JPH0730117B2 - 因子▲ｖｉｉｉ▼含有分画の製造方法 - Google Patents
因子▲ｖｉｉｉ▼含有分画の製造方法Info
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- JPH0730117B2 JPH0730117B2 JP62278985A JP27898587A JPH0730117B2 JP H0730117 B2 JPH0730117 B2 JP H0730117B2 JP 62278985 A JP62278985 A JP 62278985A JP 27898587 A JP27898587 A JP 27898587A JP H0730117 B2 JPH0730117 B2 JP H0730117B2
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
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Description
【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、少なくともタンパク質1mgあたり因子VIII（A
HF）2.5単位の比活性、ならびに多くても因子VIII1000
単位あたり免疫グロブリンＧ（IgG）10mgの割合を有
し、治療または予防に用いたときのウィルスまたは細菌
感染の危険が避けられているか、またはそのほとんどが
減じられている、因子VIII含有分画の製造方法に関す
る。
HF）2.5単位の比活性、ならびに多くても因子VIII1000
単位あたり免疫グロブリンＧ（IgG）10mgの割合を有
し、治療または予防に用いたときのウィルスまたは細菌
感染の危険が避けられているか、またはそのほとんどが
減じられている、因子VIII含有分画の製造方法に関す
る。
従来技術 因子VIII濃縮物を製造するための多数の方法が、既に文
献で知られている。これらの方法は分画手段として、血
漿をエタノール、エーテル、ポリエチレングリコールお
よび／またはグリシンで処理することを含んでいる。ま
た、プール［Pool,The New England Journal of Medici
ne,273,1443（1965）］の血漿の冷凍沈澱法またはジョ
ンソン［Johnson,Congr.Int.Soc.Blood Transf.,シドニ
ー，オーストラリア，論文抄録集,1109頁（1966）］の
血漿の冷凍エタノール沈澱法も知られている。
献で知られている。これらの方法は分画手段として、血
漿をエタノール、エーテル、ポリエチレングリコールお
よび／またはグリシンで処理することを含んでいる。ま
た、プール［Pool,The New England Journal of Medici
ne,273,1443（1965）］の血漿の冷凍沈澱法またはジョ
ンソン［Johnson,Congr.Int.Soc.Blood Transf.,シドニ
ー，オーストラリア，論文抄録集,1109頁（1966）］の
血漿の冷凍エタノール沈澱法も知られている。
さらに、米国特許No.3,973,002には、血漿から得られた
冷凍沈澱物を浸軟し、この浸軟物をクエン酸塩−グルコ
ース緩衝溶液中に懸濁し、遠心し、そしてこうして得ら
れた緩衝液抽出物をpH6.0〜6.8に調節する方法が記載さ
れている。これらの条件下で、望ましくない不純物の沈
澱が起こり、そうした上で、残りの因子VIIIを含有して
いる残留物を滅菌し、凍結乾燥する。しかし、この方法
によって得られる因子VIII生成物は、因子VIII単位数/m
gタンパク質で表すとわずかな比活性を示すにすぎな
い。さらに、因子VIII単位数あたりの免疫グロブリンＧ
（IgG）の割合が高く、望ましいものではない。
冷凍沈澱物を浸軟し、この浸軟物をクエン酸塩−グルコ
ース緩衝溶液中に懸濁し、遠心し、そしてこうして得ら
れた緩衝液抽出物をpH6.0〜6.8に調節する方法が記載さ
れている。これらの条件下で、望ましくない不純物の沈
澱が起こり、そうした上で、残りの因子VIIIを含有して
いる残留物を滅菌し、凍結乾燥する。しかし、この方法
によって得られる因子VIII生成物は、因子VIII単位数/m
gタンパク質で表すとわずかな比活性を示すにすぎな
い。さらに、因子VIII単位数あたりの免疫グロブリンＧ
（IgG）の割合が高く、望ましいものではない。
同様の方法が、英国特許No.1,551,928、ならびに米国特
許No.4,170,639およびNo.4,104,266に記載されている。
ここでも同様に、血漿から始めて凍結沈澱物を回収し、
これを中性のpH範囲の緩衝液に溶解して望ましくないタ
ンパク質を分離し、上清を水酸化アルミニウムで処理し
てプロトロンビン複合体を分離し、次いで因子VIII含有
溶液を濃縮し、凍結乾燥している。この方法を用いたと
きでも、因子VIII単位数/mgタンパク質で表される比活
性は低く、望ましいものではない。すなわち、米国特許
No.4,104,266に従って処理したときの比活性は、これに
記載されているように、0.5〜0.6単位/mgタンパク質を
越えることはない。
許No.4,170,639およびNo.4,104,266に記載されている。
ここでも同様に、血漿から始めて凍結沈澱物を回収し、
これを中性のpH範囲の緩衝液に溶解して望ましくないタ
ンパク質を分離し、上清を水酸化アルミニウムで処理し
てプロトロンビン複合体を分離し、次いで因子VIII含有
溶液を濃縮し、凍結乾燥している。この方法を用いたと
きでも、因子VIII単位数/mgタンパク質で表される比活
性は低く、望ましいものではない。すなわち、米国特許
No.4,104,266に従って処理したときの比活性は、これに
記載されているように、0.5〜0.6単位/mgタンパク質を
越えることはない。
PCT公開WO82/04395により、因子VIII複合体を精製し、
濃縮する方法が知られているが、ここでは、調製物をグ
リシン溶液で処理し、その上清を塩溶液で沈澱させてい
る。
濃縮する方法が知られているが、ここでは、調製物をグ
リシン溶液で処理し、その上清を塩溶液で沈澱させてい
る。
本出願人の米国特許No.4,522,751には、向上した比活性
（少なくとも1.5単位の因子VIII/mgタンパク質）を有す
る因子VIII（AHF）含有調製物の製造方法が記載されて
いるが、ここでは、望ましくないタンパク質の沈澱を、
硫酸処理した多糖の存在下、中性の範囲で行ない、アル
コール沈澱によって上清から因子VIII濃縮物を回収して
いる。
（少なくとも1.5単位の因子VIII/mgタンパク質）を有す
る因子VIII（AHF）含有調製物の製造方法が記載されて
いるが、ここでは、望ましくないタンパク質の沈澱を、
硫酸処理した多糖の存在下、中性の範囲で行ない、アル
コール沈澱によって上清から因子VIII濃縮物を回収して
いる。
最近行なわれた試験［Vox Sang.,49:319−322（198
5）］により、因子VIII濃縮物中のIgG複合体が、血友病
患者におけるＴヘルパー/Tサプレッサー細胞比の変化な
らびにリンパ球異常などの望ましくない反応を誘導する
ことがわかった。
5）］により、因子VIII濃縮物中のIgG複合体が、血友病
患者におけるＴヘルパー/Tサプレッサー細胞比の変化な
らびにリンパ球異常などの望ましくない反応を誘導する
ことがわかった。
記載されている方法によると、望ましくない高含有量の
IgGは別にしても、因子VIII活性が実質的に減少するこ
となく熱処理による不活性化に耐えるには熱安定性が十
分でない生成物が得られることがわかった。現在、血漿
から調製し、患者に大量投与する、ウィルスまたは細菌
感染の危険性のない凝固因子調製物を保有する必要性が
存在しているが、用いられている不活性化法は、通常60
℃以上の温度で数時間処理することを含むものである。
この必要性は因子VIII調製物についても当てはまるが、
知られているように、この後者は他の凝固因子に比べ比
較的影響を受けやすく、不安定である。
IgGは別にしても、因子VIII活性が実質的に減少するこ
となく熱処理による不活性化に耐えるには熱安定性が十
分でない生成物が得られることがわかった。現在、血漿
から調製し、患者に大量投与する、ウィルスまたは細菌
感染の危険性のない凝固因子調製物を保有する必要性が
存在しているが、用いられている不活性化法は、通常60
℃以上の温度で数時間処理することを含むものである。
この必要性は因子VIII調製物についても当てはまるが、
知られているように、この後者は他の凝固因子に比べ比
較的影響を受けやすく、不安定である。
発明の目的および構成 本発明の目的は、上記の問題を解決し、そして比活性を
少なくとも因子VIII2.5単位まで高め、免疫グロブリン
Ｇの割合をできるだけ低くした、因子VIII（AHF）含有
分画を製造するための方法を提供することである。さら
に、得られた調製物は、望ましくない方法で因子VIIIの
活性を低下させることなく熱処理によって不活性化する
ことができるよう、熱的に安定なものであるべきであ
る。
少なくとも因子VIII2.5単位まで高め、免疫グロブリン
Ｇの割合をできるだけ低くした、因子VIII（AHF）含有
分画を製造するための方法を提供することである。さら
に、得られた調製物は、望ましくない方法で因子VIIIの
活性を低下させることなく熱処理によって不活性化する
ことができるよう、熱的に安定なものであるべきであ
る。
本発明によれば、この目的は以下の手段を組み合わせる
ことによって達成される： ａ）硫酸処理した多糖類の存在下、ほぼ中性の範囲にあ
るpHで、因子VIIIを含有する血漿分画の溶液から望まし
くないタンパク質を沈澱させ、分離すること； ｂ）このようにして精製した因子VIII含有溶液を、硫酸
アンモニウム、硫酸アンモニウム−グリシン、塩化ナト
リウム−グリシン、硫酸ナトリウム、硫酸ナトリウム−
クエン酸ナトリウム、硫酸アンモニウム−クエン酸ナト
リウム、クエン酸塩−グリシンから選ばれるタンパク質
沈澱剤で処理して、因子VIII含有沈澱物を沈澱させるこ
と； ｃ）この因子VIII含有沈澱物を溶解し、凍結乾燥するこ
と；および ｄ）おそらく存在しているであろうウィルスを不活性化
するに十分な時間および温度で、この凍結乾燥物を熱処
理すること。
ことによって達成される： ａ）硫酸処理した多糖類の存在下、ほぼ中性の範囲にあ
るpHで、因子VIIIを含有する血漿分画の溶液から望まし
くないタンパク質を沈澱させ、分離すること； ｂ）このようにして精製した因子VIII含有溶液を、硫酸
アンモニウム、硫酸アンモニウム−グリシン、塩化ナト
リウム−グリシン、硫酸ナトリウム、硫酸ナトリウム−
クエン酸ナトリウム、硫酸アンモニウム−クエン酸ナト
リウム、クエン酸塩−グリシンから選ばれるタンパク質
沈澱剤で処理して、因子VIII含有沈澱物を沈澱させるこ
と； ｃ）この因子VIII含有沈澱物を溶解し、凍結乾燥するこ
と；および ｄ）おそらく存在しているであろうウィルスを不活性化
するに十分な時間および温度で、この凍結乾燥物を熱処
理すること。
上に示した塩類あるいは塩−アミノ酸の組み合わせが、
タンパク質沈澱剤となること、および従来技術の欄に示
したように、凝固因子調製物の製造時に既に用いられて
いることは自体知られている。
タンパク質沈澱剤となること、および従来技術の欄に示
したように、凝固因子調製物の製造時に既に用いられて
いることは自体知られている。
それでもなお、できるだけIgG含量の低いところで高い
因子VIIIの比活性を示し、同時に十分熱的に安定な、こ
れまで知られていたものより優れた生成物を回収しうる
ことが本発明に係る組み合わせの利点である。
因子VIIIの比活性を示し、同時に十分熱的に安定な、こ
れまで知られていたものより優れた生成物を回収しうる
ことが本発明に係る組み合わせの利点である。
凍結乾燥物を、0.05（５重量％）以上かつ0.70（70重量
％）以下の水分量、好ましくは0.40（40重量％）以下の
水分量に調節し、密閉した容器中、50〜121℃の温度範
囲で、蒸気分圧上昇のもとで処理するのが好ましい。
％）以下の水分量、好ましくは0.40（40重量％）以下の
水分量に調節し、密閉した容器中、50〜121℃の温度範
囲で、蒸気分圧上昇のもとで処理するのが好ましい。
蒸気による凍結乾燥物の処理は、0.01〜２バールの圧力
で100時間以内行なうのが適当である。
で100時間以内行なうのが適当である。
繁殖性かつ濾過性病原体としては、特に肝炎ウィルスま
たはHIV（ヒト免疫欠損ウィルス）を考慮に入れる。
たはHIV（ヒト免疫欠損ウィルス）を考慮に入れる。
好ましい態様では、タンパク質沈澱剤による因子VIII含
有溶液の沈澱は、5.6〜6.8のpHおよび１〜40℃の温度で
行なう。
有溶液の沈澱は、5.6〜6.8のpHおよび１〜40℃の温度で
行なう。
本発明方法の有用な態様は、以下の手段を組み合わせる
ことを特徴とする： ａ）所望によりヘパリン、ヘパリノイド、ヘパリンと抗
トロンビンIIIの複合化合物［アテプレックス（Atheple
x）］および／またはアプロチニンを含有するクエン酸
緩衝液中、6.0〜6.4のpHおよび０〜25℃、好ましくは４
〜８℃の温度で、凍結沈澱物溶液から望ましくないタン
パク質を沈澱させ、分離すること； ｂ）この精製した因子VIII含有上清を、８〜35％の濃度
および5.6〜6.8のpHの、硫酸アンモニウム、硫酸アンモ
ニウム−グリシン、塩化ナトリウム−グリシン、硫酸ナ
トリウム、硫酸ナトリウム−クエン酸ナトリウム、硫酸
アンモニウム−クエン酸ナトリウム、クエン酸塩−グリ
シンを含有する溶液で処理して、因子VIII含有沈澱物を
沈澱させること； ｃ）この因子VIII含有沈澱物を、抗トロンビン−ヘパリ
ノイドまたは抗トロンビン−III−ヘパリノイド複合
体、ならびにアルブミンを含有する塩化ナトリウム−ク
エン酸ナトリウム緩衝液に溶解し、限外濾過するか、ま
たは透析し、凍結乾燥し、そして熱処理によって不活性
化すること。
ことを特徴とする： ａ）所望によりヘパリン、ヘパリノイド、ヘパリンと抗
トロンビンIIIの複合化合物［アテプレックス（Atheple
x）］および／またはアプロチニンを含有するクエン酸
緩衝液中、6.0〜6.4のpHおよび０〜25℃、好ましくは４
〜８℃の温度で、凍結沈澱物溶液から望ましくないタン
パク質を沈澱させ、分離すること； ｂ）この精製した因子VIII含有上清を、８〜35％の濃度
および5.6〜6.8のpHの、硫酸アンモニウム、硫酸アンモ
ニウム−グリシン、塩化ナトリウム−グリシン、硫酸ナ
トリウム、硫酸ナトリウム−クエン酸ナトリウム、硫酸
アンモニウム−クエン酸ナトリウム、クエン酸塩−グリ
シンを含有する溶液で処理して、因子VIII含有沈澱物を
沈澱させること； ｃ）この因子VIII含有沈澱物を、抗トロンビン−ヘパリ
ノイドまたは抗トロンビン−III−ヘパリノイド複合
体、ならびにアルブミンを含有する塩化ナトリウム−ク
エン酸ナトリウム緩衝液に溶解し、限外濾過するか、ま
たは透析し、凍結乾燥し、そして熱処理によって不活性
化すること。
以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明する。
実施例１ 急速冷凍および再解凍により、血漿16.5lから凍結沈澱
物150gを回収した。これを、硫酸処理した多糖「SP54〕
［ベネケミー（Benechemie）］90mg、アテプレックス９
単位ならびにアプロチニン27,000単位を含有するクエン
酸三ナトリウム緩衝液900mlに溶解した。溶液のpHを6.2
5に、温度を４℃に調節して、望ましくないタンパク質
を沈澱させ、遠心して分離した。この上清を、pH6.0〜
6.3および室温で攪拌しながら、120g/lグリシンおよび8
5g/l硫酸アンモニウムの沈澱濃度になるまで、グリシン
および硫酸アンモニウムと徐々に混合した。
物150gを回収した。これを、硫酸処理した多糖「SP54〕
［ベネケミー（Benechemie）］90mg、アテプレックス９
単位ならびにアプロチニン27,000単位を含有するクエン
酸三ナトリウム緩衝液900mlに溶解した。溶液のpHを6.2
5に、温度を４℃に調節して、望ましくないタンパク質
を沈澱させ、遠心して分離した。この上清を、pH6.0〜
6.3および室温で攪拌しながら、120g/lグリシンおよび8
5g/l硫酸アンモニウムの沈澱濃度になるまで、グリシン
および硫酸アンモニウムと徐々に混合した。
生成した沈澱を遠心して分離し、塩化ナトリウム−クエ
ン酸塩緩衝液に溶解し、同じ緩衝液に対して透析した。
この透析物を、10mg/mlグリシンおよび2mg/mlアルブミ
ンの濃度となるまでグリシンおよびアルブミンと混合
し、この溶液を凍結乾燥した。得られた粉体の凍結乾燥
物の一部を水蒸気で8w/w％の水分量に調節し、他の部分
を24〜26w/w％の水分量に調節した。
ン酸塩緩衝液に溶解し、同じ緩衝液に対して透析した。
この透析物を、10mg/mlグリシンおよび2mg/mlアルブミ
ンの濃度となるまでグリシンおよびアルブミンと混合
し、この溶液を凍結乾燥した。得られた粉体の凍結乾燥
物の一部を水蒸気で8w/w％の水分量に調節し、他の部分
を24〜26w/w％の水分量に調節した。
これらの湿らせた調製物を、密閉した容器中、窒素雰囲
気下、60または70℃で10〜100時間熱処理にかけて、存
在しているであろうウィルスを不活性比した。次いで、
因子VIIIの比活性を測定した。熱−不活性化を行なわず
に実施例１に従って得られた凍結乾燥物と比較して、結
果を次第１表に示す。
気下、60または70℃で10〜100時間熱処理にかけて、存
在しているであろうウィルスを不活性比した。次いで、
因子VIIIの比活性を測定した。熱−不活性化を行なわず
に実施例１に従って得られた凍結乾燥物と比較して、結
果を次第１表に示す。
実施例２ 本発明に従って得られた調製物が、熱安定性に関して、
既知の調製物（たとえば、米国特許No.4,522,751の調製
物）より優れていることを明らかにするため、グリシン
および硫酸アンモニウムによる沈澱の代わりに1.45モル
/lグリシンの存在下で８％エチルアルコールをpH6.0で
用いて、実施例１の初めの部分を繰り返した。沈澱を分
離し、塩化ナトリウム−グリシン−アルブミンのクエン
酸緩衝液に溶解し、凍結乾燥し、この凍結乾燥物を水蒸
気でそれぞれ8w/w％および24〜26w/w％の水分量に再調
節し、実施例１に記載のようにして窒素雰囲気下で加熱
した。結果を次第２表に示すが、これらの結果は、一方
で、IgG含量の上昇がかなり大きいことを示し（1.8mgに
対して30mg）、他方で、従来技術比較例の熱処理後の比
活性が明らかに低下することを示している（特に、長期
加熱後に）。
既知の調製物（たとえば、米国特許No.4,522,751の調製
物）より優れていることを明らかにするため、グリシン
および硫酸アンモニウムによる沈澱の代わりに1.45モル
/lグリシンの存在下で８％エチルアルコールをpH6.0で
用いて、実施例１の初めの部分を繰り返した。沈澱を分
離し、塩化ナトリウム−グリシン−アルブミンのクエン
酸緩衝液に溶解し、凍結乾燥し、この凍結乾燥物を水蒸
気でそれぞれ8w/w％および24〜26w/w％の水分量に再調
節し、実施例１に記載のようにして窒素雰囲気下で加熱
した。結果を次第２表に示すが、これらの結果は、一方
で、IgG含量の上昇がかなり大きいことを示し（1.8mgに
対して30mg）、他方で、従来技術比較例の熱処理後の比
活性が明らかに低下することを示している（特に、長期
加熱後に）。
実施例３ 実施例１の初めの部分を繰り返した;10％塩化ナトリウ
ムおよび12％硫酸アンモニウムの沈澱濃度となるまで、
水溶液中で塩化ナトリウムと硫酸アンモニウムを組み合
わせて用い、因子VIII濃縮物を沈澱させた。さらに、実
施例１のようにして、処理し、遠心し、溶解し、透析
し、凍結乾燥し、加湿した。結果を第３表に示す。
ムおよび12％硫酸アンモニウムの沈澱濃度となるまで、
水溶液中で塩化ナトリウムと硫酸アンモニウムを組み合
わせて用い、因子VIII濃縮物を沈澱させた。さらに、実
施例１のようにして、処理し、遠心し、溶解し、透析
し、凍結乾燥し、加湿した。結果を第３表に示す。
実施例４ 実施例１の初めの部分を繰り返した;5％クエン酸ナトリ
ウムおよび12.5％硫酸アンモニウムの沈澱濃度となるま
で、水溶液中でクエン酸ナトリウムと硫酸アンモニウム
を組み合わせて用い、因子VIII濃縮物を沈澱させた。さ
らに、実施例１のようにして、処理し、遠心し、溶解
し、透析し、凍結乾燥し、加湿した。結果を第４表に示
す。
ウムおよび12.5％硫酸アンモニウムの沈澱濃度となるま
で、水溶液中でクエン酸ナトリウムと硫酸アンモニウム
を組み合わせて用い、因子VIII濃縮物を沈澱させた。さ
らに、実施例１のようにして、処理し、遠心し、溶解
し、透析し、凍結乾燥し、加湿した。結果を第４表に示
す。
実施例５ 実施例１の初めの部分を繰り返した;13.2％硫酸アンモ
ニウムの沈澱濃度となるまで、硫酸アンモニウムの塩溶
液を用いて因子VIII濃縮物を沈澱させた。さらに、実施
例１のようにして、処理し、遠心し、溶解し、透析し、
凍結乾燥し、加湿した。結果を第５表に示す。
ニウムの沈澱濃度となるまで、硫酸アンモニウムの塩溶
液を用いて因子VIII濃縮物を沈澱させた。さらに、実施
例１のようにして、処理し、遠心し、溶解し、透析し、
凍結乾燥し、加湿した。結果を第５表に示す。
すべての場合において、得られた因子VIII濃縮物のIgG
量は10mgよりはるかに少なく、かつ熱処理した後の残留
活性は70％以上である。
量は10mgよりはるかに少なく、かつ熱処理した後の残留
活性は70％以上である。
Claims (9)
- 【請求項１】少なくともタンパク質1mgあたり因子VIII
（AHF）2.5単位の比活性、ならびに多くても因子VIII10
00単位あたり免疫グロブリンＧ（IgG）10mgの割合を有
し、治療または予防に用いたときのウィルスまたは細菌
感染の危険が避けられているか、またはそのほとんどが
減じられている因子VIII含有分画の製造方法であって、 ａ）因子VIIIを含有する血漿分画溶液を調製し、 ｂ）硫酸処理した多糖類の存在下、ほぼ中性の範囲にあ
るpHで、該溶液から望ましくないタンパク質を沈澱さ
せ、分離して、精製した因子VIII含有溶液を得、 ｃ）該精製した因子VIII含有溶液を、硫酸アンモニウ
ム、硫酸アンモニウム−グリシン、塩化ナトリウム−グ
リシン、硫酸ナトリウム、硫酸ナトリウム−クエン酸ナ
トリウム、硫酸アンモニウム−クエン酸ナトリウム、ク
エン酸塩−グリシンからなる群から選ばれるタンパク質
沈澱剤で処理して、因子VIII含有沈澱物を沈澱させ、 ｄ）該因子VIII含有沈澱物を溶解し、凍結乾燥して、凍
結乾燥物を得、そして ｅ）おそらく存在しているであろうウィルスを不活性化
するに十分な時間および温度で、該凍結乾燥物を熱処理
することからなる方法。 - 【請求項２】該凍結乾燥物を、0.05（５重量％）以上か
つ0.70（70重量％）以下の水分量に調節し、密閉した容
器中、50〜121℃の範囲の温度で、蒸気分圧上昇のもと
で処理する第（１）項記載の方法。 - 【請求項３】該水分量を0.40（40重量％）以下に調節す
る第（２）項記載の方法。 - 【請求項４】該凍結乾燥物を、0.01〜２バールの圧力で
100時間以内、蒸気処理する第（１）項記載の方法。 - 【請求項５】該ウィルスが、肝炎ウィルスおよびHIV
（ヒト免疫欠損ウィルス）からなる群から選ばれる繁殖
性かつ濾過性病原体である第（１）項記載の方法。 - 【請求項６】該タンパク質沈澱剤による該因子VIII含有
溶液の沈澱を、5.6〜6.8のpHおよび１〜40℃の温度で行
なう第（１）項記載の方法。 - 【請求項７】少なくともタンパク質1mgあたり因子VIII
（AHF）2.5単位の比活性、ならびに多くても因子VIII10
00単位あたり免疫グロブリンＧ（IgG）10mgの割合を有
し、治療または予防に用いたときのウィルスまたは細菌
感染の危険が避けられているか、またはそのほとんどが
減じられている因子VIII含有分画の製造方法であって、 ａ）クエン酸緩衝液中で、第１の因子VIII含有凍結沈澱
物溶液を調製し、 ｂ）硫酸処理した多糖類の存在下、6.0〜6.4のpHおよび
０〜25℃の温度で、該第１の溶液から望ましくないタン
パク質を沈澱させ、分離して、精製した因子VIII含有上
清を得、 ｃ）該精製した因子VIII含有上清を、硫酸アンモニウ
ム、硫酸アンモニウム−グリシン、塩化ナトリウム−グ
リシン、硫酸ナトリウム、硫酸ナトリウム−クエン酸ナ
トリウム、硫酸アンモニウム−クエン酸ナトリウム、ク
エン酸塩−グリシンからなる群から選ばれるタンパク質
沈澱剤を用い、８〜35％の濃度および5.6〜6.8のpHで処
理して、因子VIII含有沈澱物を沈澱させ、 ｄ）該因子VIII含有沈澱物を、抗トロンビン−ヘパリノ
イド複合体および抗トロンビン−III−ヘパリノイド複
合体のいずれかならびにアルブミンを含有する塩化ナト
リウム−クエン酸ナトリウム緩衝液に溶解して第２の溶
液を得、 ｅ）該第２の溶液を限外濾過するか、または透析し、凍
結乾燥して凍結乾燥物を得、そして ｆ）おそらく存在しているであろうウィルスを不活性化
するに十分な時間および温度で、該凍結乾燥物を熱処理
することからなる方法。 - 【請求項８】該クエン酸緩衝液が、ヘパリン、ヘパリノ
イド、ヘパリンと抗トロンビンIIIの複合化合物、およ
びアプロチニンからなる群の少なくとも１種を含有して
いる第（７）項記載の方法。 - 【請求項９】沈澱および分離を４〜８℃の温度で行なう
第（７）項記載の方法。
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