JPH0731190B2

JPH0731190B2 - 肝網内系機能診断剤

Info

Publication number: JPH0731190B2
Application number: JP5332386A
Authority: JP
Inventors: 博之平澤; 道雄福原; 一広清水; 修一田中
Original assignee: Fuso Pharmaceutical Industries Ltd
Current assignee: Fuso Pharmaceutical Industries Ltd
Priority date: 1986-03-10
Filing date: 1986-03-10
Publication date: 1995-04-10
Anticipated expiration: 2010-04-10
Also published as: JPS62209026A

Description

【発明の詳細な説明】〈産業上の利用分野〉本発明は、肝の網内系（reticuloendo thelial system;
以下、RESと略す）の細菌をはじめ内因性、外因性の毒
素及び微小血栓などの微細異物を貧食する機能即ち肝RE
S機能の検査に用いる診断剤に関するものである。

〈従来の技術〉 RES機能を検査する方法としては、従来から、生体に対
し、網内系において処理されることが判明している異物
を静脈内注射し、異物の流血中からの消失を経時的に測
定し、網内系への異物摂取状態を観察する方法が一般的
に用いられている。この異物即ち診断剤としては、脂肪
乳剤、墨汁、含糖酸化鉄、放射ラベルした金コロイド、
コンゴーレッド（Congo Red:C₃₂H₂₂N₆Na₂O₆S₂）等多数
ある。

〈発明が解決しようとする問題点〉しかし、微粒子を静脈内注射する場合には、粒子の大き
さが問題となる。例えば、粒子が大きい場合には、肺等
でも除去され、正しい肝RES機能の検査を行なえず、
又、一定の粒子径を持つ製剤を同一に生産することは、
非常に困難である。

又、放射ラベルを行なった物質を用いる場合には、施
設、測定機器及び安全性等の問題が生じる。

一方、コンゴーレッドは、アゾ色素系の水溶性染色剤で
あり、従来から臨床の場でRES機能検査用として用いら
れてきたが、その投与量、採血時間及び測定方法がまち
まちであり、正確なRES機能の指標とはなっておらず、
又、コンゴーレッドは、溶解度が低い（約10％）ため
に、臨床検査薬として投与する場合、約１〜３％のもの
が使用されているが、投与液量の多いことが精神的苦痛
となるであろうし、経時的変化により結晶が析出し易
く、長期の保存には耐えられない等安定性に関して問題
があり、用時調製を必要としている。（1977年７月30日
中山書店発行，新内科学大系第23巻〈肝疾患IV〉
（ｃ）、第94ページ，同第47巻Ｂ〈代謝異常IIIb〉
（ｃ）第20ページ）本発明は、上記問題点に鑑みてなされたものであり、診
断剤としてきわめて安定化し、安全に正確なRES機能検
査を行なうことができる診断剤を提供することを目的と
する。

〈問題点を解決するための手段〉上記の目的を達成するため、本発明者らは、コンゴーレ
ッド注射液に量を異にする尿素を添加して種々検討を行
ない、適当添加量の尿素によりコンゴーレッドに対する
溶解補助作用が認められ、経時的に安定した診断剤を得
た。

本発明は、３％コンゴーレッド注射液に尿素（Urea）を
2,5,10,20及び30％添加したものと、尿素無添加のもの
とを、室温、低温における経時的変化即ち安定性につい
て観察するとともに之らの安全性について検討し、所期
の目的を達成し得る尿素添加量を見出し、発明を完成し
た。

〈実施例〉 1.使用剤；コンゴーレッド、尿素はキシダ化学製試薬特
級を使用。

2.下記表に尿素添加量を示す。コンゴーレッドは１アン
プル5ml中、150mg（３％溶液）含有される。ロットNo. 尿素量(mg) １００％２ 100 ２％３ 250 ５％４ 500 10％５ 1000 20％６ 1500 30％ 3.調製方法前記コンゴーレッド6gを粉砕、精秤し、200mlメスフラ
スコに入れ、50％尿素水溶液（500mg/ml）を所定量（上
記表参照）と、注射用蒸留水を適量加え温浴中で攪拌
し、溶解確認後、室温に放置し冷却後注射用蒸留水で全
量を200mlとした。0.22μｍメンブランフィルター（ミ
リポア社）を通し、5mlアンプルに無菌充填し、溶封し
た。

4.保存条件及びサンプリング時期室温（25℃）と低温（４℃）にロットNo.1〜６の夫々を
半数ずつ保存した。

サンプリング時期は調製後、1,2,4及び９週間目に行な
った。

5.測定項目及び方法５−１コンゴーレッドの吸光値の測定サンプル1.5mlを0.45μｍのメンブランフィルター（ミ
リポア社）を用いて濾過した。

濾液1.0mlを取り100mlメスフラスコに入れ、水にて希釈
した。この液10mlを取り、50mlメスフラスコに入れ希釈
した。希釈溶液1.0mlを取り10mlメスフラスコにて希釈
した。

水を対照に500nmにおける吸光値を測定した。

５−２異物の確認サンプル1.0mlを0.45μｍのメンブランフィルター（ミ
リポア社）を用いて濾過した。

メンブランフィルター上に残存した結晶の有無を実体顕
微鏡（40倍）で確認し、室内温度25℃、低温４℃におい
て、1,2,4,9週間毎に観察し、量的表現として（−）
（＋）（×）を標示した。

上記表１に関し、室温保存（25℃）の場合、尿素無添加
（No.1）では、４週間目で結晶の析出が認められるのに
対し、尿素添加群（No.2〜５）は、いずれも結晶を認め
なかった。低温保存（４℃）において、尿素無添加（N
o.1）では、１週間目より結晶が析出し、４週間目に至
っては沈殿物を認めるのに対し、尿素添加群（No.2〜
５）は、２％添加（No.2）で２週間目以降に結晶が現れ
たが、５％以上の添加量（No.3〜５）では、いずれも９
週間目まで結晶を検出することはできなかった。

6.吸光値の変化及び結果調製した前記３％コンゴーレッド注射液の尿素添加量に
対する吸光値の変化を調製時、１週間、２週間、４週
間、９週間毎に観察した吸光値と開始時の吸光値を100
とした場合の吸光値（％）により表２に示す。

結果：上記の表に見られる吸光値の変化から、尿素無添
加（No.1、０％）、及び２％添加（No.2）では室温25℃
で９週間目まで安定であるが、４℃の低温保存では４週
間目以降から吸光値の低下が起こった。

４℃の尿素無添加（No.1、０％）では吸光値が60％低
下、同２％添加（No.2）では15％低下した。

尿素添加量が５〜30％（No.3〜６）では室温25℃、低温
４℃の両保存条件において、９週間目まで吸光値の低下
は殆んど見られず、安定であった。

以上の結果から、３％コンゴーレッド注射液に対して尿
素を少なくとも２％添加することによって、コンゴーレ
ッドの溶解補助作用が認められ、室温において経時的に
安定した製剤を得られたことが判明した。更に、尿素の
添加量を５％以上とすることによって、低温保存におい
ても結晶等の析出が生じず、経時的に安定な製剤が得ら
れることが明らかとなった。次に以上の本発明製剤（注
射液）の正常及び病態動物等に対する安全性を検討する
ため、正常ラット、コントロールラット及びガラクトサ
ミン（Galactosamine）肝障害ラットに投与し、血漿中B
UN（尿素窒素）値の変動及びRES機能を測定した。

実験 1.被実験肝障害動物;Wister系雄性ラット（日本クレ
ア、７週令）に対し、Ｄ−（＋）−ガラクトサミン（東
京化成）を600mg/kg腹腔内投与し、48時間後に実験に供
した。

2.上記のラットの４〜５匹を１群として（１）を正常ラ
ット（２）〜（６）を障害ラット群とし、（１）の正常
ラット群（normal）には注射用蒸留水（distilled wate
r）を、（２）のコントロール肝障害ラット群（contro
l）には３％コンゴーレッド注射液（尿素０％）を、
（３）の肝障害ラット群Ｕ−５には５％尿素（urea）添
加した３％コンゴーレッド注射液を、（４）の肝障害ラ
ット群Ｕ−10には10％尿素添加した３％コンゴーレッド
注射液を、（５）の肝障害ラット群Ｕ−20には20％尿素
添加した３％コンゴーレッド注射液を、（６）の肝障害
ラット群には30％尿素添加した３％コンゴーレッド注射
液を夫々2.5mg/kgずつ上記各ラットの大腿静脈より投与
し、5,10,20,40及び120分後に血液0.3ml採血した。該採
血々液100μｌを用いてRES機能（PRS希釈法）の測定を
行ない、残りの血液は3,500r.p.mで10分間遠心分離し血
漿を得、血漿20μｌを取りBUN（Ureaselmdophemol法）
の測定を行なった。そして投与前値に対する各時間のBU
N値の増加率（％）を算出した。

尚、予め前記各注射液投与前にも採血をして、注射投与
後の血液との比較基準とする。

表３にラット血漿中BUNの増加率およびRES機能を示し
た。

3.結果及び考察 BUNの増加率は各群とも時間経過とともに上昇した。ま
た、コントロール群に比べ正常、Ｕ−５およびＵ−10群
では各時間において有意な差は認められなかった。しか
し、Ｕ−20およびＵ−30群は投与後10および20分におい
て対照群に比べ有意に増加した（ｐ＜0.05）。これらの
ことから肝障害時において尿素を20％以上含有するコン
ゴーレッド製剤を投与することは血中BUN値を有意に増
加させるため、不適当であると考えられる。

RES機能はコントロール群に比べＵ−10,U−20およびＵ
−30群では有意な差は認められず、尿素添加量の違いに
よってRES機能およびRES機能測定値に影響を与えること
はないと思われた。

以上のことから、ガラクトサミン肝障害ラットを用い
て、コンゴーレッド注射液の溶解補助剤である尿素の添
加量を安全性面より検討するため、血漿中BUNの変動率
およびRES機能を見たが、３％コンゴーレッドに５〜10
％の尿素添加では血漿中BUNおよびRES機能に影響を与え
ないことから、生体にとってほとんど影響しない安全な
ものと推察された。

本発明の診断剤は前記した通り尿素を添加してなる。

肝網内系機能診断を要する障害が肝にある場合、多くの
場合に腎障害をも起こしており、腎障害時に血漿中BUN
を増加させることは生体にとって好ましいものではな
い。従って前記診断時、投与したコンゴーレッド注射液
中の尿素が腎障害にどのような影響を及ぼすか検討を行
なった。

実験ウイスター（Wistar）系雄性ラット（日本クレア、７週
令）に対して塩化第二水銀（HgCl₂）（東京化成）を生
理食塩水で2.5mg/mlに調製し、5mg/kgを皮下投与した。
なお投与後48時間後に実験に供した。

2.実験方法上記のラットの５匹を１群として（１）のコントロール
腎障害群には３％−コンゴーレッド（尿素０）、（２）
の腎障害ラット群Ｕ−５には３％コンゴーレッドに５％
尿素（Urea）添加注射液を、（３）の腎障害Ｕ−10には
３％−コンゴーレッドに10％尿素添加注射液を、（４）
の腎障害ラット群Ｕ−20には３％コンゴーレッドに20％
尿素添加注射液を、（５）の腎障害ラット群Ｕ−30には
３％コンゴーレッドに30％尿素添加注射液を夫々、2.5m
g/kgずつラット大腿静脈より投与し、５、10、20、40お
よび120分後に血液0.3ml採血した。該採血々液100μｌ
を用いてRES機能（PBS希釈法）の測定を行ない、残りの
血液は3,500r.p.mで10分間遠心分離し血漿を得、血漿20
μｌを取りBUN（Urease−Indophenol法）の測定を行な
った。そして予め前記注射液投与前の採血による投与前
値に対する前記各時間のBUN値の増加率（％）を算出し
た。

表４にラット血漿中BUNの時間経過における増加率とRES
機能を示した。

4.結果および考察表４により、BUNの増加率はコントロールに比べ、５分
値では各群とも差は認められなかったが、10分および20
分値においてＵ−20およびＵ−30群はそれぞれ有意に高
値を示した。しかし、Ｕ−５およびＵ−10群は各時間に
おいてそれぞれコントロールと差は認められなかった。

一方、RES機能のＫ値，（コンゴーレッドの血漿中の消
失速度定数）はコントロールに対し各群とも差は認めら
れず、尿素添加量の違いによってＫ値は影響を受けず、
各群とも正常範囲内であった。

以上のことから、腎障害時において尿素を20％以上含有
するコンゴーレッド製剤を投与することは、血漿中BUN
を増加させることによって生体になんらかの悪影響を与
えることと思われる。しかし、尿素添加量が５〜10％の
場合は血漿中BUNおよびRES機能は変化しないことから、
生体にとってほとんど影響しないものと推察された。よ
って肝、腎障害時におけるコンゴーレッド製剤投与の実
験より、コンゴーレッド製剤の尿素添加量は安全性の面
から20％未満が好ましく５〜10％が最適であると考えら
れる。

また、本発明の診断剤に一種又は二種以上のアミノ酸又
は糖類を添加することにより、安全性を損なうことな
く、さらに溶解性が向上する。

実施例として、３％コンゴーレッド注射液にアラニン0.
02〜0.03％、グルタミン0.01〜0.03％、イソロイシン0.
03〜0.15％、マンニトール0.03〜0.1％、ソルビトール
４〜10％、キシリトール0.3〜1.0％、もしくはイノシト
ール１〜２％を添加した製剤をそれぞれ調整し、前記尿
素のみ添加した製剤における場合と同様の安定性、安全
性の検討をし、そのフィルター上残存結晶の有無、含量
の低下等を室温25℃、低温４℃のもとに1,2,4,9週間毎
に観察したが、何れの場合にも尿素のみ添加した製剤よ
り良好で残存結晶の低下および含量で約５〜６％向上が
見られた。

以上の結果は下表に示す通りである。

なお下表中、表５にはアミノ酸添加等のコンゴーレッド
注射液の安定性の検討に使用した尿素およびアミノ酸添
加量を示し、表６には該注射液の吸光値の経時変化を示
す。

又表７には糖類添加時のコンゴーレッド注射液の安定性
の検討に使用した尿素および糖類添加量を示し、表８に
は該注射液の吸光値の経時変化を示す。

表5.尿素およびアミノ酸の添加量Lot. 尿素(mg/ml) アミノ酸(mg/ml) Ａ０ − Ｂ 250 − Ｃ 250 アラニン 8.0 Ｄ 250 グルタミン 3.0 Ｅ 250 アスパラギン酸 7.5 Ｆ 250 イソロイシン 14.0 Ｇ 250 ヒスチジン 10.0 Ｈ 250 グリシン 50.0 表7.尿素および糖類の添加量Lot. 尿素(mg/ml) 糖類 (mg/ml) Ａ０ − Ｂ 250 − Ｉ−１ 250 マンニトール 3.75 Ｉ−２ 250 マンニトール 1.50 Ｊ−１ 250 ソルビトール 100.0 Ｊ−２ 250 ソルビトール 200.0 Ｋ−１ 250 キシリトール 56.5 Ｋ−２ 250 キシリトール 22.6 Ｌ−１ 250 イノシトール 187.5 Ｌ−２ 250 イノシトール 75.0 〈発明の効果〉以上のように、本発明の診断剤は、尿素の添加により極
めて安全性高く、コンゴーレッドの溶解性及び安定性を
高めることができるので、従来に比し高濃度にして投与
液量を減らして肝・腎障害のある被検者に使用出来るた
め、被検者にとっては安全でしかも精神的な負担が低減
され、又調剤後、長期保存しても結晶の析出等の経時的
変化による変質を生じず、用時調製の手間を省くことが
可能となる。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】コンゴーレッド注射液に、尿素を添加して
なる肝網内系機能診断剤。
【請求項２】アミノ酸又は糖を添加したことを特徴とす
る特許請求の範囲第１項記載の肝網内系機能診断剤。