JPH0741499A - アミラーゼ阻害物質 - Google Patents
アミラーゼ阻害物質Info
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Landscapes
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 ポリアクリアミドゲル電気泳動で移動度0.26
の位置に単一のバンドを与える124個のアミノ酸の結合
体であるサブユニット２個からなる新規な蛋白質(0.26A
I)であるアミラーゼ阻害物質、その調製法、並びに0.26
AIの含有量又は0.26AIと蛋白質(0.19AI)の合計含有量が
20重量％であるアミラーゼ阻害剤、血糖値上昇抑制剤、
インシュリン分泌調節剤及び／又は食欲抑制剤。 【効果】 本発明の0.26AIは人膵臓α−アミラーゼに対
して高い阻害活性を有し、0.26AI又は0.26AIと0.19AIを
20％以上含有する本発明の剤は、人間の血糖値上昇抑制
及びインシュリン分泌の調節に高い効果を有し、満腹感
を持続させて節食を容易にすることができ、高血糖症、
糖尿病、高脂血症、動脈硬化、肥満等の予防及び治療に
極めて有効である。
の位置に単一のバンドを与える124個のアミノ酸の結合
体であるサブユニット２個からなる新規な蛋白質(0.26A
I)であるアミラーゼ阻害物質、その調製法、並びに0.26
AIの含有量又は0.26AIと蛋白質(0.19AI)の合計含有量が
20重量％であるアミラーゼ阻害剤、血糖値上昇抑制剤、
インシュリン分泌調節剤及び／又は食欲抑制剤。 【効果】 本発明の0.26AIは人膵臓α−アミラーゼに対
して高い阻害活性を有し、0.26AI又は0.26AIと0.19AIを
20％以上含有する本発明の剤は、人間の血糖値上昇抑制
及びインシュリン分泌の調節に高い効果を有し、満腹感
を持続させて節食を容易にすることができ、高血糖症、
糖尿病、高脂血症、動脈硬化、肥満等の予防及び治療に
極めて有効である。
Description
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、小麦に由来する新規な
アミラーゼ阻害物質およびその調製方法、並びに該アミ
ラーゼ阻害物質を含有するアミラーゼ阻害剤、血糖値上
昇抑制剤、インシュリン分泌調節剤、食欲抑制剤および
食品に関する。本発明の新規なアミラーゼ阻害物質は、
特に人膵臓α−アミラーゼに対して極めて高い阻害活性
を有していて、人間の血糖値上昇抑制およびインシュリ
ン分泌の調節を効果的に行うことができる。更に、本発
明の新規なアミラーゼ阻害物質は食後の満腹感を持続さ
せることができ、そのため食欲抑制が容易に行えるよう
になり、成人病の原因となり易い過食や肥満を効果的に
防止することができる。
アミラーゼ阻害物質およびその調製方法、並びに該アミ
ラーゼ阻害物質を含有するアミラーゼ阻害剤、血糖値上
昇抑制剤、インシュリン分泌調節剤、食欲抑制剤および
食品に関する。本発明の新規なアミラーゼ阻害物質は、
特に人膵臓α−アミラーゼに対して極めて高い阻害活性
を有していて、人間の血糖値上昇抑制およびインシュリ
ン分泌の調節を効果的に行うことができる。更に、本発
明の新規なアミラーゼ阻害物質は食後の満腹感を持続さ
せることができ、そのため食欲抑制が容易に行えるよう
になり、成人病の原因となり易い過食や肥満を効果的に
防止することができる。
【０００２】
【従来の技術】近年わが国では食生活が豊かになり、糖
尿病をはじめとする代謝性疾患が急増している。過剰の
栄養摂取はインシュリンの大量分泌を誘導することによ
って間接的に代謝バランス崩壊の原因となり、耐糖機能
の低下（高血糖）、糖尿病、高脂血症、動脈硬化等につ
ながる。特に、糖尿病患者ではインシュリン作用が不足
し耐糖能が低下しているので、食後の血糖値の上昇が著
しく、毛細血管の損傷や動脈硬化などの合併症の原因と
なっている。そして、このような疾患の予防および治療
には、血糖値が上昇しにくい食品や物質の摂取が有効で
あるとされており、そのため摂取した澱粉が糖に分解す
るのを抑制または阻害し得る物質が求められている。ま
た、飲食物が豊富にある我が国の現状では過食し易く、
これが肥満、高血圧、糖尿病、心臓疾患などの成人病の
原因とものなっている。
尿病をはじめとする代謝性疾患が急増している。過剰の
栄養摂取はインシュリンの大量分泌を誘導することによ
って間接的に代謝バランス崩壊の原因となり、耐糖機能
の低下（高血糖）、糖尿病、高脂血症、動脈硬化等につ
ながる。特に、糖尿病患者ではインシュリン作用が不足
し耐糖能が低下しているので、食後の血糖値の上昇が著
しく、毛細血管の損傷や動脈硬化などの合併症の原因と
なっている。そして、このような疾患の予防および治療
には、血糖値が上昇しにくい食品や物質の摂取が有効で
あるとされており、そのため摂取した澱粉が糖に分解す
るのを抑制または阻害し得る物質が求められている。ま
た、飲食物が豊富にある我が国の現状では過食し易く、
これが肥満、高血圧、糖尿病、心臓疾患などの成人病の
原因とものなっている。
【０００３】上記の点から、澱粉を糖に分解するアミラ
ーゼの活性を阻害する作用を有するいわゆるアミラーゼ
阻害物質に対する研究が色々行われるようになってお
り、小麦中にもアミラーゼ阻害物質が含まれていること
が報告されて以来、小麦由来のアミラーゼ阻害物質に関
する研究や開発が種々なされるようになっている［例え
ば特開昭４６−１８３３号公報、特開昭６１−１７１４
３１号公報、Phytochemistry. Vol.20，No.8， pp1781-
1784（1981）、Eur．J．Biochem．183,37-40(1989)］。
ーゼの活性を阻害する作用を有するいわゆるアミラーゼ
阻害物質に対する研究が色々行われるようになってお
り、小麦中にもアミラーゼ阻害物質が含まれていること
が報告されて以来、小麦由来のアミラーゼ阻害物質に関
する研究や開発が種々なされるようになっている［例え
ば特開昭４６−１８３３号公報、特開昭６１−１７１４
３１号公報、Phytochemistry. Vol.20，No.8， pp1781-
1784（1981）、Eur．J．Biochem．183,37-40(1989)］。
【０００４】しかしながら、上記した従来の小麦由来の
アミラーゼ阻害物質は人以外の動物のアミラーゼに対し
てはある程度の阻害活性はあるものの、人膵臓α−アミ
ラーゼに対する阻害活性が極めて低いかまたは殆どな
く、人に経口で投与した場合に期待どおりの効果が見ら
れず、特に米飯のような加熱調理した澱粉に対しては、
その分解を阻害する作用が低いことが報告されている。
そのため、人膵臓α−アミラーゼに対する阻害活性が強
く、人に経口で投与した場合に少量の使用で人の血糖値
上昇やインシュリン分泌を効果的に抑制することがで
き、特に加熱調理した澱粉の糖への分解を効果的に抑制
できる活性の高いアミラーゼ阻害物質が求められてい
る。
アミラーゼ阻害物質は人以外の動物のアミラーゼに対し
てはある程度の阻害活性はあるものの、人膵臓α−アミ
ラーゼに対する阻害活性が極めて低いかまたは殆どな
く、人に経口で投与した場合に期待どおりの効果が見ら
れず、特に米飯のような加熱調理した澱粉に対しては、
その分解を阻害する作用が低いことが報告されている。
そのため、人膵臓α−アミラーゼに対する阻害活性が強
く、人に経口で投与した場合に少量の使用で人の血糖値
上昇やインシュリン分泌を効果的に抑制することがで
き、特に加熱調理した澱粉の糖への分解を効果的に抑制
できる活性の高いアミラーゼ阻害物質が求められてい
る。
【０００５】また、血糖値の上昇やインシュリン分泌を
抑制する剤を用いた場合には、血液中の遊離脂肪酸量が
増加することが報告されており［PulsおよびKeup“Ｄia
betologia” 9，97-101(1973)］、血液中の遊離脂肪酸
量の増加は一般に空腹感をもたらすために過食につなが
り易いとされている。これがアミラーゼ阻害物質による
上記した血糖値上昇抑制効果およびインシュリン分泌抑
制効果を相殺する結果をもたらし、糖尿病などの有効な
治療や予防を困難にしていたと思われる。
抑制する剤を用いた場合には、血液中の遊離脂肪酸量が
増加することが報告されており［PulsおよびKeup“Ｄia
betologia” 9，97-101(1973)］、血液中の遊離脂肪酸
量の増加は一般に空腹感をもたらすために過食につなが
り易いとされている。これがアミラーゼ阻害物質による
上記した血糖値上昇抑制効果およびインシュリン分泌抑
制効果を相殺する結果をもたらし、糖尿病などの有効な
治療や予防を困難にしていたと思われる。
【０００６】
【発明の内容】上記のような状況下に、本発明者らは小
麦中のアミラーゼ阻害物質について色々研究を行ってき
た。その結果、小麦や小麦粉等の原料を水等で抽出処理
して得られるアミラーゼ阻害物質を含有する液または小
麦澱粉製造時に得られる小麦澱粉廃液（小麦抽出液）を
従来法とは異なる特定の方法で処理すると高活性の新規
なアミラーゼ阻害物質が得られることを見出した。すな
わちアミラーゼ阻害物質を含有する抽出液または小麦澱
粉製造時に得られる小麦澱粉廃液を陽イオン交換体で処
理してアミラーゼ阻害物質を吸着させた後に特定のｐＨ
を有するアルカリ液で陽イオン交換体を処理してアミラ
ーゼ阻害物質を溶出させ、アミラーゼ阻害物質を含有す
る溶出液を直ちに酸で酸性にすると、従来公知の小麦粉
由来のアミラーゼ阻害物質に比べて高いアミラーゼ阻害
活性を有する物質、特に人膵臓α−アミラーゼの活性を
強く阻害し得る物質が溶出液中に含まれることを見出し
た。そして本発明者らは、溶出液中に含まれるその高い
アミラーゼ阻害活性を有する物質を回収して、その分子
量の測定および一次構造の決定を行ったところ、配列番
号１で表されるサブユニット２個から成る新規な蛋白質
であることが明らかになった。
麦中のアミラーゼ阻害物質について色々研究を行ってき
た。その結果、小麦や小麦粉等の原料を水等で抽出処理
して得られるアミラーゼ阻害物質を含有する液または小
麦澱粉製造時に得られる小麦澱粉廃液（小麦抽出液）を
従来法とは異なる特定の方法で処理すると高活性の新規
なアミラーゼ阻害物質が得られることを見出した。すな
わちアミラーゼ阻害物質を含有する抽出液または小麦澱
粉製造時に得られる小麦澱粉廃液を陽イオン交換体で処
理してアミラーゼ阻害物質を吸着させた後に特定のｐＨ
を有するアルカリ液で陽イオン交換体を処理してアミラ
ーゼ阻害物質を溶出させ、アミラーゼ阻害物質を含有す
る溶出液を直ちに酸で酸性にすると、従来公知の小麦粉
由来のアミラーゼ阻害物質に比べて高いアミラーゼ阻害
活性を有する物質、特に人膵臓α−アミラーゼの活性を
強く阻害し得る物質が溶出液中に含まれることを見出し
た。そして本発明者らは、溶出液中に含まれるその高い
アミラーゼ阻害活性を有する物質を回収して、その分子
量の測定および一次構造の決定を行ったところ、配列番
号１で表されるサブユニット２個から成る新規な蛋白質
であることが明らかになった。
【０００７】そして、上記で得られた新規なアミラーゼ
阻害物質について更に研究を続けたところ、配列番号１
で表されるサブユニット２個からなるアミラーゼ阻害物
質、特に配列番号１で表されるサブユニット２個からな
る蛋白質を２０重量％以上の割合で含有するアミラーゼ
阻害物質が、従来の小麦由来のアミラーゼ阻害物質に比
べて極めて少量の投与で人膵臓α−アミラーゼの活性を
大きく阻害し、人の血糖値の上昇およびインシュリン分
泌を大幅に抑制できると共に、血液中の遊離脂肪酸量が
増加せず、食後の満腹感を持続させることができるこ
と、そのため血糖値上昇抑制およびインシュリン分泌の
抑制と同時に食欲抑制が容易になり、糖尿病の治療や予
防、肥満防止などに極めて有効であることを見出した。
阻害物質について更に研究を続けたところ、配列番号１
で表されるサブユニット２個からなるアミラーゼ阻害物
質、特に配列番号１で表されるサブユニット２個からな
る蛋白質を２０重量％以上の割合で含有するアミラーゼ
阻害物質が、従来の小麦由来のアミラーゼ阻害物質に比
べて極めて少量の投与で人膵臓α−アミラーゼの活性を
大きく阻害し、人の血糖値の上昇およびインシュリン分
泌を大幅に抑制できると共に、血液中の遊離脂肪酸量が
増加せず、食後の満腹感を持続させることができるこ
と、そのため血糖値上昇抑制およびインシュリン分泌の
抑制と同時に食欲抑制が容易になり、糖尿病の治療や予
防、肥満防止などに極めて有効であることを見出した。
【０００８】また、小麦から得られるアミラーゼ阻害物
質として配列番号２で表されるサブユニット２個からな
る蛋白質が既に知られているが、この蛋白質は人唾液ア
ミラーゼに対してはある程度の阻害活性を有するもの
の、人膵臓α−アミラーゼに対しては極めて低い阻害活
性しか示さず、本発明の目的とする用途では有効でない
と考えられてきた。そのような状況下に、本発明者らは
既知物質である配列番号２で表されるサブユニット２個
からなる蛋白質についても色々研究をすすめたところ、
上記した配列番号１で表されるサブユニット２個からな
る蛋白質および配列番号２で表されるサブユニット２個
からなる蛋白質の両方を含有するアミラーゼ阻害物質、
特に両方の蛋白質の合計含有量が２０重量％以上である
アミラーゼ阻害物質も、上記した従来の予想に反して、
人膵臓α−アミラーゼに対して極めて高い阻害活性を発
揮し、人における血糖値上昇抑制およびインシュリン分
泌抑制効果があり、それと共に血液中の遊離脂肪酸量が
増加せず食後の満腹感を持続させることができることを
見出して本発明を完成した。
質として配列番号２で表されるサブユニット２個からな
る蛋白質が既に知られているが、この蛋白質は人唾液ア
ミラーゼに対してはある程度の阻害活性を有するもの
の、人膵臓α−アミラーゼに対しては極めて低い阻害活
性しか示さず、本発明の目的とする用途では有効でない
と考えられてきた。そのような状況下に、本発明者らは
既知物質である配列番号２で表されるサブユニット２個
からなる蛋白質についても色々研究をすすめたところ、
上記した配列番号１で表されるサブユニット２個からな
る蛋白質および配列番号２で表されるサブユニット２個
からなる蛋白質の両方を含有するアミラーゼ阻害物質、
特に両方の蛋白質の合計含有量が２０重量％以上である
アミラーゼ阻害物質も、上記した従来の予想に反して、
人膵臓α−アミラーゼに対して極めて高い阻害活性を発
揮し、人における血糖値上昇抑制およびインシュリン分
泌抑制効果があり、それと共に血液中の遊離脂肪酸量が
増加せず食後の満腹感を持続させることができることを
見出して本発明を完成した。
【０００９】したがって、本発明は、配列番号１で表さ
れるサブユニット２個からなる蛋白質（以下「０．２６
ＡＩ」という）であることを特徴とするアミラーゼ阻害
物質である。
れるサブユニット２個からなる蛋白質（以下「０．２６
ＡＩ」という）であることを特徴とするアミラーゼ阻害
物質である。
【００１０】そして、本発明は、小麦、小麦粉または小
麦グルテン等の小麦由来物質を水、希塩水溶液、緩衝
液、酸、希アルカリまたは含水アルコールで抽出して得
られるアミラーゼ阻害物質を含有する液を、必要に応じ
て精製処理して夾雑物を除いた後、陽イオン交換体で処
理してアミラーゼ阻害物質を吸着させ、次いでｐＨ９〜
１３のアルカリ溶液で処理して陽イオン交換体からアミ
ラーゼ阻害物質を溶出させた後、直ちにアミラーゼ阻害
物質を含有する溶出液のｐＨを酸性に調整し、ｐＨ調整
された液からアミラーゼ阻害物質を回収することを特徴
とする０．２６ＡＩからなるアミラーゼ阻害物質の調製
方法である。
麦グルテン等の小麦由来物質を水、希塩水溶液、緩衝
液、酸、希アルカリまたは含水アルコールで抽出して得
られるアミラーゼ阻害物質を含有する液を、必要に応じ
て精製処理して夾雑物を除いた後、陽イオン交換体で処
理してアミラーゼ阻害物質を吸着させ、次いでｐＨ９〜
１３のアルカリ溶液で処理して陽イオン交換体からアミ
ラーゼ阻害物質を溶出させた後、直ちにアミラーゼ阻害
物質を含有する溶出液のｐＨを酸性に調整し、ｐＨ調整
された液からアミラーゼ阻害物質を回収することを特徴
とする０．２６ＡＩからなるアミラーゼ阻害物質の調製
方法である。
【００１１】そして、本発明は、小麦澱粉製造時に得ら
れる小麦澱粉廃液（小麦抽出液）を、必要に応じて精製
処理して夾雑物を除いた後、陽イオン交換体で処理して
アミラーゼ阻害物質を吸着させ、次いでｐＨ９〜１３の
アルカリ溶液で処理して陽イオン交換体からアミラーゼ
阻害物質を溶出させた後、直ちにアミラーゼ阻害物質を
含有する溶出液のｐＨを酸性に調整し、ｐＨ調整された
液からアミラーゼ阻害物質を回収することを特徴とする
０．２６ＡＩからなるアミラーゼ阻害物質の調製方法で
ある。
れる小麦澱粉廃液（小麦抽出液）を、必要に応じて精製
処理して夾雑物を除いた後、陽イオン交換体で処理して
アミラーゼ阻害物質を吸着させ、次いでｐＨ９〜１３の
アルカリ溶液で処理して陽イオン交換体からアミラーゼ
阻害物質を溶出させた後、直ちにアミラーゼ阻害物質を
含有する溶出液のｐＨを酸性に調整し、ｐＨ調整された
液からアミラーゼ阻害物質を回収することを特徴とする
０．２６ＡＩからなるアミラーゼ阻害物質の調製方法で
ある。
【００１２】更に、本発明は、０．２６ＡＩの含有量が
２０重量％以上であるか、または該０．２６ＡＩと配列
番号２で表されるサブユニット２個からなる蛋白質（以
下「０．１９ＡＩ」という）の合計含有量が２０重量％
以上であることを特徴とする、アミラーゼ阻害剤、血糖
値上昇抑制剤、インシュリン分泌調節剤または食欲抑制
剤である。そして本発明は、０．２６ＡＩを１食当たり
３０〜２５００ｍｇに調整される食品、または０．２６
ＡＩと０．１９ＡＩの合計含量が１食当たり３０〜２５
００ｍｇに調整される食品を包含する。
２０重量％以上であるか、または該０．２６ＡＩと配列
番号２で表されるサブユニット２個からなる蛋白質（以
下「０．１９ＡＩ」という）の合計含有量が２０重量％
以上であることを特徴とする、アミラーゼ阻害剤、血糖
値上昇抑制剤、インシュリン分泌調節剤または食欲抑制
剤である。そして本発明は、０．２６ＡＩを１食当たり
３０〜２５００ｍｇに調整される食品、または０．２６
ＡＩと０．１９ＡＩの合計含量が１食当たり３０〜２５
００ｍｇに調整される食品を包含する。
【００１３】本発明の新規な０．２６ＡＩは、下記に具
体的に説明するSephadex Ｇ−７５を用いたゲル濾過ク
ロマトグラフィーでほぼ２５，０００の分子量を有して
いる。また、この蛋白質を、Davisの方法［Annals New
York Academy of Science，121, 404−427（1964）］に
従って、ポリアクリルアミドゲル電気泳動（以下「Nati
ve−ＰＡＧＥ」という）にかけたところ、移動度０．２
６の位置に単一のバンドが認められた。また、Orthらの
方法［Cereal Chem. Vol.50，ｐ190−197（1973）］に
よるＳＤＳポリアクリルアミド電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡ
ＧＥ）においては、分子量１２５００に単一なバンドが
認められた。このことから０．２６ＡＩは、分子量１
２，５００の２つのサブユニットから構成される蛋白質
であることが判明した。
体的に説明するSephadex Ｇ−７５を用いたゲル濾過ク
ロマトグラフィーでほぼ２５，０００の分子量を有して
いる。また、この蛋白質を、Davisの方法［Annals New
York Academy of Science，121, 404−427（1964）］に
従って、ポリアクリルアミドゲル電気泳動（以下「Nati
ve−ＰＡＧＥ」という）にかけたところ、移動度０．２
６の位置に単一のバンドが認められた。また、Orthらの
方法［Cereal Chem. Vol.50，ｐ190−197（1973）］に
よるＳＤＳポリアクリルアミド電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡ
ＧＥ）においては、分子量１２５００に単一なバンドが
認められた。このことから０．２６ＡＩは、分子量１
２，５００の２つのサブユニットから構成される蛋白質
であることが判明した。
【００１４】そして、そのサブユニットのアミノ酸配列
をペプチドシークエンサーＰＳＱ−１（島津社製）を用
いて調べたところ、配列番号１で表される１２４個のア
ミノ酸が結合した構造を有していることが明らかにな
り、したがって０．２６ＡＩは、配列番号１で表される
サブユニット２個からなる２４８個のアミノ酸から構成
される蛋白質である。また、この０．２６ＡＩはＳ−Ｓ
結合を有し球状になっている。
をペプチドシークエンサーＰＳＱ−１（島津社製）を用
いて調べたところ、配列番号１で表される１２４個のア
ミノ酸が結合した構造を有していることが明らかにな
り、したがって０．２６ＡＩは、配列番号１で表される
サブユニット２個からなる２４８個のアミノ酸から構成
される蛋白質である。また、この０．２６ＡＩはＳ−Ｓ
結合を有し球状になっている。
【００１５】この０．２６ＡＩは、アミラーゼ、特に人
膵臓α−アミラーゼに対して極めて高い阻害活性を有し
ており、従来公知の小麦由来のアミラーゼ阻害物質であ
る配列番号３で表されるサブユニット２個からなる蛋白
質「以下「０．５３ＡＩ」という）[Biochem．Biophys.
Acta. 743, 52−57（1983)］や配列番号４で表される
蛋白質（以下「０．２８ＡＩ」という）［上記したPhyt
ochemistry. Vol.20，No.8， 1781−1784（1981）］と
比較した場合に、その数倍〜数十倍もの高いα−アミラ
ーゼ阻害活性を有しており、また０．１９ＡＩに比べた
場合にも約２０〜３０％高いα−アミラーゼ阻害活性を
有している。
膵臓α−アミラーゼに対して極めて高い阻害活性を有し
ており、従来公知の小麦由来のアミラーゼ阻害物質であ
る配列番号３で表されるサブユニット２個からなる蛋白
質「以下「０．５３ＡＩ」という）[Biochem．Biophys.
Acta. 743, 52−57（1983)］や配列番号４で表される
蛋白質（以下「０．２８ＡＩ」という）［上記したPhyt
ochemistry. Vol.20，No.8， 1781−1784（1981）］と
比較した場合に、その数倍〜数十倍もの高いα−アミラ
ーゼ阻害活性を有しており、また０．１９ＡＩに比べた
場合にも約２０〜３０％高いα−アミラーゼ阻害活性を
有している。
【００１６】また、本発明の上記した剤において０．２
６ＡＩと共に使用する０．１９ＡＩは、Sephadex Ｇ−
７５を用いたゲル濾過クロマトグラフィーでほぼ２５，
０００の分子量を有しており、０．２６ＡＩと同様に、
Ｓ−Ｓ結合を有し球状になっている。また、０．１９Ａ
Ｉは、Davisの方法［Annals New York Academy of Scie
nce，121，404−427（1964）］に従うポリアクリルアミ
ドゲル電気泳動（以下「Native−ＰＡＧＥ」という）で
は移動度０．１９の位置に単一のバンドとして認めら
れ、更にOrthらの方法［Cereal Chem. Vol.50，ｐ190−
197（1973）］によるＳＤＳポリアクリルアミド電気泳
動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）では分子量１２，５００に単一
なバンドが認められる。このことから０．１９ＡＩは分
子量１２，５００の２つのサブユニットから構成される
蛋白質であること、またそのサブユニットのアミノ酸配
列は配列番号２で表される１２４個のアミノ酸が結合し
た構造を有していることが明らかになっている［Biochi
m． Biophys．Acta，Vol．828，213−221（1985）］。
そして、０．１９ＡＩは、上記したように０．２６ＡＩ
に比べてそのα−アミラーゼ阻害活性が約２０％前後低
いものの、０．５３ＡＩや０．２８ＡＩと比べた場合に
は、極めて高いα−アミラーゼ阻害活性を有している。
６ＡＩと共に使用する０．１９ＡＩは、Sephadex Ｇ−
７５を用いたゲル濾過クロマトグラフィーでほぼ２５，
０００の分子量を有しており、０．２６ＡＩと同様に、
Ｓ−Ｓ結合を有し球状になっている。また、０．１９Ａ
Ｉは、Davisの方法［Annals New York Academy of Scie
nce，121，404−427（1964）］に従うポリアクリルアミ
ドゲル電気泳動（以下「Native−ＰＡＧＥ」という）で
は移動度０．１９の位置に単一のバンドとして認めら
れ、更にOrthらの方法［Cereal Chem. Vol.50，ｐ190−
197（1973）］によるＳＤＳポリアクリルアミド電気泳
動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）では分子量１２，５００に単一
なバンドが認められる。このことから０．１９ＡＩは分
子量１２，５００の２つのサブユニットから構成される
蛋白質であること、またそのサブユニットのアミノ酸配
列は配列番号２で表される１２４個のアミノ酸が結合し
た構造を有していることが明らかになっている［Biochi
m． Biophys．Acta，Vol．828，213−221（1985）］。
そして、０．１９ＡＩは、上記したように０．２６ＡＩ
に比べてそのα−アミラーゼ阻害活性が約２０％前後低
いものの、０．５３ＡＩや０．２８ＡＩと比べた場合に
は、極めて高いα−アミラーゼ阻害活性を有している。
【００１７】本発明の０．２６ＡＩには、配列番号１で
表されるサブユニット２個から構成され且つアミラーゼ
阻害活性を有する蛋白質はいずれも包含され、特にその
製法は限定されず、例えば化学合成によるものなどであ
ってもよい。しかしながら、本発明の０．２６ＡＩは、
小麦由来物質を水などで抽出処理して得た液や小麦澱粉
製造時に得られる小麦澱粉廃液に対して陽イオン交換体
を用いて上記特定の処理を施す上記した本発明の調製方
法によって確実に得ることができ、以下にその方法につ
いて説明する。
表されるサブユニット２個から構成され且つアミラーゼ
阻害活性を有する蛋白質はいずれも包含され、特にその
製法は限定されず、例えば化学合成によるものなどであ
ってもよい。しかしながら、本発明の０．２６ＡＩは、
小麦由来物質を水などで抽出処理して得た液や小麦澱粉
製造時に得られる小麦澱粉廃液に対して陽イオン交換体
を用いて上記特定の処理を施す上記した本発明の調製方
法によって確実に得ることができ、以下にその方法につ
いて説明する。
【００１８】（１） まず、小麦由来物質を水、希塩水
溶液、緩衝液、酸、希アルカリまたは含水アルコールで
抽出して０．２６ＡＩを含有する液を調製する。その際
の小麦由来物質としては、その種類、生産地、収穫時
期、粒度などを問わずいずれも使用することができる。
そのうちでも、小麦粉（小麦セモリナを含む）または小
麦グルテンの形態にしたものを用いるのが抽出効率がよ
く、好ましい。また、色々ある小麦の品種のうちで、特
にデュラム小麦を使用した場合には、本発明の０．２６
ＡＩを高収率で得ることができ、したがって小麦由来物
質として、デュラム小麦粉またはそれから得たグルテン
を使用するのが特に好ましい。
溶液、緩衝液、酸、希アルカリまたは含水アルコールで
抽出して０．２６ＡＩを含有する液を調製する。その際
の小麦由来物質としては、その種類、生産地、収穫時
期、粒度などを問わずいずれも使用することができる。
そのうちでも、小麦粉（小麦セモリナを含む）または小
麦グルテンの形態にしたものを用いるのが抽出効率がよ
く、好ましい。また、色々ある小麦の品種のうちで、特
にデュラム小麦を使用した場合には、本発明の０．２６
ＡＩを高収率で得ることができ、したがって小麦由来物
質として、デュラム小麦粉またはそれから得たグルテン
を使用するのが特に好ましい。
【００１９】また、抽出用の液としては水、希塩水溶
液、緩衝液、酸水溶液、希アルカリ水溶液が好ましい
が、含水アルコールを使用してもよい。希塩水溶液とし
ては塩化ナトリウム、塩化カリウムなどの中性塩等の水
溶液が好ましく、その濃度は２０ｍＭ〜２００ｍＭであ
るのが好ましい。また、緩衝液としてはｐＨ４〜８．５
に調整されたリン酸緩衝液、酢酸緩衝液、トリス緩衝液
などが好ましく用いられる。酸水溶液を使用する場合
は、塩酸、リン酸等の無機酸、酢酸等の有機酸でｐＨ約
２〜５に調整した酸性水溶液を使用するのがよい。希ア
ルカリ水溶液を使用する場合は、アンモニア、水酸化ナ
トリウム等でｐＨ８〜１０に調整したアルカリ性水溶液
を使用するのがよい。また、含水アルコールを使用する
場合は、アルコール濃度約１〜５０％のアルコール水溶
液がよく、その際のアルコールとしては、メタノール、
エタノール、イソプロピルアルコール等を挙げることが
できる。また、抽出用の液はトリス緩衝液、酢酸緩衝液
などを使用して液のｐＨが一定に保たれるようにするの
が好ましい。
液、緩衝液、酸水溶液、希アルカリ水溶液が好ましい
が、含水アルコールを使用してもよい。希塩水溶液とし
ては塩化ナトリウム、塩化カリウムなどの中性塩等の水
溶液が好ましく、その濃度は２０ｍＭ〜２００ｍＭであ
るのが好ましい。また、緩衝液としてはｐＨ４〜８．５
に調整されたリン酸緩衝液、酢酸緩衝液、トリス緩衝液
などが好ましく用いられる。酸水溶液を使用する場合
は、塩酸、リン酸等の無機酸、酢酸等の有機酸でｐＨ約
２〜５に調整した酸性水溶液を使用するのがよい。希ア
ルカリ水溶液を使用する場合は、アンモニア、水酸化ナ
トリウム等でｐＨ８〜１０に調整したアルカリ性水溶液
を使用するのがよい。また、含水アルコールを使用する
場合は、アルコール濃度約１〜５０％のアルコール水溶
液がよく、その際のアルコールとしては、メタノール、
エタノール、イソプロピルアルコール等を挙げることが
できる。また、抽出用の液はトリス緩衝液、酢酸緩衝液
などを使用して液のｐＨが一定に保たれるようにするの
が好ましい。
【００２０】抽出処理に当たっては、小麦由来物質に充
分量（通常約３〜５０倍）の上記した抽出用液を加え
て、通常、約１０〜４０℃の温度で撹拌処理しながら抽
出処理を行った後、遠心分離、濾過、静置等の任意の方
法で固形分を除去して、０．２６ＡＩを含有する抽出液
を得る方法を採用することができる。
分量（通常約３〜５０倍）の上記した抽出用液を加え
て、通常、約１０〜４０℃の温度で撹拌処理しながら抽
出処理を行った後、遠心分離、濾過、静置等の任意の方
法で固形分を除去して、０．２６ＡＩを含有する抽出液
を得る方法を採用することができる。
【００２１】しかしながら、本発明では、このアミラー
ゼ阻害物質を含有する液として、小麦由来物質を水、希
塩水溶液、緩衝液、酸、希アルカリまたは含水アルコー
ルで抽出処理して得た上記の液の代わりに、小麦澱粉の
製造時に得られる小麦澱粉廃液、すなわち小麦粉から澱
粉やグルテンを採取する際のドウまたはバッターの水洗
廃液を、アミラーゼ阻害物質０．２６ＡＩを含有する液
としてそのまま使用して以下の（２）以降の工程を行っ
てもよく、その場合には従来その取り扱いが苦慮されて
いた小麦澱粉廃液の有効利用をも同時に達成することが
できる。
ゼ阻害物質を含有する液として、小麦由来物質を水、希
塩水溶液、緩衝液、酸、希アルカリまたは含水アルコー
ルで抽出処理して得た上記の液の代わりに、小麦澱粉の
製造時に得られる小麦澱粉廃液、すなわち小麦粉から澱
粉やグルテンを採取する際のドウまたはバッターの水洗
廃液を、アミラーゼ阻害物質０．２６ＡＩを含有する液
としてそのまま使用して以下の（２）以降の工程を行っ
てもよく、その場合には従来その取り扱いが苦慮されて
いた小麦澱粉廃液の有効利用をも同時に達成することが
できる。
【００２２】（２） 次いで、上記（１）の抽出処理に
より得られた０．２６ＡＩを含有する液または上記した
小麦澱粉の製造時に得られる小麦澱粉廃液を直接そのま
ま陽イオン交換体で処理するか、または精製処理を施し
て夾雑物を除去してから陽イオン交換体で処理する。い
ずれの場合も、本発明の０．２６ＡＩを得ることができ
るが、精製処理して夾雑物を除去してから陽イオン交換
体で処理する方が、本発明の０．２６ＡＩを高純度で効
率よく得ることができ好ましい。
より得られた０．２６ＡＩを含有する液または上記した
小麦澱粉の製造時に得られる小麦澱粉廃液を直接そのま
ま陽イオン交換体で処理するか、または精製処理を施し
て夾雑物を除去してから陽イオン交換体で処理する。い
ずれの場合も、本発明の０．２６ＡＩを得ることができ
るが、精製処理して夾雑物を除去してから陽イオン交換
体で処理する方が、本発明の０．２６ＡＩを高純度で効
率よく得ることができ好ましい。
【００２３】陽イオン交換体で処理する前に精製処理を
行う場合は、小麦類からアミラーゼ阻害物質を得るのに
従来から用いられている精製法のいずれも採用でき、特
に限定されないが、例えば下記の〜の方法を挙げる
ことができ、特にの方法が好ましい。
行う場合は、小麦類からアミラーゼ阻害物質を得るのに
従来から用いられている精製法のいずれも採用でき、特
に限定されないが、例えば下記の〜の方法を挙げる
ことができ、特にの方法が好ましい。
【００２４】 上記（１）の抽出処理により得られた
０．２６ＡＩを含有する抽出液または小麦澱粉廃液に硫
酸アンモニウムやエタノールなどを添加して、０．２６
ＡＩを含有する沈殿物を生成させ、この沈殿物を分取し
た後、少量の水に懸濁させて透析膜を使用して透析処理
し、透析された液にリン酸緩衝液を加えて生成した沈殿
物を除去し、得られた上澄液をＤＥＡＥセルロースなど
の陰イオン交換体で処理し、通過液をそのまま直接また
は一旦乾燥して粉末状にしたものを緩衝液に溶かして
０．２６ＡＩ含有液として用いるか、或いは更に疎水ク
ロマトグラフィーにかけてアミラーゼ阻害活性のある分
画を集めてそれを０．２６ＡＩ含有液として用いる方
法。
０．２６ＡＩを含有する抽出液または小麦澱粉廃液に硫
酸アンモニウムやエタノールなどを添加して、０．２６
ＡＩを含有する沈殿物を生成させ、この沈殿物を分取し
た後、少量の水に懸濁させて透析膜を使用して透析処理
し、透析された液にリン酸緩衝液を加えて生成した沈殿
物を除去し、得られた上澄液をＤＥＡＥセルロースなど
の陰イオン交換体で処理し、通過液をそのまま直接また
は一旦乾燥して粉末状にしたものを緩衝液に溶かして
０．２６ＡＩ含有液として用いるか、或いは更に疎水ク
ロマトグラフィーにかけてアミラーゼ阻害活性のある分
画を集めてそれを０．２６ＡＩ含有液として用いる方
法。
【００２５】 上記（１）の抽出処理により得られた
０．２６ＡＩを含有する抽出液または小麦澱粉廃液を例
えば７０〜９０℃に加熱して液中に未だに残留する熱に
不安定な蛋白質等の不純物を変性固形化させて分離除去
し、その後に得られる液を０．２６ＡＩ含有液として用
いる方法。
０．２６ＡＩを含有する抽出液または小麦澱粉廃液を例
えば７０〜９０℃に加熱して液中に未だに残留する熱に
不安定な蛋白質等の不純物を変性固形化させて分離除去
し、その後に得られる液を０．２６ＡＩ含有液として用
いる方法。
【００２６】 上記の方法により得られた液を更に
限外濾過膜（好ましくは分画分子量が２００００以下）
やゲル濾過クロマトグラフィーで処理して余剰の塩類や
その他の低分子夾雑物を除去して必要により濃縮を行っ
てその液を０．２６ＡＩ含有液として用いる方法。
限外濾過膜（好ましくは分画分子量が２００００以下）
やゲル濾過クロマトグラフィーで処理して余剰の塩類や
その他の低分子夾雑物を除去して必要により濃縮を行っ
てその液を０．２６ＡＩ含有液として用いる方法。
【００２７】 上記（１）の抽出処理により得られた
０．２６ＡＩを含有する抽出液のｐＨを３前後に調整し
た後、再びｐＨを中性に調整し、生じた沈殿物を分離除
去した液を０．２６ＡＩ含有液として用いる方法。
０．２６ＡＩを含有する抽出液のｐＨを３前後に調整し
た後、再びｐＨを中性に調整し、生じた沈殿物を分離除
去した液を０．２６ＡＩ含有液として用いる方法。
【００２８】（３） 上記（１）で得られた０．２６Ａ
Ｉを含有する抽出液または小麦澱粉廃液を直接そのまま
陽イオン交換体で処理するか、または上記（２）に記載
したような精製処理を施してから陽イオン交換体で処理
するに当たっては、陽イオン交換体としてポリマー系陽
イオン交換樹脂、珪酸、珪酸アルミニウムなどの陽イオ
ン交換体を使用することができ、具体的にはＣＭ−トヨ
パール（商品名；東ソー社製）、ダイヤイオンＨＰＫ−
５５（商品名；三菱化成工業社製）などのポリマー系陽
イオン交換樹脂を用いるのが好ましい。陽イオン交換体
による処理は、０．２６ＡＩを含有する液中に陽イオン
交換体を加えて撹拌して陽イオン交換を行うバッチ式で
も、カラムに充填した陽イオン交換体に０．２６ＡＩを
含有する液を通す連続法のいずれで行ってもよいが、連
続法が好ましい。陽イオン交換体で処理する際には、陽
イオン交換体を予めｐＨ３〜５の緩衝液で平衡化してお
き、その後ｐＨ３〜５に調整したアミラーゼ阻害物質を
含有する液を処理するのがよく、それによって液中の
０．２６ＡＩが陽イオン交換体に吸着される。
Ｉを含有する抽出液または小麦澱粉廃液を直接そのまま
陽イオン交換体で処理するか、または上記（２）に記載
したような精製処理を施してから陽イオン交換体で処理
するに当たっては、陽イオン交換体としてポリマー系陽
イオン交換樹脂、珪酸、珪酸アルミニウムなどの陽イオ
ン交換体を使用することができ、具体的にはＣＭ−トヨ
パール（商品名；東ソー社製）、ダイヤイオンＨＰＫ−
５５（商品名；三菱化成工業社製）などのポリマー系陽
イオン交換樹脂を用いるのが好ましい。陽イオン交換体
による処理は、０．２６ＡＩを含有する液中に陽イオン
交換体を加えて撹拌して陽イオン交換を行うバッチ式で
も、カラムに充填した陽イオン交換体に０．２６ＡＩを
含有する液を通す連続法のいずれで行ってもよいが、連
続法が好ましい。陽イオン交換体で処理する際には、陽
イオン交換体を予めｐＨ３〜５の緩衝液で平衡化してお
き、その後ｐＨ３〜５に調整したアミラーゼ阻害物質を
含有する液を処理するのがよく、それによって液中の
０．２６ＡＩが陽イオン交換体に吸着される。
【００２９】（４） 次いで、必要に応じて陽イオン交
換体を塩化ナトリウムなどを含む中性液で処理して不純
物を陽イオン交換体から溶出除去させた後に、ｐＨ９〜
１３のアルカリ溶液、もしくはｐＨ９〜１０のアルカリ
緩衝液で陽イオン交換体を処理して陽イオン交換体に吸
着されている本発明の０．２６ＡＩを溶出させる。この
場合のアルカリ溶液としては、ｐＨが９〜１３である限
り、アルカリ化合物の種類は特に限定されず、水酸化ナ
トリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化
マグネシウム、水酸化アンモニウムなどのアルカリ化合
物の水溶液を使用することができ、水酸化ナトリウムの
水溶液が好ましい。水酸化ナトリウムの水溶液を使用す
る場合は、水酸化ナトリウムの濃度を０．０５〜１．０
Ｎにするのが望ましい。また、アルカリ緩衝液の場合は
濃度を２０ｍＭ〜１Ｍにするのが望ましい。アルカリ溶
液のｐＨが９よりも低いと、陽イオン交換体からの０．
２６ＡＩの溶出を円滑に行うことができず、一方アルカ
リ溶液のｐＨが１３よりも高いと０．２６ＡＩが溶出時
に変性して目的とする０．２６ＡＩを得ることができな
くなる。
換体を塩化ナトリウムなどを含む中性液で処理して不純
物を陽イオン交換体から溶出除去させた後に、ｐＨ９〜
１３のアルカリ溶液、もしくはｐＨ９〜１０のアルカリ
緩衝液で陽イオン交換体を処理して陽イオン交換体に吸
着されている本発明の０．２６ＡＩを溶出させる。この
場合のアルカリ溶液としては、ｐＨが９〜１３である限
り、アルカリ化合物の種類は特に限定されず、水酸化ナ
トリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化
マグネシウム、水酸化アンモニウムなどのアルカリ化合
物の水溶液を使用することができ、水酸化ナトリウムの
水溶液が好ましい。水酸化ナトリウムの水溶液を使用す
る場合は、水酸化ナトリウムの濃度を０．０５〜１．０
Ｎにするのが望ましい。また、アルカリ緩衝液の場合は
濃度を２０ｍＭ〜１Ｍにするのが望ましい。アルカリ溶
液のｐＨが９よりも低いと、陽イオン交換体からの０．
２６ＡＩの溶出を円滑に行うことができず、一方アルカ
リ溶液のｐＨが１３よりも高いと０．２６ＡＩが溶出時
に変性して目的とする０．２６ＡＩを得ることができな
くなる。
【００３０】（５） 続いて、陽イオン交換体から溶出
された０．２６ＡＩ含有液に直ちに酸を加えて該液のｐ
Ｈを２〜５に調整して、抽出液中に含まれる０．２６Ａ
Ｉの変性を防止する。この場合に、酸によるアルカリ溶
出液のｐＨ調整は、陽イオン交換体からのアルカリ溶出
液を容器等に一旦溜めてそこに酸を添加して行っても、
アルカリ容器液の容器等への流入と同時に酸を連続的に
容器に加えて行っても、または容器中に予め酸溶液を入
れておいてそこにアルカリ溶液を流入させるようにして
もよく、いずれの場合に陽イオン交換体から溶出された
０．２６ＡＩを含有するアルカリ溶液を可及的速やかに
酸でｐＨ２〜５に調整することが必要である。アルカリ
溶出液のｐＨ調整用の酸としては、塩酸、硫酸、リン酸
などの無機酸、酢酸などの有機酸を使用できるが、塩酸
が好ましい。
された０．２６ＡＩ含有液に直ちに酸を加えて該液のｐ
Ｈを２〜５に調整して、抽出液中に含まれる０．２６Ａ
Ｉの変性を防止する。この場合に、酸によるアルカリ溶
出液のｐＨ調整は、陽イオン交換体からのアルカリ溶出
液を容器等に一旦溜めてそこに酸を添加して行っても、
アルカリ容器液の容器等への流入と同時に酸を連続的に
容器に加えて行っても、または容器中に予め酸溶液を入
れておいてそこにアルカリ溶液を流入させるようにして
もよく、いずれの場合に陽イオン交換体から溶出された
０．２６ＡＩを含有するアルカリ溶液を可及的速やかに
酸でｐＨ２〜５に調整することが必要である。アルカリ
溶出液のｐＨ調整用の酸としては、塩酸、硫酸、リン酸
などの無機酸、酢酸などの有機酸を使用できるが、塩酸
が好ましい。
【００３１】（６） 最後に、上記（５）で得られたｐ
Ｈを２〜５に調整した０．２６ＡＩを含有する液を、必
要に応じて透析やその他の精製処理を施してから、凍結
乾燥、減圧乾燥、噴霧乾燥、ボール乾燥などの任意の方
法で乾燥することによって、目的とする０．２６ＡＩを
得ることができる。そして上記の方法による場合は、一
般に、０．２６ＡＩを２０重量％以上の高濃度で含有す
るアミラーゼ阻害物質を得ることができる。この０．２
６ＡＩは、人膵臓α−アミラーゼに対する阻害活性が極
めて高くてインシュリン分泌調節剤として高い機能を有
し、しかも少量の使用で米飯のような加熱調理された澱
粉が消化されるのを抑制する、すなわち加熱処理された
澱粉が糖に分解されるのを効果的に抑制することができ
て高い血糖値上昇抑制剤としての機能を有し、しかも食
欲抑制機能をも有する。
Ｈを２〜５に調整した０．２６ＡＩを含有する液を、必
要に応じて透析やその他の精製処理を施してから、凍結
乾燥、減圧乾燥、噴霧乾燥、ボール乾燥などの任意の方
法で乾燥することによって、目的とする０．２６ＡＩを
得ることができる。そして上記の方法による場合は、一
般に、０．２６ＡＩを２０重量％以上の高濃度で含有す
るアミラーゼ阻害物質を得ることができる。この０．２
６ＡＩは、人膵臓α−アミラーゼに対する阻害活性が極
めて高くてインシュリン分泌調節剤として高い機能を有
し、しかも少量の使用で米飯のような加熱調理された澱
粉が消化されるのを抑制する、すなわち加熱処理された
澱粉が糖に分解されるのを効果的に抑制することができ
て高い血糖値上昇抑制剤としての機能を有し、しかも食
欲抑制機能をも有する。
【００３２】一般に、酵素のような生理機能を有する蛋
白質はｐＨ９以上の強アルカリ条件下では変性し易く、
そのため小麦由来物質からアミラーゼ阻害物質を調製す
る従来技術においても、ｐＨ９以上のアルカリ溶液は使
用されなかった。それに対して本発明では、従来用いら
れなかったｐＨ９〜１３のアルカリ溶液を用い、それで
陽イオン交換体を処理することによって、従来の小麦由
来のアミラーゼ阻害物質である０．５３ＡＩや０．２８
ＡＩなどに比べて著しく高いアミラーゼ阻害活性を有す
る本発明の新規な０．２６ＡＩを得ることができるので
あり、このような本発明の処理操作およびそれによって
得られる新規な０．２６ＡＩの優れた特性は全く予想外
のことである。
白質はｐＨ９以上の強アルカリ条件下では変性し易く、
そのため小麦由来物質からアミラーゼ阻害物質を調製す
る従来技術においても、ｐＨ９以上のアルカリ溶液は使
用されなかった。それに対して本発明では、従来用いら
れなかったｐＨ９〜１３のアルカリ溶液を用い、それで
陽イオン交換体を処理することによって、従来の小麦由
来のアミラーゼ阻害物質である０．５３ＡＩや０．２８
ＡＩなどに比べて著しく高いアミラーゼ阻害活性を有す
る本発明の新規な０．２６ＡＩを得ることができるので
あり、このような本発明の処理操作およびそれによって
得られる新規な０．２６ＡＩの優れた特性は全く予想外
のことである。
【００３３】また、本発明において０．２６ＡＩと共に
用いる０．１９ＡＩは本出願前公知の蛋白質であり、そ
の調製法は特に制限されずいずれの方法で調製してもよ
く、また既知のものを入手して使用してもよいが、例え
ば下記の方法により調製することができ、その場合には
０．１９ＡＩを２０重量％以上の高濃度で含有するアミ
ラーゼ阻害物質を円滑に得ることができる。
用いる０．１９ＡＩは本出願前公知の蛋白質であり、そ
の調製法は特に制限されずいずれの方法で調製してもよ
く、また既知のものを入手して使用してもよいが、例え
ば下記の方法により調製することができ、その場合には
０．１９ＡＩを２０重量％以上の高濃度で含有するアミ
ラーゼ阻害物質を円滑に得ることができる。
【００３４】０．１９ＡＩを２０重量％以上含有するア
ミラーゼ阻害物質の調製例： （ａ）小麦由来物質を水、酸（ｐＨ約２〜６）、アルカ
リ（ｐＨ約８〜１０）または含水アルコールで抽出して
０．１９ＡＩを含有する抽出液を得た後、（ｂ）該抽出
液に、０．１９ＡＩと不溶性の複合体を形成する多糖類
を加えて０．１９ＡＩと多糖類との不溶性の複合体を生
成させ、その複合体を液から分別し、（ｃ）該分別した
複合体から多糖類を分離除去して０．１９ＡＩを含有す
る液を分取し、（ｄ）その分取した０．１９ＡＩを含有
する液を陽イオン交換体で処理して陽イオン交換体非吸
着画分から０．１９ＡＩを回収して、０．１９ＡＩ含量
が２０％以上のアミラーゼ阻害物質を得る。
ミラーゼ阻害物質の調製例： （ａ）小麦由来物質を水、酸（ｐＨ約２〜６）、アルカ
リ（ｐＨ約８〜１０）または含水アルコールで抽出して
０．１９ＡＩを含有する抽出液を得た後、（ｂ）該抽出
液に、０．１９ＡＩと不溶性の複合体を形成する多糖類
を加えて０．１９ＡＩと多糖類との不溶性の複合体を生
成させ、その複合体を液から分別し、（ｃ）該分別した
複合体から多糖類を分離除去して０．１９ＡＩを含有す
る液を分取し、（ｄ）その分取した０．１９ＡＩを含有
する液を陽イオン交換体で処理して陽イオン交換体非吸
着画分から０．１９ＡＩを回収して、０．１９ＡＩ含量
が２０％以上のアミラーゼ阻害物質を得る。
【００３５】より具体的には、上記の工程(ａ)は小麦由
来物質にその約３〜５０倍の抽出用液を加えて通常約１
０〜４０℃で行うのがよく、工程（ａ）により得られる
０．１９ＡＩ含有抽出液を、好ましくは精製処理してそ
こに含まれる不純可溶性蛋白質類、可溶性糖類、無機塩
類、可溶性色素などの不純物を除去して、工程(ｂ)に供
する。
来物質にその約３〜５０倍の抽出用液を加えて通常約１
０〜４０℃で行うのがよく、工程（ａ）により得られる
０．１９ＡＩ含有抽出液を、好ましくは精製処理してそ
こに含まれる不純可溶性蛋白質類、可溶性糖類、無機塩
類、可溶性色素などの不純物を除去して、工程(ｂ)に供
する。
【００３６】工程（ｂ）では、工程（ａ）からの０．１
９ＡＩを含有する抽出液に、０．１９ＡＩと不溶性の複
合体を形成し得るアルギン酸ナトリウム、ＣＭＣ（カル
ボキシメチルセルロースナトリウム）、κ−カラギーナ
ン、ν−カラギーナン、λ−カラギーナンなどのカチオ
ン交換機能を有する水溶性多糖類、ペクチン、キサンタ
ンガム、ジェランガム等の水溶性多糖類、好ましくはア
ルギン酸ナトリウムを一般に５０〜６００ｐｐｍの割合
で添加して、好ましくはｐＨ１〜６および１〜３０℃の
条件下に撹拌して、０．１９ＡＩと水溶性多糖類との不
溶性の複合体を形成させ、この複合体を濾過、遠心分
離、その他適当な方法で液から分別する。
９ＡＩを含有する抽出液に、０．１９ＡＩと不溶性の複
合体を形成し得るアルギン酸ナトリウム、ＣＭＣ（カル
ボキシメチルセルロースナトリウム）、κ−カラギーナ
ン、ν−カラギーナン、λ−カラギーナンなどのカチオ
ン交換機能を有する水溶性多糖類、ペクチン、キサンタ
ンガム、ジェランガム等の水溶性多糖類、好ましくはア
ルギン酸ナトリウムを一般に５０〜６００ｐｐｍの割合
で添加して、好ましくはｐＨ１〜６および１〜３０℃の
条件下に撹拌して、０．１９ＡＩと水溶性多糖類との不
溶性の複合体を形成させ、この複合体を濾過、遠心分
離、その他適当な方法で液から分別する。
【００３７】そして、工程（ｃ）では、工程（ｂ）で分
別して得た０．１９ＡＩと多糖類との不溶性の複合体を
水、アンモニア、炭酸水素アンモニウム等の弱アルカリ
性の水溶液、カルシウム、カリウムを含まない塩類の水
溶液などからなる溶液に入れて好ましくは約３０〜７０
℃の温度に加温して０．１９ＡＩと多糖類とに解離させ
た後、この液にカリウムイオン、カルシウムイオン、マ
グネシウムイオンなどの金属イオンを添加して多糖類を
ゲル化して固形の不溶物とすると共に０．１９ＡＩをそ
のまま液中に溶存して残留させ、ゲル化した多糖類を液
から適当な方法で分離除去して、０．１９ＡＩを含有す
る液を回収する。
別して得た０．１９ＡＩと多糖類との不溶性の複合体を
水、アンモニア、炭酸水素アンモニウム等の弱アルカリ
性の水溶液、カルシウム、カリウムを含まない塩類の水
溶液などからなる溶液に入れて好ましくは約３０〜７０
℃の温度に加温して０．１９ＡＩと多糖類とに解離させ
た後、この液にカリウムイオン、カルシウムイオン、マ
グネシウムイオンなどの金属イオンを添加して多糖類を
ゲル化して固形の不溶物とすると共に０．１９ＡＩをそ
のまま液中に溶存して残留させ、ゲル化した多糖類を液
から適当な方法で分離除去して、０．１９ＡＩを含有す
る液を回収する。
【００３８】次いで、工程（ｄ）で多糖類を分離除去し
た後の０．１９ＡＩを含有する液を、陽イオン交換体で
処理して陽イオン交換体非吸着画分から目的とする０．
１９ＡＩを２０重量％以上の割合で含有するアミラーゼ
阻害物質を得る。この工程（ｄ）において、上記の工程
（ｃ）で得られた０．１９ＡＩを含有する液をそのまま
直接工程（ｄ）の陽イオン交換体で処理してもまたは必
要に応じて他の精製工程を経てから陽イオン交換体処理
に付してもよく、一般に他の精製工程を経てから陽イオ
ン交換体で処理するのが、アミラーゼ阻害活性がより高
く、且つトリプシン阻害物質等の他の望ましくない物質
の含量のより少ない０．１９ＡＩを得ることができ、望
ましい。
た後の０．１９ＡＩを含有する液を、陽イオン交換体で
処理して陽イオン交換体非吸着画分から目的とする０．
１９ＡＩを２０重量％以上の割合で含有するアミラーゼ
阻害物質を得る。この工程（ｄ）において、上記の工程
（ｃ）で得られた０．１９ＡＩを含有する液をそのまま
直接工程（ｄ）の陽イオン交換体で処理してもまたは必
要に応じて他の精製工程を経てから陽イオン交換体処理
に付してもよく、一般に他の精製工程を経てから陽イオ
ン交換体で処理するのが、アミラーゼ阻害活性がより高
く、且つトリプシン阻害物質等の他の望ましくない物質
の含量のより少ない０．１９ＡＩを得ることができ、望
ましい。
【００３９】工程（ｄ）において陽イオン交換体処理に
付す前に他の精製工程を施す場合は、工程（ｃ）で得ら
れた０．１９ＡＩを含有する液を例えば７０〜９０℃に
加熱して液中に未だに残留する熱に不安定な蛋白質等の
不純物を変性固形化させて分離除去した後、残る液を更
に限外濾過膜やゲル濾過クロマトグラフィーを通して処
理して余剰の塩類やその他の低分子夾雑物を除去して濃
縮を行うのが望ましい。その場合の限外濾過膜として
は、ポリアクロニトリル系、ポリオレフィン系、ポリス
ルフィン系、ポリイミド系またはセルロース系の素材よ
りなる分画分子量が２０，０００以下のものを使用する
のがよい。
付す前に他の精製工程を施す場合は、工程（ｃ）で得ら
れた０．１９ＡＩを含有する液を例えば７０〜９０℃に
加熱して液中に未だに残留する熱に不安定な蛋白質等の
不純物を変性固形化させて分離除去した後、残る液を更
に限外濾過膜やゲル濾過クロマトグラフィーを通して処
理して余剰の塩類やその他の低分子夾雑物を除去して濃
縮を行うのが望ましい。その場合の限外濾過膜として
は、ポリアクロニトリル系、ポリオレフィン系、ポリス
ルフィン系、ポリイミド系またはセルロース系の素材よ
りなる分画分子量が２０，０００以下のものを使用する
のがよい。
【００４０】０．１９ＡＩを含有する液を陽イオン交換
体で処理するに際しては、ポリマー系陽イオン交換樹
脂、珪酸、珪酸アルミニウムなどの陽イオン交換体を使
用することができ、ダイヤイオンＨＰＫ−５５（商品
名；三菱化成工業社製）などのポリマー系陽イオン交換
樹脂が好ましい。陽イオン交換体による処理は、液中に
陽イオン交換体を加えて撹拌して陽イオン交換を行うバ
ッチ式でも、カラムに充填した陽イオン交換体に液を通
す連続法のいずれで行ってもよいが、連続法が好まし
い。陽イオン交換体による処理は、０．１９ＡＩを含有
する液のｐＨを６〜９に調整して行うのがよく、それに
よって液中の０．１９ＡＩはカラム通過画分、または陽
イオン交換体非吸着画分（バッチ式のとき）として回収
される。この陽イオン交換体処理によって、有害なトリ
プシン阻害物質は陽イオン交換体に吸着され、トリプシ
ン阻害物質を含まない０．１９ＡＩを高濃度で含有する
液を効率よく回収することができるので、これを必要に
応じて除菌または殺菌処理（例えば加熱、アルコール殺
菌、除菌濾過等）、或いは濃縮処理を施した後、乾燥す
ると、０．１９ＡＩを２０％以上の高濃度で含有するア
ミラーゼ阻害物質の粉末を得ることができる。なお、
０．１９ＡＩを２０％以上含有するアミラーゼ阻害物質
の調製法は、本出願人による特願平４−１２７９７０号
（特開平５−３０１８９８号）により具体的に記載され
ている。
体で処理するに際しては、ポリマー系陽イオン交換樹
脂、珪酸、珪酸アルミニウムなどの陽イオン交換体を使
用することができ、ダイヤイオンＨＰＫ−５５（商品
名；三菱化成工業社製）などのポリマー系陽イオン交換
樹脂が好ましい。陽イオン交換体による処理は、液中に
陽イオン交換体を加えて撹拌して陽イオン交換を行うバ
ッチ式でも、カラムに充填した陽イオン交換体に液を通
す連続法のいずれで行ってもよいが、連続法が好まし
い。陽イオン交換体による処理は、０．１９ＡＩを含有
する液のｐＨを６〜９に調整して行うのがよく、それに
よって液中の０．１９ＡＩはカラム通過画分、または陽
イオン交換体非吸着画分（バッチ式のとき）として回収
される。この陽イオン交換体処理によって、有害なトリ
プシン阻害物質は陽イオン交換体に吸着され、トリプシ
ン阻害物質を含まない０．１９ＡＩを高濃度で含有する
液を効率よく回収することができるので、これを必要に
応じて除菌または殺菌処理（例えば加熱、アルコール殺
菌、除菌濾過等）、或いは濃縮処理を施した後、乾燥す
ると、０．１９ＡＩを２０％以上の高濃度で含有するア
ミラーゼ阻害物質の粉末を得ることができる。なお、
０．１９ＡＩを２０％以上含有するアミラーゼ阻害物質
の調製法は、本出願人による特願平４−１２７９７０号
（特開平５−３０１８９８号）により具体的に記載され
ている。
【００４１】そして本発明では、上記した０．２６ＡＩ
の含有量が２０重量％以上であるか、または０．２６Ａ
Ｉと０．１９ＡＩの合計含有量が２０重量％以上である
ものを、アミラーゼ阻害剤、血糖値上昇抑制剤、インシ
ュリン分泌抑制剤または食欲抑制剤として用いる。０．
２６ＡＩと０．１９ＡＩの両方を含有する場合は、０．
２６ＡＩと０．１９ＡＩの比率は特に制限されず任意の
比率であってよい。その場合に、０．２６ＡＩと０．１
９ＡＩは高純度精製物であっても粗精製物であってもよ
く、両者を適宜組み合わせて用いればよい。
の含有量が２０重量％以上であるか、または０．２６Ａ
Ｉと０．１９ＡＩの合計含有量が２０重量％以上である
ものを、アミラーゼ阻害剤、血糖値上昇抑制剤、インシ
ュリン分泌抑制剤または食欲抑制剤として用いる。０．
２６ＡＩと０．１９ＡＩの両方を含有する場合は、０．
２６ＡＩと０．１９ＡＩの比率は特に制限されず任意の
比率であってよい。その場合に、０．２６ＡＩと０．１
９ＡＩは高純度精製物であっても粗精製物であってもよ
く、両者を適宜組み合わせて用いればよい。
【００４２】アミラーゼ阻害物質中における０．２６Ａ
Ｉの含有量、または０．２６ＡＩと０．１９ＡＩの合計
含有量が２０重量％未満であると、そのようなアミラー
ゼ阻害物質を多量に投与してもアミラーゼ阻害作用が小
さくて、血糖値上昇抑制作用およびインシュリン分泌調
節作用が小さくなり、しかも食欲抑制剤として有効に使
用できなくなる。一方、０．２６ＡＩの含有量または
０．２６ＡＩと０．１９ＡＩの合計含有量の上限値は限
定されず、アミラーゼ阻害物質中におけるこれらの蛋白
質の含有量が高くなるほどアミラーゼ阻害作用が高くな
り、血糖値上昇抑制作用、インシュリン分泌調節作用お
よび食欲抑制作用も高くなる。しかし、純度が高くなる
ほど生産性が低下するので、生産性や経済性の点から
は、アミラーゼ阻害物質中の０．２６ＡＩの含有量、ま
たは０．２６ＡＩと０．１９ＡＩの合計含有量の上限値
を８０重量％程度にしておくのが望ましい。
Ｉの含有量、または０．２６ＡＩと０．１９ＡＩの合計
含有量が２０重量％未満であると、そのようなアミラー
ゼ阻害物質を多量に投与してもアミラーゼ阻害作用が小
さくて、血糖値上昇抑制作用およびインシュリン分泌調
節作用が小さくなり、しかも食欲抑制剤として有効に使
用できなくなる。一方、０．２６ＡＩの含有量または
０．２６ＡＩと０．１９ＡＩの合計含有量の上限値は限
定されず、アミラーゼ阻害物質中におけるこれらの蛋白
質の含有量が高くなるほどアミラーゼ阻害作用が高くな
り、血糖値上昇抑制作用、インシュリン分泌調節作用お
よび食欲抑制作用も高くなる。しかし、純度が高くなる
ほど生産性が低下するので、生産性や経済性の点から
は、アミラーゼ阻害物質中の０．２６ＡＩの含有量、ま
たは０．２６ＡＩと０．１９ＡＩの合計含有量の上限値
を８０重量％程度にしておくのが望ましい。
【００４３】また、本発明で使用するアミラーゼ阻害物
質は、０．２６ＡＩおよび０．１９ＡＩの他に、場合に
より８０重量％未満の量であれば小麦に由来する他の蛋
白質類、ペプチド類、その他の物質（例えば澱粉、食物
繊維、ビタミン、無機質など）を含有していてもよく、
一般に本発明で使用するアミラーゼ阻害物質では、０．
２６ＡＩおよび０．１９ＡＩをも含めてその全重量の７
０重量％以上が蛋白質からなっているのが好ましい。
質は、０．２６ＡＩおよび０．１９ＡＩの他に、場合に
より８０重量％未満の量であれば小麦に由来する他の蛋
白質類、ペプチド類、その他の物質（例えば澱粉、食物
繊維、ビタミン、無機質など）を含有していてもよく、
一般に本発明で使用するアミラーゼ阻害物質では、０．
２６ＡＩおよび０．１９ＡＩをも含めてその全重量の７
０重量％以上が蛋白質からなっているのが好ましい。
【００４４】０．２６ＡＩを含有するアミラーゼ阻害物
質、または０．２６ＡＩと０．１９ＡＩを含有するアミ
ラーゼ阻害物質は、そのままで、または公知の担体や助
剤等を使用して液剤、顆粒剤、錠剤等の形態にしてアミ
ラーゼ阻害剤、血糖値上昇抑制剤、インシュリン分泌調
節剤および／または食欲抑制剤として用いることができ
る。更に、食品、特に澱粉質を多く含むパン、クッキー
等の炭水化物系食品に添加して使用したり、お茶類、ス
ープ類、ふりかけ、バター、ジャム等のスプレッド類に
添加して使用することができる。０．２６ＡＩ、または
０．２６ＡＩと０．１９ＡＩを含有するアミラーゼ阻害
物質の人への投与量や食品への添加量は、糖尿病患者に
投与するかまたは健常者に投与するかによって、或いは
それらの被投与者の状態や症状等によって、更にはそれ
が添加される食品の種類やその摂取量などに応じて適宜
調節することができるが、本発明の剤の場合は、少量の
投与で高い、アミラーゼ阻害作用、血糖値上昇抑制効
果、インシュリン分泌調節効果および満腹感の持続効果
を図ることができる。特に、食品に添加する場合は、
０．２６Ａの含有量が１食当たり３０〜２５００ｍｇに
調整されるか、または０．２６ＡＩと０．１９ＡＩの合
計含有量が１食当たり３０〜２５００ｍｇに調整される
ようにして０．２６ＡＩまたは０．２６ＡＩと０．１９
ＡＩを含有させるのが好ましい。
質、または０．２６ＡＩと０．１９ＡＩを含有するアミ
ラーゼ阻害物質は、そのままで、または公知の担体や助
剤等を使用して液剤、顆粒剤、錠剤等の形態にしてアミ
ラーゼ阻害剤、血糖値上昇抑制剤、インシュリン分泌調
節剤および／または食欲抑制剤として用いることができ
る。更に、食品、特に澱粉質を多く含むパン、クッキー
等の炭水化物系食品に添加して使用したり、お茶類、ス
ープ類、ふりかけ、バター、ジャム等のスプレッド類に
添加して使用することができる。０．２６ＡＩ、または
０．２６ＡＩと０．１９ＡＩを含有するアミラーゼ阻害
物質の人への投与量や食品への添加量は、糖尿病患者に
投与するかまたは健常者に投与するかによって、或いは
それらの被投与者の状態や症状等によって、更にはそれ
が添加される食品の種類やその摂取量などに応じて適宜
調節することができるが、本発明の剤の場合は、少量の
投与で高い、アミラーゼ阻害作用、血糖値上昇抑制効
果、インシュリン分泌調節効果および満腹感の持続効果
を図ることができる。特に、食品に添加する場合は、
０．２６Ａの含有量が１食当たり３０〜２５００ｍｇに
調整されるか、または０．２６ＡＩと０．１９ＡＩの合
計含有量が１食当たり３０〜２５００ｍｇに調整される
ようにして０．２６ＡＩまたは０．２６ＡＩと０．１９
ＡＩを含有させるのが好ましい。
【００４５】例えば、０．２６ＡＩの含有量、または
０．２６ＡＩと０．１９ＡＩの合計含有量が３０重量％
である本発明の血糖値上昇抑制剤を健常者に投与した場
合には、１回に１００ｍｇの投与でも血糖値上昇抑制効
果が認められ、１回当たり５００〜２，５００ｍｇを１
日３回投与すると血糖値の上昇を極めて良好に抑制する
ことができる。また糖尿病患者ではそれよりも少ない投
与量（一般に１日当たり約３００〜１，５００ｍｇ）で
血糖値の上昇を効果的に抑制することができる。更に、
０．２６ＡＩの含有量、または０．２６ＡＩと０．１９
ＡＩの合計含有量が３０重量％である食欲抑制剤を１回
当たり１，０００〜５，０００ｍｇの割合で食事と共に
人に投与すると、血液中の遊離脂肪酸量が増加せず、空
腹感が抑えられて苦痛を感じることなく食欲を抑制する
ことができる。
０．２６ＡＩと０．１９ＡＩの合計含有量が３０重量％
である本発明の血糖値上昇抑制剤を健常者に投与した場
合には、１回に１００ｍｇの投与でも血糖値上昇抑制効
果が認められ、１回当たり５００〜２，５００ｍｇを１
日３回投与すると血糖値の上昇を極めて良好に抑制する
ことができる。また糖尿病患者ではそれよりも少ない投
与量（一般に１日当たり約３００〜１，５００ｍｇ）で
血糖値の上昇を効果的に抑制することができる。更に、
０．２６ＡＩの含有量、または０．２６ＡＩと０．１９
ＡＩの合計含有量が３０重量％である食欲抑制剤を１回
当たり１，０００〜５，０００ｍｇの割合で食事と共に
人に投与すると、血液中の遊離脂肪酸量が増加せず、空
腹感が抑えられて苦痛を感じることなく食欲を抑制する
ことができる。
【００４６】したがって、本発明の剤は、０．２６ＡＩ
の含有量が２０重量％以上であるか、または０.２６Ａ
Ｉと０.１９ＡＩの合計含有量が２０重量％以上である
ものを、１回の投与分当たり剤中に１００〜５，０００
ｍｇ、好ましくは５００〜２，５００ｍｇの量で含有す
るように製剤しておくのが望ましく、例えば１個のカプ
セル、錠剤、丸薬またはペレット当たり、１分包の散
剤、顆粒剤当たり、或いは１本の液剤中に１００〜５，
０００ｍｇ含有させておいて、それらを１回につき１つ
投与するようにすると過不足なく確実に且つ簡単に摂取
することができる。
の含有量が２０重量％以上であるか、または０.２６Ａ
Ｉと０.１９ＡＩの合計含有量が２０重量％以上である
ものを、１回の投与分当たり剤中に１００〜５，０００
ｍｇ、好ましくは５００〜２，５００ｍｇの量で含有す
るように製剤しておくのが望ましく、例えば１個のカプ
セル、錠剤、丸薬またはペレット当たり、１分包の散
剤、顆粒剤当たり、或いは１本の液剤中に１００〜５，
０００ｍｇ含有させておいて、それらを１回につき１つ
投与するようにすると過不足なく確実に且つ簡単に摂取
することができる。
【００４７】
【実施例】以下に実施例により本発明を具体的に説明す
るが、本発明はそれらの例により限定されない。また、
以下の例において、Sephadex Ｇ−７５を用いたゲル濾
過クロマトグラフィーでの分子量の測定、０．２６ＡＩ
のアミノ酸配列の決定、総蛋白質含量の決定、０．２６
ＡＩまたは０．１９ＡＩ含量の決定、アミラーゼ阻害物
質（０．２６ＡＩ、０．１９ＡＩ、０．５３ＡＩ、０．
２８ＡＩ）の人膵臓α−アミラーゼに対する阻害活性の
測定、血糖値の測定、インシュリン量の測定および満腹
感の持続性の評価は以下のようにして行った。また、得
られた０．２６ＡＩのNative−ＰＡＧＥは上記したよう
に、Davisの方法［Annals New York Academy of Scienc
e，121,404−427（1964）］に従って行った。更に、Ｓ
ＤＳ−ＰＡＧＥはOrthらの方法［Cereal Chem. Vol.5
0，190−197（1973）］に従って行った。
るが、本発明はそれらの例により限定されない。また、
以下の例において、Sephadex Ｇ−７５を用いたゲル濾
過クロマトグラフィーでの分子量の測定、０．２６ＡＩ
のアミノ酸配列の決定、総蛋白質含量の決定、０．２６
ＡＩまたは０．１９ＡＩ含量の決定、アミラーゼ阻害物
質（０．２６ＡＩ、０．１９ＡＩ、０．５３ＡＩ、０．
２８ＡＩ）の人膵臓α−アミラーゼに対する阻害活性の
測定、血糖値の測定、インシュリン量の測定および満腹
感の持続性の評価は以下のようにして行った。また、得
られた０．２６ＡＩのNative−ＰＡＧＥは上記したよう
に、Davisの方法［Annals New York Academy of Scienc
e，121,404−427（1964）］に従って行った。更に、Ｓ
ＤＳ−ＰＡＧＥはOrthらの方法［Cereal Chem. Vol.5
0，190−197（1973）］に従って行った。
【００４８】Sephadex Ｇ−７５を用いたゲル濾過クロ
マトグラフィーでの分子量の測定：得られた０．２６Ａ
Ｉに、４ｍｌの緩衝液（２０ｍＭトリス、２００ｍＭ
NaCl、ｐＨ８．０）を加えて試料溶液を調製し、予め緩
衝液で平衡化しておいたSephadex Ｇ−７５のゲル濾過
カラム（１．６ｃｍ×９０ｃｍ）にかけ、０．５ｍｌ／
ｈｒの流速でゲル濾過クロマトグラフィーを行い分子量
を測定した。
マトグラフィーでの分子量の測定：得られた０．２６Ａ
Ｉに、４ｍｌの緩衝液（２０ｍＭトリス、２００ｍＭ
NaCl、ｐＨ８．０）を加えて試料溶液を調製し、予め緩
衝液で平衡化しておいたSephadex Ｇ−７５のゲル濾過
カラム（１．６ｃｍ×９０ｃｍ）にかけ、０．５ｍｌ／
ｈｒの流速でゲル濾過クロマトグラフィーを行い分子量
を測定した。
【００４９】０．２６ＡＩのアミノ酸配列の決定：得ら
れた０．２６ＡＩをピリジルエチル化した後、Ｖ８プロ
テアーゼ、リシルエンドペプチダーゼ（和光純薬製）を
用いて加水分解した。加水分解した試料をＨＰＬＣにか
け、加水分解されたペプチドフラグメントを得た。得ら
れたペプチドプラグメントをペプチドシークエンサーＰ
ＳＱ−１（島津社製）を用いてペプチドのＮ末端より分
析し全一次構造の決定を行った。Ｃ末端はカルボキシペ
プチダーゼで分解し、その遊離してきたアミノ酸を分析
して決定した。
れた０．２６ＡＩをピリジルエチル化した後、Ｖ８プロ
テアーゼ、リシルエンドペプチダーゼ（和光純薬製）を
用いて加水分解した。加水分解した試料をＨＰＬＣにか
け、加水分解されたペプチドフラグメントを得た。得ら
れたペプチドプラグメントをペプチドシークエンサーＰ
ＳＱ−１（島津社製）を用いてペプチドのＮ末端より分
析し全一次構造の決定を行った。Ｃ末端はカルボキシペ
プチダーゼで分解し、その遊離してきたアミノ酸を分析
して決定した。
【００５０】総蛋白質含量の測定：ケルテックオート１
０３０型機（Tecator社製）を使用し、ケルダール法に
より測定した。窒素、蛋白質換算係数は５．７０とし
た。
０３０型機（Tecator社製）を使用し、ケルダール法に
より測定した。窒素、蛋白質換算係数は５．７０とし
た。
【００５１】０．２６ＡＩまたは０．１９ＡＩ含量の測
定：試料を０．１％トリフルオロ酢酸水溶液に溶解し、
下記の表１に示した条件の高速液体クロマトグラフィー
に供して、クロマトグラム中の０．２６ＡＩまたは０．
１９ＡＩのピーク面積を測定した。一方、０．２６ＡＩ
または０．１９ＡＩ標品（純度１００％）を同じ条件下
に高速液体クロマトグラフィーに供してクロマトグラム
中の０．２６ＡＩまたは０．１９ＡＩのピーク面積を測
定し、下記の数式１により試料中の０．２６ＡＩまたは
０．１９ＡＩ含量を算出した。
定：試料を０．１％トリフルオロ酢酸水溶液に溶解し、
下記の表１に示した条件の高速液体クロマトグラフィー
に供して、クロマトグラム中の０．２６ＡＩまたは０．
１９ＡＩのピーク面積を測定した。一方、０．２６ＡＩ
または０．１９ＡＩ標品（純度１００％）を同じ条件下
に高速液体クロマトグラフィーに供してクロマトグラム
中の０．２６ＡＩまたは０．１９ＡＩのピーク面積を測
定し、下記の数式１により試料中の０．２６ＡＩまたは
０．１９ＡＩ含量を算出した。
【００５２】
【数１】試料中の０．２６ＡＩ又は０.１９ＡＩ含量
(％)＝(Ｓａ／Ｓｔ)×１００ 式中、Ｓａ＝試料の０．２６ＡＩ又は０.１９ＡＩのピ
ーク面積 Ｓｔ＝標品の０．２６ＡＩ又は０.１９ＡＩのピーク面
積
(％)＝(Ｓａ／Ｓｔ)×１００ 式中、Ｓａ＝試料の０．２６ＡＩ又は０.１９ＡＩのピ
ーク面積 Ｓｔ＝標品の０．２６ＡＩ又は０.１９ＡＩのピーク面
積
【００５３】
【表１】 クロマトグラフィー条件 カラム： 充填材：CAPCELL PAK C18 SG120A(粒径５μｍ)(資生堂社製) サイズ：４．６ｍｍφ×２５０ｍｍ 温 度：５０℃ 流 速：１ミリリットル／分 検 出：２８０ｎｍにおける吸光度 移動相： Ａ液；０．１％トリフルオロ酢酸水溶液 Ｂ液；８０％アセトニトリルと０．１％トリフルオロ酢酸の水溶液 よりなる下記の時間／濃度勾配を有する高圧リニアグラジエンド溶出 時間(分) Ａ液(％) Ｂ液(％) ０ ６５ ３５ ３ ６２ ３８ １５ ６２ ３８ １６ ０ １００ ２０ ０ １００
【００５４】人膵臓α−アミラーゼに対する阻害活性の
測定：試料水溶液と人膵臓α−アミラーゼを、５０ｍＭ
NaCl、５ｍＭ CaCl2および０．０２％卵白アルブミンを
含む２０ｍＭ ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−エタ
ンスルホン酸）緩衝液（ｐＨ６．９）中に加えて３７℃
で３０分間放置した後、１．５％可溶性澱粉溶液（ｐＨ
６．９）を０．５ｍｌ混合した。この液を３７℃に１０
分間保って反応を行わせた後、２．５ｍｌの反応停止液
（０．０８ＭＨＣｌおよび０．４Ｍ酢酸）を加えた。反
応液より０．２ｍｌ採取し、これに２．５ｍｌのヨウ素
液（０．０５％ ＫＩおよび０．００５％ヨウ素）を加
えて、６６０ｎｍでの吸光度を測定した。なお、測定に
当たっては、試料液を含まないときに吸光度を８０％減
少させるアミラーゼ量を用い、このときのアミラーゼ活
性を５０％阻害するアミラーゼ阻害物質量を１ユニット
（Ｕ）として表した。
測定：試料水溶液と人膵臓α−アミラーゼを、５０ｍＭ
NaCl、５ｍＭ CaCl2および０．０２％卵白アルブミンを
含む２０ｍＭ ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−エタ
ンスルホン酸）緩衝液（ｐＨ６．９）中に加えて３７℃
で３０分間放置した後、１．５％可溶性澱粉溶液（ｐＨ
６．９）を０．５ｍｌ混合した。この液を３７℃に１０
分間保って反応を行わせた後、２．５ｍｌの反応停止液
（０．０８ＭＨＣｌおよび０．４Ｍ酢酸）を加えた。反
応液より０．２ｍｌ採取し、これに２．５ｍｌのヨウ素
液（０．０５％ ＫＩおよび０．００５％ヨウ素）を加
えて、６６０ｎｍでの吸光度を測定した。なお、測定に
当たっては、試料液を含まないときに吸光度を８０％減
少させるアミラーゼ量を用い、このときのアミラーゼ活
性を５０％阻害するアミラーゼ阻害物質量を１ユニット
（Ｕ）として表した。
【００５５】血糖値の測定：被験者の前腕静脈より採血
し、直ちにグルコースオキシダーゼ法によって血糖値を
測定した。グルコースオキシダーゼ法による測定には、
グルコース−Ｂ−テストワコー［和光純薬工業（株）
製］を用いた。
し、直ちにグルコースオキシダーゼ法によって血糖値を
測定した。グルコースオキシダーゼ法による測定には、
グルコース−Ｂ−テストワコー［和光純薬工業（株）
製］を用いた。
【００５６】インシュリン量の測定：被験者の前腕静脈
より採血し、直ちに遠心分離により血清を得て、血清中
のインシュリン量を酵素免疫法により測定した。酵素免
疫法による測定には、グラザイム Insuliｎ−ＥＩＡテ
スト［和光純薬工業（株）製］を用いた。
より採血し、直ちに遠心分離により血清を得て、血清中
のインシュリン量を酵素免疫法により測定した。酵素免
疫法による測定には、グラザイム Insuliｎ−ＥＩＡテ
スト［和光純薬工業（株）製］を用いた。
【００５７】満腹感の持続性の評価：被検者に下記の表
２に示す７段階の評価から適当を思われるものを１つ選
択させ、その平均値を採った。
２に示す７段階の評価から適当を思われるものを１つ選
択させ、その平均値を採った。
【００５８】
【表２】
【００５９】《実施例 １》デュラム小麦粉５００ｇに
水を２リットル加えて室温で３時間撹拌した。その後遠
心分離により沈殿物を除き、得られた上澄液に塩酸を加
えてｐＨ３に調整し、そのまま１時間放置した。次い
で、該上澄液に水酸化ナトリウム水溶液を加えてｐＨ６
に調整し、１時間放置後、遠心分離して沈殿物を除去し
た。得られた上澄液に硫酸アンモニウムを４５％飽和と
なるように撹拌しながら加え、２時間放置後、この液を
遠心分離して沈殿物を回収した。
水を２リットル加えて室温で３時間撹拌した。その後遠
心分離により沈殿物を除き、得られた上澄液に塩酸を加
えてｐＨ３に調整し、そのまま１時間放置した。次い
で、該上澄液に水酸化ナトリウム水溶液を加えてｐＨ６
に調整し、１時間放置後、遠心分離して沈殿物を除去し
た。得られた上澄液に硫酸アンモニウムを４５％飽和と
なるように撹拌しながら加え、２時間放置後、この液を
遠心分離して沈殿物を回収した。
【００６０】上記で回収した沈殿物に５０ｍｌの水を加
えて沈殿物を懸濁させ、透析膜（Visking社製）を使用
して脱塩を１晩行った。脱塩された液に２０ｍＭの濃度
となるようにリン酸緩衝液（ｐＨ７．６）を加え、充分
撹拌した後、遠心分離して沈殿物を除去した。得られた
上澄液を予め２０ｍＭリン酸緩衝液で平衡化しておいた
陰イオン交換樹脂カラム（東ソー社製；「ＤＥＡＥ−ト
ヨパールカラム」）にかけ、同じ緩衝液で充分に洗浄し
てカラムを通過してきた分画を集めた。集めた分画を水
に対して透析した後、２００ｍＭ NaClを含む２０ｍＭ
トリス緩衝液に対して再び透析した。透析終了後、ミニ
モジュール（旭化成社製）を使って４ｍｌまで濃縮し、
同じ緩衝液で予め平衡化しておいたゲル濾過カラム（フ
ァルマシア社製；「Sephacryl Ｓ−２００」）にかけて
アミラーゼ阻害活性のある分画を集めた。集めた分画を
水に対して透析した後、酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）を２
０ｍＭの濃度となるように加え、予め同じ酢酸緩衝液で
平衡化しておいて陽イオン交換樹脂カラム（東ソー社
製；「ＣＭ−トヨパールカラム」）にかけた。
えて沈殿物を懸濁させ、透析膜（Visking社製）を使用
して脱塩を１晩行った。脱塩された液に２０ｍＭの濃度
となるようにリン酸緩衝液（ｐＨ７．６）を加え、充分
撹拌した後、遠心分離して沈殿物を除去した。得られた
上澄液を予め２０ｍＭリン酸緩衝液で平衡化しておいた
陰イオン交換樹脂カラム（東ソー社製；「ＤＥＡＥ−ト
ヨパールカラム」）にかけ、同じ緩衝液で充分に洗浄し
てカラムを通過してきた分画を集めた。集めた分画を水
に対して透析した後、２００ｍＭ NaClを含む２０ｍＭ
トリス緩衝液に対して再び透析した。透析終了後、ミニ
モジュール（旭化成社製）を使って４ｍｌまで濃縮し、
同じ緩衝液で予め平衡化しておいたゲル濾過カラム（フ
ァルマシア社製；「Sephacryl Ｓ−２００」）にかけて
アミラーゼ阻害活性のある分画を集めた。集めた分画を
水に対して透析した後、酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）を２
０ｍＭの濃度となるように加え、予め同じ酢酸緩衝液で
平衡化しておいて陽イオン交換樹脂カラム（東ソー社
製；「ＣＭ−トヨパールカラム」）にかけた。
【００６１】次いで、１００ｍＭ 塩化ナトリウムを含
む酢酸緩衝液を陽イオン交換樹脂カラムに通して不純物
を溶出させた後、０．１Ｎ 水酸化ナトリウム水溶液を
カラムに通して、０．２６ＡＩをカラムから溶出させ
た。溶出液に直ちに塩酸を加えて液のｐＨを３．０に調
整した。この液を水に対して透析した後、凍結乾燥して
０．２６ＡＩから主としてなる白色の生成物６０ｍｇを
得た。
む酢酸緩衝液を陽イオン交換樹脂カラムに通して不純物
を溶出させた後、０．１Ｎ 水酸化ナトリウム水溶液を
カラムに通して、０．２６ＡＩをカラムから溶出させ
た。溶出液に直ちに塩酸を加えて液のｐＨを３．０に調
整した。この液を水に対して透析した後、凍結乾燥して
０．２６ＡＩから主としてなる白色の生成物６０ｍｇを
得た。
【００６２】上記で得た生成物を用いて上記したSephad
ex Ｇ−７５を用いるゲル濾過クロマトグラフィーでそ
の分子量を測定したところ、ほぼ２５，０００の分子量
を有していた。また、上記したＳＤＳ−ＰＡＧＥにかけ
たところ分子量１２，５００に相当する位置に単一のバ
ンドを与えた。したがって、これらのことから上記の生
成物は分子量１２，５００の２つのサブユニットから構
成されることが判明した。そのサブユニットのアミノ酸
配列を上記した方法により調べたところ、配列番号１で
表される１２４個のアミノ酸が結合した構造を有してい
た。
ex Ｇ−７５を用いるゲル濾過クロマトグラフィーでそ
の分子量を測定したところ、ほぼ２５，０００の分子量
を有していた。また、上記したＳＤＳ−ＰＡＧＥにかけ
たところ分子量１２，５００に相当する位置に単一のバ
ンドを与えた。したがって、これらのことから上記の生
成物は分子量１２，５００の２つのサブユニットから構
成されることが判明した。そのサブユニットのアミノ酸
配列を上記した方法により調べたところ、配列番号１で
表される１２４個のアミノ酸が結合した構造を有してい
た。
【００６３】また、上記の生成物中における総蛋白質含
量および０．２６ＡＩ含量を上記の方法で測定したとこ
ろ、それぞれ９５％および９１％であった。また、該生
成物中には０．２６ＡＩの他に夾雑蛋白質が４％、水分
が５％含まれていた。この実施例１で得られた生成物の
人膵臓α−アミラーゼ阻害活性を上記した方法で測定し
たところ、下記の表３に示すとおりであった。
量および０．２６ＡＩ含量を上記の方法で測定したとこ
ろ、それぞれ９５％および９１％であった。また、該生
成物中には０．２６ＡＩの他に夾雑蛋白質が４％、水分
が５％含まれていた。この実施例１で得られた生成物の
人膵臓α−アミラーゼ阻害活性を上記した方法で測定し
たところ、下記の表３に示すとおりであった。
【００６４】《参考例 １》上記の実施例１で得られた
生成物にグルテンを加えて、０．２６ＡＩ含量を１５％
のものを調製し、その人膵臓α−アミラーゼ阻害活性を
測定したところ、下記の表３に示すとおりであった。
生成物にグルテンを加えて、０．２６ＡＩ含量を１５％
のものを調製し、その人膵臓α−アミラーゼ阻害活性を
測定したところ、下記の表３に示すとおりであった。
【００６５】《参考例 ２》 （１） 小麦粉８００ｋｇに水１１０リットルを加え、
混練して生地を形成させた。この生地を７，６００リッ
トルの水を用いて洗浄して、グルテン４１０ｋｇおよび
小麦澱粉５０５ｋｇを回収した。その際に、６，２００
リットルの廃液が発生したので、この廃液（水抽出液）
に塩酸を加えてｐＨ３に調整し、３０分放置した後、ア
ンモニアでｐＨを６．５に調整すると不溶物が沈殿し
た。沈殿を除去して上澄み液５，２００リットルを回収
した。
混練して生地を形成させた。この生地を７，６００リッ
トルの水を用いて洗浄して、グルテン４１０ｋｇおよび
小麦澱粉５０５ｋｇを回収した。その際に、６，２００
リットルの廃液が発生したので、この廃液（水抽出液）
に塩酸を加えてｐＨ３に調整し、３０分放置した後、ア
ンモニアでｐＨを６．５に調整すると不溶物が沈殿し
た。沈殿を除去して上澄み液５，２００リットルを回収
した。
【００６６】（２） 上記で回収した上澄み液にアルギ
ン酸ナトリウムをその濃度が３００ｐｐｍになるような
量で加えた後、ｐＨを４．２に調整して３０分間撹拌し
た。その結果、水不溶物を生成したので、この水不溶物
をドラバル型遠心分離機を使用して回収した。この回収
物をその１０倍量の水に分散させた後、塩化カルシウム
４．７ｋｇを加えてよく撹拌し、アンモニアでｐＨを
８．５に調整して１時間静置した。次いでドラバル型遠
心分離機を使用して固形物を分離除去して上澄み液６０
０リットルを回収した。
ン酸ナトリウムをその濃度が３００ｐｐｍになるような
量で加えた後、ｐＨを４．２に調整して３０分間撹拌し
た。その結果、水不溶物を生成したので、この水不溶物
をドラバル型遠心分離機を使用して回収した。この回収
物をその１０倍量の水に分散させた後、塩化カルシウム
４．７ｋｇを加えてよく撹拌し、アンモニアでｐＨを
８．５に調整して１時間静置した。次いでドラバル型遠
心分離機を使用して固形物を分離除去して上澄み液６０
０リットルを回収した。
【００６７】（３） 上記で回収した上澄み液を塩酸で
中和し、中和液を８０℃に３０分間加熱した後、生成し
た不溶性部質をドラバル型遠心分離機で分離して上澄み
液を回収し、この上澄み液を限外濾過膜［日東電工(株)
製；ＮＴＵ−３２５０ＣＩＲ（２万分画）］を用いて濃
縮し、併せて余剰カルシウム塩の脱塩を行って濃縮液を
得た。
中和し、中和液を８０℃に３０分間加熱した後、生成し
た不溶性部質をドラバル型遠心分離機で分離して上澄み
液を回収し、この上澄み液を限外濾過膜［日東電工(株)
製；ＮＴＵ−３２５０ＣＩＲ（２万分画）］を用いて濃
縮し、併せて余剰カルシウム塩の脱塩を行って濃縮液を
得た。
【００６８】（４） 上記で得た濃縮液１４０リットル
をアンモニアでｐＨ７．５に調整し、陽イオン交換樹脂
［ダイヤイオンＨＰＫ−５５；三菱化成（株）製］２８
リットルを充填したカラム（長さ９００ｍｍ、内径２０
０ｍｍ）に１リットル／分の流速で通液し、陽イオン交
換樹脂に吸着せずに溶出した画分を採取した。上記の溶
出画分をセラミックフィルターを使用して除菌濾過した
後、凍結乾燥して１，４００ｇの乾燥粉末生成物を得
た。 （５） 上記（４）で得たこの乾燥粉末状生成物の総蛋
白質含量および０．１９ＡＩの含量を測定したところ、
それぞれ８４％および２１％であり０．１９ＡＩを高濃
度で含有しており、その人膵臓α−アミラーゼ阻害活性
は下記の表３に示すとおりであった。
をアンモニアでｐＨ７．５に調整し、陽イオン交換樹脂
［ダイヤイオンＨＰＫ−５５；三菱化成（株）製］２８
リットルを充填したカラム（長さ９００ｍｍ、内径２０
０ｍｍ）に１リットル／分の流速で通液し、陽イオン交
換樹脂に吸着せずに溶出した画分を採取した。上記の溶
出画分をセラミックフィルターを使用して除菌濾過した
後、凍結乾燥して１，４００ｇの乾燥粉末生成物を得
た。 （５） 上記（４）で得たこの乾燥粉末状生成物の総蛋
白質含量および０．１９ＡＩの含量を測定したところ、
それぞれ８４％および２１％であり０．１９ＡＩを高濃
度で含有しており、その人膵臓α−アミラーゼ阻害活性
は下記の表３に示すとおりであった。
【００６９】《参考例 ３》参考例２の工程（３）で得
た濃縮液を乾燥して粉末にし、得られた粉末中の総蛋白
質含量および０．１９ＡＩの含量を測定したところ、そ
れぞれ６０％および１５％であり、その人膵臓α−アミ
ラーゼ阻害活性は下記の表３のとおりであった。
た濃縮液を乾燥して粉末にし、得られた粉末中の総蛋白
質含量および０．１９ＡＩの含量を測定したところ、そ
れぞれ６０％および１５％であり、その人膵臓α−アミ
ラーゼ阻害活性は下記の表３のとおりであった。
【００７０】《実施例 ２》実施例１で得られた白色生
成物５０ｍｇに２０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）を加
え、予め同じ緩衝液で平衡化しておいた「ＣＭ−セファ
ロースカラム」（ファルマシア社製）にかけた。同じ緩
衝液で充分カラムを洗浄後、０−３００ｍＭの塩化ナト
リウム直線勾配をかけて目的物質である０．２６ＡＩを
分離溶出させた。得られた分離液を水に対して充分に透
析後、凍結乾燥して３５ｍｇの白色粉末を得た。得られ
た粉末の総蛋白質含量、０．２６ＡＩ含量およびアミラ
ーゼ阻害活性を上記した方法で測定したところ、下記の
表３に示すとおりであった。
成物５０ｍｇに２０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）を加
え、予め同じ緩衝液で平衡化しておいた「ＣＭ−セファ
ロースカラム」（ファルマシア社製）にかけた。同じ緩
衝液で充分カラムを洗浄後、０−３００ｍＭの塩化ナト
リウム直線勾配をかけて目的物質である０．２６ＡＩを
分離溶出させた。得られた分離液を水に対して充分に透
析後、凍結乾燥して３５ｍｇの白色粉末を得た。得られ
た粉末の総蛋白質含量、０．２６ＡＩ含量およびアミラ
ーゼ阻害活性を上記した方法で測定したところ、下記の
表３に示すとおりであった。
【００７１】《参考例 ４》参考例２で得られた乾燥生
成物１０ｇに１２０ｍｌの酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）を
加え３０分間撹拌し、酢酸を加えてｐＨを４．５に調整
した。この液を予め同じ緩衝液で平衡化しておいた「Ｃ
Ｍ−トヨパールカラム」（東ソー社製）にかけ、２０ｍ
Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）で充分洗浄後、３５０ｍＭ
の塩化ナトリウムを含む酢酸緩衝液（２０ｍＭ、ｐＨ
４．０）で目的物質である０．１９ＡＩを分離溶出させ
た。得られた溶出液をさらに予め３５０ｍＭ塩化ナトリ
ウムを含有する２０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）で平
衡化しておいた「ブチル−トヨパールカラム」（東ソー
社製）にかけて充分洗浄した。その後、１００ｍＭ塩化
ナトリウムを含有する２０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．
０）で目的物質である０．１９ＡＩを分離溶出させ、得
られた液を水に対して充分に透析後、凍結乾燥して１．
５ｇの白色粉末を得た。得られた粉末の総蛋白質含量、
０．１９ＡＩ含量およびアミラーゼ阻害活性を上記した
方法で測定したところ、下記の表３に示すとおりであっ
た。
成物１０ｇに１２０ｍｌの酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）を
加え３０分間撹拌し、酢酸を加えてｐＨを４．５に調整
した。この液を予め同じ緩衝液で平衡化しておいた「Ｃ
Ｍ−トヨパールカラム」（東ソー社製）にかけ、２０ｍ
Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）で充分洗浄後、３５０ｍＭ
の塩化ナトリウムを含む酢酸緩衝液（２０ｍＭ、ｐＨ
４．０）で目的物質である０．１９ＡＩを分離溶出させ
た。得られた溶出液をさらに予め３５０ｍＭ塩化ナトリ
ウムを含有する２０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）で平
衡化しておいた「ブチル−トヨパールカラム」（東ソー
社製）にかけて充分洗浄した。その後、１００ｍＭ塩化
ナトリウムを含有する２０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．
０）で目的物質である０．１９ＡＩを分離溶出させ、得
られた液を水に対して充分に透析後、凍結乾燥して１．
５ｇの白色粉末を得た。得られた粉末の総蛋白質含量、
０．１９ＡＩ含量およびアミラーゼ阻害活性を上記した
方法で測定したところ、下記の表３に示すとおりであっ
た。
【００７２】《実施例 ３》小麦粉から澱粉やグルテン
を採取する際に排出されるドウまたはバッターの水洗廃
液６．２トンに塩酸を加えてｐＨ３．０に調整し、３０
分間放置した後、アンモニアでｐＨ６．５に調整したと
ころ不溶物が沈殿した。この沈殿物を除去して、５．２
トンの上澄み液を回収した。この上澄み液に濃度が３０
０ｐｐｍになるような量でアルギン酸ナトリウムを加
え、その後塩酸を加えてｐＨ４．２に調整して３０分間
撹拌した。生じた沈殿を遠心分離して回収し（６５ｋ
ｇ）、６５０リットルの水を加えて分散させ、塩化カル
シウム４．７ｋｇを添加してよく撹拌した。次いで、ア
ンモニアで分散液のｐＨを８．５に調整し、１時間放置
した後、沈殿物を遠心分離して除き、上澄み液６００リ
ットルを回収した。
を採取する際に排出されるドウまたはバッターの水洗廃
液６．２トンに塩酸を加えてｐＨ３．０に調整し、３０
分間放置した後、アンモニアでｐＨ６．５に調整したと
ころ不溶物が沈殿した。この沈殿物を除去して、５．２
トンの上澄み液を回収した。この上澄み液に濃度が３０
０ｐｐｍになるような量でアルギン酸ナトリウムを加
え、その後塩酸を加えてｐＨ４．２に調整して３０分間
撹拌した。生じた沈殿を遠心分離して回収し（６５ｋ
ｇ）、６５０リットルの水を加えて分散させ、塩化カル
シウム４．７ｋｇを添加してよく撹拌した。次いで、ア
ンモニアで分散液のｐＨを８．５に調整し、１時間放置
した後、沈殿物を遠心分離して除き、上澄み液６００リ
ットルを回収した。
【００７３】回収した上澄み液にリン酸ナトリウムをそ
の濃度が０．１％になるような量で添加し、アンモニア
でｐＨ６．５に調整した後、８０℃の温度で１５分間熱
処理を行った。熱変性による沈殿物を遠心分離して除去
した後、限外濾過膜（分子量２０，０００；日東電工製
「ＮＴＵ−３２５０ＣＩＲ」）を使って脱塩、濃縮を行
い、凍結乾燥して乾燥粉末１．４ｋｇを得た。この乾燥
粉末５００ｍｇに５ｍｌの１００ｍＭ 塩化ナトリウム
を含む２０ｍＭ緩衝液（ｐＨ４．０）を加えて溶解さ
せ、不溶物を遠心分離して除き、得られた液をSephadex
Ｇ−１００にかけてゲル濾過クロマトグラフィーを行
った。活性のあるピーク部分の溶出液を分取し、透析チ
ューブに入れて、２０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）に
対して４℃で一晩透析した。透析が終了した液を、予め
同じ緩衝液で平衡化しておいた陽イオン交換樹脂カラム
（ＣＭ−トパール）に通液し、目的物質を吸着させた。
の濃度が０．１％になるような量で添加し、アンモニア
でｐＨ６．５に調整した後、８０℃の温度で１５分間熱
処理を行った。熱変性による沈殿物を遠心分離して除去
した後、限外濾過膜（分子量２０，０００；日東電工製
「ＮＴＵ−３２５０ＣＩＲ」）を使って脱塩、濃縮を行
い、凍結乾燥して乾燥粉末１．４ｋｇを得た。この乾燥
粉末５００ｍｇに５ｍｌの１００ｍＭ 塩化ナトリウム
を含む２０ｍＭ緩衝液（ｐＨ４．０）を加えて溶解さ
せ、不溶物を遠心分離して除き、得られた液をSephadex
Ｇ−１００にかけてゲル濾過クロマトグラフィーを行
った。活性のあるピーク部分の溶出液を分取し、透析チ
ューブに入れて、２０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）に
対して４℃で一晩透析した。透析が終了した液を、予め
同じ緩衝液で平衡化しておいた陽イオン交換樹脂カラム
（ＣＭ−トパール）に通液し、目的物質を吸着させた。
【００７４】陽イオン交換樹脂カラムに３００ｍＭ塩化
ナトリウムを含む２０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）を
通液し、不純物を溶出させた後、０．０５Ｎ水酸化ナト
リウム溶液（ｐＨ１２．２）で目的物質を溶出させた。
溶出液に直ちに塩酸を加えてｐＨを３．０に調整し、透
析チューブを使って充分脱塩した後、凍結乾燥して白色
粉末状の生成物を得た。得られた生成物の蛋白質含量お
よび０．２６ＡＩ含量を上記の方法で測定したところ、
それぞれ９４％および８８％であった。また、この生成
物の人膵臓α−アミラーゼ阻害活性を上記した方法で測
定したところ、下記の表３に示すとおりであった。
ナトリウムを含む２０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）を
通液し、不純物を溶出させた後、０．０５Ｎ水酸化ナト
リウム溶液（ｐＨ１２．２）で目的物質を溶出させた。
溶出液に直ちに塩酸を加えてｐＨを３．０に調整し、透
析チューブを使って充分脱塩した後、凍結乾燥して白色
粉末状の生成物を得た。得られた生成物の蛋白質含量お
よび０．２６ＡＩ含量を上記の方法で測定したところ、
それぞれ９４％および８８％であった。また、この生成
物の人膵臓α−アミラーゼ阻害活性を上記した方法で測
定したところ、下記の表３に示すとおりであった。
【００７５】《実施例 ４》小麦粉１００ｇに１％塩化
ナトリウム水溶液１リットルを加え、室温で２時間撹拌
した。遠心分離して沈殿物を除き、得られた上澄液を分
取し、硫酸アンモニウムを５０％飽和となるように加
え、室温で１時間撹拌した後、更に１時間静置した。遠
心分離によって沈殿物を分取し、これを２００ミリリッ
トルの蒸留水に入れて分散させ、脱イオン水に対して一
晩透析した。透析した液に塩酸を加えてｐＨ４．０に調
整した後、残存する沈殿物を遠心分離して除去して、上
澄み液を回収した。得られた上澄み液を、予め酢酸緩衝
液（２０ｍＭ、ｐＨ４．０）で平衡化しておいた陽イオ
ン交換樹脂カラム（ＣＭ−セファロースカラム）に通液
し、目的物質をイオン交換樹脂に吸着させた。同じ緩衝
液で充分に洗浄した後、４００ｍＭ塩化ナトリウムを含
む２０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）で不純物を溶出さ
せた。
ナトリウム水溶液１リットルを加え、室温で２時間撹拌
した。遠心分離して沈殿物を除き、得られた上澄液を分
取し、硫酸アンモニウムを５０％飽和となるように加
え、室温で１時間撹拌した後、更に１時間静置した。遠
心分離によって沈殿物を分取し、これを２００ミリリッ
トルの蒸留水に入れて分散させ、脱イオン水に対して一
晩透析した。透析した液に塩酸を加えてｐＨ４．０に調
整した後、残存する沈殿物を遠心分離して除去して、上
澄み液を回収した。得られた上澄み液を、予め酢酸緩衝
液（２０ｍＭ、ｐＨ４．０）で平衡化しておいた陽イオ
ン交換樹脂カラム（ＣＭ−セファロースカラム）に通液
し、目的物質をイオン交換樹脂に吸着させた。同じ緩衝
液で充分に洗浄した後、４００ｍＭ塩化ナトリウムを含
む２０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）で不純物を溶出さ
せた。
【００７６】次いで、０．０５Ｎ水酸化ナトリウム水溶
液（ｐＨ１２．２）で目的物質を溶出させ、溶出液に塩
酸を加えてｐＨを３．０に調整した後、１００ｍＭ塩化
ナトリウムを含む５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）に
対して充分透析した。透析した液を限外濾過膜（分子量
２０，０００）にて濃縮した後、Sephadex Ｇ−７５で
ゲル濾過クロマトグラフィー（２０ｍＭ酢酸緩衝液；ｐ
Ｈ４．０、１００ｍＭ塩化ナトリウム）を行い、更に精
製した。精製後、透析チューブを使用して脱イオン水に
対して充分に透析した後、凍結乾燥して白色粉末状の生
成物を得た。得られた生成物の蛋白質含量および０．２
６ＡＩ含量を上記の方法で測定したところ、それぞれ９
６％および９３％であった。また、この生成物の人膵臓
α−アミラーゼ阻害活性を上記した方法で測定したとこ
ろ、下記の表３に示すとおりであった。
液（ｐＨ１２．２）で目的物質を溶出させ、溶出液に塩
酸を加えてｐＨを３．０に調整した後、１００ｍＭ塩化
ナトリウムを含む５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）に
対して充分透析した。透析した液を限外濾過膜（分子量
２０，０００）にて濃縮した後、Sephadex Ｇ−７５で
ゲル濾過クロマトグラフィー（２０ｍＭ酢酸緩衝液；ｐ
Ｈ４．０、１００ｍＭ塩化ナトリウム）を行い、更に精
製した。精製後、透析チューブを使用して脱イオン水に
対して充分に透析した後、凍結乾燥して白色粉末状の生
成物を得た。得られた生成物の蛋白質含量および０．２
６ＡＩ含量を上記の方法で測定したところ、それぞれ９
６％および９３％であった。また、この生成物の人膵臓
α−アミラーゼ阻害活性を上記した方法で測定したとこ
ろ、下記の表３に示すとおりであった。
【００７７】《比較例１および２》比較のために、既知
のアミラーゼ阻害物質である０．５３ＡＩおよび既知の
アミラーゼ阻害物質である０．２８ＡＩについても同様
にして人膵臓α−アミラーゼ阻害活性を測定したとこ
ろ、下記の表３のとおりであった。
のアミラーゼ阻害物質である０．５３ＡＩおよび既知の
アミラーゼ阻害物質である０．２８ＡＩについても同様
にして人膵臓α−アミラーゼ阻害活性を測定したとこ
ろ、下記の表３のとおりであった。
【００７８】
【表３】 総蛋白質含量 アミラーゼ阻害蛋白質 アミラーゼ阻害活性 生成物 （％） 種 類 含 量 （Ｕ／ｍｇ） （％） 実施例１ 95 0.26AI 91 23,300 実施例２ 100 0.26AI 100 26,100 実施例３ 94 0.26AI 88 22,030 実施例４ 96 0.26AI 93 23,500 参考例１ 99 0.26AI 15 1,350 参考例２ 84 0.19AI 21 3,550 参考例３ 60 0.19AI 15 2,160 参考例４ 100 0.19AI 100 20,300 比較例１ 100 0.53AI 100 3,940 比較例２ 100 0.28AI 100 840
【００７９】上記の表３の結果から、本発明の０．２６
ＡＩは、従来のアミラーゼ阻害物質（０．５３ＡＩおよ
び０．２８ＡＩ）などに比べて、数倍〜数十倍もの極め
て高いアミラーゼ阻害活性を有すること、また０．１９
ＡＩに比べても約３０％高いアミラーゼ阻害活性を有す
ることがわかる。
ＡＩは、従来のアミラーゼ阻害物質（０．５３ＡＩおよ
び０．２８ＡＩ）などに比べて、数倍〜数十倍もの極め
て高いアミラーゼ阻害活性を有すること、また０．１９
ＡＩに比べても約３０％高いアミラーゼ阻害活性を有す
ることがわかる。
【００８０】《実施例 ５》実施例２で得られた０．２
６ＡＩと参考例４で得られた０．１９ＡＩ、および残部
として小麦グルテンを用いて、０．２６ＡＩおよび０．
１９ＡＩを小麦蛋白質の全重量に基づいて下記の表４に
示す量で含有する小麦蛋白質を調製し、そのアミラーゼ
阻害活性を上記した方法で測定したところ、表４に示す
とおりであった。
６ＡＩと参考例４で得られた０．１９ＡＩ、および残部
として小麦グルテンを用いて、０．２６ＡＩおよび０．
１９ＡＩを小麦蛋白質の全重量に基づいて下記の表４に
示す量で含有する小麦蛋白質を調製し、そのアミラーゼ
阻害活性を上記した方法で測定したところ、表４に示す
とおりであった。
【００８１】
【表４】 0.26AI含量 0.19AI含量 0.26A1と0.19AIの合計含量 アミラーゼ阻害活性 (重量％) (重量％) (重量％) （Ｕ／ｍｇ） 20 5 25 6,300 15 10 25 5,600 5 20 25 5,100 35 5 40 9,800 20 20 40 8,900 10 30 40 8,400
【００８２】上記表４の結果から、０．２６ＡＩおよび
０．１９ＡＩの合計含有量が２０重量％以上である蛋白
質は高いアミラーゼ阻害活性を有しており、アミラーゼ
阻害剤として有効に使用し得ることがわかる。
０．１９ＡＩの合計含有量が２０重量％以上である蛋白
質は高いアミラーゼ阻害活性を有しており、アミラーゼ
阻害剤として有効に使用し得ることがわかる。
【００８３】《実施例 ６》糖尿病でない健康な男子２
名と女子１名を１０時間絶食させた後、米飯３００ｇと
無糖の紅茶２００ｍｌを摂取させ、食後３０分ごとに血
液を採取してその血糖値およびインシュリン量を測定す
ると共に、満腹感の持続性を評価した。試験は各人につ
き合計５回、１週間つづ間隔をおいて実施した。該５回
の試験のうちの第１回目は実施例１の生成物を、第２回
目は参考例１の生成物を、第３回目は実施例５の生成物
（０．２６ＡＩ含量が２０重量％で０．１９ＡＩ含量が
２０重量％の小麦蛋白質）を、そして第４回目は参考例
３の生成物をそれぞれ３５０ｍｇずつ紅茶に入れて摂取
させた。また、第５回目は生成物を入れずに米飯と紅茶
のみを摂取させた（対照）。その結果を下記の表５に示
す。なお、表５の結果は３名の平均値を採ったものであ
る。
名と女子１名を１０時間絶食させた後、米飯３００ｇと
無糖の紅茶２００ｍｌを摂取させ、食後３０分ごとに血
液を採取してその血糖値およびインシュリン量を測定す
ると共に、満腹感の持続性を評価した。試験は各人につ
き合計５回、１週間つづ間隔をおいて実施した。該５回
の試験のうちの第１回目は実施例１の生成物を、第２回
目は参考例１の生成物を、第３回目は実施例５の生成物
（０．２６ＡＩ含量が２０重量％で０．１９ＡＩ含量が
２０重量％の小麦蛋白質）を、そして第４回目は参考例
３の生成物をそれぞれ３５０ｍｇずつ紅茶に入れて摂取
させた。また、第５回目は生成物を入れずに米飯と紅茶
のみを摂取させた（対照）。その結果を下記の表５に示
す。なお、表５の結果は３名の平均値を採ったものであ
る。
【００８４】
【表５】 第１回目 第２回目 第３回目 第４回目 第５回目 生成物の種類 実施例１ 参考例１ 実施例５ 参考例３ な し (0.26AI) (0.26AI) (0.26AI＋0.19AI) (0.19AI) (対 照) (91％) (15％) (20％＋20％) (15％) 血 糖 値(mg/dl) : 食前 101 103 101 99 102 食後30分 128 158 141 167 162 60分 150 187 155 178 183 90分 145 151 148 140 148 120分 116 130 123 127 124 インシュリン量(μU/ml) : 食前 9 12 8 10 8 食後30分 14 27 15 25 23 60分 26 38 30 35 32 90分 22 30 24 36 33 120分 20 33 21 33 30 満 腹 感 食前 1.9 1.7 2.0 2.1 2.1 食後30分 5.3 4.9 5.0 4.9 4.8 60分 4.3 4.0 4.4 4.0 4.1 90分 4.9 3.3 4.8 3.7 3.5 120分 4.1 3.1 3.7 3.2 3.0
【００８５】上記表５の結果から、０．２６ＡＩを２０
重量％以上含有する実施例１の生成物、および０．２６
ＡＩと０．１９ＡＩの合計含有量が２０重量％以上であ
る実施例５の生成物を用いた場合には、血液中の血糖値
上昇抑制およびインシュリン分泌の抑制に効果があり、
且つ満腹感を持続させ得ることがわかる。
重量％以上含有する実施例１の生成物、および０．２６
ＡＩと０．１９ＡＩの合計含有量が２０重量％以上であ
る実施例５の生成物を用いた場合には、血液中の血糖値
上昇抑制およびインシュリン分泌の抑制に効果があり、
且つ満腹感を持続させ得ることがわかる。
【００８６】
【発明の効果】本発明の新規な０．２６ＡＩは高いアミ
ラーゼ阻害活性を有しており、そして０．２６ＡＩの含
有量が２０重量％以上であるかまたは０．２６ＡＩと
０．１９ＡＩの合計含有量が２０重量％以上である本発
明のアミラーゼ阻害剤、血糖値上昇抑制剤、インシュリ
ン調節剤および／または食欲抑制剤は、人膵臓α−アミ
ラーゼに対して高い阻害活性を有し人間に極めて有効で
あり、血糖値の上昇抑制、インシュリン分泌の調節に高
い効果を有し、満腹感を持続させて食欲抑制を容易にす
ることができ、高血糖症、糖尿病、高脂血症、動脈硬
化、肥満などの予防および治療に極めて有効である。特
に、０．２６ＡＩを含む本発明の剤は、米飯のような加
熱調理した澱粉の消化抑制に対して有効であり、アミラ
ーゼの活性を阻害して澱粉が糖に分解されるのを抑制し
て血糖値の上昇を抑制することができる。そして、本発
明の剤による上記した種々の優れた効果は、経口投与に
よって極めて簡単に達成することができる。さらに、本
発明の上記した剤は、副作用を生ずることなく、上記し
た種々の優れた効果を奏することができる。
ラーゼ阻害活性を有しており、そして０．２６ＡＩの含
有量が２０重量％以上であるかまたは０．２６ＡＩと
０．１９ＡＩの合計含有量が２０重量％以上である本発
明のアミラーゼ阻害剤、血糖値上昇抑制剤、インシュリ
ン調節剤および／または食欲抑制剤は、人膵臓α−アミ
ラーゼに対して高い阻害活性を有し人間に極めて有効で
あり、血糖値の上昇抑制、インシュリン分泌の調節に高
い効果を有し、満腹感を持続させて食欲抑制を容易にす
ることができ、高血糖症、糖尿病、高脂血症、動脈硬
化、肥満などの予防および治療に極めて有効である。特
に、０．２６ＡＩを含む本発明の剤は、米飯のような加
熱調理した澱粉の消化抑制に対して有効であり、アミラ
ーゼの活性を阻害して澱粉が糖に分解されるのを抑制し
て血糖値の上昇を抑制することができる。そして、本発
明の剤による上記した種々の優れた効果は、経口投与に
よって極めて簡単に達成することができる。さらに、本
発明の上記した剤は、副作用を生ずることなく、上記し
た種々の優れた効果を奏することができる。
【００８７】
【００８８】配列番号：１ 配列の長さ：１２４ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 配列 Ser Gly Pro Trp Met Cys Tyr Pro Gly Tyr Ala Phe Lys Val Pro Ala 1 5 10 15 Leu Pro Gly Cys Arg Pro Val Leu Lys Leu Gln Cys Asn Gly Ser Gln 20 25 30 Val Pro Glu Ala Val Leu Arg Asp Cys Cys Gln Gln Leu Ala Asp Ile 35 40 45 Ser Glu Trp Cys Arg Cys Gly Ala Leu Tyr Ser Met Leu Asp Ser Met 50 55 60 Tyr Lys Glu His Gly Val Gln Glu Gly Gln Ala Gly Thr Gly Ala Phe 65 70 75 80 Pro Ser Cys Arg Arg Glu Val Val Lys Leu Thr Ala Ala Ser Ile Thr 85 90 95 Ala Val Cys Lys Leu Pro Ile Val Ile Asp Ala Ser Gly Asp Gly Ala 100 105 110 Tyr Val Cys Lys Gly Val Ala Ala Tyr Pro Asp Ala 115 120
【００８９】配列番号：２ 配列の長さ：１２４ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 配列 Ser Gly Pro Trp Met Cys Tyr Pro Gly Gln Ala Phe Gln Val Pro Ala 1 5 10 15 Leu Pro Ala Cys Arg Pro Leu Leu Arg Leu Gln Cys Asn Gly Ser Gln 20 25 30 Val Pro Glu Ala Val Leu Arg Asp Cys Cys Gln Gln Leu Ala His Ile 35 40 45 Ser Glu Trp Cys Arg Cys Gly Ala Leu Tyr Ser Met Leu Asp Ser Met 50 55 60 Tyr Lys Glu His Gly Ala Gln Glu Gly Gln Ala Gly Thr Gly Ala Phe 65 70 75 80 Pro Arg Cys Arg Arg Glu Val Val Lys Leu Thr Ala Ala Ser Ile Thr 85 90 95 Ala Val Cys Arg Leu Pro Ile Val Val Asp Ala Ser Gly Asp Gly Ala 100 105 110 Tyr Val Cys Lys Asp Val Ala Ala Tyr Pro Asp Ala 115 120
【００９０】配列番号：３ 配列の長さ：１２４ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 配列 Ser Gly Pro Trp Met Cys Tyr Pro Gly Gln Ala Phe Gln Val Pro Ala 1 5 10 15 Leu Pro Gly Cys Arg Pro Leu Leu Lys Leu Gln Cys Asn Gly Ser Gln 20 25 30 Val Pro Glu Ala Val Leu Arg Asp Cys Cys Gln Gln Leu Ala Asp Ile 35 40 45 Ser Glu Trp Pro Arg Cys Gly Ala Leu Tyr Ser Met Leu Asp Ser Met 50 55 60 Tyr Lys Glu His Gly Val Ser Glu Gly Gln Ala Gly Thr Gly Ala Phe 65 70 75 80 Pro Ser Cys Arg Arg Glu Val Val Lys Leu Thr Ala Ala Ser Ile Thr 85 90 95 Ala Val Cys Arg Leu Pro Ile Val Val Asp Ala Ser Gly Asp Gly Ala 100 105 110 Tyr Val Cys Lys Asp Val Ala Ala Tyr Pro Asp Ala 115 120
【００９１】配列番号：４ 配列の長さ：１２３ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 配列 Ser Gly Pro Trp Ser Trp Cys Asn Pro Ala Thr Gly Tyr Lys Val Ser 1 5 10 15 Ala Leu Thr Gly Cys Arg Ala Met Val Lys Leu Gln Cys Val Gly Ser 20 25 30 Gln Val Pro Glu Ala Val Leu Arg Asp Cys Cys Gln Gln Leu Ala Asp 35 40 45 Ile Asn Asn Glu Trp Cys Arg Cys Gly Asp Leu Ser Ser Met Leu Arg 50 55 60 Ala Val Tyr Gln Glu Leu Gly Val Arg Glu Gly Lys Glu Val Leu Pro 65 70 75 80 Gly Cys Arg Lys Glu Val Met Lys Leu Thr Ala Ala Ser Val Pro Glu 85 90 95 Val Cys Lys Val Pro Ile Pro Asn Pro Ser Gly Asp Arg Ala Gly Val 100 105 110 Cys Tyr Gly Asp Trp Cys Ala Tyr Pro Asp Val 115 120
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ２３Ｌ 1/30 Ｂ Ａ６１Ｋ 38/55 ＡＣＮ ＡＤＰ Ｃ１２Ｎ 9/99 9152−4Ｂ (72)発明者 村山 隆二 兵庫県宍粟郡山崎町三谷40番地１ (72)発明者 松原 央 大阪府豊能郡豊能町ときわ台１丁目16番地 の10
Claims (7)
- 【請求項１】 配列番号１で表されるサブユニット２個
からなる蛋白質であることを特徴とするアミラーゼ阻害
物質。 - 【請求項２】 小麦、小麦粉または小麦グルテン等の小
麦由来物質を水、希塩水溶液、緩衝液、酸、希アルカリ
または含水アルコールで抽出して得られるアミラーゼ阻
害物質を含有する液を、必要に応じて精製処理して夾雑
物を除いた後、陽イオン交換体で処理してアミラーゼ阻
害物質を吸着させ、次いでｐＨ９〜１３のアルカリ溶液
で処理して陽イオン交換体からアミラーゼ阻害物質を溶
出させた後、直ちにアミラーゼ阻害物質を含有する溶出
液のｐＨを酸性に調整し、ｐＨ調整された液からアミラ
ーゼ阻害物質を回収することを特徴とする請求項１のア
ミラーゼ阻害物質の調製方法。 - 【請求項３】 小麦澱粉製造時に得られる小麦澱粉廃液
を、必要に応じて精製処理して夾雑物を除いた後、陽イ
オン交換体で処理してアミラーゼ阻害物質を吸着させ、
次いでｐＨ９〜１３のアルカリ溶液で処理して陽イオン
交換体からアミラーゼ阻害物質を溶出させた後、直ちに
アミラーゼ阻害物質を含有する溶出液のｐＨを酸性に調
整し、ｐＨ調整された液からアミラーゼ阻害物質を回収
することを特徴とする請求項１のアミラーゼ阻害物質の
調製方法。 - 【請求項４】 配列番号１で表されるサブユニット２個
からなる蛋白質の含有量が２０重量％以上であるか、ま
たは配列番号１で表されるサブユニット２個からなる蛋
白質と配列番号２で表されるサブユニット２個からなる
蛋白質の合計含有量が２０重量％以上であることを特徴
とするアミラーゼ阻害剤。 - 【請求項５】 配列番号１で表されるサブユニット２個
からなる蛋白質の含有量が２０重量％以上であるか、ま
たは配列番号１で表されるサブユニット２個からなる蛋
白質と配列番号２で表されるサブユニット２個からなる
蛋白質の合計含有量が２０重量％以上であることを特徴
とする血糖値上昇抑制剤またはインシュリン分泌調節
剤。 - 【請求項６】 配列番号１で表されるサブユニット２個
からなる蛋白質の含有量が２０重量％以上であるか、ま
たは配列番号１で表されるサブユニット２個からなる蛋
白質と配列番号２で表されるサブユニット２個からなる
蛋白質の合計含有量が２０重量％以上であることを特徴
とする食欲抑制剤。 - 【請求項７】 配列番号１で表されるサブユニット２個
からなる蛋白質を１食当たり３０〜２５００ｍｇに調整
される食品、または配列番号１で表されるサブユニット
２個からなる蛋白質と配列番号２で表されるサブユニッ
ト２個からなる蛋白質の合計含量が１食当たり３０〜２
５００ｍｇに調整される食品。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP07921394A JP3504719B2 (ja) | 1993-03-29 | 1994-03-28 | アミラーゼ阻害活性を有する物質 |
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9188193 | 1993-03-29 | ||
| JP5-91881 | 1993-03-29 | ||
| JP5-148423 | 1993-05-28 | ||
| JP14842393 | 1993-05-28 | ||
| JP07921394A JP3504719B2 (ja) | 1993-03-29 | 1994-03-28 | アミラーゼ阻害活性を有する物質 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0741499A true JPH0741499A (ja) | 1995-02-10 |
| JP3504719B2 JP3504719B2 (ja) | 2004-03-08 |
Family
ID=27302952
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP07921394A Expired - Lifetime JP3504719B2 (ja) | 1993-03-29 | 1994-03-28 | アミラーゼ阻害活性を有する物質 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3504719B2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0785214A2 (en) | 1996-01-18 | 1997-07-23 | Nisshin Flour Milling Co., Ltd. | Amylase inhibitors |
| EP0784978A2 (en) | 1996-01-18 | 1997-07-23 | Nisshin Flour Milling Co., Ltd. | Agents for inhibiting accumulation of visceral fat |
| JP2006328017A (ja) * | 2005-05-30 | 2006-12-07 | Nagata Sangyo Kk | α−アミラーゼ阻害活性を有する蛋白質 |
-
1994
- 1994-03-28 JP JP07921394A patent/JP3504719B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0785214A2 (en) | 1996-01-18 | 1997-07-23 | Nisshin Flour Milling Co., Ltd. | Amylase inhibitors |
| EP0784978A2 (en) | 1996-01-18 | 1997-07-23 | Nisshin Flour Milling Co., Ltd. | Agents for inhibiting accumulation of visceral fat |
| US5726291A (en) * | 1996-01-18 | 1998-03-10 | Nisshin Flour Milling Co., Ltd. | Amylase inhibitors |
| US5789380A (en) * | 1996-01-18 | 1998-08-04 | Nisshin Flour Milling Co., Ltd. | Agents for inhibiting accumulation of visceral fat |
| JP2006328017A (ja) * | 2005-05-30 | 2006-12-07 | Nagata Sangyo Kk | α−アミラーゼ阻害活性を有する蛋白質 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3504719B2 (ja) | 2004-03-08 |
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