JPH07304667A

JPH07304667A - 静脈細胞接着分子−１産生阻害剤

Info

Publication number: JPH07304667A
Application number: JP9623794A
Authority: JP
Inventors: Daisuke Kamimura; 大輔上村; Kaoru Yamada; 薫山田; Heiritsu Ri; 炳律李; Osanori Numao; 長徳沼尾
Original assignee: Sagami Chemical Research Institute
Current assignee: Sagami Chemical Research Institute
Priority date: 1994-05-10
Filing date: 1994-05-10
Publication date: 1995-11-21

Abstract

(57)【要約】【目的】ヒト静脈内皮細胞による静脈細胞接着分子−
１（ＶＣＡＭ−１）の産生阻害剤を提供する。【構成】下記式（１）、【化１】で表されるＶＣＡＭ−１産生阻害剤、及び下記式
（２）、【化２】で表されるＶＣＡＭ−１産生阻害剤。【効果】上記化合物は細胞毒性を全く示さない範囲
で、ヒト静脈内皮細胞によるＶＣＡＭ−１の産生を強く
阻止する作用を持ち、本発明の阻害剤は癌転移抑制剤、
抗炎症剤の他、動脈硬化、移植拒絶反応、慢性関節リュ
ウマチ、サルコイドーシス等の治療薬としての利用が期
待される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、静脈細胞接着分子−１
（ＶＣＡＭ−１）の産生を阻害する作用を示す薬剤に関
するもので、癌転移抑制剤、抗炎症剤の他、動脈硬化、
移植拒絶反応、慢性関節リュウマチ、サルコイドーシス
等の治療薬として有用である。

【０００２】

【従来の技術】ＶＣＡＭ−１は、静脈細胞接着分子（Ｖ
ＣＡＭ）の１つで１９８９年に新たに見出された分子量
９万の糖蛋白である（Osborn, L., et al, Cell 59, 12
03, 1989）。ＶＣＡＭ−１は血管内皮細胞をＴＮＦ（腫
瘍壊死因子）やＩＬ−１（インターロイキン−１）等の
炎症性サイトカインで刺激することによって発現が誘導
され、血管内皮細胞とＶＣＡＭ−１のリガンドであるＶ
ＬＡ−４を発現する細胞（リンパ球、マクロファージ、
好酸球、好塩基球、メラノーマ等）との接着に関与す
る。

【０００３】炎症反応においてはＶＣＡＭ−１の他にＰ
−セレクチン、ＥＬＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１等の接着分
子が関与するが、この内ＶＣＡＭ−１とＩＣＡＭ−１を
介する接着は特に強固で、実際の疾患においてはこれら
の働きが重要な役割を果たしているとされる。動脈硬
化、同種移植片拒絶症、メラノーマ等の癌転移、及び種
々の急性、慢性炎症性疾患等、広い範囲の病変局所の血
管内皮細胞でＶＣＡＭ−１の発現亢進が報告されてい
る。従って、この静脈内皮細胞のＶＣＡＭ−１産生を抑
制する作用を持つ物質は、これらの疾患の治療薬として
有効であると考えられるが、現在までに、そのような物
質は報告されていない。

【０００４】一方医療の場では、炎症性疾患は直接生命
に関わるものではないものの、様々な原因による症状に
悩む患者は数多く、より有効で副作用の少ない治療薬が
常に求められている。また癌の転移は癌による死亡の主
因であるにも関わらず、その予防法、治療法は未だに殆
ど確立されていないのが現状である。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】そこで、本発明は、Ｖ
ＣＡＭ−１の産生を阻害する作用を持つ物質を有効成分
とするＶＣＡＭ−１産生阻害剤を提供することを目的と
する。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者等は、種々の化
合物について探索した結果、静脈内皮細胞によるＶＣＡ
Ｍ−１の産生を阻害する作用を示す物質を見出し、本発
明を完成した。

【０００７】すなわち本発明は、下記式（１）

【０００８】

【化３】

【０００９】で表されるジョルキノリドＢを有効成分と
する静脈細胞接着分子−１（ＶＣＡＭ−１）産生阻害
剤、及び下記式（２）

【００１０】

【化４】

【００１１】で表されるアラニノール誘導体を有効成分
とする静脈細胞接着分子−１（ＶＣＡＭ−１）産生阻害
剤を提供するものである。

【００１２】本発明に係る前記式（１）で表されるジョ
ルキノリドＢは、文献記載の方法により、イワタイゲキ
（Euphorbia jolkini Boiss.）から分離、精製すること
により得られる化合物である（D. Uemura and Y. Hirat
a, Tetrahedron Letters No.15, 1387, 1972.）。

【００１３】また、本発明に係る前記式（２）で表され
るアラニノール誘導体は、文献記載の方法により、狼毒
（Euphorbia fischeriana Steud.）から分離、精製する
ことにより得ることができる（D. Uemura et al., Che
m. Lett., 537, 1975.）。

【００１４】本発明に係る上記化合物を有効成分とする
ＶＣＡＭ−１産生阻害剤は、経口投与、非経口投与（皮
下、静脈、筋肉、胸骨注射等）または直腸投与などによ
り供することができる。上記化合物の投与量は、患者の
症状、年齢、投与方法等によっても異なるが、通常０．
０１から５００ｍｇ／ｋｇ／日程度である。投与にあた
っては、上記化合物をそのまま用いることもできるが、
通常は製剤化して用いる。製剤化にあたっては、慣用の
希釈剤、担体、増量剤、添加剤等の薬理学的、製剤学的
に認容される製剤用成分を用い、この分野で通常行われ
ている方法を適用することができる。更に公知の技術に
より持続性製剤とすることも可能である。製剤の形とし
ては錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、カプセル剤、シロッ
プ剤、エリキシル剤、注射剤、点眼剤、眼軟膏剤または
座薬等が用いられる。製剤に含まれる有効成分量は０．
０１から９９．９９％程度である。

【００１５】上記製剤用成分としては、内服用製剤（経
口剤）、注射用製剤（注射剤）、粘膜投与剤（バッカ
ル、トロ−チ、坐剤等）、外用剤（軟膏、貼付剤等）な
どの投与経路に応じた適当な成分が使用される。例え
ば、経口剤および粘膜投与剤にあっては、賦形剤（例：
澱粉、乳糖、結晶セルロース、乳糖カルシウム、メタケ
イ酸アルミン酸マグネシウム、無水ケイ酸）、崩壊剤
（例：カルボキシメチルセルロ−ス、カルボキシメチル
セルロースカルシウム）、滑沢剤（例：ステアリン酸マ
グネシム、タルク）、コ−テング剤（例：ヒドロキシエ
チルセルロ−ス）、矯味剤などの製剤用成分が、また注
射剤にあっては、水性注射剤を構成し得る溶解剤ないし
溶解補助剤（例：注射用蒸留水、生理食塩水、プロピレ
ングリコ−ル）、懸濁化剤（例：ポリソルベ−ト８０な
どの界面活性剤）、ｐＨ調整剤（例：有機酸またはその
金属塩）、安定剤などの製剤用成分が、さらに外用剤に
あっては、水性ないし油性の溶解剤ないし溶解補助剤
（例：アルコ−ル、脂肪酸エステル類）、粘着剤（例：
カルボキシビニルポリマ−、多糖類）、乳化剤（例：界
面活性剤）などの製剤用成分が使用される。

【００１６】上記の製剤は、公知の製造法、例えば日本
薬局方第１０版製剤総則記載の方法ないし適当な改良を
加えた方法によって製造することができる。

【００１７】

【実施例】以下、本発明を試験例により詳細に説明す
る。

【００１８】試験例１．ヒトＶＣＡＭ−１産生阻害
試験正常ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＣＳ−ＶＥ）を、ヒトリコ
ンビナント塩基性ＦＧＦ１０ｎｇ／ｍＬを添加した１０
％牛胎児血清含有ＣＨＬ−ＭＣＢＤ１３１培地に加え、
１×１０⁴ 個／ｍＬに調製してコラーゲンI処理した２
４穴プレートに０．５ｍＬづつ分注し、ＣＯ₂ 培養器
（ＣＯ₂ ５％、湿度１００％、３７℃）でコンフルエン
トに達するまで培養した。１０％牛胎児血清含有ＣＨＬ
−ＭＣＢＤ１３１培地に交換し、ヒトリコンビナントＴ
ＮＦ−αを５００Ｕ／ｍＬに調製してその３５μＬを加
えた。続いて前記化合物（１）及び（２）を所定の濃度
になるように添加し、ＣＯ₂ 培養器（ＣＯ₂ ５％、湿度
１００％、３７℃）で１８時間培養した。この上清中の
ＶＣＡＭ−１をヒトＶＣＡＭ−１ＥＬＩＳＡキットを
用いて定量した。測定したＶＣＡＭ−１量の対照群のそ
れに対する百分率から５０％産生阻害濃度（ＩＣ₅₀）を
求めた。結果を表１に示す。

【００１９】

【表１】

【００２０】試験例２．細胞毒性試験上記化合物について、以下の方法により細胞毒性試験を
行い、上記濃度において毒性が認められないことを確認
した。試験例１で試験に供する上清を採取した後の２４
穴プレートに、１．１ｍｇ／ｍＬのＭＴＴ水溶液を０．
１５ｍＬ分注しＭＴＴ法で生存細胞を計測した。測定値
の対照群に対する百分率から５０％増殖阻害濃度（ＩＣ
₅₀）を求めた。結果を表２に示す。

【００２１】

【表２】

【００２２】試験例３．ＴＮＦ−αレセプタ結合試験上記化合物について、以下の方法によりＴＮＦ−αレセ
プタ結合試験を行い、上記濃度においてＴＮＦの同レセ
プタへの結合を阻害しないことを確認した。１×１０⁷
個の培養ヒト前骨髄性白血病細胞（ＨＬ−６０）を所定
濃度の前記化合物（１）または（２）の１０％牛胎児血
清添加ＲＰＭＩ１６４０培地溶液１ｍＬに浮遊させて３
７℃で３０分間感作した。０．５％牛血清アルブミン添
加ＰＢＳ（バインディング溶液）で洗浄後、同溶液によ
り４×１０⁷ 個／ｍＬ細胞浮遊液を調製した。９６穴プ
レートの１ウェル当り、調製した細胞浮遊液を２５μ
Ｌ、２ｎＭに調製した ¹²⁵Ｉ−ＴＮＦを２５μＬ、及び
バインディング溶液を５０μＬ加え、氷中で９０分間反
応させた。反応液の７０μＬを１Ｍスクロース添加ＰＢ
Ｓ１ｍＬ入りのエッペンドルフチューブに重層し、１２
０００ｒｐｍ、４分間の遠心操作により反応を停止し
た。上清を除去後、細胞をバインディング溶液で洗浄
し、ガンマーカウンターで細胞の放射活性を測定した。
この値（全結合数）から非特異的結合数（上記反応液に
４００ｎＭの標識していないＴＮＦを混合添加して測定
した放射活性）を差し引いて、特異的結合数を求め、対
照群（１０％牛胎児血清添加ＲＰＭＩ１６４０培地で感
作）の特異的結合数に対する比を百分率で示した。結果
を表３に示す。

【００２３】

【表３】

【００２４】

【発明の効果】本発明の化合物は細胞毒性を全く示さな
い範囲で、ヒト静脈内皮細胞によるＶＣＡＭ−１の産生
を強く阻止する作用を持ち、癌転移抑制剤、抗炎症剤の
他、動脈硬化、移植拒絶反応、慢性関節リュウマチ、サ
ルコイドーシス等の治療薬としての利用が期待される。
なお、その作用機作は単なるＴＮＦ刺激阻害ではない。

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【手続補正書】

【提出日】平成７年４月５日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００２０

【補正方法】変更

【補正内容】

【００２０】試験例２．細胞毒性試験上記化合物について、以下の方法により細胞毒性試験を
行い、上記濃度において毒性が認められないことを確認
した。試験例１で試験に供する上清を採取した後の２４
穴プレートに、１．１ｍｇ／ｍＬのＭＴＴ水溶液を０．
１５ｍＬ分注しＭＴＴ法で生存細胞を計測した。測定値
の対照群に対する百分率から５０％阻害濃度（ＩＣ₅₀）
を求めた。結果を表２に示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所 // Ｃ０７Ｄ 493/14

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】下記式（１）【化１】で表されるジョルキノリドＢを有効成分とする静脈細胞
接着分子−１産生阻害剤。
【請求項２】下記式（２）【化２】で表されるアラニノール誘導体を有効成分とする静脈細
胞接着分子−１産生阻害剤。