倍
希釈にて添加後１時間反応させた。洗浄の後、ペルオキ
シダーゼ標識抗ヒトＩｇＧ抗体を加え１時間反応させ
た。再度洗浄後、基質液（０．０３％オルトフェニレン
ジアミン，０．００３％Ｈ２Ｏ２）を加え３７℃、１０
分反応させた。反応は２Ｎ硫酸を加え停止し、各ウェル
をマイクロプレートリーダー（λ１＝４９２ｎｍ，λ２
＝６６０ｎｍ）で比色した。内視鏡診断で正常、かつ培
養検査が陰性であったヒト血清（ｎ＝８）を各法にて測
定し、そのＯ．Ｄ．値のｘ＋２ＳＤ＝０．３００をカッ
トオフ値と定めそれ以上を陽性と判定した。その結果を
表に示した。検出感度は８２．３９％であり特異性は７
０．８％、そして正確度は７８．２％であった。
を長田（ｐｏｔｅｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ａｃｔ
ｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｇａｓｔｒｉｃ ｐｒｏｔｏｎ
ｐｕｍｐ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｌａｎｓｏｐｒａｚ
ｏｌｅ ａｇａｉｎｓｔ ｕｒｅａｓｅ ａｃｔｉｖｉ
ｔｙ ｏｆ ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒ
ｉ：ｕｎｉｑｕｅ ａｃｔｉｏｎ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ
ｆｏｒ Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ ｃｅｌｌｓ．ａｎｔｉｍ
ｉｃｒｏｂ ａｇｅｎｔｓ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ３７：
７６９−７７４，１９９３）らの方法により培養した
後、Ｓｔａｃｅｙ（Ａｎｔｉｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ
ｆｒａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ
ｐｙｌｏｒｉ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｂｙ ｆａｓｔ
ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ
ａｐｈｙ ａｎｄ ｕｒｅａｓｅ ｃａｐｔｕｒｅ ｂ
ｙ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｅ
ｕｒｊ ｃｌｉｎ ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ ｉｎｆｅｃｔ
ｄｉｓ ９：７３２−７３７，１９９０）らの方法に
準じ可溶性抗原を作成した。この抗原を、ＥＬＩＳＡ用
９６穴マイクロプレートに、測定チャンネルには１μｇ
／ｍｌで、またブランクチャンネルには０．１μｇ／ｍ
ｌで分注し、４℃一夜静置した。プレートをＰＢＳ
（０．１％Ｔｗｅｅｎ２０含む）で洗浄後、ブロックエ
ースでブロッキングした。患者血清を１％の牛アルブミ
ンを含むＰＢＳで５００倍希釈して添加後１時間反応さ
せた。洗浄の後、ペルオキシダーゼ標識抗ヒトＩｇＧ抗
体を加え１時間反応させた。再度洗浄後、基質液（０．
０３％オルトフェニレンジアミン，０．００３％Ｈ２Ｏ
２）を加え３７℃、１０分反応させた。反応は２Ｎ硫酸
を加え停止し、各ウエルをマイクロプレートリーダー
（λ１＝４９２ｎｍ，λ２＝６６０ｎｍ）で比色した。
そして、測定チャンネル（固相Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅ
ｒｐｙｌｏｒｉ抗原１μｇ／ｍｌの測定値）からブラン
クチャンネル（固相Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌ
ｏｒｉ抗原０．１μｇ／ｍｌの測定値）を差し引いた値
を判定値とした。内視鏡診断で正常、かつ細菌培養検査
が陰性であったヒト血清（ｎ＝８）を測定し、そのＯ．
Ｄ．値のｘ＋２ＳＤ＝０．２００をカットオフ値と定め
それ以上を陽性と判定した。結果を表に示した。なお、
Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉの感染は内視
鏡時に採取した生検組織の培養検査によって陽性か陰性
を診断した。本発明による検出感度は８６．９％であり
特異性は７０．８％、そして正確度は８１．２％であっ
た。これらの結果は以下に記した比較例と比べ高感度で
あるのがわかる。 （比較例１） （実施例１）でブランクチャンネルには、何等抗原を吸
着させない場合の結果を表に示した。検出感度は６９．
２％であり特異性は７３．６％、そして正確度は７０．
６％であった。 （比較例２）Ｅｖａｎｓ（Ａ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ａ
ｎｄ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｓｅｒｐｌｏｇｉｃ ｔｅｓ
ｔ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｍｐｙｌ
ｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．
Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ９６：１００４−
１００８，１９８９）の方法に従い測定した。すなわ
ち、界面活性剤（ｎ−オクチル−グルコシド）で可溶可
したＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ抗原をゲ
ルろ過かし、その第一ピークの抗原を、ＥＬＩＳＡ用９
６穴マイクロプレートに、１μｇ／ｍｌで、４℃一夜静
置した。プレートを、ＰＢＳ（０．１％Ｔｗｅｅｎ２０
含む）で洗浄後、ブロックエースでブロッキングした。
患者血清を１％の牛アルブミンを含むＰＢＳで５００倍
希釈にて添加後１時間反応させた。洗浄の後、ペルオキ
シダーゼ標識抗ヒトＩｇＧ抗体を加え１時間反応させ
た。再度洗浄後、基質液（０．０３％オルトフェニレン
ジアミン，０．００３％Ｈ２Ｏ２）を加え３７℃、１０
分反応させた。反応は２Ｎ硫酸を加え停止し、各ウェル
をマイクロプレートリーダー（λ１＝４９２ｎｍ，λ２
＝６６０ｎｍ）で比色した。内視鏡診断で正常、かつ培
養検査が陰性であったヒト血清（ｎ＝８）を各法にて測
定し、そのＯ．Ｄ．値のｘ＋２ＳＤ＝０．３００をカッ
トオフ値と定めそれ以上を陽性と判定した。その結果を
表に示した。検出感度は８２．３９％であり特異性は７
０．８％、そして正確度は７８．２％であった。
【０００６】
【考案の効果】実施例１、比較例１および比較例２に示
される如く、本発明の方法によれば、高感度かつ特異的
に体液中の病原体（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏ
ｒｉ）抗体を検出する事が可能であった。すなわち、簡
便に病原体（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒ
ｉ）感染を診断可能であった。
される如く、本発明の方法によれば、高感度かつ特異的
に体液中の病原体（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏ
ｒｉ）抗体を検出する事が可能であった。すなわち、簡
便に病原体（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒ
ｉ）感染を診断可能であった。
【図１】図１は、酵素免疫測定法による血清Ｈｅｌｉｃ
ｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ抗体測定結果を示すグラ
フである。（ａ）は陽性、（ｂ）は陰性そして（ｃ）は
陽性検体である。
ｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ抗体測定結果を示すグラ
フである。（ａ）は陽性、（ｂ）は陰性そして（ｃ）は
陽性検体である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 小西 登 奈良県橿原市白橿町７丁目８−17 (72)発明者 日浅 義雄 奈良県奈良市秋篠早月町９−１−301
Claims (9)
- 【請求項１】病原体の可溶性抗原を含む組成物であっ
て、複数の測定チャンネルを持ち、それぞれが異なる濃
度の病原体由来可溶性抗原を含む組成物。 - 【請求項２】請求項１であって免疫学的測定法に従い操
作を行い、各測定チャンネル間の測定データ差により、
体液中の病原体にたいする抗体を検出するための測定
法。 - 【請求項３】請求項１であって免疫学的測定法に従い操
作を行い、各測定チャンネルにおいて１チャンネルでも
陽性があれば陽性と判定する、体液中の病原体にたいす
る抗体を検出するための測定法。 - 【請求項４】Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ
の可溶性抗原を含む組成物であって、複数の測定チャン
ネルを持ち、それぞれが異なる濃度のＨｅｌｉｃｏｂａ
ｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ由来可溶性抗原を含む組成物。 - 【請求項５】Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ
の可溶性抗原を含む組成物であって、ブランクチャンネ
ルにＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ以外の菌
体を含む組成物。 - 【請求項６】請求項４であって免疫学的測定法に従い操
作を行い、各測定チャンネル間の測定データ差により、
体液中の病原体にたいする抗体を検出するための測定
法。 - 【請求項７】請求項４であって免疫学的測定法に従い操
作を行い、各測定チャンネルにおいて１チャンネルでも
陽性があれば陽性と判定する、体液中の病原体にたいす
る抗体を検出するための測定法。 - 【請求項８】請求項２および請求項３であって酵素免疫
測定法、ラジオイムノアッセイ法に従って検査すべき体
液と結合させることを含む病原体抗体検出のための測定
法。 - 【請求項９】請求項６および請求項７であって酵素免疫
測定法、ラジオイムノアッセイ法に従って検査すべき体
液と結合させることを含むＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ
ｐｙｌｏｒｉ体抗体検出のための測定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12085394A JPH07294530A (ja) | 1994-04-20 | 1994-04-20 | 病原体に対する体液中の抗体検出法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12085394A JPH07294530A (ja) | 1994-04-20 | 1994-04-20 | 病原体に対する体液中の抗体検出法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07294530A true JPH07294530A (ja) | 1995-11-10 |
Family
ID=14796571
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12085394A Pending JPH07294530A (ja) | 1994-04-20 | 1994-04-20 | 病原体に対する体液中の抗体検出法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07294530A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008542703A (ja) * | 2005-05-27 | 2008-11-27 | オーエヌシーイミューン リミテッド | 改善されたイムノアッセイ法 |
| US8574848B2 (en) | 2006-09-13 | 2013-11-05 | Oncimmune Ltd. | Immunoassay methods |
| US8592169B2 (en) | 2002-11-14 | 2013-11-26 | Oncimmune Limited | Tumour marker proteins and uses thereof |
| US9696319B2 (en) | 1998-05-11 | 2017-07-04 | Oncimmune Ltd. | Tumour markers |
| US9714938B2 (en) | 2005-05-27 | 2017-07-25 | Oncimmune Ltd. | Immunoassay methods |
-
1994
- 1994-04-20 JP JP12085394A patent/JPH07294530A/ja active Pending
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9696319B2 (en) | 1998-05-11 | 2017-07-04 | Oncimmune Ltd. | Tumour markers |
| US8592169B2 (en) | 2002-11-14 | 2013-11-26 | Oncimmune Limited | Tumour marker proteins and uses thereof |
| JP2008542703A (ja) * | 2005-05-27 | 2008-11-27 | オーエヌシーイミューン リミテッド | 改善されたイムノアッセイ法 |
| JP4876127B2 (ja) * | 2005-05-27 | 2012-02-15 | オーエヌシーイミューン リミテッド | 改善されたイムノアッセイ法 |
| US8722339B2 (en) | 2005-05-27 | 2014-05-13 | Oncimmune Ltd. | Immunoassay methods |
| US9714938B2 (en) | 2005-05-27 | 2017-07-25 | Oncimmune Ltd. | Immunoassay methods |
| US9719984B2 (en) | 2005-05-27 | 2017-08-01 | Oncimmune Ltd. | Immunoassay methods |
| US8574848B2 (en) | 2006-09-13 | 2013-11-05 | Oncimmune Ltd. | Immunoassay methods |
| US8927223B2 (en) | 2006-09-13 | 2015-01-06 | Oncimmune Ltd. | Immunoassay methods |
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