JPH07309767A - 白血球保護方法 - Google Patents

白血球保護方法

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JPH07309767A
JPH07309767A JP6103920A JP10392094A JPH07309767A JP H07309767 A JPH07309767 A JP H07309767A JP 6103920 A JP6103920 A JP 6103920A JP 10392094 A JP10392094 A JP 10392094A JP H07309767 A JPH07309767 A JP H07309767A
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sample
acid
isotonic
anticoagulant
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JP6103920A
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Agthoven Andre Van
バン アグトーベン アンドレ
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IMMUNOTECH SA
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Abstract

(57)【要約】 【目的】 本発明は白血球を正確に分析するための方法
の提供を目的とする。 【構成】 本発明は白血球を保護するための方法であっ
て、抗凝血剤で事前処理した血液サンプルを、赤血球の
低緊張溶解の前に、白血球を固定するための試薬を含む
白血球の保護のための調製品を用いて処理することを特
徴とする方法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は特に赤血球の溶解過程に
おける白血球の保護のための方法及び調製品、保護血液
の調製、及び血液分析の方法に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】血液は
いくつかの細胞集団を含む。最も多いのは赤血球及び血
小板であり、これは二酸化炭素と酸素の交換及び輸送を
担う。血小板は凝血に一役担っている。白血球は免疫系
のコントロールに関与する少数派の集団である。
【０００３】顕微鏡分析又はフローサイトメトリー分析
により、白血球の３つのサブ集団が認識されている：複
数の核を有する多核細胞及び１個のみの核を有する単核
細胞。単核細胞のうちで、リンパ球は小型の球状核を有
することにより、そして単球は大きめの月型核を有する
ことにより区別されうる。
【０００４】これらの集団はサイトメトリーによりスキ
ャッターグラフにおいて区別されうる。白血球集団のう
ちで、約６０％が多核細胞であり、約３０％がリンパ球
であり、そして１０％が単球である。
【０００５】リンパ球のパーセンテージにおける変動は
個体の健康状態の指標を供しうる。
【０００６】蛍光マーカーにコンジュゲートせしめたモ
ノクローナル抗体による血液細胞の染色により、及び顕
微鏡又はフローサイトメトリーによる細胞の分析を経
て、血液細胞及びサブ集団は単なる光学的手段よりもよ
り正確に、且つより詳細に区別することができる。
【０００７】例えば、マーカーＣＤ１９を利用すること
により、骨髄に由来するリンパ球集団におけるＢ−細胞
を同定することができる。同じ集団において、ＣＤ３マ
ーカーにより、胸腺に由来するＴ細胞を区別することが
できる。ＣＤ４及びＣＤ８マーカーにより、ヘルパー機
能又はサプレッサー／キラー機能を有するＴ細胞それぞ
れを区別することができる。
【０００８】リンパ球のサブクラスの同定は免疫系の診
断及びその疾患の処置にとって重要である。
【０００９】赤血球は血液中の多数派の集団であるた
め、それらは白血球をマスクしてしまうことがあり、従
ってフローサイトメトリーによるその分析を困難なもの
としてしまうことがある。慣用の免疫蛍光技術にはリン
パ球と赤血球の物理学的分離、例えば勾配密度遠心(Boy
em, A.1968, Scand.J.Clin.Lab.Invest., 21 suppl.97)
が挙げられる。
【００１０】より迅速な他の方法は、全血における赤血
球溶解である。例えば、Hansenの方法においては（米国
出願第４，２８４，４１２号、欧州出願０，０２２，６
７０号）、抗凝血剤で処理した血液サンプルを蛍光抗体
コンジュゲート調製品と混合している。赤血球のインキ
ュベーション及び溶解の後、サンプルをフローサイトメ
ーターに通して、一定の抗体について陽性である白血球
集団を分析する。
【００１１】適正なサイトメトリー分析を行うのに、全
ての赤血球を溶解することが必要なだけでなく、サイト
メーターが多核細胞、単球、リンパ球、及び細胞塊と血
小板との混合物を区別することができるように白血球が
全て形態学的な状態で保存されていることが必要でもあ
る。赤血球を溶解するのに多大なる様々な方法がある；
これらの方法は例えば酸処理、アルカリ処理、塩化アン
モニウム、多価アルコール、又は低緊張ショックの利用
を基礎とする処理を基礎としうる。これらの方法にかか
わる問題は、赤血球を溶解することにより、白血球の形
態学レベルに変化が導入されることにある。
【００１２】慣用の方法において、白血球分解は、例え
ば溶解直後に分析を行うことにより、又は細胞を洗うこ
とにより、又はホルムアルデヒドもしくはパラホルムア
ルデヒドの如きの固定剤の添加により防がれている。
【００１３】Chang(C.Chang 、米国出願第４，９０２，
６１３号、欧州出願第０，１６１，７７０号）の方法に
おいては、この溶解は多価アルコールの存在下における
低緊張処理に基づいている。この溶解の最中、白血球は
ホルムアルデヒドにより、及び弱酸の塩により安定化さ
れている。この方法の不都合さは、細胞を同時に溶解及
び固定している間に、赤血球塊と血小板との有意義なサ
イズの複合体が形成され、そしてスキャッターグラフに
おいてリンパ球集団を妨害することにある。更に、多価
アルコールの存在はスキャッターグラフにおける単球の
移動の原因となり、換言すればリンパ球集団を妨害しう
る。溶解後の洗浄は、赤血球塊及び血小板の除去によ
り、並びに単球の再生により、スキャッターグラフの結
果をよくする。洗浄工程の欠点は、時間がかかること及
び白血球が失われることの軽視できない事実にある。上
記の方法により、正常サンプル中の２０％〜４０％の白
血球の損失が予測されうる。この損失は、既に部分的に
変性している細胞に及ぼされる遠心力、及びチューブ壁
との一定の細胞サブ集団の相互作用により説明されう
る。これは不正確な細胞計測をもたらしうる。この欠点
は、後天性免疫不全症（ＡＩＤＳ）の如きの疾患により
影響されている対象者に由来する白血球を考慮したと
き、更に大きな比率を占めうる。
【００１４】サンプルの洗浄及び白血球の計測における
不正確さを回避するような、白血球の分析のための手順
を見い出すことが所望されているであろう。
【００１５】
【課題を解決するための手段】本願の目的は、赤血球の
変性作業から白血球を実質的に保護し、且つ血小板を不
活性化せしめて、溶解、特に単純な低緊張ショックによ
る溶解の際の赤血球塊との重大なるかなり大きな凝集体
の形成を防ぐための方法及び調製品にある。本発明にか
かわる保護の方法は、フローサイトメトリーにより得ら
れるスキャッターグラフにおける白血球サブ集団の良好
な分離を保証するのに十分に有効である。コンジュゲー
ト化抗体で細胞を事前ラベルすることにより得られるサ
ブ集団の蛍光特性はこの手順の際に保存される。
【００１６】本願の目的は白血球を保護する方法であっ
て、抗凝血剤により事前処理せしめてある血液サンプル
の：脂肪族アルデヒド；アルカリ金属又はアルカリ土類
金属と弱酸との塩；所望するならば、等張性を保証する
ための試薬；を含む実質的に等張性又は高張性である調
製品を利用する処理を特徴とする方法、そしてより一般
的には白血球を保護する方法であって、抗凝血剤により
事前に処理せしめてある血液サンプルを、赤血球の低緊
張溶解の前に白血球固定剤を含む白血球を保護する調製
品で処理することを特徴とする方法にある。
【００１７】上記の調製品を以降、「等張性調製品」と
呼ぶ。
【００１８】十分な量における脂肪族アルデヒドは血液
の細胞成分の固定をもたらす。この固定は細胞壁中のタ
ンパク質のアミノ末端基の架橋により得られる。細胞表
層膜において高タンパク質密度を有する細胞、例えば白
血球及び血小板は、弱く架橋している赤血球に比して、
最も高い度合いの架橋を受ける。この処理は高い膜タン
パク質密度を有する細胞を、その後の低緊張性溶解手順
に対して比較的耐性にする。
【００１９】「脂肪族アルデヒド」とは、好ましくは１
〜４個の炭素原子を有するアルデヒド、例えばアセトア
ルデヒド、ブチルアルデヒド及びグリオキサール、そし
て特にホルムアルデヒド及びパラホルムアルデヒドを意
味する。
【００２０】血液と等張性調製品との混合物における脂
肪族アルデヒドの濃度は好ましくは０．０３６Ｍ〜１．
８Ｍ、そして好ましくは０．３６Ｍ〜１．８Ｍ、そして
特に０．３６Ｍ〜０．７２Ｍである。０．３６Ｍ（０．
１％ｗ／ｖ）未満では、白血球保護は不十分である。
１．８Ｍより高いと、一定の赤血球は溶解しないであろ
う。
【００２１】本願においては、脂肪族アルデヒド、特に
ホルムアルデヒドについての有用性は、Merck Company
より市販されている、１０％（ｗ／ｖ）のメタノールで
安定化されている３７％（ｗ／ｖ）（０．８４Ｍ）にお
ける製品に関して示唆されている。
【００２２】白血球を固定するその他の試薬は、例えば
二価試薬、例えばカルボジイミド、コハク酸アルデヒド
又はＭｉｒｓｋｙの試薬である。
【００２３】固定手順の際に細胞形態を保存せしめる、
及び赤血球塊のサイズを抑制するため、本発明にかかわ
る等張性調製品はアルカリ金属又はアルカリ土類金属
と、弱酸、例えばフマル酸、マロン酸、コハク酸、クエ
ン酸、ピルビン酸、乳酸、リン酸、ポリリン酸、炭酸、
そして好ましくはギ酸及び酒石酸、そして特にアルカリ
土類金属と可溶性な塩を形成せしめるような上記の酸、
との塩も含む。
【００２４】アルカリ金属又はアルカリ土類金属は例え
ばリチウム、ナトリウム、カリウム又はマグネシウムで
あり、そして好適には最後のものである。
【００２５】弱酸の濃度は血液と等張性調製品との混合
物において１mM〜１Ｍでありうる。１mM程度の弱い濃度
では、弱酸はスキャッターグラフにおける細胞集団の分
解能を改善する。１mM以上の濃度の弱酸はその後の低緊
張性溶解を妨げうる。その濃度は好ましくは５mM〜１０
０mM、そして特に１０〜５０mMである。
【００２６】等張性試薬、製品又は調製品とは、調製品
の最終濃度が生理学的な値に近くなるような量で加える
べきものを意味している。特に、等張性試薬はその後の
低緊張溶解を妨げず、且つ白血球を溶解すべきでない。
例えば、特に単糖又は二糖、例えばグルコース、特にサ
ッカロースを挙げることができる。
【００２７】等張性試薬の濃度は、該混合物の等張値が
等張又は高張、好ましくはやや高張な値に調整されて、
固定の際に細胞を保護するような濃度であるべきであ
る。
【００２８】調製品における酸濃度の調整は従来技術で
ある。
【００２９】溶解手順の前の、サンプルと調製品との接
触時間は例えば少なくとも１分、好ましくは少なくとも
５分、そして最も好ましくは少なくとも１０分とする。
【００３０】あらゆるケースにおいて、本発明にかかわ
る調製品から授かる安定性の観点において、その処理後
３０分までに溶解手順を行ってよい。
【００３１】上記の方法の好適な実施条件のもとで、該
等張性調製品は前述の塩以外の二価陽イオン、特に上記
の塩がマグネシウム塩ならばマンガン又はカルシウムの
塩も少量を含む。これらはアルカリ金属又はアルカリ土
類金属と弱酸との塩のモル濃度の好ましくは約５〜１５
％、そして最も好ましくは約８％を占める。特に、血液
と等張性調製品との混合物中のカルシウムの最終濃度は
０．５〜２．３mM、そして好ましくは１．１〜１．６mM
である。
【００３２】弱い濃度の観点において、この第二塩は弱
酸、又は塩酸もしくは硫酸の如きの強酸の塩であってよ
い。
【００３３】本発明の目的は白血球の保護のための調製
品でもあり、これは：脂肪族アルデヒド；アルカリ金属
又はアルカリ土類金属の塩；必要ならば、実質的に等張
性又は高張性にするための等張剤；を含む事実を特徴と
する。
【００３４】好適な調製品は上記の比率及び量において
規定されているものである。特に好ましいのは、ホルム
アルデヒドにおいて約１．２２Ｍ、酢酸マグネシウムに
おいて約３７mM、塩化カルシウムにおいて約３mM、そし
て約７．０のpHの水性溶液である調製品である。この調
製品は等張性を達しめるのに十分な量の試薬を含む。例
えばそのサッカロース濃度は約４０mMである。上記の等
張性調製品の容量は０．１mlである。
【００３５】本願の目的は保護化血液の調製品でもあ
り、これは抗凝血剤で処理した血液サンプルと上記の等
張性調製品との混合物を含み、そして少なくとも０．０
３６Ｍの脂肪族アルデヒドを含むことを特徴とする。
【００３６】本発明にかかわる保護方法を利用する血液
サンプル中の白血球を計測するための方法は、特に下記
の方法であり、その手順の後に低緊張ショックにより溶
解が行われうる。
【００３７】抗凝血剤で処理した０．１mlの血液サンプ
ルを、好ましくは２０μｌの容量における１又は２種の
蛍光コンジュケート抗体の調製品と混合する。インキュ
ベーション後、その混合物に等張性調製品を加える。こ
の等張性調製品は特に、１．２２Ｍのホルムアルデヒ
ド、３７mMの酢酸マグネシウム、３mMの塩化カルシウ
ム、４０mMのサッカロースの水性溶液であり、そして約
７．０のpHを有する。上述の等張性調製品の容量は０．
１mlとする。
【００３８】混合後、その混合物を強く振騰し、そして
室温で１０分間放置する。その後、低緊張赤血球溶解を
１mlの蒸留水の添加により行う。溶解は全部で１０分か
かると考えられ、その時点でサンプルはサイトメトリー
分析の用意がされている。
【００３９】全手順は好ましくは室温で行う（１８〜２
４℃）。
【００４０】サイトメトリー分析の前に、サンプルを室
温で６時間又は４℃で４８時間保存してよい。
【００４１】全血の低緊張溶解の方法は本出願人の実験
に従っており、その制約は使用したフローサイトメトリ
ー装置にかかわる。
【００４２】Becton Dickinson and Co.のサイトメータ
ー、例えばＦａｃｓｃａｎ（商標）又はＦａｃｓｔａｒ
（商標）がこのタイプの溶解によく適した。異なる光学
系に基づく他のタイプのサイトメーターは、それらが等
張性条件下での溶解に適応されているという欠点を示し
うる。
【００４３】従って、本願の目的は血液サンプルの白血
球集団を分析する方法であって、血液サンプルを抗凝血
剤で、次いで少なくとも一白血球集団又はサブ集団に特
異的な抗体で、続いて白血球のための固定剤で処理し、
その後低緊張的に溶解せしめ、次いでそのサンプルをフ
ローサイトリーで分析する方法にあり、ここでこの方法
は抗凝血剤及び所望するならば少なくとも一種のラベル
化抗体による処理の後、このサンプルを、脂肪族アルデ
ヒドである固定剤、アルカリ金属又はアルカリ土類金属
と弱酸との塩、及び必要ならば、等張性にするための試
薬、を含む実質的に等張性又は高張性の調製品で処理
し、次いで等張性又は高張性であるこの調製品によるサ
ンプル処理の少なくとも１分後に、前記サンプルの低緊
張溶解を行うことを特徴とする。
【００４４】上記の方法は特に上記で説明した好適な条
件のもとで実施できる。
【００４５】下記の実施例は本発明を限定することなく
例証する。
【００４６】
【実施例】例１：等張性調製品 本発明に従って等張性調製品を調製し、そして下記の組
成を有する： ホルムアルデヒド* ０．２０６Ｍ 酢酸マグネシウム ０．０３７Ｍ 塩化カリウム ０．０３Ｍ サッカロース ０．０４Ｍ 蒸留水 pH７．０ ＊ ホルムアルデヒドは３７％（ｗ／ｖ）の溶液であ
り、そして１０％（ｗ／ｖ）のメタノールで安定化され
ている。
【００４７】例２：等張性調製品 本発明に従って水性等張性調製品を調製し、そして下記
の組成を有する： ホルムアルデヒド* ０．１Ｍ 酒石酸カリウム、ナトリウム ０．０６Ｍ グルコース ０．１Ｍ 蒸留水 pH７．０ ＊ ホルムアルデヒドは３７％（ｗ／ｖ）の溶液であ
り、そして１０％（ｗ／ｖ）のメタノールで安定化され
ている。
【００４８】例３：等張性調製品 本発明に従って水性等張性調製品を調製し、そして下記
の組成を有する： ホルムアルデヒド* ０．１８５Ｍ ポリリン酸ナトリウム １％（ｗ／ｖ） サッカロース ２０mM 炭酸ナトリウム １０mM 蒸留水 pH７．０ ＊ ホルムアルデヒドは３７％（ｗ／ｖ）の溶液であ
り、そして１０％（ｗ／ｖ）のメタノールで安定化され
ている。
【００４９】例４：血液サンプルの分析 抗凝血剤で処理した０．１mlの血液サンプルを６本のチ
ューブに分注した。
【００５０】チューブ１には、２０mlのＰＢＳを加え
た。
【００５１】チューブ２には、２種類のモノクローナル
抗体（無関係な特異性を有し、一方はイソシアネート
（ＦＩＴＣ）にコンジュゲートされておりＣａｔ．Ｎ
ｏ．０６３９（１０μｌ）、他方はフィコエリトリンに
コンジュゲートされているｃａｔ＃０６７０（２μ
ｌ））及びＰＢＳ（８μｌ）の混合物を加えた。
【００５２】チューブ３には、ＦＩＴＣにコンジュゲー
トされているＣＤ４５に特異的なｃａｔ＃０７８２（２
μｌ）及びフィコエリトリン（２．５μｌ）にコンジュ
ゲートされているＣＤ１４に特異的なｃａｔ＃０６５０
（２．５μｌ）モノクローナル抗体、並びにＰＢＳ（１
５．５μｌ）の混合物２０μｌを加えた。
【００５３】チューブ４には、ＦＩＴＣにコンジュゲー
トされているＣＤ３に特異的なｃａｔ＃１２８１（２μ
ｌ）及びＰＥにコンジュゲートされているＣＤ４に特異
的なｃａｔ＃０４４９（１０μｌ）モノクローナル抗
体、並びにＰＢＳ（８μｌ）の混合物２０μｌを加え
た。
【００５４】チューブ５には、ＣＤ３−ＦＩＴＣ ｃａ
ｔ＃１２８１（２μｌ）及びＣＤ８−ＰＥ抗体ｃａｔ＃
０４５２（３．３μｌ）並びにＰＢＳ（１４．７μｌ）
の混合物２０μｌを加えた。
【００５５】チューブ６には、ＣＤ３−ＦＩＴＣ ｃａ
ｔ＃１２８１（２μｌ）、ＣＤ１９−ＰＥ抗体＃１２８
５（１０μｌ）の抗体及びＰＢＳ（８μｌ）の混合物２
０μｌを加えた。
【００５６】上記の抗体はImmunotech SA により、「Ｉ
ＯＴＥＳＴ」として市販されている。比較用抗体は他の
会社より市販されている。
【００５７】抗体との２０分のインキュベーション後、
例１の調製品０．１mlを加え、そしてそのチューブを直
ちにボルテックスに付した。１０分の反応後、容量１ml
の蒸留水をチューブに加え、そしてそのチューブを直ち
にボルテックスに付した。
【００５８】室温で２時間後、それらのサンプルをBect
on Dickinson and Co.によるフローサイトメトリーによ
り分析した。スキャッター分析において、塊及び血小板
の計測を防ぐために域値を用いた。リンパ球、単球及び
顆粒球の集団を中心に領域ができた。ＦＩＴＣコンジュ
ゲートを検出する蛍光１分析、ＰＥ−コンジュゲートを
検出する蛍光２分析はその領域にあるリンパ球細胞につ
いて行った。ＣＤ４５に関する蛍光において陽性な細胞
は白血球を表わし、白血球と、血小板を有する塊との区
別を可能とする。ＣＤ１４について陽性な細胞は単球で
あり、単球とリンパ球との区別を可能とする；ＣＤ３及
びＣＤ４について陽性な細胞はヘルパーＴ細胞である。
ＣＤ３及びＣＤ４について陽性な細胞は細胞障害性サプ
レッサーＴ−細胞である；ＣＤ−１９について陽性な細
胞はＢ−細胞である。
【００５９】その結果を図２〜９に示している。
【００６０】リンパ球領域において、結果の９７％がリ
ンパ球、６８％がＴ−細胞、１７％がＢ−細胞、そして
１５％がＴでもＢ−細胞でもないものを示した。
【００６１】Ｔ−細胞集団においては、５３％がヘルパ
ー細胞であり、そして１６％が細胞障害性／サプレッサ
ー細胞であった。
【００６２】単球領域においては、結果の９６％が単球
を示した。
【００６３】所 見 図１の分析より、白血球集団及び塊はスキャッターグラ
フにおいてはっきりと区別されることが考察されうる。
このスキャッターグラフはBecton Dickinson and Co.に
より市販されているＦａｓｃａｎフローサイトメトリー
を用いて得られた。左から右、及び下から上に向い、そ
れぞれの集団、即ち、血小板と赤血球との塊、リンパ
球、単球及び顆粒球の良好な分離が認められる。リンパ
球を調べるため、塊及び血小板を排除する域値を導入し
てよく、そしてリンパ球は図１に示す領域において規定
されうる。
【００６４】図２〜９は、本発明にかかわる方法が、ラ
ベル化細胞の蛍光特性を保持し、そして全血を用いて良
好な細胞区別が得られることを示す。
【００６５】Becton Dickinson and Co.のＦａｃｓｌｙ
ｓｅ法との平行比較は本発明を用いることにより、実質
的に同じ値が得られることを示した。
【図面の簡単な説明】
【図１】例２の調製品を用い、次いで低緊張溶解にサン
プルを付した血液サンプルのスキャッター分析の結果。
【図２】リンパ球（Ｒ1 ）、単球（Ｒ2 ）及び顆粒球
（Ｒ3 ）の領域を有するサイトグラフ。
【図３】蛍光マーカー非存在下での全血（領域Ｒ1 ）の
サイトグラフ。
【図４】アイソトープコントロールマーカーの存在下で
のインキュベーション後の全血（領域Ｒ1 ）のサイトグ
ラフ。
【図５】ＣＤ４５−ＦＩＴＣ及びＣＤ１４−ＰＥの存在
下での全血（領域Ｒ1 ）のサイトグラフ。
【図６】ＣＤ４５−ＦＩＴＣ及びＣＤ１４−ＰＥの存在
下でインキュベーションした、全血（領域Ｒ2 ）のサイ
トグラフ。
【図７】ＣＤ３−ＦＩＴＣ及びＣＤ４−ＰＥの存在下で
インキュベートした、全血（領域Ｒ1 ）のサイトグラ
フ。
【図８】ＣＤ３−ＦＩＴＣ及びＣＤ８−ＰＥの存在下で
インキュベートした、全血（領域Ｒ1 ）のサイトグラ
フ。
【図９】ＣＤ３−ＦＩＴＣ及びＣＤ１９−ＰＥの存在下
でインキュベートした、全血（領域Ｒ1 ）のサイトグラ
フ。

Claims (10)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 白血球を保護するための方法であって、
    抗凝血剤で事前処理した血液サンプルを、赤血球の低緊
    張溶解の前に、白血球を固定するための試薬を含む白血
    球の保護のための調製品を用いて処理することを特徴と
    する方法。
  2. 【請求項２】 白血球を保護するための方法であって、
    抗凝血剤で事前処理した血液サンプルを、 脂肪族アルデヒド；アルカリ金属又はアルカリ土類金属
    の塩；任意的に、赤血球の低緊張溶解の前に等張性に調
    整するための試薬；を含む実質的に等張性又は高張性で
    ある調製品を用いて処理することを特徴とする方法。
  3. 【請求項３】 サンプルを、前記の保護のための調製品
    を利用する処理の前に、リンパ球のサブ集団に特異的な
    少なくとも一種の抗体で処理することを特徴とする、請
    求項１又は２に記載の方法。
  4. 【請求項４】 前記溶解を、サンプルと前記の保護のた
    めの調製品とを混合して少なくとも１分後に行う、請求
    項１〜３のいづれか１項に記載の方法。
  5. 【請求項５】 抗凝血剤で処理した血液サンプル中の白
    血球を保護するための調製品であって：脂肪族アルデヒ
    ド；アルカリ金属又はアルカリ土類金属と弱酸との塩；
    任意的に、等張性にするための試薬；を含む、実質的に
    等張性又は高張性であることを特徴とする調製品。
  6. 【請求項６】 前記脂肪族アルデヒドがホルムアルデヒ
    ド又はパラホルムアルデヒドであることを特徴とする、
    請求項５に記載の調製品。
  7. 【請求項７】 前記アルカリ金属又はアルカリ土類金属
    と弱酸との塩が、酢酸、酒石酸、ギ酸、クエン酸、炭
    酸、リン酸又はポリリン酸のナトリウム、カリウム又は
    マグネシウムの塩であることを特徴とする、請求項５又
    は６に記載の調製品。
  8. 【請求項８】 マンガン又はカルシウムの塩である第二
    塩を更に含むことを特徴とする、請求項５〜７に記載の
    調製品。
  9. 【請求項９】 抗凝血剤で処理した血液サンプルと、少
    なくとも０．０３６Ｍの脂肪族アルデヒドを含む請求項
    ５〜８のいづれか１項に記載の調製品との混合物を含む
    ことを特徴とする、保護血液の調製品。
  10. 【請求項１０】 血液サンプルの白血球集団を分析する
    方法であって、血液サンプルを抗凝血剤で、それに続い
    て所望するならば白血球の少なくとも集団又はサブ集団
    に特異的な抗体で、それに続いて白血球を固定する試薬
    の利用により処理し、そしてその後にサンプルのサイト
    メトリー分析を行い、ここで抗凝血剤による処理及び所
    望するなら少なくとも一種のラベル化抗体による処理の
    後、サンプルを：脂肪族アルデヒドである固定剤；アル
    カリ金属又はアルカリ土類金属と弱酸との塩；任意的に
    等張性にする試薬；を含む実質的に等張性又は高張性で
    ある調製品で処理、次いで実質的に等張性又は高張性で
    ある調製品を用いるサンプル処理の少なくとも１分後
    に、前記サンプルの低緊張溶解を行うことを特徴とす
    る、方法。
JP6103920A 1993-05-19 1994-05-18 白血球保護方法 Pending JPH07309767A (ja)

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