JPH074225B2 - 培養用バック - Google Patents
培養用バックInfo
- Publication number
- JPH074225B2 JPH074225B2 JP17409490A JP17409490A JPH074225B2 JP H074225 B2 JPH074225 B2 JP H074225B2 JP 17409490 A JP17409490 A JP 17409490A JP 17409490 A JP17409490 A JP 17409490A JP H074225 B2 JPH074225 B2 JP H074225B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- culture
- cells
- weight
- container body
- vinyl chloride
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、動物組織等の細胞の培養に使用される培養用
バックに関するものである。
バックに関するものである。
（従来の技術） 動物組織等の培養を行う場合、従来はシャーレまたはフ
ラスコに細胞と培養液とを入れ、これを炭酸ガス培養器
内に置き、この培養器内に滅菌された空気／炭酸ガスの
混合ガス（一般には、炭酸ガス濃度５容量％）を導入
し、この混合ガス雰囲気下に細胞と培養液とを置くこと
によって行っていた。
ラスコに細胞と培養液とを入れ、これを炭酸ガス培養器
内に置き、この培養器内に滅菌された空気／炭酸ガスの
混合ガス（一般には、炭酸ガス濃度５容量％）を導入
し、この混合ガス雰囲気下に細胞と培養液とを置くこと
によって行っていた。
この混合ガス雰囲気下に細胞と培養液とを置く方法は、
シャーレまたはフラスコに気体が通過できるような僅か
な隙間をつくり、その隙間から炭酸ガス培養器内の混合
ガスをシャーレまたはフラスコ内に入れ、培養液と接触
させることにより行っていた。
シャーレまたはフラスコに気体が通過できるような僅か
な隙間をつくり、その隙間から炭酸ガス培養器内の混合
ガスをシャーレまたはフラスコ内に入れ、培養液と接触
させることにより行っていた。
（発明が解決しようとする課題） 炭酸ガス培養器内の混合ガスは、あらかじめ滅菌されて
いるので、これを培養液と接触させても、培養液を雑菌
汚染することはない。しかし、炭酸ガス培養器の扉を開
けた時などに、空気中の雑菌が培養器内に取り込まれ、
それが培養液と接触して、該培養液を汚染するといった
不都合を生じることとなる。
いるので、これを培養液と接触させても、培養液を雑菌
汚染することはない。しかし、炭酸ガス培養器の扉を開
けた時などに、空気中の雑菌が培養器内に取り込まれ、
それが培養液と接触して、該培養液を汚染するといった
不都合を生じることとなる。
そのため、フラスコ等のキャップ口に滅菌フィルタを取
り付けることも考えられているが、この場合、フィルタ
の取付け面積に制約があり、大量培養には適当でない。
り付けることも考えられているが、この場合、フィルタ
の取付け面積に制約があり、大量培養には適当でない。
本発明は、係る実情に鑑みてなされたもので、炭酸ガス
等のガスが流通可能でかつ単位内容量当たりガス透過面
積に自在にコントロール可能な培養用バックを提供する
ことを目的としている。
等のガスが流通可能でかつ単位内容量当たりガス透過面
積に自在にコントロール可能な培養用バックを提供する
ことを目的としている。
（課題を解決するための手段） 本発明は培養用バックは、塩化ビニル樹脂または塩化ビ
ニルとこれと共重合しうる単量体との共重合樹脂100重
量部と、エチレン・ｎ−ブチルアクリレート・一酸化炭
素共重合体150〜260重量部とからなる厚さ0.1〜0.5mmの
シート状材料を融着加工してなる容器本体に、少なくと
も一つの開口部が形成されたものである。
ニルとこれと共重合しうる単量体との共重合樹脂100重
量部と、エチレン・ｎ−ブチルアクリレート・一酸化炭
素共重合体150〜260重量部とからなる厚さ0.1〜0.5mmの
シート状材料を融着加工してなる容器本体に、少なくと
も一つの開口部が形成されたものである。
細胞を培養液中にて培養する場合、細胞が生長するに
は、酸素ガスが必要である。また、培養系内のPHを約7.
4〜7.6にコントロールするために炭酸ガスが必要であ
る。このPHが7.8を越えると培養障害が起こることとな
る。これらガスが自由に通気し、培養液を貯蔵しうる材
料としては、高分子系樹脂が最適である。また、容器を
構成する材料として要求される項目は、上記以外に密
閉性を必要とするため、融着接合が可能なこと、顕微
鏡等で細胞の生長度合いを調べるため、透明なフィルム
であること等が要求される。
は、酸素ガスが必要である。また、培養系内のPHを約7.
4〜7.6にコントロールするために炭酸ガスが必要であ
る。このPHが7.8を越えると培養障害が起こることとな
る。これらガスが自由に通気し、培養液を貯蔵しうる材
料としては、高分子系樹脂が最適である。また、容器を
構成する材料として要求される項目は、上記以外に密
閉性を必要とするため、融着接合が可能なこと、顕微
鏡等で細胞の生長度合いを調べるため、透明なフィルム
であること等が要求される。
これらの要求を満たす材料として、塩化ビニル樹脂また
は塩化ビニルとこれと共重合しうる単量体との共重合樹
脂（例えば、塩化ビニル・エチレン共重合体、塩化ビニ
ル・プロピレン共重合体、塩化ビニル・酢酸ビニル共重
合体）100重量部と、エチレン・ｎ−ブチルアクリレー
ト・一酸化炭素共重合体150〜260重量部とからなるシー
ト状材料が使用される。
は塩化ビニルとこれと共重合しうる単量体との共重合樹
脂（例えば、塩化ビニル・エチレン共重合体、塩化ビニ
ル・プロピレン共重合体、塩化ビニル・酢酸ビニル共重
合体）100重量部と、エチレン・ｎ−ブチルアクリレー
ト・一酸化炭素共重合体150〜260重量部とからなるシー
ト状材料が使用される。
また、シート状材料の厚みとしては、ガス透過性と、内
容液を充填した際に容器が破裂することがない厚みとさ
れる。好適には、0.1〜0.5mmである。0.5mmを越える
と、シートの透明性が劣り、内容物の検査に支障をきた
すこととなる。さらに、このようになる容器本体には、
少なくとも一つの開口部が必要とされる。この開口部
は、培養液の導入、排出、洗浄液の導入、細胞の導入、
培養された細胞の回収または培養中のサンプリングなど
に際して使用される。開口部は、これらの使用目的に応
じて、別々に設けられてもよい。この開口部は、容器本
体に、該容器本体と同じ材料で構成されたチューブ（例
えば、内径３〜５Φのチューブ）を取り付けることによ
って設けることができる。これら、容器本体およびチュ
ーブ等は、高周波融着または熱融着等により融着接合し
うるので、完全な密閉性が保持される。
容液を充填した際に容器が破裂することがない厚みとさ
れる。好適には、0.1〜0.5mmである。0.5mmを越える
と、シートの透明性が劣り、内容物の検査に支障をきた
すこととなる。さらに、このようになる容器本体には、
少なくとも一つの開口部が必要とされる。この開口部
は、培養液の導入、排出、洗浄液の導入、細胞の導入、
培養された細胞の回収または培養中のサンプリングなど
に際して使用される。開口部は、これらの使用目的に応
じて、別々に設けられてもよい。この開口部は、容器本
体に、該容器本体と同じ材料で構成されたチューブ（例
えば、内径３〜５Φのチューブ）を取り付けることによ
って設けることができる。これら、容器本体およびチュ
ーブ等は、高周波融着または熱融着等により融着接合し
うるので、完全な密閉性が保持される。
本発明の培養用バックは、例えば以下のようにして使用
される。エチレンオキサイドガス滅菌された後（滅菌
後、滅菌された袋にいれて販売などされてもよい）、ク
リーンベンチ内で開口部から容器本体内へ培養液および
細胞が導入され、ピンチコックなどで開口部が密閉状態
とされる。これが培養に必要なガス雰囲気下で静置培養
され、その後開口部から培養液および細胞が取り出され
ることによって使用される。
される。エチレンオキサイドガス滅菌された後（滅菌
後、滅菌された袋にいれて販売などされてもよい）、ク
リーンベンチ内で開口部から容器本体内へ培養液および
細胞が導入され、ピンチコックなどで開口部が密閉状態
とされる。これが培養に必要なガス雰囲気下で静置培養
され、その後開口部から培養液および細胞が取り出され
ることによって使用される。
本発明においては、上述の開口部をピンチコック等で閉
じる代わりに、開口部に滅菌済のキャップやゴム栓を取
付けておいてもよい。また、培養中のサンプリングのた
めに、内部に膜が形成されたチューブまたは混注ゴムボ
タンが嵌挿されたチューブなどを、前述の開口部の他に
容器本体に取付けてもよい。
じる代わりに、開口部に滅菌済のキャップやゴム栓を取
付けておいてもよい。また、培養中のサンプリングのた
めに、内部に膜が形成されたチューブまたは混注ゴムボ
タンが嵌挿されたチューブなどを、前述の開口部の他に
容器本体に取付けてもよい。
（作用） 容器本体は、塩化ビニル樹脂または塩化ビニルとこれと
共重合しうる単量体との共重合樹脂100重量部と、エチ
レン・ｎ−ブチルアクリレート・一酸化炭素共重合体15
0〜260重量部とからなる厚さ0.1〜0.5mmのシート状材料
の融着加工して構成しているので、このシート状材料を
介してガスが透過するとともに、内容物を観察すること
ができる。
共重合しうる単量体との共重合樹脂100重量部と、エチ
レン・ｎ−ブチルアクリレート・一酸化炭素共重合体15
0〜260重量部とからなる厚さ0.1〜0.5mmのシート状材料
の融着加工して構成しているので、このシート状材料を
介してガスが透過するとともに、内容物を観察すること
ができる。
（実施例） 塩化ビニル・エチレン共重合体（平均重合度1300、エチ
レン含有量４重量％）100重量部と、エチレン・ｎ−ブ
チルアクリレート・一酸化炭素共重合体（ｎ−ブチルア
クリレート含有量30重量％、一酸化炭素含有量10重量
％）160重量部と、Ca−Zn系安定剤（アデカアーガス社
製マーク37）1.0重量部と、エポキシ化大豆油（アデカ
アーガス社製Ｏ−130P）15重量部と、ポリエチレンワッ
クス（三井石油化学製ハイワックス4202E）１重量部と
を押出機で溶融混練し（混練温度180℃）、得られた塩
化ビニル樹脂組成物をペレット化した。
レン含有量４重量％）100重量部と、エチレン・ｎ−ブ
チルアクリレート・一酸化炭素共重合体（ｎ−ブチルア
クリレート含有量30重量％、一酸化炭素含有量10重量
％）160重量部と、Ca−Zn系安定剤（アデカアーガス社
製マーク37）1.0重量部と、エポキシ化大豆油（アデカ
アーガス社製Ｏ−130P）15重量部と、ポリエチレンワッ
クス（三井石油化学製ハイワックス4202E）１重量部と
を押出機で溶融混練し（混練温度180℃）、得られた塩
化ビニル樹脂組成物をペレット化した。
ついで、65mmの単軸押出機に幅400mmのＴダイを取付
け、180℃で成形し、シート状材料を押出した。また、
同様の押出機でチューブを成形した。そして、これらシ
ート状材料およびチューブを融着加工して第１図に示す
ような培養用バック１を得た。
け、180℃で成形し、シート状材料を押出した。また、
同様の押出機でチューブを成形した。そして、これらシ
ート状材料およびチューブを融着加工して第１図に示す
ような培養用バック１を得た。
得られた培養用バック１は、内容量200ml、シート厚み
が0.15mmの容器本体２に、開口部10として内径4mm外径5
mmの培養液導入用チューブ11、細胞の導入用チューブ12
およびサンプリング用チューブ13が形成されたものであ
った。
が0.15mmの容器本体２に、開口部10として内径4mm外径5
mmの培養液導入用チューブ11、細胞の導入用チューブ12
およびサンプリング用チューブ13が形成されたものであ
った。
また、同様の方法で、容器本体２のシート厚みを0.4mm
とした培養用バック１を得た。
とした培養用バック１を得た。
次に、このようにして得た培養用バック１を用いて行っ
た実験例について説明する。
た実験例について説明する。
〔第１実施例〕 エチレンオキサイド滅菌した上記培養用バックに140ml
の無血清培地（極東製薬工業株式会社製）を入れ、ここ
に５×104Cells/mlとなるように細胞を加え、37℃、５
％炭酸ガス雰囲気下の炭酸ガス培養器にて、５日間静置
培養した。そして、培養５日目の細胞数を測定した。ま
た、培養用バックの全光線透過率をJIS（JIS K7105）
に基づいて測定した。結果を表１に示す。
の無血清培地（極東製薬工業株式会社製）を入れ、ここ
に５×104Cells/mlとなるように細胞を加え、37℃、５
％炭酸ガス雰囲気下の炭酸ガス培養器にて、５日間静置
培養した。そして、培養５日目の細胞数を測定した。ま
た、培養用バックの全光線透過率をJIS（JIS K7105）
に基づいて測定した。結果を表１に示す。
なお、細胞は、P3/NS1/1−Ag4−１細胞（原ATCC株番号T
IB−18大日本製薬株式会社より購入以下、株細胞NS−１
とする。）とマウスの脾臓細胞を用いて細胞融合して得
られたハイブリドーマ株を使用した。
IB−18大日本製薬株式会社より購入以下、株細胞NS−１
とする。）とマウスの脾臓細胞を用いて細胞融合して得
られたハイブリドーマ株を使用した。
また、比較対照として、カルチャーフラスコ（150cm2岩
城硝子株式会社から購入）に上記ハイブリドーマ株を５
×104Cells/mlとなるように加え、無血清培地を加えて
全量を30mlとし、同一条件の炭酸ガス培養器で５日間静
置培養した。その際、カルチャーフラスコの蓋は、僅か
に開けた状態にした。そして、培養５日目の細胞数を測
定した。結果を表１に示す。
城硝子株式会社から購入）に上記ハイブリドーマ株を５
×104Cells/mlとなるように加え、無血清培地を加えて
全量を30mlとし、同一条件の炭酸ガス培養器で５日間静
置培養した。その際、カルチャーフラスコの蓋は、僅か
に開けた状態にした。そして、培養５日目の細胞数を測
定した。結果を表１に示す。
〔第２実験例〕 RPMI1640培地（大日本製薬株式会社から購入）に牛胎児
血清を10％になるように加えて無菌的に調製した培地
を、容器本体の厚みが1cm（約140ml）になるように培養
バック（エチレンオキサイド滅菌済み）に入れた。ここ
に株細胞NS−１を５×104Cells/mlとなるように加え、3
7℃、５％炭酸ガス雰囲気下の炭酸ガス培養器にて、５
日間静置培養した。そして、培養５日目の細胞数を測定
した。結果を表２に示す。
血清を10％になるように加えて無菌的に調製した培地
を、容器本体の厚みが1cm（約140ml）になるように培養
バック（エチレンオキサイド滅菌済み）に入れた。ここ
に株細胞NS−１を５×104Cells/mlとなるように加え、3
7℃、５％炭酸ガス雰囲気下の炭酸ガス培養器にて、５
日間静置培養した。そして、培養５日目の細胞数を測定
した。結果を表２に示す。
また、比較対照として、カルチャーフラスコ（150cm2岩
城硝子株式会社から購入）に株細胞NS−１を５×104Cel
ls/mlとなるように加え、上記と同様の培地を加えて全
量を30mlとし、同一条件の炭酸ガス培養器で５日間静置
培養した。この際、カルチャーフラスコの蓋は、僅かに
開けた状態にした。そして、培養５日目の細胞数を測定
した。結果を表２に示す。
城硝子株式会社から購入）に株細胞NS−１を５×104Cel
ls/mlとなるように加え、上記と同様の培地を加えて全
量を30mlとし、同一条件の炭酸ガス培養器で５日間静置
培養した。この際、カルチャーフラスコの蓋は、僅かに
開けた状態にした。そして、培養５日目の細胞数を測定
した。結果を表２に示す。
（発明の効果） 以上述べたように、本発明によると、培養用バックを構
成するシート状材料を介してガスが透過するとともに、
内容物を観察することができるので、密閉状態培養を行
うことができ、培養液への雑菌混入を防止することがで
きる。また、融着加工によって構成されるので、容器本
体を任意の大きさに容易に作ることができる。さらに、
シート材料自体がガス透過性を有するので、ガス透過量
も自由にコントロールすることができる。
成するシート状材料を介してガスが透過するとともに、
内容物を観察することができるので、密閉状態培養を行
うことができ、培養液への雑菌混入を防止することがで
きる。また、融着加工によって構成されるので、容器本
体を任意の大きさに容易に作ることができる。さらに、
シート材料自体がガス透過性を有するので、ガス透過量
も自由にコントロールすることができる。
第１図は、本発明に係る培養用バックの全体構成の概略
を示す平面図である。 １……培養用バック 10……開口部 11……培養液導入用チューブ 12……細胞導入用チューブ 13……サンプリング用チューブ ２……容器本体
を示す平面図である。 １……培養用バック 10……開口部 11……培養液導入用チューブ 12……細胞導入用チューブ 13……サンプリング用チューブ ２……容器本体
Claims (1)
- 【請求項１】塩化ビニル樹脂または塩化ビニルとこれと
共重合しうる単量体との共重合樹脂100重量部と、エチ
レン・ｎ−ブチルアクリレート・一酸化炭素共重合体15
0〜260重量部とからなる厚さ0.1〜0.5mmのシート状材料
を融着加工してなる容器本体に、少なくとも一つの開口
部が形成されたことを特徴とする培養用バック。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17409490A JPH074225B2 (ja) | 1990-06-29 | 1990-06-29 | 培養用バック |
| EP91110591A EP0471947A1 (en) | 1990-06-29 | 1991-06-26 | Culture bag |
| AU79377/91A AU631746B2 (en) | 1990-06-29 | 1991-06-27 | Culture bag |
| US07/723,074 US5225346A (en) | 1990-06-29 | 1991-06-28 | Culture bag |
| CA 2045969 CA2045969A1 (en) | 1990-06-29 | 1991-06-28 | Culture bag |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17409490A JPH074225B2 (ja) | 1990-06-29 | 1990-06-29 | 培養用バック |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0463585A JPH0463585A (ja) | 1992-02-28 |
| JPH074225B2 true JPH074225B2 (ja) | 1995-01-25 |
Family
ID=15972550
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP17409490A Expired - Lifetime JPH074225B2 (ja) | 1990-06-29 | 1990-06-29 | 培養用バック |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH074225B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2608670B2 (ja) * | 1993-03-10 | 1997-05-07 | 株式会社 ナーサリーテクノロジー | 培養由来幼植物体の育成方法 |
| BE1017763A5 (nl) * | 2007-09-24 | 2009-06-02 | Proviron Holding | Bioreactor. |
-
1990
- 1990-06-29 JP JP17409490A patent/JPH074225B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0463585A (ja) | 1992-02-28 |
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